DD151108A1 - Verfahren zur praeparation von thronbozytenkonzentraten mittels diamid - Google Patents

Abstract

Vorliegende Erfindung beschreibt eine Methode, um innerhalb von 40 min ausgehend von humanem Citratblut durch Verwendung von Diamid (Azocarboxylic acid-bis-dimethylamide) als Zusatz Thrombozytensuspensionen und -konzentrate in salinem und plasmatischem Milieu zu praeparieren.

Description

Titel der Erfindung:

Verfahren zur Präparation von Thrombozytensuspensionen und -konzentraten mittels Diamid (Azodicarboxylic acid-bisd ime thyIami de)

Anwendungsgebiet der Erfindung;

Thrombozytenkonzentrate werden in der klinischen Medizin zur Therapie von Blutgerinnungsstörungen bzw. Thrombozytopenien eingesetzt. Die Erfindung ist vorteilhaft in entsprechenden medizinischen Bereichen, insbesondere im Blutspendewesen anwendbar·

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen Die Präparation von Thrombozytenkonzentraten erfolgt ausgehend von frisch gewonnenem Spenderblut durch Differentialzentrifugation. Die Resuspension kann am günstigsten im Plasma, keinesfalls jedoch in Puffer durchgeführt werden. Zur Verminderung der insbesondere nach der Thrombozytensedimentation auftretenden verstärkten Aggregationsneigung arbeitet man bei einem gegenüber dem Nativblut gesenktem pH-Yiert von 6,5· Erreicht wird eine etwa achtfache Konzentrierung der Thrombozyten gegenüber dem Vollblut bei einer Präparationsdauer von zwei Stunden. Literatur: Stein,P. M. Karl, Polia Haematologica 2£, 577-81 (1970), Probleme der Präparation und der Konservierung von Thrombozyten. Durch Verwendung von Diamid als Resuspensionsvermittler ist es möglich die Präparationsdauer zu verringern, eine höhere Konzentrierung der Thrombozyten bei vollständiger Abtrennung der Erythrozyten zu erzielen und die Resuspension ohne Variation des pH-V/ertes sowohl im Plasma als auch in salinen Medien durchzuführen.

Ziel der Erfindung

Das vorliegende Verfahren erlaubt die Präparation und Konzentration von Blutplättchen innerhalb kürzester Zeit. Darlegung des .7esens der Erfindung;

Vorliegende Erfindung beschreibt eine Methode, um ausgehend von humanem Vollblut unter Verwendung von Diamid (Azodicarboxylic acid-bis-diamethylamide) innerhalb von 40 Minuten Thrombozytensuspensionen im saunen bzw. plasmatischen Milieu

bis zu einer Konzentration von etwa 3·10 Thrombozyten je ml zu präparieren, was einer ungefähr 15fachen Anreicherung gegenüber dem Vollblut entspricht. Dabei beträg-t die Ausbeute an Thrombozyten 75% bezogen auf das zunächst präparierte plättehenreiche Plasma (PRP).

Citratblut wird 15 Minuten bei 1400 U/min zentrifugiert und der plättehenreiche Überstand (PRP) vorsichtig gewonnen. Man fügt zum PRP ein Zehntel des Volumens 5 ml.l Diamid in isotonem TRAP-Puffer pH 7.4 (14,5 mM Triäthanolamin-HCl, 126 mM NaCl, 0.9SmM MgCl₂, 5,4 ml.l KCl, 0,1% Glucose) hin» zu, mischt und läßt 5 Minuten inkubieren· Danach werden die Thrombozyten durch lOminütige Zentrifugation bei 3000 U/min sedimentiert, wobei die Diamidzugabe die Bildung eines lockeren Thrombozytensediments bewirkt und damit eine schnelle und nahezu vollständige Resuspension ermöglicht. Der Plasmaüberstand wird vorsichtig abpipettiert und durch das gleiche Volumen isotonen TRAP-Puffer pH 7,4 (Zusammensetzung s.o.) ersetzt. Die Thrombozyten werden durch leichtее Schwenken des Zentrifugenglases resuspendiert und neuerlich durch 5minütige Zentrifugation bei 3000 U/min sedimentiert, wonach die gesamte Waschprozedur nochmals wiederholt wird. Schließlich wird das zweimal gewaschene Thrombozytensediment in der gewünschten Menge Puffer bzw. diamidfreiem Plasma resuspendiert· Ergebnisse der Erprobung

Zur Prüfung der Funktionsfähigkeit der nach vorliegender Methode gewonnenen Thrombozyten wurden folgende Ergebnisse durch in vitro Punktionsteste erhalten:

- Vorinkubation des PRP mit Diamid führt nicht zur Plättchenlyse.

- Die durch Thrombin, Arachidonsäure, Collagen, ADP oder Ionophor A 23 187 ausgelöste Aggregation ist intakt.

- Während 2stündiger Lagerung bei 37⁰C bleibt die Aggregationsfähigkeit der Plättchen erhalten (0,1 U Thrombin, 50/UM Arachidonsäure + 5% Plasma).

- Die Malondialdehydbildung nach Thrombin-induzierter Aggregation ist normal.

Claims (1)

1. Anspruch

   Verfahren zur Präparation von Thrombozytensuspensionen und -konzentraten im salinen bzw. plasmatischen Milieu gekennzeichnet dadurch, daß Diamid (Azodicarboxylic acid-bisdimethylamide) als Resuspensionsvermittler zugesetzt wird.