DD148955A1 - Verfahren zur kopplung von nukleinsaeuren an traegermaterialien - Google Patents
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Abstract
Die Erfindung betrifft ein chemisches Kopplungsverfahren von Nukleinsaeuren an Traegermaterialien, das fuer affinitaetschromatografische Untersuchungen verwendet wird. Ziel ist die stabile Kopplung von Nukleinsaeuren an einen Traeger. Es wurde ueberraschend gefunden, dasz nur im sauer gepufferten pH-Bereich (5 bis 6,5) eine unter Hybridisationsbedingungen stabile Kopplung der Nukleinsaeuren an Cyanursaeurechlorid aktivierte Traegermaterialien moeglich ist. Das Kopplungsverfahren kann auch zum Transfer von in Trenngelen getrennten Nukleinsaeuren auf aktiviertem Papier benutzt werden.
Description
Erfinder: Dr. H.-D· Hunger
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Kopplung von Nukleinsäuren an Trägermaterialien, das in der Biochemie für . affinitätschromatografische Untersuchungen Anwendung findet·
Charakteristik der bekannten technischen Lösungen Die Kopplung von Nukleinsäuren nach bekannten chemischen Verfahren (Ho Potuzak and P. D. G. Dean (1978) Pebs-Lett. 88, 161 - 166; H. H. Weetall (Separation and Purification Methods, 2 (2), 199 - 229 (1973))) führt unter Hybridisa-, tionsbedingungen zu relativ instabilen Kopplungsprodukten. Sie sind deshalb für den Einsatz zur Affinitätschromatografie von Minorkomponenten eines Nukleinsauregemisch.es bzw. für Transferversuche von Nukleinsäuren aus Trenngelen mittels aktivierten Papieren schlecht geeignet. Ein weiteres bekanntes Verfahren mit Cyanurchlorid (S. Biagioni, R. Sisto, A. Perraro, P. Caiafa, C. Turano Analytical Biochemistry 8£, 616 - 619 (1978); N. L. Smith and H. M0 Lenhoff Analytical Biochemistry 61.» 392 - 415·(1974)) koppelt nur Doppelstrang DNS an kristalline Zellulose. Die Kopplungsbedingungen erlauben keine Stabilität der Kopplung unter Hybridisationsbedingungen.
Bekannte Kopplungsverfahren über Diazobenzyloxymethylgruppen (J. C. Alwine, D.-Kemp, B. A. Parker, J. Keiser, J. Renart, G. R. Stark, G. M. Wahl Methods in Enzymology, noch im Druck) stellen eine chemisch relativ aufwendige Prozedur dar.
- 2- 2 18847
Ziel der Erfindung ist es, ein chemisch einfaches Verfahren zur Kopplung von Nukleinsäuren an Trägermaterialien zu entwickeln,
Darlegung des Y/esens der Erfindung
Aufgabe der Erfindung ist es, ein solches Verfahren zu schaffen, daß die Bindung der Nukleinsäuren an das Trägermaterial unter Hybridisations- und Elutionsbedingungen stabil ist. Erfindungsgemäß wird das zur Kopplung von Nukleinsäuren verwendete Trägermaterial, vorzugsweise Zellulose oder Papier, das mit Cyanursäurechlorid aktiviert wurde, im schwach sauren gepufferten pH-Bereich, vorzugsweise 5 - 6» 5» mit den Nukleinsäuren in Kontakt gebracht· (Die Aktivierung des Trägermaterials erfolgt in einem Gemisch von Dioxan/Syloi;) Überraschend wurde gefunden, daß eine unter Hybridisationsbedingungen stabile Kopplung nur im schwach sauren gepufferten pH-Bereich, .bevorzugt bei pH = 6,1 und im y,- M Sörensen-Puffer erfolgt.
Eine Kopplung an aktiviertes Papier benutzt man zum Transfer von Nukleinsäuren bzw« ihrer Bruchstücke aus Trenngelen. Die Übertragung der Nukleinsäuren aus Trenngelen auf das Papier erfolgt nach der von Southern (6) beschriebenen Technik. Die·Erfindung hat den Vorteil, daß sie universell anwendbar ist. Es können DNS- und RNS-Bruchstücke der verschiedensten Größen (Einzelstrang und Doppelstrang) gekoppelt werden. Die Kopplung ist unter Hybridisations- und Elutionsbedingungen stabil.
Die Erfindung soll anschließend an einem Beispiel näher erläutert werden.
Aasführungsbeispiel .
0,5 cm Whatman 540-Papier werden 15 Minuten in 3 M NaOH geschüttelt» Das Papier wird in eine 5 % Cyanursäurechloridlösung in Dioxan/Xylol (1 :.1) gebracht und 30 Minuten bei Zimmertemperatur geschüttelt.
- 3 - 2 1 €
Das Filterblättchen wird je 10 Minuten gewaschen (2 χ Dioxan, 1 χ Dioxan Eisessig/Wasser (2/1/1), 1 χ Wasser)
Die Kopplung der Nukleinsäuren erfolgt "bei Zimmertemperatur in einem 1/15 m Sörensen-Puffer pH 6,1, DNS-Konzentration 100 /Ug/ml·
Es werden bis zu 20 /Ug DITS/cm Papier kovalent gebunden. Inaktivierung vorhandener Restgruppen erfolgt mittels 1 % Äthanolamin im Kopplungspuffer«
Claims (3)
1. Verfahren zur Kopplung von Nukleinsäuren an mit Cyanursäurechlorid aktivierte Trägermaterialien, dadurch gekennzeichnet, daß die Trägermaterialien, vorzugsweise Zellulose oder Papier, im schwach sauren, gepufferten pH-Bereich, vorzugsweise 5 - 6,5, mit Nukleinsäuren in Kontakt ge-
. bracht werden.
2. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Kopplung bei pH 6,1 in τ,- Μ Sörensen-Puffer durchgeführt
. wird,, ·
3· Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Kopplung mittels Southern-Technik erfolgt»
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD21884780A DD148955A1 (de) | 1980-02-04 | 1980-02-04 | Verfahren zur kopplung von nukleinsaeuren an traegermaterialien |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DD21884780A DD148955A1 (de) | 1980-02-04 | 1980-02-04 | Verfahren zur kopplung von nukleinsaeuren an traegermaterialien |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DD148955A1 true DD148955A1 (de) | 1981-06-17 |
Family
ID=5522531
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DD21884780A DD148955A1 (de) | 1980-02-04 | 1980-02-04 | Verfahren zur kopplung von nukleinsaeuren an traegermaterialien |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DD (1) | DD148955A1 (de) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0130523A2 (de) * | 1983-07-05 | 1985-01-09 | Molecular Diagnostics, Inc. | Immobilisierte Nukleinsäure-Sonde und fester Träger fur Nukleinsäuren |
| EP0136153A2 (de) * | 1983-09-19 | 1985-04-03 | Orgenics Ltd. | Modifiziertes Materialblatt, Methode zur Herstellung und seine Anwendung in biochemischen Verfahren |
-
1980
- 1980-02-04 DD DD21884780A patent/DD148955A1/de not_active IP Right Cessation
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0130523A2 (de) * | 1983-07-05 | 1985-01-09 | Molecular Diagnostics, Inc. | Immobilisierte Nukleinsäure-Sonde und fester Träger fur Nukleinsäuren |
| EP0136153A2 (de) * | 1983-09-19 | 1985-04-03 | Orgenics Ltd. | Modifiziertes Materialblatt, Methode zur Herstellung und seine Anwendung in biochemischen Verfahren |
| EP0136153A3 (de) * | 1983-09-19 | 1986-01-22 | Orgenics Ltd. | Modifiziertes Materialblatt, Methode zur Herstellung und seine Anwendung in biochemischen Verfahren |
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