CZ59999A3 - Způsob k získání estrogenů z moči klisen - Google Patents
Způsob k získání estrogenů z moči klisen Download PDFInfo
- Publication number
- CZ59999A3 CZ59999A3 CZ99599A CZ59999A CZ59999A3 CZ 59999 A3 CZ59999 A3 CZ 59999A3 CZ 99599 A CZ99599 A CZ 99599A CZ 59999 A CZ59999 A CZ 59999A CZ 59999 A3 CZ59999 A3 CZ 59999A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- urine
- silica gel
- mixture
- water
- liquid
- Prior art date
Links
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 title claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 title abstract description 27
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 title description 25
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 51
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 51
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 47
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 229940035811 conjugated estrogen Drugs 0.000 claims description 47
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 31
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 19
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 17
- QTTMOCOWZLSYSV-QWAPEVOJSA-M equilin sodium sulfate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4C3=CCC2=C1 QTTMOCOWZLSYSV-QWAPEVOJSA-M 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 11
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 claims description 11
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- -1 aliphatic ketones Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000012465 retentate Substances 0.000 claims description 8
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 6
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 5
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 4
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 claims description 3
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 125000000686 lactone group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 abstract description 6
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 abstract description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 14
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HVDGDHBAMCBBLR-UHFFFAOYSA-N enterolactone Chemical compound OC1=CC=CC(CC2C(C(=O)OC2)CC=2C=C(O)C=CC=2)=C1 HVDGDHBAMCBBLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002585 base Substances 0.000 description 8
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JKKFKPJIXZFSSB-CBZIJGRNSA-N estrone 3-sulfate Chemical class OS(=O)(=O)OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JKKFKPJIXZFSSB-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 4
- XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N Dimethoxyethane Chemical compound COCCOC XTHFKEDIFFGKHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 150000001896 cresols Chemical class 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- SBZXBUIDTXKZTM-UHFFFAOYSA-N diglyme Chemical compound COCCOCCOC SBZXBUIDTXKZTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- JKKFKPJIXZFSSB-UHFFFAOYSA-N 1,3,5(10)-estratrien-17-one 3-sulfate Natural products OS(=O)(=O)OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 JKKFKPJIXZFSSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BNHGVULTSGNVIX-UHFFFAOYSA-N 1-(2-ethoxyethoxy)ethanol Chemical compound CCOCCOC(C)O BNHGVULTSGNVIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004208 3-hydroxyphenyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C([H])C(*)=C1[H] 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010003439 Artificial menopause Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910000272 alkali metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910001860 alkaline earth metal hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005233 alkylalcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124339 anthelmintic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000921 anthelmintic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000004653 carbonic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 150000004292 cyclic ethers Chemical class 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone Chemical compound OCC(=O)CO RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002070 germicidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002657 hormone replacement therapy Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical group 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 1
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical group CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 150000004756 silanes Chemical class 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J75/00—Processes for the preparation of steroids in general
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/22—Urine; Urinary tract, e.g. kidney or bladder; Intraglomerular mesangial cells; Renal mesenchymal cells; Adrenal gland
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/12—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for climacteric disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
- A61P5/30—Oestrogens
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Extraction Or Liquid Replacement (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Silicon Compounds (AREA)
- Organic Insulating Materials (AREA)
Description
(57) Anotace:
Je popsán způsob k získání extraktu obsahujícího přirozenou směs konjugovaných estrogenů z moči klisen, a to extrakcí pevné fáze směsi konjugovaných estrogenů z moči březích klisen na RP-silikagelu.
CZ 599-99 A3 i
Způsob k získání estrogenů z moči klisen
·· ·· * 1 r~qq - qq
Je popsán způsob k získání extraktu obsahujícího přirozenou směs konjugovaných estrogenů z moči klisen extrakcí pevné fáze směsi konjugovaných estrogenů z moči březích klisen na RP-silikagelu.
Oblast techniky
Předložený vynález se týká získání přirozené směsi konjugovaných estrogenů z moči březích klisen.
Dosavadní stav techniky
Estrogeny jsou v lékařství používány k hormonální substituční terapii (léčbě). Zejména jsou směsi estrogenů používány k léčbě a prevenci potíží vyskytujících se u žen v době přechodu (klimaktériu) po přirozené nebo umělé menopauze. Přitom se přirozené směsi konjugovaných estrogenů, jež se vyskytují v moči březích klisen, ukázaly jako zvlášť účinné a dobře snášenlivé.
Rozpuštěný obsah pevných látek v moči březích klisen (= pregnant mares urine, v následujícím zkráceno jako PMU) může kolísat přirozeně v širokých rozsazích a obecně leží v rozsahu 40-90 g sušiny na litr. Vedle močoviny a jiných obvyklých moč obsahujících látek jsou v obsahu pevných látek PMU obsaženy fenolické složky v množstvích cca 2-5 hm.% vztaženo na sušinu. Mezi těmito fenolickými složkami se nacházejí kresoly a jako HPMF známý dihydro-3,4-bis[3-hydroxyfenyl)metyl]-2(3H)furanon. Tyto látky se mohou vyskytovat ve volné nebo konjugované formě. V PMU je obsažena přirozená směs estrogenů, která dalekosáhle existuje v konjugované formě, např. jako sodná sůl poloesteru kyseliny sírové (v následujícím zkráceno jako sulfátová sůl. Obsah konjugovaných estrogenů (vypočtený jako sulfátová sůl estrogenů) může činit mezi 0,3 a 1 hm.% vztaženo na sušinu.
Obvykle jsou extrakty z PMU obsahující konjugované estrogeny získávány extrakcí pomocí polárních, s vodou nemísitelných nebo jen málo mísitelných organických rozpouštědel, jako jsou např. etylester kyseliny octové, n-butanol nebo cyklohexanol. U takových extrakcí kapalina-kapalina se však vyskytuje velký počet problémů, jako jsou silná tvorba pěny, tvorba sedimentu, tvorba emulze a špatné dělení fází. Obecně je zapotřebí více extrakčních kroků, což vede ke ztrátám a jen k částečnému získání obsahu estrogenů.
Pro úpravu malých množství močových a plazmových tekutin pro analytické určení estrogenů pomocí plynové chromatografie je Heikkinnenem et al. (Clin. Chem. 27/7, (1981), 1186-1 189) a Shackletonem et al. (Clinica Chimica Acta 107(1980), • · • · · · « · ···« · · · ···· • · · · · ···· • · ·· · ·· ······ ·· ···· · · •••••·· ·· · · · · ··
31-243) navržena extrakce estrogenů z pevné fáze pomocí kartuše se silanizovaným silikagelem obsahujícím zbytky oktadekylsilanu (Sep-PakR Cis-cartridge, výrobce Waters Ass. Inc. Milford, MA, USA). Přitom jsou estrogeny z kartuše eluovány metanolem. Nejsou však uvedeny žádné údaje o dalších látkách obsažených v eluátu obsahujícím estrogeny.
Podstata vynálezu
Úkolem tohoto vynálezu je vyvinout technický postup k získávání přirozené směsi konjugovaných estrogenů z PMU, přičemž by se zabránilo známým nevýhodám dosud obvyklých extrakcí kapalina-kapalina, a jenž dodává produkt obohacený fenolickými, moč obsahujícími látkami a dalekosáhle zbavený HPMF.
Nyní byl nalezen postup, jímž může být v jedné extrakci pevné látky na hydrofobizovaném silikagelu získána směs obohacená fenolickými, moč obsahujícími látkami, jež je dalekosáhle zbavená HPMF, avšak prakticky úplně obsahuje přirozený obsah estrogenů v PMU, která může sloužit jako výchozí materiál pro výrobu farmaceutik obsahujících přirozenou směs konjugovaných estrogenů z PMU jako účinnou složku.
Způsob podle vynálezu k získávání fenolickými, moč obsahujícími látkami obohacené přirozené směsi konjugovaných estrogenů z PMU se vyznačuje tím, že
a) se močová kapalina, která představuje moč zbavenou slizových a pevných látek, zúžený koncentrát této moči nebo ultrafiltrací této moči získaný zúžený močový retentát, zpracovává s množstvím vodorozpustné zásady dostatečným k nastavení hodnoty pH minimálně na 12 a nakonec se nastaví hodnota pH se zásadou zpracované močové kapaliny přidáním dostatečného množství vodného roztoku kyseliny na hodnotu v rozsahu od 5 do 8,5,
b) se předem se zásadou zpracovaná, na pH 5 až 8,5 nastavená močová kapalina kontaktuje s množstvím hydrofobizovaného silikagelu dostatečným k adsorpci směsi konjugovaných estrogenů obsažené v močové kapalině a hydrofobizovaný silikagel naložený směsí konjugovaných estrogenů se oddělí od ostatní močové kapaliny,
c) se hydrofobizovaný silikagel naložený směsí konjugovaných estrogenů promyje s vodným roztokem pufru, nastaveným na rozsah pH od 5 do 7, zejména 5,
d) se promytý hydrofobizovaný silikagel kontaktuje s množstvím eluční kapaliny, jež představuje směs z vody a s vodou mísitelného organického rozpouštědla ze skupiny s vodou mísitelných éterů, nižších alkanolů a nižších alifatických ketonů, dostatečným k desorpci adsorbované směsi konjugovaných estrogenů, a eluát obsahující přirozenou • · · · « · • · ··« ···· • · · · · ·· ······ ·· ···· · · ······« * · » · · · · · směs konjugovaných estrogenů se oddělí a popřípadě zúží od hydrofobizovaného silikagelu.
Pro daný postup podle vynálezu mohou být používány PMU jako takový, z něho zúžením získaný koncentrát nebo z něho membránovou filtrací získaný retentát. Nashromážděná moč se nejprve známým způsobem zbaví slizových a pevných látek. Jako účelné se ukazuje usazování pevných a slizových látek a tyto se pak oddělí známými dělicími způsoby, např. dekantací, separací a/nebo filtrací. Tak může být PMU např. veden přes známé dělicí zařízení, např. separátor, filtrační zařízení nebo sedimentační zařízení. Jako dělicí zařízení může sloužit např. pískové lože nebo mohou být použity obchodně běžné separátory, např. tryskové nebo komorové separátory. Je-li to žádoucí, mohou být použita rovněž mikrofiltraění nebo ultrafiltrační zařízení, při jejichž použití může být současně dosaženo dalekosáhlého zbavení zárodků a virů filtrovaného PMU.
V žádoucím případě mohou být k moči přidávány konzervační prostředky, dezinfekční prostředky (germicidy), baktericidy a/nebo anthelmintika.
Pokud místo PMU má být použit zkoncentrovaný PMU-retentát, může být tento získáván z PMU pomocí známé membránové filtrace. Obsah pevných látek retentátu a jeho složení se mohou měnit podle použitého PMU a membrány použité k membránové filtraci, např. podle její velikosti pórů nebo podmínek filtrace. Např. při použití nanofiltrační membrány může být dosaženo téměř bezztrátového koncentrování obsahu estrogenů v PMU-retentátu při současném odstranění až 50 hm.% nízkomolekulárních látek obsažených v PMU. Pro daný postup podle vynálezu mohou být použity PMUretentáty, které byly zkoncentrovány až na poměr cca 1:10, lépe na poměr cca 1:7, a jejichž objem může být zúžen až na cca 1/10, přednostně cca 1/7, původního objemu PMU.
V postupovém kroku a) se k močové kapalině přidává vodorozpustná zásada v množství dostatečném k nastavení hodnoty pH minimálně 12, zejména 13 až 14. Jako vodorozpustné zásady se hodí anorganické nebo organické, v močové tekutině rozpustné inertní zásady, které jsou dost silné, aby se dosáhlo hodnoty pH minimálně 12. Tak jsou vhodné hydroxidy alkalických kovů nebo hydroxidy kovů alkalických zemin, zejména hydroxid sodný, nebo rovněž organické zásady jako kvartérní hydroxidy amonné s nižšími alkyly. Přednostně se daná zásada přidává ve formě vodného roztoku s obsahem báze minimálně 20 hm.%, přednostně 40 až 60 hm.%. Jako vhodný se ukazuje zejména 45- až 55%-ní vodný louh sodný. Při tomto alkalickém předběžném zpracovávání se hodnota pH močové kapaliny nastaví minimálně na 12, příkladně v rozsahu 12 až 14, přednostně cca 13, a tato alkalická hodnota pH se bude udržovat po období dostatečné ke štěpení laktonových seskupení obsažených v látkách obsažených v moči, přičemž toto • · • ···· ·♦·· • · ·· · · · ······ ·· ···· · · ······> · · · · · · · · období může obecně činit 1/2 až 2 hodiny. Podmínky zpracování musí být voleny tak, aby konjugované estrogeny nebyly přitom napadány. Tak probíhá dané zpracování přednostně při teplotě místnosti při omezení přidání zásady na množství potřebné k dosažení žádané hodnoty pH v oblasti 12 až 14. Množství zásady potřebné k dosažení hodnoty pH v rozsahu od 12 do 14 se může měnit podle složení použité PMU. Při použití 50%-ního louhu sodného se ukazují obecně jako dostatečná množství od cca 100 do 700 ml 50%-ního louhu sodného vztaženo na 10 1 PMU. Nakonec se močová tekutina nastaví přidáním vodného roztoku kyseliny na hodnotu pH v rozsahu od 5 do 8,5, přednostně 7 až 8,5, zejména 8 až 8,5. Jako kyseliny se hodí inertní anorganické nebo organické kyseliny rozpustné v močové kapalině, jako např. kyselina solná, kyselina sírová, kyselina fosforečná nebo nižší karbonové kyseliny jako kyselina octová. Jako vhodný se ukazuje příkladně koncentrovaný vodný roztok kyseliny solné. Množství kyseliny nutné k dosažení předem uvedeného rozsahu pH se může měnit podle složení použité PMU a množství zásady použité při počátečním nastavování alkalické oblasti. Při použití koncentrovaného roztoku kyseliny solné může být žádoucí hodnota pH dosažena obecně přidáním cca 25 až 100 g koncentrovaného roztoku kyseliny solné vztaženo na 1 1 PMU.
V postupovém kroku b) použitelné hydrofobizované silikagely jsou známé silikagely s inverzní fází (=Reverse-Phase-Kieselgele, zkráceno „RP-silikagely“), tj. chemicky modifikované silikagely, jež nesou hydrofobní funkční skupiny, event. ligandy. Tak jsou vhodné např. silanizované RP-silikagely, které obsahují jako hydrofobní funkční skupiny η-oktadecyldimetylsilyloxy-, n-oktyldimetylsilyloxy- nebo dimetylhydroxysilyloxy-skupiny. Vhodné jsou např. silanizované silikagely se střední velikostí zrn od 15 do 500 μιη. Jako zvlášť vhodný se ukázal silikagel obsahující dimetylhydroxylsilyloxylové zbytky se střední velikostí zrn v rozsahu od 0,05-0,3 mm, např. silanový derivát silikagelu „Kieselgel 60/Dimethylsilanderivat“ firmy Merck.
Podle vynálezu může adsorpce konjugovaných estrogenů na hydrofobizovaném silikagelu probíhat kontaktováním eventuálně zkoncentrované PMU nebo jejího retentátu s hydrofobizovaným silikagelem, přičemž v postupovém kroku a) předem zpracovaná močová kapalina se zavede do reaktoru obsahujícího silikagel a v něm je udržována v kontaktu se silikagelem po dobu dostatečnou k adsorpci obsahu estrogenů. Po proběhlé adsorpci konjugovaných estrogenů na hydrofobizovaný silikagel může být silikagel napojený směsí konjugovaných estrogenů oddělen známým způsobem od ostatní močové kapaliny. Účelněji může být močová kapalina vedena sloupcem obsahujícím silikagel takovou průtokovou rychlostí, aby kontaktní doba postačovala k adsorpci obsahu estrogenů. Vhodné jsou např. průtokové rychlosti, jež odpovídají průtoku 5 až 20 objemových dílů PMU/1 objemový díl silikagelu/hodinu. Adsorpce je prováděna • · • · · · • · «··· ·· · ···· • · · · · · · · · 9 · ·· · · · ······ • · ···· · · ··»···· ·· ·· ·· ·· přednostně při teplotě místnosti. Účelné je řízení průtokové rychlosti močové tekutiny reaktorem pracemi při malém přetlaku nebo podtlaku. Množství použitého hydrofobizovaného silikagelu se může měnit podle druhu použitého silikagelu a množství obsahu pevných látek v močové kapalině předem zpracované v postupovém kroku a). Při použiti předem zpracované PMU může být příkladně 1 objemový díl hydrofobizovaného silikagelu napojen až 80 objemovými díly předem zpracované PMU, aniž by byla v odtékající močové kapalině prokazatelná patrná množství estrogenu. Při použití předem zpracovaného PMU-koncentrátu neb PMU-retentátu se kapacita napojení hydrofobizovaného silikagelu redukuje přirozeně tou měrou, v níž jsou tyto látky zkoncentrovány. Tak může být příkladně 1 objemový díl na hydrofobizovaném silikagelu napojen množstvím močové kapaliny odpovídajícím 30 až 80, přednostně 40 až 50, objemovým dílům PMU.
Hydrofobizovaný silikagel napojený směsí konjugovaných estrogenů se v postupovém kroku c) promývá vodným roztokem pufru nastaveným na oblast pH od 5 do 7, přednostně cca 5. Jako promývací kapalina se přednostně používá vodný roztok pufru složeného z kyseliny octové/octanu nastavený na pH cca 5. Vhodné jsou zejména 0,1 až 1-molární, přednostně 0,1 až 0,2-molární roztoky pufru kyselina octová/octan. Množství promývací kapaliny je voleno tak, aby postačovalo pro dalekosáhlé vymytí fenolických, v moči obsažených látek, aniž by přitom byla vymyta za zmínku stojící množství konjugovaných estrogenů. Jako vhodné se ukazuje příkladně použití 8 až 15, zejména 9 až 10, ložných objemů promývací kapaliny na ložný objem hydrofobizovaného silikagelu. Přitom účelnější je vedení promývací kapaliny reaktorem obsahujícím hydrofobizovaný silikagel průtokovou rychlostí 5 až 20 objemových dílů prací kapaliny/1 objemový díl silikagelu/hodinu.
V postupovém kroku d) se nakonec zpracuje promytý hydrofobizovaný silikagel napojený směsí konjugovaných estrogenů s množstvím eluční kapaliny, jež je dostatečné k eluci směsi konjugovaných estrogenů, a získá se eluát obsahující přirozenou směs konjugovaných estrogenů PMU. Podle vynálezu používaná eluční kapalina představuje směs z vody a s vodou mísitelného éteru, nižšího alkanolu a/nebo nižšího alifatického ketonu. Jako éterické složky eluční kapaliny se hodí s vodou mísitelné cyklické étery jako tetrahydrofuran nebo dioxan, ale také s vodou mísitelné étery s otevřeným řetězcem, jako např. etylénglykoldimetyléter (= Monoglyme), dietylénglykoldimetyléter (= Diglyme) nebo etyloxyetyloxyetanol (= karbitol). Jako nižší alkoholy se hodí s vodou mísitelné alkylalkoholy s 1 - 4, přednostně 1 - 3, atomy uhlíku, zejména etanol nebo isopropanol. Jako nižší alifatické ketony se hodí s vodou mísitelné ketony s 3 - 5 uhlíkovými atomy, zejména aceton. Jako obzvlášť příznivé se ukazují eluční kapaliny, v nichž je organickým rozpouštědlem etanol. V eluční kapalině může objemový poměr s • · · · • ·
vodou mísitelného organického rozpouštědla k vodě ležet v rozsahu od 40:60 do 20:80, přednostně cca 30:70. Použité množství elučního činidla může činit cca 3 až 5 ložných objemů na ložný objem hydrofobizovaného silikagelu. Vhodněji se eluční kapalina vede reaktorem obsahujícím hydrofobizovaný silikagel napojený směsí estrogenů takovou průtokovou rychlostí, aby kontaktní doba postačovala k úplné eluci směsi konjugovaných estrogenů. Při použití směsi tetrahydrofuranu a/nebo etanolu s vodou v objemovém poměru 30:70 se hodí příkladně průtokové rychlosti od 5 do 20 objemových dílů eluční kapaliny na 1 objemový díl silikagelu za hodinu. Vhodně se průtoková rychlost reguluje prací při lehce zvýšeném tlaku, např. při přetlaku až do 0,2 bar, a eluát se jímá v několika frakcích. Obsahy jednotlivých eluátových frakcí konjugovaných estrogenů a fenolických, v moči obsažených látek, jako jsou kresoly a HPMF, mohou být určeny známým způsobem pomocí vysokovýkonné kapalinové chromatografie (= high performance liquid chromatography, zkráceno jako HPLC).
Při eluci se nejprve získá slabě zbarvená až bezbarvá, prakticky estrogeny neobsahující předkapová frakce, jejíž množství odpovídá obecně cca jednomu ložnému objemu. Hlavní množství konjugovaných estrogenů, příkladně mezi 80 a 99% konjugovaných estrogenů existujících ve výchozí PMU (moči březích klisen), se nachází v následujících, tmavožlutě až hnědě zbarvených hlavních eluátových frakcích, jejichž množství zahrnuje obecně 1 až 2 ložné objemy. V následujících dokapových zadních frakcích jsou obecně obsaženy již jen stopy konjugovaných estrogenů. Pokud jsou získány zadní frakce, jež obsahují ještě konjugované estrogeny nad 10 hm.% vztaženo na sušinu a méně než 0,6 hm.% kresolů a HPMF vztaženo na sušinu, mohou být tyto frakce spojeny s hlavním eluátem bohatým na estrogeny k dalšímu zpracování.
Hlavní eluát oddělený výše popsaným způsobem od silikagelu obsahuje v PMU se vyskytující přirozenou směs konjugovaných estrogenů vedle jen malého podílu původně v PMU přítomného obsahu fenolických, v moči obsažených látek. Tento eluát může sloužit jako výchozí materiál pro výrobu léčiv obsahujících přirozenou směs konjugovaných estrogenů. Je-li to žádoucí, může být eluát dále zúžen známým způsobem, aby byl získán koncentrát dalekosáhle zbavený organických rozpouštědel, jenž je vhodný pro další galenické zpracování. V žádoucím případě může být také sušením rozprašováním vyrobena směs pevných látek zbavená elučního činidla. Pokud má být přirozená směs konjugovaných estrogenů použita pro výrobu pevných léků, může být vhodné přimíchat k eluátu obsahujícímu konjugované estrogeny již před koncentrováním nebo sušením rozprašováním pevný nosič, aby se tímto způsobem získala směs pevných látek obsahující konjugované estrogeny a nosiče. Jak eluát obsahující směs estrogenů, tak z toho vyrobený koncentrát nebo rozprašováním vysušený pevný produkt mohou být známým způsobem zapracovány do pevných nebo • · • · · · • · kapalných galenických přípravků, jako např. tablet, dražé, kapslí nebo emulzí. Tyto gaienické přípravky mohou být vyráběny podle známých způsobů s použitím obvyklých pevných nebo kapalných nosičů, jako např. škrobu, celulózy, mléčného cukru (laktózy) nebo talku (mastku) nebo kapalných parafínů a/nebo s použitím obvyklých farmaceutických pomocných látek, např. bubřidel tablet, rozpouštěcích nebo konzervačních prostředků. Tak může být produkt obsahující konjugované estrogeny smíchán známým způsobem s farmaceutickými nosiči a pomocnými prostředky a daná směs může být převedena do vhodného dávkovacího tvaru.
Následující příklady mají blíže vysvětlit daný vynález, aniž by však byl omezen jeho rozsah.
Příklady provedení vynálezu
Příklady 1 - 3
Obecný pracovní předpis k získání extraktu z PMU obsahujícího přirozenou směs v PMU obsažených konjugovaných estrogenů, jež jsou dalekosáhle obohaceny fenolickými látkami obsaženými v moči.
A) Předběžné zpracování PMU
1 PMU filtrovaného přes 5 cm vysoké pískové lože nebo přes mikrofiltrační zařízení (obsah sušiny (=TS) a rovněž pomocí HPLC určené obsahy estronsulfátové soli, kresolu a HPMF viz následující tabulku příkladů) je za silného míchání nastaveno přidáním 50%-ního vodného roztoku hydroxidu sodného (hustota při 20°C = 1,52 g/ml) na pH 13 (přidané množství roztoku NaOH viz příkladnou tabulku) a hodinu mícháno při teplotě místnosti. Nakonec je alkalická močová kapalina nastavena přidáním koncentrovaného vodného roztoku kyseliny solné (cca 35%ního) na hodnotu pH od 8 do 8,5.
B) Adsorpce obsahu estrogenů PMU na RP-silikagelu
Sloupec o výšce 50 cm o průměru 5 cm je naplněn 100 g (o objemu cca 193 ml = 1 ložný objem) RP-silikagelu (= „silikagel 60/dimetylsilanderivát“ firmy Merck, obj. č. 7719, velikost zrn 63 až 200 pm). Sloupec se promyje nejprve s 0,5 1 vody, potom s 0,25 1 metanolu a ještě s 0,5 1 vody.
Močová kapalina předem zpracovaná podle A) se vede daným sloupcem přetlakem 0,2 bar a s průtokovou rychlostí 60 ml/minutu. Obsah estrogenů v PMU je na takto napojeném sloupci RP-silikagelu úplně adsorbován. Prošlá močová kapalina je analyzována pomocí HPLC na obsah estronsulfátové soli a ukazuje se jako prakticky zbavená estrogenů. Odteklá kapalina se likviduje.
C) Promývání napojeného sloupce RP-silikagelu
Naložený sloupec RP-silikagelu je promyt 2 1 (cca 10 ložných objemů) 0,15-molárního roztoku pufru kyselina octová/octan sodný. Roztok pufru se připraví, když k 0,15molárnímu vodnému roztoku kyseliny octové přidá pevný octan sodný (cca 107 g) až k dosažení pH 5. Protékající promývací kapalina je analyzována pomocí HPLC na obsah estronsulfátové soli, kresolu a HPMF a obsahuje méně než 5% obsahu estrogenů výchozí PMU.
D) Desorpce konjugovaných estrogenů z promytého sloupce RP-silikagelu a oddělení frakce eluátu bohaté na estrogeny
1 eluční kapaliny (směs vody s rozpouštědlem, složení viz následující tabulka) je veden s přetlakem 0,2 bar a s průtokovou rychlostí cca 60 ml/min daným sloupcem. Proběhlý eluát je zachycen do několika frakcí (objem zhruba po 200 ml na cca 1 ložný objem). Jednotlivé frakce jsou vyšetřeny pomocí HPLC na obsah estronsulfátové soli, kresolu a HPMF. První frakce se shromažďuje, dokud se eluát ukazuje bezbarvý až slabě žlutý. Objem této frakce činí 150 až 200 ml. Tato frakce obsahuje jen stopy estronsulfátové soli.
Jakmile dochází ke změně barvy eluátu na intenzívní tmavožlutou až hnědou barvu, shromáždí se další frakce o objemu cca 200 ml. V této frakci je obsaženo cca 80 až 98% celkového, na daném sloupci adsorbovaného množství konjugovaných estrogenů. Zbylé frakce obsahují již jen malé množství estrogensulfátové soli. Je-li to žádoucí, mohou být tyto frakce po oddestilování daného rozpouštědla přidány ještě k postupovému kroku B). Pro 2. frakci obsahující hlavní množství konjugovaných estrogenů jsou v následující tabulce obsaženy vždy obsah sušiny (TS) ve hm.% a obsahy estronsulfátové soli, kresolu a HPMF určené pomocí HPLC. Tato frakce představuje extrakt vhodný pro další galenické zpracováni.
E) Regenerace sloupce RP-silikagelu
K regeneraci se daný sloupec promyje nejprve 2 1 vody, potom 0,5 1 metanolu a ještě 2 1 vody. Potom může být sloupec použit znovu pro daný sloupec. Sloupec může být vícekrát, např. až desetkrát, regenerován a znovu používán.
• · ·
- (?'i • · • · · 1 • · · · · * · • ·· · · · · · · • · · · · · * ····· ·· ·· ·· ··
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (7)
1. Postup k získání fenolickými, v moči obsaženými látkami obohacené přirozené směsi konjugovaných estrogenů z moči březích klisen, vyznačující se tím, že se
a) močová kapalina, jež představuje moč zbavenou slizových a pevných látek, zúžený koncentrát této moči nebo membránovou filtrací této moči získaný zúžený močový retentát, zpracovává s množstvím vodorozpustné zásady dostatečným k nastavení pH 12 a nakonec pH močové kapaliny zpracované s danou zásadou nastavuje přidáním dostatečného množství vodného roztoku kyseliny na hodnotu v rozsahu od 5 do 8,5,
b) se zásadou předem zpracovaná, na pH 5 až 8,5 nastavená močová kapalina kontaktuje s množstvím hydrofobizovaného silikagelu dostatečným k adsorpci v močové kapalině obsažené směsi konjugovaných estrogenů a hydrofobizovaný silikagel napojený směsí konjugovaných estrogenů oddělí od ostatní močové kapaliny,
c) hydrofobizovaný silikagel napojený směsí konjugovaných estrogenů promyje vodným roztokem pufru nastaveným na rozsah pH od 5 do 7, a
d) promytý hydrofobizovaný silikagel kontaktuje s takovým množstvím eluční kapaliny, jež je dostatečné k desorpci adsorbované směsi konjugovaných estrogenů, přičemž tato kapalina představuje směs z vody a ze s vodou mísitelného organického rozpouštědla ze skupiny s vodou mísitelných éterů, nižších alkanolů a nižších alifatických ketonů a daný eluát obsahující přirozenou směs konjugovaných estrogenů oddělí a popřípadě zúží od hydrofobizovaného silikagelu.
2. Postup podle nároku 1, vyznačující se tím, že v kroku daného postupu a) je močová kapalina smísena se zásadou, přednostně s vodným roztokem zásady, a během doby dostatečné ke štěpení laktonových seskupení obsažených v moči je udržována na hodnotě pH minimálně 12.
3. Postup podle jednoho z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že jako hydrofobizovaný silikagel je použit silanizovaný silikagel nesoucí di mety lhydroxysilyloxy lově zbytky.
4. Postup podle jednoho z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se v postupovém kroku b) 1 objemový díl hydrofobizovaného silikagelu napojí množstvím močové kapaliny odpovídajícím 30 až 80, přednostně 40 až 50 objemovým dílům moči.
5. Postup podle jednoho z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že v kroku postupu b) se močová kapalina vede reaktorem obsahujícím hydrofobizovaný silikagel průtokovou rychlostí, jež odpovídá průtoku od 5 do 20 objemových dílů moči/1 objemový díl hydrofobizovaného silikagelu/hodinu.
···· »· · * · · · • * ··· · · · · • · ·· · · · ······ • · · ♦ · · · · ·«····> ·· » · ·· ··
6. Postup podle jednoho z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že v kroku postupu c) vodný roztok pufru použitý jako promývací kapalina je vodným roztokem pufru kyselina octová/octan, který je nastaven na pH cca 5.
7. Postup podle jednoho z předcházejících nároků, vyznačující sc tím, že v postupovém kroku d) je jako eluční kapalina použita směs z vody a s vodou mísitelného organického rozpouštědla s objemovým poměrem organického rozpouštědla k vodě v rozsahu 20:80 až 40:60, zejména 30:70.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/EP1996/003819 WO1998008525A1 (de) | 1996-08-30 | 1996-08-30 | Prozess zur gewinnung von oestrogenen aus stutenharn |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ59999A3 true CZ59999A3 (cs) | 1999-06-16 |
| CZ298762B6 CZ298762B6 (cs) | 2008-01-23 |
Family
ID=8166299
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0059999A CZ298762B6 (cs) | 1996-08-30 | 1996-08-30 | Postup získání estrogenů z moči klisen |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0927040B1 (cs) |
| JP (1) | JP4125788B2 (cs) |
| AT (1) | ATE264110T1 (cs) |
| AU (1) | AU722084B2 (cs) |
| CA (1) | CA2263904C (cs) |
| CZ (1) | CZ298762B6 (cs) |
| DE (3) | DE19681616D2 (cs) |
| DK (1) | DK0927040T3 (cs) |
| ES (1) | ES2219697T3 (cs) |
| HK (1) | HK1023063A1 (cs) |
| HU (1) | HU228765B1 (cs) |
| IL (1) | IL128671A (cs) |
| NO (1) | NO318378B1 (cs) |
| PL (1) | PL185920B1 (cs) |
| PT (1) | PT927040E (cs) |
| SK (1) | SK281367B6 (cs) |
| WO (1) | WO1998008525A1 (cs) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE10037389A1 (de) * | 2000-08-01 | 2002-02-14 | Solvay Pharm Gmbh | Verfahren und Vorrichtung zur Anreicherung und Stabilisierung von konjugierten Oestrogenen aus Stutenharn |
| DE10159161A1 (de) * | 2001-12-01 | 2003-06-18 | Solvay Pharm Gmbh | Verfahren zur Gewinnung von Oestrogenen aus Stutenharn |
| TWI332400B (en) | 2001-12-14 | 2010-11-01 | Solvay Pharm Gmbh | Preformulation for the tableting of natural mixtures of conjugated estrogens |
| TWI252111B (en) | 2001-12-14 | 2006-04-01 | Solvay Pharm Gmbh | Matrix film tablet with controlled release of a natural mixture of conjugated estrogens |
| AR041121A1 (es) * | 2002-10-11 | 2005-05-04 | Solvay Pharm Gmbh | Procedimiento para la obtencion de una mezcla natural de estrogenos conjugados |
| US20040072814A1 (en) | 2002-10-11 | 2004-04-15 | Solvay Pharmaceuticals Gmbh | Method for obtaining a natural mixture of conjugated equine estrogens depleted in non-conjugated lipophilic compounds |
| CN1332973C (zh) * | 2003-03-06 | 2007-08-22 | 深圳市海达克实业有限公司 | 结合态雌性激素的提取方法 |
| ATE410435T1 (de) * | 2003-07-17 | 2008-10-15 | Solvay Pharm Gmbh | Verfahren zur gewinnung eines natürlichen gemisches konjugierter equin esrtrogene |
-
1996
- 1996-08-30 HU HU9903670A patent/HU228765B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1996-08-30 AU AU69856/96A patent/AU722084B2/en not_active Ceased
- 1996-08-30 WO PCT/EP1996/003819 patent/WO1998008525A1/de active IP Right Grant
- 1996-08-30 JP JP51119498A patent/JP4125788B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-08-30 CA CA002263904A patent/CA2263904C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-08-30 EP EP96930986A patent/EP0927040B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-30 PT PT96930986T patent/PT927040E/pt unknown
- 1996-08-30 DK DK96930986T patent/DK0927040T3/da active
- 1996-08-30 DE DE19681616D patent/DE19681616D2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-30 CZ CZ0059999A patent/CZ298762B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-08-30 DE DE59610986T patent/DE59610986D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-30 DE DE19681616A patent/DE19681616B4/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-08-30 ES ES96930986T patent/ES2219697T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-08-30 SK SK244-99A patent/SK281367B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1996-08-30 PL PL96331885A patent/PL185920B1/pl unknown
- 1996-08-30 IL IL12867196A patent/IL128671A/xx not_active IP Right Cessation
- 1996-08-30 AT AT96930986T patent/ATE264110T1/de active
-
1999
- 1999-02-26 NO NO19990953A patent/NO318378B1/no not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-04-06 HK HK00102091A patent/HK1023063A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE19681616B4 (de) | 2006-03-09 |
| HUP9903670A2 (hu) | 2000-03-28 |
| AU722084B2 (en) | 2000-07-20 |
| DE59610986D1 (de) | 2004-05-19 |
| IL128671A (en) | 2001-03-19 |
| NO990953L (no) | 1999-02-26 |
| IL128671A0 (en) | 2000-01-31 |
| DE19681616D2 (de) | 1999-09-30 |
| EP0927040B1 (de) | 2004-04-14 |
| SK281367B6 (sk) | 2001-02-12 |
| PL185920B1 (pl) | 2003-08-29 |
| HK1023063A1 (en) | 2000-09-01 |
| AU6985696A (en) | 1998-03-19 |
| JP4125788B2 (ja) | 2008-07-30 |
| PL331885A1 (en) | 1999-08-16 |
| HU228765B1 (hu) | 2013-05-28 |
| NO318378B1 (no) | 2005-03-14 |
| CA2263904C (en) | 2007-08-07 |
| EP0927040A1 (de) | 1999-07-07 |
| CZ298762B6 (cs) | 2008-01-23 |
| DK0927040T3 (da) | 2004-05-10 |
| CA2263904A1 (en) | 1998-03-05 |
| SK24499A3 (en) | 1999-10-08 |
| JP2000517309A (ja) | 2000-12-26 |
| ES2219697T3 (es) | 2004-12-01 |
| PT927040E (pt) | 2004-08-31 |
| ATE264110T1 (de) | 2004-04-15 |
| HUP9903670A3 (en) | 2000-05-29 |
| NO990953D0 (no) | 1999-02-26 |
| WO1998008525A1 (de) | 1998-03-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ59999A3 (cs) | Způsob k získání estrogenů z moči klisen | |
| US5723454A (en) | Method for obtaining estrogens from pregnant mare urine by solid phase extraction on a semi-polar adsorber resin | |
| CA2263757C (en) | Method to obtain oestrogens from mare's urine | |
| US5814624A (en) | Method for obtaining estrogens from pregnant mare urine by solid-phase extraction | |
| CA2468933C (en) | Method for obtaining oestrogen from mare's urine | |
| US8815299B2 (en) | Method for obtaining a natural mixture of conjugated equine estrogens depleted in non-conjugated lipophilic compounds | |
| CA2529009C (en) | Method for obtaining a natural mixture of conjugated equine estrogens | |
| CN1101683C (zh) | 由牝马尿获取雌激素的方法 | |
| RU2179029C2 (ru) | Способ получения эстрогенов из кобыльей мочи | |
| MXPA99001851A (en) | Process to obtain oestrogens from mare's urine | |
| AU2003301237B2 (en) | Method for extracting a natural mixture of conjugated equine estrogens that is depleted of non-conjugated lipophilic compounds | |
| MXPA99001923A (es) | Procedimiento para la obtencion de estrogenos a partir de orina de yeguas |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20150830 |