DE10394175T5

DE10394175T5 - Zusammensetzung mit einem botanischen Extrakt mit Anti-Krebs- oder phytoöstrogener Aktivität, enthaltend Prenyflavonoide

Info

Publication number: DE10394175T5
Application number: DE10394175T
Authority: DE
Inventors: Sophie Chen
Original assignee: MEDICAL RES AND EDUCATION TRUS; Medical Research and Education Trust San Diego
Current assignee: ACTIVEPHYTO TECHNOLOGIES LTD., ST. HELIER, JER, GB
Priority date: 2003-03-06
Filing date: 2003-08-01
Publication date: 2006-08-03
Also published as: GB2415905A; AU2003269928A1; GB2415905B; WO2004080474A1; GB0520247D0

Abstract

Eine Zusammensetzung, enthaltend mehr als 0,5 Gew.-% eines Phytoöstrogens, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung, ein Antikrebsmittel und optional ein Immunstimulans, wobei das Phytoöstrogen ein Prenylflavonoid ist, dargestellt durch die Formel

worin R³⁰ und R³¹ unabhängig voneinander Wasserstoff oder 3-Methyl-2-butenyl sind, mit der Voraussetzung, dass wenigstens eines von R³¹ und R³³ 3-Methyl-2-butenyl ist; R²⁹ und R³² sind unabhängig voneinander Wasserstoff oder C₁-C₆-Alkyl; und R³³-R³⁷ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl; und worin wenigstens zwei von R³³-R³⁷ Wasserstoff sind;
Formononetin; oder
eine Kombination, enthaltend eins oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene.

Description

Technisches Gebiet
Diese Anmeldung bezieht sich auf Zusammensetzungen botanischer Extrakte und Verfahren zur Behandlung von Menschen, insbesondere Verfahren zur Behandlung von Krebs oder mit Östrogen in Zusammenhang stehenden Erkrankungen.
Von botanischen Extrakten, so wie den Isoflavonen, die in Sojaprodukten enthalten sind, wird angenommen, dass sie therapeutisches Potential bei der Behandlung von Krankheiten und deren Prävention haben. Insbesondere wird von Phytoöstrogenen angenommen, dass sie bei der Behandlung von mit Östrogen in Zusammenhang stehenden Erkrankungen anwendbar sind, so wie z. B. Osteoporose, den Symptomen der Menopause und von mit Hormonen in Zusammenhang stehenden Krebsarten.
Es wurde berichtet, dass endogene und exogene Hormone eine Rolle bei der Entwicklung von mit Hormonen in Zusammenhang stehenden Krebsarten, wie z. B. Brustkrebs, Darmkrebs, Lungenkrebs, Endometrialkrebs, Ovarkrebs, Prostatakrebs, Blasenkrebs, Hodenkrebs, Schilddrüsenkrebs und Knochenkrebs spielen (siehe beispielsweise Henderson et al., „Hormonal Carcinogenesis", Carcinogenesis (2000), 21(3): 427-433). Epidemologische Studien haben gezeigt, dass das Einhalten einer Diät mit hohem Gehalt an Phytoöstrogenen, wie z. B. denen, die in Sojaprodukten gefunden werden, mit einem niedrigeren Auftritt von hormonbezogenen Krebsarten einhergeht (H. Wiseman, „The therapeutic potential of phytoestrogens", Expert. Opin. Investig. Drugs (2000), 9(8): 1829-40).
Prostatakarzinome, ein mit Hormonen in Zusammenhang stehender Krebs, ist ein großes Gesundheitsproblem unter Männern in Nordamerika und Europa (S. H: Landis et al., „Cancer Statistics, 1998", CA Cancer J. Clin. (1998) 48: 6-29). Eine chronische Vergrößerung der Prostata in Kombination mit erhöhten prostataspezifischem Antigen (PSA) kann häufig zu Prostatakarzinomen führen. Jedes Jahr treten 160.000 neue Fälle und 39.000 Todesfälle wegen der Erkrankung in den Vereinigten Staaten auf (Landis). Brustkrebs, ein anderer mit Hormonen in Zusammenhang stehender Krebs, ist auch ein großes Gesundheitsproblem. Neue invasive Auftritte von Brustkarzinomen werden überschlagsweise mit 192.200 angegeben, wobei gemäß der Amerikanischen Krebsgesellschaft überschlagsweise 40.200 Todesfälle in 2001 vorhergesagt wurden (National Alliance of Breast Cancer Organizations News, 15(1): 2, Januar, 2001). Eine frühe Entdeckung und ein frühes Eingreifen sind häufig der Schlüssel für eine erfolgreiche Behandlung dieser Erkrankungen. Obwohl die Chemotherapie häufig die Wahl für beispielsweise Brustkrebspatienten ist, ist sie nicht wirksam für Prostatakrebspatienten im fortgeschrittenen Stadium. Konventionelle Behandlungsmethoden schließen die Operation, die Bestrahlung, eine Hormontherapie und eine Chemotherapie ein. Während die bestehenden therapeutischen Wirkstoffe und Verfahren eine gewisse Effizienz haben, verbleibt eine weiterhin bestehende Notwendigkeit für alternative therapeutische Mittel, die bestehende Therapien ergänzen oder ersetzen können. Es würde insbesondere vorteilhaft sein, wenn solche Wirkstoffe und Verfahren zu niedrigen Kosten leicht erhältlich wären und eine gleiche oder höhere Effizienz hätten als bestehende auf Kräutern basierende Heilmittel. Dementsprechend verbleibt eine Notwendigkeit für alternative auf Kräutern basierende Heilmittel für die Behandlung von mit Östrogen in Zusammenhang stehenden Erkrankungen, einschließlich hormonbezogenen Krebsarten, zusätzlich zu Heilmitteln für nicht hormonbezogene Krebsarten.
Kurze Zusammenfassung
In einer Ausführungsform umfasst ein Verfahren zur Behandlung eines Menschen, der eine Krebsbehandlung nötig hat, die Verabreichung einer Zusammensetzung, die mehr als 0,5 Gew.-% eines Phytoöstrogens, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung, enthält, wobei das Phytoöstrogen folgendes ist:
Wogonin, dessen pharmazeutisch annehmbare Ester und Salze und dessen selektiv substituierte Analoge, die dargestellt sind durch die Formel (1)
worin R¹ Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl oder C₁-C₆-Alkoxy ist; R² Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl oder C₂-C₆-Acyl ist; R³ und R⁴ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, Hydroxy, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl; eines von R⁵ oder R⁶ ist Wasserstoff, Hydroxy, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Alkyl, wobei das andere von R^5A oder R^5B
ist, worin R⁷ bis R¹¹ unabhängig voneinander Wasserstoff, Hydroxy, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl sind und worin wenigstens vier von R³ bis R¹¹ Wasserstoff sind;
Isoliquiritigenin, dessen pharmazeutisch annehmbare Ester und Salze und dessen selektiv substituierte Analoge, die dargestellt sind durch die Formel (2)
worin R¹¹-R¹⁴ unabhängig voneinander Wasserstoff oder C₁-C₆-Alkyl sind; R¹⁵-R²⁰ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl, wobei wenigstens drei der R¹⁵-R²⁰ Wasserstoff sind;
Coumestrol, dessen pharmazeutisch annehmbare Ester und Salze und dessen selektiv substituierte Analoge, die dargestellt sind durch die Formel (3)
worin R²¹ und R²² unabhängig voneinander Wasserstoff oder C₁-C₆-Alkyl sind; und R²³-R²⁸ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl, wobei wenigstens drei der R²³-R²⁸ Wasserstoff sind;
ein Prenylisoflavonoid, dargestellt durch die Formel (4)
worin R³⁰ und R³¹ unabhängig voneinander Wasserstoff oder 3-Methyl-2-butenyl sind, mit der Voraussetzung, dass wenigstens eines von R³¹ und R³³ 3-Methyl-2-butenyl ist; R²⁹ und R³² sind unabhängig voneinander Wasserstoff oder C₁-C₆-Alkyl; und R³³-R³⁷ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl; und worin wenigstens zwei von R³³-R³⁷ Wasserstoff sind;
oder eine Kombination, die eines oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene enthält.
Ein weiteres Verfahren zur Behandlung eines Menschen, der eine Krebsbehandlung nötig hat, umfasst das Verabreichen einer Zusammensetzung, die ein Phytoöstrogen, ein Anti-Krebsmittel und ein Immunstimulans enthält, wobei das Phytoöstrogen in einer Menge von mehr als 0,5 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung, vorliegt.
In einer weiteren Ausführungsform umfasst ein Verfahren zur Behandlung eines Menschen, der eine Behandlung einer mit Östrogen in Zusammenhang stehenden Erkrankung nötig hat, die Verabreichung einer Zusammensetzung, die Wogonin, dessen pharmazeutisch annehmbare Salze und Ester, oder eine Kombination einer oder mehrerer der zuvor genannten Komponenten enthält.
In einer weiteren Ausführungsform umfasst eine Zusammensetzung mehr als oder gleich ungefähr 0,5 Gew.-% eines Phytoöstrogens, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung, und wenigstens ein Anti-Krebsmittel, wobei das Phytoöstrogen die oben beschriebenen Phytoöstrogene umfasst.
Eine weitere Zusammensetzung enthält mehr als oder gleich ungefähr 0,5 Gew.-% eines Phytoöstrogens, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung, ein Anti-Krebsmittel und ein Immunstimulans.
Andere Ausführungsformen, einschließlich Zusammensetzungen, die für die Krebsbehandlung geeignet sind, sind unten im Detail beschrieben.
Kurze Beschreibung der Abbildungen
1 zeigt ein Hochleistungs-Flüssigkeitschromatogramm (gemessen bei 254 Nanometern) einer Multi-Komponenten-Zusammensetzung eines botanischen Extraktes, der Extrakte von Panax pseudo-ginseng Wall, Isatis Indigotica Fort, Ganoderma lucidium Karst, Dendrathema morifolium Tzvel, Glycyrrhiza glabra L, Sculletaria bailcalensis Georgi, Rabdosia rubescens und Serenoa repens enthält; ein Pfeil weist auf die Position von Wogonin (bezeichnet als „I-16-2") in dem Elutionsprofil hin.
2 zeigt ¹³C NMR-Spektren von Wogonin, das aus Multikomponenten-Zusammensetzungen eines botanischen Extraktes, wie in 1 abgetrennt wurde; (a) getrennte (DEPT) Spektren von -CH₃, -CH₂ und -CH-Gruppen; (b) gesamtes ¹³C NMR-Spektrum.
3 ist ein Massenspektrum von Wogonin, das aus einem botanischen Multikomponenten-Extrakt wie in 1 abgetrennt wurde, mit einer Reinheit von mehr als 95%.
4 ist ein Hochleistungs-Flüssigkeitschromatogramm von Isoliquiritigenin, das aus Glycyrrhiza uralensis isoliert wurde.
5 ist ein Absorptionsspektrum, das mit dem Isoliquiritigenin-Peak in dem Chromatogramm aus 4 in Zusammenhang steht.
6 zeigt ¹³C NMR-Spektren von Isoliquiritigenin, das aus Glycyrrhiza uralensis isoliert wurde; (a) getrennte (DEPT) Spektren für -CH₃, -CH₂ und -CH-Gruppen; (b) gesamtes ¹³C NMR-Spektrum.
7 ist ein Massenspektrum von Isoliquiritigenin, das aus Glycyrrhiza uralensis isoliert wurde, mit einer Reinheit, von der gezeigt wird, das sie höher als 95% ist.
8 ist ein Diagramm der Zellüberlebensrate von LNCaP und DU-145 Prostatakrebszellen als eine Funktion der Wogonin-Konzentration.
9 ist ein Diagramm der Zellüberlebensrate von DU-145 und LNCaP Prostatatkrebszellen und MCF-7 Brustkrebszellen, als eine Funktion der Isoliquiritigenin-Konzentration.
10 zeigt DNA-Histogramme, die den Effekt auf LNCaP-Zellzyklen in Abwesenheit (A) und Gegenwart (B) von Wogonin bei 20 mg/ml zeigen.
11 zeigt Änderungen in dem LNCaP-Zellzyklus, die durch Wogonin und Isoliquiritigenin induziert sind.
12 zeigt Änderungen in dem DU-145-Zellzyklus, die durch Wogonin und Isoliquiritigenin induziert sind.
13 ist ein Diagramm, das die Potenz von Wogonin und Isoliquiritigenin zur ER-alpha-Luc-Reportergen-Aktivierung zeigt.
14 ist ein Diagramm, das die Potenz von Wogonin und Isoliquiritigenin zur ER-beta-Luc-Reportergen-Aktivierung zeigt.
15 ist ein Diagramm der COX-2 Inhibierung als eine Funktion der Isoliquiritigenin-Konzentration.
16 ist ein Diagramm der Zellüberlebensrate von PTX 10 Ovarkrebszellen (resistent gegenüber Taxol) in Anwesenheit ansteigender Konzentrationen von Wogonin.
17 ist ein Diagramm der Zellüberlebensrate von PTX 10 Ovarkrebszellen in Anwesenheit ansteigender Konzentrationen von Isoliquiritigenin.
Detaillierte Beschreibung der bevorzugten Ausführungsform
Hierin sind Zusammensetzungen und Verfahren zur Behandlung von Krebs und mit Östrogen in Zusammenhang stehenden Erkrankungen in einem Menschen offenbart, der eine solche Behandlung nötig hat. Wie es hierin verwendet wird, kann ein Mensch, der ein Krebsbehandlung nötig hat, ein Mensch sein, bei dem Krebs diagnostiziert wurde, oder ein Mensch, der den Auftritt von Krebs verhindern oder verzögern will, z. B. ein Mensch mit einer Familiengeschichte, in der Krebs vorkam. Der Krebs kann optional hormonbezogener Krebs sein, wie z. B. Prostatakrebs, Brustkrebs, Endometrialkrebs, Darmkrebs, Lungenkrebs, Blasenkrebs, Hodenkrebs, Ovarkrebs, Schilddrüsenkrebs oder Knochenkrebs. Wie es hierin verwendet wird, kann ein Mensch, der ein Behandlung einer mit Östrogen in Zusammenhang stehenden Erkrankung nötig hat, ein Mensch sein, bei dem eine mit Östrogen in Zusammenhang stehende Erkrankung diagnostiziert wurde, wie z. B. Osteoporose, oder die Symptome einer Menopause, oder ein Mensch, der das Auftreten einer mit Östrogen in Zusammenhang stehenden Erkrankung verhindern oder verzögern will. Das Verfahren umfasst die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge einer Zusammensetzung, die Phytoöstrogen enthält, wie z. B. Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol, deren pharmazeutisch wirksame Salze oder Ester, deren selektiv substituierte Analoga und Kombinationen, die eine oder mehrere der zuvor genannten Verbindungen enthalten. Wie es hierin verwendet wird, ist ein Phytoöstrogen eine aus Pflanzen erhaltene Verbindung oder dessen Metabolit, die/der die Wirkung nachahmen kann, oder die Bindung, den Metabolismus oder die Herstellung von endogenen Östrogenen in dem Körper modulieren kann.
Wie es zuvor angegeben wurde, wurden bei der Behandlung von Krebs auf Kräuter basierende Hilfsmittel verwendet. Scutellaria baicalensis ist z. B. eine Quelle für Wogonin (Y.Y. Zhang et al., "Comparative study of Scutellaria planipes and Scutellaria baicalensis", Biomed. Chromatogra. (1998), 12: 31-3), und Glycyrrhiza uralensis und Glycyrrhiza glabra sind Quellen für Isoliquiritigenin (H. Hayashi H. et al., „Seasonal variation of glycyrrhizain and isoliquiritigenin glycosides in the root of glycyrrhiza glabra L", Biol. Pharm. Bull. (1998) 21: 987-9).
Coumestrol ist ein Phytoöstrogen, das in Alfalfa und rotem Klee gefunden wird, von denen bekannt ist, das es phytoöstrogene Aktivität aufweist (siehe z. B. US -Anmeldung Nr. 20010044431 A1 von Rodrigez).
Von Wogonin wurde berichtet, dass es ein starkes anti-inflammatorisches Wirkmittel ist wegen seiner inhibitorischen Aktivität gegen Cyclooxygenase 2 (COX-2) direkt und gegen die Genexpression von induzierbarem COX-2 und Stickstoffoxidsynthase (siehe z. B. Y. S. Chi et al., „Effect of wogonin, a plant flavone from Scutellaria radix, on the expression of cyclooxygenase-2 and the induction of inducible nitric oxide synthase and the induction of inducible nitric oxide synthase in inhibitors and lipopolysaccharide-treated RAW 264.7 cells", Biochem. Pharmacol. (2001), 61(11): 1417-27). Der hiesige Erfinder ist sich jedoch keiner Berichte, dass Wogonin östrogene Aktivität aufweist, bewusst.
Von Isoliquiritigenin wurde berichtet, dass es eine östrogenähnliche Aktivität besitzt (siehe z. B. S. Tamir „Estrogen-like activity of glabrene and other constituents isolated from licorice root", J. Steroid Biochem. Mol. Biol. (2001), 78(3): 291-8). Der hiesige Erfinder ist sich jedoch keines Berichtes bewusst, dass Isoliquiritigenin ein Inhibitor für die COX-2-Aktivität ist und es somit vorteilhaft ist, um Krebs zu behandeln.
Jüngere Studien haben die Wichtigkeit von COX-2-Inhibitoren als krebstherapeutische Mittel zum Vorschein gebracht (siehe z. B. A. Kirschenbaum et al., „ The role of cyclocxygenase-2 in prostate cancer" Urology (2001), 58 (2 Zus. 1): 127-131; und E.T. Hawk et al., „COX-2 in Cancer - A Player that's Defining the Rules", J. Natl. Cancer Inst. (2002), 94(8): 545-546). Der Inhibitor blockiert die Angiogenese von Krebs und reduziert die Krebsmetastasenbildung (siehe z. B. E. Fosslien „Review: Molecular pathology of cyclooxygenas-2 in cancer-induced angiogenesis", Ann. Clin. Lab. Sci. (2001), 31(4): 325-348).
Die vorliegende Arbeit zeigt eine potente Aktivität von Verbindungen der Formeln 1-4, insbesondere Wogonin und Isoliquiritigenin, den Östrogen-Rezeptor-alpha und -beta zu aktivieren und die biochemischen Reaktionen in Krebszellen auszulösen. Die COX-2-inhibitorische Aktivität von Isoliquiritigenin wird auch gezeigt. Suppressive Effekt beider Verbindungen auf die Krebszellproliferation werden ebenso demonstriert. Die Zytotoxizität von Wogonin und Isoliquiritigenin gegenüber Krebszellen kann entweder abhängig oder unabhängig von Östrogen-Rezeptoren sein.
Das Phytoöstrogen kann Wogonin umfassen. Der Begriff Wogonin, wie er hierin verwendet wird, schließt CAS Reg. Nr. 632-85-9 ein, auch bekannt als 5,7-Dihydroxy-8-methoxy-flavon, und dessen pharmazeutisch annehmbare Salze oder Ester, dessen selektiv substituierte Analoga, einen Extrakt aus einer Pflanze aus der Scutellaria-Familie, oder eine Kombination, die eine oder mehrere der zuvor genannten Verbindungen umfasst.
Ein Ester von Wogonin ist bevorzugt ein Glykosid von Wogonin. Es gibt keine bestimmte Einschränkung bezüglich der Monosaccharide oder Polysaccharide, die verwendet werden, um das Glykosid von Wogonin zu bilden. Geeignete monosaccharidische Zucker schließen z. B. Glukose, Glucoronsäure, Mannose, Fruktose, Galaktose, Xylose, Rutinose, Rhamnose und ähnliche ein und Kombinationen, die einen oder mehrere der zuvor genannten Monosaccharide enthalten. Geeignete Polysaccharide schließen z. B. Dimere, Trimere, Oligomere und Polymere ein, die aus einem oder mehreren der obigen Monosaccharide gebildet sind.
Wogonin-Analoge schließen z. B. Formononetin, Genistein, Biochanin, Prunetin, Scutellarein, Daidzin, Luteolin, Apigenin, Acacetin, 3,6,4-Trihydroxylflavon, 7,3-Dihydroxy-4,1-dimethoxy-isoflavon, 3R-2',3'-Dihydroxy-7,4-dimethoxy-isoflavon, oder ähnliche oder eine Kombination, die eine oder mehrere der zuvor genannten Wogonin-Analoge enhält, ein.
Wogonin kann auch in der Form eines Extraktes aus einer Pflanze der Scutellaria-Familie vorliegen, so wie z. B. Scutellaria baicalensis, als dessen pharmazeutisch annehmbare Salze oder Ester, dessen selektiv substituierte Analoge, oder eine Kombination, die eine oder mehrere der zuvor genannten Verbindungen enthält. Wogonin-Analoge können in Form von Extrakten vorliegen, z. B. Humulus lupulus L, Glycine max, Trifolium pretense und Kombinationen, die einen oder mehrere der zuvor genannten Extrakte enthält.
Bevorzugte Verbindungen vom Wogonin-Typ können ein selektiv substituiertes Analoges von Wogonin umfassen, das die Formel (1) hat.
worin R¹ Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl oder C₁-C₆-Alkoxy ist; R² ist Wasserstoff, R³ und R⁴ sind unabhängig Wasserstoff oder Hydroxy, bevorzugt Wasserstoff; eines von R⁵ oder R⁶ ist Wasserstoff, Hydroxy, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl, wobei das andere von R^5A oder R^5B
ist, worin R⁷ bis R¹¹ Wasserstoff oder Hydroxy ist, besonders bevorzugt Wasserstofff. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform ist R¹ Methyl, R² ist Wasserstoff und R³-R¹⁰ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, Acetyl oder Propionyl, unter der Voraussetzung, dass wenigstens 5 von R³-R¹¹ Wasserstoff sind. In einer weiteren besonders bevorzugten Ausführungsform sind R¹-R³ und R^5A Wasserstoff, R⁴ ist Hydroxy, R⁹ ist Hydroxy und R⁷-R⁸ und R⁹-R¹⁰ sind Wasserstoff. In einer weiteren besonders bevorzugten Ausführungsform sind R¹-R⁴ und R^5A Wasserstoff, R⁹ ist Methoxy und R⁷-R⁸ und R⁹-R¹⁰ sind Wasserstoff.
Verfahren zur Synthetisierung oder Isolierung von Wogonin, dessen pharmazeutisch annehmbarer Salze oder Ester, dessen selektiv substituierter Analoge sind in der Fachwelt allgemein bekannt. Siehe z. B. die internationale Patentanmeldung Nr. WO/01051482 A1 von Wallace et al.; P. Rivaille et al., C.R Acad. Sci., Paris Ser. C.(1969), 268(2): 2213-16; M.-C. Lin et al., J. Chromatogr, A (1999), 830(2): 387-395; Y.-C. Chen et al., Biochem. Pharmacol. (2001), 61(11): 1417-1427.
Wenn Wogonin vorliegt, enthält das Wogonin mehr als oder gleich 0,5 Gew.-%, bevorzugt mehr als gleich ungefähr 1 Gew.-%, insbesondere mehr bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 2 Gew.-% und ganz besonders bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 5 Gew.-%, noch weiter bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 10 Gew.-% und noch mehr bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 20 Gew.-% des Gesamtgewichts der Zusammensetzung. Zusammensetzungen, die mehr als 50 Gew.-% oder sogar mehr als 100 Gew.-% Wogonin enthalten, sind angedacht.
Das Phytoöstrogen kann Isoliquiritigenin umfassen. Isoliquiritigenin bezieht sich gemäß der hiesigen Verwendung auf CAS Reg. Nr. 961-29-5, auch bekannt als 2',4,4'-Trihydroxychalcon, ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Ester von Isoliquiritigenin, ein selektiv substituiertes Analoges von Isoliquiritigenin, einen Extrakt aus Glycyrrhiza uralensis oder Glycyrrhiza glabra, oder eine Kombination, die eine oder mehrere der zuvor genannten Verbindungen enthält.
Ein Ester von Isoliquiritigenin ist bevorzugt ein Glykosid von Isoliquiritigenin. Es gibt keine besondere Einschränkung bezüglich des Monosaccharids oder des Polysaccharids, das verwendet wird, um das Glykosid von Isoliquiritigenin zu bilden. Geeignete monosaccharidische Zucker schließen z. B. Glukose, Glucoronsäure, Mannose, Fruktose, Galaktose, Xylose, Rutinose, Rhamnose und ähnliche ein, und Kombinationen, die eine oder mehrere der zuvor genannten Monosaccharide enthalten. Geeignete Polysaccharide schließen z. B. Dimere, Trimere, Oligomere und Polymere ein, die aus einem oder mehreren der obigen Monosaccharide gebildet sind.
Ein Isoliquiritigenin-Analoges schließt z. B. Phloretin, 4,2,4'-Trihydroxychalcon, oder ähnliches ein, oder eine Kombination, die eines oder mehrere der zuvor genannten Isoliquiritigenin-Analoge enthält.
Ein Extrakt von Glycyrrhiza uralensis oder Glycyrrhiza glabra ist eine Quelle für Isoliquiritigenin, ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Ester von Isoliquiritigenin, ein selektiv substituiertes Analoges von Isoliquiritigenin, oder eine Kombination, die eine oder mehrere der zuvor genannten Verbindungen umfasst.
Ein selektiv substituiertes Analoges von Isoliquiritigenin hat die Formel (2)
worin R¹¹-R¹⁴ unabhängig voneinander Wasserstoff oder C₁-C₆-Alkyl (bevorzugt Wasserstoff) sind; und R¹⁵-R²⁰ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl (bevorzugt Wasserstoff), unter der Voraussetzung, dass wenigstens drei von R¹⁵-R²⁰ Wasserstoff sind. In einer bevorzugten Ausführungsform sind R¹¹-R¹⁴ Wasserstoff und R¹⁵-R²⁰ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, Acetyl oder Propionyl, unter der Voraussetzung, dass wenigstens vier von R¹⁵-R²⁰ Wasserstoff sind. Verfahren zur Synthetisierung oder Isolierung von Isoliquiritigenin, dessen pharmazeutisch annehmbarer Salze oder Ester, dessen selektiv substituierten Analogen, sind in der Fachwelt allgemein bekannt. Siehe z. B. S. K. Srivastava et al., Indian J. Chem., Sect. B (1981), 20B(4): 347-8; und F. A. Macias et al., Phytochemistry (1998), 50(1): 35-46.
Wenn Isoliquiritigenin vorliegt, umfasst das Isoliquiritigenin mehr als oder gleich ungefähr 0,5 Gew.-%, bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 1 Gew.-%, weiter bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 2 Gew.-%, noch weiter bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 5 Gew.-%, insbesondere bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 10 Gew.-% und noch weiter bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 20 Gew.-% des Gesamtgewichts der Zusammensetzung. Zusammensetzungen, die mehr als 50 Gew.-% oder sogar mehr als 100 Gew.-% an Isoliquiritigenin enthalten, sind angedacht.
Das Phytoöstrogen kann Coumestrol umfassen. Coumestrol, wie es hierin verwendet wird, bezieht sich auf CAS Reg. Nr. 479-13-0, auch bekannt als 3,9-Dihydroxy-6H-benzufuro[3,2-c][1]benzopyran-6-on, ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Ester von Coumestrol, ein selektiv substituiertes Analoges von Coumestrol, ein Extrakt aus Taraxacum mongolicum, Alfalfakeimling (Medicago sativa); Brokkoli (Brassica oleracea), Eclipta prostrata, oder eine Kombination, die eine oder mehrere der zuvor genannten Verbindungen umfasst.
Ein Ester von Coumestrol ist bevorzugt ein Glykosid von Coumestrol. Es gibt keine bestimmte Einschränkung bezüglich des Monosaccharids oder des Polysaccharids, das verwendet wird, um das Glykosid von Coumestrol zu bilden. Geeignete monosaccharidische Zucker schließen z. B. Glukose, Glucoronsäure, Mannose, Fruktose, Galaktose, Xylose, Rutinose, Rhamnose und ähnliche ein und Kombinationen, die wenigstens einen oder mehrere der zuvor genannten Monosaccharide enthalten. Geeignete Polysaccharide schließen z. B. Dimere, Trimere, Oligomere und Polymere ein, die aus einem oder mehreren der obigen Monosaccharide gebildet sind.
Ein Coumestrol-Analoges schließt z. B. 4-Ethyl-7-hydroxy-3-(p-methoxyphenyl)-2H-1-benzopyran-2-on (Wedelolacton) und ähnliche ein.
Das Coumestrol kann einen Extrakt von Taraxacum mongolicum, Alfalfakeimling (Medicago sativa); Brokkoli (Brassica oleracea), Eclipta prostrata, oder ähnliches als eine Quelle für Coumestrol umfassen, ein pharmazeutisch annehmbares Salz oder Ester von Coumestrol, ein selektiv substituiertes Analoges von Coumestrol, oder eine Kombination, die eine oder mehrere der zuvor genannten Verbindungen enthält.
Ein selektiv substituiertes Analoges von Coumestrol hat die Formel
worin R²¹ und R²² unabhängig voneinander Wasserstoff oder C₁-C₆-Alkyl (bevorzugt Wasserstoff) sind; und R²³-R²⁸ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl (bevorzugt Wasserstoff), mit der Voraussetzung, dass wenigstens drei von R²³-R²⁸ Wasserstoff sind. In einer bevorzugten Ausführungsform sind R²¹ und R²² Wasserstoff; und R²³-R²⁸ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, Methyl, Ethyl, Methoxy, Ethoxy, Acetyl oder Propionyl, mit der Voraussetzung, dass wenigstens vier von R²³-R²⁸ Wasserstoff sind.
Verfahren zur Synthetisierung oder Isolierung von Coumestrol, dessen pharmazeutisch annehmbarer Salze oder Ester, dessen selektiv substituierter Analoge, sind in der Fachwelt allgemein bekannt. Siehe z. B. P. M. Dewick et al., J. Chem. Soc. D. (1969), 9: 466-7; T. Kappe et al., Z. Naturforsch. Teil B (1974), 29(3-4): 292-3; R. Laschober et al., Synthesis (1990), 5: 387-8; F. A Macias et al., Phytochemistry (1998), 50(1): 35-46; K. Hiroya et al., Perkin 1 (2000), 24: 4339-4346; G. A. Kraus et al., Journal of Organic Chemistry (2000), 65(18): 5644-5646; und M. Okada et al., Planta Med. (2000), 66(6): 572-575.
Wenn es vorliegt, umfasst Coumestrol mehr als oder gleich 0,5 Gew.-%, bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 1 Gew.-%, weiter bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 2 Gew.-%, noch weiter bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 5 Gew.-%, noch weiter bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 10 Gew.-%, insbesondere weiter bevorzugt mehr als oder gleich ungefähr 20 Gew.-% des Gesamtgewichts der Zusammensetzung. Zusammensetzungen, die soviel wie 50 Gew.-% oder sogar mehr als 100 Gew.-% an Coumestrol enthalten, sind angedacht.
Das Phytoöstrogen kann ein Prenylflavonoid umfassen, wie z. B. 6-Prenylnarignin, 8-Prenylnaringenin und 6,8-Diprenylnaringenin. Geeignete Prenylisoflavonoide werden durch die Formel dargestellt
worin R³⁰ und R³¹ unabhängig voneinander Wasserstoff oder 3-Methyl-2-butenyl sind, mit der Voraussetzung, dass wenigstens eines von R³¹ und R³³ 3-Methyl-2-butenyl ist; R²⁹ und R³² sind unabhängig voneinander Wasserstoff oder C₁-C₆- Alkyl; und R³³-R³⁷ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl; und worin wenigstens zwei von R³³-R³⁷ Wasserstoff sind.
Ergänzende aktive Bestandteile können auch in die Zusammensetzungen und Präparationen eingearbeitet sein. Z. B. wird von der Verabreichung von Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol und Mischungen, die eines oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene in Kombination mit anderen Antikrebsmitteln enthalten, erwartet, dass sie die Antikrebsaktivität stimulieren.
In einer Ausführungsform kann die Zusammensetzung enthalten: Mehr als oder gleich 0,5 Gew.-% eines Phytoöstrogens, ausgewählt aus Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol und Kombinationen, die eine oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene enthalten und wenigstens ein Anti-Krebsmittel. In solchen Zusammensetzungen kann das Phytoöstrogen, das ausgewählt ist aus Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol und Kombinationen daraus, in einer Menge von ungefähr 0,5 bis ungefähr 50 Gew.-% des Gesamtgewichts an aktiven Bestandteilen in der Zusammensetzung vorliegen. Innerhalb dieses Bereichs kann die Menge größer als oder gleich ungefähr 1, 2, 5 oder 10 Gew.-% sein. Auch innerhalb dieses Bereichs kann die Menge bis zu ungefähr 40, 30 oder 20 Gew.-% sein. Während die oben genannten Gewichtsprozente auf das Gesamtgewicht an aktiven Bestandteilen in der Zusammensetzung bezogen sind, können sie alternativ auf das Gesamtgewicht an Phytoöstrogenen in der Zusammensetzung bezogen sein.
Die Zusammensetzung zur Behandlung von Krebs kann außerdem ein Antikrebsmittel enthalten, das kein Phytoöstrogen ist. Es gibt keine bestimmte Einschränkung bezüglich des Anti-Krebsmittels, das angewendet wird. Geeignete Antikrebsmittel schließen z. B. Oridonin, Indirubin, Taxol, cis-Platin, Camptothecan, Vincristin, Monocrotalin, Maytansin, Homoharringtonin, Colchicin, Irischinon A, Irischinon B, Irischinon C, Acronycin, Matrin, Oxymatrin, Curcumin, Paricin, Pariphyllin und ähnliche ein, sowie Kombinationen, die ein oder mehrere der zuvor genannten Antikrebsmittel enthalten. Bevorzugt schließen die Antikrebsmittel Oridonin ein.
Geeignete Antikrebsmittel schließen z. B. auch einen Extrakt aus einer Pflanze ein, die ausgewählt ist aus Rabdosia rubescens, Panax pseudo-ginseng Wall, Ganoderma lucidum Karst, Scutellaria baicalensis Georgi, Glycine max, Curcuma longa und ähnliche, und Kombinationen, die eine oder mehrere der vorgenannten Pflanzen umfasst. Ein Extrakt aus Rabdosia rubescens kann Oridonin enthalten; ein Extrakt aus Humulus lupulus kann Lupulon enthalten; ein Extrakt aus Panax pseudo-ginseng Wal! kann ein Gensenosid enthalten; ein Extrakt aus Scutellaria baicalensis Georgi kann Baicalin enthalten; ein Extrakt aus Glycine max kann ein Sojaflavonoid, ein Sojaisoflavonoid oder beides enthalten; und ein Extrakt aus Curcuma longa kann Curcumin enthalten.
Das Antikrebsmittel kann z. B. ungefähr 1 bis ungefähr 10 Gewichtsteile eines Extraktes aus Rabdosia rubescens enthalten; ungefähr 10 bis ungefähr 40 Gewichtsteile eines Extraktes aus Panax pseudo-ginseng Wall; ungefähr 100 bis ungefähr 500 Gewichtsteile eines Extraktes aus Ganoderma lucidum Karst; ungefähr 10 bis ungefähr 100 Gewichtsteile eines Extraktes aus Scutellaria baicalensis Georgi; ungefähr 10 bis ungefähr 100 Gewichtsteile eines Extraktes aus Glycine max; und ungefähr 10 bis ungefähr 100 Gewichtsteile eines Extraktes aus Curcuma longa.
Das Antikrebsmittel kann z. B. einen Extrakt aus Humulus lupulus enthalten; und einen Extrakt aus einer Pflanze, die ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus Panax pseudo-ginseng Wall, Ganoderma lucidum Karst, Scutellaria baicalensis Georgi, Glycine max, Curcuma longa und Kombinationen, die eine oder mehrere der zuvor genannten Pflanzen umfasst.
Das Antikrebsmittel kann ungefähr 1 bis ungefähr 10 Gewichtsteile eines Extraktes aus Humulus lupulus enthalten, ungefähr 10 bis ungefähr 40 Gewichtsteile eines Extraktes aus Panax pseudo-ginseng Wall; ungefähr 100 bis ungefähr 500 Gewichtsteile eines Extraktes aus Ganoderma lucidum Karst; ungefähr 10 bis ungefähr 100 Gewichtsteile eines Extraktes aus Scutellaria baicalensis Georgi; ungefähr 10 bis ungefähr 100 Gewichtsteile eines Extraktes aus Glycine max; und ungefähr 10 bis ungefähr 100 Gewichtsteile eines Extraktes aus Curcuma longa.
Das Antikrebsmittel kann mit ungefähr 1 bis ungefähr 90 Gew.-% des Gesamtgewichts an aktiven Bestandteilen in der Zusammensetzung vorliegen. Innerhalb dieses Bereiches kann die Menge an Antikrebsmittel größer als oder gleich ungefähr 2, 5 oder 10 Gew.-% sein. Auch innerhalb dieses Bereichs kann die Menge an Antikrebsmittel bis zu ungefähr 80, 70, 50 oder 25 Gew.-% sein.
Zusätzlich zu einem Antikrebsmittel kann die Zusammensetzung optional außerdem in Immunstimulans enthalten. Es gibt keine besondere Einschränkung bezüglich des Immunstimulans, das angewendet wird. Geeignete Immunstimulantien schließen z. B. Ginsenoside, Ferulasäure, Mannan, Synanthrin, Eleutherosid A, Eleutherosid B, Elutherosid C, Eleutherosid D, Eleutherosid E, Gynosid, Beta-pachyman, Inulin, Polyfruktose, Glycoproteine, Interferone, Gammaglobuline, Polysaccharide aus Ganoderma lucidum und ähnliche ein und Kombinationen, die eines oder mehrere der zuvor genannten Immunstimulantien enthält. Geeignete Immunstimulantien schließen außerdem z. B. Extrakte aus Ganoderma lucidum, Coriolus versicolor; Poria cocos und ähnliche ein, und Kombinationen, die eines oder mehrere der zuvor genannten Extrakte enthalten. Bevorzugte Immunstimulantien schließen Beta-pachyman ein.
Das Immunstimulans wird, wenn es vorliegt, mit ungefähr 1 bis ungefähr 90 Gew.-% des Gesamtgewichts an aktiven Wirkstoffen in der Zusammensetzung angewendet. Innerhalb dieses Bereichs kann die Menge an Immunstimulans größer als oder gleich ungefähr 2, 5, 10, 20 oder 50 Gew.-% sein. Auch innerhalb dieses Bereichs kann die Menge an Immunstimulans bis zu ungefähr 80, 70 oder 60 Gew.-% sein.
In einer bevorzugten Ausführungsform enthält die Zusammensetzung: mehr als ungefähr 0,5 Gew.-% eines Phytoöstrogens, ausgewählt aus Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol oder eine Kombination, enthaltend eins oder mehrere der zuvor genannten Verbindungen; ein Antikrebsmittel, ausgewählt aus Oridonin, Colchicin, Vincristin, Camptothecan, Maytansin, Taxol und Kombinationen, enthaltend eines oder mehrere der zuvor genannten Antikrebsmittel; und ein Immunstimulans, ausgewählt aus Ginsenosiden, Mannan, Synanthrin, Eleutherosid A, Eleutherosid B, Elutherosid C, Eleutherosid D, Eleutherosid E, Gynosiden, Beta-pachyman, Interferon und Kombinationen, enthaltend eins oder mehrere der zuvor genannten Immunstimulantien. In dieser Ausführungsform enthält die Zusammensetzung bevorzugt: ungefähr 1 bis ungefähr 40 Gew.-% einer Verbindung, ausgewählt aus Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol und Kombinationen, die eins oder mehrere der zuvor genannten Verbindungen enthalten; ungefähr 0,05 bis ungefähr 5 Gew.-% einer Verbindung, ausgewählt aus Oridonin, Camptothecan, Vincristin, Indirubin, Colchicin, Ginsenosiden und Kombinationen, die eine oder mehrer der zuvor genannten Verbindungen enthalten; und ungefähr 10 bis ungefähr 98 Gew.-% einer Verbindung, ausgewählt aus Beta-pachyman, Mannan, Synanthrin, Gynosiden und Kombinationen, die eine oder mehrere der zuvor genannten Verbindungen enthalten; wobei alle Gewichtsprozente bezogen sind auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform enthält die Zusammensetzung ein Phytoöstrogen, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol und Kombinationen, die eine oder mehrere der zuvor genannten Verbindungen enthalten; Oridonin; und Beta-pachyman. In dieser Ausführungsform enthält die Zusammensetzung bevorzugt: ungefähr 1 bis ungefähr 30 Gew.-% an Wogonin, Isoliquiritigenin Coumestrol oder einer Kombination, die wenigstens eine der zuvor genannten Verbindungen enthält; ungefähr 0,1 bis ungefähr 5 Gew.-% Oridonin; und ungefähr 20 bis ungefähr 90 Gew.-% Beta-pachyman; wobei alle Gewichtsprozente bezogen sind auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung.
Wenn die Zusammensetzung auch so definiert werden kann, dass sie mehrere Komponenten enthält, soll es so verstanden werden, dass jede Komponente chemisch voneinander getrennt ist, insbesondere in dem Fall, dass eine einzelne chemische Verbindung die Definition von mehr als einer Komponente erfüllen kann.
Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol und deren pharmazeutisch annehmbare Salze oder Ester oder deren selektiv substituierte Analoge können aus natürlichen Quellen isoliert werden oder gemäß bekannter Methoden synthetisiert werden, wie es oben beschrieben ist. Die Reinheiten dieser Verbindungen, wie sie in der Zusammensetzung angewendet werden, können entsprechend deren Verfahren der Isolierung oder Synthese variieren, jedoch können Reinheiten von ungefähr 5% oder mehr als 99% für die Verwendung in der Zusammensetzung geeignet sein.
Die Phytoöstrogene können in Form einer pharmazeutisch annehmbaren Zusammensetzung vorliegen. Verfahren für die Formulierung von pharmazeutisch annehmbaren Zusammensetzungen sind allgemein bekannt. Die pharmazeutischen Formulierungstypen können eine oder mehrere nichtbiologisch aktive Verbindungen enthalten, z. B. Hilfsstoffe wie Stabilisatoren (um die Langzeitlagerung zu unterstützen), Emulgatoren, Bindemittel, Verdickungsmittel, Salze, Konservierungsstoffe und ähnliches, abhängig von dem Weg der Verabreichung.
Für eine orale Verabreichung können das Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol, deren pharmazeutisch annehmbare Salze oder Ester, deren selektiv substituierte Analoge oder ähnliche, oder Kombinationen, enthaltend eines oder mehrere der vorhergehenden mit einem inerten Verdünnungsmittel oder mit einem assimilierbaren essbaren Trägerstoff verabreicht werden oder direkt mit dem Essen der Diät zugeführt werden. Die Formulierungen können mit Hilfsmitteln zugeführt werden und in der Form von einnehmbaren Tabletten, Lutschtabletten, Pastillen, Kapseln, Elixieren, Suspensionssirup, Waffeln oder ähnlichem verwendet werden. Die Tabletten, Pastillen, Pillen, Kapseln und ähnliches können auch das folgende enthalten: ein Bindemittel, wie z. B. Gum tragacanth, Akaziensaft, Maisstärke oder Gelatine; Hilfsmittel, wie z. B. Dicalciumphosphat; ein Disintegrationsmittel, wie z. B. Maisstärke, Kartoffelstärke, Alginsäure und ähnliches; ein Schmiermittel, wie z. B. Magnesiumstearat und Süßungsmittel, wie z. B. Sucrose, Lactose oder Saccharin; ein Geschmacksmittel, wie z. B. Pfefferminz, Wintergrünöl oder ähnliche Geschmacksrichtungen. Wenn die Dosierungseinheit eine Kapsel ist, kann sie zusätzlich zu den Materialien des obigen Typs einen flüssigen Träger enthalten. Verschiedene andere Materialien können auch als Beschichtungen vorliegen oder um die physikalische Form der Dosierungseinheit auf andere Weise zu modifizieren. Ein Sirup oder Elixier kann Sucrose als ein Süßungsmittel enthalten, Methyl- und Propylparabene als Konservierungsstoffe, einen Farbstoff und ein Geschmacksmittel, wie z. B. Kirsche oder Orangengeschmack. Solche zusätzlichen Materialien sollten in den Mengen, in denen sie angewendet werden, im Wesentlichen nicht toxisch sein. Darüber hinaus können die aktiven Mittel in Präparationen und Formulierungen eingearbeitet sein, die eine anhaltende Freisetzung gewährleisten. Formulierungen für eine parenterale Verabreichung können sterile wässrige Lösungen oder Dispersionen umfassen und sterile Pulver für die kurzfristige Herstellung von sterilen, injizierbaren Lösungen oder Dispersionen. Die Lösungen oder Dispersionen können auch Puffer, Verdünnungsmittel und andere geeignete Additive enthalten und können so ausgearbeitet sein, dass sie die zelluläre Aufnahme der aktiven Mittel in der Zusammensetzung unterstützen, z. B. durch Liposome. Sterile, injizierbare Lösungen werden durch Einarbeiten der aktiven Verbindungen in den erforderlichen Mengen in das geeignete Lösemittel mit einem oder mehreren der verschiedenen anderen Bestandteile, die oben beschrieben sind, hergestellt, gefolgt von einer Sterilisation. Dispersionen können im Allgemeinen durch Einarbeiten der verschiedenen sterilisierten aktiven Bestandteile in einen sterilen Trägerstoff hergestellt werden, der das Basisdispersionmedium und die erforderlichen anderen Bestandteile aus denen, die oben aufgelistet sind, enthält. Im Falle von sterilen Pulvern, die verwendet werden, um sterile, injizierbare Lösungen herzustellen, sind die bevorzugten Verfahren zur Herstellung Vakkumtrocknungs- und Gefriertrocknungstechniken, die ein Pulver des aktiven Bestandteils plus irgendwelche zusätzliche gewünschte Bestandteile von den vorher sterilfiltrierten Lösungen ergeben. Pharmazeutische Formulierungen für die topische Verabreichung können insbesondere für eine lokalisierte Behandlung geeignet sein. Formulierungen für die topische Behandlung schließen Salben, Sprays, Gele, Suspensionen, Lotionen, Cremes und ähnliche ein. Formulierungen für die topische Verabreichung können bekannte Trägermaterialien einschließen, wie z. B. Isopropanol, Glycerin, Paraffin, Stearylalkohol, Polyethylenglykol und ähnliche. Die pharmazeutisch annehmbaren Träger können auch einen bekannten chemischen, die Absorption unterstützenden Stoff einschließen. Die Absorption unterstützende Stoffe schließen z. B. Dimethylacetamid (U.S.-Patent Nr. 3,472,931 von Stoughton), Trichlorethanol oder Trifluorethanol (U.S.-Patent Nr. 3,891,757 von Higuchi), bestimmte Alkohole und Mischungen daraus (britische Patente Nrn. 1,001,949 von Meyer und 1,464,975 von Astra Lakemedel) ein. Mit der Ausnahme insofern, wie irgendwelche konventionelle Medien oder Mittel mit den therapeutisch wirksamen Bestandteilen nicht vereinbar sind, wird deren Verwendung in den therapeutischen Zusammensetzungen und Präparationen beabsichtigt.
Die Zusammensetzung kann optional in einer mit der Nahrung aufnehmbaren Form vorliegen, bevorzugt einem Pulver, einer Kapsel oder einer Tablette. Alternativ kann die Zusammensetzung in Form eines Zäpfchens sein.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen, die beschrieben sind, enthalten bevorzugt ungefähr 0,5 Gew.-% bis 100 Gew.-% an aktivem Wirkstoff. Innerhalb dieses Bereichs können die Zusammensetzungen und die Präparationen bevorzugt das aktive Mittel in einer Menge von wenigstens ungefähr 1, 2, 5, 10 oder 20 Gew.-% enthalten. Ebenfalls innerhalb dieses Bereichs kann die Zusammensetzung bevorzugt das aktive Mittel in einer Menge von bis zu ungefähr 90, 80, 70, 60 oder 50 Gew.-% enthalten. Die Menge an aktiven Verbindungen in solch pharmazeutisch verwendbaren Zusammensetzungen und Präparationen ist so, dass die geeignete Dosierung erhalten wird.
Eine weitere Ausführungsform ist ein Verfahren für die Behandlung eines Menschen, der Krebs hat, einen Östrogen-bezogenen Krebs oder eine andere Östrogen-bezogene Erkrankung. Das Verfahren umfasst die Behandlung eines Menschen, der eine solche Behandlung nötig hat, mit einer Zusammensetzung, die ein Phytoöstrogen enthält, ausgewählt aus Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol oder einer Kombination, die eines oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene enthält. Die Begriffe „behandeln" und „Behandlung", wie sie hierin verwendet werden, beziehen sich auf eine Verringerung der Schwere und/oder der Häufigkeit von Symptomen, der Elimination von Symptomen und/oder den ihnen zugrunde liegenden Gründen, der Vorbeugung des Auftretens von Symptomen und/oder deren zugrunde liegenden Gründe, und der Verbesserung oder Behebung eines Schadens. Somit schließt z. B. das vorliegende Verfahren zum „Behandeln" einer Östrogen-abhängigen Erkrankung oder Krebs gemäß dem Begriff, wie er hierin verwendet wird, sowohl die Prävention der Erkrankung als auch die Behandlung der Erkrankung in einem klinisch symptomatischen Individuum ein.
Durch die Begriffe „effektive Menge" oder „pharmazeutisch wirksame Menge" oder „eine wirksame anti-östrogene Menge" eines Mittels, wie es hierin bereitgestellt wird, ist eine nichttoxische, jedoch ausreichende Menge des Mittels gemeint, um den gewünschten prophylaktischen oder therapeutischen Effekt zu liefern. Wie unten nochmals hingewiesen wird, wird die exakte Menge, die erforderlich ist, von Patient zu Patient variieren, abhängig von dem Alter und der allgemeinen Befindlichkeit des Patienten, der Schwere der zu behandelnden Umstände und des bestimmten Phytoöstrogens, das angewendet wird, und der Weise der Verabreichung und ähnlichem. Daher ist es nicht möglich, eine exakte „wirksame Menge" zu spezifizieren. Eine geeignete „wirksame" Menge in irgendeinem individuellen Fall kann jedoch durch einen üblich geschulten Fachmann auf diesem Gebiet unter Anwendung von lediglich Routineexperimenten bestimmt werden.
Mit einem „pharmazeutisch annehmbaren Träger" ist ein Material gemeint, das nicht biologisch oder anderweitig unerwünscht ist, z. B. kann das Material an ein Individuum zusammen mit dem ausgewählten Phytoöstrogen verabreicht werden ohne irgendwelche unerwünschten biologischen Effekte oder eine Interaktion in einer nachteiligen Weise mit irgendeinem der anderen Komponenten der pharmazeutischen Zusammensetzung, in der dieses enthalten ist, zu bewirken.
Krebs ist das Wachstum von neuen Zellen in dem Körper, wobei die neuen Zellen typischerweise negative Effekte in dem Körper haben. Krebs ist durch ein Ansteigen der Zahl von abnormen oder neoplastischen Zellen charakterisiert, die von einem normalen Gewebe abgeleitet sind, das proliferiert, um eine Tumormasse zu bilden, die Invasion von anliegenden Geweben durch diese neoplastischen Tumorzellen, und die Bildung von malignen Zellen, die sich eventuell über das Blut oder das lymphatische System zu regionalen Lymphknoten und zu entfernten Stellen über ein Verfahren ausbreiten, das Metastasis genannt wird. In einem kanzerogen Zustand proliferiert eine Zelle unter Bedingungen, unter denen normale Zellen nicht wachsen würden. Krebs manifestiert sich selbst in einer breiten Vielzahl von Formen, die durch verschiedene Grade an Invasivität und Aggressivität charakterisiert sind.
Die Verabreichung eines Phytoöstrogens, wie z. B. Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol oder Kombinationen davon, ist wirksam, eine Antikrebsaktivität bereitzustellen. Es wird angenommen, dass die allgemeine Antikrebsaktivität von Wogonin, Isoliquiritigenin und Coumestrol mit deren Aktivität als COX-2-Inhibitoren in Zusammenhang steht. COX-2 ist ein induzierbares Schlüsselenzym bei der Umwandlung von Arachidonsäure zu Prostaglandinen und anderen Eicosanoiden. Die COX-2-Expression kann durch eine Vielzahl von Faktoren induziert werden, einschließlich z. B. Wachstumsfaktoren, Interleukin-1 und Tumorpromotionsfaktoren. Das Enzym wird in einer Vielzahl von Tumorzellen und menschlichen Krebsarten, unter denen auch Prostatakrebs ist, exprimiert. COX-2-Inhibitoren sind dafür bekannt, dass sie eine Verwendbarkeit als Antikrebstherapeutika haben.
Zusätzlich zu einer allgemeinen Antikrebsaktivität sind die Phytoöstrogene Wogonin, Isoliquiritigenin und Coumestrol als Anti-Hormonbezogene Krebswirkstoffe verwendbar. Hormonbezogene Krebsarten schließen z. B. Blasenkrebs, Knochenkrebs, Brustkrebs, Darmkrebs, Endometrialkrebs, Lungenkrebs, Ovarkrebs, Prostatakrebs, Hodenkrebs und Schilddrüsenkrebs ein.
Bei der Behandlung von Krebs können die Phytoöstrogen-Zusammensetzungen oral, parenteral, transdermal, rektal, nasal, bukkal, vaginal oder über ein implantiertes Reservoir in Dosierungsformulierungen verabreicht werden, die konventionelle nichttoxische pharmazeutisch annehmbare Trägerstoffe, Adjuvantien und Vehikel enthalten. Der Begriff „parenteral", wie er hierin verwendet wird, soll so verstanden werden, dass er eine subkutane, intravenöse und intramuskuläre Injektion einschließt. Die Menge an aktiver Verbindung, die verabreicht, wird natürlich von dem Patienten abhängen, der behandelt wird, dem Patientengewicht, der Art und Weise der Verabreichung und der Entscheidung des verschreibenden Arztes. Im Allgemeinen wird jedoch die Dosierung des Phytoöstrogens ungefähr 0,01 mg/kg/Tag bis ungefähr 1000 mg/kg/Tag sein, bevorzugt ungefähr 0,01 mg/kg/Tag bis ungefähr 300 mg/kg/Tag, besonders bevorzugt ungefähr 1 mg/kg/Tag bis ungefähr 300 mg/kg/Tag. Wenn das Phytoöstrogen in Kombination mit einem Antikrebsmittel verwendet wird, wird die Dosierung des Phytoöstrogens ungefähr 0,01 mg/kg/Tag bis ungefähr 1000 mg/kg/Tag sein, bevorzugt ungefähr 0,01 mg/kg/Tag bis ungefähr 300 mg/kg/Tag, besonders bevorzugt ungefähr 1 mg/kg/Tag bis ungefähr 300 mg/kg/Tag, und die Dosierung des Antikrebsmittels wird ungefähr 0,1 μg/kg/Tag bis ungefähr 100 mg/kg/Tag sein, bevorzugt ungefähr 0,3 μg/kg/Tag bis ungefähr 50 mg/kg/Tag, besonders bevorzugt ungefähr 0,01 mg/kg/Tag bis ungefähr 50 mg/kg/Tag. Wenn die Phytoöstrogen-Zusammensetzung ein Immunstimulans enthält, wird die Dosierung des Immunstimulans ungefähr 1 mg/kg/Tag bis ungefähr 5000 mg/kg/Tag, bevorzugt ungefähr 5 mg/kg/Tag bis ungefähr 1000 mg/kg/Tag sein.
Die Phytoöstrogene Wogonin, Isoliquiritigenin und Coumestrol können auch bei der Behandlung von anderen Östrogen-bezogenen Erkrankungen verwendet werden, einschließlich z. B. Knochenverlust, Knochenfrakturen, Osteoporose, Glucokortikoid-induzierte Osteoporose, Paget's Erkrankung, abnormal erhöhten Knochenumsatz, periodontale Erkrankung, Zahnverlust, rheumatitische Arthritis, Osteoarthritis, periprostethische Osteolyse, Osteogenesis imperfecta, metastatische Knochenerkrankung, Hypercalcämie von Malignität, Knorpeldegeneration, Endometriosis, Uterusfibroiderkrankung, Hitzewallungen, kardiovaskuläre Erkrankung, Beeinträchtigung der kognitiven Funktion, cerebraldegenerative Erkrankungen, Restenosis, Gynecomastia, Proliferation der vaskulären glatten Muskelzellen, Fettleibigkeit, Inkontinenz und Kombinationen davon. Wie es hierin verwendet wird, schließt eine Östrogen-bezogene Erkrankung auch die Symptome der Menopause, also dem Übergang aus dem reproduktiven Stadium zu dem nichtreproduktiven Stadium des Lebens von Frauen ein, was in erster Linie durch die Beendigung der Menstruation charakterisiert ist. Symptome der Menopause schließen z. B. Hitzewallungen, das Schwitzen in Nachklang zu einer vasomotorischen Instabilität, psychologische und emotionale Symptome von Müdigkeit, Schlaflosigkeit, Erregbarkeit und Nervosität, Schlafmangel, Schwindelgefühle und Herzsymptome ein; die Häufigkeit von Herzerkrankungen steigt an, Übelkeit, Verstopfung, Durchfall, Arthralgia, Myalgia und Kombinationen der zuvor genannten Symptome.
Von besonderem Interesse ist die Behandlung und die Prävention von Osteoporose. Osteoporose, oder der Verlust von Knochendichte, führt zu häufigeren Knochenbrüchen und dem Zusammenschieben der Wirbelsäule. Der Knochenverlust beginnt häufig ungefähr im Alter von 35. Dieser Verlust beschleunigt sich während der Menopause, die im Allgemeinen ungefähr im Alter von 45 bis 55 eintritt. Die Verluste an Knochenmasse belaufen sich auf ungefähr 1 bis 2% pro Jahr nach der Menopause. Die primären Stellen sind die Rückenwirbel, die ein früheres Zusammenschieben zeigen, was zu einer Krümmung des Rückens und Rückenschmerzen, der Hüften und des Handgelenks führt. Osteoporose entwickelt sich über Dekaden hinweg und bezieht sich auf die maximale Knochenmasse ebenso wie auf den Grad des Verlustes von Knochen.
Bei der Behandlung einer Östrogen-bezogenen Erkrankung können die Phytoöstrogen-Zusammensetzungen oral, parenteral, transdermal, rektal, nasal, bukkal, vaginal oder über ein implantiertes Reservoir in Dosierungsformulierungen verabreicht werden, die konventionelle nichttoxische pharmazeutisch annehmbare Trägerstoffe, Adjuvantien und Vehikel enthalten. Der Begriff „parenteral", wie er hierin verwendet wird, soll so verstanden werden, dass er eine subkutane, Intravenöse und intramuskuläre Injektion einschließt. Die Menge an aktiver Verbindung, die verabreicht wird, wird natürlich von dem Patienten abhängig sein, der behandelt wird, von dem Gewicht des Patienten, der Art und Weise der Verabreichung und der Entscheidung des verschreibenden Arztes. Im Allgemeinen wird jedoch die Dosierung des Phytoöstrogens ungefähr 0,1 mg/kg/Tag bis ungefähr 1000 mg/kg/Tag sein, bevorzugt ungefähr 0,1 mg/kg/Tag bis ungefähr 300 mg/kg/Tag.
Der Erfindung wird durch die folgenden nicht einschränkenden Beispiele genauer dargestellt.
Allgemeine Experimente
Wogonin wurde aus 7 g einer Multi-Komponenten-Zusammensetzung eines botanischen Extraktes, die Extrakte von Panxy pseudo-ginseng Wall, Istatis Indigotica Fort, Ganoderma lucidium Karst, Dendrathema morifolium Tzvel, Glycyrrhiza glabra L, Sculletaria baicalensis Georgi, Rabdosia rubescens und Serenoa repens enthielt, extrahiert. Das Pulver wurde in 150 ml Aceton unter Verwendung eines Soxhlet-Extraktors für eine Stunde gelöst. Der Flüssigphasenextrakt wurde weiter gereinigt durch eine Silicagel-Säulenchromatographie unter Verwendung eines Lösemittelsystems von 2:1 Cyclohexan:Aceton. Ungefähr 25 mg des gelben Pulvers wurde aus den Fraktionen 11-13 erhalten (8 ml pro Fraktion). Das Pulver wurde anschließend aus absolutem Alkohol rekristallisiert, um gelbe Kristalle zu erhalten.
1 ist ein Hochleistungs-Flüssigchromatogramm, dass die Lokalisierung von Wogonin in dem Elutionsprofil zeigt. Das Chromatogramm wurde mit einem Shimadzu SPD-M10A-Chromatograph unter Verwendung einer C18-Reverse-Phasensäule und zwei Lösemittelsystemen von Wasser und Acetonitril in 0,1% Trifluoressigsäure erhalten.
Die chemische Struktur und das Molekulargewicht des gelben Kristalls wurden durch Gesamt-(2(b)) und DEPT-(2(a))- ¹³C NMR (d-4 Methanollösungsmittel, analysiert auf einem Varian^UNITY Inova 400 System) bestimmt. Die Probe wurde auch durch Elektronionisation mit einem Hewlett Packard VG 7070 analysiert; das Massenspektrum ist in 3 gezeigt und weist ein Molekulargewicht von 284 auf, das mit Wogonin übereinstimmt.
Isoliquiritigenin wurde aus der Flavonoidfraktion eines Glycyrrhiza glabra konzentrierten Pulvers (von Shanghay Zhao Wie Technology Development Co. käuflich erworben), das durch absoluten Alkohol extrahiert wurde, aufgereinigt. Ungefähr 1 g des Flavonoidkonzentrats (gelöst in 5 ml Wasser) wurde durch eine Sephadex LH-20-Säule (2,5 × 30 mm) hindurchlaufen gelassen und mit Hilfe eines Gradienten eines Methanol-Wasser-gemischten Lösungsmittels eluiert. Das unreine Isoliquiritigenin wurde bei der Fraktion 27 (10 ml pro Fraktion) erhalten. Das unreine Produkt wurde weiter durch eine Silicagel-Chromatographie gereinigt und mit Hilfe eines gemischten Lösemittels aus Methylenchlorid:Methanol (5:1) eluiert.
Die chemische Struktur und das Molekulargewicht von Isoliquiritigenin wurde durch das Absorptionsspektrum (5) bestimmt, das mit einer HPLC-Trennung (4), durchgeführt auf einem Shimazdu SPD-M10A-Chromatographen, ebenso wie mit dem ¹³C NMR-Spektrum (6(a), DEPT; 6(b), gesamt) und einem Massenspektrum (7) gekoppelt war. Das Absorptionsspektrum war identisch zu dem einer Referenzverbindung von Isoliquiritigenin, das von Sigma Chemical Co. (St. Louis, Missouri), käuflich erworben war.
Die Antikrebsaktivitäten von Wogonin und Isoliquiritigenin wurden durch Bestimmung von deren Fähigkeiten, das Wachstum von Krebszellen zu inhibieren, den Krebszellzyklus zu modulieren und die Östrogenrezeptoren zu aktivieren, bewertet.
Krebszelllinien: LNCaP, DU-145 und MCF-7 Zellen wurden von der American Type Culture Collection käuflich erworben. PTX 10, eine Taxol-resistente Ovarkrebszelllinie, wurde von Brander Cancer Research Laboratory, New York Medical College, erhalten. Die Zellen wurden in RPMI 1640 Kulturmedium, das mit 10% Hitze-inaktiviertem FBS, 5 mM Glutamin, 50 Einheiten/ml Penicillin G und 50 g/ml Streptomycin vervollständigt war, geführt. Die Zellen wurden routinemäßig mit 1 × 105 Zellen/ml in T-75-Flaschen geführt, über Nacht absitzen gelassen und dann mit dem Kräuterextrakt behandelt. Zu verschiedenen Zeitpunkten wurden die Zellen durch Trypsinierung geerntet.
Beispiel 1
Dieses Beispiel zeigt die Aktivität von Wogonin und Isoliquiritigenin bei der Inhibierung des Wachstums der hormonsensitiven Prostatakrebszelllinie LNCaP.
Der MTT-Assay (MTT = 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid) wurde verwendet, um überlebende Zellen zu zählen. Die Assay-Reagenzien wurden von Boehringer Mannheim (Roche Diagnosis Corp, Indianapolis, Indiana) käuflich erworben. In diesem Assay wird der Farbstoff MTT von metabolisch aktiven Zellen gespalten, um Formazan zu bilden, und weist eine starke rote Absorptionsbande bei 550-618 nm auf. Das Protokoll für den Zellüberlebensassay wurde von dem Hersteller bereitgestellt und in unserem Labor wie unten beschrieben modifiziert.
Prostata- oder Brustkrebszellen wurden in 96-Well-Mikrotiter-Platten mit einer Konzentration von 3 × 10³ Zellen pro Vertiefung ausgesät (MCF-7; Brustkrebszellen), oder 6 × 10³ Zellen pro Vertiefung (LNCaP oder DU145; Prostatakrebszellen), in einem Volumen von 100 μl Zellkulturmedium. Nach 24 h wurden 20 μl Aliquots der Verbindungen mit verschiedenen Konzentrationen zu den angelagerten Zellen zugegeben. Jede Konzentration wurde in drei verschiedenen Vertiefungen wiederholt, um mittlere Werte zu erhalten. Um irgendwelche Lösungsmitteleffekte zu eliminieren, wurden 20 μl des Lösungsmittels, das in der Präparation der höchsten Konzentration der Verbindungen verwendet wurde (ein Maximum von 0,5 Vol.-% an Dimethylsulfoxid (DMSO)), zu den Kontrollzellen in jeder Vertiefung zugegeben. Die Platten wurden bei 37°C in einem CO₂-Inkubator für 72 h inkubiert. Am Ende des Tages 3 (nach 72 h) wurde das Kulturmedium vorsichtig ohne das Zerstören der Zellen entfernt und durch 100 μl frisches Zellmedium ersetzt. Es wurden 10 μl des MTT-Reagens zu jeder Vertiefung zugegeben und die Platten wurden wiederum in einem CO₂-Inkubator bei 37°C für 4 h inkubiert. 100 μl von Natriumdodecylsulfat (SDS) solubilisierendem Reagens (von Boehringer Mannheim) wurden in jede Vertiefung zugegeben. Die Platte wurde über Nacht in dem CO₂-Inkubator stehen gelassen und durch ein ELISA-Reader (EL800, Bio-Tek Insturments, Inc.) bei einer Wellenlänge von 570 nm ausgelesen. Die Überlebensrate in Prozent wurde entsprechend der Gleichung unten ausgerechnet:
worin V die Überlebensrate der Zellen in Prozent ist, A_Kontrolle ist die Absorption der Kontrollzellen und A_behandelt ist die Absorption der behandelten Zellen.
Die 8 und 9 zeige die Aktivität von Wogonin bzw. Isoliquiritigenin bei der Inhibierung des Wachstums von LNCaP (Androgen-abhängigen) und DU-145 (Androgen-unabhängigen) Prostatakrebszellen. Es ist ersichtlich, dass die Inhibierung des Zellwachstums dosisabhängig ist. Die Konzentration der Verbindungen, die in einer 50%igen Inhibierung des Krebszellwachstums resultieren, definiert als ED₅₀, wurde durch eine lineare Interpolation bestimmt. Die ED₅₀-Werte für die zwei Verbindungen, die aus diesen Messungen erhalten wurden, sind in den Spalten 1 und 2 der Tabelle 1 gezeigt. Tabelle 1 ED₅₀-Werte aus dem MTT-Assay als eine Funktion der Verbindung und des Zelltyps
Beispiel 2
Dieses Beispiel zeigt die Aktivität von Isoliquiritigenin bei der Inhibierung des Wachstums einer Brustkrebszelllinie, MCF-7.
Dieselben Protokolle, die in Beispiel 1 beschrieben sind, wurden verwendet, um die Wirkungen von Isoliquiritigenin auf MCF-7 Zellen zu bewerten. MCF-7 ist eine Brustkrebstzelllinie, die Östrogenrezeptoren exprimiert. Daher ist es ein gutes Modell, um den Effekt von Antikrebsmitteln auf Östrogenrezeptor-positiven Brustkrebs zu studieren.
9 zeigt die MTT-Assay-Kurven für Isoliquiritigenin mit MCF-7. Diese Daten zeigen, dass Isoliquiritigenin das Wachstum von MCF-7 Zellen hemmt und es wurden dosisabhängige Kurven beobachtet. Die ED₅₀-Werte sind in der Spalte 3 von Tabelle 1 oben wiedergegeben.
Beispiel 3
Dieses Beispiel zeigt die Modulation der LNCaP-Zelllinie durch Wogonin und Isoliquiritigenin. LNCaP-Zellen haben einen hormonabhängigen Zellzyklus.
Probenpräparation für die Zellzyklusmessung: Kultivierte Zellen (2-4 × 10⁶ Zellen) wurden gegenüber zwei Konzentrationen von jeweils Wogonin und Isoliquiritigenin für 24 bis 48 h in 12,5-cm²-Flaschen ausgesetzt, bevor sie geerntet wurden. Diese Zellen wurden mit Phosphat gepufferter Saline (PBS) gewaschen und in eiskaltem 70%igem Ethanol fixiert. Aliquots der fixierten Zellen wurden in PBS rehydriert und mit 1,0 μg/ml DAPI (4,6-Diamidino-2-phenylindol von Eastman Kodak, Rochester, NY) gefärbt, und in 10 mM Piperazin-N,N-bis-2-ethansulfonsäure-Puffer (Calbiochem, La Jolla, CA), enthaltend 100 mM NaCl, 2mM MgCl₂ und 0,1% Triton X-100 (Sigma) bei pH 6,8 verdünnt, wie es zuvor von Halicka et al. (H. D. Halicka, B. Ardelt, G. Juan, A. Mittelman, S. Chen, F. Traganos und Z. Darzynkiewicz, „Aptotosis and Cell Cycle Effects Induced by Extracts of the Chinese Herbal Preparation of PC SPES", International J. of Oncology (1997), 11: 437-448) beschrieben wurde.
Der zelluläre DNA-Gehalt wurde mit einem ELITE ESP Flußzytometer (Coulter Inc., FL) unter Verwendung einer UV-Laser-Belichtung gemessen. Das Multizyklusprogramm wurde verwendet, um die DNA-Frequenz-Histogramme aufzuschlüsseln, um die Frequenz der Zellen in verschiedenen Phasen des Zellzyklus abzuschätzen.
10 zeigt die DNA-Histogramme von LNCaP-Zellen in Gegenwart oder Abwesenheit von Wogonin bei 3 μg/ml nach 24 h. Es ist auffällig, dass es einen Wechsel bei der G1-Phase gab, wie es durch die gestrichelte Linie gezeigt ist. Die Datenanalyse brachte zum Vorschein, dass der Anstieg in der G1-Phase proportional zu der Wogonin-Konzentration war.
Die gleichen Messungen wurden für Isoliquiritigenin durchgeführt. 11 fasst die Effekte von Wogonin und Isoliquiritigenin auf die G1-, S und G₂M-Phasen des LNCaP-Zellzyklus zusammen. Die Daten zeigen, dass Wogonin einen G1-Phasenstillstand induzierte und Isoliquiritigenin induzierte einen G₂M-Phasen stillstand. Eine Verlängerung entweder der G1- oder der G₂M-Phasen führt zu der Unterdrückung der LNCaP-Zellproliferation.
Beispiel 4
Dieses Beispiel zeigt die Modulation des DU-145-Zellzyklus durch Wogonin und Isoliquiritigenin.
Das Protokoll, das in Beispiel 3 beschrieben ist, wurde verwendet, um den Effekt von Wogonin auf die hormonunabhängige Prostatakrebs-Zelllinie DU-145 zu studieren. Die Ergebnisse sind in 12 dargestellt und zeigen, dass Wogonin die G₂M-Phase von DU-145 verlängerte. Eine Verlängerung in der G₂M-Phase führt zur Unterdrückung der DU-145-Zellproliferation.
Beispiel 5
Die östrogene Aktivität von Wogonin und Isoliquiritigenin wurde durch die Bestimmung deren Fähigkeit die Östrogen-Rezeptoren (Subklasse Alpha und Beta) zu aktivieren demonstriert.
HEK 293 Zellen (ATCC CRL-1573) wurden mit einem Expressionsvektor für hER_α bzw. hER_β und einem ERE-LUC Reportergen (plus ein TK-LUC Reporter für die Normalisierung) transfiziert, wobei dem Protokoll von Yoon et al. gefolgt wurde („Differential activation of wild-type and variant forms of estrogen receptor α by synthetic and natural estrogenic compounds using a promoter containing three estrogen-responsive elements", J. Steroid Biochem. & Molecular Biology (2000), 28: Seiten 25-32).
Die Zellen wurden getrennt gegenüber Wogonin und Isoliquiritigenin mit Konzentrationen von 0, 0,07, 0,02, 0,08, 0,3, 0,7, 1,4 (oder 4) und 9 μg/ml für 20 h ausgesetzt und dann wurden die Zelllysate bezüglich der Reportergen-Expression untersucht (Tzukerman et al., „Human estrogen receptor transactivational capacity is determined by both cellular and promoter content and mediated by two functionally distinct intermolecular regions", Mol. Endocrinol. (1994), 8: 21-30).
13 zeigt das Dosis-Antwort-Verhalten des ER_α-Luc-Reportergens, das von Wogonin und Isoliquiritigenin aktiviert wurde.
14 zeigt das Dosis-Antwort-Verhalten des ER_β-Luc-Reportergens, das von Wogonin und Isoliquiritigenin aktiviert wurde. Es ist sehr signifikant, dass Wogonin und Isoliquiritigenin wenigstens eine 10-fach höhere Fähigkeit zur Aktivierung des ER_β-Luc-Reportergens zeigten als des ER_α-Luc-Reportergens.
Beispiel 6
Dieses Beispiel zeigt die Inhibierung der COX-Aktivität durch Isoliquiritigenin.
COX ist ein bifunktionelles Enzym, das sowohl Cyclooxygenase- wie auch Peroxidase-Aktivität aufweist. Die Cyclooxygenase-Aktivität ist für die Oxidierung von Arachidonsäure zu Prostaglandin G₂ (PGG₂) verantwortlich und die Peroxidase-Aktivität ist für die nachfolgende Reduzierung des PGG₂ zu dem entsprechenden Alkohol, PGH₂, verantwortlich. Einige Methoden, die verwendet werden, um die COX-Inhibitor-Aktivität zu bestimmen, schließen die Messung der Aufnahme von Sauerstoff unter Verwendung eines Oxygraphen ein, die Messung der Umwandlung von radioaktiver Arachidonsäure, oder die Messung von Prostaglandinen, die aus PGH₂ gebildet werden (unter Verwendung von Immunoassaytechniken).
Diese Experimente wendeten den Ovine COX-2 Inhibitor Screening Assay an, der unter Katalognr. 760101 von Cayman Chemical (Ann Arbor, MI 48108) kommerziell erhältlich ist. Dieser Immunoassay verwendet einen Antikörper, an den alle größeren Prostaglandine binden, um quantitativ die Menge an PGF_2α zu messen, die bei der COX-Reaktion unter Verwendung von Arachidonsäure als ein Substrat gebildet wird. Das Endvolumen der Reaktionen, die unten beschrieben sind, ist typischerweise 1,15 ml. Kurz gesagt wird COX-1 oder COX-2 (z. B. 20 μ1 einer Lösung von 1 bis 100 Einheiten/ml COX, wobei eine Einheit definiert als die Menge des Enzyms, das ein Nanomol Sauerstoff pro Minute bei 37°C in 0,1 M Tris-HCl-Puffer, pH 8,0, enthaltend 100 μM Arachidonat, 5 mM EDTA, 2 mM Phenol und 1 μM Hämatin verbraucht) zuerst mit einem Puffer (z. B. 0,1 M Tris, pH 8,0, 5 mM EDTA, 2 mM Phenol) und Häm (z. B. 10 μl von 10 mM Häm) in einer Mikrofugenröhre gemischt. Das Häm ist ein Co-Faktor für COX, der eine maximale Aktivität in dem Assay bereitstellt. Die COX-Proben, die einen Inhibitor enthalten, können mit dem Inhibitor vorgemischt werden (z. B. 1-100 μM), bevor das Substrat zugegeben wird. Das Arachidonsäuresubstrat (z. B. 10 μl einer 10 mM Lösung) kann dann zu der COX/Häm/Inhibitor-Mischung über eine Zeit und bei einer Temperatur zugegeben werden, die für die Reaktion ausreicht, um abzulaufen, um ein detektierbares Produkt zu bilden (z. B. 2 min bei 37°C). Die Reaktion kann mit Säure (z. B. 50 μl 1 M HCl) gequencht werden. Zusätzlich kann Zinnchlorid (z. B. 100 μl einer gesättigten Lösung) zugegeben werden, um das PGH₂, das hergestellt wurde, in das stabilere PGF_2α umzuwandeln, zu dem Zwecke der Quantifizierung von Prostaglandin. Das in den Reaktionen hergestellte Prostaglandin wird typischerweise unter Verwendung eines Enzym-Immmunoassays quantifiziert.
Der Enzym-Immunoassay, um das Prostaglandin zu detektieren, kann bequem in einer 96-Well-Platte unter Verwendung eines Antikörpers, um das Prostaglandin zu detektieren, ausgeführt werden. Als Kontrollen können Prostaglandin-Standards und COX-Proben mit 100% Aktivität (kein Inhibitor) gemessen werden. Die Proben, die für eine Hintergrundkorrektur verwendet werden, können auch verwendet werden. Die Kontrollen und Reaktionen, die mit COX und den Inhibitoren von Interesse durchgeführt werden, werden mit Prostaglandin-Screening-Antiserum in einer Menge inkubiert, die ausreicht, um das Prostaglandin, das bei den COX-Reaktionen gebildet wird, zu detektieren (z. B. 50 μl Antiserum, verdünnt in 6 ml eines geeigneten EIA-Puffers). Die Reaktionen können für eine Zeit und bei einer Temperatur inkubiert werden, die ausreicht, um die Interaktion des Antiserums mit den Prostaglandinen zu erlauben (z. B. 18 h bei Raumtemperatur). Wenn sie fertig sind, um die Platte zu entwickeln, werden die Reaktionen zuerst gewaschen und dann mit 200 μl von Ellman's Reagenz für 60 min oder so inkubiert. Die Platte kann dann bei 405 bis 420 nm auf einem Plattenlesegerät ausgelesen werden. Die Prostaglandin-Standards werden verwendet, um eine Standardkurve für die Prostaglandin-Konzentration zu berechnen. Die Menge an Prostaglandin in jeder Probe mit Inhibitor wird von der Menge an Prostaglandin in der Probe mit 100% Aktivität abgezogen, geteilt durch die Menge von Prostaglandin in der Probe mit 100% Aktivität und mit 100 multipliziert, um die Prozent Inhibition zu ergeben. Das Auftragen der Prozent Inhibition gegen die Inhibitorberechnung erlaubt die Berechnung des IC₅₀-Werts (die Konzentration, bei der 50% Inhibition vorliegt).
Methoden zur Messung der Aktivität eines COX-Inhibitors sind z. B. in W. Xie, J.G. Chipman, D. L. Robertson et al., „Expression of a mitogen-responsive gene encoding prostaglandin synthase is regulated by mRNA splicing", Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1991), 88: 2692-2696; K.M. Maxey, K.R. Maddipati und J. Birkmeier, "Interference in enzyme immunoassays", J. Clin. Immunoassay (1992), 15: 116-120; P. Pradelles, J. Grassi und J. A. Maclouf, "Enzyme immunoassays of eicosanoids using acetylcholinesterase as label: An alternative to radioimmunoassay", Anal. Chem. (1985), 57: 1170-1173; Maclouf, J., Grassi, J. und Pradelles, P. „Development of enzyme-immunoassay techniques for the measurement of eicosanoids", Prostaglandin and Lipid Metabolism in Radiation Injury (1987), Seiten 355-364, beschrieben.
15 zeigt die dosisabhängige Inhibitoraktivität von Isoliquiritigenin auf COX-2, wie sie entsprechend der obigen Prozedur gemessen wurde. Ein IC₅₀ von 10,5 μM wurde aus diesen Daten berechnet.
Beispiel 7
Dieses Beispiel zeigt die Zytotoxizität von Wogonin und Isoliquiritigenin auf eine Ovarkrebs-Zelllinie.
PTX 10 Zellen, eine Taxol-resistente Ovarkrebszelllinie, wurden in RPMI 1640 Medium, das mit 10% fötalem Kälberserum, 100 Einheiten/ml Penicillin, 100 mg/ml Streptomycin und 2 mM L-Glutamin (alle von Gibco/BRL Life Technologies, Inc., Grand Island, NY) ergänzt war, bei 37,5°C in einer Atmosphäre mit 5% CO₂ in Luft geführt. Zu Beginn der Experimente waren die Kulturen bei einer Dichte unterhalb von 5 × 10⁵ Zellen/ml und die Zellen wuchsen exponentiell und asynchron.
Der MTT-Assay wurde durchgeführt, um die Wirkung von Wogonin und Isoliquiritigenin auf das Zellwachstum von PTX 10 zu studieren. Das MTT-Assay-Protokoll ist das gleiche, das in Beispiel 1 beschrieben ist. Die 16 und 17 zeigen die Inhibitionskurven der PTX-Zelllinie in Gegenwart von Wogonin bzw. Isoliquiritigenin. Eine konzentrationsabhängige Inhibierung wurde in diesen zwei Abbildungen deutlich beobachtet. Der ED₅₀, der aus den Inhibitionskurven berechnet wurde, war 1,56 μg/ml und 3,32 μg/ml für Wogonin bzw. Isoliquiritigenin, wie es in Tabelle 2 gezeigt ist. Tabelle 2 ED₅₀
Somit können Wogonin und Isoliquiritigenin eine Eignung für die Behandlung von Krebsarten haben, die gegenüber einer Behandlung mit anderen Wirkstoffen, wie z. B. mit Taxol, resistent sind.
Beispiel 8
Eine Zusammensetzung entsprechend dieser Offenbarung wurde in Kapseln 6-mal am Tag zwei älteren freiwilligen Patienten verabreicht, bei denen Prostatakrebs diagnostiziert worden war. Als eine Messung für das Fortschreiten des Krebses wurde die Menge an prostataspezifischem Antigen (PSA), einer Substanz, die durch die Prostatadrüse produziert wird, im Blutstrom durch Standardmethoden gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 gezeigt. Tabelle 3
Wie es aus Tabelle 3 gesehen werden kann, wird eine dramatische Reduktion der PSA-Mengen nach 1 und 2 Monaten der Behandlung mit der Zusammensetzung 1 beobachtet.
Zusammensetzungen, die Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol und Kombinationen daraus enthalten, haben sowohl phytoöstrogenische wie auch Antikrebs-Aktivitäten. Wenn sie bei der Krebstherapie verwendet werden, können die Zusammensetzungen zusätzlich Antikrebsmittel und/oder Immunstimulantien enthalten. Die Antikrebsaktivität wird durch die Fähigkeit von Wogonin und Isoliquiritigenin demonstriert, das Wachstum von Krebszelllinien zu inhibieren. Die Identifizierung von Isoliquiritigenin als ein COX-2-Inhibitor legt nahe, dass es eine allgemeine Antikrebsaktivität hat. Die Identifizierung der phytoöstrogenen Aktivität von Wogonin legt nahe, dass zusätzlich zu der allgemeinen Antikrebsaktivität gemäß der COX-2-Inhibition Wogonin insbesondere für die Behandlung von hormonbezogenen Krebsarten verwendbar ist. Zusätzlich kann Wogonin bei der Behandlung von hormonbezogenen Erkrankungen, wie z. B. Osteoporose, verwendet werden.
Während die Erfindung mit Bezug auf eine bevorzugte Ausführungsform beschrieben wurde, wird es von den Fachleuten auf diesem Gebiet verstanden werden, dass vielfältige Änderungen gemacht werden können und Äquivalente für Elemente daraus ersetzt werden können, ohne aus dem Umfang der Erfindung herauszuführen. Zusätzlich können viele Modifikationen gemacht werden, um eine bestimmte Situation oder Materialien auf die Techniken dieser Erfindung anzupassen, ohne aus dem wesentlichen Umfang davon herauszuführen. Daher ist die Intention, dass die Erfindung nicht auf die bestimmte Ausführungsform beschränkt ist, die offenbart ist, als die beste Weise, die angedacht ist, um diese Erfindung auszuführen, sondern, dass die Erfindung alle Ausführungsformen einschließt, die in den Umfang der anhängenden Ansprüche fallen. Alle zitierten Patente, Patentanmeldungen und andere Referenzen werden hiermit durch Referenznahme in deren Gesamtumfang einbezogen.
Was beansprucht ist, ist:

1. Ein Verfahren zur Behandlung eines Menschen, der eine Krebsbehandlung nötig hat, umfassend das Verabreichen einer Zusammensetzung, die mehr als 0,5 Gew.-% eines Phytoöstrogens, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung, ein Antikrebsmittel und optional ein Immunstimulans enthält, wobei das Phytoöstrogen ein Prenylflavonoid ist, dargestellt durch die Formel
worin R³⁰ und R³¹ unabhängig voneinander Wasserstoff oder 3-Methyl-2-butenyl sind, mit der Voraussetzung, dass wenigstens eines von R³¹ und R³³ 3-Methyl-2-butenyl ist; R²⁹ und R³² sind unabhängig voneinander Wasserstoff oder C₁-C₆-Alkyl; und R³³-R³⁷ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl; und worin wenigstens zwei von R³³-R³⁷ Wasserstoff sind; Formononetin; oder eine Kombination, enthaltend eins oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene.
2. Das Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei das Phytoöstrogen 6-Prenylnaringenin, 8-Prenylnaringenin, 6,8-Diprenylnaringenin oder eine Kombination, enthaltend eines oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene, ist.
3. Das Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei die Zusammensetzung außerdem Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol, oder eine Kombination von einem oder mehreren der zuvor genannten Verbindungen enthält.
4. Das Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei das Antikrebsmittel Oridonin, Indirubin, Taxol, cis-Platin, Camphothecan, Vincristin, Monocrotalin, Maytansin, Homoharringtonin, Cochicin, Irischinon A, Irischinon B, Irischinon C, Cronycin, Matrin, Oxymatrin, Curcumin, Paricin, Pariphyllin, oder eine Kombination, enthaltend eines oder mehrere der zuvor genannten Antikrebsmittel, ist.
5. Das Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei das Immunstimulans ein Ginsenosid, Ferulasäure, Mannan, Synanthrin, Eleutherosid A, Eleutherosid B, Eleutherosid C, Eleutherosid D, Polyfruktose, Eleutherosid E, Gynosid, Beta-pachyman, Inulin, Glycoproteine, Interferone, γ-Globuline, ein Extrakt von Ganoderma lucidum, ein Extrakt von Coriolus versicolor, ein Extrakt von Poria cocos, oder eine Kombination ist, enthaltend eine oder mehrere der zuvor genannten Immunstimulantien.
6. Das Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei der Krebs Prostatakrebs, Brustkrebs, Endometrialkrebs, Darmkrebs, Lungenkrebs, Blasenkrebs, Hodenkrebs, Ovakrebs, Schilddrüsenkrebs oder Knochenkrebs ist.
7. Eine Zusammensetzung, enthaltend mehr als 0,5 Gew.-% eines Phytoöstrogens, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung, ein Antikrebsmittel und optional ein Immunstimulans, wobei das Phytoöstrogen ein Prenylflavonoid ist, dargestellt durch die Formel
worin R³⁰ und R³¹ unabhängig voneinander Wasserstoff oder 3-Methyl-2-butenyl sind, mit der Voraussetzung, dass wenigstens eines von R³¹ und R³³ 3-Methyl-2-butenyl ist; R²⁹ und R³² sind unabhängig voneinander Wasserstoff oder C₁-C₆-Alkyl; und R³³-R³⁷ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl; und worin wenigstens zwei von R³³-R³⁷ Wasserstoff sind; Formononetin; oder eine Kombination, enthaltend eins oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene.
8. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 7, wobei das Phytoöstrogen 6-Prenylnaringenin, 8-Prenylnaringenin, 6,8-Diprenylnaringenin oder eine Kombination, enthaltend eines oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene, ist.
9. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 7, wobei die Zusammensetzung außerdem Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol, oder eine Kombination von einem oder mehreren der zuvor genannten Verbindungen enthält.
10. Das Zusammensetzung gemäß Anspruch 7, wobei das Antikrebsmittel Oridonin, Indirubin, Taxol, cis-Platin, Camphothecan, Vincristin, Monocrotalin, Maytansin, Homoharringtonin, Cochicin, Irischinon A, Irischinon B, Irischinon C, Cronycin, Matrin, Oxymatrin, Curcumin, Paricin, Pariphyllin, oder eine Kombination, enthaltend eines oder mehrere der zuvor genannten Antikrebsmittel, ist.
11. Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 7, wobei das Immunstimulans ein Ginsenosid, Ferulasäure, Mannan, Synanthrin, Eleutherosid A, Eleutherosid B, Eleutherosid C, Eleutherosid D, Polyfruktose, Eleutherosid E, Gynosid, Beta-pachyman, Inulin, Glycoproteine, Interferone, γ-Globuline, ein Extrakt von Ganoderma lucidum, ein Extrakt von Coriolus versicolor, ein Extrakt von Poria cocos, oder eine Kombination ist, enthaltend eine oder mehrere der zuvor genannten Immunstimulantien.

Zusammenfassung
Eine Zusammensetzung mit phytoöstrogenischer und Antikrebs-Aktivität ist beschrieben. Die Zusammensetzung enthält Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol, deren pharmazeutisch annehmbare Salze oder Ester, deren selektiv substituierte Analoge, oder Kombinationen davon. Die Zusammensetzungen können auch ein Antikrebsmittel und/oder ein Immunstimulans enthalten. Ein Verfahren zur Behandlung oder Vorbeugung von Krebs oder einer Östrogenbezogenen Erkrankung, die die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge der Zusammensetzungen einschließt, ist beschrieben. Die Zusammensetzungen sind insbesondere für die Behandlung von hormonbezogenen Krebsarten verwendbar.

Claims

Eine Zusammensetzung, enthaltend mehr als 0,5 Gew.-% eines Phytoöstrogens, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung, ein Antikrebsmittel und optional ein Immunstimulans, wobei das Phytoöstrogen ein Prenylflavonoid ist, dargestellt durch die Formel
worin R³⁰ und R³¹ unabhängig voneinander Wasserstoff oder 3-Methyl-2-butenyl sind, mit der Voraussetzung, dass wenigstens eines von R³¹ und R³³ 3-Methyl-2-butenyl ist; R²⁹ und R³² sind unabhängig voneinander Wasserstoff oder C₁-C₆-Alkyl; und R³³-R³⁷ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl; und worin wenigstens zwei von R³³-R³⁷ Wasserstoff sind; Formononetin; oder eine Kombination, enthaltend eins oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene.
Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, wobei das Phytoöstrogen 6-Prenylnaringenin, 8-Prenylnaringenin, 6,8-Diprenylnaringenin oder eine Kombination, enthaltend eines oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene, ist.
Die Zusammensetzung gemäß Anspruch 1 oder 2, wobei die Zusammensetzung außerdem Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol, oder eine Kombination von einem oder mehreren der zuvor genannten Verbindungen enthält.
Das Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei das Antikrebsmittel Oridonin, Indirubin, Taxol, cis-Platin, Camphothecan, Vincristin, Monocrotalin, Maytansin, Homoharringtonin, Cochicin, Irischinon A, Irischinon B, Irischinon C, Cronycin, Matrin, Oxymatrin, Curcumin, Paricin, Pariphyllin, oder eine Kombination, enthaltend eines oder mehrere der zuvor genannten Antikrebsmittel, ist.
Die Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei das Immunstimulans ein Ginsenosid, Ferulasäure, Mannan, Synanthrin, Eleutherosid A, Eleutherosid B, Eleutherosid C, Eleutherosid D, Polyfruktose, Eleutherosid E, Gynosid, Beta-pachyman, Inulin, Glycoproteine, Interferone, γ-Globuline, ein Extrakt von Ganoderma lucidum, ein Extrakt von Coriolus versicolor, ein Extrakt von Poria cocos, oder eine Kombination ist, enthaltend eine oder mehrere der zuvor genannten Immunstimulantien.
Verwendung von mehr als 0,5 Gew.% eines Phytoöstrogens in einer Zusammensetzung, wobei das Phytoöstrogen ein Prenylflavonoid ist, dargestellt durch die Formel
worin R³⁰ und R³¹ unabhängig voneinander Wasserstoff oder 3-Methyl-2-butenyl sind, mit der Voraussetzung, dass wenigstens eines von R³¹ und R³³ 3-Methyl-2-butenyl ist; R²⁹ und R³² sind unabhängig voneinander Wasserstoff oder C₁-C₆-Alkyl; und R³³-R³⁷ sind unabhängig voneinander Wasserstoff, C₁-C₆-Alkyl, C₁-C₆-Alkoxy oder C₂-C₆-Acyl; und worin wenigstens zwei von R³³-R³⁷ Wasserstoff sind; Formononetin; oder einer Kombination, enthaltend eins oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene für die Herstellung eines Heilmittels zur Behandlung von Krebs.
Verwendung gemäß Anspruch 6, wobei das Phytoöstrogen 6-Prenylnaringenin, 8-Prenylnaringenin, 6,8-Diprenylnaringenin oder eine Kombination, enthaltend eines oder mehrere der zuvor genannten Phytoöstrogene, ist.
Verwendung gemäß Anspruch 6 oder 7, wobei die Zusammensetzung außerdem Wogonin, Isoliquiritigenin, Coumestrol, oder eine Kombination von einem oder mehreren der zuvor genannten Verbindungen enthält.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 6 bis 8, wobei das Antikrebsmittel Oridonin, Indirubin, Taxol, cis-Platin, Camphothecan, Vincristin, Monocrotalin, Maytansin, Homoharringtonin, Cochicin, Irischinon A, Irischinon B, Irischinon C, Cronycin, Matrin, Oxymatrin, Curcumin, Paricin, Pariphyllin, oder eine Kombination, enthaltend eines oder mehrere der zuvor genannten Antikrebsmittel, ist.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 6 bis 9, wobei das Immunstimulans ein Ginsenosid, Ferulasäure, Mannan, Synanthrin, Eleutherosid A, Eleutherosid B, Eleutherosid C, Eleutherosid D, Polyfruktose, Eleutherosid E, Gynosid, Betapachyman, Inulin, Glycoproteine, Interferone, γ-Globuline, ein Extrakt von Ganoderma lucidum, ein Extrakt von Coriolus versicolor, ein Extrakt von Poria cocos, oder eine Kombination ist, enthaltend eine oder mehrere der zuvor genannten Immunstimulantien.
Verwendung einer Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Herstellung eines Heilmittels zur Behandlung von Krebs.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 6 bis 11, wobei der Krebs Prostatakrebs, Brustkrebs, Endometrialkrebs, Darmkrebs, Lungenkrebs, Blasenkrebs, Hodenkrebs, Ovarkrebs, Schilddrüsenkrebs oder Knochenkrebs ist.