DE1908225B2 - Biotechnisches Verfahren zur Herstellung von Enzymen, die stärkeartige Polysaccharide und Dextrane sowie Oligosaccharide der entsprechenden Bindungstypen hydrolytisch spalten - Google Patents
Biotechnisches Verfahren zur Herstellung von Enzymen, die stärkeartige Polysaccharide und Dextrane sowie Oligosaccharide der entsprechenden Bindungstypen hydrolytisch spaltenInfo
- Publication number
- DE1908225B2 DE1908225B2 DE19691908225 DE1908225A DE1908225B2 DE 1908225 B2 DE1908225 B2 DE 1908225B2 DE 19691908225 DE19691908225 DE 19691908225 DE 1908225 A DE1908225 A DE 1908225A DE 1908225 B2 DE1908225 B2 DE 1908225B2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- enzymes
- oligosaccharides
- yeast
- starch
- dextrans
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 48
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 48
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 title claims description 34
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 title claims description 23
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 title claims description 23
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims description 21
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims description 12
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 7
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 41
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 10
- 241001149698 Lipomyces Species 0.000 claims description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 44
- 241001149691 Lipomyces starkeyi Species 0.000 description 30
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 19
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 19
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 19
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 9
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 9
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 9
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 108010001682 Dextranase Proteins 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 5
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 5
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001489207 Lipomyces lipofer Species 0.000 description 3
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 3
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 3
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000011138 biotechnological process Methods 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- DFKPJBWUFOESDV-NGZVDTABSA-N (2S,3R,4S,5S,6R)-6-[[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-Trihydroxy-6-[[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-[[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxymethyl]oxan-2-yl]oxymethyl]oxane-2,3,4,5-tetrol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H]3[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)O3)O)O2)O)O1 DFKPJBWUFOESDV-NGZVDTABSA-N 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 2
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 208000002925 dental caries Diseases 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000004753 textile Substances 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 32-alpha-galactosyl-3-alpha-galactosyl-galactose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(CO)OC(O)C2O)O)OC(CO)C1O DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N D-maltotriose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000002064 Dental Plaque Diseases 0.000 description 1
- AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N Isomaltose Natural products OC[C@H]1O[C@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O AYRXSINWFIIFAE-SCLMCMATSA-N 0.000 description 1
- 238000002768 Kirby-Bauer method Methods 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 241001136494 Talaromyces funiculosus Species 0.000 description 1
- FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N UNPD130147 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(OC4C(OC(O)C(O)C4O)CO)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N UNPD55895 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- DBTMGCOVALSLOR-AXAHEAMVSA-N galactotriose Natural products OC[C@@H]1O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H](O[C@H]3[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H](CO)[C@@H]3O)[C@@H]2O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O DBTMGCOVALSLOR-AXAHEAMVSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N isomaltose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-RTPHMHGBSA-N 0.000 description 1
- FBJQEBRMDXPWNX-FYHZSNTMSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H]2[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)C(O)O2)O)O1 FBJQEBRMDXPWNX-FYHZSNTMSA-N 0.000 description 1
- 229940068140 lactobacillus bifidus Drugs 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N malto-pentaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N malto-tetraose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N maltopentaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N 0.000 description 1
- LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N maltotetraose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N mannotriose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 238000005065 mining Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003058 plasma substitute Substances 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000000985 reactive dye Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- -1 ti-l Chemical class 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000007966 viscous suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N β-1,4-galactotrioside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01033—Amylo-alpha-1,6-glucosidase (3.2.1.33)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2408—Glucanases acting on alpha -1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2411—Amylases
- C12N9/2428—Glucan 1,4-alpha-glucosidase (3.2.1.3), i.e. glucoamylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01003—Glucan 1,4-alpha-glucosidase (3.2.1.3), i.e. glucoamylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/0101—Oligo-1,6-glucosidase (3.2.1.10), i.e. sucrase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01041—Pullulanase (3.2.1.41)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01068—Isoamylase (3.2.1.68)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
Lipomyces starkeyi VLB — Nn Öiöi
Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0102
Lipomyces starkeyi C. B. S.—Nr. 1807
Lipomyces starkeyi C. B. S. — Nr. 1808
Lipomyces starkeyi C. B. S. — Nr. 1809
Lipomyces starkeyi C.B.S — Nr 1810
Lipomyces starkeyi C.B.S. — Nr. 2511
Lipomyces starkeyi C. B. S. — Nr. 2512
Lipomyces starkeyi C. B. S. — Nr. 2516
Lipomyces starkeyi C. B.S. — Nr. 5607
Lipomyces starkeyi C. B. S. — Nr. 5910
Lipomyces starkeyi C.B.S. — Nr. 5911
Lipomyces lipofer C.B.S. — Nr. 944
Lipomyces lipofer C. B. S. — Nr. 2513
Lipomyces kononenk oe CB. S. - Nr. 2514
Lipomyces kononenkoe C. B.S. - - Nr. 5608
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß durch Zusatz geeigneter Kohlenstoffquellen zur Nährlösung die Bildung von Enzymen
zur Spaltung von <i-1 ,o-glycosidiachen Bindungen
intensiviert wird.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß durch Zusatz geeigneter Kohlenstoffquellen
zur Nährlösung die Bildung von Enzymen zur Spaltung von «i-l,4-glycosidischen Bindungen
intensiviert wird.
4. Verfahren nach Anspruch 1. dadurch gekennzeichnet,
daß durch Zusatz geeigneter Kohlenstnffquellen die Bildung von Enzymen zur Spaltung
sowohl von «-i,6-glycosidischen als auch «-1,4-glycosidischen
Bindungen intensiviert wird.
Die Erfindung betrifft ein biotechnisches Verfallen zur Herstellung von Enzymen, die stärkeartige Polysaccharide
und Dextrane sowie Oligosaccharide der entsprechenden Bindungstypen hydrolytisch spalten.
Der enzymatische Abbau von Poly- und Oligosacchariden
hat große technische Bedeutung unter anderem in der Gärungsindustrie, der Lebensmittelindustrie,
der Textilindustrie, der chemisch-pharmazeutischen Industrie, der Medizin usw.
Man hat bereits hierzu pflanzlische Enzyme (z. B. die des Malzes) sowie geeignete Enzyme aus Bakterien
und/oder Schimmelpilzen verwendet (vgl. R e e d, G., »Enzymes in Food Processing«, Academic
Press, New York [1966]). Bekanntlich sind </- und
/f-Amy lasen aus Malz vorwiegend geeignet zum Abbau
stärkeartiger Polysaccharide. Diese können auch durch Enzyme verschiedener Bakterien und Schimmelpilze
(z. B. «-Amylase aus Bacillus subtilis, Glucoamy-
S läse aus Aspergillus-Arten) gespalten werden. Hefeenzyme wurden für diesen Zweck bisher nicht verwendet,
da die Enzymaklivitäten dieser Organismen für eine technische Nutzung als nicht ausreichend befunden
wurden.
ίο Neben stärkeartigen Polysacchariden, deren GIucosebausteine
vorwiegend «-1,4-gIycosidisch verknüpft
sind, gibt es in der Natur andere Polysaccharide, beispielsweise Dextrane bakteriellen Ursprungs, deren
vorwiegender Bindungstyp die «-1,6-glycosidische Verknüpfung
der Glucoseeinheiten ist.
Die obengenannten Enzyme können aus diesem Grunde Dextrane nicht hydrolysieren. Dextrane werden
technisch in großen Mengen hergestellt und nach Zerlegung des sehr hochmolekularen Polysaccharide
»ο in geeignete Fraktionen (Säurehydrolyse/Ultraschalleinwirkung)
als Ersatz für Blutplasma bei Bluttransfusionen verwendet. Dextrane können unter gewissen
Umständen (bakterielle Infektionen) auch als Bestandteile von LebensmitCeln oder Roh- bzw. Zwischenprodukten
der Lebensmittelherstellung auftreten. Nach neueren /ahnmedizinischen Erkenntnissen besteht
auch die Matrix der Zahn-Plaques (unter Umständen kariesfördernde Ablagerungen unlöslicher Polysaccharide
bakteriellen Ursprungs an den Zähnen) zum überwiegenden Teil aus Dextranen oder dextranähnlichen
Polysacchariden.
Einige spezielle Bakterien und Schimmelpilze (z. B. Lactobacillus bifidus. Cellovibrio fulva, Penicillium
funiculosum. Penicillium lilacinum u. a. m) sind in der Lage. Enzyme zu bilden, die Dextrane spalten
können (Dextranasen). Bei Hefen sind Dextranasen bisher unbekannt.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war es, ein biotechnisches Verfahren zur Herstellung von Enzymen
zur Spaltung von Poly- und Oligosacchariden zu entwickeln, welche stärkeartige Polysaccharide und
Dextrane sowie Oligosaccharide der entsprechender Bindungstypen hydrolytisch zu spalten vermögen.
Diese Aufgabe wurde mit einem biotechnischen Verfahren zur Herstellung von Enzymen, die stärkeartige
Polysaccharide und Dextrane sowie Oligosaccharide der entsprechenden Bindungstypen hydrolytisch
spalten gelöst, welches dadurch gekennzeichnel ist, daß man die folgenden Hefen der Gattung Lipomyces
in einem die für das Hefewachstum und für die Bildung dieser Enzyme erforderlichen Nährstoffe
enthaltenden Nährmedium unter aeroben Bedingun gen kultiviert, wobei diese Enzyme in den Hefezeller
und im Kulturmedium angereichert werden:
Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0101
Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0102
Lipomyces starkeyi .... ν .B.S. Nr. 1807
Lipomyces starkeyi .... C B.S. Nr. 1808
Lipomyces starkeyi C.B.S. — Nr. 1809
Lipomyces starkeyi C.B.S. — Nr. 1810
Lipomyces starkeyi
Lipomyces starkeyi
Lipomyces starkeyi
Lipomyces starkeyi
Lipomyces starkeyi
Lipomyces starkeyi
Lipomyces starkeyi
Lipomyces starkeyi
Lipomyces starkeyi
Lipomyces starkeyi
C.B.S. —Nr. 2511
C.B.S. —Nr. 2512
C.B.S. —Nr. 2516
C.B.S. —Nr. 2512
C.B.S. —Nr. 2516
C.B.S. —Nr. 5607
C.B.S. —Nr. 5910
C.B.S. —Nr. 5911
C.B.S. —Nr. 5910
C.B.S. —Nr. 5911
Lipomyces Upofcr C. B. S. - Nr. 944
Lipomyces lipofer C. B. S. Nr. 2513
Lipomyces kononenkoe C.B.S — Nr. 2514
Lipomyces kononenkoc C. B. S. — Nr. 5608
Durch das erfindungsgemäße Verfahren wird techologisch
eine Reihe von Vorteilen erreicht:
1. DuTch Züchtung im sauren pH-Bereich lassen sich
unerwünschte Infektionen durch viele Bakterienarten vermeiden.
2. Züchtungsmöglichkeit der Hefen unter Zusatz von Antibiotics, die das Aufkommen unerwünschter
Bakterien unterdrücken.
3. Zur Züchtung können einfache und daher preiswerte
Substrate verwendet werden.
4. Im Gegensatz zu Schimmelpilzen bereitet die Submerskultur
von Hefen technologisch wenig Schwierigkeiten.
5. Im Gegensatz zu Bakterien lassen sich Hefen au* Nährsubstraten leichter abtrennen.
6. Durch Zugabe von Poly- bzw. Oligosacchariden entsprechender Konstituitionen einzeln oder in
Kombination zum Nährmedium ist es möglich, wahlweise die Synthese von Enzymen zur Spaltung
vorwiegend «-1,6-glucosidisch verknüpfter
Poly- und Oligosaccharide, vorwiegend ti-l,4-glycosidisch
verknüpfter Poly- und Oligosaccharide oder H-1,6- und «/-1,4-glycosidisch veiknüpfter
Poly- und Oligosaccharide zu intensivieren.
Die Anwendung von Hefeenzymen, die Poly- und Oligosaccharide in vergärbare Zucker spalten, ist für
die Gärungsindustrie von großer Bedeutung, da — wie schon zu Beginn dargelegt - bisher Hefen mit
technisch nutzbaren Enzymaktivitäten zur Spaltung stärkeartiger Kohlenhydrate nicht bekannt waren.
Der Einsatz von Bakterien- bzw. Schimmclpüzenzymen
ist nicht in allen Bereichen der Gärungsindustrie möglich. Hier fuhren die erfindungsgemäß beschriebenen
Hefeenzyme zu technisch neuen Arbeitsweisen. Bemerkenswert ist in diesem Zusammenhang, daß von
diesen Hefen keine geschmacksnegativen Stoffwechselprodukte gebildet werden.
Die in der Gärungsindustrie, der Lebensmittelindustrie
und Textilindustrie gebräuchlichen Enzyme aus Malz. Bakterien und Schimmelpilzen zeichnen
sich dadurch aus. daß sie vornehmlich «-1.4-glycosidische
Bindungen spalten. Ihre Aktivität gegenüber «-1,6-verknüpften Glucoseeinheiten ist sehr gering
und wird durch die in diesen Enzymen bzw. Enzym komplexen enthaltenen »Grenzdextrinasen« bewirkt.
Die erfindungsgemäß erzielbaren Hefeenzyme zeich nen sich demgegenüber durch hohe Aktivität gegen
«-1,4- und (i-l,6-verknüpften Glucoseeinheiten aus. In der Dextranindustrie werden zum Blutpasmaersatz
geeignete Dextranfraktionen überwiegend durch Behandlung der hochmolekularen Rohdextrane mit
Säuren oder Ultraschall hergestellt, die enzymatisch^ Hydrolyse hat sich hier vor allem wegen mangelnder
Eignung der Enzyme und aus Wirtschaftlichkeitsgründen noch nicht eingeführt. Die Anwendung von Dextranasen
aus Hefen ist hier vor allem deshalb interessant, weil diese Enzyme technologisch einfach und somit
preiswert herzustellen sind. In der chemischen Industrie ist die Anwendung der beschriebenen Hefeenzyme
geeignet zur präparativen Darstellung von auf üblichem Wege schwierig zu erhaltenen Oligosacchariden.
In der pharmazeutischen Industrie sowie der Zahnheilkunde schließlich können die Dextranasen
aus Hefen bzw. entsprechende Zubereitungsformen zur Kariesprophylaxe eingesetzt werden.
Kultiviert man die obengenannten Hefe-Stämme unter Belüftung in NährmedJen, die auf der Basis
von Hefeextrakt und/oder Pepton, einer Hefc-StickstolT
enthaltenden Zusammensetzung, die im »Difco
Manual«. 9. Auflage, S. 251, Difco Laboratories, Detroit,
angegeben ist, oder einer geeigneten an sich bekannten Kombination anorganischer Salze und Spurenelementen
aufgebaut sind, unter Zusatz einer geeigneten Kohlenstoffquelle oder auf Bierwürze, Brennereischlempe
bzw. Melasse selbst, wobei auch hier eine oder mehrere geeignete Kohlenstoffquellen zusätzlich zugegeben werden können, bei pH-Werten
zwischen etwa 3,0 und 7,0, insbesondere zwischen pH 4,0 und 6,0 und bei Temperaturen zwischen etwa
15 und 400C. insbesondere zwischen 20 und 35° C
über eine hinreichende Zeit, so bilden diese Hefen Enzyme oben beschriebenen Cha-akters. Als Kohlenstoffquellen
lassen sich verwenden z. B. lösliche oder unlösliche Dextrane, lösliche odei nicht gelöste Stärke
bzw. stärkeahnliche Poly- und Oligosaccharide, MaIzextrakt.
Bierwürze oder Biertreber bzw. ein Extrakt aus Biert rebern. Brennereischlempe, Kartoffelpülpe
oder Melasse. Glucose, Maltose oder Saccharose sowie andere Mono- und Oligosaccharide.
Die gewonnene Kulturflüssigkeit kann nach Abtrennung
der Hefe oder nach Abtrennung der Hefe und Konzentrierung oder Lyophilisation zum Abbau
der beschriebenen Poly- und Oligosaccharide verwendet werden. Es ist vorteilhaft, die abgetrennte
Hefe gegebenenfalls mehrmals zu waschen und das
Waschwasser bzw. die dazu verwendete Pufferlösung zusammen mit der zellfreien Kulturflüssigkeit, unter
Umständen jedoch auch getrennt, zu verwenden bzw. aufzuarbeiten. Aus der abgetrennten Hefe selbst kann
ebenfalls nach Zellaufschluß durch geeignete Methoden eine enzymhaltige Lösung gewonnen werden.
Eine Abtrennung der Enzyme durch Fällung mit Ammonsulfat, Aceton oder anderen gebräuchlichen
Fällungsmitteln ist möglich. Die abgetrennten Enzyme können nach Wiederaufnahme in Wasser bzw. Pufferlösungen
im pH-Bereich zwischen pH 3,0 und 7,0 zur Spaltung der angegebenen Kohlenhydrate eingesetzt
werden.
Zur Prüfung auf die Fähigkeit, Enzyme zum Abbau von stärkeartigen Polysacchariden und Dextranen
zu bilden, wurden die angegebenen Hefen in vivo bzw. ein zollfreies Kulturfiltrat der Hefestämme im
Agar-Diffusionstest (vgl. Fleming, J.R. Johnson.
LV: Getreide und Mehl 15 [10], 120 122 [1965]) untersucht. Als Substrate dienten mit Reaktivfarbstoffen
gekoppelte lösliche und unlösliche Dextrane bzw. Stärke. An Hand der Bildung von Diffusionshöfen
konnte die Aktivität der Hefen festgestellt werden. Der Hofdurchmesser ist direkt proportional
dem Logarithmus der Enzymkonzentration.
Der Hefestamm Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0102 (VLB = Kulturensammlung der Staatlichen brauereitechnischen
Prüf- und Versuchsanstalt, Weihenstephan-Freising) wurde in 5 1 eines Nährmediums (0,5%
Hefeextrakt, 0,5% Pepton, 0,5% Rohdextran, gepuffert pH 5,2) unter Belüftung (1,5 l/Min.) 60 Stunden
lang bei 25" C kultiviert. Die so erhaltene Kultur-
lösung wurde zentrifugiert, um die Hefe abzutrennen.
Anschließend wurde die klare Lösung sterilfiltriert. Ein Teil dieser Lösung wurde bei 4°C aufbewahrt
(Fraktion 1), ein zweiter Teil bei 25° C zehnfach konzentriert (Fraktion 2). Der dritte Teil dieser Lösung
(Fraktion 3) wurde lyophilisiert und für den nachfolgenden Test in Pufferlösung (pH 5,5) in einer Menge,
die V20 des ursprünglichen Volumens der Fraktion 3
ausmachte, aufgenommen. Die Hefeernte wurde zweimal mit Pufferlösung (pH 5,5) ausgewaschen und ebenfalls
lyophilisiert. Die lyophilisierte Hefe wurde anschließend in Pufferlösung (pH 5,5) aufgenommen und
im Homogenisator nach Potter-Elvehjem homogenisiert. Nach Zentrifugieren des erhaltenen Homogenisats
wurde der überstand sterilfiltriert (Fraktion 4). Die zum Waschen der Hefe verwendete Pufferlösung
wurde ebenfalls bei 4° C aufbewahrt (Fraktion 5). Die so erhaltenen fünf Fraktionen wurden auf Dextranase-
und Amylaseaktivität nach der oben angegebenen Arbeitsweise geprüft (2% Agar; pH-Wert 5,5;
0,5% Substrat; 400C; 24Std.; 0,02 ml Probemenge
an Enzymlösung). Unter den gleichen Bedingungen wurde der Hefeslamm Lipomyces starkeyi VLB
Nr. 0101 kultiviert, aufgearbeitet und auf Enzymaktivität geprüft. DieDextranaseaktivitäten der Kulturnitrate
und der zum Waschen verwendeten Pufferlösungen waren hoch. Durch Konzentrieren oder Lyophilisation
traten keine wesentlichen Aktivitätsverluste ein. Die aus den homogenisierten Hefen gewonnenen
Extrakte zeigten geringere Aktivitäten. Die Amylaseaktivitäten waren bei allen Ansätzen ebenfalls gut,
lagen aber etwas niedriger als die Dextranaseaktivitäten.
Die folgenden Ergebnisse wurden erhalten:
Stamm Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0101
Fraktion
Nr.
1
2
3
4
5
2
3
4
5
Stamm Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0102
Die folgenden Ergebnisse wurden erhalten:
Stamm Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0101
Stamm Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0101
| Hofdurchmesser | Hofdurchmesser |
| auf Dextran-Agar | auf Stärke-Agar |
| (mm I | (mm) |
| 12,0 | 10« |
| 22,1 | 21.0 |
| 24,6 | 23,5 |
| 5.5 | 4.0 |
| 9.2 | 8.0 |
| Hofdurchmesser | Hofdurchmesser | |
|
Fraktion
Nr. |
auf Dextran-Agar | auf Stärke-Agar |
| JbBnJ | (mm) | |
| 1 | 10,5 | 10.0 |
| 2 | 20.0 | 18,2 |
| 3 | 23,6 | 23,0 |
| 4 | 7,0 | 5,1 |
| 5 | 10.0 | 10,2 |
Kultivierung der Hefestämme wie unter Beispiel 1 beschrieben, jedoch unter Zusatz von 0.5% Stärke
an Stelle von Dextran. Bei Prüfung der Enzymaktivitäten wurde jetzt festgestellt, daß Stärke besser abgebaut
wurde als Dextran«:.
| Hofdurchmesser | Hofdurchmesser | |
| Fiaktion Nr. |
auf Dextran-Agar | auf Stärke-Agar |
| (mm) | (mm) | |
| I | 10.7 | 15,0 |
| ■> | 20.5 | 25.3 |
| 3 | 24,0 | 28,0 |
| 4 | 3.0 | 8,5 |
| 5 | 7.5 | 15,1 |
Stamm Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0102
Fraktion
Nr.
Kultivierung der Hefestümme wie unter Beispiel 1
beschrieben, jedoch unter Zusatz, von 0,25% Dextran
und 0,25% Stärke. Die Prüfung der Enzymaktivitäten zeigte, daß Stärke und Dcxtranc in etwa gleichem
Maße hydrolysiert wurden.
| Hofdurchmcsscr | Hofdurchmesser |
| auf Dextran-Agar | auf Stärke-Agar |
| (mm) | (mm) |
| 9,1 | 14,5 |
| 18.9 | 24.6 |
| 22.0 | 27,6 |
| 3.5 | 8.1 |
| X.9 | 13.4 |
a)Zujeweils 100 ml einer 3%igen gepufferten Stärkelösung
(lösliche Stärke. pH 5,5, bei 40 C gerührt) wurden je 10 ml zellfreien Kulturnitrats der Hefestämme
Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0101 und VLB Nr.0102 (Kultivierung s. Beispiel 2) zugesetzt. Nach
30 Minuten zeigten Proben, die den Ansätzen laufend entnommen und mit Jodlösung versetzt wurden, Jodnormalität.
Die gleichen Ansätze wurden unter Verwendung von kurz aufgekochter Kartoffelstärke (unlöslich)
wiederholt. Die hochviskose Suspension war nach 5 Minuten verflüssigt, Jodnormalität wurde nach
70 Minuten beobachtet.
b) Zu jeweils 120 ml einer 3%igen Suspension von unlöslichem Dextran (gepuffert, pH 5,5. bei 40 C gerührt)
wurden je 1 ml eines zehnfach konzentrierten zellfreien Kulturfiltrats der Hefestämme Lipomyces
starkeyi VLB Nr. 0101 und VLB Nr. 0102 (Kultivierung s. Beispiel 1) zugesetzt. Nach 13 Minuten (0102]
bzw. 14.5 Minuten (0101) war das unlösliche Dextran vollständig in Lösung gegangen. Die Ansätze wurden
unter Verwendung verschiedener unlöslicher Dexträne mit gleichem Erfolg wiederholt. In Ansätzen
die unter den beschriebenen Bedingungen, jedocl unter Verwendung von 3% pulverisiertem unlös
lichem Rohdextran durchgerührt wurden, war die Suspension des unlöslichen Rohdextrans innerhalt
von 9 Minuten in eine klare dünnflüssige Lösunj übergeführt. Als Nullproben dienten Reakiionsansätze
denen zur Inaktivierung der Enzyme 0.5 ml 50%igi Trichlorcssigsäurc zugegeben wordtm «ar. Hier licl
sich kein Abbau der Substrate erkennen.
Der Hefestamm Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0102 wurde, wie unter Beispiel 1 beschrieben, jedoch auf
filtrierter Brennereischlempe ohne Zusatz von Dextran oder Stärke kultiviert. Ein Teil der zellfreien Kulturlösung
wurde lyophilisiert und auf u-Amylaseaktivität untersucht (vgl. Meth. of Analysis of the Am. Soc. of
Brew. Chemists, 5. Aufl., 1949). Der in der Bestimmungsmethode angegebene Zusatz von /i-Amylase
unterblieb. Eine a-Amylaseeinheit ist definiert als die Menge an a-Amylase, die 1 g lösliche Stärke bei 20° C
in einer Stunde bis zum Farbstandard Rotbraun dextriniert. Die a-Amylseeinheiten berechnen sich nach
der Formel
Stärkemenge im Substrat (g) ■ 60 Minuten
Enzymmenge (g) · Dextrinierungszeit
Enzymmenge (g) · Dextrinierungszeit
Es betrugen
Stärkemenge im Substrat
Stärkemenge im Substrat
(30 ml 2%ige Stärkelösung) 0,6 g Stärke
Enzymmenge, die zugegeben
wurde 50 mg Lyophilisat
Dextrinierungszeit 19 Minuten
Alpha-Amylaseeinheiten = -—,—^r = 37,9 .
a) Drei Milliliter 2%iger gepufferte Dextranlösung (pH 5,5,40° C) wurde mit 100 mg zellfreiem Lyophilisat
des Hefestammes Lipomyces starkeyi VLB Nr. 0102 (Kulturbedingungen wie im Beispiel 1 beschrieben)
versetzt. Von diesem Ansatz wurden zu den Zeiten Oh, 3 h und 6 h Proben entnommen, die Enzymwirkung
durch Zugabe von Trichloressigsäure unterbrochen und die entstandenen Abbauprodukte gelchromatographische
nachgewiesen (T r e η e 1, G., John, M., Dell weg, H.: Gel Chromatographie
Separation of Oligosaccharides at Elevates Temperature, FEBS Letters, Vol.2, Nr. 1, 74—76, 1968).
Dabei betrug die Aufgabemenge, die in die Trennsäule eingespritzt wurde, 100 μΐ inaktivierten Enzymansatzes.
Die Chromatogramme (s. F i g. 2 bis 4) zeigen den Verlauf der enzymatischen Reaktion.
Die Chromatogramme (s. F i g. 2 bis 4) zeigen den Verlauf der enzymatischen Reaktion.
Zur Zeit 0 h (F i g. 2) sind neben der hochmolekularen Fraktion Gn nur die Oligosaccharide G4 (Isomaltotetraose)
und G5 (Isomaltopentaose) nachweisbar. Diese entstammen dem zugegebenen enzymhaltigen
Lyophilisat (s. dazu F i g. 1 Chromatogramm von 100 mg Lyophilisat, die in 3 ml Pufferlösung aufgenommen
wurden; dort wird darüber hinaus sichtbar, daß das hochmolekulare Dextran (Gn) der Nährlösung
nahezu vollständig abgebaut ist.) Zur Zeit 3 h
(F i g. 3) ist das hochmolekulare Dextran des Enzymansatzes schon weitgehend abgebaut. Die Bildung
von Oligosacchariden G1 (Glucose), G2 (Isomaltose),
G3 (Isomaltotriose), G4 (Isomaltotetraose) und G5
(Isomaltopentaose) ist bereits stark fortgeschritten.
Aus F i g. 4 zur Zeit 6 h ist zu ersehen, daß die hochmolekulare Fraktion (Gn) nahezu vollständig zu Oligosacchariden
abgebaut ist. Darüber hinaus wird deutlich, daß auch G4 und G5 zugunsten von G1,
G2 und G3 abgenommen haben; dies stellt einen eindeutigen
Nachweis des Abbaus von «-1,6-glycosidisch
verknüpften Oligosacchariden dar.
b) In gleicher Weise wie unter a) beschrieben wurden 3 ml einer 2%igen Stärkelösung mit 100 mg Lyophilisat
des gleichen Hefestammes (Kultur jetzt jedoch wie im Beispiel 2 angegeben) inkubiert und untersucht.
F i g. 5 (0 h) zeigt auch hiei nur die dem Lyophilisat entstammenden Oligosaccharide G4 (Maltotetraose)
und G5 (Maltopentaose). Nach 3h (Fig. 6) ist deutlich
zu erkennen, daß G4 und G3 zugenommen haben
und daneben auch G, (Glucose). G2 (Maltose) und G3
(Maltotriose) entstanden sind. Nach 6h (Fig. 7) hat die hochmolekulare Fraktion (Gn) stark abgenommen,
G1, G2 und G3 treten auf Kosten von G4 und G5 in
höherer Konzentration auf, was auch hier den Abbau von Oligosacchariden, diesmal jedoch solcher, die
(1-1,4-glycosidisch verknüpft sind, deutlich werden läßt
Mit den anderen im Kennzeichen des Hauptanspruchs angegebenen Lipomyces-Stämmen wurder
die entsprechenden Ergebnisse erhalten.
Hierzu 4 Blatt Zeichnungen
Claims (1)
- Patentansprüche:;"·, I. Biotechnisches Verfahren zur Herstellung von Enzymen, die stärkeartige Polysaccharide und Dextrane sowie Oligosaccharide der entspredtfn- ;den Bindungstypen hydrolytisch spalten, dadurch gekennzeichnet, daß man die folgenden Hefen der Gattung Lipomyces in einem die für das Hefewachstum und für die Bildung dieser Enzymeerforderlichen Nährsiofleentliaitenden Nährmedium unter aeroben Bedingungen kultiviert, wobei diese Enzyme in den Hefezellen und im Kulturmedium angereichert werden:
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19691908225 DE1908225C3 (de) | 1969-02-14 | 1969-02-14 | Biotechnisches Verfahren zur Herstellung von Enzymen, die stärkeartige Polysaccharide und Dextrane sowie Oligosaccharide der entsprechenden Bindungstypen hydrolytisch spalten |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19691908225 DE1908225C3 (de) | 1969-02-14 | 1969-02-14 | Biotechnisches Verfahren zur Herstellung von Enzymen, die stärkeartige Polysaccharide und Dextrane sowie Oligosaccharide der entsprechenden Bindungstypen hydrolytisch spalten |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE1908225A1 DE1908225A1 (de) | 1970-08-20 |
| DE1908225B2 true DE1908225B2 (de) | 1975-01-02 |
| DE1908225C3 DE1908225C3 (de) | 1975-08-14 |
Family
ID=5725687
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19691908225 Expired DE1908225C3 (de) | 1969-02-14 | 1969-02-14 | Biotechnisches Verfahren zur Herstellung von Enzymen, die stärkeartige Polysaccharide und Dextrane sowie Oligosaccharide der entsprechenden Bindungstypen hydrolytisch spalten |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE1908225C3 (de) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2906977A1 (de) * | 1979-02-22 | 1980-09-04 | Achim Dipl Ing Ballweg | Verfahren und vorrichtung zur gewinnung waessriger zuckerloesungen |
| DE102006022729B4 (de) * | 2006-05-12 | 2008-10-02 | Edl Anlagenbau Gesellschaft Mbh | Verfahren zur Verwertung von Schlempe |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3990945A (en) * | 1975-04-28 | 1976-11-09 | Bio Research Center Company Limited | Enzymatic hydrolysis of cellulose |
-
1969
- 1969-02-14 DE DE19691908225 patent/DE1908225C3/de not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2906977A1 (de) * | 1979-02-22 | 1980-09-04 | Achim Dipl Ing Ballweg | Verfahren und vorrichtung zur gewinnung waessriger zuckerloesungen |
| DE102006022729B4 (de) * | 2006-05-12 | 2008-10-02 | Edl Anlagenbau Gesellschaft Mbh | Verfahren zur Verwertung von Schlempe |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE1908225C3 (de) | 1975-08-14 |
| DE1908225A1 (de) | 1970-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3587623T2 (de) | Enzymatische Hydrolyse von körniger Stärke direkt bis zu Glukose. | |
| DE69032772T2 (de) | Hitzestabile gereinigte cellulase aus dem thermophilen bakterium acidothermus cellulolyticus | |
| DE2453111C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Cellulase 212 und dieses Produkt enthaltendes Mittel | |
| DE2265121B2 (de) | Enzympräparat zur Bestimmung von Cholesterin und Verfahren zu seiner Herstellung | |
| DE2909093C2 (de) | ||
| DE3779522T2 (de) | Ein neuer amylasetyp. | |
| DE1442298A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Staerke-Sirups | |
| DE3806423C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Pectin | |
| DE2167078C2 (en) | Amylase prepn - for prodn of maltose from starch | |
| DE1767653A1 (de) | Verfahren zur Erzeugung von Isoamylase | |
| DE1908225C3 (de) | Biotechnisches Verfahren zur Herstellung von Enzymen, die stärkeartige Polysaccharide und Dextrane sowie Oligosaccharide der entsprechenden Bindungstypen hydrolytisch spalten | |
| DE1517810C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von hochwertigen Maltosesirup | |
| DE2500597C2 (de) | Verfahren zur gleichzeitigen Herstellung von beta-Amylase und alpha-1,6-Glucosidase | |
| DE2717333C2 (de) | Hitze- und säurebeständige alpha-Amylase | |
| DE69825926T2 (de) | Gereinigte säurestabile Alpha-Amylase von schimmeliger Herkunft | |
| EP0276806B1 (de) | Thermostabile Amylasen und Pullulanasen aus 2 anaeroben Mikroorganismen | |
| DE2435247C2 (de) | &beta;-Amylase, ihre Herstellung und Verwendung | |
| DE2028134C3 (de) | Verfahren zur Gewinnung carbonsäurereicher Zuckersirupe | |
| DE2408998A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines fructan abbauenden enzyms | |
| DE3332639C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Maltopentaose | |
| DE2120412A1 (de) | Verfahren zur Gewinnung von hoch wirksamen Alpha-1,6-glukosidasen | |
| DE1957416C (de) | Verfahren zur Herstellung von Pullulanaseenzym | |
| DE2153151A1 (de) | Verfahren zur herstellung von hefevergaerbaren staerkeprodukten | |
| DE2107461A1 (de) | Verfahren zum Herstellen von alkali schem Dextranase Enzym | |
| DE2928881A1 (de) | Neutrale glucoamylase, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) | ||
| E77 | Valid patent as to the heymanns-index 1977 | ||
| 8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |