DD213242A5 - PROCESS FOR CONVERTING 1,2-STAINED STEROIDS IN 1,2-DEHYDROSTEROIDS - Google Patents

PROCESS FOR CONVERTING 1,2-STAINED STEROIDS IN 1,2-DEHYDROSTEROIDS Download PDF

Info

Publication number
DD213242A5
DD213242A5 DD25312383A DD25312383A DD213242A5 DD 213242 A5 DD213242 A5 DD 213242A5 DD 25312383 A DD25312383 A DD 25312383A DD 25312383 A DD25312383 A DD 25312383A DD 213242 A5 DD213242 A5 DD 213242A5
Authority
DD
German Democratic Republic
Prior art keywords
dione
pregn
steroid
methyl
acetoxy
Prior art date
Application number
DD25312383A
Other languages
German (de)
Inventor
Leo A Kominek
Timothy W Evans
Holly J Wolf
Original Assignee
Upjohn Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US06/436,552 external-priority patent/US4524134A/en
Application filed by Upjohn Co filed Critical Upjohn Co
Publication of DD213242A5 publication Critical patent/DD213242A5/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P33/00Preparation of steroids
    • C12P33/02Dehydrogenating; Dehydroxylating

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Beschrieben wird eine verbesserte mikrobiologische Umwandlung zur Herstellung von 1,2-Dehydrosteroiden aus ihren entsprechenden 1,2-gesaettigten Derivaten. Vorteilhaft an dem beschriebenen Verfahren ist, dass als Lieferant oder Quelle fuer die Steroid-1-dehydrogenaseaktivitaet luft- oder waermegetrocknete Mikrobenzellen bzw. Mikroorganismenzellen eingesetzt werden koennen. Vorteilhaft im Rahmen des beschriebenen Verfahrens ist ferner, dass waehrend des Reaktionsverlaufs ein mit Wasser nicht mischbares organisches Loesungsmittel in Form eines aromatischen Kohlenwasserstoffs eingesetzt werden kann.Described is an improved microbiological conversion for the preparation of 1,2-dehydro-steroids from their corresponding 1,2-saturated derivatives. An advantage of the method described is that air or heat-dried microbial cells or microorganism cells can be used as supplier or source for the steroid-1-dehydrogenase activity. Advantageous in the context of the described method is further that during the course of the reaction, a water-immiscible organic solvent in the form of an aromatic hydrocarbon can be used.

Description

Verfahren zur Umwandlung von 1,2-gesättigten Steroiden in 1,2-DehydrosteroideProcess for converting 1,2-saturated steroids to 1,2-dehydrosteroids

Anwendungsgebiet der Erfindung;Field of application of the invention;

Die Erfindung betrifft ein verbessertes Verfahren zur umwandlung von 1,2-gesättigten Steroiden in 1,2-Dehydrosteroide*The invention relates to an improved process for the conversion of 1,2-saturated steroids into 1,2-dehydro-steroids *

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen:Characteristic of the known technical solutions:

Über den ersten therapeutischen Einsatz von Corticosteroiden wurden in den fünziger Jahren berichtet. Hierbei handelte es sich um die Durchführung einer Cortisönäcetatbehandlung von rheumatischer Arthritis. Weitere Untersuchungen zeigten, daß der Einbau einer ungesättigten Bindung in 1,2-Stellung von Hydrocortison und Cortison dazu führte, daß die erhaltenen Steroide Prednisolon und Prednison eine verstärkte Wirkung erhalten und eine geringere arzneimittelreduzierte SaIzretention hervorrufen. Danach wurden auch die meisten anderen Steroide, die bei der Behandlung- von auf Corticoide ansprechenden Erkrankungen eingesetzt wurden, mit einer Doppelbindung in 1,2-Stellung des Steroidmoleküls versehen. Seit 1977 sind zwei Versuche zur Synthese von Corticosteroiden aus Sterinvorläufern bekannt geworden. Aus der US-PS 4 035 236 ist beispielsweise ein Verfahren zur Herstellung von 9dL-Hydroxyandrostendion über eine Fermentation von Sitosterin, Stigmasterin oder Cholesterin bekannt. Aus der US-PS 4 041 055 ist ein Verfahren zur Synthese medizinisch wertvoller Corticosteroide aus Androsten bekannt * Hierbei auftretende Zwischenpro-The first therapeutic use of corticosteroids was reported in the fifties. This was to perform a cortisone acetate treatment of rheumatoid arthritis. Further studies showed that the incorporation of an unsaturated bond in the 1,2-position of hydrocortisone and cortisone resulted in the prednisolone and prednisone steroids obtained being more potent and producing less drug-reduced salt retention. Thereafter, most other steroids used in the treatment of corticosteroid-responsive diseases were also provided with a double bond in the 1,2-position of the steroid molecule. Since 1977, two attempts have been made to synthesize corticosteroids from sterol precursors. US Pat. No. 4,035,236, for example, discloses a process for preparing 9dL-hydroxyandrostenedione via a fermentation of sitosterol, stigmasterol or cholesterol. From US Patent 4,041,055 a process for the synthesis of medically valuable corticosteroids from androstene is known * These intermediates occurring

A Q f ·* 4 \ A Q f * 4

dukte können 3-Keto- A -Konfiguration aufweisen.can have 3-keto-A configuration.

Bekannte Verfahren zur biologischen Umwandlung 1,2-gesättigter Steroide in die entsprechenden 1,2-Dehydrosteroide sind:Known methods for the biological conversion of 1,2-saturated steroids into the corresponding 1,2-dehydro-steroids are:

US-PS 2 837 464 "Verfahren zur Herstellung von Dienen durch Corynebacterium".U.S. Patent 2,837,464 "Method of Making Dienes by Corynebacterium".

-Beschrieben wird eine 1-Dehydrierung von Steroiden in verschiedenen Fermentationsbrühen durch Arthrobacter (Corynebacterium) simplex.A 1-dehydrogenation of steroids in various fermentation broths is described by Arthrobacter (Corynebacterium) simplex.

US-PS 3 360 43 9 "Verfahren zur Herstellung von 2-Dehydrosteroiden".US Pat. No. 3,360,439 "Process for the preparation of 2-dehydro-steroids".

Beschrieben wird eine 1-Dehydrierung von Steroiden mitDescribed is a 1-dehydration of steroids with

Hilfe von A. simplex-Zellen, die vor dem Vermischen des 15Help of A. simplex cells, which are mixed before mixing the 15

Substrats mit einem Wasserstoffträger mit einem kurzkettigen Alkanol oder kurzkettigen Alkanon, z.B. Aceton, vorbehandelt wurden.Substrate with a hydrogen carrier with a short chain alkanol or short chain alkanone, e.g. Acetone, pretreated.

W.Charney und H.Herzog "Mikrobielle Umwandlung von Steroiden", Verlag Academic Press, Inc., New York, Seiten 4-9, 236-261 (1967).W.Charney and H. Hezog "Microbial Transformation of Steroids", Academic Press, Inc., New York, pp. 4-9, 236-261 (1967).

In letzterer Literaturstelle werden der historische Hintergrund biologischer Steroidumwandlungen und eine taxonomische Auflistung von zur Durchführung einer 1-Dehydrierung geeigneten Mikroorganismen angegeben.In the latter reference the historical background of biological steroid transformations and a taxonomic listing of microorganisms suitable for carrying out a 1-dehydrogenation are given.

T.Yamane, H.Nakatani, E.Sada, T.Omata, A.Tanaka und S.Fukui "Biotechnology and Bioengineering", 21, 1979.T. Yaman, H. Nakatani, E. Sada, T. Omata, A. Tanaka and S. Fukui Biotechnology and Bioengineering, 21, 1979.

3030

Die Autoren untersuchten die 1-Dehydrierung von 4-Androsten-3,17-dion mittels Nocardia rhodocrous in einem Gemisch aus 50 % 3enzol und 50 % Heptan. Durch die Zugabe dieses Lösungsmittelgemischs zu dem biologischen Umwandlungsgemisch soll die ReaktionsgeschwindigkeitThe authors investigated the 1-dehydrogenation of 4-androstene-3,17-dione using Nocardia rhodocrous in a mixture of 50% 3-enol and 50% heptane. By adding this solvent mixture to the biological conversion mixture, the reaction rate should be

um einen Faktor von 180 erhöht werden. Benzol ist jedoch bekanntlich krebserregend. Der bevorzugte Elektronenakzeptor für die Nocardia rhodocrous-Aktivität war bei den durchgeführten Versuchen Phenazinmethosulfat. Dieser . Elektronenakzeptor ist zu teuer und zu instabil, um bei großtechnologischen biologischen Umwandlungsverfahren diese Mikroorganismusaktivität praktisch ausnutzen zu können. Das Nocardia rhodocrous-Enzym war in Gegenwart von Menadion, dem Elektronenakzeptor der Wahl für Arthrobacter simplex, nicht aktiv. Somit muß sich das von N. rhodocrous gebildete Enzym von dem von A.simplex gebildeten Enzym unterscheiden. Die Umsetzung wurde in einem mit einem Steroid gesättigten Lösungsmittelsystem mit lediglich 20 % an organischem Lösungsmittel durchgeführt. Es zeigte sich, daß mit steigender Konzentration an dem Steroid die Reaktionsgeschwindigkeit abnahm. Sauerstoff bildet ein wesentliches Reagens bei der 1-Dehydrierungsreaktion. Das Lösungsmittel (50 % Benzol/50 % Heptan) ist in Gegenwart von Sauerstoff brennbar. Wie der Sauerstoff in den Reaktor ohne Entstehen einer explosiven Umgebung eingeführt wurde, ist in der genannten Literaturstelle nicht erläutert.increased by a factor of 180. However, benzene is known to be carcinogenic. The preferred electron acceptor for Nocardia rhodocrous activity was phenazine methosulfate in the experiments performed. This one. The electron acceptor is too expensive and too unstable to be able to exploit this microorganism activity in large scale biological conversion processes. The Nocardia rhodocrous enzyme was not active in the presence of menadione, the electron acceptor of choice for Arthrobacter simplex. Thus, the enzyme formed by N. rhodocrous must differ from the enzyme formed by A.simplex. The reaction was carried out in a steroid saturated solvent system with only 20% organic solvent. It was found that with increasing concentration of the steroid, the reaction rate decreased. Oxygen forms an essential reagent in the 1-dehydrogenation reaction. The solvent (50% benzene / 50% heptane) is flammable in the presence of oxygen. How the oxygen was introduced into the reactor without the occurrence of an explosive environment is not explained in the cited reference.

K.Sonomoto, I.Jin, A.Tanaka und S.Fukui "Agric. Biol. Chem.", 44,. 1119-1126 (1980).K. Sonomoto, I.Jin, A. Tanaka and S. Fukui "Agric. Biol. Chem.", 44 ,. 1119-1126 (1980).

Die genannten Autoren untersuchten die 1-Dehydrierung von Hydrocortison mittels A.simplex. Es wurden zwei mit Wasser nicht mischbare Lösungsmittel, nämlich n-Butanol und η-Amylalkohol getestet. In Gegenwart dieser Lösungsmittel erfolgt jedoch keine Bioumwandlung.. Als bevorzugte Lösungsmittel wurden mit Wasser mischbare Lösungsmittel, z.B. Gemische aus 10 % Methanol und 90 % Wasser und 10 % Propylenglykol und 90 % Wasser eingesetzt.The authors mentioned investigated the 1-dehydrogenation of hydrocortisone by means of A.simplex. Two water immiscible solvents, namely n-butanol and η-amyl alcohol were tested. However, no bioconversion occurs in the presence of these solvents. As preferred solvents, water-miscible solvents, e.g. Mixtures of 10% methanol and 90% water and 10% propylene glycol and 90% water used.

Die genannten Literaturstellen beschreiben weder das erfindungsgemäße Verfahren noch, legen sie dieses nahe.The cited references neither describe nor suggest the process according to the invention.

Ziel der Erfindung:Object of the invention:

Mit der Erfindung soll ein gegenüber dem Stand der Technik verbessertes Verfahren der eingangs genannten Art bereitgestellt werden,The invention is intended to provide a method of the aforementioned type which is improved over the prior art,

Darlegung des Wesens der Erfindung;Explanation of the essence of the invention;

Das neue Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, daß man auf die 1,2-gesättigten Steroide in Gegenwart eines exogenen Elektronenträgers und eines mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittels in Form eines aromatischen Kohlenwasserstoffs gegebenenfalls unter Zugabe einer'unterhalb der zur Verbrennung erforderlichen Mindestsauerstoffkonzentration liegenden Sauerstoffmenge Arthrobacter simplex und/oder Bacterium cyclooxydans einwirken läßt.The novel process is characterized in that on the 1,2-saturated steroids in the presence of an exogenous electron carrier and a water-immiscible solvent in the form of an aromatic hydrocarbon optionally with the addition of a below the minimum oxygen concentration required for combustion Arthrobacter simplex and / or Bacterium cyclooxydans.

Diese Maßnahmen sind der bekannten Technologie einer Steroiddehydrierung durch Mikroorganismen in folgendem überlegen:These measures are superior to the known technology of steroid dehydrogenation by microorganisms in the following:

a) Die Bioumwandlung führt zu niedrigeren Gehalten an nicht umgewandeltem Steroidsubstrat;a) The bioconversion results in lower levels of unconverted steroid substrate;

b) das erfindungsgemäße Verfahren kann bei höheren Steroidkonzentrationen durchgeführt werden;b) the method according to the invention can be carried out at higher steroid concentrations;

c) zur Umwandlung einer gegebenen Steroidmenge. benötigt man weniger Mikroorganismenzellen, z.B. simples-Zellen;c) to convert a given amount of steroid. one needs fewer microorganism cells, e.g. simple cells;

d) das erfindungsgemäSe Verfahren ist weniger empfindlich gegenüber in dem Steroid, in den Mikroorganismenzellen oder in dem durch die Zellen gebildeten Steroid enthaltenen organischen löslichen Verun-d) the process according to the invention is less sensitive to organic soluble contaminants contained in the steroid, in the microorganism cells or in the steroid formed by the cells.

5 reinigungen und5 cleanings and

e) eine Verminderung oder vollständige Eliininierung von in den Mikrobenzellen enthaltenen steroidabbauenden Enzymen führt zu höheren Ausbeuten an dem gewünschten Reaktionsprodukte) a reduction or complete elimination of steroid degrading enzymes contained in the microbial cells leads to higher yields of the desired reaction product

10 10

Die Lösungsmittelmaßnahmen sind der bekannten Technologie einer Steroiddehydrierung mit anderen Mikroorganismenaktivitäten, z.B. Nocardia rhodocrous, überlegen, da die durch A.simpelx katalysierte Umsetzung mit stabileren und preisgünstigeren Elektronenakzeptoren, wie Menadion, durchgeführt werden kann.The solvent measures are of the known technology of steroid dehydrogenation with other microorganism activities, e.g. Nocardia rhodocrous, because A.simpelx catalyzed reaction can be performed with more stable and less expensive electron acceptors, such as menadione.

Mikroorganismen:microorganisms:

Im Rahmen des erfindungsgemäßen Verfahrens können alsIn the context of the method according to the invention can as

Mikroorganismen die zahlreichen, für eine 1-Dehydrierung bekannten Mikroorganismen eingesetzt werden. Solche Mikroorganismen werden von W.Charney und H.Herzog in "Microbial Transformation of Steroids", VerlagMicroorganisms, the numerous microorganisms known for a 1-dehydrogenation are used. Such microorganisms are described by W.Charney and H. Hezog in "Microbial Transformation of Steroids", publ

Academic Press, Inc., New York, (1967) beschrieben. 25Academic Press, Inc., New York, (1967). 25

Die Bakterien, die Steroide in 1-Stellung dehydrieren, fallen generell in zwei Gruppen, vgl. "Sergey's Manual of Determinative Biology", 8.Ausgabe. Das aaO beschriebene Verfahren konnte erfolgreich an Arten aus Arthrobacter und Corynebacterium-Gattungen von "Teil 17, Actinomycetes & Related Organisms" demonstriert werden. Die 1-dehydrierenden Arten verschiedener anderer Gattungen in Teil 17, z.B. Nocardia, Mycobacterium, Streptomyces und Bacterium sind wahrscheinlich ebenfallsThe bacteria dehydrating steroids in the 1-position generally fall into two groups, cf. "Sergey's Manual of Determinative Biology", 8th ed. The method described above was successfully demonstrated on species of Arthrobacter and Corynebacterium genera of "Part 17, Actinomycetes & Related Organisms". The 1-dehydrating species of various other genera in part 17, e.g. Nocardia, Mycobacterium, Streptomyces and Bacterium are also likely

35 brauchbar.35 usable.

Zwei für die Öffentlichkeit verfügbare Mikroorganismen, von denen bekannt ist, daß sie Steroide in 1-Stellung dehydrieren, haben sich als bei dieser Art von Verfahren einsetzbar erwiesen. So wurde beispielsweise das aus der US-PS 3 065 146 als 1-dehydrierendes Bakterium bekannte Bacterium cyclooxydans (ATCC-Nr. 12673} getestet und als brauchbar befunden. Ein Bakterium, das zur 1-Dehydrierung von Steroiden noch weit intensiver untersucht wurde, ist das aus der US-PS 2 837 464 bekannte Bakterium Arthrobacter simplex (ATCC-Nr. 6946), Im folgenden wird also zur Veranschaulichung des erfindungsgemäßen Verfahrens weitestgehend dieser Mikroorganismus herangezogen. Selbstverständlich läßt sich das erfindungsgemäße Verfahren aber auch mit anderen 1-dehydrie-Two publicly available microorganisms known to dehydrate steroids in the 1-position have been found useful in this type of process. For example, Bacterium cyclooxydans (ATCC No. 12673), which is known as a 1-dehydrogenating bacterium from US Pat. No. 3,065,146, has been tested and found to be useful, a bacterium which has been studied much more intensively for the 1-dehydrogenation of steroids The bacterium Arthrobacter simplex (ATCC No. 6946), which is known from US Pat. No. 2,837,464, is therefore used to illustrate the process according to the invention to the greatest extent possible, but the process according to the invention can of course also be used with other 1-dehydrogenated

15 renden Mikroorganismen durchführen.15 perform microorganisms.

Wachstum des Mikroorganismus:Growth of the microorganism:

Die Mikroorganismen werden in einem wäßrigen Nährmedium mit:The microorganisms are in an aqueous nutrient medium with:

a) anorganischen Verbindungen, z.B. Nitraten odera) inorganic compounds, e.g. Nitrates or

Ammoniumsalzen, oder organischen stickstoffhaltigen Verbindungen, z.B. Hefeextrakt, Pepton, Maiseinweichflüssigkeit u.dgl. (Stickstoffquelle für das Wachstum) ; 25Ammonium salts, or organic nitrogenous compounds, e.g. Yeast extract, peptone, corn steep liquor and the like. (Nitrogen source for growth); 25

b) einer Kohlenstoff- und Energiequelle z.3. Kohlenhydraten und Zuckerderivaten, öl, Fettsäuren und deren Methylestern, Alkoholen, Aminosäuren oder organischen Säuren, undb) a source of carbon and energy z.3. Carbohydrates and sugar derivatives, oil, fatty acids and their methyl esters, alcohols, amino acids or organic acids, and

c) Ionen und Spurenelementen, z.B. Natrium, Kalium, Magnesium, Phosphaten, Sulfaten, Mangan, Kupfer, Kobalt, Molybdän u.dgl. in Mengen, wie sie mit Leitungswasser oder weniger gereinigten Bestandteilen des Nährmediums, z.B. der Maiseinweichflüssigkeit,c) ions and trace elements, e.g. Sodium, potassium, magnesium, phosphates, sulfates, manganese, copper, cobalt, molybdenum and the like. in amounts such as with tap water or less purified nutrient media, e.g. corn steep liquor,

35 zugeführt werden, wachsen gelassen.35, let grow.

Für das Wachstum benötigen die Organismen in der Atmo. Sphäre enthaltenen Sauerstoff. Der Temperaturbereich für das Wachstum beträgt 10 - 45°C bei einem optimalen Bereich von 28 bis 37 C für A.simplex. Der optimale pH-Wert für das Wachstum liegt etwa am Neutralpunkt.For growth, the organisms need in the atmosphere. Sphere contained oxygen. The temperature range for growth is 10 - 45 ° C with an optimum range of 28 to 37 C for A.simplex. The optimum pH for growth is approximately at the neutral point.

Gewinnung der Steroid-1-Dehydrogenase:Recovery of steroid 1-dehydrogenase:

Die Zellen werden durch Zusatz einer 1,2-gesättigten 3-Ketosteroidverbindung, z.B. von Androsta-4-en-3,17-dionThe cells are supplemented by addition of a 1,2-saturated 3-ketosteroid compound, e.g. of androsta-4-ene-3,17-dione

1^ oder Cortisonacetat in einer Menge von 0,005 % (w/v) des Mediums oder darüber zu einer Steroid-1-Dehydrogenaseaktivität angeregt. In Gegenwart des "Anregungsmittels" wird noch mindestens 6 h lang inkubiert, bevor die Zellen ..zur Trocknung geerntet werden. 1 ^ or cortisone acetate in an amount of 0.005% (w / v) of the medium or above to stimulate steroid-1 dehydrogenase activity. In the presence of the "stimulating agent" incubation is continued for at least 6 hours before the cells are harvested for drying.

Das "Anregungsmittel" kann zu einem beliebigen Zeitpunkt während des Wachstumszyklus zugesetzt werden. Kulturen, die auf Nährmedien, wie Specköl, wachsen gelassen wurden, beginnen mit der Synthese der Steroid-1-Dehydrogenäse rasch, während Kulturen, die auf Glucose wachsen gelassen wurden, eine Substratabreicherung erfordern, bevor eine Enzymsynthese erfolgt. Nach Zugabe des "Anregungsmittels" wird 6 h oder langer weiter inkubiert, danach werden die Zellen zur Verwendung bei dem Lösungs-The "stimulant" may be added at any time during the growth cycle. Cultures grown on nutrient media such as bacon oil begin rapidly with the synthesis of steroid 1-dehydrogenase, while cultures grown on glucose require substrate depletion before enzyme synthesis. After addition of the "excitation agent", incubation is continued for 6 hours or more, after which the cells are incubated for use in the solution

25 mittelverfahren oder zur Trocknung geerntet.25 medium or harvested for drying.

Maßnahmen zur Sammlung von Zellen zum Trocknen:Measures for collecting cells for drying:

Die Zellen werden aus dem Nährmedium abgetrennt und in üblicher bekannter Weise, z.B. durch Zentrifugieren oderThe cells are separated from the nutrient medium and incubated in the usual manner, e.g. by centrifuging or

Flockung und Filtration und Ultrafiltration konzentriert. Danach werden die abgetrennten Zellen getrocknet, indem sie unter vermindertem Druck bei 1° bis 85 C, vorzugsweise 55° bis 75°C, durch Lufttrocknung unter Erwärmen, durch Sprühtrocknen oder durch Trommeltrocknung auf flocculation and filtration and ultrafiltration concentrated. Thereafter, the separated cells are dried by applying under reduced pressure at 1 ° to 85 C, preferably 55 ° to 75 ° C, by air drying with heating, by spray drying or by drum drying

^5 einen Feuchtigkeitsgehalt von etwa 1 bis etwa 10 % ge-^ 5 has a moisture content of about 1 to about 10%.

getrocknet warden. Vorzugsweise beträgt der Feuchtigkeitsgehalt'. etwa 5 %. Die Zellen werden dann bei 5°C gelagert, bis sie zur Bioumwandlung eingesetzt werden. .Aktive getrocknete Zellen erhält man auch durch Immobilisieren getrockneter Zellen nach Standardverfahren, z.B. durch Einschluß in ein Polyacrylamidgel und Collagen oder durch kovalente Kupplung der Zellen an einen PoIyelektrolytträger, vgl. "Methods in Enzymology", 3and XLIV, 1976, Verlag Academic Press, Inc., New York, Seiten 11-317.dried. Preferably, the moisture content is'. about 5%. The cells are then stored at 5 ° C until used for bioconversion. Active dried cells are also obtained by immobilizing dried cells by standard methods, e.g. by inclusion in a polyacrylamide gel and collagen or by covalent coupling of the cells to a polyelectrolyte carrier, cf. "Methods in Enzymology", 3and XLIV, 1976, Academic Press, Inc., New York, pp. 11-317.

Biologische Umwandlung:Biological conversion:

Die Bioumwandlung erfolgt durch Einwirkenlassen der Zellpräparate auf das Steroidsubstrat. In typischer Weise werden die Zellen und das Steroid in einer schwach gepufferten wäßrigen Lösung eines pH-Werts im 3ereich von 6 - 10, vorzugsweise 7,25 - 8,5, suspendiert. Die Zellenmenge beträgt 0,1 - 50 g/l. Das Steroid kann in einem Gewichtsverhältnis (Steroid:Zellen) von 0,05 bis 5,0 zugesetzt werden. Zellenmengen von 8-10 g/l bei 5-10 g/l Steroid werden bevorzugt, wenn die biologische Umwandlung in wäßriger Umgebung vonstatten geht. Zur Stimulierung der Reaktion wird ein exogener Eletro-The bioconversion occurs by exposing the cell preparations to the steroid substrate. Typically, the cells and steroid are suspended in a weakly buffered aqueous solution having a pH in the range of 6-10, preferably 7.25-8.5. The amount of cells is 0.1 - 50 g / l. The steroid may be added in a weight ratio (steroid: cells) of 0.05 to 5.0. Cell levels of 8-10 g / L with 5-10 g / L steroid are preferred when biological conversion occurs in an aqueous environment. To stimulate the reaction, an exogenous eletro-

nenträger in katalytischer Menge (beispielsweisecarrier in a catalytic amount (for example

-4 5x10 M Menadion) zugesetzt. Geeignete Verbindungen sind Menadion-(2-methyl-1,4-naphthochinon), Phenazinmethosulfat, Dichlorphenol-indophenol, 1,4-Naphthochinon, Menadionbisulfit, Ubichinone (Coenzym Q) und Verbindungen vom Vitamin K-Typ. Die Mischungen werden bei einer Temperatur von 5° - 45°C 0 bis 14 Tage lang inkubiert. Während der Inkubation ist ein Zutritt von molekularem Sauerstoff zu dem Gemisch möglich. Vorzugsweise wird das Gemisch während der Inkubation gerührt. Die Geschwindigkeit der 1-Dehydrierung nimmt in typischer Weise im Laufe der Zeit ab. Bei Verwendung-4 5x10 M menadione). Suitable compounds are menadione (2-methyl-1,4-naphthoquinone), phenazine methosulfate, dichlorophenol-indophenol, 1,4-naphthoquinone, menadione bisulfite, ubiquinone (coenzyme Q) and vitamin K-type compounds. The mixtures are incubated at a temperature of 5 ° -45 ° C. for 0 to 14 days. During the incubation, access of molecular oxygen to the mixture is possible. Preferably, the mixture is stirred during the incubation. The rate of 1-dehydrogenation typically decreases over time. Using

von 10 g/l Substrat kann die Bioumwandlung in weniger als h 98 - 100 % vollständig sein.From 10 g / L substrate, the bioconversion may be complete in less than 98-100%.

Im folgenden werden Beispiele für verschiedene durchführbare Verfahrensmaßnahmen angegeben:The following are examples of different practicable procedures:

a) Suspension des Steroids und von Menadion in einer schwach gepufferten wäßrigen Lösung und anschließende Zugabe der getrockneten Zellen. Zur Verbesserung der Steroidsuspension können oberflächenaktive Mittel/ z.B. Tween 80 in niedriger Konzentration, beispielsweise einer Konzentration von 0 - 5 %, zugegeben werden.a) Suspension of the steroid and menadione in a weakly buffered aqueous solution and subsequent addition of the dried cells. To improve the steroid suspension, surfactants / e.g. Tween 80 in low concentration, for example, a concentration of 0-5%, are added.

b) Suspension der Zellen in einem wäßrigen Puffersystem bei anschließender Zugabe des in Ethanol, Methanol oder Aceton (nicht mehr als 5 % des Endvolumens) gelösten Elektronenträgers. Das Steroidsubstrat kann als trockenes Pulver oder in einem mischbaren organisehen Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, Ethanol, Methanol, Aceton oder Dimethylsulfoxid, oder in einem nicht.mischbaren organischen Lösungsmittel, wie Toluol, gelöst oder suspendiert zugegeben werden.b) Suspension of the cells in an aqueous buffer system with subsequent addition of the dissolved in ethanol, methanol or acetone (not more than 5% of the final volume) electron carrier. The steroid substrate may be added as a dry powder or in a miscible organic solvent such as dimethylformamide, ethanol, methanol, acetone or dimethylsulfoxide, or in a non-miscible organic solvent such as toluene, dissolved or suspended.

c) Rehydratisierung der getrockneten Zellen in einem geringen Puffervolumen und anschließende Zugabe von mehr Puffer oder eines organischen Lösungsmittels. Hierbei wird so viel Ethanol, Aceton, Xylol, Butylacetat, Methylenchlorid oder Toluol zugegeben, daß der Endgehalt an organischem Lösungsmittel 0 - 95 % (Vol/Vol) beträgt. Die Menge an verwendetem aromatischem Kohlenwasserstoff reicht von etwa der Hälfte der zum Auflösen des am besten löslichen Ausgangssteroids oder gebildeten Steroids erforderlichen Menge bis zur etwa vierfachen Menge der zum Auflösenc) rehydration of the dried cells in a small buffer volume and subsequent addition of more buffer or an organic solvent. In this case, so much ethanol, acetone, xylene, butyl acetate, methylene chloride or toluene is added that the final content of organic solvent is 0 - 95% (vol / vol). The amount of aromatic hydrocarbon used ranges from about half of the amount required to dissolve the most soluble initial steroid or steroid formed to about four times the amount of dissolution

des am wenigsten löslichen Ausgangssteroids oder gebildeten Steroids erforderlichen Menge. Das Steroid und der Elektronenträger werden zur Einleitung der Umsetzung zugegeben. Der Zusatz des aromatischen Kohlen-Wasserstoffs erfolgt vorzugsweise zusammen mit dem Steroid, er kann jedoch auch früher oder später erfolgen.amount of the least soluble starting steroid or steroid formed. The steroid and the electron carrier are added to initiate the reaction. The addition of the aromatic carbon-hydrogen is preferably carried out together with the steroid, but it can also be done sooner or later.

d) Suspension eines nassen Zellenkuchens oder Verdünnen einer Fermentationsbrühe mit"einer schwach gepuffer-* ten wäßrigen Lösung und anschließende Zugabe eines exogenen Elektronenträgers, eines Steroids und eines aromatischen Kohlenwasserstoffs.d) Suspension of a wet cell cake or dilution of a fermentation broth with "a weakly buffered aqueous solution and subsequent addition of an exogenous electron carrier, a steroid and an aromatic hydrocarbon.

15 Substratbereich: 15 substrate area:

Im Rahmen des erfindungsgemäßen Verfahrens verwendbareUsable in the context of the method according to the invention

Verbindungen gehört zur 3-Keto-A -androsten- und 3-Keto-Δ -pregnenreihe der Steroide. Substrate für die Steroid-1-Dehydrogenase sind bekanntlich zwischen den Kohlen-Stoffatomen C1 und C~ des Rings A gesättigt und besitzen in 3-Stellung des Rings A eine Hydroxy- oder Ketogruppe. Beispiele für Verbindungen der Androstenreihe sind:Compounds belongs to the 3-keto-A -androsten- and 3-keto-Δ-pregnenreihe of steroids. Substrates for the steroid 1-dehydrogenase are known to be saturated between the carbon atoms C 1 and C ~ of the ring A and have in the 3-position of the ring A a hydroxy or keto group. Examples of compounds of the Androstenreihe are:

1) Androsta-4-en-3,17-dion und1) androsta-4-ene-3,17-dione and

2) Androsta-4,9(11)-dien-3,17-dion und seine -6a^Fluor-, 6a-Methyl- oder 16-Methy!derivate;2) androsta-4,9 (11) -diene-3,17-dione and its -6a ^ fluoro, 6a-methyl or 16-methyl derivatives;

3) 11S-Hydroxyandrosta-4-en-3,1 7-dion und seine Derivate.3) 11S-hydroxyandrosta-4-ene-3,1,7-dione and its derivatives.

4 Verwendbare Steroide der 3-Keto-A -pregnen-Reihe sind:4 Usable steroids of the 3-keto-A-pregnene series are:

1. 17a-Hydroxy-pregn-4-en-20-yn-3-on und seine 16-Methylderivate;1. 17a-hydroxy-pregn-4-en-20-yn-3-one and its 16-methyl derivatives;

2. 11 ß,21-Dihydroxy-pregn-4,17 (20)-dien-3-on und seine βα-Methylderivate;2. 11β, 21-dihydroxy-pregn-4,17 (20) -dien-3-one and its βα-methyl derivatives;

11 3. 20-Chlor-pregn-4,9(11),17(20)-trien-21-al-3-on;11 3. 20-chloro-pregn-4,9 (11), 17 (20) -triene-21-al-3-one;

4 4. verschiedene Gruppen von 3,20-Diketo-A -Pregnenen,4 4. different groups of 3,20-diketo-A rainstorms,

wieas

a) 11,17,21-Tr!hydroxyverbindungen, z.B. Hydro-a) 11,17,21-trihydroxy compounds, e.g. hydro-

cortison und sein 6a-Methylderivat;cortisone and its 6a-methyl derivative;

b) 9ß,11ß-Epoxy-17,21-dihydroxyverbindungen, z.B. 9ß, 11ß-Epoxy-17,21-dihydroxy-16ß-methyl-pregn-4-b) 9β, 11β-epoxy-17,21-dihydroxy compounds, e.g. 9β, 11β-epoxy-17,21-dihydroxy-16β-methyl-pregn-4

en-3,20-dion;ene-3,20-dione;

c) 3,20-Diketo-4,9(11)-pregnediene, z.B. 17a,21-Dihydroxy-pregn-4,9(11)-dien-3,20-dion und sein Ιβα-Methyl-, 16ß-Methyl- oder 16a-Hydroxyderivat oder der 17a-Acetatester;c) 3,20-diketo-4,9 (11) -pededienes, e.g. 17a, 21-dihydroxy-pregn-4,9 (11) -diene-3,20-dione and its Ιβα-methyl, 16β-methyl or 16α-hydroxy derivative or the 17α-acetate ester;

d) 3,20-Diketo-4,9(11), 4,9 (11),16-pregnetriene, z.B 21-Hydroxy-pregn-4,9(11), 16-trien-3,20-dion undd) 3,20-diketo-4,9 (11), 4,9 (11), 16-pregnetrienes, for example 21-hydroxy-pregn-4,9 (11), 16-triene-3,20-dione and

sein 6a-Fluorderivat.its 6a fluoro derivative.

Als Substrate eignen sich ferner die 21-Esterderivate derjenigen Steroide, die in 21-Stellung eine Hydroxygruppe aufweisen (Nr. 2 und Nr. 4). Die bevorzugten 21-Ester enthalten kurzkettige Alkyl- oder Arylgruppen von kurzkettigen Fettsäuren, z.B. Essigsäure, und monocyclischen Carbonsäuren, z.B. Benzoesäure.Also suitable as substrates are the 21-ester derivatives of those steroids which have a hydroxyl group in the 21-position (Nos. 2 and 4). The preferred 21-esters contain short chain alkyl or aryl groups of short chain fatty acids, e.g. Acetic acid, and monocyclic carboxylic acids, e.g. Benzoic acid.

Die biologischen Umwandlungsprodukte und nicht umgewandeltes Substrat können aus den Reaktionsgemischen in üblicher bekannter Weise isoliert werden. Die Steroide werden in typischer Weise abfiltriert, worauf der Filterkuchen mit einem organischen Lösungsmittel, wie Aceton oder Methylenchlorid, extrahiert wird. Andererseits kann das gesamte biologische ümwandlungsgemisch durch Vermischen mit einem mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel, z.B. Butylacetat oder Methylenchlorid, extrahiert werden. Das Reaktionsprödukt wird dann aus dem organischen Lösungsmittel isoliert.The biological conversion products and unconverted substrate can be isolated from the reaction mixtures in the usual manner. The steroids are typically filtered off, after which the filter cake is extracted with an organic solvent such as acetone or methylene chloride. On the other hand, the entire biological mixture may be mixed by mixing with a water-immiscible solvent, e.g. Butyl acetate or methylene chloride. The reaction precursor is then isolated from the organic solvent.

- 12 Ausführungsbeispiele: - 12 embodiments:

Die folgenden Seispiele sollen die Erfindung näher veranschaulichen.The following Seispiele to illustrate the invention in more detail.

Beispiel 1example 1

Herstellung der getrockneten Zellen:Preparation of the dried cells:

Die Beimpfung mit Bacterium cyclooxydans (ATCC Hr. 12673) erfolgt in Schüttelflaschen mit einem Medium aus cerelose, Pepton und Maiseinweichflüssigkeit (jeweils 6 g/l) eines pH-Werts von 7,0. Die Kulturen werden bis zum Auftreten einer Glueöseerschöpfung auf einem Drehrüttler bei 28 0C inkubiert. Beim Auftreten der Glucoseerschöpfung erfolgt eine Zugabe von 0,5 g/l Cortisonacetat, worauf die Schüttelflaschen erneut 16 h lang inkubiert werden, Die Ernte der Zellen erfolgt durch Zentrifugieren. Die abzentrifugierten Zellen werden zweimal mit Wasser gewaschen und dann in einem ein niedriges Vakuum-aufweisenden Ofen bei 45 0C gelagert, bis sie getrocknet sind.Inoculation with Bacterium cyclooxydans (ATCC No. 12673) is carried out in shake flasks with a medium of cerelose, peptone and corn steep liquor (in each case 6 g / l) of a pH of 7.0. The cultures are incubated on a rotary shaker at 28 0 C until the appearance of a Glueöseerschöpfung. When glucose depletion occurs, 0.5 g / l cortisone acetate is added and the shake flasks are incubated again for 16 h. Cells are harvested by centrifugation. The centrifuged cells are washed twice with water and then stored in a low vacuum oven at 45 ° C. until dried.

Bioumwandlung von öoC-Methylhydrocortison.Bioconversion of ooC methyl hydrocortisone.

Ein halbes Gramm der in der geschilderten Weise hergestellten getrockneten Zellen wird unter Rühren in 50 ml. eines 50 mM Phosphatpuffers eines pH-Werts von 7,5 rehydratisiert. Zu der Zellensuspension wird Menadion als ethanolische Lösung (8,6 mg/ml Ethanol) in einer Menge von 0,025 ml/50 ml zugegeben. Die Substratzugabe erfolgt als Lösung in Dimethylformamid (100 mg 6^-Methylhydrocortison/ml Dimethylformamid) bis zu einer Endbioumwandlungskonzentration von 0,5 g/l. Nun wird das Gemisch unter Bewegen bei 28 0C inkubiert. Uach 4stündiger Inkubation ist das Steroid zu 91 % umgewandelt. Das 6 Methylprednisolon wird in üblicher bekannter Weise gewonnen.Half a gram of the dried cells prepared as described above are rehydrated with stirring in 50 ml. Of a 50 mM phosphate buffer of pH 7.5. To the cell suspension menadione is added as an ethanolic solution (8.6 mg / ml ethanol) in an amount of 0.025 ml / 50 ml. The substrate is added as a solution in dimethylformamide (100 mg 6 ^ -methylhydrocortisone / ml dimethylformamide) to a final bio-conversion concentration of 0.5 g / l. Now the mixture is incubated with stirring at 28 0 C. After 4 hours of incubation, the steroid is converted to 91 % . The methylprednisolone is recovered in the usual manner.

1 Beisp, iel·.-. .2 1 example. .2

Herstellung von Androsta-1,4,9(11}-trien-3,17-dionPreparation of androsta-1,4,9 (11} -triene-3,17-dione

a) Herstellung des Biokatalysators: 5a) Preparation of the biocatalyst: 5

Arthrobacter simplex (ATCC Nr. 6946) wird in Schüttelflaschen in einem Medium mit 6 g/1 Glucose, 6 g/l Maiseinweichflüssigkeit und 6 g/l sprühgetrockneten Speckwassers wachsen gelassen. DieArthrobacter simplex (ATCC No. 6946) is grown in shake flasks in a medium containing 6 g / l glucose, 6 g / l corn steep liquor, and 6 g / l spray-dried bacon. The

·. λ Kulturen werden so lange auf einem Drehrüttler bei 28 C inkubiert, bis eine Glucoseverarmung eintritt. Zu diesem Zeitpunkt erfolgt eine Zugabe von 0/15 g/l Cortisonacetat zur Einleitung der Steroid-1-Dehydrogenasesynthese. Nach einer Inkubation über·. λ cultures are incubated on a rotary shaker at 28 C until a glucose depletion occurs. At this point, 0/15 g / l cortisone acetate is added to initiate steroid-1 dehydrogenase synthesis. After an incubation over

2g Nacht werden die Zellen durch Zentrifugieren mit niedriger Geschwindigkeit geerntet. Die Zellenpellets werden dann zum Trocknen 24 h lang in einen ein niedriges Vakuum aufweisenden Ofen einer Temperatur von 55°C gelegt. 24 h später wird das getrockne-2g night the cells are harvested by low speed centrifugation. The cell pellets are then placed in a low vacuum oven at 55 ° C for 24 hours to dry. 24 hours later, the dried

«Q te Material in einen luftdichten Behälter überführt und darin bis zum Gebrauch zur biologischen Umwandlung bei 5 C gelagert.Transfer the Q te material to an airtight container and store at 5 C until needed for biological conversion.

b) Biologische Umwandlung von Androsta-4, 9 (11.)-dien-3,1 7-dion:b) Biological conversion of androsta-4,9 (11) -diene-3,1 7-dione:

25 .25.

10 g/l getrocknete Zellen werden unter 30-minütigem Rühren in 50 mM Phosphatpuffer eines pH-Werts von 7,5 rehydratisiert. Danach wird die Zellensuspension mit so viel trockenem pulverförmigen Menadion versetzt,10 g / L of dried cells are rehydrated in 50 mM phosphate buffer of pH 7.5 with stirring for 30 minutes. Thereafter, the cell suspension is mixed with so much dry powdered menadione,

3q daß eine Endkonzentration von 86 mg/1 erreicht wird. Ferner wird mikronisiertes Androsta-4,9(11)-dien-3,17-dion in Dimethylformamid aufgeschlämmt und in Form der Aufschlämmung dem biologischen Umwandlungsgemisch in einer Menge von 2,5 g Steroid/1 und 2 % 3 q that a final concentration of 86 mg / 1 is reached. Further, micronized androsta-4,9 (11) -diene-3,17-dione is slurried in dimethylformamide and, in the form of the slurry, is added to the biological conversion mixture in an amount of 2.5 g steroid / 1 and 2%.

QP. (v/v) Dimethylformamid zugegeben. Nun wird das Gemisch QP . (v / v) dimethylformamide added. Now the mixture is

unter Bewegen, in Gegenwart von Luft 24 h lang bei 31°c inkubiert. Nach beendeter Inkubation wird das Androsta-1,4,9(11)-trien-3,17-dion in üblicher bekannter Weise rein dargestellt.with agitation, incubated in the presence of air for 24 h at 31 ° C. After completion of the incubation, the androsta-1,4,9 (11) -triene-3,17-dione is purified in the usual manner.

Beispielexample

In entsprechender Weise wie in Beispiel 2 werden aufIn a similar manner as in Example 2 are on

folaende Steroide: 10folate steroids: 10

1. Androsta-4-en-3,17-dion1. Androsta-4-ene-3,17-dione

2. 6a-Fluor-androsta-4,9(11)-dien-3,17-dion2. 6a-fluoro-androsta-4,9 (11) -diene-3,17-dione

3. 6a-Methyl-androsta-4,9(11)-dien-3,17-dion 4. 16ß-Methyl-androsta-4,9(11)-dien-3,17-dion3. 6a-Methyl-androsta-4,9 (11) -diene-3,17-dione 4. 16β-Methyl-androsta-4,9 (11) -diene-3,17-dione

5. 17a-Hydroxy-pregn-4-en-20-yn-3-on5. 17a-Hydroxy-pregn-4-en-20-yn-3-one

6. 17a-Kydroxy-pregn-4,9(11)-dien-2O-yn-3-on6. 17a-Kydroxy-pregn-4,9 (11) -dien-2 O -yyn-3-one

7. 17a-Hydroxy-16ß-methyl-pregn-4,9(11)-dien-20-yn-7. 17a-hydroxy-16β-methyl-pregn-4,9 (11) -dien-20-yn

3n 3 - ° n

8. 11ß,21-Dihydroxy-pregn-4,17(20)-dien-3-on8. 11β, 21-dihydroxy-pregn-4,17 (20) -dien-3-one

9. 21-Acetoxy-11ß-hydroxy-pregn-4,1 7(20)-dien-3-on9. 21-Acetoxy-11β-hydroxy-pregn-4,1 7 (20) -dien-3-one

10. 6a-Methyl-11ß,21-dihydroxy-pregn-4,17(20)-dien-3-on 25 11. 20-Chlor-pregn-4,9(11),17(20)-trien-21-al-3-on10. 6a-methyl-11β, 21-dihydroxy-pregn-4,17 (20) -dien-3-one 25 11. 20-chloro-pregn-4,9 (11), 17 (20) -triene-21 -al-3-one

12. Hydrocortison12. Hydrocortisone

13. 6a-Methylhydrocortison13. 6a-methyl hydrocortisone

14. 21-Acetoxy-11ß,17-dihydroxy-16ß-methyl-pregn-4-en-30 3,20-dion14. 21-Acetoxy-11β, 17-dihydroxy-16β-methyl-pregn-4-ene-30 3,20-dione

15. 21-Acetoxy-9a-fluor-11ß,17-dihydroxy-16ß-methylpregn-4-en-3,20-dion15. 21-Acetoxy-9a-fluoro-11β, 17-dihydroxy-16β-methylpregn-4-ene-3,20-dione

16. 21-Acetoxy-9ß,11ß-epoxy-17-hydroxy-16ß-methyl-pregn-35 4-en-3,20-dion16. 21-Acetoxy-9β, 11β-epoxy-17-hydroxy-16β-methyl-pregn- 35 4-ene-3,20-dione

15 17. 21-Acetoxy-17-hydroxy-pregn-4,9(11)-dien-3,20-dion15 17. 21-Acetoxy-17-hydroxy-pregn-4,9 (11) -diene-3,20-dione

18. 21-Acetoxy-16α,17-dihydroxy-pregn-4,9(11)-dien-3,20-dion18. 21-Acetoxy-16α, 17-dihydroxy-pregn-4,9 (11) -diene-3,20-dione

19. 21-Acetoxy-17-hydroxy-16a-methy1-pregn-4,9(11 )-dien-3,20-dion19. 21-Acetoxy-17-hydroxy-16a-methyl-pregn-4,9 (11) -diene-3,20-dione

20. 21-Benzoyloxy-17-hydroxy-16ß-methyl-pregn-4,9(11)-dien-3,20-dion20. 21-Benzoyloxy-17-hydroxy-16β-methyl-pregn-4,9 (11) -diene-3,20-dione

21. 21-Acetoxy-17-hydroxy-16ß-methyl-pregn-4,9(11)-dien-3,20-dion21. 21-Acetoxy-17-hydroxy-16β-methyl-pregn-4,9 (11) -diene-3,20-dione

22. 21-Acetoxy-pregn-4,9(11),16(17)-trien-3,20-dion und22. 21-acetoxy-pregn-4,9 (11), 16 (17) -triene-3,20-dione and

23. 21-Acetoxy-6a-fluor-pregn-4,9(11),16-trien-3,20-dion.23. 21-Acetoxy-6α-fluoro-pregn-4,9 (11), 16-triene-3,20-dione.

zur Gewinnung der entsprechenden 1,2-Dehydroderivate: 1a Androsta-1,4-dien-3,17-dion 2a 6a-Fluor-androsta-1,4,9(11)-trien-3,17-dion 3a . 6a-Methyl-androsta-1,4,9(11)-trien-3,17-dion 4a 16ß-Methyl-androsta-1,4,9(11)-trien-3,17-dion 5a 17a-Hydroxy-pregn-1,4-dien-20-yn-3-on 6a 17a-Hydroxy-pregn-1,4,9(11)-trien-20-yn-3-onto obtain the corresponding 1,2-dehydro derivatives: 1a androsta-1,4-diene-3,17-dione 2a 6a-fluoro-androsta-1,4,9 (11) -triene-3,17-dione 3a. 6a-methyl-androsta-1,4,9 (11) -triene-3,17-dione 4a 16β-methyl-androsta-1,4,9 (11) -triene-3,17-dione 5a 17a-hydroxy pregn-1,4-dien-20-yn-3-one 6a 17a-hydroxy-pregn-1,4,9 (11) -trien-20-yn-3-one

7a 17a-Hydroxy-16S-methy1-pregn-1,4,9(11)-trien-20-yn-7a 17a-hydroxy-16S-methyl-pregn-1,4,9 (11) -trien-20-yn

3-on 8a 11ß,21-Dihydroxy-pregn-1,4,17(20)-trien-3-on3-one 8a 11β, 21-dihydroxy-pregn-1,4,17 (20) -trien-3-one

9a 21-Acetoxy-11ß-hydroxy-pregn-1,4,17(20)-trien-3-one und9a 21-acetoxy-11β-hydroxy-pregn-1,4,17 (20) -triene-3-ones and

11ß,21-Dihydroxy-pregn-1,4,17(20)-trien-3-on11ß, 21-dihydroxy-pregn-1,4,17 (20) -trien-3-one

10a 6a-Methyl-11ß,21-dihydroxy-pregn-1,4,17(20)-trien-3-on10a 6a-methyl-11β, 21-dihydroxy-pregn-1,4,17 (20) -trien-3-one

11a 20-Chlor-pregn-1,4,9(11),17(20)-tetraen-21-al-3-on11a 20-chloro-pregn-1,4,9 (11), 17 (20) -tetraene-21-al-3-one

1 12a Prednisolon1 12a prednisolone

13a βα-Methy!prednisolon13a βα-methyl prednisolone

14a 21-Acetoxy-11ß,17-dihydroxy-16ß-methyl-pregn-1, 4-14a 21-acetoxy-11β, 17-dihydroxy-16β-methyl-pregn-1, 4-

dien-3,20-dion unddien-3,20-dion and

11ß,17,21-Trihydroxy-16ß-methyl-pregn-1,4-dien-3,20-dion11beta, 17,21-trihydroxy-16ss-methyl-pregn-1,4-diene-3,20-dione

15a 21-Acetoxy-9a-fluor-11ß,u7-dihydroxy-16ß-methyl-15a 21-acetoxy-9a-fluoro-11β, u7-dihydroxy-16β-methyl

pregn-1,4-dien-3,20-dion undpregn-1,4-diene-3,20-dione and

9a-Fluor-11ß,17,21-trihydroxy-16ß-methyl-pregn-1,4-dien-3,20-dion9a-fluoro-11ß, 17,21-trihydroxy-16ss-methyl-pregn-1,4-diene-3,20-dione

16a 21-Acetoxy-9ß,11ß-epoxy-17-hydroxy-16ß-methyl-pregn-1,4-dien-3,20-dion und16a 21-acetoxy-9β, 11β-epoxy-17-hydroxy-16β-methyl-pregn-1,4-diene-3,20-dione and

9ß,11ß-Epoxy-17,21-dihydroxy-16ß-methyl-pregn-1,4-dien-3,20-dion9SS, 11.beta.-epoxy-17,21-dihydroxy-16ss-methyl-pregn-1,4-diene-3,20-dione

17a 21-Acetoxy-17-hydroxy-pregn-1,4,9(11)-trien-3,2O dion und 17,21-Dihydroxy-pregn-1,4,9(11)-trien-3,20-dion17a 21-acetoxy-17-hydroxy-pregn-1,4,9 (11) -triene-3,2-dione and 17,21-dihydroxy-pregn-1,4,9 (11) -triene-3,20- dion

18a 21-Acetoxy-iea,17-dihydroxy-pregn-1,4,9(11)-trien-18a 21-acetoxy-iea, 17-dihydroxy-pregn-1,4,9 (11) -triene

3,20-dion und3,20-dion and

16a,1-7,21-Trihydroxy-pregn-1 ,4,9(11) -trien-3, 20-dion16a, 1-7,21-Trihydroxy-pregn-1, 4,9 (11) -triene-3,20-dione

19a 21-Acetoxy-17-hydroxy-16a-methyl-pregn-1,4,9(11)-trien-3,20-dion und19a 21-acetoxy-17-hydroxy-16a-methyl-pregn-1,4,9 (11) -triene-3,20-dione and

17,21-Dihydroxy-16a-methyl-pregn-1 ,4,9(11)-trien-3,20-dion17,21-Dihydroxy-16a-methyl-pregn-1, 4,9 (11) -triene-3,20-dione

20a 21-Benzoyloxy-17-hydroxy-16ß-methyl-pregn-1,4,9(11) -20a 21-Benzoyloxy-17-hydroxy-16β-methyl-pregn-1,4, 9 (11) -

trien-3,20-dion 30trien-3,20-dion 30

21a 2i-Acetoxy-17-hydroxy-16ß-methyl-pregn-1,4,9(11)-trien-3,20-dion und21a 2i-acetoxy-17-hydroxy-16β-methyl-pregn-1,4,9 (11) -triene-3,20-dione and

17,21-Dihydroxy-16ß-methyl-pregn-1,4,9(11)-trien-3,20-dion,17,21-dihydroxy-16ss-methyl-pregn-1,4,9 (11) -triene-3,20-dione,

22a 21-Acetoxy-pregn-1,4,9(11),16-tetraen-3,20-dion und 21-Hydroxy-pregn-1,4,9(11),16-tetraen-3,20-dion22a 21-acetoxy-pregn-1,4,9 (11), 16-tetraene-3,20-dione and 21-hydroxy-pregn-1,4,9 (11), 16-tetraene-3,20-dione

2 3a 21-Acetoxy-5ct-fluor-pregn-1,4,9(11),16-tetraen-3,20-2 3a 21-acetoxy-5ct-fluoro-pregn-1,4,9 (11), 16-tetraene-3,20-

dion unddion and

6a-Fluor-21-hydroxy-pregn-1,4,9(11),16-tetraen-6a-fluoro-21-hydroxy-pregn-1,4,9 (11), 16-tetraene

3,20-dion3,20-dione

trockene Seilen von A. simplex einwirken gelassen·.dry ropes of A. simplex exposed ·.

Beispiel 4Example 4

Mit Zellen von A„simplex in einer Gärbrühe und mit getrockneten A.simplex-Zellen werden zwei verschiedene Steroide einer biologischen Umwandlung unterworfen. Nachdem jede biologische Umwandlung als beendet angesehen wurde (keine weitere Abnahme der Restsubstratmenge), wird das in jedem Gemisch enthaltene Steroid extrahiert und isoliert (um Daten für die einzelnen Versuche zu gewinnen). Die folgende Tabelle faßt die gewonnenen Ergebnisse zusammen:With cells of A "simplex in a fermentation broth and with dried A.simplex cells, two different steroids are subjected to biological conversion. After each biotransformation has been considered complete (no further decrease in the residual substrate amount), the steroid contained in each mixture is extracted and isolated (to collect data for each experiment). The following table summarizes the results obtained:

Vergleich der isolierten Ausbeuten aus verschiedenen Arten biologischer UmwandlungenComparison of isolated yields from different types of biological transformations

Substratsubstratum

g/lg / l

Art der biologischen Chemische Ausbeute % Δ1 %-Rest Bemerkung Umwandlung an wertvollem Verbin-Type of biological chemical yield% Δ 1 % residue Remark Conversion to valuable compound

Steroid (a) dungSteroid (a)

Fermentationfermentation

getrocknete Zellen 77,2 % erste Chargedried cells 77.2% first batch

2,62.6

2,8!% zweite Charge 10,42.8% second batch 10.4

82,6 % erste Charge 100,0 9,9 % zweite Charge 95,082.6% first batch 100.0 9.9% second batch 95.0

87,487.4

89,689.6

5,05.0

schlechte 1-Dehydrierungbad 1-dehydration

g/lg / l

OAc FermentationOAc fermentation

getrocknete Zellendried cells

18,1 % ersteCharge 59,118.1% first charge 59.1

keine zweite Chargeno second batch

7 9,6 % erste Charge 97,87 9.6% first batch 97.8

keine zweite Chargeno second batch

40,940.9

2,12.1

(b)(B)

(a) Als "brauchbares Steroid" ist eine bei einer weiteren Synthese verwendbare Δ1-Verbindung oder das 1,2-Dihydrosubstrat, das in eine weitere biologische Umwandlung zur Produktgewinnung rückgeführt werden(a) A "useful steroid" is a Δ 1 compound useful in a further synthesis or the 1,2-dihydrosubstrate, which are recycled to a further biological conversion for product recovery

5 kann, zu verstehen.5 can, understand.

(b) Es werden auch beträchtliche Mengen an sonstigen unerwünschten Steroidmolekülen gefunden.(b) Substantial amounts of other unwanted steroid molecules are also found.

Beispiel 5Example 5

Arthrobacter simplex wird in einem 5 1 fassenden "Microferm"-Fermentiergefäß wachsen gelassen, zu einer Steroid-1-Dehydrogenasesynthese angeregt und durch Zentrifugieren geerntet. Teile der erhaltenen Zellenpaste werden nach zwei verschiedenen Verfahren aufgearbeitet. Beim ersten Verfahren werden die Zellen unter vermindertem Druck bei 55 C getrocknet.^ Beim zweiten Verfahren werden entsprechend der US-PS 3 360 439 acetongetrocknete Zellen hergestellt. Die Zellen werden hierbei mit Aceton gemischt, geerntet und bei 5 C unter vermindertem Druck getrocknet.Arthrobacter simplex is grown in a 5 liter "Microferm" fermentation flask, stimulated for steroid-1 dehydrogenase synthesis, and harvested by centrifugation. Parts of the cell paste obtained are processed by two different methods. In the first method, the cells are dried under reduced pressure at 55 ° C. In the second method, 3,360,439 acetone-dried cells are prepared according to US Pat. The cells are mixed with acetone, harvested and dried at 5 C under reduced pressure.

Danach werden die trockenen Zellenpräparate zur biologi-Thereafter, the dry cell preparations become biological

9 119 11

sehen Umwandlung von A ' -Androstendion in Schüttelflaschen bei Konzentrationen von 10 g/l Zellen und 10 g/l Steroid eingesetzt.see conversion of A'-endrostenedione into shake flasks used at concentrations of 10 g / l cells and 10 g / l steroid.

Vergleich der biologischen Umwandlungskapazität von A.simplex-Zellen, die nach unterschiedlichen Verfahren getrocknet wurdenComparison of the biological conversion capacity of A.simplex cells dried by different methods

55 ZellenartCell type Versuchs dauer (h)Trial duration (h) % Rest substrat% Residual substrate Biologische Umwand lungsakt ivität+ (g gebildetes Pro dukt) h/g ZellenBiological conversion activity + (g product produced) h / g cells 1010 acetonge- trocknetdried acetone 1 41 4 98,7 95,598.7 95.5 0,013 0,0110.013 0.011 2424 84,1*84.1 * 0,0070,007 wärmege trocknetheat dried 1 41 4 85,1 23,285.1 23.2 0,149 0,1920.149 0.192 1515 2424 7,2*7.2 * 0,0390,039

2Q (+) Die biologische Umwandlungsaktivität errechnet sich wie folgt:2Q (+) The biological conversion activity is calculated as follows:

% gebildetes Produkt χ g zugesetztes Substrat% product formed χ g added substrate

100100

= g gebildetes Produkt= g product formed

g gebildetes Produkt/Dauer der Inkubation in h/ g zugesetzte Zellen = Aktivitätg product formed / duration of incubation in h / g added cells = activity

(*) Die Restsubstratmengen sinken bei weiterer Inkubation nicht mehr.(*) The residual substrate amounts no longer decrease on further incubation.

21 I Beispiel 621 I Example 6

Beim Ersatz von 6a.-Methylhydrocort.ison in Beispiel 1 bzw Androsta-4,9(11)-dien-3,17-dion in Beispiel 2 durch folgende Substrate:When replacing 6a.-Methylhydrocort.ison in Example 1 or Androsta-4,9 (11) -diene-3,17-dione in Example 2 by the following substrates:

1. 21-Acetoxy-9a-fluor-11ß,16a,17-trihydroxy-pregn-4-en1. 21-Acetoxy-9a-fluoro-11β, 16α, 17-trihydroxy-pregn-4-ene

3,20-dion;3,20-dione;

2. 21-Acetoxy-6a,9a-difluor-11ß,16a,17-trihydroxy-pregn 4-en-3,20-dion-16,17-acetonid;2. 21-acetoxy-6a, 9a-difluoro-11ß, 16a, 17-trihydroxy-pregn 4-ene-3,20-dione-16,17-acetonide;

3. 21-Acetoxy-6a-fluor-11ß-hydroxy-16a-methyl-pregn-4-en-3,20-dion;3. 21-acetoxy-6α-fluoro-11β-hydroxy-16α-methyl-pregn-4-ene-3,20-dione;

4. 21-Acetoxy-6a-fluor-11ß,17-hydroxy-pregn-4-en-3,20-dion;4. 21-acetoxy-6α-fluoro-11β, 17-hydroxy-pregn-4-ene-3,20-dione;

^c 5. 21-Acetoxy-öa,9a-difluor-11ß,17-dihydroxy-16a-methyl pregn-4-en-3,20-dion;^ c 5. 21-acetoxy-6α, 9α-difluoro-11β, 17-dihydroxy-16α-methyl-pregn-4-ene-3,20-dione;

6. 21-Acetoxy-9a-fluor-11ß,16a,17-trihydroxy-pregn-4-en-3,20-dion-16,17-acetonid;6. 21-acetoxy-9a-fluoro-11β, 16α, 17-trihydroxy-pregn-4-ene-3,20-dione-16,17-acetonide;

7. 21-Acetoxy-9ß-,-llß-epoxy-6a-f luor-1 6a, 1 7-dihydroxy-7. 21-Acetoxy-9β, -IIβ-epoxy-6a-fluoro-1 6a, 1,7-dihydroxy-

pegn-4-en-3,20-dion-16,17-acetonid;Pegn-4-ene-3,20-dione-16,17-acetonide;

8. 21-Acetoxy-9ß,11ß-epoxy-16a-hydroxy~pregn-4-en-3,20-dion und8. 21-acetoxy-9β, 11β-epoxy-16α-hydroxy-pregn-4-ene-3,20-dione and

9. 21-Acetoxy-9ß,11ß-epoxy-16a,17-dihydroxy-pregn-4-en-3,20-dion-16,17-acetonid9. 21-Acetoxy-9β, 11β-epoxy-16α, 17-dihydroxy-pregn-4-ene-3,20-dione-16,17-acetonide

erhält man die folgenden Produkte:you get the following products:

1. 21-Acetoxy-9a-fluor-11ß,16a-17-trihydroxy-pregn-1,4-dien-3,20-dion und1. 21-acetoxy-9a-fluoro-11β, 16a-17-trihydroxy-pregn-1,4-diene-3,20-dione and

9a-Fluor-11ß,16a,17,21-tetrahydroxy-pregn~1,4-dien-3,20-dion;9a-fluoro-11beta, 16a, 17,21-tetrahydroxy-pregn ~ 1,4-diene-3,20-dione;

2. 21-Acetoxy-6a,9a-difluor-11ß,16a,17-trinydroxy-pregn 1,4-dien-3,20-dion-16,17-acetonid und2. 21-acetoxy-6a, 9a-difluoro-11ß, 16a, 17-trinydroxy-pregn 1,4-diene-3,20-dione-16,17-acetonide and

6a,9a-Fluor-11ß,16«r 17,21-tetrahydroxy-pregn-1,4-dien-3,20-dion-16,17-acetonid;6a, 9a-fluoro-11β, 16β-tetrahydroxy-pregn-1,4-diene-3,20-dione-16,17-acetonide;

3. 21-Acetoxy-6a-fluor-11ß-hydroxy-16a-methyl-pregn-1,4-dien-3,20-dion und3. 21-acetoxy-6a-fluoro-11β-hydroxy-16a-methyl-pregn-1,4-diene-3,20-dione and

6a-Fluor-11ß,21-dihydroxy-16a-methyl-pregn-1,4-dien-3,20-dion;6a-fluoro-11beta, 21-dihydroxy-16a-methyl-pregn-1,4-diene-3,20-dione;

4. 21-Acetoxy-6a-fluor-11ß,17-hydroxy-pregn-1,4-dien-3,20-dion und 6a-Fluor-11ß,17,21-tr!hydroxy-1,4-dien-3/20-dion;4. 21-Acetoxy-6α-fluoro-11β, 17-hydroxy-pregn-1,4-diene-3,20-dione and 6α-fluoro-11β, 17,21-trihydroxy-1,4-diene 3/20-dione;

5. 21-Acetoxy-6a,9a-difluor-11ß,17-dihydroxy-16a-methyl-5. 21-acetoxy-6a, 9a-difluoro-11β, 17-dihydroxy-16a-methyl

pregn-1,4-dien-3,20-dion und 10pregn-1,4-diene-3,20-dione and 10

6a,9a-Difluor-11 ß, 1 7,21-trihydroxy-1,4-dien-3,20-dion;6a, 9a-difluoro-11β, 1, 7,21-trihydroxy-1,4-diene-3,20-dione;

6. 21-Acetoxy-9a,fluor-11ß,16a>17-trihydroxy-pregn-1,4-dien-3,20-dion-16,17-acetonid;6. 21-acetoxy-9a, fluoro-11β, 16a> 17-trihydroxy-pregn-1,4-diene-3,20-dione-16,17-acetonide;

7. 21-Acetoxy-9ß,11ß-epoxy-6a-fluor-16α,17-dihydroxypregn-1,4-dien-3,20-dion-16,17-acetonid;7. 21-acetoxy-9β, 11β-epoxy-6α-fluoro-16α, 17-dihydroxypregn-1,4-diene-3,20-dione-16,17-acetonide;

8. 21-Acetoxy-9ß,11ß-epoxy-16-hydroxy-pregn-1,4-dien-3,20-dion und8. 21-acetoxy-9β, 11β-epoxy-16-hydroxy-pregn-1,4-diene-3,20-dione and

9ß,11ß-Epoxy-16a,21-dihydroxy-pregn-1,-4-dien-3,20-9SS, 11.beta.-epoxy-16a, 21-dihydroxy-pregn-1, -4-diene-3,20-

dion;dione;

9. 21-Acetoxy-98,11ß-epoxy-16a,17-dihydroxy-pregn-1,4-dien-3,20-dion-16,17-acetonid.9. 21-Acetoxy-98,11β-epoxy-16a, 17-dihydroxy-pregn-1,4-diene-3,20-dione-16,17-acetonide.

Beispie.1 7Example 7

Biologische Umwandlung von 11ß-Hydroxyandrosta-4-en-3,17-dion.Biological conversion of 11β-hydroxyandrosta-4-ene-3,17-dione.

Ein Gramm entsprechend Beispiel 2 getrockneter A.simplex-Zellen wird in 100 ml 50 mM Phosphatpuffer eines pH-Werts von 7,5 resuspendiert. Danach erfolgt eine Zugabe von in 3A Ethanol gelöstem Menadion in einer Endkonzentration von 86 mg/1. Nach Zugabe von 1/2 g 11ß-Hydroxyandrosten-One gram of Example 2 dried A.simplex cells is resuspended in 100 ml of 50 mM phosphate buffer of pH 7.5. This is followed by the addition of menadione dissolved in 3A ethanol in a final concentration of 86 mg / l. After addition of 1/2 g of 11β-hydroxyandrostene

dion in die Flasche wird das Gemisch auf einem Drehrütt-35dion in the bottle, the mixture is on a rotary-35

ler bei einer Temperatur von 310C inkubiert. Werden nach 1-tägiger Inkubation Proben gezogen, erscheinen auf einem Dünnschichtchromatograinin eines Methylenchloridextrakts zwei Produkte. Etwa 95 % des Steroids bestehen aus 11ß-Hydroxyandrosta-1,4-dien-3,17-dion, der Rest aus nicht umaewandeltem Substrat.ler incubated at a temperature of 31 0 C. When samples are taken after 1 day of incubation, two products appear on a thin layer chromatograinin of a methylene chloride extract. About 95% of the steroid consists of 11β-hydroxyandrosta-1,4-diene-3,17-dione, the remainder being unreacted substrate.

Beispielexample

Entsprechend Beispiel 7 lassen sich folgende am C11 modifizierte Androstendione 1-dehydrieren:According to Example 7, the following can be dehydrogenated at C 11 modified androstenediones 1:

Substrat -> ProduktSubstrate -> Product

(1) 11ß-Hydroxy-16ß-methylandrosta-4-en-3,17-dion *(1) 11β-hydroxy-16β-methylandrosta-4-ene-3,17-dione *

11ß-Hydroxy-16ß-methylandrosta-1,4-dien-3,17-dion11.beta.-hydroxy-16ss-methylandrosta-1,4-diene-3,17-dione

(2) 11 ß-Hydroxy-16a-methylandrosta-4-en-3,17-dion > 11ß-Hydroxy-16a-methylandrosta-1,4-dien-3,17-dion(2) 11β-Hydroxy-16α-methylandrosta-4-ene-3,17-dione> 11β-hydroxy-16α-methylandrosta-1,4-diene-3,17-dione

(3) 6a-Fluor-11 ß-hydroxyandrosta-4-en-3,1 7-dion >(3) 6α-fluoro-11β-hydroxyandrosta-4-ene-3,1,7-dione>

6a-Flüor-11ß-hydroxyandrosta-1,4-dien-3,17-dion6a-Flüor-11.beta.-hydroxyandrosta-1,4-diene-3,17-dione

(4) 6a-Methyl-11ß-hydroxyandrosta-4-en-3,17-dion » 6a-Methyl-11ß-hydroxyandrosta-1,4-dien-3,17-dion(4) 6a-Methyl-11β-hydroxyandrosta-4-ene-3,17-dione 6a-methyl-11β-hydroxyandrosta-1,4-diene-3,17-dione

(5) 11a-Hydroxyandrosta-4-en-3,17-dion * 11a-Hydroxyandrosta-1,4-dien-3,17-dion . und(5) 11a-Hydroxyandrosta-4-ene-3,17-dione * 11a-hydroxyandrosta-1,4-diene-3,17-dione. and

(6) Androsta-4-en-3f11,17-trion(6) androsta-4-en-3 f 11,17-trione

Androsta-1,4-dien-3,11,17-trion.Androsta-1,4-diene-3,11,17-trione.

Beispielexample

1. In ein®n Reaktionsgefäß werden (auf 1 Liter-Basis) fol-1. Into a reaction vessel (on a 1 liter basis)

1 gende Bestandteile kombiniert:1 basic ingredients combined:

a) 0,9 1 50 rnM KPO4~Puffer eines pH-Werts von 7,5a) 0.9 1 50 nm KPO 4 ~ pH 7.5 buffer

b) 3,66 g trockene A.simplex-Zellenb) 3.66 g dry A.simplex cells

c) 0,08 g Menadionc) 0.08 g of menadione

d) 8 g 21-Acetoxy-pregn-4,9(11),16-trien-3,20-dion e) 100 ml Toluol.d) 8 g of 21-acetoxy-pregn-4,9 (11), 16-triene-3,20-dione e) 100 ml of toluene.

2. Es wird mit 15 cal/1 min bewegt.2. It is moved at 15 cal / 1 min.

3. Zutritt von so viel Luft, daß der Sauerstoffgehalt im Gasraum des Reaktionsgefäßes etwa 3 - 6 % beträgt.3. Access of so much air that the oxygen content in the gas space of the reaction vessel is about 3 - 6%.

4. Die Temperatur wird auf 28° - 1°C gehalten. 15 5. Nach 25 h wird die Toluolphase abgetrennt.4. The temperature is kept at 28 ° - 1 ° C. 15 5. After 25 h, the toluene phase is separated off.

In diesem Beispiel besteht das Steroid in der Toluolphase ausIn this example, the steroid exists in the toluene phase

94,3 % 21-Acetoxy-pregn-1,4,9(11),16-tetraen-3,20-dion, 4,2 % 21-Hydroxy-pregn-1,4,9(11),16-tetraen-3,20-dion und 1,5 % 21-Acetoxy-pregn-4,9(11),16-trien-3,20-dion.94.3% 21-acetoxy-pregn-1,4,9 (11), 16-tetraene-3,20-dione, 4.2% 21-hydroxy-pregn-1,4,9 (11), 16- tetraene-3,20-dione and 1.5% 21-acetoxy-pregn-4,9 (11), 16-triene-3,20-dione.

Die verschiedenen beschriebenen Stufen können wie folgtThe various steps described can be as follows

variiert werden: 25be varied: 25

Stufe 1step 1

a) Puffer-pH-Bereich: 6-10.a) buffer pH range: 6-10.

b) Die Menge an A.simplex wird so weit verringert, daß 30b) The amount of A.simplex is reduced so much that 30

sie gerade ausreicht, die Reaktion vollständig ablaufen zu lassen. Typische A.simplex-Mengen sind 0,05 - 1,0 g/g Steroid. Der mikrobiologische Enzymlieferant ist: Arthrobacter (Corynebacterium) simplex (ATCC Nr. 6946)it is just enough to complete the reaction. Typical A.simplex levels are 0.05-1.0 g / g steroid. The microbiological enzyme supplier is: Arthrobacter (Corynebacterium) simplex (ATCC No. 6946)

oder Bacterium cyclooxydans (ATCC Nr. 12S73).or Bacterium cyclooxydans (ATCC No. 12S73).

Herstellung der Mikroorganismen: Die A.simplex-Zellen können in der Gärbrühe verwendet oder durch Sammeln der Zellen, Trocknen, Acetonbehandlung oder Immobilisieren in üblicher bekannter Weise modifiziert werden.Production of microorganisms: The A.simplex cells can be used in the fermentation broth or modified by collecting the cells, drying, acetone treatment or immobilizing in a conventional manner.

c) Als Elektronenakzeptor eignen sich Menadion-(2-methyl-1,4-naphthochinon), Menadionbisulfit, 1,4-Naphthochinon oder sonstige Vitamin K-artige Verbindungen.c) Suitable electron acceptors are menadione (2-methyl-1,4-naphthoquinone), menadione bisulfite, 1,4-naphthoquinone or other vitamin K-like compounds.

Der Gehalt des Elektronenakzeptors wird durch dessen Kosten und Erwägungen bezüglich der Reaktionsgeschwindigkeit bestimmt. Die Reaktionsgeschwindigkeit ist linear proportional zur Menadionkonzentration.The content of the electron acceptor is determined by its cost and consideration of the reaction rate. The reaction rate is linearly proportional to the menadione concentration.

Typische Mengen sind etwa 5 bis etwa 40 g/kg Steroid.Typical amounts are about 5 to about 40 g / kg steroid.

d) Die Steroidkonzentration sollte so hoch wie möglich sein, solange nur eine wirksame Umwandlung abläuft.d) The steroid concentration should be as high as possible as long as there is only one effective conversion.

4 Als Steroide eignen sich solche der 3-Keto-A -androsten-4 Steroids are those of the 3-keto-A -androsten-

4 oder 3-Keto-A -pregnen-Reihe. Vorzugsweise sollte das Steroid eine Löslichkeit in dem organischen Lösungsmittel von mehr als 5 g/l aufweisen.4 or 3-keto-A-pregnene series. Preferably, the steroid should have a solubility in the organic solvent of greater than 5 g / L.

e) Als aromatische Kohlenwasserstoffe eignen sich Toluol, Benzol und/oder Xylol. Diese Lösungsmittel können allein, in Mischung untereinander oder in Verdünnung mit anderen mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmitteln, wie Heptan oder Methylenchlorid, zum Einsatz gelangen.e) Suitable aromatic hydrocarbons are toluene, benzene and / or xylene. These solvents may be used alone, mixed with each other, or diluted with other water-immiscible solvents such as heptane or methylene chloride.

Die Menge an aromatischem Kohlenwasserstoff reicht von etwa der Hälfte der zum Auflösen des am besten löslichen Ausgangssteroids oder gebildeten Steroids erforderlichen Menge bis zur etwa vierfachen Menge der zum Auflösen des am wenigsten löslichen Ausgangssteroids oder gebildetenThe amount of aromatic hydrocarbon ranges from about one half of the amount required to dissolve the most soluble initial steroid or steroid formed to about four times that of dissolving the least soluble starting steroid or formed

1 Steroids erforderlichen Menge.1 steroid required amount.

Im vorliegenden Beispiel wird gerade so viel Toluol zugegeben, daß das Steroid bei Beendigung der Umsetzung eben gelöst wird.In the present example, just enough toluene is added that the steroid is just dissolved upon completion of the reaction.

Die Zugabe des aromatischen Kohlenwasserstoffs erfolgt . vorzugsweise zusammen mit dem Steroid. Der aromatische Kohlenwasserstoff kann jedoch auch später oder früher zugegeben werden.The addition of the aromatic hydrocarbon takes place. preferably together with the steroid. However, the aromatic hydrocarbon may be added later or earlier.

Stufe 2Level 2

Man kann auch mit hoher Bewegungsenergie bewegen. Die Reaktionsgeschwindigkeit steht in deutlicher BeziehungYou can also move with high kinetic energy. The reaction rate is clearly related

zur Bewegungsenergie.to the kinetic energy.

Stufe 3level 3

Die Umsetzung erfordert Sauerstoff als endgültigen Wasserstoff -(Elektronen"und. Protonen)-Akzeptor. InfolgeThe reaction requires oxygen as the final hydrogen (electron and proton) acceptor

Anwesenheit des aromatischen Kohlenwasserstoffs existiert jedoch im Gasraum des Reaktors eine explosive Umgebung. Um diese Gefahr der Sauerstoffkonzentration im Gasraum auszuschalten' oder weitestgehend zu mindern, sollte die Sauerstoffkonzentration unter der zur Verbrennung er-However, presence of the aromatic hydrocarbon exists in the gas space of the reactor an explosive environment. In order to eliminate or substantially reduce this risk of oxygen concentration in the gas space, the oxygen concentration should be lower than that used for combustion.

forderlichen Mindestkonzentration gehalten werden. Für Benzol beträgt die Mindestsauerstoffkonzentration 11,2 %. Bei Xylol ist es auch möglich, die Umsetzung unterhalb des Flammpunkts durchzuführen. Die Flammpunkte fürminimum concentration. For benzene, the minimum oxygen concentration is 11.2%. With xylene, it is also possible to carry out the reaction below the flash point. The flashpoints for

m-Xylol, o-Xylol und p-Xylol sind 29, 32 und 3 9°C. 30m-xylene, o-xylene and p-xylene are 29, 32 and 39 ° C. 30

Stufe 4Level 4

Die Temperatur der Umsetzung kann von 0 bis 45 C reichenThe temperature of the reaction can range from 0 to 45 ° C

35 35

1 Stufe 5 1 level 5

Die Umsetzung dauert typischerweise 2 Tage, sie kann jedoch auch einige h bis einige Wochen durchgeführt werden.The conversion typically takes 2 days, but it can be done for a few hours to a few weeks.

Beispiel 10Example 10

Vergleich von Versuchen in Toluol und wäßriger Phase.Comparison of tests in toluene and aqueous phase.

in A* Maßnahmen:in A * measures :

Zunächst werden 0,4 g A.simplex-Zellen mit 50 ml 50 mM KPO.-Puffer eines pH-Werts von 7,5 kombiniert, worauf das Ganze 2 h lang oder bis zum Erreichen einer gleichmäßigen Aufschlämmung bewegt wird. Es werden nun zwei 25 ml Fraktionen entnommen und in 125 ml fassende Flaschen überführt. In jede Flasche werden dann 0,25 ml 5 mM Menadion in -3A-AIkOhOl" und 0, 2 g Androsta—4,9(11)-dien-3,17-dion eingetragen. In eine der mit Stopfen versehenen Flaschen werden 2 ml Toluol gefüllt, worauf die Flaschen 4 Tage lang mittels eines Gelenkrüttlers bewegt werden. Nach 4 Tagen erfolgt eine Extraktion mit 25 ml Toluol. Eine Analyse der Extrakte ergibt folgende Ergebnisse.First, 0.4 g of A.simplex cells are combined with 50 ml of pH 50 pH 50 mM KPO. Buffer, and the whole is agitated for 2 hours or until a uniform slurry is obtained. Two 25 ml fractions are now taken and transferred to 125 ml bottles. 0.25 ml of 5 mM menadione are then added to each flask in -3A-AlKOhOl "and 0.2 g of androsta-4,9 (11) -diene-3,17-dione are placed in one of the stoppered bottles ml of toluene, then the bottles are agitated for 4 days by means of an articulated vibrator, followed by extraction with 25 ml of toluene after 4 days Analysis of the extracts gives the following results.

25 B. Ergebnisse:25 B. Results:

Verfahrenmethod

in wäßrigem in Toluol Mediumin aqueous in toluene medium

30 (Substrat)30 (substrate)

Androsta-4,9(11)-dien-3,17-dion 17,7 % 0,00 %Androsta-4,9 (11) -diene-3,17-dione 17.7% 0.00%

(Produkt) Androsta-4,9(11)-trien-3,17-dion 82,3 % 100,00 %(Product) Androsta-4,9 (11) -triene-3,17-dione 82.3% 100.00%

28 Beispiel 1128 Example 11

Entsprechend Beispiel 9 werden mit Hilfe getrockneter Zellen von A.simplex folgende Steroide:According to Example 9, the following steroids are obtained using dried cells from A.simplex:

1. Androsta-4-en-3,17-dion1. Androsta-4-ene-3,17-dione

2. 6a-Fluor-androsta-4,9(11)-dien-3,17-dion2. 6a-fluoro-androsta-4,9 (11) -diene-3,17-dione

3. 6a-Methyl-androsta-4,9(11)-dien-3,17-dion3. 6a-methyl-androsta-4,9 (11) -diene-3,17-dione

4. 16ß-Methyl-androsta-4,9(11)-dien-3,17-dion4. 16β-methyl-androsta-4,9 (11) -diene-3,17-dione

5. 17a-Hydroxy-pregn-4-en-2G-yn-3-on5. 17a-Hydroxy-pregn-4-en-2G-yn-3-one

6. 17a-Hydroxy-pregn-4,9(11)-dien-20-yn-3-on6. 17a-Hydroxy-pregn-4,9 (11) -dien-20-yn-3-one

7. 17a-Hydroxy-16ß-methyl-pregn-4,9(11)-dien-20-yn-3-on7. 17a-hydroxy-16β-methyl-pregn-4,9 (11) -dien-20-yn-3-one

8. 21-Aee%axy-iiß-hydroxy-pregn-4,17(20)-dien-3-on8. 21-Aee% axy-iiss-hydroxy-pregn-4,17 (20) -dien-3-one

9. 20-Chlor-pregn-4 , 9(11) ,17(20) -tri'en-21 -al-3-on9. 20-Chloro-pregn-4, 9 (11), 17 (20) -tri-ene-21-al-3-one

10. 21-Acetoxy-17-hydroxy-pregn-4,9(11)-dien-3,20-dion10. 21-Acetoxy-17-hydroxy-pregn-4,9 (11) -diene-3,20-dione

11. 21-Acetoxy-17-hydroxy-16a-methyl-pregn-4,9(11)-dien-15 3,20-dion11. 21-Acetoxy-17-hydroxy-16a-methyl-pregn-4,9 (11) -diene- 15 3,20-dione

12. 21-Benzoyloxy-17-hydroxy-16ß-methyl-pregn-4,9(11)-dien-3,20-dion12. 21-Benzoyloxy-17-hydroxy-16β-methyl-pregn-4,9 (11) -diene-3,20-dione

13. 21-Acetoxy-17-hydroxy-16ß-methyl-pregn-4,9(11) dien-3,20-dion13. 21-Acetoxy-17-hydroxy-16β-methyl-pregn-4,9 (11) -diene-3,20-dione

14. 21-Acetoxy-pregn-4,9(11),16-trien-3,20-dion14. 21-Acetoxy-pregn-4,9 (11), 16-triene-3,20-dione

15. 21-Acetoxy-öa-fluor-pregn-4,9(11),16(17)-trien-3,20-dion15. 21-Acetoxy-6α-fluoro-pregn-4,9 (11), 16 (17) -triene-3,20-dione

in folgende Produkte:in the following products:

1a Androsta-1,4-dien-3,17-dion1a androsta-1,4-diene-3,17-dione

2a 6a-Fluor-androsta-1,4,9(11)-trien-3,17-dion 3a 6a-Methyl-androsta-1,4,9(11)-trien-3,17-dion 4a 16ß-Methyl-androsta-1,4,9(11)-trien-3,17-dion2a 6a-Fluoro-androsta-1,4,9 (11) -triene-3,17-dione 3a 6a-methyl-androsta-1,4,9 (11) -triene-3,17-dione 4a 16β-methyl androsta-1,4,9 (11) -triene-3,17-dione

5a 17a-Hydroxypregn-1,4-dien-20-yn-3-on5a 17a-hydroxypregn-1,4-dien-20-yn-3-one

6a 17a-Hydroxy-pregn-1,4,9(11)-trien-20-yn-3-on6a 17a-Hydroxy-pregn-1,4,9 (11) -trien-20-yn-3-one

7a 17a-Hydroxy-16ß-methyl-pregn-1,4,9(11)-trien-20-yn-3-on7a 17a-hydroxy-16β-methyl-pregn-1,4,9 (11) -trien-20-yn-3-one

8a 21-Acetoxy-11ß-hydroxy-pregn-1,4,17(20)-trien-3-on 35 und8a 21-acetoxy-11β-hydroxy-pregn-1,4,17 (20) -trien-3-one 35 and

11ß,21-Dihydroxy-pregn-1,4,17(20)-trien-3-on11ß, 21-dihydroxy-pregn-1,4,17 (20) -trien-3-one

29 9a 20-Chlor-pregn-1,4,9(11),17(20)-tetraen-21-al-3-on29 9a 20-chloro-pregn-1,4,9 (11), 17 (20) -tetraene-21-al-3-one

10a 21-Acetoxy-17-hydroxy-pregn-1,4,9(11)-trien-3,20-dion und10a 21-acetoxy-17-hydroxy-pregn-1,4,9 (11) -triene-3,20-dione and

17,21-Dihydroxy-pregn-1,4,9(11)-trien-3,20-dion 517,21-dihydroxy-pregn-1,4,9 (11) -triene-3,20-dione 5

11a 21-Acetoxy-17-hydroxy-16a-methyl-pregn-1,4,9(11)-11a 21-acetoxy-17-hydroxy-16a-methyl-pregn-1,4, 9 (11) -

trien-3,20-dion undtrien-3,20-dion and

17,21-Dihydroxy-1βα-methy1-pregn-1,4,9(11)-trien-17,21-dihydroxy-1βα-methy1-pregn-1,4,9 (11) -triene

3,20-dion3,20-dione

12a 21-Benzoyloxy-17-hydroxy-16ß-methyl-pregn-1,4,9(11)-trien-3,20-dion12a 21-Benzoyloxy-17-hydroxy-16β-methyl-pregn-1,4,9 (11) -triene-3,20-dione

13a 21-Aoetoxy-17-hydroxy-16ß-methy1-pregn-1,4,9(11)-trien-3,20-dion und13a 21-acetoxy-17-hydroxy-16β-methyl-pregn-1,4,9 (11) -triene-3,20-dione and

17,21-Dihydroxy-16ß-methy1-pregn-1,4,9(11)-trien-3,20-dion17,21-dihydroxy-16ss-methy1-pregn-1,4,9 (11) -triene-3,20-dione

14a 21-Acetoxy-pregn-1,4,9(11)-tetraen-3,20-dion und 21-Hydroxy-pregn-1,4,9(11),16-tetraen-3,20-dion14a 21-Acetoxy-pregn-1,4,9 (11) -tetraene-3,20-dione and 21-hydroxy-pregn-1,4,9 (11), 16-tetraene-3,20-dione

15a 21-Acetoxy-6a-fluor-pregn-1,4,9(11),16-tetraen-3,20-dion und15a 21-acetoxy-6a-fluoro-pregn-1,4,9 (11), 16-tetraene-3,20-dione and

6a~Fluor-21-hydroxy-pregn-1,4,9(11),16-tetraen-3,20-dion6a ~ fluoro-21-hydroxy-pregn-1,4,9 (11), 16-tetraene-3,20-dione

überführt.transferred.

2^ Die Verwendbarkeit von 1 ,2-Dehydrosteroidenist. bekannt. So ist es beispielsweise aus der US-PS 3 284 447 bekannt, 2 ^ The utility of 1,2-dehydrosteroids. known. For example, it is known from US Pat. No. 3,284,447,

1 4 9(11)1 4 9 (11)

Δ ' ' ' -Pregnetriene bei der Synthese diuretisch wirksamer, am C.g substituierter Corticosteroide einzusetzen. Aus der US-PS 4 041 055 ist ein Verfahren zur Synthese von Corticosteroiden aus Δ ' -Androstendionderivaten bekannt, d.h. 1,2-Dehydroandrostene stellen wichtige Zwischenprodukte bei der Herstellung medizinisch wertvoller Steroide dar. Δ ''' pregnetrienes in the synthesis of diuretic, coc substituted corticosteroids. From US-PS 4,041,055 a process for the synthesis of corticosteroids from Δ '-Androstendionderivaten is known that 1,2-Dehydroandrostene are important intermediates in the production of medically valuable steroids.

3535

Claims (6)

1. Verfahren zur Umwandlung von 1,2-gesättigten Steroiden in 1,2-Dehydrosteroide, gekennzeichnet dadurch, daß man auf die 1,2-gesättigten Steroide in Gegenwart eines exogenen Elektronenträgers und eines mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittels in Form eines aromatischen' Kohlenwasserstoffs gegebenenfalls unter Zugabe einer unterhalb der zur Verbrennung erforderlichen Mindestsauerstoffkonzentration liegenden Sauerstoffmenge Artrobacter simples und/oder Bacterium cyclooxydans einwirken läßt, :A process for the conversion of 1,2-saturated steroids to 1,2-dehydro-steroids characterized by comprising the 1,2-saturated steroids in the presence of an exogenous electron carrier and a water-immiscible solvent in the form of an aromatic hydrocarbon optionally with the addition of a below the minimum oxygen concentration required for combustion Artrobacter simples and / or Bacterium cyclooxydans, 2. Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß man als Slektronenträger Menadion, 1,4-Naphthochinon, Menadionbisulfit und eine sonstige Verbindung vom Vitamin K-Typ und als aromatischen Kohlenwasserstoff Benzol, Toluol und/oder Xylol verwendet.2. The method according to item 1, characterized in that menadione, 1,4-naphthoquinone, menadione bisulfite and another compound of the vitamin K type and as the aromatic hydrocarbon benzene, toluene and / or xylene used as slektronenträger. 3. Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß man die Umsetzung bei einer Temperatur unterhalb des Flammpunkts des organischen Lösungsmittels durchführt,3. The method according to item 1, characterized in that one carries out the reaction at a temperature below the flash point of the organic solvent, 4. Verfahren nach Punkt 1, -gekennzeichnet dadurch, daß man so viel mit Wasser nicht mischbares Lösungsmittel in Form eines aromatischen Kohlenwasserstoffs verwendet, daß dessen Menge etwa die Hälfte der zum Auflösen des am besten löslichen Steroidsubstrats etwa vierfachen Menge der zum Auflösen des am wenigsten löslichen Steroidsubstrats oder gebildeten Steroids erforderlichen Menge beträgt.4. Method according to item 1, characterized in that one uses as much water-immiscible solvent in the form of an aromatic hydrocarbon that its amount about half of the dissolution of the least soluble to dissolve the best soluble steroid substrate about four times the amount soluble steroid substrate or formed steroid. 5. Verfahren nach Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß man das mit Wasser nicht mischbare Lösungsmittel mit einem weiteren, mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel verdünnt.5. The method according to item 1, characterized by diluting the water-immiscible solvent with another, immiscible with water solvent. 6. Verfahren nach. Punkt 1, gekennzeichnet dadurch, daß man luftgetrocknete oder wärmegetrocknete Zellen von Ärthrobacter simplex und/oder Bacterium cyclo-6. Method according to. Item 1, characterized in that air-dried or heat-dried cells of Ärthrobacter simplex and / or Bacterium cyclic verwendet.used.
DD25312383A 1982-07-30 1983-07-15 PROCESS FOR CONVERTING 1,2-STAINED STEROIDS IN 1,2-DEHYDROSTEROIDS DD213242A5 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US40394982A 1982-07-30 1982-07-30
US06/436,552 US4524134A (en) 1982-07-30 1982-10-25 Process for preparing 1,2-dehydro steroids
US47543783A 1983-03-15 1983-03-15

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DD213242A5 true DD213242A5 (en) 1984-09-05

Family

ID=27410563

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DD25312383A DD213242A5 (en) 1982-07-30 1983-07-15 PROCESS FOR CONVERTING 1,2-STAINED STEROIDS IN 1,2-DEHYDROSTEROIDS

Country Status (8)

Country Link
JP (2) JPH0614874B2 (en)
CH (1) CH657871A5 (en)
DD (1) DD213242A5 (en)
DE (1) DE3322120A1 (en)
FR (1) FR2531101B1 (en)
GB (2) GB2123833B (en)
IE (1) IE55533B1 (en)
NL (1) NL8302596A (en)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2568908B1 (en) * 1984-08-10 1986-12-26 Doris Dev Richesse Sous Marine OSCILLATING PLATFORM ON FLEXIBLE PILES FOR WORK AT SEA
USRE35053E (en) * 1985-09-12 1995-10-10 The Upjohn Company Amines useful in producing pharmaceutically active CNS compounds
US5380840A (en) * 1985-09-12 1995-01-10 The Upjohn Company Triazinylpiperazinyl steroids
US5099019A (en) * 1985-09-12 1992-03-24 Upjohn Company Amines useful in producing pharmaceutically active CNS compounds
DE3883973T2 (en) * 1987-03-12 1994-02-17 Upjohn Co 1-2 DEHYDRATION OF STEROID-21 ESTERS WITH A. SIMPLEX.
EP1970437A4 (en) * 2005-12-28 2010-04-14 Ajinomoto Kk Method for production of dried microorganism cell
HU227367B1 (en) * 2007-09-11 2011-04-28 Richter Gedeon Nyrt Method for producing 6-hydroxymethyl-1,4-androstadiene-3,17-dion
DK2805720T3 (en) 2008-05-28 2019-09-02 Reveragen Biopharma Inc Non-hormonal steroid modulators of NF-κB for the treatment of disease
JPWO2010079594A1 (en) 2009-01-07 2012-06-21 三菱化学株式会社 Sterol side chain cleaving enzyme protein and use thereof
EP2556083A4 (en) 2010-04-05 2013-12-04 Validus Biopharma Inc Non-hormonal steroid modulators of nf- kappa b for treatment of disease
US10799514B2 (en) 2015-06-29 2020-10-13 Reveragen Biopharma, Inc. Non-hormonal steroid modulators of NF-kappa beta for treatment of disease
US11382922B2 (en) 2019-03-07 2022-07-12 Reveragen Biopharma, Inc. Aqueous oral pharmaceutical suspension compositions

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB883500A (en) * 1958-09-15 1961-11-29 Wisconsin Alumni Res Found Improvements in a microbiological process for the preparation of steroids and ketones
FR1262182A (en) * 1960-07-01 1961-05-26 Olin Mathieson Process for selective dehydrogenation of the nucleus to steroids
US3087864A (en) * 1961-04-28 1963-04-30 American Cyanamid Co Process for the 1, 2-hydrogenation of steroids by the use of dried thalli
CH414063A (en) * 1962-11-23 1966-05-31 Eprova Ag X-ray contrast media
US3360439A (en) * 1964-08-19 1967-12-26 Squibb & Sons Inc Process for preparing 1-dehydro steroids
US3549498A (en) * 1968-04-02 1970-12-22 Squibb & Sons Inc 11alpha-substituted steroids and process
FR2285137A1 (en) * 1974-09-18 1976-04-16 Roussel Uclaf NEW 17-SPIROSULTIN STEROID DERIVATIVES, THE CORRESPONDING G-HYDROXYACIDS, THEIR PREPARATION PROCESS AND THEIR APPLICATION AS A MEDICINAL PRODUCT
US4035236A (en) * 1975-10-24 1977-07-12 The Upjohn Company Process for preparing 9α-hydroxyandrostenedione
US4041055A (en) * 1975-11-17 1977-08-09 The Upjohn Company Process for the preparation of 17α-hydroxyprogesterones and corticoids from androstenes

Also Published As

Publication number Publication date
GB8317422D0 (en) 1983-07-27
FR2531101B1 (en) 1985-11-15
JPH06225792A (en) 1994-08-16
JPS5939299A (en) 1984-03-03
JPH0614874B2 (en) 1994-03-02
IE831767L (en) 1984-01-30
DE3322120C2 (en) 1992-10-08
NL8302596A (en) 1984-02-16
GB2123833A (en) 1984-02-08
JPH0824596B2 (en) 1996-03-13
GB8402640D0 (en) 1984-03-07
FR2531101A1 (en) 1984-02-03
IE55533B1 (en) 1990-10-24
GB2131811A (en) 1984-06-27
CH657871A5 (en) 1986-09-30
GB2123833B (en) 1986-06-11
GB2131811B (en) 1986-06-11
DE3322120A1 (en) 1984-02-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2004838B1 (en) Process for the preparation of steroid derivatives by reduction of oxosteroid compounds or by oxidation of hydroxysteroid compounds using a hydroxysteroid dehydrogenase
DE3322120C2 (en)
US4524134A (en) Process for preparing 1,2-dehydro steroids
US4749649A (en) Microbial Δ1-dehydrogenation process using a scavenger of toxic oxygen
DE3235884C2 (en)
EP0014991B1 (en) Microbiological method for the preparation of 7-alpha-hydroxylated steroids
US2863806A (en) 17alpha hydroxylation of steroids by trichoderma viride
US4704358A (en) Δ1 -dehydrogenation with heat or air-dried B. cyclooxidans
DE60306768T2 (en) PROCESS FOR DEHYDROGENATION OF AZAANDROSTAN COMPOUNDS
US4684610A (en) Process for converting 1,2-saturated steroids to 1,2-dehydro steroids
DE1593327C (en) Process for the production of Delta high 1,4 -androstadien-3,17-dione, Delta high 1,4 -androstadien-3,11,17-trione or Delta high 1,4 -androstadien-1 lalpha-ol-3, 17-dione
DE956952C (en) Process for the manufacture of oxidized steroids
EP0014971B1 (en) Process for the preparation of 1-alpha-hydroxy dehydroepiandrosterone
DE1909152A1 (en) Process for the production of 11 alpha-hydroxy-3-oxo-delta? -Steroids of the pregnane and androstane series by means of mixed fermentation
DE936207C (en) Process for the manufacture of oxidized steroids
DE2431377A1 (en) 17 MONOESTERS OF 17 DELTA, 21 DIHYDROXY STEROIDS AND METHOD FOR PRODUCING THEM
DE1181703B (en) Process for the microbiological conversion of steroids and fatty acids
DE1021845B (en) Process for dehydration and / or for the oxidative degradation of the 17-member side chain of steroids
DE1768978A1 (en) Process for removing side chains from sapogenins
HU196847B (en) New process for producing 1,2-dehydrosteroids
DE1231697B (en) Process for the preparation of 11alpha-Oxy-delta 4-3-ketosteroids
DEC0009818MA (en)
DD152581A1 (en) PROCESS FOR PREPARING 20-CARBOXYPREGNA-1,4-DIEN-3-ON
DE1128854B (en) Process for the preparation of 11-hydroxylated steroids of the pregnane series
HU196464B (en) New process for producing 1,2-dehydrosteroids

Legal Events

Date Code Title Description
ENJ Ceased due to non-payment of renewal fee