CZ423797A3

CZ423797A3 - Topické přípravky s imunosupresivy

Info

Publication number: CZ423797A3
Application number: CZ974237A
Authority: CZ
Inventors: Milan Rndr. Stuchlík; Alexandr Rndr. Jegorov; Vladimír Ing. Csc. Maťha; Josef Ing. Stuchlík
Original assignee: Galena, A. S.
Priority date: 1997-12-30
Filing date: 1997-12-30
Publication date: 1999-07-14
Also published as: HUP0004173A2; CZ287497B6; CA2317010A1; WO1999034830A1; SK171798A3; NO20003344L; AU1481399A; PL341604A1; EP1058560A1; BG104558A; SK284246B6; JP2002500200A; NO20003344D0; HRP20000258A2

Description

Topické přípravky s imunosupresivy (57) Anotace:

Léčivé přípravky k topické oční aplikaci obsahující 0,02 až 5,0 % umunosupresivních léčiv , patřících do skupin monocyklických undekapeptidů, makrolidových laktonů nebo , ř , kortisteroldů ve vehikulu obsahujícím do ! 10 % polyalkylenglykol-polyuretanových koíj polymerů. Tyto kopolymery jsou tvořeny v hydrofilním vehikulu s výhodou poly/oxy-

1,2. e thandiyl / -. alfa. -hydro-x-hydroxypolym ery s 1,1 -methylen-bis-/4-isokyantocyklohexanem/ o průměrné molekulové hmotnosti 1000 až 3000 v lipofilním vehikulu s výhodou polyfoxy/methyl-1,2-1,2e thandiyl/]-. alfa.-h ydro-x-hydroxypolymery s 1,1 -methylen bis/4-isokyanatocyklohexanem/ o průměrné molekulové hmotnosti 1600 až 18000. Léčivé přípravky dále mohou obsahovat další excipienty obvyklé v topických aplikačních formách.

CZ 4237-97 A3 • * φ φ φφφ φ φ φ φ · ·

Topické přípravky s imunosupresivy__

Oblast techniky

Vynález se týká léčivých přípravků určených k topické oční aplikaci lipofilních, imunosupresivních léčiv rozpuštěných nebo dispergovaných ve fyziologicky, vhodném vehikulu obsahujícím excipienty zvyšující průnik léčiv do očních tkání.

Dosavadní stav techniky

Γ 1 ý Za topickou oční aplikaci se považuje zevní podání léčivých přípravků do spojivkového vaku ( pod víčko a na rohovku i injekční subkonjunktivální a retrobulbámí podání.

Účinnost topicky aplikovaných léčiv k léčení očních chorob je vedle anatomickofyziologických vlastností oka ovlivňována zejména fyzikálně-chemickými vlastnostmi léčiva a charakterem aplikační formy a jejím složením. Je všeobecně známo, že transport léčiv do očních tkání znesnadňují obranné mechanismy oka jako je zvýšené slzení a mrkání, které snižuje koncentraci léčiva v prekomeální oblasti. Absorpci léčiva umožňuje prodloužený kontakt s rohovkou a schopnost léčiva penetrovat rohovkou. Biodostupnost léčiv po topické aplikaci na oko činí obvykle jen 1 až 10 % podané látky.

Typickými lipofilními, imunosupresivními léčivy jež jsou užívány k léčení očních chorob jsou např, protizánětlivé a imunosupresivně působící látky ze skupiny monocyklických poly-N-methylovaných undekapeptidů, laktonových makrolidů nebo kortikosteroidů. Undekapeptidy vhodné k léčení oka tvoří skupina cyklosporinů, zejména ciclosporin, [Nva]²ciclosporin, [Val]²·- ciclosporin a dihydro[Val]² -ciclosporin.

Makrolidová antibiotika vhodná k léčení očních chorob představují zejména tacrolimus a sirolimus. Tacrolimus a jemu strukturálně podobné deriváty jsou souhrnně označovány jako askomyciny; sirolimus a jemu strukturálně podobné deriváty jsou souhrnně označovány jako rapamyciny.

Skupinu kortikosteroidů používaných k topické aplikaci v očním lékařství tvoří látky jako jsou např. cortison a hydrocortison, prednisolon a methyl prednisolon, dexamethason a fluoromethalon.

. , Terapeutická účinnost vzpomínaných cyklosporinů při topické aplikaci je prokázána zejména

I při rizikových transplantacích rohovky a autoimunitních onemocněních jako jsou keratokonjunktivitis sicca, chronická keratitis, Behcetův syndrom, Sjogrenův syndrom, endogenní uveitis, ale také ulcerativních chorob rohovky jako je např. Morenův vřed.

Makrolidová antibiotika prokázala svoji vysokou imunosupresivní účinnost při orgánových i tkáňových transplantacích a jsou příslibem pro keratoplastiky. Kortikosteroidní léčiva jsou používána v terapii zánětů po očních operacích a rovněž tlumí imunologické reakce po transplantacích rohovky.

1SD/STU/PATENT/ROHOVKA

• v 4' *♦··

4· ··

4444444 · **

Všechny tři skupiny účinných látek uváděné v tomto vynálezu jsou podávány k léčení zánětlivých a autoimunitních chorob očí také systémovým způsobem. Pro závažné vedlejší účinky této léčby je však systémové podávání použitelné jen v omezené míře. Při racionální topické aplikaci lze snížit nebo vyloučit vedlejší účinky spojené se systémovým podáním tím, že aktivita přípravku je soustředěna jen na ošetřovanou lokalitu a její nejbližší okolí.

Léčiva ze skupin N-metylových cyklických undekapeptidů, makrolidových laktonů a kortikosteroidů jsou ve své neionizované formě jen velmi málo rozpustná ve vodě nebo hydrofilních nosičích fyziologicky přijatelných pro oční aplikaci. To prakticky znesnadňuje přípravu klasických hydrofilních očních kapek. Pro ilustraci, rozpustnost skupiny cyklosporinů ve vodě se pohybuje v rozmezí 16 až 30 pg/ml při 25 °C, přičemž polárnější molekula [Thr]²-ciclosporinu je ve vodě více rozpustná než méně polární [NVa]²-ciclosporin.

Pro vzájemné posouzení lípofility účinných látek z uvedených skupin lze použit hodnotu rozdělovacího koeficientu P mezi vodnou fázi a lipofilní fázi představovanou n-oktanolem. Pro kortikosteroidní léčiva leží např. hodnota log P mezi 1,2 (prednisolon) až 4,3 (flurbiprofen). Ve skupině cyklosporinů se pohybuje log P pro imunosupresivně aktivní látky mezi 1,1 až 3,1. Pro askomyciny a rapamyciny nejsou hodnoty rozdělovačích koeficientů publikovány, ale lze předpokládat z údajů o rozpustnosti ve vodě, že budou srovnatelné s cyklosporiny.

Jedny z prvních patentů věnovaných oční topické aplikaci léčiv ze skupiny cyklosporinů jako metodě léčení fakoanafylaktických endooftalmitid a uveitid v předním a zadním očním·“·· segmentu nebo očních chorob projevujících se sníženou produkcí slz jsou US patenty 4,649,047 a 4, 839,342. Oba patenty blíže nespecifikují aplikační formu a předpokládajíτ použití roztoků, suspensí i mastí s farmaceuticky přijatelným vehikulem obsahujícím rostlinné, živočišné, minerální a silikonové oleje; liposomy a dále pak alkoholy, ' dimethylsulfoxid a polyoxyethylovaný ricinový olej. Ve zmíněných patentech nejsou ani v příkladech provedení ani v patentových nárocích zveřejněny hmotnostní poměry vhodnýcha* excipientů.

Ke skupině kortikosteroidů, cyklosporinů a antibiotik k oční aplikaci se vztahuje US patent 4,865,846 chránící transportní systémy, ve kterých jsou roztoky léčiv v kapalném nebo masťovém základě přítomny spolu s částicemi biodegradibilních materiálů obsahujících tatáž nebo i jiná léčiva, a způsob přípravy těchto transportních systémů. Z příkladů provedení tohoto patentu vyplývá, že příprava trojrozměrných Částic o velikosti 0,4 až 1,0 mm z bioerodibilních materiálů jako jsou kolagen, želatina, polyvinylalkohol a methylcelulosové deriváty, suspendace těchto částic v kapalném nebo masťovém základě i způsob vpravení léčiv do těchto bioerodibilních částic je velmi pracný a málo vhodný pro validovatelný výrobní postup.

Topické přípravky k aplikaci na oko a přilehlé tkáně obsahující cyklosporiny ve vehikulu složeném ze směsi rostlinných olejů a vaseliny jsou popsány v UK patentu 2,224,205. Léčivé přípravky vyrobeny postupy popsanými v tomto patentu však obsahují jako emulgátory látky založené zejména na steroidních látkách z ovčí vlny. V současné době je již zaznamenám odklon od používání těchto látek pro možné alergizující a dráždivě účinky možných insekticidních reziduí obsažených v tuku z ovčí vlny.

ISD/STU/PATENT/ROHOVKA /

LOční přípravky s nízkými koncentracemi cyklosporinu ve vodném vehikulu obsahující tenzidy ze skupiny polyethoxylovaných esterů mastných kyselin, polyethoxylovaných alkyletherů a po lyethoxylo váných alkyl feny letherů popisuje mezinárodní přihláška vynálezu WO 93/23010. Emulsní oční formulace se specifickou afinitou k slzným žlázám obsahující cyklosporiny popisuje mezinárodní přihláška vynálezu WO 95/31211.

Euacidní a isotonické nanoemulse vhodné k aplikaci obsahující 0,01 % až 5 % léčiv, mezi nimiž jsou kortikoidy i cyklosporiny popisuje evropská patentová přihláška EP 0 696 452 AI. Žádné z těchto výše uvedených patentů neřeší konkrétní problém zvýšení penetrace léčiva přes rohovku do vnitřních očních struktur jako je komorová voda, duhovka případně uvea.

Podstata vynálezu

Vynález si klade za cíl zvýšit prostupnost rohovkou u topicky aplikovaných léčiv a docílit tak terapeuticky účinných hladin léčiva ve vnitřních tkáních oka použitím zvláště vhodných pomocných látek v léčivých přípravcích. Tento úkol je mimořádně ztížen u léčiv velmi obtížně rozpustných v tělních tekutinách a tkáních. Za léčiva velmi obtížně rozpustná ve vodě se považují látky, které potřebují k rozpuštění 1 hmotnostního dílu 1000 až 10000 objemových dílů vody. Takovými léčivy jsou zejména imunosupresiva ze skupiny monocyklických undekapeptidů reprezentované ciclosporinem nebo [Nva]²-ciclosporinem, ze skupiny laktonů s makrolidovou strukturou reprezentované sirolimusem nebo tacrolimusem a ze skupiny kortikoidů reprezentované např. prednisolonem nebo dexamethasonem.

Předmětem vynálezu jsou léčivé přípravky k topické oční aplikaci, které jsou podle vynálezu charakterizovány přítomností 0,02 až 5,0 % hmotnostních imunospuresicních léčiv rozpuštěných nebo dispergovaných ve fyziologicky přijatelném vehikulu obsahujícím do 10 % hmotnostních polyalkylenglykol-polyurethanových kopolymerů obecného vzorce I

(I) kdenjeSaž51,mje převážně 1 až 4 a R znamená CH₃ nebo H.

Z chemického hlediska správné CAS názvy těchto látek jsou dále v popisu vynálezu uváděny zkráceně v CTFA nomenklatuře:

ISD/STU/PATENT/ROHOVKA φ · φ φ ♦ · · φφ·· φ « φ φ φφ · * «φ φφ φφφ φφ·· φφ ·

CAS názvosloví	CTFA názvosloví
Póly (oxy l,2-ethandiyl)-a-hydro-o-hydroxy polymer s 1,1' -methylen-bis-(4-isokyanatocyklohexanem) CAS No. 39444-87-6	kopolymer PEG-8/SMDI
Poly[oxy (methyl l,2-ethandiyl)])-a-hydro-0)- hydroxy polymer s l,l'-methylen-bis-(4-isokyanatocyklohexanem) CAS No. 9042-82-4 CAS No. 9042-82-4	kopolymer PPG-12/SMDI kopolymer PPG-51/SMDI

V CTFA názvosloví odpovídá zkratkám PEG a PPG označení polyethylenglykol a polypropylenglykol a zkratce SMDI označení saturovaný methylendífenyldiisokyanát.

Tyto látky jsou uváděny do oběhu, např. pod obchodním názvem Polyolprepolymer-2 (kopolymer PPG-12/SMDI); Polyolprepolymer-14 (kopolymer PPG-51/SMDI) a Polyolprepolymer-15 (kopolymer PEG-8/SMDI) a jsou vyráběny firmou PENEDERM Incorporated.

V dermálním použití jsou tyto kopolymery známé. Mají silnou aktivitu k pokožce a vytváří snadno deposita ve stratům comeum. Tím se vytváří dlouho přetrvávající kapalné rezervoáry léčiv mezi komeocyty a umožňují ták protrahované působení léčiv v pokožce.

Použití polyolprepolymerů v dermálních a kosmetických přípravcích chrání např. US patenty -á .

4,971,800, 5,045,317 a 5,051,260.

Přes značně odlišnou anatomickou skladbu pokožky od anatomické skladby oční rohovky bylo s překvapením zjištěno, že polyalkylenglykol-polyurethanové kopolymery výrazně zvyšují penetraci velmi obtížně rozpustných imunosupresivních léčiv přes rohovku. Tento jev <r byl prokázán u očních přípravků, kdy výše uvedená léčiva jsou vpravena v přítomnosti řečených kopolymerů jak do hydrofilních tak do hydrofobních, fyziologicky nezávadných ^;;; vehikul.

S překvapením bylo rovněž zjištěno, že léčivé přípravky podle vynálezu s obsahem excípientů polyalkylenglykol-polyurethanových kopolymerů nepůsobí v použitelných koncentracích až do 10 hmotnostních % zvýšení oční dráždivosti, i když dochází k prokazatelnému zvýšení průniku terapeuticky účinných imunosupresivních léčiv do vnitřních očních struktur. Ani histologické vyšetření očních struktur po opakovaném podávání přípravků podle vynálezu nenaznačuje možnost jejich poškození. Naproti tomu projevy oční dráždivosti a toxicity jsou popsány již při aplikaci 0,1 % a vyšších koncentrací azonu, což je známá látka používaná ke zlepšení permeability léčiv oční rohovkou (Ismail I.M. et al., Pharm. Res., 9(6), 817-821, 1992).

Dosažení příznivých biologických vlastností je podmíněno kvalitativními vlastnostmi kopolymerů podle vynálezu, zejména reziduálními koncentracemi nezreagované diisokyanátové složky a příslušných polyalkylenglykolů. Typické vlastnosti kopolymerů jsou uvedeny v následuj ícím přehledu:

1SD/STU/PATENT/ROHOVKA * * * * · · · ··· · ···« ·· · · ·· ,· «*····· ·· ·

	kopolymer PPG-12/SMDI	kopolymer PPG-51/ SMDI	kopolymer PEG-8 / SMDI
mol. hmotnost (hmotn. průměr)	4000	18000	1800
viskozita mPa.S při 37°C	2500-4500	2500-6000	2500-5000
nezreagovaný diisokyanát	max. 0,1 %	max. 0,1 %	max. 0,1 %
Residuální obsah PPG obsah PEG	max. 20 %	max. 20 %	max. 20 %
obsah těžkých kovů	max. 20 ppm	max. 20 ppm	max. 20 ppm
obsah vody	max. 0,1 %	max. 0,1 %	max. 0,1 %

Polyalkylenglykol-polyurethanové kopolymery obsahují směs oligomerů, jejichž zastoupení vyjadřuje hodnota indexu „m“ v obecném vzorci, která Činí převážně 1 až 4.

Pro jednotlivé druhy vyráběných kopolymerů platí typické distribuce molekulových hmotností stanovených gelovou permeační chromatografíí. Například pro kopolymer PPG12/SMDI představuje podíl molekulových hmotností:

až 23 % (pro pík s molekulovou hmotností 1500 až 2000) ·. ·*·.

až 25 % (pro pík s molekulovou hmotností 2400 až 3300) &

až 45 % (pro pík s molekulovou hmotností >3700)

Oba typy kopolymerů obsahující v polyalkylenglykolové části koncové hydroxylové skupiny výrazně zvyšují deponování vzpomínaných léčiv do střední části rohovky (stromatu), která obsahuje vysoký podíl vody. V důsledku odstupňované lipofility frakcí kopolymerů s a.

rozdílnou molekulovou hmotností se v rohovce vytváří koncentrační gradient, který je >

příčinou toho, že ve vodě velmi těžce rozpustná imunosupresivní léčiva nejsou fixována jen v silně lipofilní vrstvě rohovkového epitelu tvořeného přibližně jen 5 horními vrstvami živých buněk.

Lipofilní oční vehikula tvoří jednak rostlinné nebo živočišné triacylglyceroly (např. ricinový, kukuřičný, sezamový případně rybí olej) a jejich hydrogenované formy. Uhlovodíkové směsi jako jsou např. nasycené uhlovodíky hexamethyltetrakosahexaen známé pod názvem vazelína nebo nenasycené rozvětvené uhlovodíky známé pod názvem squalen, či jeho hydrogenovaná forma - squalan mohou být v omezeném množství vpraveny také mezi triacylglyceroly. Do lipofilních vehikul se řadí rovněž strukturované lipidy tvořené triglyceryl estery se středně dlouhými acylovými zbytky C₈ až C_l2 v kombinacích s dlouhými acylovými zbytky C₁₄ až C₂₂. Také polyglyceryl estery mastných kyselin C,₄ až C₂₂, jejichž hodnota hydrofilně-lipofilní rovnovány (HLB) je menší než 6, mající olejovitý charakter jsou použitelné jako nedráždivá lipofilní oční vehicula. Rovně mastné alkoholy s délkou uhlovodíkového řetězce C₁₂ až C₂₃jsou k tomuto účelu použitelné.

Hydrofílní oční vehikula pro přípravky podle vynálezu jsou tvořena vodou nebo alkylenglykoly jako jsou zejména glycerol či polyethylenglykoly. Použitelné jsou rovněž

IS D/STU/PATENT/ROHO VKA

4 · * · 4 4 4 4

4 4 4 4 4 · 4

4 4 4 4 40 4444 4 4 4 blokové kopolymery ethylenoxidu s propylenoxidem, známé jako poloxamery nebo meroxapoly.

Oba typy očních vehikul jsou charakterizovány také tím, že při teplotách 15 až 37 °C mají kapalnou nebo polotuhou konsistenci.

Dodatkové excipienty mohou být přítomny ve vehikulech topických očních přípravků podle vynálezu v množství technologicky nezbytném a jejich volba je podmíněna výběrem konkrétní aplikační formy. V případě roztoků to jsou pro oko fyziologicky přijatelná rozpouštědla a solubilizační látky kapalné či polotuhé konsistence. U dispersních přípravků emulsních i suspensních to jsou navíc ještě stabilizační přísady přítomných fází. U více dávkových balení očních přípravků bývají obvyklé antimikrobiální přísady.

Jelikož molekulová hmotnost kopolymeru PEG-8/SMDI nepřesahuje 3000, je vhodné v přípravcích s hydrofilním vehikulem zohlednit jeho příspěvek k hodnotě osmotického tlaku a v případě potřeby obvyklým způsobem dodatkovými excipienty ionogenního nebo neionogenního charakteru upravit tonicitu.

Přehled obrázků na výkresech

Na připojených výkresech je graficky znázorněn vliv přísady 1 % kopolymeru PPG-51/SMDI v topických očních přípravcích podle příkladu 3 na absorpci ciklosporinu do rohovky (graf 1) vr a jeho průnik do duhovky (graf 2), komorové vody (graf 3) a uvey (graf 4). Ve skupinách ’ & pigmentovaných králičích samců i samic došlo k signifikantnímu zvýšení absorpce. Průměrně g se zvýšila koncentrace ciclosporinu po 12 aplikacích jedné kapky přípravku do oka proti kontrolám následně:

rohovka 3,30x; duhovka 5,24x ; komorová voda 5,08x a uvea 5,2x.

Je rovněž připojena tabulka I s uvedením schématu hodnocení reakce oka.

Příklady provedení vynálezu

V následujících příkladech provedení jsou uvedena možná složení přípravku podle vynálezu s léčivy ze všech typických skupin aniž by měla jakkoliv omezující význam.

Přikladl Oční kapky 1% 2%

Ciclosporin	1,000-kg	2,000 kg
Kopolymer PPG-12/SMDI	1,00 kg	1,00 kg
Diglyceryl monooleat	2,50 kg	5,00 kg
Chlorbutanol	0,50 kg	0,50 kg
Kukuřičný olej	do 100,00 litrů	do 100,00 litrů

Ve 100 1 kotli s magnetickým míchadlem typu Steridose Systems AB se smíchá kopolymer PPG-12/SMDI a diglyceryl.monooleat s kukuřičným olejem. Ve směsi se za obyčejné teploty rozpustí čerstvě přesublimovaný chlorbutanol a ciclosporin. Roztok se asepticky filtruje do

ISD/STU/PATENT/ROHOVKA vysterilizovaného zásobníku přes membránový filtr s odlučivostí 0,2 pm. Plní se do polyethylenových nádobek o objemu 5 ml na zařízení pracujícím systémem BFS.

Obě koncentrační varianty přípravku byly hodnoceny na oční dráždivost u králíků dle popsané metodiky.

Oční kapky podle příkladu provedení 1 s obsahem 1 % a 2 % ciclosporinu a jim odpovídající placeba bez kopolymeru byly hodnoceny na oční dráždivost metodikou doporučenou výborem ETAD pro toxikologii.

Oční kapky byly testovány vždy na 6 králících plemene novzélandský bílý. Zvířata byla konvenční kvality s hmotností 2,19 až 4,62 kg odpovídající jejich věku. Králíci byli ustájeni individuálně v kovových klecích a aklimatizováni na. podmínky, vivaria (teplota 22 ± 2 °C, relativní vlhkost vzduchu 50 až 70 %). Králíkům byla podávána· standardní krmná směs KKK/L a pitná voda ad libitum.

Oční kapky byly aplikovány jednorázově v množství 50 μΐ do každého oka, rozděleně do dvou po sobě následujících částí po 25 μΐ. Stav oka (spojivky, rohovky, duhovky a produkce slz) byl sledován před aplikací a 24,48 a 72 hodin po aplikaci. K vyšetření rohovky byl použit komerčně dostupný roztok fluoresceinu při modrém bodovém osvětlení. Po 24 hodinách byl do očí aplikován stejným způsobem a ve stejném množství fyziologický roztok. Změny na spojivce, rohovce duhovce a produkce slz byly hodnoceny podle schématu uvedeného v tabulce I. Kumulativní hodnoty změn zjištěných za 24, 48 a 72 hodin u všech 6 králíků jsou následující:

	1% oční kapky	2% oční kapky
Přípravek	Placebo	Přípravek	Placebo
Změny na rohovce [A x B x 5]	0	0	0	0
Změny na duhovce [Ax5]	0	0	0	0
Změny na spojivce [A x b x C] x 2	32	10	' 16	0
Výsledný stupeň dráždění	1,78 ·	0,56	0,89	0
Závěrečný posudek	nedráždí	nedráždí	nedráždí	nedráždí

ISD/STU/PATENT/ROHOVKA

Σ změn na rohovce, duhovce a spojivce

Výsledný stupeň dráždění =----------------------------------[3x6]

Klasifikace podráždění: výsledný stupeň 0 až 10 11 až 25 26 až 56 57 až 110

nedráždí lehce dráždí mírně dráždí silně dráždí

Příklad 2 Oční kapky A B (placebo)

Ciclosporin	2,000 g	2,000 g
Kopolymer PPG-51/SMDÍ	2,000 g	-
Decaglyceryl pentaoleat	5,000 g	5,000 g
Tokoferyl Iinoleat	0,700 g	0,700 g
Kukuřičný olej	do 100,000 ml	do 100,000 ml

U přípravků byla hodnocena snášenlivost při 19 denním podávání u psů dle popsané metodiky s histopatologickým vyšetřením a byla zhodnocena penetrace ciclosporinu do očních tkání.

K pokusu bylo použito 10 psů plemene Beagle - samců o stáří 12 až 16 měsíců. Psi byli v pravidelných intervalech ošetřeni. V příslušném období byli ošetřeni vakcinami Canvac, Dohyvac-Parvo a Lyscelin.

Zvířata byla umístěna individuálně v kotcích o rozměrech 0,9 x 1,0 m v konvenčních podmínkách. Krmena byla standardní peletovanou dietou Ro XIII v denní dávce 300 g na psa. Pitnou vodu měli psi k dispozici ad libitum.

Zkoušené přípravky - dle příkladu provedení 2 byly aplikovány čtyřikrát denně 5 psům (pokusná skupina) ve dvouhodinových intervalech na rohovku každého oka po jedné kapce kapátkem ze standardního balení. Po zakápnutí bylo lehkým sevřením víček docíleno rozprostření přípravku po rohovce. Kontrolní skupině (5 psů) bylo stejným způsobem aplikováno placebo. Oba přípravky byly aplikovány 19 po sobě následujících dní. Před začátkem aplikace a na konci aplikačního období bylo provedeno oňalmologické vyšetření Oční snášenlivost byla opět posuzována posuzována dle schématu v tabulce I, denně před první aplikací. Posuzována byla přítomnost a velikost případného zakalení rohovky (stupeň 0 až 4), stav a reakce duhovky (stupeň 0 až 2), přítomnost zarudnutí či otoku spojivek (stupeň 0 až 4) a přítomnost sekrece (stupeň 0 až 3). Varianty A i B byly klasifikovány jako nedráždivé.

Pro histopatologické vyšetření byli použiti dva psi, kterým byla do spojivkového vaku obou očí 4x denně aplikována 1 kapka přípravku dle příkladu provedení 2. Dále byl v pokuse pes kontrolní, kterému bylo stejným způsobem podáváno placebo. Pokus trval 19 dní.

Hodinu po poslední aplikaci byli psi utraceiii vykrvácením v thiopentalové narkóze. Oční —bulby -byly opatrně- vyjmuty z~ orbity a- fixovány - v~10%-neutrálním-fo rmolur Ostrou-žiletkou-------IS D/STU/PATENT/ROHOVKA byl proveden každým okem řez, který směřoval od vstupu očního nervu k okraji rohovky. Z většího očního segmentu byla pak pořízena lamela o šíři asi 8 mm, která obsahovala rohovku, pupilu, čočku a optický nerv. Vedle očního bulbu byla vždy ze zevní části orbity odebrána příslušná slzná žláza.

Histologické preparáty byly zhotoveny standardní parafínovou technikou, krájeny v síle asi 6 pm a barveny hematoxylinem-eosmem, metodou PAS na mukopolysacharidy, kresylovou violetí, alciánovou modří, metodou podle Van Giesona a Halle-Mullerovou technikou.

Na histotopogramech obou očních bulbů kontrolního psa ani u obou psů s aplikovaným přípravkem dle příkladu provedení č. 2 nebyly na žádné zachycené oční struktuře (rohovka, bělima, spojivka, cévnatka, sítnice, řasnaté tělísko, duhovka, čočka, přední a zadní oční komora, optický nerv, průřezy okohybných svalů a peribulbámí . pletivo) nalezeny žádné odchylky. Změněna nebyla ani spojivka vystýlající zadní plochu horního očního víčka ani slzná žláza.

Penetrace do očních tkání

V pokusu byly použity skupiny 4 psů Beagle ve stáří 12 až 16 měsíců. Třem z nich byl do obou očí aplikován přípravek A nebo B podle příkladu 2, specificky značený tritiovaným ciclosporinem s aktivitou 2 mCi/ml v množství 0,03 ml. Aplikace byly prováděny 4x denně ve dvouhodinových intervalech po dva dny, třetí den byl přípravek aplikován 3x. Celkemsbylo provedeno 11 aplikací. Čtvrtý pes obdržel ve stejném množství a frekvenci přípravek podle příkladu 2 bez specifického značení.

Hodinu po poslední aplikaci byli psi utraceni vykrvácením z velkých krčních cév v thiopentalové anestézii. Poté jim byly vyjmuty obě oči, včetně spojivek a slzných žláz. Pravé oči všech 4 psů byly zality 2% gelem karboxymetylcelulózy a zmraženy ve směsi n-hexan a suchý led pro autoradiografické vyšetření. Z levých očí byly odebrány vzorky 25 % jednotlivých tkání, zváženy a potom rozpuštěny v 1 ml 25% KOH ve 20% etanolu, Měření radioaktivity bylo provedeno na kapalně scintilačním spektrofotometru Wallac Rackbeta. Naměřené hodnoty aktivity (dpm) byly přepočítány na ng podané látky/g tkáně.

A B

	Prům. konc. (n = 3)	Směr. odch.	Prům. konc. (n = 3)	Směr. odch.
Rohovka	15743,4	± 2730,2	5100,2	± 1474,1
Spojivka	4350,2	± 192,3	750,0	± 97,7
Duhovka	633,5	± 62,2	120,9	± 44,5
Slzná žláza	146,6	± 44,1	30,8	± 23,0
Komorová voda	62,0	± 7,9	11,7	± 3,4

Ve sklivci, čočce, bělimě a sítnici se zjištěné hodnoty ciclosporinu pohybovaly na úrovni pozadí.

ISD/STU/PATENT/ROHOVKA • · · · to · · ···· *··· toto·· • to toto toto· ···· ···

Příklad 3 Oční kapky A . B

Ciclosporin	2,00 g	2,00 g
Kopolymer PPG-51/SMDI	1,00 g	-
Diglyceryl monooleat	4,00 g	5,00 g
Kukuřičný olej	do 100,00 ml	do 100,00 ml

Obě formulace byly označeny tritiovaným ciclosporinem v dávce 1 mBq/mg účinné látky. Oba přípravky byly aplikovány skupině 6 králíků o hmotnosti 3 až 3,5 kg tvořené 3 samci (M) a 3 samicemi (F). Přípravek A byl vkapáván do levého oka vždy na rohovku (nikoliv do spojivkového vaku).

Aplikace se prováděla každých 15 minut po dobu 3 hodin (celkem 12 aplikací) v množství 15 μΐ přípravku pomocí mikropipety (celkem 3,6 mg ciclosporinu). Za 15 minut po poslední aplikaci byla zvířata usmrcena, ze všech očí byla odebrána komorová voda a byla vypreparována rohovka, duhovka a uvea.

Vzorky tkání byly zváženy a upraveny pro měření radioaktivity na kapalinově scintilačním spektofotometrem Wallac Rackbeta. Naměřené hodnoty aktivity (dpm) byly přepočítány na koncentrace ng ciclosporinu /g tkáně.

Průměrné hodnoty tkáňových koncentrací ciclosporinu (n = 6) u obou přípravků jsou následující:

	A	B
Rohovka	14246,1 ng/g	5832,1 ng/g
Duhovka	915,9 ng/g	174,8 ng/g
Komorová voda	293,1 ng/g	57,8 ng/g
Uvea	107,4 ng/g	20,3 ng/g

Příklad 4 Oční mast

[Nva]²- ciclosporin	0,50 g
Kopolymer PPG-51/SMDI	2,00 g
RRR-a-tokoferol	0,40 g
Hydrogenový ricinový olej	26,9 g (CUTINA® HR fy HENKEL)
Ricinový olej	70,00 g

K vysterilizované směsi ricinového oleje a hydrogelovaného oleje se při teplotě 60 °C rozpustí tokoferol, kopolymer a účinná látka. Za tepla se zfiltruje za aseptických podmínek a plní se do tub s očním aplikátorem.

1SD/STU/PATENT/ROHOVKA ♦ ·♦ · ·

Příklad 5 Oční kapky

Sirolimiis	0,50 g
Kopolymer PPG-12/SMDI	1,00 g
Sorbitau trioleát	2,00 g
Askorbyl palmitát	0,02 g
Sojový olej	do 100,00 ml

Připravený roztok se filtruje přes přepážku s odlučivostí 0,2 pm a plní se do skleněných lahviček s očním aplikátorem.

Přiklad 6 Oční kapky

Dexamethazon	0,100 g
Kopolymer PEG-8/SDMI	6,000 g
PEG-50 stearát	5,000 g (Myij® 53 fy ICI)
K₂HPO₄	0,061 g
NaOH 0,1 M roztok	q.s. pH 6,9
Fenylethyl alkohol	0,300 g
Sterilní voda	do 100,00 ml

Připravený roztok se filtruje přes filtrační přepážku s odlučivostí 0,2 pm a plní se do polyethylenových nádobek s očním aplikátorem.

Průmyslová využitelnost

Vynález nachází uplatnění ve farmaceutickém průmyslu při výrobě topických očních přípravků. Přípravky dle vynálezu se vyznačují vysokým průnikem imunosupresivních léčiv do očních tkání a velmi dobrou snášenlivosti.

ISD/STU/PATENT/ROHOVKA • « • · · ····

Claims

1. Léčivé přípravky k topické oční aplikaci vyznačující se tím, že jsou tvořeny 0,02 až 5,0 % hmotnostními imunosupresivních léčiv rozpuštěných nebo dispergovaných ve fyziologicky přijatelném vehikulu obsahujícím do 10 % hmotnostních polyalkylenglykol-polyurethanových kopolymerů obecného vzorce I

R O O *

HO’(-CH-CH₂-O-) /^~ ^{r CH}“^{) 11} '°l·^ (I), kde n má hodnotu 8 až 51, m je převážně 1 až 4 a R je skupina CH₃ nebo vodík, případně spolu s dalšími excipienty obvyklými v topických aplikačních formách.

2. Přípravky podle nároku 1 vyznačující se tím, že při použití hydrofilního vehikula jsou polyalkylenglykol-polyurethanovými kopolymery poly(oxy-l ,2-ethandiyl)-a-hydro-cohydroxypolymery s l,r-methylen-bis-(4-isokyanatocyklohexanem) o průměrné molekulové hmotnosti 1000 až 3000.

3. Přípravky podle nároku 1 vyznačující se tím, že při použití lipofilního vehikula: jsou polyalkylenglykol-polyurethanovými kopolymery poly[oxy(methyl-1,2-ethandiyI)]-ahydro-Q-hydroxypolymery s l,r-methylen-bis-(4-isokyanatocyklohexanem) o průměrné molekulové hmotnosti 1600 až 18000.

4. Přípravky podle nároku 1 až 3 vyznačující se tím, že jako imunosupresivní léčiva obsahují léčiva patřící do skupin monocyklických undekapeptidů nebo makrolidových laktonů nebo kortikosteroidů, používaná buď jednotlivě nebo vzájemně libovolných směsích.

5. Přípravky podle nároku 1 až 4 vyznačující se tím, že jako imunosupresivní léčiva obsahují ciclosporin a/nebo [Nvaf-ciclosporin v množství 0,1 až 3,0 % hmotnostních a/nebo tacrolimus a/nebo sirolimus v množství 0,05 až 2,0 % hmotnostních a/nebo dexamethason a/nebo prednisolon v množství 0,02 až 1,0 % hmotnostních.

IS D/STWATENT/ROHOVKA

Cm

25000 • · • 9

Graf 2

Graf 3

O o o o O O o o o o o m CO N v

β/6ιι

Graf 4