DE10103620C1

DE10103620C1 - Verfahren zur Anakyse von Proben mittels einer Streulichtmessung

Info

Publication number: DE10103620C1
Application number: DE10103620A
Authority: DE
Inventors: Joachim M Baumert; Constantin Odefey; Wilfried Will
Original assignee: HTK HAMBURG GmbH
Current assignee: HTK HAMBURG GmbH
Priority date: 2001-01-25
Filing date: 2001-01-25
Publication date: 2002-08-08
Anticipated expiration: 2021-01-26

Abstract

Verfahren zur Analyse von Proben mittels einer Streulichtmessung, bei dem DOLLAR A ein Trägerfluid bereitgestellt wird, das im wesentlichen frei von Stoffen ist, deren Partikelgröße einen bestimmten Wert überschreitet, DOLLAR A dem Trägerfluid eine Probe zugeführt wird, die im wesentlichen frei von Stoffen ist, deren Partikelgröße den bestimmten Wert überschreitet, DOLLAR A dem Trägerfluid ein Monomer zugeführt wird, dessen Partikelgröße im wesentlichen den bestimmten Wert nicht überschreitet, wobei das Monomer in der Lage ist, mit einem weiteren Monomer zu einem Dimer und/oder Oligomer und/oder Polymer zu reagieren, dessen Partikelgröße den bestimmten Wert überschreitet, und DOLLAR A das Trägerfluid der Streulichtmessung unterzogen wird, so daß, wenn das weitere Monomer in den Proben enthalten ist und mit dem Monomer zu dem Dimer und/oder Oligomer und/oder Polymer reagiert, dieses mittels der Streulichtmessung nachgewiesen wird.

Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Analyse von Proben mittels einer Streulichtmessung.

Die Nephelometrie ist ein optisches Analysenverfahren, mit dem man in Suspen sionen, Aerosolen u. a. trüben Dispersionen den Feststoff-Anteil bestimmen kann. Par tikel mit Partikelgrößen unterhalb der sichtbaren Lichtwellenlängen lassen sich wegen der intensiven Brownschen Molekularbewegung nicht unter dem Mikroskop messen. Zur Bestimmung solcher Partikel nutzt man den Tyndall-Effekt, bei dem die Be leuchtung eines kleinen Teilchens ein weitwinkliges Streulicht auslöst. Die Streuung des Lichtes kann entweder durch Messung der Intensitätsabnahme des einfallenden Lichtstrahles nach dem Durchgang durch das streuende Medium oder durch Bestimmung der Intensität des seitlich abgelenkten Lichtes ermittelt werden. Im ersten Fall spricht man von der Methode der Turbidimetrie oder Extinktionsmessung und zweiten von der eigentlichen Nephelometrie oder Tyndallometrie.

Bei dem als dynamic-light-scattering (DLS) bezeichneten Verfahren betrachtet man nur einen (oder wenige) Punkte auf der das Teilchen umspannenden Lichtkugel und wertet zusätzlich die durch die Brownsche Molekularbewegung hervorgerufene Helligkeitsmodulation aus. Durch Fokussierung auf ein winziges Beobachtungs volumen versucht man, die störenden Streulichtüberlagerungen mehrerer Teilchen zu reduzieren. Infolgedessen durchläuft ein Teilchen ein winziges beleuchtetes Volumen sehr schnell, so daß die auswertende Opto-Elektronik erhebliche Fluktuationsfrequen zen erkennen muß. Bei der aufwendigen Signalverarbeitung stehen viele Informa tionen zur Verfügung, so daß diese Systeme nur bedingt zur quantitativen Analyse einsetzbar sind.

In der Reinstwasseranalytik gestattet die äußerst geringe Konzentration der Teilchen den Einsatz von Optiksystemen, die ein möglichst großes Streulicht-Volumen erfas sen. Da die Teilchen verhältnismäßig lange Zeiten benötigen, um dieses Volumen zu durchlaufen, resultieren verhältnismäßig geringe Fluktuationsfrequenzen. Infolge dessen ist die Signalverarbeitung mit verhältnismäßig geringem Aufwand möglich. Bei einem bekannten System für die Reinstwasseranalytik wird hierzu eine PC- Soundkarte in einem Laptop mit Pentiumprozessor herangezogen. Das System liefert grafische Analysen, die Informationen über die Teilchenanzahl und die Teilchengröße beinhalten. Daraus ist jedoch regelmäßig nicht ersichtlich, aus welchen Stoffen die Teilchen bestehen.

Die EP 0 252 127 B1 bezieht sich auf ein Verfahren zur Analyse einer chemischen Reaktion, bei welchem ein Streusignal überwacht wird, das von durch ein bei der Reaktion gebildetes Präzipitat bzw. Ausfällung sowie durch andere nicht-spezifische Streuquellen gestreutes Licht erzeugt wird, und bei welchem das genannte Streusignal modifiziert wird, indem man ein von nur durch die genannten nicht-spezifischen Streuquellen gestreutem Licht erzeugtes Leer- bzw. Blindsignal (blanking signal) von dem Streusignal subtrahiert. Das Verfahren ist gekennzeichnet durch das Überwachen des genannten Streusignals als eine Funktion der Zeit während der Reaktionsperiode, das Überwachen des genannten Leer- bzw. Blindsignals als eine Funktion der Zeit während einer der Reaktionsperiode entsprechenden Zeitperiode sowie die dynami sche Subtraktion des zeitveränderlichen Leer- bzw. Blindsignals von dem zeitver änderlichen Streusignal, zur Gewinnung eines resultierenden Signals, in welchem die Auswirkungen der genannten nicht-spezifischen Streuquellen reduziert sind.

Die Reaktion kann insbesondere die Reaktion zwischen einem Antigen und einem Antikörper sein. Gemäß einem weiteren Verfahrensschritt kann die Konzentration einer (Antigen-)Probe aus der Änderungsgeschwindigkeit des resultierenden Signals ermittelt werden.

Das Verfahren ist auf die Konzentrationsbestimmung von Proben beschränkt. Außer dem basiert es auf einer aufwendigen Eliminierung von Leer- bzw. Blindsignalen auf grund nicht-spezifischer Streuquellen. Die Präzipitatbildung kann zudem zur Ver schmutzung der lichtführenden Teile eines Streulichtmeßgerätes führen und hierdurch die Messung beeinträchtigen.

Davon ausgehend liegt der Erfindung die Aufgabe zugrunde, ein mit verringertem Aufwand störungsärmer und genauer durchführbares Verfahren zur Analyse von Pro ben zur Verfügung zu stellen.

Die Aufgabe wird durch ein Verfahren mit den Merkmalen des Anspruches 1 gelöst. Vorteilhafte Ausgestaltungen des Verfahrens sind in den Unteransprüchen angegeben.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren zur Analyse von Proben mittels einer Streu lichtmessung wird/werden

1. 1.1 ein Trägerfluid bereitgestellt, das im wesentlichen frei von Stoffen ist, deren Partikelgröße einen bestimmten Wert überschreitet,
2. 1.2 dem Trägerfluid eine Probe zugeführt, die im wesentlichen frei von Stoffen ist, deren Partikelgröße den bestimmten Wert überschreitet,
3. 1.3 dem Trägerfluid ein Monomer zugeführt, dessen Partikelgröße im wesent lichen den bestimmten Wert nicht überschreitet, wobei das Monomer in der Lage ist, mit einem weiteren Monomer zu einem Dimer und/oder Oligomer und/oder Polymer zu reagieren, dessen Partikelgröße den bestimmten Wert überschreitet
4. 1.4 vor und/oder nach dem Zuführen der Probe und/oder vor und/oder nach dem Zuführen des Monomers und vor der Streulichtmessung Stoffe, deren Partikelgröße einen bestimmten Wert überschreitet, aus dem Trägerfluid und/oder der Probe und/oder dem Monomer entfernt werden, insbesondere durch Filtern, und
5. 1.5 das Trägerfluid der Streulichtmessung unterzogen, so daß, wenn das wei tere Monomer in der Probe enthalten ist und mit dem Monomer zu dem Dimer und/oder Oligomer und/oder Polymer reagiert, dieses mittels der Streulichtmessung nachgewiesen wird.

Dadurch, daß mit einem Trägerfluid, mit einer Probe und mit einem Monomer gear beitet wird, die jeweils im wesentlichen frei von Stoffen sind, deren Partikelgröße einen bestimmten Wert überschreitet, werden Störungen der Streulichtmessung ver mieden bzw. auf ein unschädliches Ausmaß reduziert und wird damit der Nachweis zudem äußerst geringer Stoffmengen erheblich verbessert. Der Nachweis dieser Stoffe basiert darauf, daß es sich dabei um Monomere handelt, die in der Lage sind, mit be stimmten Monomeren zu einem Dimer und/oder Oligomer und/oder Polymer (Reaktionsprodukte) zu reagieren, dessen Partikelgröße den bestimmten Wert über schreitet. Infolgedessen weichen die von diesen Reaktionsprodukten herrührenden Streulichtsignale deutlich von den Streulichtsignalen eventuell noch im Trägerfluid enthaltener Partikel mit einer Größe unterhalb des bestimmten Wertes ab. Hierdurch wird ein eindeutiger Nachweis der Reaktionsprodukte und damit der diesen zugrunde liegenden Monomere in der Probe ermöglicht. Grundsätzlich ist es vorteilhaft, wenn die Partikelgröße der Dimere und/oder Oligomere und/oder Polymere sich möglichst deutlich von dem bestimmten Wert unterscheiden, so daß sich die interessierenden Streulichtsignale möglichst deutlich von den übrigen Streulichtsignalen abheben. Darüber hinaus ist es grundsätzlich von Vorteil, wenn der bestimmte Wert der Parti kelgröße, der von den übrigen, nicht nachzuweisenden Partikeln unterschritten wird, möglichst niedrig ist bzw. möglichst wenige solcher Partikel im Trägerfluid vorhanden sind.

Verfahrensgemäß wird so vorgegangen, daß man dem Trägerfluid - grundsätzlich in beliebiger Reihenfolge - eine Probe und ein Monomer zuführt, das in der Lage ist, mit einem in der Probe vermuteten Monomer zu einem Dimer und/oder Oligomer und/oder Polymer zu reagieren. Wenn sich das vermutete Monomer tatsächlich in der Probe befindet, findet die Reaktion statt und wird das Reaktionsprodukt mittels der Streulichtmessung nachgewiesen. Hierdurch ist ein eindeutiger Nachweis dafür möglich, daß sich in der Probe ein bestimmter Stoff befindet. Befindet sich der ver mutete Stoff nicht in der Probe, kann der Test mit einem anderen Monomer wiederholt werden. Grundsätzlich sind so viele Wiederholungen möglich, bis der Stoff identifi ziert ist, aus dem die Probe besteht. Falls die Probe aus mehreren verschiedenen Stof fen besteht, kann der Test so oft wiederholt werden, bis mehrere oder sämtliche Kom ponenten der Probe identifiziert sind.

Grundsätzlich ist es mittels des erfindungsgemäßen Verfahrens möglich, eine Probe vollständig zu analysieren, die aus einem oder mehreren Monomeren besteht. Falls keine oder keine vollständige Analyse der Probe gelingt, kann zumindest anhand des oder der durchgeführten Tests ausgeschlossen werden, daß ein bestimmter Stoff oder mehrere bestimmte Stoffe in der Probe enthalten sind, wobei es sich beispielsweise um "verbotene" Stoffe handeln kann.

Somit ist das erfindungsgemäße Verfahren insbesondere für die Anwendung in der Wasseranalytik (Nachweis von Inhalts- und Schadstoffen), der Lebensmitteltechnolo gie (Nachweis von Mikroorganismen, Inhaltsstoffen (z. B. Rindfleisch)) oder in biolo gischen oder medizinischen Tests (z. B. Nachweis bestimmter DNA- oder RNA-Se quenzen oder von Allergenen (Allergietests)) geeignet.

Die Monomere, die mittels des Verfahrens in der Probe nachgewiesen werden können, können beliebige Monomere sein. Insbesondere können sie Antigene oder Antikörper sein, die über eine Antigen-/Antikörperreaktion nachweisbar sind. Dabei kann es sich ferner um DNA- bzw. RNA-Stränge handeln, die mit komplementären Strängen rea gieren. Einbezogen sind insbesondere solche Monomere, die zu einem im Trägerfluid löslichen Dimer und/oder Oligomer und/oder Polymer reagieren. Einbezogen sind aber auch Monomere, die Präzipitate bilden.

Vorzugsweise ist der bestimmte Wert der Partikelgröße, den die im Trägerfluid, in der Probe und im Monomer enthaltenen Stoffe nicht überschreiten, im Nanometerbereich angesiedelt. Vorzugsweise im Bereich von 10 bis 30 Nanometern. Bei Partikeln mit Partikelgrößen unter etwa 10 bis 30 Nanometern ist das Streusignal so gering, daß es nicht mehr eindeutig zugeordnet werden kann. Außerdem werden bei den genannten Partikelgrößen die Grenzen der (Ultra-)Filtration erreicht, d. h. es gibt derzeit keine Filter mehr, die in der Lage sind, kleinere Partikel noch wirksam auszufiltern. Da die Anzahl der Teilchen unterhalb des bestimmten Wertes regelmäßig immens ist, hat man so viel überlagerte Streulichtsignale (durch mehrfache Streuung), daß diese als Summensignal aller dieser Kleinstpartikel erscheinen, dem keine bestimmten Partikel mehr zuordenbar sind. Andererseits kann dieses Summensignal eindeutig von den Streusignalen größerer Partikel unterschieden werden, die somit eindeutig identifizier bar sind.

Nach einer vorteilhaften Ausgestaltung des Verfahrens wird das Trägerfluid und/oder die Probe und/oder das Monomer gefiltert, um Stoffe auszufiltern, deren Partikelgröße den bestimmten Wert überschreitet. Der Filter definiert eine scharfe Trennung zwi schen besagten Kleinstteilchen und den zu messenden Streuteilchen, die das eindeu tige Erkennen des Streusignales eines Reaktionsproduktes möglich macht. Grundsätz lich bezieht die Erfindung ein, zur Entfernung von Stoffen, deren Partikelgröße einen bestimmten Wert überschreitet, aus dem Trägerfluid, der Probe und dem Monomer, andere Techniken als das Filtern einzusetzen.

Nach einer weiteren Ausgestaltung des Verfahrens werden dem Trägerfluid kleine Mengen Probe und des Monomers in der Größenordnung von Mikro-, Nano- oder Picogramm pro Liter zugeführt. Derart geringe Mengen sind ausreichend, da die Streulichtmessung nicht durch störende Streusignale beeinträchtigt wird. Das Arbeiten mit geringen Probenmengen ist grundsätzlich kosten- und aufwandsmindernd außer dem kann bei derart geringen Probenmengen die aus der Reinstwasseranalytik be kannte Streulichtmessung vorteilhaft zum Einsatz kommen.

Grundsätzlich kann es sich bei dem Trägerfluid um ein Gas oder um eine Flüssigkeit handeln. Bevorzugt ist das Trägerfluid eine Flüssigkeit. Vielfach handelt es sich bei der Flüssigkeit um Wasser, beispielsweise wenn dem Analyseverfahren eine bio chemische Reaktion zugrunde liegt. Grundsätzlich kann es sich bei der Flüssigkeit aber auch um eine andere transparente Flüssigkeit handeln, beispielsweise um flüssige Kohlenwasserstoffe, Säuren oder Laugen.

Nach einer weiteren Ausgestaltung des Verfahrens wird das Trägerfluid einer konti nuierlichen und/oder mehrfach einer stichprobenartigen Streulichtmessung unter zogen. Hierdurch ist es insbesondere möglich, den Endpunkt der Reaktion festzustel len und Mittelwerte der Streulichtmessung zu bilden. Bevorzugt wird bereits das von Stoffen, deren Partikelgröße den bestimmten Wert überschreitet, im wesentlichen freie Trägerfluid vor Zugabe des Monomers und/oder vor Zugabe der Probe einer Streulichtmessung unterzogen und das Ergebnis dieser Messung als Bezugswert für die Streulichtmessung des Dimers und/oder Oligomers und/oder Polymers herangezogen.

Gemäß einer weiteren Ausgestaltung wird das Trägerfluid in einen Kreislauf gepumpt, in dem das Trägerfluid einer Streulichtmessung unterzogen wird und in den die Probe und das Monomer eingespeist werden. Hierdurch kommt man mit verhältnismäßig ge ringen Mengen Trägerfluid aus und kann der Aufwand für die Entfernung von Stoffen, deren Partikelgröße einen bestimmten Wert überschreitet, aus dem Trägerfluid gemin dert werden. Für die Entfernung solcher Stoffe kann das Trägerfluid durch Umschalten von Ventileinrichtungen durch einen Bypass mit einem Filter geführt werden, der die besagten Stoffe ausfiltert. Das Filtern des Trägerfluids kann vor dem Einspeisen der Probe über eine bestimmte, vorgegebene Zeit durchgeführt werden, um sicherzu stellen, daß keine die Streulichtmessung störenden Stoffe mehr enthalten sind. Aus der Probe bzw. dem Monomer können Stoffe, deren Partikelgröße den bestimmten Wert überschreitet, insbesondere durch Filter entfernt werden, die in die Einspeisestellen integriert bzw. diesen vorgeordnet sind. Auch nach dem Einspeisen der Probe kann das Trägerfluid über eine bestimmte Zeit gefiltert werden, um störende Stoffe, die mit der Probe oder aus dem Leitungssystem in das Trägerfluid gelangen könnten, aus dem Trägerfluid zu entfernen.

Bevorzugt wird jedoch nach Zugabe des Monomers das Trägerfluid nicht mehr gefil tert, damit eventuelle Reaktionsprodukte nachgewiesen werden können.

Gemäß einer weiteren Ausgestaltung des Verfahrens wird das Trägerfluid nach Zu gabe eines Monomers, die zu einem Nachweis oder nicht zu einem Nachweis des weiteren Monomers geführt hat, erneut gefiltert, bis ein anderes Monomer zugegeben wird. Hierdurch können zwischenzeitlich in das Trägerfluid eingetretene Stoffe, die die Streulichtmessung stören könnten, entfernt werden. Außerdem ist es hierdurch möglich, ein nachgewiesenes Reaktionsprodukt aus dem Trägerfluid zu entfernen, um eventuelle weitere Komponenten der Probe zu analysieren.

Die Erfindung wird nachfolgend anhand der anliegenden Schemazeichnung einer An lage zum Durchführen des Verfahrens näher erläutert.

Ein Streulichtmeßgerät 1, das nach dem Prinzip des dynamic-light-scattering arbeitet, ist in eine Leitung 2 integriert, durch die ein Trägerfluid im Kreislauf durch das Streu lichtmeßgerät 1 geführt wird. In dem Streulichtmeßgerät 1 ist das Trägerfluid durch eine Durchflußküvette geführt, durch die der Strahlengang der Streulichtmessung ver läuft. Das Streulichtmeßgerät 1 kann eine einstellbare Nachweisgrenze haben, die Streulichtsignale von Teilchen unterhalb einer bestimmten Größe elektronisch aus blendet. Hierdurch ist es möglich, Streulichtsignale von Partikeln, die nicht nachge wiesen werden sollen, vollständig zu unterdrücken.

In die Leitung 2 ist eine Pumpe 3 integriert, um das Trägerfluid im Kreislauf durch die Leitung 2 und das Streulichtmeßgerät 1 zu pumpen. Die Pumpe 3 kann beispielsweise als Schlauchpumpe ausgeführt sein.

Die Leitung 2 hat einen Einspeiseabschnitt 2', in dem Einspeisestellen 4, 5, 6 ausge bildet sind. In die Einspeisestellen 4, 5, 6 können Filter integriert sein, die Partikel ausfiltern, deren Partikelgröße einen bestimmten Wert (z. B. 30 Nanometer) über schreitet. Ferner können die Einspeisestellen 4, 5, 6 jeweils elastische Membranen aufweisen, in die von außen eine Spritzennadel einsteckbar ist, um eine Probe in den Einspeiseabschnitt 2' einzuspeisen. Auch können alle Einspeisestellen 4, 5 oder ein Teil derselben über eine Schalt- bzw. Dosiereinrichtung mit einem Behälter für Probe bzw. ein Reagens verbunden sein.

Ferner hat die Leitung 2 einen Bypass 2", der den Einspeiseabschnitt 2' überbrückt, in den ein Filter 7 integriert ist. Der Filter 7 vermag Partikel oberhalb einer bestimmten Größe (z. B. 30 Nanometer) aus einem Trägerfluid herauszufiltern. Der Einspeiseab schnitt 2' und der Bypass 2" sind über einen Dreiwegehahn 8 mit dem Abschnitt der Leitung 2 verbunden, in den die Pumpe 3 integriert ist.

Dieses Analysensystem funktioniert wie folgt:
Das Trägerfluid (z. B. Wasser) wird von der Pumpe 3 durch die Leitung 2 und das Streulichtmeßgerät 1 gepumpt. Dabei ist zunächst der Dreiwegehahn 8 so geschaltet, daß das Trägerfluid durch den Bypass 2" und damit den Filter 7 gepumpt wird. Auf diese Weise wird das Trägerfluid über eine bestimmte Zeit gefiltert, beispielsweise etwa 100 Sekunden.

Partikel, deren Größe die Nachweisgrenze des Streulichtmeßgerätes 1 überschreiten, werden während dieser Zeit von dem Filter 7 aus dem Trägerfluid herausgefiltert.

Danach wird der Dreiwegehahn 8 umgeschaltet, so daß das Trägerfluid durch den Ein speiseabschnitt 2' im Kreislauf gepumpt wird. In den Einspeiseabschnitt 2' wird dann - z. B. durch die Einspeisestelle 4 - eine Probe eingespeist, z. B. ein Antigen. Die Probe enthält einen zu analysierenden Stoff, dessen Partikelgröße die Nachweisgrenze des Streulichtmeßsystems 1 unterschreitet. Von einem in die Einspeisestelle 4 integrierten Filter können bereits Partikel aus der Probe herausgefiltert werden, deren Partikel größe den bestimmten Wert überschreitet.

Nach dem Einspritzen der Probe kann der Dreiwegehahn 8 erneut umgeschaltet wer den, um das Trägerfluid erneut über eine gewisse Zeit durch den Filter 7 hindurchzu pumpen, wodurch wiederum Partikel herausgefiltert werden, deren Partikelgröße den bestimmten Wert überschreitet. Derartige Partikel können aus dem System in das Trä gerfluid eingetreten oder mit der Probe eingeschleppt worden sein. Nach einer bestimmten Filterzeit (z. B. 100 Sekunden) wird erneut durch Umschalten des Dreiwege hahns 8 auf den Einspeiseabschnitt 2' umgeschaltet. Die vorstehende Nachreinigung ist jedoch nicht obligatorisch.

Während der vorerwähnten Schritte kann permanent oder mehrfach stichprobenartig mittels des Streulichtmeßgerätes 1 eine Streulichtmessung durchgeführt worden sein, um einen Bezugswert der Streulichtmessung zu ermitteln.

Als nächstes wird - beispielsweise durch die Einspeisestelle 5 - ein Monomer in den Einspeiseabschnitt 2' eingespeist. Von einem in die Einspeisestelle 5 integrierten Fil ter können dabei Partikel aus dem Monomer herausgefiltert werden, deren Partikel größe den bestimmten Wert überschreitet. Bei dem Monomer kann es sich beispiels weise um Antikörper handeln.

Falls das eingespeiste Monomer mit einem Monomer aus der Probe reagiert, bilden sich Teilchen mit einer Partikelgröße, die den bestimmten Wert überschreitet. Diese Partikel erzeugen ein Streulichtsignal, das sich deutlich von den Streulichtsignalen eventuell noch im Trägerfluid vorhandener Partikel, deren Partikelgröße den be stimmten Wert unterschreitet. Infolgedessen werden diese Reaktionsprodukte eindeu tig durch das Streulichtmeßgerät 1 nachgewiesen. Aus dem Nachweis ergibt sich, daß ein bestimmter Stoff in der Probe enthalten ist.

Aus der Intensität des Streulichtmeßsignals kann überdies die Konzentration des Stof fes in der Probe ermittelt werden.

Falls das Streulichtmeßgerät 1 keine Partikel oberhalb der Nachweisgrenze nachweist oder weitere Monomere in der Probe vermutet werden, kann anschließend ein anderes Monomer eingespeist werden, beispielsweise durch die Einspeisestelle 6. Dabei kann das andere Monomer in der Einspeisestelle 6 ebenfalls einer Filterung unterzogen werden, die dem Monomer Partikel entzieht, deren Größe den bestimmten Wert über schreitet. Zuvor können gegebenenfalls nachgewiesene Partikel durch erneutes Spülen durch das Filter 7 aus dem Trägerfluid entfernt werden.

Claims

1. Verfahren zur Analyse von Proben mittels einer Streulichtmessung, bei dem

1. 1.1 ein Trägerfluid bereitgestellt wird, das im wesentlichen frei von Stoffen ist, deren Partikelgröße einen bestimmten Wert überschreitet,
2. 1.2 dem Trägerfluid eine Probe zugeführt wird, die im wesentlichen frei von Stoffen ist, deren Partikelgröße den bestimmten Wert überschreitet,
3. 1.3 dem Trägerfluid ein Monomer zugeführt wird, dessen Partikelgröße im we sentlichen den bestimmten Wert nicht überschreitet, wobei das Monomer in der Lage ist, mit einem weiteren Monomer zu einem Dimer und/oder Oligomer und/oder Polymer zu reagieren, dessen Partikelgröße den be stimmten Wert überschreitet,
4. 1.4 vor und/oder nach dem Zuführen der Probe und/oder vor und/oder nach dem Zuführen des Monomers und vor der Streulichtmessung Stoffe, deren Partikelgröße einen bestimmten Wert überschreitet, aus dem Trägerfluid und/oder der Probe und/oder dem Monomer entfernt werden, insbesondere durch Filtern, und
5. 1.5 das Trägerfluid der Streulichtmessung unterzogen wird, so daß, wenn das weitere Monomer in der Probe enthalten ist und mit dem Monomer zu dem Dimer und/oder Oligomer und/oder Polymer reagiert, dieses mittels der Streulichtmessung nachgewiesen wird.

2. Verfahren nach Anspruch 1, bei dem die Schritte 1.3 und 1.4 mindestens einmal unter Zuführung eines anderen Monomers zum Trägerfluid wiederholt werden.

3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, bei dem der bestimmte Wert der Partikelgröße im Nanometerbereich angesiedelt ist.

4. Verfahren nach Anspruch 3, bei dem der bestimmte Wert der Partikel größe etwa 10 bis 30 nm beträgt.

5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, bei dem das Trägerfluid und/oder die Probe und/oder das Monomer vor der Zugabe des Monomers gefiltert wird/werden, um Stoffe auszufiltern, deren Partikelgröße den bestimmten Wert überschreitet.

6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, bei dem das Dimer und/oder Oligo mer und/oder Polymer im Trägerfluid löslich ist.

7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, bei dem dem Trägerfluid kleine Mengen der Probe und des Monomers in der Größenordnung von Mikro-, Nano- oder Picogramm pro Liter zugeführt werden.

8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 7, bei dem das Trägerfluid eine Flüs sigkeit ist.

9. Verfahren nach Anspruch 8, bei dem die Flüssigkeit Wasser ist.

10. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 9, bei dem das Monomer mit dem weiteren Monomer eine Antigen-/Antikörperreaktion bildet.

11. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 10, bei dem das Trägerfluid einer kon tinuierlichen Streulichtmessung und/oder mehrfach einer stichprobenartigen Streu lichtmessung unterzogen wird.

12. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 11, bei dem das von Stoffen, deren Partikelgröße einen bestimmten Wert überschreitet, freie Trägerfluid vor Zugabe des Monomeren und/oder der Probe einer Streulichtmessung unterzogen und das Ergebnis dieser Messung als Bezugswert für die Streulichtmessung des Dimers und/oder Oligomers und/oder Polymers herangezogen wird.

13. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 12, bei dem das Trägerfluid in einem Kreislauf gepumpt wird, in dem das Trägerfluid einer Streulichtmessung unter zogen wird und in den die Probe und das Monomer eingespeist werden.

14. Verfahren nach Anspruch 13, bei dem das Trägerfluid durch Umschalten von Ventileinrichtungen durch einen Bypass mit einem Filter geführt wird.

15. Verfahren nach Anspruch 13 und 14, bei dem das Trägerfluid vor dem Einspeisen der Probe über eine bestimmte Zeit gefiltert wird.

16. Verfahren nach Anspruch 15, bei dem das Trägerfluid nach dem Einspeisen der Probe über eine bestimmte Zeit gefiltert wird.

17. Verfahren nach einem der Ansprüche 13 bis 16, bei dem das Trägerfluid nach Zu gabe des Monomers nicht mehr gefiltert wird.

18. Verfahren nach einem der Ansprüche 13 bis 17, bei dem das Trägerfluid nach Zu gabe des Monomers, die zu einem Nachweis oder nicht zu einem Nachweis des weiteren Monomers geführt hat, erneut gefiltert wird, bis ein anderes Monomer zugegeben wird.