CZ287497B6

CZ287497B6 - Topické oční přípravky s imunosupresivními látkami

Info

Publication number: CZ287497B6
Application number: CZ19974237A
Authority: CZ
Inventors: Milan Rndr. Stuchlík; Alexandr Rndr. Jegorov; Vladimír Ing. Csc. Maťha; Josef Ing. Stuchlík
Original assignee: Galena, A. S.
Priority date: 1997-12-30
Filing date: 1997-12-30
Publication date: 2000-12-13
Also published as: PL341604A1; HRP20000258A2; WO1999034830A1; SK284246B6; EP1058560A1; AU1481399A; CA2317010A1; JP2002500200A; BG104558A; HUP0004173A2; NO20003344L; NO20003344D0; SK171798A3; CZ423797A3

Abstract

Léčivé přípravky k topické oční aplikaci, obsahující 0,02 až 5,0 % imunosupresivních léčiv, patřících do skupin monocyklických undekapeptidů, makrolidových laktonů nebo kortikosteroidů ve vehikulu, obsahujícím do 10 % polyalkylenglykol-polyuretanové kopolymery. Tyto kopolymery jsou tvořeny v hydrofilním vehikulu s výhodou poly(oxy-1,2-ethandiyl)-.alfa.-hydro-.omega.-hydroxypolymery s 1,1'-methylen-bis-(4-izokyanátocyklohexanem) o střední molekulové hmotnosti 1000 až 3000 a v lipofilním vehikulu s výhodou poly[oxy(methyl-1,2-ethandiyl)]-.alfa.-hydro-.omega.-hydroxypolymery s 1,1'-methylen-bis-(4-izokyanátocyklohexanem) o střední molekulové hmotnosti 1600 až 18 000. Léčivé přípravky dále mohou obsahovat další excipienty, obvyklé v topických aplikačních formách.ŕ

Description

Topické oční přípravky s imunosupresivními látkami

Oblast techniky

Vynález se týká léčivých přípravků, určených k topické oční aplikaci lipofilních, imunosupresivních léčiv, rozpuštěných nebo dispergovaných ve fyziologicky vhodném vehikulu, obsahujícím excipienty, zvyšující průnik léčiv do očních tkání.

Dosavadní stav techniky

Za topickou oční aplikaci se považuje zevní podání léčivých přípravků do spojivkového vaku pod víčko a na rohovku, i injekční subkonjuktivální a retrobulbámí podání.

Účinnost topicky aplikovaných léčiv k léčení očních chorob je vedle anatomicko-fyziologických vlastností oka ovlivňována zejména fyzikálně-chemickými vlastnostmi léčiva a charakterem aplikační formy a jejím složením. Je všeobecně známo, že transport léčiv do očních tkání znesnadňují obranné mechanismy oka, jako je zvýšené slzení a mrkání, které snižuje koncentraci léčiva v prekomeální oblasti. Absorpci léčiva umožňuje prodloužený kontakt s rohovkou a schopnost léčiva penetrovat rohovkou. Biodostupnost léčiv po topické aplikaci na oko činí obvykle jen 1 až 10 % podané látky.

Typickými lipofilními, imunosupresivními léčivy, jež jsou užívána k léčení očních chorob, jsou např. protizánětlivé a imunosupresivně působící látky ze skupiny monocyklických poly-Nmethylovaných undekapeptidů, laktonových makrolidů nebo kortikosteroidů. Undekapeptidy, vhodné k léčení oka, tvoří skupina cyklosporinů, zejména ciclosporin, [Nva]²-ciclosporin, [Val]²-ciclosporin a dihydro[Val]²-ciclosporin.

Makrolidová antibiotika, vhodná k léčení očních chorob, představují zejména tacrolimus a sirolimus. Tacrolimus a jemu strukturálně podobné deriváty jsou souhrnně označovány jako askomyciny; sirolimus a jemu strukturálně podobné deriváty jsou souhrnně označovány jako rapamyciny.

Skupinu kortikosteroidů, používaných k topické aplikaci v očním lékařství, tvoří látky, jako jsou např. cortison a hydrocortison, prednisolon a methyl prednisolon, dexamethason a fluoromethalon.

Terapeutická účinnost vzpomínaných cyklosporinů při topické aplikaci je prokázána zejména při rizikových transplantacích rohovky a autoimunitních onemocněních, jako jsou keratokonjunktivitis sicca, chronická keratitis, Behcetův syndrom, Sjógrenův syndrom, endogenní uveitis, ale také ulcerativních chorob rohovky, jako je např. Morenův vřed.

Makrolidová antibiotika prokázala svoji vysokou imunosupresivní účinnost při orgánových i tkáňových transplantacích a jsou příslibem pro keratoplastiky. Kortikosteroidní léčiva jsou používána v terapii zánětů po očních operacích a rovněž tlumí imunologické reakce po transplantacích rohovky.

Všechny tři skupiny účinných látek, uváděné v tomto vynálezu, jsou podávány k léčení zánětlivých a autoimunitních chorob očí také systémovým způsobem. Pro závažné vedlejší účinky této léčby je však systémové podávání použitelné jen v omezené míře. Při racionální topické aplikaci lze snížit nebo vyloučit vedlejší účinky, spojené se systémovým podáním tím, že aktivita přípravku je soustředěna jen na ošetřovanou lokalitu a její nejbližší okolí.

Léčiva ze skupin N-metylových cyklických undekapeptidů, makrolidových laktonů a kortikosteroidů jsou ve své neionizované formě jen velmi málo rozpustná ve vodě nebo hydrofilních nosi

-1 CZ 287497 B6 čích, fyziologicky přijatelných pro oční aplikaci. To prakticky znesnadňuje přípravu klasických hydrofilních očních kapek. Pro ilustraci, rozpustnost skupiny cyklosporinů ve vodě se pohybuje v rozmezí 16 až 30 pg/ml při 25 °C, přičemž polárnější molekula [Thr]²-ciclosporinu je ve vodě více rozpustná než méně polární [NVa]²-ciclosporin. Pro vzájemné posouzení lipofility účinných látek z uvedených skupin lze použit hodnotu rozdělovacího koeficientu P mezi vodnou fázi a lipofilní fázi, představovanou n-oktanolem. Pro kortikosteroidní léčiva leží např. hodnota log P mezi 1,2 (prednisolon) až 4,3 (flurbiprofen). Ve skupině cyklosporinů se pohybuje log P pro imunosupresivně aktivní látky mezi 1,1 až 3,1. Pro askomyciny a rapamyciny nejsou hodnoty rozdělovačích koeficientů publikovány, ale lze předpokládat z údajů o rozpustnosti ve vodě, že budou srovnatelné s cyklosporiny.

Jedny z prvních patentů, věnovaných oční topické aplikaci léčiv ze skupiny cyklosporinů jako metodě léčení fakoanafylaktických endoofitalmitid a uveitid v předním a zadním očním segmentu nebo očních chorob, projevujících se sníženou produkcí slz, jsou US patenty 4 649 047 a 4 839 342. Oba patenty blíže nespecifikují aplikační formu a předpokládají použití roztoků, suspenzí i mastí s farmaceuticky přijatelným vehikulem, obsahujícím rostlinné, živočišné, minerální a silikonové oleje; liposomy a dále pak alkoholy, dimethylsulfoxid a polyoxyethylovaný ricinový olej. Ve zmíněných patentech nejsou ani v příkladech provedení ani v patentových nárocích zveřejněny hmotnostní poměry vhodných excipientů.

Ke skupině kortikosteroidů, cyklosporinů a antibiotik k oční aplikaci se vztahuje US patent 4 865 846, chránící transportní systémy, ve kterých jsou roztoky léčiv v kapalném nebo masťovém základě přítomny spolu s částicemi biodegradibilních materiálů, obsahujících tatáž nebo i jiná léčiva, a způsob přípravy těchto transportních systémů. Z příkladů provedení tohoto patentu vyplývá, že příprava trojrozměrných částic o velikosti 0,4 až 1,0 mm z bioerodibilních materiálů, jako jsou kolagen, želatina, polyvinylalkohol a methylcelulózové deriváty, suspendace těchto částic v kapalném nebo masťovém základě i způsob vpravení léčiv do těchto bioerodibilních částic je velmi pracný a málo vhodný pro validovatelný výrobní postup.

Topické přípravky k aplikaci na oko a přilehlé tkáně obsahující cyklosporiny ve vehikulu, složeném ze směsi rostlinných olejů a vazelíny, jsou popsány v UK patentu 2 224 205. Léčivé přípravky, vyrobené postupy, popsanými v tomto patentu, však obsahují jako emulgátory látky, založené zejména na steroidních látkách z ovčí vlny. V současné době je již zaznamenán odklon od používání těchto látek pro možné alergizující a dráždivě účinky možných insekticidních reziduí, obsažených v tuku v ovčí vlny.

Oční přípravky s nízkými koncentracemi cyklosporinů ve vodném vehikulu, obsahující tenzidy ze skupiny polyethoxylovaných esterů mastných kyselin, polyethoxylovaných alkyletherů a polyethoxylovaných alkylfenyletherů, popisuje mezinárodní přihláška vynálezu WO 93/23010. Emulzní oční formulace se specifickou afinitou k slzným žlázám, obsahující cyklosporiny, popisuje mezinárodní přihláška vynálezu WO 95/31211.

Euacidní a izotonické nanoemulze, vhodné k aplikaci, obsahující 0,01 % až 5 % léčiv, mezi nimiž jsou kortikoidy i cyklosporiny, popisuje evropská patentová přihláška EP 0 696 452 Al. Žádný z těchto výše uvedených patentů neřeší konkrétní problém zvýšení penetrace léčiva přes rohovku do vnitřních očních struktur, jako je komorová voda, duhovka, případně uvea.

Podstata vynálezu

Vynález si klade za cíl zvýšit prostupnost rohovkou u topicky aplikovaných léčiv a docílit tak terapeuticky účinných hladin léčiva ve vnitřních tkáních oka použitím zvláště vhodných pomocných látek v léčivých přípravcích. Tento úkol je mimořádně ztížen u léčiv, velmi obtížně rozpustných v tělních tekutinách a tkáních. Za léčiva, velmi obtížně rozpustná ve vodě, se považují látky, které potřebují k rozpuštění 1 hmotnostního dílu 1000 až 10 000 objemových dílů

-2CZ 287497 B6 vody. Takovými léčivy jsou zejména imunosupresiva ze skupiny monocyklických undekapeptidů, reprezentovaná ciclosporinem nebo [Nva]²-ciclosporinem, ze skupiny laktonů s makrolidovou strukturou, reprezentovaná sirolimusem nebo tacrolimusem a ze skupiny kortikoidů, reprezentovaná např. prednisolem nebo dexamethasonem.

Předmětem vynálezu jsou topické oční přípravky s imunosupresivními látkami, které jsou podle vynálezu charakterizovány přítomností 0,02 až 5,0 % hmotnostních imunosupresivních léčiv, rozpuštěných nebo dispergovaných ve fyziologicky přijatelném vehikulu, obsahujícím do 10 % hmotnostních polyalkylenglykol-polyurethanových kopolymerů obecného vzorce I

kde n je 8 až 51, m je 1 až 4 a R znamená skupinu CH₃ nebo H.

Z chemického hlediska správné CAS názvy těchto látek jsou dále v popisu vynálezu uváděny zkráceně v CTFA nomenklatuře:

CAS názvosloví	CTFA názvosloví
Póly (oxy l,2-ethandiyl)-a-hydro-m-hydroxy polymer s 1,1 -methylen-bis-(4-izokyanátocyklohexanem) CAS No. 39444-87-6	kopolymer PEG-8/SMDI
Poly[oxy (methyl l,2-ethandiyl)]-a-hydro-co-hydroxy polymer s 1,1 '-methylen-bis-(4-izokyanátocyklohexanem) CAS No. 9042-82-4 CAS No. 9042-82-4	kopolymer PPG-12/SMDI kopolymer PPG-51/SMDI

V CFTA názvosloví odpovídá zkratkám PEG a PPG označení polyethylenglykol a polypropylenglykol a zkratce SMDI označení saturovaný methylendifenyldiizokyanát.

Tyto látky jsou uváděny do oběhu např. pod obchodním názvem Polyolprepolymer-2 (kopolymer PPG-12/SMDI); Polyolprepolymer-14 (kopolymer PPG-51/SMDI) a Polyolprepolymer-15 (kopolymer PEG-8/SMDI) a jsou vyráběny firmou PENEDERM Incorporated.

V dermálním použití jsou tyto kopolymery známé. Mají silnou aktivitu k pokožce a vytváří snadno depozita ve stratům comeum. Tím se vytváří dlouho přetrvávající kapalné rezervoáry léčiv mezi komeocyty a umožňují tak protrahované působení léčiv v pokožce.

Použití polyolprepolymerů v dermálních a kosmetických přípravcích chrání např. US patenty

971 800, 5 045 317 a 5 051 260.

Přes značně odlišnou anatomickou skladbu pokožky od anatomické skladby oční rohovky bylo s překvapením zjištěno, že polyalkylenglykol-polyurethanové kopolymery výrazně zvyšují penetraci velmi obtížně rozpustných imunosupresivních léčiv přes rohovku. Tento jev byl prokázán u očních přípravků, kdy výše uvedená léčiva jsou vpravena v přítomnosti řečených kopolymerů jak do hydrofilních, tak do hydrofobních, fyziologicky nezávadných vehikul. ⁵ překvapením bylo rovněž zjištěno, že léčivé přípravky podle vynálezu s obsahem excipientů polyalkylenglykol-polyurethanových kopolymerů nepůsobí v použitelných koncentracích až do 10 hmotnostních % zvýšení oční dráždivosti, i když dochází k prokazatelnému zvýšení průniku

-3CZ 287497 B6 terapeuticky účinných imunosupresivnich léčiv do vnitřních očních struktur. Ani histologické vyšetření očních struktur po opakovaném podávání přípravků podle vynálezu nenaznačuje možnost jejich poškození. Naproti tomu projevy oční dráždivosti a toxicity jsou popsány již při aplikaci 0,1 % a vyšších koncentrací azonu, což je známá látka, používaná ke zlepšení permeability léčiv oční rohovkou (Ismail I. M. et al., Pharm. Res., 9(6), 817-821,1992).

Dosažení příznivých biologických vlastností je podmíněno kvalitativními vlastnostmi kopolymerů podle vynálezu, zejména reziduálními koncentracemi nezreagované diizokyanátové složky a příslušných polyalkylenglykolů. Typické vlastnosti kopolymerů jsou uvedeny v následujícím přehledu:

	kopolymer PPG-12/SMDI	kopolymer PPG-51/SMDI	kopolymer PEG-8/SMDI
mol. hmotnost (hmotn. průměr)	4000	18 000	1800
viskozita mPa.S při 37 °C	2500-4500	2500 - 6000	2500 - 5000
nezreagovaný diizokyanát	max. 0,1 %	max. 0,1 %	max. 0,1 %
Reziduální obsah PEG	max. 20 %	max. 20 %
obsah PEG	-	-	max. 20 %
obsah těžkých kovů	max. 20 ppm	max. 20 ppm	max. 20 ppm
obsah vody	max. 0,1 %	max. 0,1 %	max. 0,1 %

Polyalkylenglykol-polyurethanové kopolymery obsahují směs oligomerů, jejichž zastoupení vyjadřuje hodnota indexu „m“ v obecném vzorci, která činí převážně 1 až 4.

Pro jednotlivé druhy vyráběných kopolymerů platí typické distribuce molekulových hmotností, stanovených gelovou permeační chromatografíí. Například pro kopolymer PPG-12/SMDI představuje podíl molekulových hmotností:

až 23 % (pro pík s molekulovou hmotností 1500 až 2000), až 25 % (pro pík s molekulovou hmotností 2400 až 3300), až 45 % (pro pík s molekulovou hmotností > 3700).

Oba typy kopolymerů, obsahující v polyalkylenglykolové části koncové hydroxylové skupiny, výrazně zvyšují deponování vzpomínaných léčiv do střední části rohovky (stromatu), která obsahuje vysoký podíl vody. V důsledku odstupňované lipofility frakcí kopolymeru s rozdílnou molekulovou hmotností se v rohovce vytváří koncentrační gradient, který je příčinou toho, že ve vodě velmi těžce rozpustná imunosupresivní léčiva nejsou fixována jen v silně lipofilní vrstvě rohovkového epitelu, tvořeného přibližně jen 5 horními vrstvami živých buněk.

Podle vynálezu je výhodné, jestliže při použití hydrofilního vehikula jsou polyalkylenglykolpolyurethanovými kopolymery poly(oxy-l,2-ethandiyl)-a-hydro-a>-hydroxypolymery s 1,1'methylen-bis-(4—izokyanátocyklohexanem) o střední molekulové hmotnosti 1000 až 3000, a při použití lipofilního vehikula jsou polyalkylenglykol-polyurethanovými kopolymery poly[oxy(methyl-1,2-ethandiyl)]-a-hydro-<o-hydroxypolymery s 1,1 '-methylen-bis-(4-izokyanátocyklohexanem) o střední molekulové hmotnosti 1600 až 18 000.

Přípravky podle vynálezu výhodně jako imunosupresivní léčiva obsahují léčiva, patřící do skupin monocyklických undekapeptidů nebo makrolidových laktonů nebo kortikosteroidů, používaná buď jednotlivě nebo se vzájemně libovolných směsích, přednostně ciclosporin a/nebo [Nva]²ciclosporin v množství 0,1 až 2,0 % hmotnostních a/nebo tacrolimus a/nebo sirolimus v množství

-4CZ 287497 B6

0,05 až 2,0 % hmotnostních a/nebo dexamethason a/nebo prednisolon v množství 0,02 až 1,0 % hmotnostních.

Lipofilní oční vehikula tvoří jednak rostlinné nebo živočišné triacylglyceroly (např. ricinový, kukuřičný, sezamový, případně rybí olej) a jejich hydrogenované formy. Uhlovodíkové směsi, jako jsou např. nasycené uhlovodíky hexamethyltetrakosahexaen, známé pod názvem vazelína, nebo nenasycené rozvětvené uhlovodíky, známé pod názvem squalen, či jeho hydrogenovaná forma - squalan, mohou být v omezeném množství vpraveny také mezi triacylglyceroly. Do lipofilních vehikul se řadí rovněž strukturované lipidy, tvořené triglyceryl estery se středně dlouhými acylovými zbytky C₈ až C_]2 v kombinacích s dlouhými acylovými zbytky C₎₄ až C₂₂. Také polyglyceryl estery mastných kyselin Cj₄ až C₂₂, jejichž hodnota hydrofílně—lipofilní rovnováhy (HLB) je menší než 6, mající olejovitý charakter, jsou použitelné jako nedráždivá lipofilní oční vehikula. Rovněž mastné alkoholy s délkou uhlovodíkového řetězce Cj₂ až C₂₃ jsou k tomuto účelu použitelné.

Hydrofilní oční vehikula pro přípravky podle vynálezu jsou tvořena vodou nebo alkylenglykoly, jako jsou zejména glycerol či polyethylenglykoly. Použitelné jsou rovněž blokové kopolymery ethylenoxidu s propylenoxidem, známé jako poloxamery nebo meroxapoly.

Oba typy očních vehikul jsou charakterizovány také tím, že při teplotách 15 až 37 °C mají kapalnou nebo polotuhou konzistenci.

Dodatkové excipienty mohou být přítomny ve vehikulech topických očních přípravků podle vynálezu v množství technologicky nezbytném a jejich volba je podmíněna výběrem konkrétní aplikační formy. V případě roztoků to jsou pro oko fyziologicky přijatelná rozpouštědla a solubilizační látky kapalné či polotuhé konzistence. U disperzních přípravků emulzních i suspenzních to jsou navíc ještě stabilizační přísady přítomných fází. U více dávkových balení očních přípravků bývají obvyklé antimikrobiální přísady.

Jelikož molekulová hmotnost kopolymeru PEG-8/SMDI nepřesahuje 3000, je vhodné v přípravcích s hydrofilním vehikulem zohlednit jeho příspěvek k hodnotě osmotického tlaku a v případě potřeby obvyklým způsobem dodatkovými excipienty ionogenního nebo neionogenního charakteru upravit tonicitu.

Přehled obrázků na výkresech

Na připojených výkresech je graficky znázorněn vliv přísady 1 % kopolymeru PPG-51/SMDI v topických očních přípravcích podle příkladu 3 na absorpci ciklosporinu do rohovky (graf 1) a jeho průnik do duhovky (graf 2), komorové vody (graf 3) a uvey (graf 4). Ve skupinách pigmentovaných králičích samců i samic došlo k signifikantnímu zvýšení absorpce. Průměrně se zvýšila koncentrace ciclosporinu po 12 aplikacích jedné kapky přípravku do oka proti kontrolám následně:

rohovka 3,30x; duhovka 5,24x; komorová voda 5,08x a uvea 5,2x.

Je rovněž připojena tabulka I s uvedením schématu hodnocení reakce oka.

Příklady provedení vynálezu

V následujících příkladech provedení jsou uvedena možná složení přípravku podle vynálezu s léčivy ze všech typických skupin, aniž by měla jakkoliv omezující význam.

-5CZ 287497 B6

Příklad 1

Oční kapky 1% 2%

Ciclosporin	1,000 kg	2,000 kg
Kopolymer PPG-12/SMDI	1,00 kg	1,00 kg
Diglyceryl monooleát	2,50 kg	5,00 kg
Chlorbutanol	0,50 kg	0,50 kg
Kukuřičný olej	do 100,00 litrů	do 100,00 litrů

Ve 100 1 kotli s magnetickým míchadlem typu Steridose Systems AB se smíchá kopolymer PPG12/SMDI a diglyceryl monooleát s kukuřičným olejem. Ve směsi se za obyčejné teploty rozpustí čerstvě přesublimováný chlorbutanol a ciclosporin. Roztok se asepticky filtruje do sterilizovaného zásobníku přes membránový filtr s odlučivostí 0,2 μπι. Plní se do polyethylenových nádobek o objemu 5 ml na zařízení, pracujícím systémem BFS.

Obě koncentrační varianty přípravku byly hodnoceny na oční dráždivost u králíků dle popsané metody.

Oční kapky podle příkladu provedení 1 s obsahem 1 % a 2 % ciclosporinu a jim odpovídající placeba bez kopolymerů byly hodnoceny na oční dráždivost metodikou, doporučenou výborem ETAD pro toxikologii.

Oční kapky byly testovány vždy na 6 králících plemene novozélandský bílý. Zvířata byla konvenční kvality s hmotností 2,19 až 4,62 kg, odpovídající jejich věku. Králíci byli ustájeni individuálně v kovových klecích a aklimatizováni na podmínky vivaria (teplota 22 ± 2 °C, relativní vlhkost vzduchu 50 až 70 %). Králíkům byla podávána standardní krmná směs KKK/L a pitná voda ad libitum.

Oční kapky byly aplikovány jednorázově v množství 50 μΐ do každého oka, rozděleně do dvou po sobě následujících částí po 25 μΐ. Stav oka (spojivky, rohovky, duhovky a produkce slz) byl sledován před aplikací a 24, 48 a 72 hodin po aplikaci. K vyšetření rohovky byl použit komerčně dostupný roztok fluoresceinu při modrém bodovém osvětlení. Po 24 hodinách byl do očí aplikován stejným způsobem a ve stejném množství fyziologický roztok. Změny na spojivce, rohovce duhovce a produkce slz byly hodnoceny podle schématu, uvedeného v tabulce I. Kumulativní hodnoty změn, zjištěných za 24,48 a 72 hodin u všech 6 králíků jsou následující:

	1% oční kapky	2% oční kapky
Přípravek	Placebo	Přípravek	Placebo
Změny na rohovce [A x B x 5]	0	0	0	0
Změny na duhovce [Ax5]	0	0	0	0
Změny na spojivce [A x b x C] x 2	32	10	16	0
Výsledný stupeň dráždění	1,78	0,56	0,89	0
Závěrečný posudek	nedráždí	nedráždí	nedráždí	nedráždí

Σ změn na rohovce, duhovce a spojivce

Výsledný stupeň dráždění = ---------------------------------[3x6]

-6CZ 287497 B6

Klasifikace podráždění:

výsledný stupeň	0 až 10	nedráždí
	11 až 25	lehce dráždí
	26 až 56	mírně dráždí
	57 až 110	silně dráždí

Příklad 2
Oční kapky	A	B (placebo)

Ciclosporin	2,000 g	2,000 g
Kopolymer PPG-51/SMDI	2,000 g	-
Decaglyceryl pentaoleát	5,000 g	5,000 g
Tokoferyl linoleát	0,700 g	0,700 g
Kukuřičný olej	do 100,000 ml	do 100,000 ml

U přípravků byla hodnocena snášenlivost při 19 denním podávání u psů dle popsané metodiky s histopatologickým vyšetřením a byla zhodnocena penetrace ciclosporinu do očních tkání.

K pokusu bylo použito 10 psů plemene Beagle - samců o stáří 12 až 16 měsíců. Psi byli v pravidelných intervalech ošetřeni. V příslušném období byli ošetřeni vakcínami Canvac, DohyvacParvo a Lyscelin.

Zvířata byla umístěna individuálně v kotcích o rozměrech 0,9 x 1,0 m v konvenčních podmínkách. Krmena byla standardní peletovanou dietou Ro XIII v denní dávce 300 g na psa. Pitnou vodu měli psi k dispozici ad libitum.

Zkoušené přípravky - dle příkladu provedení 2 byly aplikovány čtyřikrát denně 5 psům (pokusná skupina) ve dvouhodinových intervalech na rohovku každého oka po jedné kapce kapátkem ze standardního balení. Po zakápnutí bylo lehkým sevřením víček docíleno rozprostření přípravku po rohovce. Kontrolní skupině (5 psů) bylo stejným způsobem aplikováno placebo. Oba přípravky byly aplikovány 19 po sobě následujících dní. Před začátkem aplikace a na konci aplikačního období bylo provedeno oftalmologické vyšetření. Oční snášenlivost byla opět posuzována dle schématu v tabulce I, denně před první aplikací. Posuzována byla přítomnosti a velikost případného zakalení rohovky (stupeň 0 až 4), stav a reakce duhovky (stupeň 0 až 2), přítomnost zarudnutí či otoku spojivek (stupeň 0 až 4) a přítomnost sekrece (stupeň 0 až 3). Varianty A i B byly klasifikovány jako nedráždivé.

Pro histopatologické vyšetření byli použiti dva psi, kterým byla do spojivkového vaku obou očí 4x denně aplikována 1 kapka přípravku dle příkladu provedení 2. Dále byl v pokuse pes kontrolní, kterému bylo stejným způsobem podáváno placebo. Pokus trval 19 dní.

Hodinu po poslední aplikaci byli psi utraceni vykrvácením v thiopentalové narkóze. Oční bulby byly opatrně vyjmuty z orbity a fixovány v 10% neutrálním formolu. Ostrou žiletkou byl proveden každým okem řez, který směřoval od vstupu očního nervu k okraji rohovky. Z většího očního segmentu byla pak pořízena lamela o šíři asi 8 mm, která obsahovala rohovku, pupilu, čočku a optický nerv. Vedle očního bulbu byla vždy ze zevní části orbity odebrána příslušná slzná žláza.

Histologické preparáty byly zhotoveny standardní parafínovou technikou, krájeny v síle asi 6 pm a barveny hematoxylinem-eosinem, metodou PAS na mukopolysacharidy, kresylovou violetí, alciánovou modří, metodou podle Van Giesona a Halle-Můllerovou technikou.

Na histotopogramech obou očních bulbů kontrolního psa ani u obou psů s aplikovaným přípravkem dle příkladu provedení č. 2 nebyly na žádné zachycené oční struktuře (rohovka, bělima, spojivka, cévnatka, sítnice, řasnaté tělísko, duhovka, čočka, přední a zadní oční komora, optický nerv, průřezy okohybných svalů a peribulbámí pletivo) nalezeny žádné odchylky. Změněna nebyla ani spojivka, vystýlající zadní plochu horního očního víčka, ani slzná žláza.

Penetrace do očních tkání

V pokusu byly použity skupiny 4 psů Beagle ve stáří 12 až 16 měsíců. Třem z nich byl do obou očí aplikován přípravek A nebo B podle příkladu 2, specificky značený tritiovaným ciclosporinem s aktivitou 2 mCi/ml v množství 0,03 ml. Aplikace byly prováděny 4x denně ve dvouhodinových intervalech po dva dny, třetí den byl přípravek aplikován 3x. Celkem bylo provedeno 11 aplikací. Čtvrtý pes obdržel ve stejném množství a frekvenci přípravek podle příkladu 2 bez specifického značení.

Hodinu po poslední aplikaci byli psi utraceni vykrvácením z velkých krčních cév v thiopentalové anestézii. Poté jim byly vyjmuty obě oči, včetně spojivek a slzných žláz. Pravé oči všech 5 psů byly zality 2% gelem karboxymethylcelulózy a zmraženy ve směsi n-hexan a suchý led pro autoradiografické vyšetření. Z levých očí byly odebrány vzorky 25 % jednotlivých tkání, zváženy a potom rozpuštěny v 1 ml 25% ΚΌΗ ve 20% ethanolu. Měření radioaktivity bylo provedeno na kapalně scintilačním spektrofotometru Wallac Rackbeta. Naměřené hodnoty aktivity (dpm) byly přepočítány na ng podané látky/g tkáně.

A B

	Prům. konc. (n = 3)	Směr. odch.	Prům. konc. (n = 3)	Směr. odch.
Rohovka	15 743,4	± 2730,2	5100,2	± 1474,1
Spojivka	4350,2	± 192,3	750,0	± 97,7
Duhovka	633,5	± 62,2	120,9	± 44,5
Slzná žláza	146,6	± 44,1	30,8	± 23,0
Komorová voda	62,0	± 7,9	11,7	± 3,4

Ve sklivci, čočce, bělimě a sítnici se zjištěné hodnoty ciclosporinu pohybovaly na úrovni pozadí.

Příklad 3

Oční kapky A B

Ciclosporin	2,00 g	2,00 g
Kopolymer PPG-51/SMDI	1,00 g	-
Diglyceryl monooleát	4,00 g	5,00 g
Kukuřičný olej	do 100,00 ml	do 100,00 ml

Obě formulace byly označeny tritiovaným ciclosporinem v dávce 1 MBq/mg účinné látky. Oba přípravky byly aplikovány skupině 6 králíků o hmotnosti 3 až 3,5 kg, tvořené 3 samci (M) a 3 samicemi (F). Přípravek A byl vkapáván do levého oka vždy na rohovku (nikoliv do spojivkového vaku).

Aplikace se prováděla každých 15 minut po dobu 3 hodin (celkem 12 aplikací) v množství 15 μΐ přípravku pomocí mikropipety (celkem 3,6 mg ciclosporinu). Za 15 minut po poslední aplikaci byla zvířata usmrcena, ze všech očí byla odebrána komorová voda a byla vypreparována rohovka, duhovka a uvea.

-8CZ 287497 B6

Vzorky tkání byly zváženy a upraveny pro měření radioaktivity na kapalinově scintilačním spektrofotometru Wallac Rackbeta. Naměřené hodnoty aktivity (dpm) byly přepočítány na koncentrace ng ciclosporinu/g tkáně.

Průměrné hodnoty tkáňových koncentrací ciclosporinu (n = 6) u obou přípravků jsou následující:

A B

Rohovka	14 246,1 ng/g	5832,1 ng/g
Duhovka	915,9 ng/g	174,8 ng/g
Komorová voda	293,1 ng/g	57,8 ng/g
Uvea	107,4 ng/g	20,3 ng/g

Příklad 4

Oční mast

[Nva]²-ciclosporin	0,50 g
Kopolymer PPG-51/SMDI	2,00 g
RRR-a-tokoferol	0,40 g
Hydrogenový ricinový olej	26,9 g (CUTINA® HR fy HENKEL)
Ricinový olej	70,00 g

K sterilizované směsi ricinového oleje a hydrogelovaného oleje se při teplotě 60 °C rozpustí tokoferol, kopolymer a účinná látka. Za tepla se zfiltruje za aseptických podmínek a plní se do tub s očním aplikátorem.

Příklad 5

Oční kapky

Sirolimus	0,50 g
Kopolymer PPG-12/SMDI	1,00 g
Sorbitan trioleát	2,00 g
Askorbyl palmitát	0,02 g
Sojový olej	do 100,00 ml

Připravený roztok se filtruje přes přepážku s odlučivostí 0,2 pm a plní se do skleněných lahviček s očním aplikátorem.

Příklad 6

Oční kapky

Dexamethazon	0,100 g
Kopolymer	6,000 g
PEG-50 stearát	5,000 g (Myrj® 53 fy ICI)
K₂HPO₄	0,061 g
NaOH 0,1 M roztok	q.s. pH 6,9
Fenylethyl alkohol	0,300 g
Sterilní voda	do 100,00 ml

-9CZ 287497 B6

Připravený roztok se filtruje přes filtrační přepážku s odlučivostí 0,2 pm a plní se do polyethylenových nádobek s očním aplikátorem.

Průmyslová využitelnost

Vynález nachází uplatnění ve farmaceutickém průmyslu při výrobě topických očních přípravků. Přípravky dle vynálezu se vyznačují vysokým průnikem imunosupresivních léčiv do očních tkání a velmi dobrou snášenlivostí.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Topické oční přípravky s imunosupresivním i látkami, vyznačující se tím, že jsou tvořeny 0,02 až 5,0 % hmotnostními imunosupresivních léčiv, rozpuštěných nebo dispergovaných ve fyziologicky přijatelném vehikulu, obsahujícím do 10% hmotnostních polyalkylenglykol-polyurethanových kopolymerů obecného vzorce I (I), kde n má hodnotu 8 až 51, m je 1 až 4 a R je skupina CH₃ nebo vodík, případně spolu s dalšími excipienty, obvyklými v topických aplikačních formách.
2. Přípravky podle nároku 1, vyznačující se tím, že při použití hydrofilního vehikula jsou polyalkylenglykol-polyurethanovými kopolymery poly(oxy-l,2-ethandiyl)-ahydro-o-hydroxypolymery s l,l'-methylen-bis-(4-izokyanátocyklohexanem) o střední molekulové hmotnosti 1000 až 3000.
3. Přípravky podle nároku 1, vyznačující se tím, že při použití lipofiln ího vehikula jsou polyalkylenglykol-polyurethanovými kopolymery poly[oxy(methyl-l,2-ethandiyl)]-ahydro-ca-hydroxypolymery s l,l'-methylen-bis-(4-izokyanátocyklohexanem) o střední molekulové hmotnosti 1600 až 18 000.
4. Přípravky podle nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že jako imunosupresivní léčiva obsahují léčiva, patřící do skupin monocyklických undekapeptidů nebo makrolidových laktonů nebo kortikosteroidů, používaná buď jednotlivě nebo ve vzájemně libovolných směsích.
5. Přípravky podle nároků laž4, vyznačující se tím, že jako imunosupresivní léčiva obsahují ciclosporin a/nebo [Nva]²-ciclosporin v množství 0,1 až 2,0 % hmotnostních a/nebo tacrolimus a/nebo sirolimus v množství 0,05 až 2,0 % hmotnostních a/nebo dexamethason a/nebo prednisolon v množství 0,02 až 1,0 % hmotnostních.