DE1598157A1 - Stabilisierung von enzymatischen Testreagenzien - Google Patents

Description

DR. ING. F. WtTRSTHOFF DIPL·. ING. G. PULS

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Beschreibung zu der Patentanmeldung

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CF. Boehringer & Soehne GmbH 8132 Tutzing

betreffend

Stabilisierung von enzymatisehen Testreagenzien

Zusatz zu Patent . ... ... (Patentanmeldung

B 74 973 IXb/42 1)

Gegenstand des Hauptpatents ist die Stabilisierung enzymatisoher lestreagenzien, die Di- oder Triphosphopyridinnueleotid in reduzierter Form enthalten, welche auch als reduziertes Nicotinamid-adenin-dinucleotid (NADH) bzw. reduziertes Nicotinamid-adenin-dinucleotidphosphat (NADPH)' bezeichnet werden, wobei Glutathion als Stabilisierungsmittel verwendet wird. Es wurde in Abänderung und weiterer Ausgestaltung dieser Er-

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findung festgestellt, daß nicht nur Glutathion, Bondern auch andere SH-gruppenhaltige Verbindungen eine Stabilisierung dieser enzymatischen Präparate "bewirken.

Pur die enzymatischen Untersuchungen, insbesondere im Rahmen diagnostischer Zwecke ist es von großer Bedeutung, daß die für die enzymatischen Reaktionen erforderlichen Stoffe, wie Substrate, Enzyme, Co-Enzyme, Puff er sub stanzen usw. gebrauchsfertig und im richtigen Verhältnis zur Verfügung stehen. Durch kombinierte Präparate, welche alle die für die Reaktionen notwendigen Stoffe bereits enthalten, können bestimmte. Teste auch von weniger geschulten Personen leicht und sicher durchgeführt werden.

Leider hat sich herausgestellt, daß häufig die Enzyme bzw. Co-Enzyme, welche in reiner Form relativ Btabil sind, durch die Gegenwart der anderen Komponente der Testpräparate instabil werden und deshalb im laufe der Lagerung einen Aktivitätsverlust zeigen. Nach dem Vorschlag des Hauptpatents wird durch Zugabe von Glutathion erreicht, daß die Testreagenzien, welche Bi- oder Triphosphopyridinnuoleotid in reduzierter Form enthalten, durch Glutathion in einfacher Weise stabilisiert werden. Es hat sich nun aber im Laufe weiterer Untersuchungen gezeigt, daß auch andere Substanzen, die SH-Gruppen aufweisen, diese vorbereiteten Testreagenzien zu stabilisieren vermögen, insbe-

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sondere Cystein, Cystein-Carbamid und Aoetyl-Cysteln sind geeignete Stabilisatoren von Kombinationen der Cestreagenzien, die insbesondere DPHH enthalten. Es ist natürlich darauf zu achten, daß die Stabilisatoren die Testreaktion als solche nicht stören oder beeinflussen, was durch einen einfac_ hen Vorversuch ohne Schwierigkeiten von Jedem Fachmann festgestellt vier den kann.

Ein Vorteil gegenüber dem Gegenstand des Hauptpatonts ist darin zu sehen, daß die beim vorliegenden Erfindungcgegenstand bevorzugt verwendeten Stoffe wie · Cystein, Cystein-Carbamid und Acetyl-Cystein im Preise wesentlich niedriger liegen als das beim Hauptpatent verwendete Glutathion.

Die folgenden Beispiele zeigen mehrere Kombinationen, welche über längere Zeiträume hinaus stabile lyophilisiert© Präparate ergaben.

1. Begtinnunft der Glutanat-Tpyruvat^transainlnase (GPT) 2,43 ß Ha₂HPO₄ . 2 HgO
0,21 g HaH₂PO₄ -2H₂O ,
2,05 g DL-Alanin
0,35 goc-Kotoglutarat
0,30 g Cystein
0*30 g Serum-Albumin
0,05 g HADH
0,0015 g Laotat-Dehydrogenase

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werden in 90 ml bidest.Wasser gelöst und der pH-Wert mit verdünnter Natronlauge auf 7,6 eingestellt. Dann wird die lösung mit bedest. Wasser auf 100 Eil aufgefüllt, anschließend eingefroren und gefriergetrocknet. > -^; '

2- Bestinmung der Glutamat-oxalacetat-transaminase (COG?)

2,43 g ^Ν*2^ΗΡ04 * ^{2 H}2° '.''·'

0,21 g NaH₂PO₄ ♦ 2 HgO.
1,80 g Natriumaspartat ' ' ,«.~.*«.*- 0,35 g -Ketoglutarat
0,30 g Serum-Albumin
^:0,05 g NADH

0,0015 g Lactat-Dehydrogenase 0,0015 g Malai-Dehydrogenase ♦ Aufbereitung wie im Beispiel 1 angegeben.

5. Bestimmung der Lactat-Dehydrogenase (IDH) 2,43 g Na₉HPO... 2 H₉O

0,21 g NaH₂PO₄ . 2 HgO

0,004 g Natriumpyruvat

0,30 g Cyetein-carbamid 0,30 g Serum-Albumin

0,05 g NADH
Aufbereitung wie im Beispiel 1 angegeben.

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4» Bestimmung von Aldolase (ALD)

2,43 g ^^a2^IEP04 * ^{2 H}2° '■.'.·."

■ 0,21 g UaH₂PO₄ . 2 HgO

0,14 g Fructose-1,6-diphosphat 0,005 g Jodacetat

0,30 s Cystein ' .'.'.-■

0,30 g Serum-AlTaumin . " ..

0,05 g HA2H

0,0015 g Glycero-phospliat-deliydrogenase

0,0015 & Triose-phosphat-isomeraee . "

Aufbereitung wie im Beispiel 1 angegeben.

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Claims (2)

DB. ING. F. tK <i. i'i'ts 4 r- η ο 1 C Π | I 0 / 8MUNCKUN90 ί \' 1Α-32676 Patentansprüche ;

1. Abwandlung der Stabilisierung von enzymatischen Testreagenzien mit Bi- oder Triphosphopyridinnucleotid in reduzierter Form nach Patent (Patentanmeldung B 74 973 IXb/42 1) dadurch gekennzeichnet, daß " an Stelle von Glutathion andere Sulfhydrylgruppen enthaltende Verbindungen, v/elche die Testreaktionen nicht stören, ver\fendet werden.

2. Verwendung von Cystein, Cystein-Carbamid und
Acetyl-Cystein als Stabilisator nach Anspruch 1 ·

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