DE10039856A1 - Inducing cell replication in resting cells, useful for producing cells for e.g. toxicology testing, by transient expression of immortalizing gene - Google Patents

Inducing cell replication in resting cells, useful for producing cells for e.g. toxicology testing, by transient expression of immortalizing gene

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Abstract

Inducing cell replication, in any human or animal cell type that no longer divides or has very limited replicative capacity in vitro, by temporally limited expression of an exogenous immortalizing (proliferation-inducing) gene (I) that has been introduced into the cell, or by injecting a proliferation-inducing protein (II), is new. Independent claims are also included for the following: (1) preparing cells (A) with an extended life span, by performing the novel method; (2) preparing immortalized liver cells (A'), derived from hepatocytes, by sequential or simultaneous transfer, and permanent expression, of nucleic acid sequences and/or genes that influence the cell cycle; and (3) (A') prepared from primary hepatocytes by the method of (2).

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren und Mittel zur Induktion von Zell-Vermehrung in denjenigen Zelltypen menschlicher und tierischer Art, die sich normalerweise nicht mehr teilen oder die eine sehr stark begrenzte Vermehrungskapazität in-vitro zeigen. Insbesondere soll eine Zell-Vermehrung erreicht werden, ohne daß generelle Veränderungen in der Zusammensetzung des zellulären Genoms und somit reversible Eigenschaften in den Zellen eintreten. Bevorzugt betrifft die Erfindung neuartige Hepatozyten mit verlängerter Lebensspanne.The invention relates to a method and means for induction of cell proliferation in those cell types human and animal species that normally no longer share or which has a very limited propagation capacity in vitro demonstrate. In particular, cell proliferation is said to be achieved without any general changes in the Composition of the cellular genome and therefore reversible Properties occur in the cells. Preferably relates to the Invention of novel hepatocytes with an extended lifespan.

Es besteht ein Bedarf im medizinischen und biotechnologischen Anwendungsbereich, sich vermehrende Zellpopulationen zu besitzen, die über einen hoch differenzierten Phänotyp verfügen. Viele tierische und humane Zellen haben im natürlichen Zellverband eines Organismus eine Proliferations- Kapazität, die auf 50 bis 100 Zellteilungen begrenzt ist, bevor die Zellen absterben. Jedoch ist die Nutzung dieses Potentials in Zellkulturen schwierig zu erreichen, da dafür eine optimale zelluläre Mikro-Umgebung einschließlich eines Komplexes mitogener und co-mitogenger Faktoren notwendig ist. Deshalb sind bei einzelnen Zelltypen nur wenige Zellteilungen oder überhaupt keine zu beobachten, wie zum Beispiel bei Kardiomyozeten, hepatischen Zellen, Neuronen, pankreatischen Zellen.There is a need in medical and biotechnological Scope of application, multiplying cell populations possess that have a highly differentiated phenotype feature. Many animal and human cells have natural cell association of an organism a proliferation Capacity limited to 50 to 100 cell divisions, before the cells die. However, the use of this Potentials in cell cultures difficult to achieve because of that an optimal cellular micro-environment including one Complex mitogenic and co-mitogenic factors are necessary. Therefore, there are only a few cell divisions for individual cell types or not to be observed at all, such as in Cardiomyocetes, hepatic cells, neurons, pancreatic Cells.

Zum Auffinden neuer Wirkstoffe ist es für die biotechnologische Industrie eine wichtige Voraussetzung, diese Barriere zu überwinden, Bedingungen für das Wachstum von Zellen der verschiedensten Körperorgane in-vitro zu etablieren und die Proliferations-Kapazität der Zellen zu nutzen. In bestimmten Fällen können immortalisierte Zellinien direkt aus Tumormaterial etabliert oder durch verschiedene Behandlungen von Primärzellen aus normalem Gewebe isoliert werden. Im letzteren Fall wurde ein immortalisierenden Gen in das Genom der Zielzelle eingebracht, speziell ein Gens von DNA-Tumorviren (wie zum Beispiel "Large T-Antigen aus Simian Virus-40"). Allerdings führte die dauernde Expression des immortalisierenden Genes zu unerwünschten, auch transformierten und tumorigen Eigenschaften der Zellen, die zudem eine Erniedrigung der zelltypischen Eigenschaften bis hin zum Abschalten oder sogar Verlust der spezifischen zellulären Aufgaben führen kann.To find new active ingredients, it is for the biotechnology industry an important requirement to overcome this barrier, conditions for growth of cells from a wide variety of body organs in vitro establish and the proliferation capacity of the cells too use. In certain cases, immortalized cell lines established directly from tumor material or through various  Treatments of primary cells isolated from normal tissue become. In the latter case, an immortalizing gene was found in introduced the genome of the target cell, specifically a gene from DNA tumor viruses (such as "Large T antigen from Simian Virus-40 "). However, the continuous expression of the immortalizing genes to unwanted ones, too transformed and tumorigenic properties of the cells that a decrease in cell-typical properties up to towards switching off or even losing the specific can perform cellular tasks.

Die Aufgabe der Erfindung bestand deshalb darin, ein Verfahren zur Induktion einer nicht-immortalisierenden und nicht-malignen Proliferation von ruhenden Zellen aus einem Organismus hin zu einer homogenen Zellpopulation zu erreichen.The object of the invention was therefore to Process for inducing a non-immortalizing and non-malignant proliferation of resting cells from one Organism towards a homogeneous cell population to reach.

Erfindungsgemäß wird eine zeitlich begrenzte Expression eines exogenen, immortalisierenden Gens genutzt, um die Zellmitose anzuregen.According to the invention, a time-limited expression of a exogenous, immortalizing gene used to treat cell mitosis to stimulate.

Die Erfindung wird gemäß den Ansprüchen realisiert. In einer bevorzugten Ausführungsvariante betrifft die Erfindung neuartige Hepatozyten mit verlängerter Lebensspanne, die insbesondere zur extrakorporalen Übernahme von Leberfunktionen, zur pharmakologischen und toxikologischen Untersuchung von Arzneistoffen in-vitro, zur Produktion rekombinanter Proteine und zur Produktion glykosylierter Proteine geeignet sind.The invention is implemented according to the claims. In a preferred embodiment variant relates to the invention novel hepatocytes with an extended lifespan, the especially for the extracorporeal takeover of Liver functions, for pharmacological and toxicological Investigation of drugs in vitro, for production recombinant proteins and for the production of glycosylated Proteins are suitable.

Die hier vorgelegte Erfindung beruht dabei auf der überraschenden Erkenntnis, daß die Beseitigung eines immortalisierenden Genes nach Beginn der Zellteilung, eine Zellpopulation erzeugt, die eine definierte Proliferations- Kapazität in Gegenwart von Wachstumsfaktoren zeigt. The invention presented here is based on the surprising finding that the removal of a immortalizing gene after the beginning of cell division, a Cell population that defines a defined proliferation Shows capacity in the presence of growth factors.  

Gegenstand der vorgelegten Erfindung ist deshalb die Einbringung eines immortalisierenden Gens, wie z. B. das Large T-Antigen, in eine Population von Zielzellen einer Primärkultur.The subject of the invention is therefore the Introduction of an immortalizing gene, such as B. the Large T antigen, in a population of target cells Primary culture.

Das Genkonstrukt, das das immortalisierende Gen enthält, ist ebenfalls ein weiteres genetisches Unter-Konstrukt, das ebenfalls die spezielle Eigenschaft besitzt, daß zu einem späteren frei wählbaren Zeitpunkt die Expression des Gens in der Zielzelle abgeschaltet werden kann.The gene construct that contains the immortalizing gene is also another genetic sub-construct, the also has the special property that a expression of the gene at a later time of your choice the target cell can be switched off.

Beispiele für solche erfindungsgemäßen Konstrukte stellen Plasmide dar, die keine Erkennungssequenz für den Beginn der Replikation zur Plasmid-bedingten Replikation in der Zielzelle enthalten (Fig. 1a) oder es wird ein Replikations-defizienter Retrovirus genutzt, in dem das immortalisierende Gen neben anderen Fremdsequenzen von loxP Sequenzen umrahmt ist. Diese loxP Sequenzen erlauben ein Ausscheiden der umrahmten Gensequenzen mithilfe des Enzymes cre-Rekombinase (Fig. 1b). In einer bevorzugten Ausführungsvariante wird die Cre-Rekombinase in die Zielzelle mittels eines nicht-integrierenden, Replikations-defizienten Adenovirus eingebracht (Fig. 1b).Examples of such constructs according to the invention are plasmids which do not contain a recognition sequence for the start of replication for plasmid-related replication in the target cell ( FIG. 1a) or a replication-deficient retrovirus is used in which the immortalizing gene, among other foreign sequences from loxP sequences is framed. These loxP sequences allow the framed gene sequences to be eliminated using the enzyme cre recombinase ( FIG. 1b). In a preferred embodiment variant, the Cre recombinase is introduced into the target cell by means of a non-integrating, replication-deficient adenovirus ( FIG. 1b).

Bevorzugt werden die erfindungsgemäß hergestellten Zellen mit verlängerter Lebensspanne zur pharmakologischen und toxikologischen Untersuchung von Arzneistoffen in-vitro, zur Produktion rekombinanter Proteine und zur Produktion glykosylierter Proteine eingesetzt.The cells produced according to the invention are preferred with extended lifespan for pharmacological and toxicological investigation of drugs in vitro, for Production of recombinant proteins and for production glycosylated proteins used.

Anschließend wird die Erfindung anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert, auf die sie jedoch nicht beschränkt werden soll.The invention is then based on Embodiments explained in more detail, but they should not be limited.

AusführungsbeispieleEmbodiments Beispiel 1example 1

Plasmid pCMV-Tagori (Fig. 1a) wird in ruhende primäre Maus Hepatozyten transduziert. Nach sechs Wochen wurden proliferierende Kolonien gespickt, von denen etwa ein Drittel kein Large T-Antigen exprimierte. Diese Zellen konnten weiterhin für 15-20 Passagen bei einer Aufteilungsrate von 1 : 3 bis 1 : 5 subkultiviert werden. Nach weiteren Passagen nahm die Zellteilung ab, bis dann die Zellteilung völlig erlosch.Plasmid pCMV-Tagori ( Fig. 1a) is transduced into resting primary mouse hepatocytes. After six weeks, proliferating colonies were spiked, about a third of which did not express Large T antigen. These cells could continue to be subcultured for 15-20 passages at a division rate of 1: 3 to 1: 5. After further passages, the cell division decreased until the cell division completely ceased.

Beispiel 2Example 2

Ruhende primäre Maus Hepatozyten wurden mit loxP-HyTK-large-T Retrovirus (Fig. 1b) infiziert, der in das Zell-Genom integriert. Immortalisierte Hepatozyten Klone wurden isoliert und als Large T-Antigen exprimierende Zellinien etabliert. Derartige proliferierende Zellinien wurden mit einem speziellen Adenovirus-Konstrukt infiziert, das cre- Rekombinase exprimiert. Das Enzym cre-Rekombinase schneidet die von loxP Sequenzen umrahmten Sequenzen aus, in diesem Fall Large T-Antigen zusammen mit CMV Promoter und HyTK. Die resultierenden Zellen wurden mit Ganciclovir behandelt, das intrazellulär durch HyTK zu einem Zell-Toxin aktiviert wird. Dadurch werden diejenigen Zellen getötet, in denen durch die cre-Recombinase des Genkonstrukt nicht korrekt herausgeschnitten worden war. Überlebende Zellen exprimierten kein Large T-Antigen mehr, womit bestätigt war, daß die loxP umrahmten Sequenzen erfolgreich herausgeschnitten waren. Large T-Antigen negative Zellen waren in der Lage in Kulturmedium zu proliferieren, das Wachstumsfaktoren enthielt. Die Proliferationsraten nahm nach etwa 20 Passagen ab und erlosch dann völlig.Resting primary mouse hepatocytes were infected with loxP-HyTK-large-T retrovirus ( Fig. 1b), which integrated into the cell genome. Immortalized hepatocyte clones were isolated and established as cell lines expressing Large T antigen. Such proliferating cell lines were infected with a special adenovirus construct that expresses cre recombinase. The enzyme cre recombinase cuts out the sequences framed by loxP sequences, in this case Large T antigen together with the CMV promoter and HyTK. The resulting cells were treated with ganciclovir, which is activated intracellularly by HyTK to form a cell toxin. As a result, those cells are killed in which the cre recombinase of the gene construct had not been excised correctly. Surviving cells no longer expressed Large T antigen, confirming that the loxP framed sequences were successfully excised. Large T antigen negative cells were able to proliferate in culture medium containing growth factors. The proliferation rate decreased after about 20 passages and then went out completely.

Die hier beschriebenen Zellinien mit endlicher Lebensdauer bleiben genetisch identisch mit den Primärzellen aus denen sie abgeleitet worden waren, haben allerdings eine weit verlängerte Proliferationsspanne gegenüber Primärzellen von ungefähr 50-100 Zellteilungen.The cell lines with finite lifespan described here remain genetically identical to the primary cells from which they were derived, however, have a wide range  prolonged proliferation span compared to primary cells of about 50-100 cell divisions.

Diese Zellinien mit verlängerter Lebensdauer erlauben die Untersuchung grundlegender biologischer Prozesse beispielsweise in Hepatozyten und somit die Entwicklung therapeutisch aktiver Wirkstoffe, die in-vitro Abklärung toxischer Eigenschaften von therapeutischen Wirkstoffen und die Etablierung von Zellen für die Herstellung rekombinanter Proteine.These cell lines with extended lifespan allow the Investigation of basic biological processes for example in hepatocytes and thus development therapeutically active substances, the in-vitro clarification toxic properties of therapeutic agents and the establishment of cells for the production of recombinant Proteins.

Claims (24)

1. Verfahren zur Induktion von Zell-Vermehrung in denjenigen Zelltypen menschlicher und tierischer Art, die sich normalerweise nicht mehr teilen oder die eine sehr stark begrenzte Vermehrungskapazität in-vitro zeigen, durch eine zeitlich begrenzte Expression eines exogenen, immortalisierenden Gens (Proliferations-förderndes Gen), das in die jeweilige Zelle eingebracht wird, oder durch Injektion eines Proliferations-fördernden Proteins.1. Method of inducing cell proliferation in those Human and animal cell types, which are usually no longer share or the one very strong show limited propagation capacity in vitro by a time-limited expression of an exogenous, immortalizing gene (proliferation-promoting gene), which is introduced into the respective cell, or by Injection of a proliferation-promoting protein. 2. Verfahren zur Herstellung von Zellen mit verlängerter Lebensspanne (ELS-Zellen) durch eine zeitlich begrenzte Expression eines exogenen, immortalisierenden Gens, das in die jeweilige Zelle eingebracht wird, oder durch Injektion eines Proliferations-fördernden Proteins.2. Process for the production of cells with elongated Lifespan (ELS cells) due to a limited time Expression of an exogenous, immortalizing gene, which in the respective cell is introduced, or by injection of a proliferation-promoting protein. 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Proliferations-fördernde Gen mit Hilfe eines nicht-replizierenden Plasmides übertragen wird.3. The method according to claim 1 or 2, characterized in that the proliferation-promoting gene with the help of a non-replicating plasmids is transferred. 4. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Proliferations-fördernde Gen mit Hilfe eines nicht-replizierbaren viralen Vektors übertragen wird.4. The method according to claim 1 or 2, characterized in that the proliferation-promoting gene with the help of a non-replicable viral vector is transmitted. 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß Proliferations-fördernde Gene eingebracht werden, die zeitlich begrenzt im Genom der Zellinie verbleiben.5. The method according to any one of claims 1 to 4, characterized characterized that proliferation-promoting genes be introduced that are limited in time in the genome of Cell line remain. 6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Proliferations-fördernde Gen von einer lox-Sequenz flankiert ist und durch nachfolgende Transfektion einer cre-exprimierenden Gensequenz wieder herausgeschnitten wird. 6. The method according to claim 5, characterized in that the Proliferation-promoting gene from a lox sequence is flanked and by subsequent transfection one cut out cre-expressing gene sequence becomes.   7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß als Proliferations-förderndes Gen das Gen für SV-40 large T-Antigen injiziert wird.7. The method according to any one of claims 1 to 6, characterized characterized in that as a proliferation-promoting gene Gene for SV-40 large T antigen is injected. 8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß als Proliferations-förderndes Protein SV-40 large T-Antigen injiziert wird.8. The method according to any one of claims 1 to 6, characterized characterized that as a proliferation-promoting protein SV-40 large T antigen is injected. 9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, daß Kardiomyceten, hepatitische Zellen, Neuronen und pankreatische Zellen, vorzugsweise hepatitische Zellen, als Ausganmaterial verwendet werden.9. The method according to any one of claims 1 to 8, characterized characterized that cardiomycetes, hepatic cells, Neurons and pancreatic cells, preferably hepatic cells, used as starting material. 10. Verfahren zur Herstellung von neuen, immortalisierten Leber-Zellinien ausgehend von Hepatozyten mit verlängerter Lebensspanne (ELS-Zellen) durch nachfolgende oder simultane Übertragung von Nukleinsäureseguenzen und/oder Genen, die den Zellzyklus beeinflussen und deren permanente Expression in den Zellen.10. Process for the production of new, immortalized Liver cell lines starting from hepatocytes with prolonged Lifespan (ELS cells) by subsequent or simultaneous transfer of nucleic acid sequences and / or Genes that influence the cell cycle and their permanent expression in the cells. 11. Verfahren nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, daß es sich um Nukleinsäuresequenzen und/oder Gene handelt, die den Retinoblastoma-Zellzyklusregulationspunkt, den p53-Zellzyklusregulationspunkt und/oder die Telomerase- Aktivität beeinflussen.11. The method according to claim 10, characterized in that nucleic acid sequences and / or genes are involved, which is the retinoblastoma cell cycle regulation point p53 cell cycle regulation point and / or the telomerase Influence activity. 12. Neuartige Hepatozyten mit verlängerter Lebensspanne (ELS-Zellen) hergestellt aus primären Hepatozyten.12. Novel hepatocytes with an extended lifespan (ELS cells) made from primary hepatocytes. 13. Zellen nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß die Zellen 15-20 Passagen stabil proliferieren.13. Cells according to claim 12, characterized in that the Cells proliferate 15-20 passages stably. 14. Zellen nach Anspruch 12 und 13, dadurch gekennzeichnet, daß die Zellen einen euploiden (diploid, tetraploid, polyploid) Chromosomensatz aufweisen. 14. Cells according to claim 12 and 13, characterized in that the cells have an euploid (diploid, tetraploid, polyploid) have a set of chromosomes.   15. Zellen nach Anspruch 12 bis 14, dadurch gekennzeichnet, daß die Zellen nicht immortalisiert sind und keine tumorigenen Eigenschaften aufweisen.15. Cells according to claim 12 to 14, characterized in that the cells are not immortalized and none have tumorigenic properties. 16. Zellen nach Anspruch 12 bis 15, dadurch gekennzeichnet, daß die Zellen funktionelle Eigenschaften von Hepatozyten aufweisen.16. Cells according to claim 12 to 15, characterized in that the cells have functional properties of hepatocytes exhibit. 17. Zellen nach Anspruch 12 bis 16, dadurch gekennzeichnet, daß die Zellen Cytochrom P450 exprimieren.17. Cells according to claim 12 to 16, characterized in that that the cells express cytochrome P450. 18. Zellen nach Anspruch 12 bis 17, dadurch gekennzeichnet, daß die Zellen Albumin und alpha 1 Antitrypsin sekretieren.18. Cells according to claim 12 to 17, characterized in that that the cells albumin and alpha 1 antitrypsin secrete. 19. Zellen nach Anspruch 12 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß die Zellen Cytokeratin 8 und 18 positiv und Cytokeratin 19 negativ sind.19. Cells according to claim 12 to 18, characterized in that the cells cytokeratin 8 and 18 positive and Cytokeratin 19 are negative. 20. Zellen nach Anspruch 12 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß die Zellen Harnstoff synthetisieren.20. Cells according to claim 12 to 19, characterized in that that the cells synthesize urea. 21. Verwendung der Zellen nach Anspruch 12 bis 20 zur extrakorporalen Übernahme von Leberfunktionen.21. Use of the cells according to claim 12 to 20 for extracorporeal takeover of liver functions. 22. Verwendung der Zellen nach einem der Ansprüche 1 bis 20 zur pharmakologischen und toxikologischen Untersuchung von Arzneistoffen in-vitro.22. Use of the cells according to one of claims 1 to 20 for pharmacological and toxicological investigation of Drugs in vitro. 23. Verwendung der Zellen nach einem der Ansprüche 1 bis 20 zur Produktion rekombinanter Proteine.23. Use of the cells according to one of claims 1 to 20 for the production of recombinant proteins. 24. Verwendung der Zellen nach einem der Ansprüche 1 bis 20 zur Produktion glykosylierter Proteine.24. Use of the cells according to one of claims 1 to 20 for the production of glycosylated proteins.
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1427850A4 (en) * 2001-08-16 2006-02-08 Phase 1 Molecular Toxicology I Human toxicologically relevant genes and arrays
DE102007041655A1 (en) * 2007-09-03 2009-03-05 Medicyte Gmbh Propagation of primary cells and their use

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6110743A (en) * 1995-02-10 2000-08-29 The Regents Of The University Of California Development and use of human pancreatic cell lines
DE19626830A1 (en) * 1996-07-04 1998-01-08 Max Delbrueck Centrum Conditional immortalization method for human tumor cells for the production of a vaccine

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