CZ422598A3 - Protein ihnibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace - Google Patents

Protein ihnibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace Download PDF

Info

Publication number
CZ422598A3
CZ422598A3 CZ984225A CZ422598A CZ422598A3 CZ 422598 A3 CZ422598 A3 CZ 422598A3 CZ 984225 A CZ984225 A CZ 984225A CZ 422598 A CZ422598 A CZ 422598A CZ 422598 A3 CZ422598 A3 CZ 422598A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
protein
ser
thr
sequence
asp
Prior art date
Application number
CZ984225A
Other languages
English (en)
Inventor
Martin Prof. Dr. Eilers
Andrea Buergin
Hans-Harald Prof. Dr. Sedlacek
Original Assignee
Hoechst Marion Roussel Deutschland Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoechst Marion Roussel Deutschland Gmbh filed Critical Hoechst Marion Roussel Deutschland Gmbh
Publication of CZ422598A3 publication Critical patent/CZ422598A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/635—Externally inducible repressor mediated regulation of gene expression, e.g. tetR inducible by tetracyline
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
    • C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals

Description

(54) Název přihlášky vynálezu:
Protein ihnibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace (57, Anotace:
Protein, který inhibuje buněčný protein p27, a tím ruší inhibici buněčné proliferace zásobovanou p27. Mutanty tohoto proteinu s dominantně interferujícím charakterem, odpovídající nukleové kyseliny, a také použití proteinu a nukleové kyseliny pro profylaxi a léčení nemocí. Konstrukt nukleové kyseliny obsahující uvedenou nukleovou kyselinu, vhodný pro genovou terapii nemocí.
• ·
Rlbur-V
K.
176 668/KB
Protein inhibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace
Oblast techniky
Předkládaná přihláška se týká proteinu, který inhibuje buněčný protein p27, a tím ruší inhibici buněčné proliferace způsobenou p27, jeho mutanty s částečně dominantně interferujícím charakterem, příslušné nukleové kyseliny kódující takové proteiny a také použití proteinu a nukleové kyseliny k profylaxi a léčení nemocí.
Dosavadní stav techniky
A) Úvod
Buněčný cyklus eukaryotické buňky je řízen kinázami závislými na cyklinu („cyclin-dependent kinase = cdk), což jsou kinázy, které pro svou aktivitu potřebují jednu regulační podjednotku (cyklin). Různé procesy v buněčném cyklu (gako např. replikace, vstup do mitózy) jsou řízeny různými druhy cdk (Morgan, Nátuře 374, 1312, 1995). Přitom aktivita kináz závislých na cyklinu je vysoce regulovaná. Existují vnitřní řídicí mechanismy, které zabraňují např. vstupu do mitózy, dokud není DNA úplně replikována. Řízení vnějšími faktory, jako jsou např. růstové faktory, existuje výlučně na začátku replikace DNA, kdy je replikace iniciována aktivním komplexem „cyklin E/cdk2.
Kromě množství cyklinu na kinázové podjednotce je aktivita kináz závislých na cyklinu regulována ještě malým ínhibitorovým proteinem (Sherr a Roberts, Gene Dev. 9, 1149,
1995). Pro komplex „cyklin E/cdk2 se rozeznávají dva «
Β Β * ♦ · 1 « « « »Β Β · Β • Β Β ΒΒΒΒ « · · · I • · «4 · 1
V buňkách,
V mne ha 11ds kýoh nádore;
rusn načneme expr: imovany
kons-11 utivně (Sherr, Science
reoulát orv isou často mutovány
et al., Cell 8 5, 73 3, 1936).
tax uapr. v mnonyen naoorecn
gerču; cy klinu Dl. Z toho v/^hc^.
cvkli nu bv mohly být c í lov
* X -*·
novýcn, selektivně úči nných,
látek.
;značují podle své velikosti p2i a p27, rámují vysoké množství p27, je kináza „cvklin E/cdk2 normálně inaktivní a tím je vstup do fáze replikace DNA blokován.
:h jsou pozitivní regulátory nebo alespoň exprmcvány 2 7-1, 1572, 1996) , negativní nebe exprimovány s1Existuje specifické se ziišfuje nadměrná exprese e kinázy závislé na .i při hledání účinných, antiproliterativně působících
Gen pro protein p27 je znám již několik let (K. Poivak a je přístupný v databázi í naděje, ze a;
c L 31 , , Cell 73,
Ge nočiiik (myš í P27
K 10906/ . : p řes
ΓίΊ' ί Γ'. α C S v oe: cu
preuvapivej intenzivní hledat t27 v lidských nebyly dosud nalezeny nádorech. To je tím ze myši, u Kterycn je gen p27 ma.K
j. v e v --i 11 vvkuzu i enotyp s recetnou dysp_azii a zvýšeným výskytem nádorů (ero et al . , Cell 85, 73 3, 1996, Kiyokawa et al . , Cell, S5, 72 1, 1995) . Místo toho je zřejmě funkce p27 v podstatě regulována postranskripčně.
Protein p27 je proteolyticky odbouráván, což se děje také v normálních buňkách na začátku replikace. Schopnost proteolyticky odbourávat p27 je v mnohých nádorech zvýšena ve srovnání s normálními buňkami, a toto zvýšení vykazuje přímou korelaci s nepříznivou prognózou (Loda et al. , Nátuře Med. 3, 231, 1997).
Ale musí existovat ještě další mechanismy, které mohou vést k inaktivaci p27. Např. po transformaci buněk' onkogonem • « * · «» · · ·♦ • ·« ·
myc je p27 nejdříve funkčně
na komplex „cykl1n/cdk), ale
Posud n n ' j a sně , proč např .
exprimováno vysoké množství
naoo r v ve j. π 1 i rychle r0stou.
p27 v těcbt 0 buňkách jsou dos;
Proč. Nati. Acad. Sci. USA 34,
v jedné řadě r.ádorů prsu je iroteinu p27, a přesto tyto Mechanismy, které inaktivují neznámé ÍFredersdorf ez a:..
V odborném světě je tudíž velký zájem, aby byly objeveny mechanismy, popřípadě látky, které jsou zodpovědné za inaktivaci p27 v nádorech. Pomocí předkládaného vynálezu je tento problém řešen. Protein plS3, popsaný v přihlášce předkládaného vynálezu, může vázat p27, inhibovat funkci p27 a vést k proteolýze p27 v cytoplazmě.
Podstata vvnálezu
B) Obecný popis vynálezu
1’ Protein pló3 a příslušná sekvence nukleová kyseliny
Předmětem vynálezu je nový protein zvaný p!53, k váže p27, a tím inhibuje jeho funkci a vede k proteo v cytcplazme. Sekvence aminokyselin tohoto proteinu s f a n o v e n z Protein pí 63 se specificky váže na p27, aniž by v a z a x na j i ne ρ r o t. e i u y j ano jsou 11a o i . /n v c, max, lcj. prc t hy mo 3 in - ci.
Předmětem vynálezu je dále sekvence nukleové kysel která kóduje protein pl63. Tato sekvence je stanovena myší protein p!63 a prostřednictvím srovnání sekvencí pro lidský protein pl63.
c o
1, pro l ak^ • * ·
I · · · · · • · ♦ • ♦ · « « · b « V · ·
21 Dor.ir.án:ní negativní analogy pl63
Předmětem předkládaného vynálezu jsou také nukleotidové sekvence, které kódují částečný peptid z p!63 a/nebo analogu pló3, což je negativně působící protein, tj . protein, který inhibuje vazbu přirozeného proteinu pl63 na protein p27, narušilo vazbu orotemu p27 na
Dodstatr.·;
a. trn DoaminenoG mniDici komcmexu také použiti servence nuk^í aniž by to bylo „cyklin E/cdk2, „cyklin E/cdk2.
Předmětem vvnálezu kyseliny, která kóduje dominantní negativní mutantní pI33 nebo jeho částečné sekvence, přičemž použití obsahuje zavedení této sekvence nukleové kyseliny do cílové buňky a inhibici vazby mezi vlastním proteinem pl63 této buňky a vlastním proteinem p27 této buňky, takže proliferace uéto cílové buňky je ínhibována volným vlastním proteinem p27.
funkci plř3 . Patří sem prot e my nebo pept ií
na vazebné místo proteinu p!6 3 pro prot
vazebné mís to prot einu p!63 pro ran (Lceb <
3) Peptidy inhibující pl63
Předmětem předkládaného vynálezu jsou také nukleotidové sskver.ce, které kódují proteiny nebo peptidy, které inhibuji idy, ktere se vaz· i p2 7 nebo na al . , Mo] . Ce 11.
3iol . 4, 2C9-222, 1 993) , a tím inhibují vnitřní buněčný protein pl63 .
K takovým proteinům patří peptidy, které odpovídají vazebnému místu proteinu p27 nebo proteinu ran pro protein p!63. K těmto proteinům patří také protilátky nebo fragmenty protilátek, jako např. F(ab)2, Fv a s.c.Fv se specifitou proti proteinu p!63, zvláště pak proti jeho vazebnému místu pro protein p27.
Předmětem vynálezu je dále použití sekvence nukleové kyseliny kódující takové inhibiční proteiny nebo peptidy, • 9 · · * * * * * « * t * · · * * • · * · * pr;ce;‘2 ocsanuje zaveíem těchto sekvenci nuK.eove kyseliny do cílové buňky a inhibici vazby mezi vlastním buněčným proteinem p!63 a vlastním buněčným proteinem p27 neoo ústním buněčným proteinem ran, takže proliferaci cílové buňrO, .nhibovana voiuvm buněčným Droteinem o;
i; Použití p’i63 oro stimulaci buněčného dělení
Předmětem předkládaného vynálezu je dále použití nukleotidové sekvence kóduiící protein ρ·163 nebo samotného proteinu p!63 pro inhibici vnitřního buněčného proteinu p27, a cím ke stimulaci buněčného dělení cílové buňky.
5) Inhibice transkripce a translace pl63
Předmětem předkládaného vynálezu je také sekvencí transkrioci a/nebo nukleové kyseliny nu.cleové kyseliny, která i vlastní buněčné i nnibuj e sekvence kódující p!63, a tím vede k výskytu volného proteinu p27, což způsobuje inhibici proliferace cílové buňky. Takové sekvence nukleové kyseliny podle cředkládaného vynálezu může představovat např. antisense triplex DNA (trojsroubovícová DNA s orientací proti smyslu transkripce), antisense RNA (RNA. s orientací proti smyslu transkripce) a/nebo ribozymy/.
testovací systémy k vyhledávání inhibitorů pl63
Předmětem vynálezu je dál
OOUZitl SČKVĚÍÍC včelíny kódující protein pi63 nebo jeho částečné sekvence oro tes;
;y sterny, 'e kterých so vyhledávací inhibitory vazby mezi proteinem pl.63 a proteinem p27 nebo proteinem ran a také použití inhibitorů proteinu pl63, nalezených v těchto systémech, pro inhibici proliferace cílové buňky.
• · · v · · • » · · • · · • v « · ·
7) Detekce pl63 pro účely diagnostiky onemocnění
Předmětem vynálezu je dále použití konstruktů nukleové kyseliny kódujících protein p!63 nebo částečné sekvence proteinu plS3 nebo p< proteinových sekvenc:
. í sekvencí nukleové k’· icrera ςο na /sei my
C / L.
nukleové kyseleny pro protein pl53, nebo proteinů, které se váží na protein pl53, k detekci nukleové kyseliny kódující plil nebo k detekci proteinu p!63 v buňce nebo tkáni nebo tělesné tekutině pro účely stanovení proiiferaČníhc stavu buňky nebo tkáně nebo pro diagnózu stavu onemocnění.
Příklady provedeni vynálezu
C) Podrobnější popis vynálezu formou příkladů
1) Charakterizace proteinu pl63 a sekvence nukleové kyseliny kódující protein pl63
Protein p!63 byl objeven pomocí metody dvou hybridů („ Tvo-hybridtechnology, Fields a Song, Náturo 340, 245,
1933) jako partnerský protein proteinu p27 . Celá kódující ctecim ramen faktoru GAL 4.
Mate hrna k e r T wc sekvence myšího proteinu p27 byla klonována pomocí kvasinkového vektoru pG3T10 (Clontech) i? DNA - vči 7. dorr.enou LzTcinsKylc-Ční Ne
Kvasinkový kmen HÍ7c {Clontech Heidelberg
Hybrid, K 1605-1) byl transformován tímto vektorem, kolonie auxocrožní na tryptofan byly izolovány a exprese správného iúzního proteinu byla prokázána westernovým přenosem pomocí specifických protilátek proti C-AL 4 a p27.
Tento kmen byl· ve druhé transformaci transformován cDNA-kmhovnou z myšího embrya označenou VP16 (Vojtek et al., Cell 74, 205, 1993). 400 kolonií, které byly auxotrofni na histidm v přítomnosti 15nM aminotriazolu, bylo nadále » * • · »»*·** «· «· anriiyzovar.o .
K O Ci C \r Cl i V 27 LI Z partneři p2 7 těchto klonů bylo sekvenccván klony byly úpí V j edné cyklmy typu D, což jsou známí int
Pomocí Southernova přenosu bylo prokázrezistentních klonů kódovalo D-cykliny. iů (číslo 163 í kódová y shodný protein, s o k v e n o o v á n y .
knihovně λΖΑΡ-cDKA připravené }alb/c-3T3 bylo identifikováno několik klonů, ktt k p!63. Sekvenční analýza ukázala jeden ur.oiogni 'A
Evo a
čtecí rámec, který byl využit také v chiméře VP1-5 z ·knihovny. Oba původní klony kódovaly aminokyseliny 121 252 tohoto čtecího rámce. Kionv pi63 charakterizovány pomocí reportérového β-galaktosidázu v kvasinkách.
Jak ukazuje tab. 1, kódovaný protein v kvasinkách reagoval specificky s p27, avšak nikoliv s jinými proteiny jako např. myc, max, bel-6 nebo prothymosin-a. Tab. 1 je také první vymezení domény p27, ve které dochází pI63. Tato data ukazují na to, že pl63 sc vážná stejnou doménu p27 jako kinázy závislé na cyklinu (Russo et al., Nátuře 362, 325, 1995). To ukazuje, že pi63 a kinázy ia p 2 7 . Dome na p 15 3 ,
D'/U/ cenu mo uk ;a cyklinu kompetují o vazbu cterá vstupuje do interakce s iminokyselinami 121 až 252.
póž j- v y~ / j- 'ri 27 b V V 3 Σ Ó KLI Z d2 7 .
VV!
Κ V Li 31Π KO ·/té OO 3 v S byl exprimovaný rekombinantní pl63 (exprimovaný jako fúzní protein s glutaf hiontrar.sf erázou GST) navázán na kolonu a pak pomocí afinitní chromatografie s proteinem p27 označeným ''S na této koloně vyčištěn. Použitím fúzníhc proteinu pl63 s glutathiontransferázou (GST) bylo možné používat pro tyto experimenty jednotnou matrix {tzv.
• · * ' · · t · · · » * · · :o£
Proč. Nat aca<
přestavc λ ;
9:
tv experimenty byl čtecí ranec z kvasinkového klonu do vektoru pGEX (Pharmacia, Freiburg :nrmericky protein noci ΐορτ kontroiou promoto
3tejnym zpusocer také dialvzována,
DGEX-27, č. 27-4301-01), který kóduj' s glutatbion-S-transferázou (GST TAC i ndu kováte i né ho IPTG v E. coli (Smith a Johnson, Gene 67, 31, 1933}. Chimérický protein z indukovaných kultur
E. coli byl přečištěn pomocí afinitni chromatografie na glutafhion-agaróze (Smith a Johnson, 1933) a pak dialyzovár. proti rozteku: lOOmM Tris-KCl, pH 7,5, lOOmM KCl, 2 0mM EDTA, 10% glycerol, 0,lmM PMSF. Pro kontrolu byl přečištěna glutathion-S-transferáza, čisté proteiny pak byly uloženy při -30 °C.
Následně bylo 10 pg obou proteinů inkubováno s 10 pg 3SA a 20 mg nasáklé C-ST-agarózy po 2 hodiny při 4 °C, poté byla agaróza odstředěna a dvakrát promyta v diaiyzačním pufru. Jako kontrola pro vazbu proteinu byl alikvotní díl· agarózy přímo ve zkušebním pufru povařen a navázané proteiny byly prokázány SDS-gelovou elektroforézou. Protein p27 označeny ' 'S-methionmem byl prioraven m vitro translaci (nedle nokynů výrobce: Proměna Mannheim, „TNT coupied / ·' ,4610) mkuboval se azanou agarózou 2 hodiny při 43C v celkovém objemu 2 00 μΐ v diaiyzačním pufru s 0,li NP-40, Agaróza rap byla čtyřikrát promyta diaiyzačním pufrem s 0,1% NP-40 a nakonec povařena ve zkušebním pufru s SOS. Navázané proteiny pak byly prokázány SDS gelovou elektroforézou a fluorografií.
V tab. 2 jsou uvedeny výsledky těchto pokusu. Ty dokládají, že rekombinantní p27, syntetizovaný in vitro a označený 3 5S, se váže na kolonu, naplněnou chimérickým fúzním proteinem GST-pl63, ale neváže se na kolonu, která je * · · « « · t · · « · · , · · · množstvím samotné GS. Tab. 2 také zeno extra.· váže neúčinně na GČT extraktu je totiž p27 vázán na komple;
závislé na cyklinu. Krátké 7. takových komplexů a dovolí působení teplem uvolní p27 pak vazbu na ol63. To dokládá,
N<
:avi na cyklinu komnatu’
T1 r7
Nukleotidová sekvence podle předkládaného νγη,ί která kóduje myší protein plS3, je uvedena v tab. 3
K této istuie nomcioc v dataoazi, n 2 ÍNup2) kvasinky. Nup2 j rr λ-Q tý nembrány, který se podílí na vytváření jaderného proteinu i na transportu proteinů z jádra a do jádra. Nup2 se i kvasinkách podílí asi především na exportu.
Více funkčních domén je konzervativních, ačkoliv ;sikové homoiogie není nijak vysoká (viz tab. 4) . Tak např. je mezi ran-vazebným proteinem (R3?-l), Nu?-2 a pl63 (viz rab. 5) konzervováno vazebné místo pro regulátorový protein protein), který remiki j aaerný stejně tak krátká jolyklcnáln
Aby se prokázalo, že v případě p!63 se bezpochyby jedná uk’! eopcrin, bylo připraveno a afmitně přečištěno antisérum proti proteinu (histidin-pl63, 121 az 252). Toto sérum zcela nesporně ozeznávající nukieoporin, bylo v i mu r.o f luorescenční m testu iditclné jako typické zabarvení jaderných pórů (obarvené tečky na povrchu a v periferii jádra).
K prokázání mtracelul ární ho spojení mezi pi63 nebo ůp2 a p27 byly oba proteiny přechodně exprimovány v buňkách eLa pomocí CMV-vektoru, po 48 hodinách byly buňky lyžovány vyšetřovány na možné interakce obou proteinů pomocí • φ φ · imunocrecipitace a westernového přenosu (Peukert et al. , EMBO J. , 16, 5572, 1997) . Asociace p27 a Nup2 byla prokázána pomocí polyklonálních protilátek proti Nup2 a proti myšímu p27. Protein p27 precipitoval dobře jen tehdy, byl-li exprimován pi63 (viz tab. 7) . To je průkaz toho, že Nup2 a p2 7 se mohou navzájem asociovat v HeLa buňkách in vivo.
srovnáváni sekvenci •ohledávání databáze lidských :lonů EST vedlo k identifikaci sekvence idského proteinu p!63. Vazebná doména pro ran pvi·; sekvenci AA1S1285 v nožicích 175 až nukleové kyseliny bx az r i 5 , vazeona nesněna sekvence R52312 a další fragment z pI63 je v sekvenci THC199124 v pozici 348 až 435.
Aby se podrobněji definovalo, které aminokyseliny z p2 7 se účastní interakce s Nup2-pl63, byl v kvasinkách vyhledán mutant, který již nereagoval s pl53. Pro tento účel se cDNA kódující p27 podrobila PCR-reakei, která záměrně indukovala ohyby (podmínky pro PCR byly dle „PCR Technology, Principles and
S L C C '< Γ. Ο Ω P171 :or DMA
Amp11ficac ions, výsledné klony, obsahující náhodné chyby, byly testovány na interakci s Nup2 a pro kontrolu také s cyklínem Di. Pokud se nodmínky PCR lišil v cd publikace, pak byly následující: 40 vk
T?!''' j . τ ΠΊ (Μ ,··“ί q ! 1_ Tj T/rnrr - JýQ 1 Γ*Λ T7 *'/ C-ΣΞ^Ό cl 0 1 ''
Získané fragmenty cDNA byly prostřednictvím vektoru byl linearizován SamHT a EcoRI a vyčištěn, . C i. V l.J
ko transformovány do ke nasinkov
Transf ormované kolonie byly
s chybějícím Leu a Trp (-Leu-T:
na me a i u jednotlivých kolonií, které se vysely opět na selektivní médium (-heu-HisTrp) selektivním médiu, β-galaktosidázový test
S klony, které nerostly na tomto byl proveden ještě další coby druhý test interakce. Negativní «· · klony byly identifikovány a z nich byl izolován piazmid pG3T10-p27. Takto získané plazmidy byly nejprve retransformovány pomocí kvasinkového expresního plazmidu, který exprimoval p!63/Nup2 jako chiméru s transakrivační doménou .v oro kot rolu retrans formovány clazmidem.
který exprimoval cyklin Dl jako chiméru s transakr. ivační doménou. Získaly se tak tři klony, které selektivně již nadále nereagovaly s Nup2, ale zato reagovaly s cyklir.em Dl, Tyto plazmidy byly společně s kontrolami sekvencovány.
Souhrnný přehled získaných fenotyoů je uveden v tab. 13. V tomto pokuse se projevuje interakce jako růst histidinu (-Trp-Leu-His, selektivní), (-Trp-Leu, neselektivní), ukazuje, že oba proteiny jsou v kvasinkách exprimovány. Z celkového počtu 1000 klonů byly nalezeny 3, které specificky nereagují s pl63-Mup2, zatímco reagují s cykimem Dl·. Sekvence jsou uvedeny v tab. 14. Všechny tři klony, na rozdíl od řady v nepřítomnosti zatímco kontrola
kontrcln ícn klonů, , nesou stejnou mutaci v amine ky se11 ně
argini nu 90 (mutován na glycin) . Sekvence také ukazuj ί , že
klony vz nikl’/ nezá visle, neboť nesou další, rozdílné mutace.
T ί ΩΊ S 6 zřetelně definoval argmin 9Q jako centrální
erninokys elina při vzájemném působení p27 a Nup2. Mutanty
j sou k dispozici pro ověření biologické relevance této
interak;
2) Nukleotidové sekvence pro dominantní negativně působící analogy proteinu p!63
Funkčními analýzami popsanými v předchozím textu byly poznány dvě domény proteinu p!63, které jsou rozhodující pro jeho funkci.
Jedna doména je specifická doména (aminokyseliny 121 až
52) pro vazbu na p27. Druhou doménou je doména • · • » t « · · « • · · · · · · .anir-OKysí
307 -457.1 pro vazbu na ran, GŮP prccem, Který reguluje transportní funkci.
Předmětem předkládaného vynálezu jsou proto i sekvence nukleové kyseliny pro protein pl63 nebo části tohoto proteinu, přičemž tyto sekvence nukleové kyseliny vykazují mutace ve vazebné doméně pro p27 a/nebo vazebné doméně pro ran, takže vazba exprimovaného mutovaného proteinu s p27 nebo ran je drasticky snížena. Takové analogy p!63 zavedené do buňky inhibuji funkční buněčný protein pl63 . Tím zůstává p27 volný, což vede k inhibici buněčného dělení. Příklady takových dominantních negativních mutantú pí63 jsou uvedeny v t.ab. 8 a 9, Tab. 8 ukazuje p!63 s deleoí vazebné domény pro p27, tab. 9 ukazuje pl63 bez vazebné domény pro ran.
Předmětem vynálezu je také použití dominantních negativních analogů plo3 v buňce s cílem proliteraci této buňky.
a vazeona aomena pro ran Dalším příkladem protilátek jako F (,oí.1d} ·,, oi63, zviasté oak na
3) Nukleotidové sekvence proteinů nebo peptidů, které se váží na vazebné domény p!63
Popsaným způsobem zkoumání byla určena vazebná doména proteinu pl63 pro p27 v úseku aminokyselin 121 až 252 úseku aminokyselin 307 až 467. jsou protilátky nebo fragmenzy
Fab, Fv nebo s.c.Fv, které se váží na vazennou doménu pi63 pro p2/ něco vazebnou doménu pro ran. Takové protilátky se mohou získat např. imunizací zvířat vazebnou doménou pi63 pro p27 nebo vazebnou doménou pro ran. Tyto domény jsou znázorněny v tab. 5 (ran-vazebná doména) nebo tab. 10 (p27-vazebná doména).
4· · ♦ · » · · · · * · · · · · · · • · · · « ···«··· ··
4) Mukleotidové sekvence pl63 prc stimulaci buněčného dělení
Zavedení nukleotidové sekvence pro pl63 nebo samotného proteinu pl63 dc buňky vede k inhibici intracelulárního p27.
Tím je komplex „cyklin E/cdk2 (který je inhibován p27) volný, což iniciuje buněčné dělení.
♦ · 4 * • · · • · · * * · · • « · · ·
5j Nukleotidové sekvence pro inhibici transkripce a/nebo translace proteinu pl63
Znalost nukleotidové sekvence proteinu plS3 poskytuje možnost připravit oligonukleotidy, jimiž může být specificky inhibována transkripce nebo translace pl63. K takovým, nukleovým kyselinám typu antisense patří oligonukleotidy, antisense triplex DNA, ribozymy nebo antisense RNA. Způsob přípravy triplexových oligonukleotidů DNA je podrobně popsán v Frank-Kamenetski a Mirkm, Ann· Rev. Biochem. 64, 65, 1995 a způsob přípravy antisense oligonukleotidů je popsán v Neckers et al . , Crit. Rev. Oncogen 3, 175, 1992, Carter a Lemoi:
Br. J. Cancer 67, 859, 1993, Mukhdopadhyay a Roth, Crit. Rev. Oncogen 7, 151, 1996 a Merccia a Cohen, Cancer Gene Ther. 2, 47, 1995.
Výhodné podle vynálezu je použití triplexové DNA nebo a antisense RNA oligonukleotidů, které s nukleotidovými sekvencemi pl63, a které částečně íoménu pro protein p27 (celkový úsek aminok v cl z tt O i l t.;...
Z Ώ Z > LXUU vazebnou domém úsek aminokyselin 307 až 467).
K nukleotidovým sekvencím, které inhibují transkripci a/nebo translaci pl63, patří dále ribozymy specifické pro oblast nukleotidové sekvence proteinu pl63. Způsob přípravy ribozymů je podrobně popsán v Burke, Nucl. Acids Mol. Biol. 8, 105, 1994, Chnstoffersen a Marr, J. Med. Chem, 38, 2023,
1995 a Scott et al . , Science 274, 2065, 1996. Výhodné jsou t* · · . · • · · · pca.e vyna-eza rmozymy, Ktere r.ycriQizu; i s nukieotídovymi sekvencemi ρ!63, které leží v rozmezí nukleotiaové sekvence vazebné domény pro protein p27 (aminokyseliny 121 až 252) nebo vazebné domény pro protein ran (aminokyseliny 307 až d. c c ' i átelnvcl nuxieot icovycn sexvenc; ribozymy jsou uvedeny v tab. 11.
Triplexová DNA, antiscnse RNA nebo ribozymy podat jako oligonukleotidy (připravené 'ní DNázami popřípadě RNázami způsoby oaoornikov viz v/še citovaná literacura) buďto m vitro do [KOALOU a chráněné proti i b- T r η ηη’/'Π i
kyseliny do buňky s
RNA nebo ribozymu
který by inhibeval
uskutečni t zoůsobem
cílových buněk nebe také in vivo injekcí nebo lokální aplikací.
Předmětem vynálezu je také zavedení konstruktu nukleové ílem, aby v buňce transkripcí antiscnse xnikl oligonukleotid podle vynálezu, oliferaci této buňky. Zavedení se může rf způsobem in vitro stejné jako in vivo.
Konstrukt nukleové kyseliny se do buňky zavede jako holá DNA nebo prostřednictvím nevirového vektoru nebo oomccí virového vektoru zoůsobem odborníkovi známým.
:stovaoí systémy pro Objevení proteinu
-1 - ϊξ 2... l L·1 .i 1 a C J Z... a j a vyhledávání inhibitorů pl63 p!63 a jeho vzájemného působ hledat inhibitory tohoto vzájsmn stovaci systémy, ve a proteinem p!63 být prostřednictvím působení. Proto jsou zapotřebí taková te kterých je vazba mezi proteinem p27 inhibována, a přitom tato inhibice může indikátoru sledována.
Je známo mnoho metod. Jedním z příkladů takové metody je test sledování dvou hybridů „two hybrid sereen assay” (viz oddíl Cl a tab. 1) .
• 0 « · I * « 4 9 · ·
I · · iemsqu ννι a: r: i r s;
(výhodně vazebná doména pro p27, /Alternativně se může ke systém, kde p!63 aminokyseliny 121 až 252) je navázán na pevnou fázi, inkubuje se s testovanou látkou a vazba testované látky se stanovuje prostřednictvím inhibice vazby označené vazebné partnerské molekuly pro p27 vazebnou doménu proteinu p!63. Tímto označeným vazebným partnerem. může proti látka specificky se vážící na vazebnou domén pló3 pro p27Stejným způsobem jako pro inhibitory vazby mezi ni 53 a p27 se mohou vytvořit testovací systémy pro inhibitory vazby mezi p!63 a ran, které lze pak využít pro testování.
Předmětem vynálezu je proto také použití sekvence nukleové kyseliny kódující protein. pl63 nebo část proteinu p!63 nebo použití proteinu p!53 nebo části tohoto proteinu pro vyhledávání inhibitorů p!63 .
/l pz / něco croteinu
7) Použití sekvence nukleové kyseliny pro p!63 nebo proteinové sekvence p!63 pro diagnostiku proliteračního stadia buňky nebo stavu onemocnění
Jak již bylo uvedeno v úvodu v oddíle A) , celá řada nádorů vykazuje zvýšenou mtracelulární koncentraci p27. Základem skutečnosti, že tyto nádory přesto proliferují, je to, Se funkce zvýšeného p27 je. inhibována. Ve smyslu tohoto vynálezu p!f>3 je specifickým inhibitorem p27. Průkaz tohoto inhibitoru v buňce umožňuje usuzovat na proliferační stav buňky. Toto usuzování může být velmi důležité, neboť, se např. může týkat určení malignity nádorové buňky nebo tkáno. Buněčnou smrtí dochází k uvolnění proteinu pl63. Průkaz plál v tělesných tekutinách dovoluje také soudit na proliferační a/nebo buněčnou smrtí začínající, tj . např. zánětlivé v procesy těle. Průkaz proteinu pl63 se muže uskutečnit fe fe • · v · · fe « · • · · fefe • fe · fefe · · • fefe · « « fe » fe • · • fefe · » « · »· * znacenc na vazcy prost: recrn: η:ν-τ
K Lakovým, specificky se vážícím látkám patří např, protein p27, protein ran a protilátky, např. protilátky získané imunizací zvířete proteinem pl63 nebo částečnou sekmeneí t cho co o ro t e i nu.
Průkaz mRNA oro pl63 v buňce nebo tkám je možné provést hybridizací sekvence nukleové kyseliny kódující pl63 s odpovídající mRNA. Zvýšení citlivosti takového průkazu je možné dosáhnout pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR·, která je odborníkům známa, a kterou lze amplifikovac (zmnožit) několik kopií hledané sekvence nukleové kyseliny pomocí tzv. páru oligonukleotidových primerů.
Příklady oligonukleotidových párů vhodných pro ampliřikaci a k prokázání sekvence nukleové kyseliny kódující pI63 jsou uvedeny v tab. 12a, 12b a 12c.
Průkaz RNA kódující pl63 je možný také např. fluorescenční hybridizací in sítu způsobem, který publikoval von Gussoni et al., Nátuře Biotechnol. 14, 1012, 1996.
Předmětem předkládaného vynálezu je také průkaz sekvence nukleové kyseliny kódující p!63 nebo proteinu p!63 pro určení prol i f eračrií ho stavu buňky nebo tkáně nebo pro průkaz proliřeračních nebo buněčnou smrži zahájených změn v z i v v m s ci v c z .
Předmět předkládaného vynálezu muže být stručně shrnut v následujících bodech:
l-Rrozein, který inhibuje ρ27, a tím ruší inhibici buněčné proliferace způsobovanou proteinem p27.
2)Protein podle bodu 1, který obsahuje sekvenci aminokyselin pl63 uvedenou v tab. 6 (sekvence identifikačního čísla 16) nebo její části.
t* » ' • ·· • · · t · ' • · · · ·
I « ·· • · · · * ·
a · *· • » * ···· * · ·· vidle bodu 2, kde části aminokyselinové sekvence
u. vybrány ze skupiny obsahující peptidy se i
sexvenci ancncKyselm v polonacn č. 2), v polohách 137 až 196 až 2 4 (sekvence id. (sekvence id. č. 4), v pohodách 215 až 265 (sekvence id. č. 6), v polohách 23:
Id v Dolohách 39:
(sekvence id. č. 10) a v polohách 307 až 469 (sekvence id. č. 12), vztaženo k číslování poloh podle tab. 6.
4} Protein, který se muže z proteinu, podle bodu 2. odvodit delecí funkčních domén, a ve kterém je ze sekvence id. č. 16 podle tab. 6 deletována (odstraněna, vazebná doména pro p27 nebo vazebná doména pro ran.
5) Protein podle bodu 4, který po delecí vazebné domény p27 poskytne protein s aminokyselinovou sekvencí podle tab. 8 (sekvence id. č. 13) a delecí vazebné domény ran poskytne protein s aminokyselinovou sekvencí podle tab. 9 (sekvence 1 d . č . 19).
6) Protein, který se může odvodit z proteinu podle bodu 2 delecí všech aminokyselinových sekvencí kromě úseku vazebné domény p27.
7) Protein podle bodu 6, který obsahuje sekvenci aminokyselin uvedenou v tab. 10 (sekvence id. č. 20),
3) Protein podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až 7, přičemž se jedná o odpovídající homologický protein nebo jdcovídaiící čas a sice clovei
9) Protein podle bodu 3, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci lidského homologu pl63.
10) DNA., která kóduje protein podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až 9.
11) DNA podle bodu 10, která
a) obsahuje nukleotidovou sekvenci uvedenou v tab. 3 · · ♦ ·
9 9
9
909 99·· • 9 9 * • 9 · »99 · · »· ♦ · • · · (sekvence id. č. 1) nebo její část, b) hybridizuje se sekvencí uvedenou v bode a) za stringentních (přísných) podmínek, nebo c! jeve srovnání se sekvencí uvedenou v a) změněna způsobem odpovídajícím degeneraci genetického kódu, .·: přesto kóduje stejnou aminokyselinovou sekvenci.
bodu 11 pro použití jako prime i DMA todl pro PCR, pricemz nukleoticcva sekver™ uifr.eru pro PCR y
1 a z ig.
id.
ze skupiny ocsanujici sekvence ra. c. uvedené v tab. 12a, sekvence id. č. uvedené v tab. 12b a sekvence id. č. uvedené v tab. 12c.
13) Použití DNA podle bodu 10 nebo 11 k prokázání a/nebo kvantifikaci p!63 mRNA v buňce a/nebo tkáni.
14) Použití podle bodu 13, kde se prokázání kvantifikace provede r.orthernovým přenosem.
a z
3 až
4:
a/nebo
15) Použití podle bodu 13, kde kvantifikace provede pomocí PCR.
16) Použití podle bodu 15, kde se prokázání a/nebo použije pro PCR prime podle bodu 12.
17) Použití podle bodu 13, kde kvantifikace provede pomocí hybricli zace .
13)Použití proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až 9 pro přípravu protilátky, která se na tento protein váže .
19) Protilátka a fragment této protilátky, které se váží na vazebnou doménu pro protein p27 proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až 9.
20) Protilátka a fragment této protilátky, které se váží na vazebnou doménu pro protein ran proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až 9.
;e prokázáni in a/nebo
Šitu »« « · •
ft* « «· · *··· lS nebo 2 0
21) Použití protilátky podie bodu proteinu podle jednoho nebo několika bodů 1 nebo v buňce, tkáni nebo tělní tekutině.
22) Antisense nukleová kyselina, která je komplementárn k části DNA podle bodu 1G nebo 11, přičemž tato část lež v úseku nukleotidů kódujícím aminokyseliny 121 až 467.
23) Antisense nukleová kyselina podle bodu 22, která j vybrána ze skupiny obsahující tripletní DNA, syntetick oligonukleotidy, antisense RNA a ribozymy.
neoo D ato buňka ~e antisense nukleové kyseliny podle bodu 2 pro mnioici proliferace ounky, pricemz s antisense nukieovou kyselinou v kontaktu in vitro nebo i n v i vo.
25) Konstrukt nukleové kyseliny kódující antisense nukieovou kyselinu podle bodu 22 nebo 23 pro inhibici proliferace buňky, kde DNA kódující antisense sekvenci nukleové kyseliny je spojena alespoň s jednou aktivační sekvencí, a pak je zavedena do cílové buňky jako holá DNA, nebo tako DNA vložená do nevirového vektoru nebo do virového vektoru.
26) Použití proteinů podle jednoho nebo několika bodů z bodů i až. 9, kdy se pro vyhledávání inhibitorů využije vzájemné působení mezi uvedeným proteinem a buněčným vazebným partnerem.
27) Použití podle bodu 26, kdy se využije systém dvou hybridů („ t wo - h y b r i d - s y s t e m ) .
28) Použití podie bodu 26, kdy se využije afinitní systém, ve kterém se na pevnou fázi váže pl63 nebo jeho vazebná doména pro p27, pevná fáze se pak inkubuje se zkoušenou látkou a nakonec se prostřednictvím proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1 až S stanoví inhibice vazby vazebného partnera s uvedeným proteinem.
·« · · » # · · ft« · ft 4 » · • · * ·
29)Použití podle bodu 23, kde vazebný partner ie vybrán ze skupiny obsahující p27 a ran.
30}Použití proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 3 až 9 jako inhibitoru funkce proteinu podle jednoho nebo několiku bodů z bodů 1, 2, 8 a 9.
31) Použití protilátky podle bodu 19 nebo 20 jako inhibitoru funkce proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů 1, 2, 3 a 9.
32) Konstrukt nukleové kyseliny obsahující DNA podle bodu 10 nebo 11 operativně spojenou s aktivační sekvencí, která umožňuje expresi proteinu podle jednoho nebo několika bodů z bodů i až 9 v buňce.
33) Použití konstruktu nukleové kyseliny podle bodu 32 pro stimulaci buněčné proliferace.
• « * * * • * · · · »
Tabulka 1
DNA- Partner. Partner. Aktivační Aktivita
vazebná molekula molekula doména galakto-
doména (GA14) I II (VP16) sidázy
p27 (1-198) - - -
+ p27 (1-198) - + -
+ p27 (1-198) p163 + +++
4- - p163 + -
+ Myc 262439 p163 + -
-i- Max p163 + -
4- p163 + -
Prothymosí
+ n p163 h -
+ LAZ3/Bcl6 p163 + +++
+ p27 (1-178) p163 4- +
+ p27 (1-94) p163 4~ +++
+ p27 (69- p163 + n.d.
+ 198) p27 (69-94) p163 (121 252) +++
p27 (1-193) > 0 · · • · · ·
0 ' 0* ·*
Tabulka 2
Na kolor; u naneseno: Vazba na kolonu af m.itn.í navázaným ·.
hromatograřie s
R úzn.í pro tem G1 u t a t h i o n -
d iutathion- trans feráza
r ransteráza -
p 16 3
rekotrhin an.tní p2 7 (značený ř + - a
J'ě)
buněčný· extrakt U) -
(RAT1 -Mv c RR) , obsahující
Oz7
buněčný extrakt
(RATl-My o ER), obsahující τ T -
o27 (zah řátý 95 cC, 2 mm)
cdk-2 -
(buněčný extrakt)
cdk- 4
(buněčný extrakt)
β · ·
Tabulka 3 ’ ,-y „ 1 r 3 ~c~--· cifikačním číslem 1 )
tcgaattggg CACCGGGCCC CCCCTCGAGG . C ί ’ i c c., CCATAAGCTT G A x AT C G AAT 60
TCGCGGCCGC T C G A Gi TACA AGATGGCGGC CCCGGGCGCT CTCTTCACCG TTCTGTAGCA 120
GCTTCGGGCT GAGCGGATGT CTCTTCTTGT CCTCAGTC-TC GG ACT CAGAG ACACACGGCT ISO
CCCGAGTTCT GCTGATCACG AAGTTCCCGG AGGCGCTCGA CGCACCGGAA TCTCCCAGCG 240
GCCGCGACCG CCGCCTCGGC CCTGCTCGCC GCGGCGCCGG GACTCCAGC.G TGATCGGCGG 30C
CGGCAGTCAA GGi iCACAAA AATGGCGAAG AGAGTTGCGG AG.-_-iG - AG - x Gactgacagg 3SC
AACTGGGATG AGGAACACGA AGTTGAAGAG A. GGGAAuriT TCTCAGTGGC CAGTGAGGAA 420
GTC AiG A.AGA ACAGAGCCGT AAAGAAGGCA AAGCGCAGAA ACGTxGGAx x TGAATCTGAT 4£2
rtG CuG z\k_'G G CCTTTAAAGG TTTCAAAGGT TTGGTTGTGC CTTCTGGAGx, A.GGAGGGTTT 540
TCTGGATTTG GTGGCTCTGG AGGAAAGCCT CTGGAAGC-AC 7GAC.AAATCG AAACAGCACA 6 DO
GACAATGCCA CGCCCTTCTC CAA7GTAA.AG ACAGCAC-CAG AC-CCCAAGGC AGCCTTTGGT ·’ Ct 33 J
TCTTTTGCTG TC-AATGGCCC TACTACCTTG G T G G f·. i / \ A A* G TTTCAAATCC AAAAACTAAT 720
GGGGACAGCA ATCAGCCGCC CTCCTCCGGC CCTGC7TCCA G7ACCGCCTG CCCTGGG.AAT 730
GCCTATCACA AGCAGCTGGC TGGCTTGAAC TGCTCCGTCC GCGATTGGAT AGTGAAGCAC 840
GTG AACA C AA ACCCGCTTTG TGACCTGACT CCCATTTTTA AAGACTATGA GAGATACTTG 900
GCGACGATCG AGAAGCAGCT GAGAATGGA GGCGGCnGCA G± i CiGAG η G CCrtGACAGAC 960
AGGGCGACGG CTGGAATGGA GCCTCCTTCC CTTTTTGGTT CAACAAAACT ACAGCAAGAG 1020
TCACCATTTT CATTTCATGG CAACAAAGCG GAGGACACAT CTGAAAAGGT GGAGTTTACA 1030
• · · • · • · * · · * *·«· »· • ·» ** * · • ·« *««
GCAGAAAAGA AA i C G G A. C G C A G C A. C ř A. G G A G C .u.A C AAG . G
A/\AA . - GAGA CCTCGGCTTT C-GGCTCGTTA AGCTCTGGCT
* C. GCTGGA.A GCTCCAGCTT G i T G G T AA_A GATGCTGCCC
CTGTTCTCTG CTAAAGCATC Ο;, AG.-.u i CCG CCAGG.AGGCG
GGTCAACAAG AGGAGAATGA CG.-l'. j C nC CC .AA G l? i A. G i G l· j
GATGCTTTCT ACTCCAAAAA ATGTAAACTA Ti TTA CAAGA
AAGGGTGi GG GGACCCTGCA TTTAAAACCC AC.AGC.AACTC
CGGGCAGACA CCAACCTAGG CAACATACTG CTG.AATGTTC
TGCACCCGCA CAGGAAAGAA CAACGTCCTT A i CG T C i G i G
GAGAAGCAGC CCACTCTCCC GGCCACCATG CTGATCCGGG
GATGAATTGC ACAAGATTTT A CTG GAG.AAA Aja G G i G C C i
GCATGTTC-CC ACGTTGCTGC TTCCCCTCCG TCCCTAACTT
TACTGTGACA TTCTGAGAAC TTCTAGGTAA CTTGAACTTT
ATAAATCCTT TCAGTGGCGG CCGCC-AATTC CTGCAGCCCG
GCGGCCGCCA CCGCGGTGGA GCTCCAGCTT TTGGGAGA
CCTCGTTTAG
CCCTAACTGG
AGAG T AAAGC
GCAGCAGCGA
TGACCGAAGT
AAGACAACGA
AGAAGACCCA
TGATCGCCCC
TCCCCAACCC i G AA G .A CG A G m,-,C i G?iC
AGTCACATTC
TGTGACGAAC
GGGGATCCAC
TTTCGGCAAC
GTTTTCATTC
AGCCTCTTCG
GTGCAGAGAT
AAA G G .-.A OG
ATTTAAAGAG
GCTCTTGGTG
CΆ.-ΛCA .GCCG
CCCACTCGAT
CGAGGATGCC
GCTGACCAAG
TTTCCTCTTC
ATTAAGGCCA
TAGTTCTAGA
1140
1200
60
1320
80
4 O
1500
1Ξ5Ο
1680
1740
1300
1350
1920
1953 • · · • · · • · · • · · ·
Tabulka 4 pl 63:
YNua2:
flAKRYAEKFLTCP.NWLEEDEYEEM 2 4 MA.KRVA + ++ O + + +
MAXAVADAQlCRFTyGSNESDOOV 2 4
P163:
YN’uc2 :
7 N Q ? ? S S G P A S S 7 A C ? G Ν A Υ Η X Q L A G L N C S N+ + G A ? + +L LN
1 N RAD G i G £ A Q V υ N S ? T 7 X S N S 3 L KA L N L Q • · ·
.. d. č . 2 i .d. č. 3) ? 1 6 3 :
YNuo2 vrdwivkrvntnplcdltpifkdyerylati 19 5 T-r 4- v ?L DL P-F ΥΞ Y* i FKAKVDDLVLGKPLADLRPLFTRYELYIKNI 130 ibCX. 10, C.
215 ATAGMFPPSLFGSTKLQQESPFSFXGNKAF.DT A + ? 5 7 + ?? G+ +
535 ANSS7SPAPSIPSTGFKFSLPFEQKGSQTTTN
SEKVFFTAFKKSDAAQGAT 265 K Ξ T E + +Q AT
DSKEESTTEATGNESQDA? 535 ' c_u.
1O. c. 7)
P163: 239 HGNKAEOTSEXVEFTAEKXSDAAQCATSASFSFG 272 +G + + + 4-D+ + +A + + AT +FSFG
YNuc2: 444 NGSSSKDSDK?SL?3AVDGENDKKEAIX?AFSFG 477 (Sek. id. č. 3)
c. 9)
P163 :
YNuo2 :
399 LGNILLNVTIAPNHPCTRTGXN^/LIVCVPNPPLDEXQPT 433 (Sek. id. Č. 10' +G N + L L N + + N + + ? DK T
5 MG NOT L Ν A 7 VO S F K Υ Ξ P LA? G N C N L KA ? 7 V A A □G KL VT 6 3· \ - V • fe · fefe · fefefe fe ·
Tabulka 5
?.?.?! (myš) 5
R3?l (člověk) 5 :rj?2p (kvasinka) sso pl63 (myš) 307
DSHADH27S7---Er,'A3£ST7H?--QFE?_L7S7?E---3 S Η A 3 X £ 7 S 7 Ξ Ν Λ 3 £ SIi 3 ? - - Q r E ?2. V S V Ρ E---SQ777N'LSXE---ES7T£A7GNESQDATX2DAT?EESXP
QSKAASSLFSAXA5E SPAGGGSSECP_3GEEEEh'3E??K7
R3P1 \ - 'V =
P3^1 t z ' ‘ · ·* ayc;
NL’?2o ' I .X v Ξ1 plfi 3 r j ,
R3 Ρ1
R3P1 NU?2p (kv: P1 6 3 1' r-fiV;
<2 ELXTLEZD Ε Ξ Ξ L F XXRAKLERFA S Ξ N 3 L ? Ξ δΥΕ ? RH G 3VYLLKH X <2 ΕIX 7 L EE3 Ε Ξ Ξ L F KMRAKLE RZA 5 Ξ N D L Ρ Ε XYk£? G 7 G 3 VKLLKH X ΐ N L Q G ££3 Ε V AL F 5 Q KA ÍCLM T EN A - - Ξ T X Ξ YL S R G 7 G Ξ MYLLX XXD W7EVK—EEDAFYSKXCKLEYXXDNEF----YZXG7G7LHL-KP7Ε X G 7 1 PT.T.RK3D K T LK_L - c ΑΝ?: Υ IT P M.u. £ L X ? - N A G S D RA '<Γη Ν 7 H 7 3
EXG7 ZALLERRDKTLKI-CANHΥ1TPMXELKP-NAGSLRAMVWNTHTD
D S Ρ X V £LL C R S DG M G VY - L L N A 7 W’ 3 S Ε X Υ Ξ ? L A ? G ? J 3 N LIXA ? 7 V AA
ATQK7QLLYRAD7NLGNILLNVLIAPNMPCTR7GKNNVLIVCVPNP--
R3P1 (myš) FAOEC?--X?ELLAIRELNAENAQKFKTX?EECRK£I (Sek. Ϊ Q č. 12
RBP1 ( Č 1 OV2 .<) FADECP—X?ELLAIRZLNASNAQKFX7KFEECRK£r (Sek. id . /-1 v 13
NUP2p (kvasinka) DG-------XL VTΥIVZXQXLEG RS F7XAIS 3 ΑΧΧΞΜ (Sek. J- l_i . c . Ί Z
p!53 í mv š' ? L 3 E XQ ? 7 L ? A 7 MLIR 7X 7 S E D AD ELHX13 L E XXD AA (Sek. ' G . c > 15
• · • · * · « * · * • » · « · « «··· · • · * · · · ·
Tabulka 6
pl63 (myš; ; í S A k ver. OS 5 idsr.t. 1 f 1 k ačním čísl 16)
Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys Glu Leu Thr Asp Arg Asn Trp Asp
1 5 10 15
Glu Glu .'is'j Glu Val Glu Glu Met Gly Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu
20 25 30
Glu Val Met Lys Asn Arg A1 a Val Lys Lys Ala Lys Arg MjTCj A s η V a 1
35 40 45
Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Gly Ala Phe Lys Gly Phe Lvs Gly Leu
50 55 60
Val Val Pro Ser Gly Gly Gly Gly Phe Ser Gly Phe Gly Gly Ser Gly
6 5 70 75 30
Gly Lys Pro Leu Glu Gly Leu Thr Asn cly Asn Ser Thr Asp Asn Ala
8 5 90 95
Thr Pro Phe Ser Asn Val Lys Thr Ala Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe
100 105 110
Gly Ser Phe Ala Val Asn Gly Pro Thr Thr Leu Val Asp Lys Val Ser
115 120 125
Asn Pro Lys Thr Asn Gly Asn Ser Asn Gin Pro Pro Ser Ser Gly Pro
130 135 140
Ala Ser Ser Thr Ala Cys Pro Gly Asn * 1 - Tyr His Lys Gin Leu Ala
145 150 155 160
Gly Leu Asn Cys Ser Val Arg Asp Trp Ile Val Lys His Val Asn Thr
15 5 170 17 5
Asn Pro Leu Cys Asp Leu Thr Pro Ile Phe . ,ys Asp Tyr Glu Arg Tyr
130 185 ISO
Leu Ala Thr Ile Glu Lys Gin Leu Glu Asn Gly Gly Gly Ser Ser Ser
195 200 205
Glu Ser Gin Thr Asp Arg Ala Thr Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu
210 215 220
Phe Gly Ser Thr Lys Leu Gin Gin Glu Ser Pro Phe Ser Phe Mis Gly
225 230 235 240
Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu Lys Va 1 Glu Phe Thr Ala Glu Lys
245 250 255
Lys Ser Asp Ala Ala Gin Gly Ala Thr Ser Ala Ser Phe Ser Phe Gly · φ φ φφφ φ φ * ·
ΦΦ φ · ··*· • Φ φφ · φ φ ··· ·
260 265 270
Lys Lys Ile Glu Ser Ser Ala Len Gly Ser Leu Ser Ser Gly Ser Len
275 2S0 22 5
Thr Gly Phe Ser Phe Ser Ala Gly Ser Ser Ser Leu Phe cly Lys Asp
290 295 300
Ala Ala Gin Ser Lys Ala Ala Ser Ser Leu Phe Ser Ala Lys Ala Ser
305 310 315 320
Glu Ser Pro Ala Gly Gly Gly Ser Ser Glu Cys Arg Asp Gly Glu Glu
325 330 335
G i u Glu Asn Asp Glu Pro Pro Lys Val Val Val Thr Glu Val Lys Glu
340 3 4 5 350
Glu A5 Ό Ala Phe Tyr Ser Lys Lys Cys Lys Leu Pne i yr Lys Lys Asp
355 360 365
Asn Glu Phe Lys Glu Ly 3 Gly Val cly T n -· Leu His Leu Lys Pro i - l K
3 7 0 3 7 5 330
Ala Thr Gin Lys Thr Gin Leu Len Val Arg Ala Asp Thr Asn Leu Gly
32 5 390 3 9 5 400
Asr. Ile Leu Leu Asn Val Leu Ile Ala Pro Asn Met Pro Cys Thr Arg
405 410 415
Thr Gly Lys Asn Asn Val Leu Ile Val Cys Val Pro Asn Pro Pro Leu
420 425 430
Asp Glu Lys Gin Pro Thr Leu Pro Ala Thr Meh Leu Ile Arg Val Ij V 2¾
43 5 440 445
Ser Glu Asp Ala Asn Glu Leu His Lys Ile Len Leu Glu Lys Lvs
*
450 455 460
Asp Ala
4 6 5
NUP2 / η V n S inka) i ÍSeKver: C Ξ ič+nt i f i) C Ώ. £n čísl β 17)
Met Ala L y s Arg Val Ala Asp Ala Gin Ile Gin Arg Glu Thr Tyr Asp
1 5 10 15
Ser Asn Glu Ser Asp Asp Asp V a x Thr Pro Ser Thr Lys Val Ala Ser
20 25 30
Ser Ala Val Met Asn Arg Arg Lys Ile Ala Met Pro Lys Arg Arg Met
35 40 45
Ala Phe Lys Pro Phe Gly Ser Ala Lys Ser Asp Glu Thr Lys Gin Ala
• ·« · » · ♦ * * ’ * « · * ♦
Ser Ser Phe Ser Phe Loj
70 n i .. rt r U r, .a rt s D « · * · » * · * » 4 • 9 « « · · ·
Glv Thr Civ Glu Ala Gin
Val Asp Asn Ser Pro Thr Thr Glu Ser Asn Ser Arg Leu Lys Ala Leu
Asn Leu Gin Phe
100
Ala
50 ys Val Asp Asp
105
Leu Ala Asp Leu Arg Pro Leu Phe Thr Arg
115
120
Leu Val Leu Gly Lys Pro
110
Tyr Glu Leu Tyr Ile Lys 12Ξ
Asn Ile Leu Glu Ala Pro Val Lvs Phe Ile Glu Asn Pro Thr Gin
130
135
140
Lys Gly Asn Asp Ala Lys Pro Ala Lys Val Glu Asp Val Gin Lys Ser
145
150
155
150
Ser Asp Ser Ser Ser Glu Asp Glu Val Lys Val Glu Gly Pro Lys Phe 165 170 175
Thr Ile Asn Ala Lvs Pro Pro Ile Ser Aso Ser Val Phe Ser Phe Glv
ISO
Pro Lys Lys Glu Asn Arg L' 195 y 5 r,td
200
190
Glu Ser Asp Ser Glu Asn
205 :le Glu Ile Lys Gly Pro Glu Phe Lys Phe Ser Gly Thr Val Ser Ser
210
215
20
Asn Val Phe Lvs Leu Asn Pro Ser Thr Asr> Lvs Asn Glu Lvs Lvs Thr
225
230
235
Glu Thr Asn Ala Lvs Pro Phe Ser Phe Ser Ser
240 ?hr Ser Thr Thr z 4s
Glu Gin Thr Lys Ser I 2 50 :50 ys Asn Pro Leu Ser Leu Thr Glu Ala Thr Lys
265
270
Thr Asn Val Aso Asn Asn Ser Lva Ala Glu Ala Ser Phe Thr Phe Glv
275
2S0
285
Thr Lys His Ala Ala Asp Ser Gin Asn Asn Lys Pro Ser Phe Val Phe
290
295 iOO
Gly Gin Ala Ala Ala Lys Pro Ser Leu Glu Lys Ser Ser Phe Thr Phe
305
310
Gly Ser Thr Thr Ile Glu Lys Lys Asn Asp Glu Asn Se:
325
330
320
5ěí' Asn
335
Ser Lys Pro Glu Lvs Ser Ser Asd Ser Asn Aso Ser Asn Pro Ser Phe
340
345
350
Ser Phe Ser Ile Pro Ser Lys Asn Thr Pro Asp Ala Ser Lys Pro Se:
355
50
365
Phe Asn Phe Gly Val Pro Asn Ser Ser Lys Asn Glu Thr Ser Lys Pro • · • * *
370
375
360
Β* »·
Val Phe Ser Phe Gly Ala Ala Thr Pro Ser Ala Lys Glu Ala Ser Gin
335 390 395 400
Glu Arr Asp Asn Asn Asn Val Glu Lys Pro Ser Ser Lys Pro Ala Phe
405 410 415
Asn Phe Ile Ser Asn Ala Gly Thr Glu Lys Glu Lys Glu Ser Lys Lys
420 425 430
Asp Ser Lys Pro Ala Phe Ser Phe Gly Ile Ser Asn Gly Ser Glu Ser
435 440 445
Ly3 Asp Ser Asp Lys Pro Ser Leu Pro Ser Ala Val Asp Gly Glu Asn
450 455 460
Asp Lys Lys Glu Ala Thr Lys Pro Ala Phe Phe Gly Ile Asn Thr Asn
465 470 475 4 S 0
Thr Thr Lys Thr Ala Asp Thr Lys Ala Pro Thr Phe Thr Phe Gly Ser
4S5 490 495
Ser Ala Leu Ala Asp Asn Lys Glu Asp Val Lys Lys Pro Phe Ser Phe
500 505 510
Gly Thr Ser Gin Pro Asn Asn Thr Pro Ser Phe Ser Phe Gly Lys Thr
515 520 525
Thr Ala Asn Leu Pro Ala Asn Ser Ser Thr Ser Pro Ala Pro Ser Ile
530 535 540
Pro Ser Thr Gly Phe Lys Phe Ser Leu Pro Phe Glu Gin Lys Gly Ser
545 550 555 560
Gin Thr Thr Thr Asn Asp Ser Lys Glu Glu Ser Thr Thr Glu Ala Thr
565 570 575
Gly Asn Glu Ser Gin Asp Ala Thr Lys Val Asp Ala Thr Pro Glu Glu
580 535 590
Ser Lys Pro Ile Asn Leu Gin Asn Gly Glu Glu Asp Glu Val Ala Leu
595 600 605
Phe Ser Lys Ala Lys Leu Met Thr Phe Asn Ala Glu Thr Lys Ser Tyr
610 615 620
Asp Ser Arg Gly Val Gly Glu Met Lys Leu Leu Lys Lys Lys Asp Asp 625 630 635 640
Pro Ser Lys Val Arg Leu Leu Cys Arg Ser Asp Gly Met Gly Asn Val 645 650 655
Leu Leu Asn Ala Thr Val Val Asp Ser Phe Lys Tyr Glu Pro Leu Ala 660 665 670 • · *·«- * · · · «»«· · ··»»«»» »»« · · «··
I « « · · ······· ·· ··
Pro Gly Asn 6 7 5 Asp A 5 n L g u Ile Lys 630 Ala Pro Thr Val Ala Ala 6S 5 Asp Gly
Lys Thr T, . >- Zle V a 1 Lys Pne Lys Gin Ly s Glu Glu Gly Arg Ser Phe
650 59 5 7 00
Thr Lys Ala Ile Glu Asp Ala Lys Lys Glu Lys
705 710 715
Tabulka 7
Průkaz asociace mezi p27 a p!63 v buňkách HeLa
3-V λ γ -q o {-pir-b trans rekovo i Lrt. 1 -- Q ’ Γ ρ ρ Q iných s: T-, r“ q j- p 1 -n 1J Γ7 ci=: τ =1 n: j ρ n y
Precipitace CMV-p27 CMV-p27 - -
C’ 4
CMV-Nap CMV -Mop -
Prot11 útkami
spéci f ickým. i - r - -
3ΙΌ Mao2
Protilátkami
specii ickými - -- - -
pro p27
» Β ·
Β «
3> /.,
Tabulka 8 (Sekvence s id'
Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys
5
Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu .Met
Glu Val Met Lys Asn Arg Ala Val 35 40
Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Glv 50 55
Val Val ?ro Ser Gly Gly Gly Gly 55 70
Gly Lys Pra Leu Glu Gly Leu Thr S5
Thr Pro Phe Ser Asn Val Lys Thr 100
Gly Ser Phe Ala Val Asn Gly Pro 115 120
Ala Ala Gin Gly Ala Thr Ser Ala 130 135
Glu Ser Ser Ala Leu Gly Ser Leu
145 150
Ser Phe Ser Ala Gly Ser Ser Ser
165
Ser Lys Ala Ala Ser Ser Len Phe ISO
Ala Gly Gly Gly Ser Ser Glu Cys 155 200
Asp Glu Pro Pro Lys Val Val Val 210 215
Phe Tyr Ser Lys Lys Cys Lys Leu
225 230
Lys Glu Lys Gly Val Gly Thr Leu 245
Lys Thr Gin Leu Leu Val Arg Ala 260
Leu Asn Val Leu Ile Ala Pro Asn 275 290 intifikaččím číslem 13)
Glu Leu Thr Asp Arg Asn Trp Asp 10 15
Gly Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu
30
Lys Lys Ala Lys Arg Arg Asn Val
Ala Phe Lys Gly Phe Lys Gly Leu 60
Phe Ser Gly Phe Gly Gly Ser Gly 75 80
Asn Gly Asn Ser Thr Asp Asn Ala 5 0 5 5
Ala Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe
105 110
Phe Thr Ala Glu Lys Lys Ser Asp
125
Ser Phe Ser Phe Gly Lys Lys Ile 140
Ser Ser Gly Ser Leu Thr Gly Phe 155 ISO
Leu Phe Gly Lys Asp Ala Ala Gin 170 175
Ser Ala Lys Ala Ser Gin Ser Pro
185 190
Arg Asp Gly Glu Glu Glu Glu Asn
205
Thr Glu Val Lys Glu Glu Asp Ala
220
Phe Tyr Lys Lys Asp Asn Glu Phe 235 240
His Leu Lys Pro Thr Ala Thr Gin 250 255
Asp Thr Asn Leu Gly Asn Ile Leu
265 270
Met Pro Cys Thr Arg Thr Gly Lys
285 «· * • · v 3 « · * * • « ♦ · *
Asn A s π V a 1 29 0 Leu Ile Val· Cys 2 5 5 Val Pro A s n Pro Pro 3C0 Leu Asp Glu Lys
Gin Pro Thr Leu Pro Ala Th r yp* Leu Ile Arg Val Lys Ser Glu
305 2 10 315 320
Asp Ala Asp Cl-j Leu H i Ξ Lys 2 ie Leu Leu Glu Lys Lys Asp Ala
325 330 335
Tabulka 9 f ·~ ~ S 1 Lir f V ním čísle’ i 19 \
Met Ala Lys Arg Val Ala Glu T », ~ * j Glu Leu Thr Asp Arg Asn Trp Asp
I 5 10 15
Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu G i v Thr Phe Ser Val Ale Ser Glu
20 2 5 30
Glu Va 1 Met Lys Asn Arg Ala Val L y s Lys Ala Lys Arg Asn Val
3 5 40 45
Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Gly Ala phe Lys Gly Phe Lys cly Leu
50 55 60
Val Val Pro Ser Gly Gly Gly Gly Phe Ser ciy Phe Gly Giy Ser Gly
65 70 75 SO
Gly Lys Pro Leu Glu Gly Leu Thr Asn Gly Asn Ser Thr A s o Asn Ala
85 90 95
Thr Pro Phe Ser Asn Val Lv 3 Thr Ala A13 Glu Pro Lys Ala Ala Phe
100 105 110
Gly Ser Phe Ala V a í. Asn oly Pra Thr μ Ti 1 1 L Leu Val Asp Lys Val Ser
115 120 125
Asn Pro Lys Thr Asn Gly π 5 O Ser Asn Gin Pro Pro Ser Ser Gly Pro
130 135 140
Ala Ser Ser Thr Ala Cys Pro Gly Asn Ala Tyr H 1 Ξ Lys Gin Leu Ala
145 150 155 160
Gly Leu Asn Cys Ser Val Arg Asp Trp Ile Val Lys His Val Asn I le
165 170 175
Asn Pro Leu Cys Asp Leu Thr Pro Ile Phe Lys As o Tyr Glu Arg Tyr
ISO 185 190
Leu Ala Thr Ile Glu Lys Gin Leu Glu Asn Gly Gly Gly Ser ser Ser
195 200 205
Clu Ser Gin Thr Asp Arg Ala Thr Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu
210 215 220
Phe Gly Ser Thr Lys Leu Gin Gin Glu Ser Pro Phe Ser Pne His Gly
TJ 4 • 4 4 4 4 4 · 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 • 4 •
225 230 2 35 240
/\ ΰ τ'. Lys Ala Glu Asp Thr Ser G u Ly s Val Glu Phe Thr Ala Glu Lys
24 5 250 255
Lv 3 Ser Asp Ala Ala Gin Gly Ala Th r Ser Aid Ser Phe Ser Phe Gly
260 2 6 5 270
Lys Lys Ile Glu Ser Ser Ala Leu Gly Ser Leu Ser Ser Gly Ser Leu
275 2S0 235
Thr Gly Phe Ser Phe Ser Ala cly Ser Ser Ser Leu Phe Gly Lys Asp
290 2 9 5 300
Ala Ala Glu Lys Glu Leu
305 310
Tabulka 10 ( Sekver.c o c; ident. fík achi rn čísl em 2 0)
Thr Thr Leu Val Asp Lys Val Ser Asn Pro Lys Thr Asn Gly Asp Ser
5 10 15
Asn Gin Pro Pro Ser Ser Gly Pro Ala Ser Ser Thr Ala Cys Pro Gly
20 25 30
Asn Ala Tyr His Ly3 Gin Leu Ala Gly Leu Asn Cys Ser Val Arg Asp
35 40 4 5
Trp Ile Val Lys His Val Asn Thr Asn Prc Leu Cys Asp Leu Thr Pro
50 5 5 60
Ile Phe Lys Asp Tyr Glu *1 - Λ* Tyr Leu A13 Thr Ile Glu Lys Gin Leu
65 70 75 SO
Glu Asn Gly Gly Gly Ser Ser Ser Glu Ser Gin Thr Asp Arg Ala Thr
S 5 90 95
Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu Phe Gly Ser Thr Lys Leu Gin Gl.n
100 105 110
Glu Ser Pro Phe Ser Phe H i s Gly Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu
lis 120 125
Lys Val Glu Phe
130 « a
5
Tabulka 11
Sekvence GUC v pl63
Pozice nukleotidů Sekvence
422-424 GGAA GTC ATG A
813-820 CTCC GTC CGCG
1021-1023 AAGA GTC ACCA
1287-1289 GAG A GTC CGGC
1586-1538 CAAC GTC CTTA
1595-1597 TATC GTC TG TG
1601-1603 CTGT GTC CCCA
v EST 62312 (lidský)
Pozice nukleotidů Sekvence
aminokyselin
212-214 GACT GTC GAA 7 87
353-360 GACA GTC AGC A 136
4 0 z — 4 0 4 TTG GTC GGA. A 150
ragující domény obsahují aminokyseliny 121-252 myší
----, na Kterou se číslování vztahuje. Tomu odpovídají etidy 635-1078 myší sekvence.
• *
Tabulka 12a vybraných párů primerů
Skóre Délka GC % Pozice Jméno 5' 3'
5.8 108 43.5 122. . 143 Horní: AGAAAGCAAAGCGCAGAAATGT
(Sek. id. č. 21)
229. .209 Dolní: CAAATCCAGAAAAGCGTCCTC
(Sek. id. č. 22)
6.7 119 42.0 104. .127 Horní·. TGAAGAATAGAGCCATAAAGAAAG
(Sek. id. č. 23)
240. .220 Dolní: AGAAAAGCGTCCTCCTCCAGA
(Sek. id. č. 24)
23.3 137 43.8 104. . 127 Horní: TGAAGAATAGAGCCATAAAGAAAG (Sek. id. č. 25)
204. .220 Dolní: agcgccactaaccaaatccaga
(Sek. id. č. 26)
25.7 100 44.0 122. . 143 Horní; AGAAAGCAAAGCGCAGAAATGT (Sek. id. č. 27)
221. . 200 Dolní: GAAAAGCGTCCTCCTCCAGAAG
(Sek. id. č. 28)
48.7 122 46.7 123. . 144 Horní: GAAAGCAAAGCGCAGAAATGTT
(Sek. id. č. 29)
244. . 224 Dolní: CTCCAGCGCCACTACCAAATC
• * 4 « · • · · ·
37 • · · « · · · · 4 » · · · · ·
Tabulka 12b
Vybraný pár primerú
Skóre Délka GC % Pozice Jméno 5' 3'
51.3 193 52.S 34. .53 Horní: CCCGCACGGAGCAGTTCAAG
(Sek. s id, č. 31) 226. .205 Dolní: gcagcggcagatcccaaggtag (Sek. s id, č. 32)
Tabulka 12c
Vybraný pár primerú
Skóre Délka GC % Pozice Jméno 5' 3'
2.4 136 45.6 4 . .20 Horní: GGCATCCTTTTTCTCCA
Dolní: (Sek. id. č. 33)
139 . . 120 CGTTCTTATCGTCTCTGTGTTC
(Sek. id. Č. 34)
2.5 120 45.0 5 . .23 Horní: GCATCCTTTTTCTCCAGTA
(Sek. id. č. 35)
139 . .119 Dolní: TGTTCCAAATCCACCAAT
(Sek. id. č. 36)
2.7 100 48.0 40 . .58 Horní: GTCTGCATCCTCGCTGGTT
(Sek. id. Č. 37)
139 . .119 Dolní: CGTTCTTATCGTCTGTGTTCC
(Sek. id. č. 38)
50.0 105 44.8 57 . .75 Horní: TTTTACCCGAATCAACAT (Sek. id. č. 39
161 . .141 Dolní: GTACGCGAACAGGGAAGAATA
- (Sek. id. č. 40)
• · · * • · «· » »·· * *
Tabulka 13
Shrnutí růstových pokusů
Cyklin Dl Nup2 neselektivní selektivní neselektivní selektivní
wt p27 + + + +++ + + + +++
Mut 106 +++ +++ +++ + + +
Mut 152 +++ + +++ +
Mut 294 +++ +++ +++ -
Mut 660 +++ +++ + + + -
Mut 687 +++ - +++
Mut 826 +++ +++ +++ +++
Mut 850 +++ +++ +++ -
· · • 0
A)
Tabulka 14
Sekvence mutovaného proteinu p27 ve srovnání s divokým typem
- - -rvsngspslermdarOADHPKPSAC p v s h g s většina
TR3LEKHCRDMEEASQRKWNFDFQNHKPLEGRYEWQEVE — - — -j----I £0
J
EO
KlcnílDS Protein Klor.í'52 Protein Klo.oí2S4 Protein Kloní660 Protein Klonem Protein Kloní626 Protein KloníESO Protein Myší p27 AS většina
16 L T R D L E Κ H C R D M E E A S 0 E K W N F D F o N HKPLEGRYEW 0 E V E KlonílC6 Protein
37 LIR D LEKU C R D M E E A £ 0 0K Η K F D F 0 N H 0? L E G R ϊ E H Q E V E Kloní 152 Protein
37 L T R D LEKU C R 3 M E E A S Q R K W N F D F 0 N HKPLEGRYEW Q E V E Kloní2S4 Protein
36 L T R D LEKU C R 3 M E E A S Q R K Κ Ϊ1 F D F 0 K HKPLEGRYEW 0 E V £ KloníE60 Protein
36 ls l τ R D L E K H C R 3 h|e |e A S 0 S K W řl F D F Q NHKPLEGRYE WJi E V Klcr.í667 Protein
16 L T R D LEKU c IíJd m E E A S fl S K W A' F O F Q N HKPLEGRYEW 0 E V E Klonř6I6 Protein
26 L T R D LEKU C R 3 M E E A £ 0 R K W N F 3 F 0 N HKPLEGRYEW 0 E V E Kloníeso Protejn
41 L T R D L E Κ H C R D K E Ξ A S 0 R K W N F 3 F 0 N HKPLEGRYEW 0 E V Ξ Myší p27 AS
R G S L P E F Y Y R ? ? R ? ? K S A C Κ V L A 0 E £ 03VSGERQAV P L I G
J “Ί-1- l * vetsma
90 1 100 ! 110 T 120 l
Ě6 R G S k ? E F Y Y R P P U? ? X S A C Κ V L A 0 E S Q3VSGSRQAV P L I G Kloní 106 Protein
77 R G S L P Ξ F Y Y S P P R p p K S A C Κ V L A 0 Ξ S Q3VSGSRQAV P L I G Klor.ílí2 Protein
77 R G S L P E F Y yHp ? R ? ? X S A C Κ V L A Q E S Q 3 V El· S R Q A V ? L I G Kloní:54 Protein
76 R G S L P Ξ F Y Y GJ? P R ? ? K S A C Κ V L A o E S ODVSGSRQAV ? L I G Kloní 6c 0 Protein
7Θ |e r g S L ? E F Y [y]r p F R }? F K £ A C Κ V ? A Q E SODVSGSRQA V ? γγί Kloní£67 Protetn
66 R G Ξ L P E F Y Y R ? P R ? P K S A C X V L A Q E £ (JDVSGSRQAV P L I G KloníS26 Protein
66 R G £ L P E F Y γ a? p R ? ? K S A C Κ V L A 0 E S qdvsgsrqav P L I G Kloníf50 Protein
61 R G S L P Ξ F Y Y R P p R P ? K S A C Κ V L A Q E S 03VSGSRQAV P L I G Myši p27 AS
£ 0 A s S E 3 R H L V 3 0 M ? 3 3 S 3 !! 0 A G L A S OCPGMRKRPA A Ξ 3 S
—|- 1 1 vetsma
130 i 140 i 150 t 160 ϊ
106 S 0 A Jí £ E 3 R H L V 3 0 Μ P 3 £ S 3 N Q A G L A E OCPGMRKRPA A E 3 S Kloní 106 Protein
117 Ξ 0 A Jí S E 3 R H L V 3 0 Η P 3 S S 3 N 0 A G L A E OCPGMRKRPA A E 3 S Klon#152 Protein
117 S Q A H S E 3 R H L V 3 0 Κ ? 3 S S 3 S 0 A G L A E OCPGMRKRPA A E 3 £ Kloní 2 54 Protein
116 £ Q A N Ξ E 3 R H L V 3 Q M p 3 S S 3 NO A G L A E OCPGMRKRPA A E 3 £ KloníířO Protein
118 Ig S 0 A N S E 3 R H L V D g H ? 31$ ls 3 N 0 A G L A EOCPGKRKRP k k £ D I KloníES? Protein
106 S Q A N S E 3 R H L V 3 0 M ? 3 S S 3 N Q A G L A E OCPGMRKRPA A E 3 £ Kloní626 Protein
106 £ 0 A N S E D R H L V D Q H ? 3 £ S D 00 A G L A E o c P 1-...... J KlonS650 Frotein
121 S 0 A N S E 3 R H L V D 0 Μ P 3 S S 3 N 0 A G L A E OCPGMRKRPA A n 3 S Myší p27 AS
£ S Q I K R A N R 7 E E Ν V S 3 G S P M A G T V E Q TPKKPGLRRQ T R - - Vcíf- σ ί τη Λ
ISO —i
R A
170 ISO
-1-_!-!-KSANSTtENVSO5S?SAGTVEÍT?KKPGLRt KRAKRTE2NVE3GSPNAGTVEQTPKKPG [j?. S Q T R KRANRTEENVS3G£PNAGTVEQTPKKPGLRRQTRR A K R T E E H V S O G 5 ? NAGTVEQTPXKP G L R R O I R Kloní 106
Kloní 152 KlonS294
Protein
Protein
Protein
R A N R T~|e |e W V S_
N R TEENVS3GSPNAGTV agtveqtpík k
T P K K P G ryč-
ΓΓρ RANRTEENVSDGSPNAGTVEQTPKKPGLRRQT
Kloní66 0 Protein Kloní6S7 Protein KloníS26 Protein KloníE50 Protein Myší p27 AS
VDLOP-S-FRAN-F
Většina
Sekvence Sek
většina 41
Klon / 106 42
Klon / 152 43
Klon / 294 44
Klon / 660 45
Klon # 687 46
Klon # 826 47
Klon / 850 48
p27 (myš) 49
i • · ·
SEZNAM SEKVENCÍ (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 1958 páru baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA; jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...1958 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 1:
TCGAATTGGG TACCGGGCCC CCCCTCGAGG TCGACGGTAT CGATAAGCTT GATATCGAAT 60
TCGCGGCCGC TCGAGTTACA AGATGGCGGC CCCGGGCGCT CTCTTCACCG TTCTGTAGCA 120
GCTTCGGGCT GAGCGGATG? CTCTTCTTGT CCTCAGTGTC GGACTCAGAG ACACACGGCT 180
CCCGAGTTCT GCTGATCACG AAGTTCCCGG AGGCGCTCGA CGCACCGGAA TCTCCCAGCG 240
GCCGCGACCG CCGCCTCGGC CCTGCTCGCC GCGGCGCCGG GACTCCAGCG TGATCGGCGG 300
0
0 < 0 0 0 0*0
0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
42 0 0 0 0 0 0· 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
CGGCAGTCAA GGTTCACAAA AATGGCGAAG AGAGTTGCGG AGAAGGAGTT GACTGACAGG 360
AACTGGGATG AGGAAGACGA AGTTGAAGAG ATGGGAACAT TCTCAGTGGC CAGTGAGGAA 420
GTCATGAAGA ACAGAGCCGT AAAGAAGGCA AAGCGCAGAA ACGTTGGATT TGAATCTGAT 480
AGCGGAGGAG CCTTTAAAGG TTTCAAAGGT TTGGTTGTGC CTTCTGGAGG AGGAGGGTTT 540
TCTGGATTTG GTGGCTCTGG AGGAAAGCCT CTGGAAGGAC TGACAAATGG AAACAGCACA 600
GACAATGCCA CGCCCTTCTC CAATGTAAAG ACAGCAGCAG AGCCCAAGGC AGCCTTTGGT 660
TCTTTTGCTG TGAATGGCCC TACTACCTTG GTGGATAAAG TTTCAAATCC AAAAACTAAT 720
GGGGACAGCA ATCAGCCGCC CTCCTCCGGC CCTGCTTCCA GTACCGCCTG CCCTGGGAAT 780
GCCTATCACA AGCAGCTGGC TGGCTTGAAC TGCTCCGTCC GCGATTGGAT AGTGAAGCAC 840
GTGAACACAA ACCCGCTTTG TGACCTGACT CCCATTTTTA AAGACTATGA GAGATACTTG 900
GCGACGATCG AGAAGCAGCT TGAGAATGGA GGCGGCAGCA GTTCTGAGAG CCAGACAGAC 960
AGGGCGACGG CTGGAATGGA GCCTCCTTCC CTTTTTGGTT CAACAAAACT ACAGCAAGAG 1020
TCACCATTTT CATTTCATGG CAACAAAGCG GAGGACACAT CTGAAAAGGT GGAGTTTACA 1080
GCAGAAAAGA AATCGGACGC AGCACAAGGA GCAACAAGTG CCTCGTTTAG TTTCGGCAAG 1140
AAAATTGAGA GCTCGGCTTT GGGCTCGTTA AGCTCTGGCT CCCTAACTGG GTTTTCATTC 1200
TCTGCTGGAA GCTCCAGCTT GTTTGGTAAA GATGCTGCCC AGAGTAAAGC AGCCTCTTCG 1260
CTGTTCTCTG CTAAAGCATC CGAGAGTCCG GCAGGAGGCG GCAGCAGCGA GTGCAGAGAT 1320
GGTGAAGAAG AGGAGAATGA CGAGCCACCC AAGGTAGTGG TGACCGAAGT AAAGGAAGAG 1380
GATGCTTTCT ACTCCAAAAA ATGTAAACTA TTTTACAAGA AAGACAACGA ATTTAAAGAG 1440
AAGGGTGTGG GGACCCTGCA TTTAAAACCC ACAGCAACTC AGAAGACCCA GCTCTTGGTG 1500
CGGGCAGACA CCAACCTAGG CAACATACTG CTGAATGTTC TGATCGCCCC CAACATGCCG 1560
TGCACCCGGA CAGGAAAGAA CAACGTCCTT ATCGTCTGTG TCCCCAACCC CCCACTCGAT 1620
GAGAAGCAGC CCACTCTCCC GGCCACCATG CTGATCCGGG TGAAGACGAG CGAGGATGCC 1680
GATGAATTGC ACAAGATTTT ACTGGAGAAA AAGGATGCCT GAGCACTGAG GCTGACCAAG 1740
GCATGTTGCC ACGTTGCTGC TTCCCCTCCG TCCCTAACTT AGTCACATTC TTTCCTCTTC 1800
TACTGTGACA TTCTGAGAAC TTCTAGGTAA CTTGAACTTT TGTGAGGAAG ATTAAGGCCA 1860
ATAAATCCTT TCAGTGGCGG CCGCGAATTC CTGCAGCCCG GGGGATCCAC TAGTTCTAGA 1920
GCGGCCGCCA CCGCGGTGGA GCTCCAGCTT TTGGGAGA
1958 • * ·«« I · • · · v · ♦ · • · ·
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...24 (Xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 2:
Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys Glu Leu Thr Asp Arg Asn 15 10
Asp Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu Met (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...24 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 3:
Met Ala Lys Arg Val Ala Asp Ala Gin Ile Gin Arg Glu Thr 15 10
Asp Ser Asn Glu Ser Asp Asp Asp Val
Trp
Tyr (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 4:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 60 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein
Β Β
Β Β * «
Β « • · · (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...60
(XÍ ) POPIS ; SE KVENCE; SE KVENCE ID. C. 4 :
Asn Gin Pro Pro Ser ser Gly Pro Ala Ser Ser Thr Ala Cys Pro Gly
1 5 10 15
Asn Ala Tyr His Lys Gin Leu Ala Gly Leu Asn Cys Ser Val Arg Asp
20 25 30
Trp Ile Val Lys His Val Asn Thr Asn Pro Leu Cys Asp Leu Thr Pro
35 40 45
Ile Phe Lys Asp Tyr Glu Arg Tyr Leu Ala Thr Ile
50 55 60
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 5:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 60 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární
(ii) TYP MOLEKULY: protein
( ix) ZNAKY: (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...60
(xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 5
Asn Arg Ala Asp Gly Thr Gly Glu Ala Gin Val Αερ Asn ser Pro Thr
1 5 10 15
Thr Glu Ser Asn Ser Arg Leu Lys Ala Leu Asn Leu Gin Phe Lys Ala
20 25 30
Lys Val Asp Asp Leu Val Leu Gly Lys Pro Leu Ala Asp Leu Arg Pro
35 40 45
Leu Phe Thr Arg Tyr Glu Leu Tyr Ile Lys Asn Ile
50 55 60
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 6:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 51 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein ·
(ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...51 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 6:
Ala Thr Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu Phe Gly Ser Thr Lys Leu
1 5 10 15
Gin Gin Glu Ser Pro Phe Ser Phe His Gly Asn Lys Ala Glu Asp Thr
20 25 30
Ser Glu Lys Val Glu Phe Thr Ala Glu Lys Lys Ser Asp Ala Ala Gin
35 40 45
Gly Ala Thr 50 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 7:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 51 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (li) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...51 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 7:
Ala Asn Ser Ser Thr Ser Pro Ala Pro Ser Ile Pro Ser Thr Gly Phe 15 10 15
Lys Phe Ser Leu Pro Phe Glu Gin Lys Gly Ser Gin Thr Thr Thr Asn 20 25 30
Asp Ser Lys Glu Glu Ser Thr Thr Glu Ala Thr Gly Asn Glu Ser Gin
35 40 45
Asp Ala Thr
50
INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 34 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární fc · • · · fc ·fc fcfc * » · «fc fc · fc··· a • *fc« • « · fcfc fc· (ii) TYP MOLEKULY: protein (ÍX) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...34
(xi) POPIS SEKVENCE : SEKVENCE ID . č. . 8 :
His Gly Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu Lys Val Glu Phe Thr Ala
1 5 10 15
Glu Lys Lys Ser Asp Ala Ala Gin Gly Aid Thr Ser Ala Ser Phe Ser
20 25 30
Phe Gly (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 9:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 34 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...34 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 9:
Asn Gly Ser Glu Ser Lys Asp Ser Asp Lys Pro Ser Leu Pro Ser Ala 15 10 15
Val Asp Gly Glu Asn Asp Lys Lys Glu Ala Thr Lys Pro Ala Phe Ser 20 25 30
Phe Gly (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 10;
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 40 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein
··· «· « · • «β * » · • · • · ♦ • · • fc « ·*· 4 (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...40
(xi ) POPIS SEKVENCE : SEKVENCE ID. . Č. 10:
Leu Gly Asn Ile Leu Leu Asn Val Leu Ile Ala Pro Asn Met Pro Cys
1 5 10 15
Thr Arg Thr Gly Lys Asn Asn Val Leu Ile Val Cys Val Pro Asn Pro
20 25 30
Pro Leu Asp Glu Lys Gin Pro Thr 35 40 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 11:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 40 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...40 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 11:
Met Gly Asn Val 1 Leu 5 Leu Asn Ala Thr Val Val Asp Ser Phe Lys Tyr
10 15
Glu Pro Leu Ala Pro Gly Asn Asp Asn Leu Ile Lys Ala Pro Thr Val
20 25 30
Ala Ala Asp Gly Lys Leu Val Thr
35 40
(2) INFORMACE PRO SE KVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 12:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 157 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...157 φ · · φ · φ·φ φφ φφφφ*·· (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 12;
Asp Ser His Ala Asp His Asp Thr Ser Thr Glu Asn Ala Asp Glu Ser
1 5 10 15
Thr Thr His Pro Gin Phe Glu Pro Ile Val Ser Val Pro Glu Gin Glu
20 25 30
Ile Lys Thr Leu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Leu Phe Lys Met Arg Ala
35 40 45
Lys Leu Phe Arg Phe Ala Ser Glu Asn Asp Leu Pro Glu Trp Lys Glu
50 55 60
Pro Arg His Gly Asp Val Lys Leu Leu Lys His Lys Glu Lys Gly Thr
65 70 75 80
Ile Arg Leu Leu Met Arg Arg Asp Lys Thr Leu Lys Ile Cys Ala Asn
85 90 95
His Tyr Ile Thr Pro Met Met Clu Leu Lys Pro Asn Ala Gly Ser Asp
100 105 110
Arg Ala Trp Val Trp Asn Thr His Thr Asp Phe Ala Asp Glu Cys Pro
115 120 125
Lys Pro Glu Leu Leu Ala Ile Arg Phe Leu Asn Ala Glu Asn Ala Gin
130 135 140
Lys Phe Lys Thr Lys Phe Glu Glu Cys Arg Lys Glu Ile
145 150 155
(2) INFORMA .CE PRO SEK VEN' Cl S ID έντ: IFIKAČN ÍM ČÍSLEM 13 :
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 157 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKYj (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...157 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 13:
Asp Ser His Ala Asp His Asp Thr Ser Thr Glu Asn Ala Asp Glu Ser 15 10 15
Asn His Asp Pro Gin Phe Glu Pro Ile Val Ser Val Pro Glu Gin Glu 20 25 30 «« · · · · * * · ·» · « ·· « « «·«» «· · · · » · * · · · ♦ • a* · · »♦····· ·· a·
Ile Lys Thr 35 Leu Glu Glu Asp Glu 40 Glu Glu Leu Phe Lys 45 Met Arg Ala
Lys Leu Phe Arg Phe Ala Ser Glu Asn Asp Leu Pro Glu Trp Lys Glu
50 55 60
Arg Gly Thr Gly Asp Val Lys Leu Leu Lys His Lys Glu Lys Gly Thr
65 70 75 80
Ile Arg Leu Leu Met Arg Arg Asp Lys Thr Leu Lys Ile Cys Ala Asn
85 90 95
His Tyr Ile Thr Pro Met Met Glu Leu Lys Pro Asn Ala Gly Ser Asp
100 105 110
Arg Ala Trp Val Trp Asn Thr His Thr Asp Phe Ala Asp Glu Cys Pro
115 120 125
Lys Pro Glu Leu Leu Ala Ile Arg Phe Leu Asn Ala Glu Asn Ala Gin
130 135 140
Lys Phe Lys Thr Lys Phe Glu Glu Cys Arg Lys Glu Ile
145 150 155 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 14;
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 158 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1. . , 158
(xi) POPIS SEKVENCE : SEKVENCE ID . Č. 14 :
Ser Gin Thr Thr Thr Asn 1 5 Asp Ser Lys Glu 10 Glu Ser Thr Thr Glu Ala 15
Thr Gly Asn Glu Ser Gin 20 Asp Ala Thr 25 Lys Val Asp Ala Thr Pro Glu 30
Glu Ser Lys Pro Ile Asn 35 Leu Gin Asn 40 Gly Glu Glu Asp Glu Val Ala 45
Leu Phe Ser Gin Lys Ala 50 Lys Leu Met 55 Thr Phe Asn Ala Glu Thr Lys 60
Ser Tyr Asp Ser Arg Gly 65 70 Val Gly Glu Met Lys 75 Leu Leu Lys Lys Lys 80
* * • · ·· · · · ♦ · · f « · « · · · « · I ·· «····«· «· ··
Asp Asp Ser Pro Lys Val Arg Leu Leu Cys Arg Ser Asp Gly Met Gly
85 90 95
Asn Val Leu Leu Asn Ala Thr Val Val Asp Ser Phe Lys Tyr Glu Pro
100 105 110
Leu Ala Pro Gly Asn Asp Asn Leu Ile Lys Ala Pro Thr Val Ala Ala
115 120 125
Asp Gly Lys Leu Val Thr Tyr Ile Val Phe Lys Gin Lys Leu Glu Gly
130 135 140
Arg Ser Phe Thr Lys Ala Ile Glu Asp Ala Lys Lys Glu Met
145 150 155
INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 15:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 160 aminokyselin
(B> TYP: aminokyselina
(C) TYP VLAKNA : j ednoduché
(D) TOPOLOGIE: 1ineární
(ii) TYP MOLEKULY: ; protein
(ix) ZNAKY:
(A) (B) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein
POZICE: 1 . . . 160
(xi) POPIS SEKVENCE : SEKVENCE ID. Č. 15:
Gin Ser Lys Ala Ala Ser Ser Leu Phe Ser Ala Lys Ala Ser Glu Ser
1 5 10 15
Pro Ala Gly Gly Gly Ser Ser Glu Cys Arg Asp Gly Glu Glu Glu Glu
20 2S 30
Asn Asp Glu Pro Pro Lys Val Val Val Thr Glu Val Lys Glu Glu Asp
35 40 45
Ala Phe Tyr Ser Lys Lys Cys Lys Leu Phe Tyr Lys Lys Asp Asn Glu
50 55 60
Phe Lys Glu Lys Gly Val Gly Thr Leu His Leu Lys Pro Thr Ala Thr
65 70 75 80
Gin Lys Thr Gin Leu Leu Val Arg Ala Asp Thr Asn Leu Gly Asn Ile
85 90 95
Leu Leu Asn Val Leu Ile Ala Pro Asn Met Pro Cys Thr Arg Thr Gly
100 105 110
Lys Asn Asn Val Leu Ile Val Cys Val Pro Asn Pro Leu Asp Glu Lys
115 120 125
Gin Pro Thr Leu Pro Ala Thr Met Leu Ile Arg Val Lys Thr Ser Glu
130 135 140
• « ol ys Lys Asp Ala Ala
160
Asp Ala Asp Glu Leu His Lys Ile Leu Leu Glu 145 150 155 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 16:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 466 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:, (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...466
(x. i) POPI S S! EKVENCE : SEKVENCE ID . C. 1 6 :
Met 1 Ala Lys Arg Val Ala 5 Glu Lys Glu Leu 10 Thr Asp Arg Asn Trp Asp 15
Glu Glu Asp Glu 20 Val Glu Glu Met Gly 25 Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu 30
Glu Val Met 35 Lys Asn Arg Ala Val Lys 40 Lys Ala Lys Arg Arg Asn Val 45
Gly Phe Glu 50 Ser Asp Ser Gly Gly Ala 55 Phe Lys cly 60 Phe Lys Gly Leu
Val 65 Val Pro Ser Gly Gly 70 Gly Gly Phe Ser Gly 75 Phe Gly Gly Ser Gly 80
Gly Lys Pro Leu Glu Gly 85 Leu Thr Asn Gly 90 Asn Ser Thr Asp Asn Ala 95
Thr Pro Phe Ser 100 Asn Val Lys Thr Ala 105 Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe 110
Gly Ser Phe 115 Ala Val Asn Gly Pro Thr 120 Thr Leu Val Asp Lys Val Ser 125
Asn Pro Lys 130 Thr Asn Gly Asp Ser Asn 13S Gin Pro Pro 140 Ser Ser Gly Pro
Ala 145 Ser Ser Thr Ala Cys 150 Pro Gly Asn Ala Tyr 155 His Lys Gin Leu Ala 160
Gly Leu Asn Cys Ser Val 165 Arg Asp Trp Ile 170 Val Lys His Val Asn Thr 175
Asn Pro Leu Cys 180 Asp Leu Thr Pro Ile 185 Phe Lys Asp Tyr Glu Arg Tyr 190
· • « « · · ♦ · · • * « · * · · · * 9 · • · · « · · · • · · ««··«·· · » * *
Leu Ala Thr 195 Ile Glu Lys Gin Leu Glu Asn Gly Gly Gly Ser Ser Ser
200 205
Glu Ser 210 Gin Thr Asp Arg Ala 215 Thr Ala Gly Met Glu Pro Pro 220 Ser Leu
Phe Gly 225 Ser Thr Lys Leu 230 Gin Gin Glu Ser Pro Phe Ser Phe 235 His Gly 240
Asn Lys Ala Glu Asp 245 Thr Ser Glu Lys Val Glu Phe Thr Ala 250 Glu 255 Lys
Lys Ser Asp Ala Ala 260 Gin Gly Ala Thr Ser Ala Ser Phe Ser 26S 270 Phe Gly
Lys Lys Ile 275 Glu Ser Ser Ala Leu 280 Gly Ser Leu Ser Ser Gly 285 Ser Leu
Thr Gly 290 Phe Ser Phe Ser Ala 295 Gly Ser Ser Ser Leu Phe Gly 300 Lys Asp
Ala Ala 305 Gin Ser Lys Ala 310 Ala Ser Ser Leu Phe Ser Ala Lys 315 Ala Ser 320
Glu Ser Pro Ala Gly 325 Gly Gly Ser Ser Glu Cys Arg Asp Gly 330 Glu 335 Glu
Glu Glu Asn Asp Glu 340 Pro Pro Lys Val Val Val Thr Glu Val 345 350 Lys Glu
Glu Asp Ala 355 Phe Tyr Ser Lya Lys 360 Cys Lys Leu Phe Tyr Lys 365 Lys Asp
Asn Glu 370 Phe Lys Glu Lys Gly 375 Val Gly Thr Leu His Leu Lys 380 Pro Thr
Ala Thr 385 Gin Lys Thr Gin 390 Leu Leu Val Arg Ala Asp Thr Asn 395 Leu Gly 400
Asn Ile Leu Leu Asn 405 Val Leu Ile Ala Pro Asn Met Pro Cys 410 Thr 415 Arg
Thr Gly Lys Asn Asn 420 Val Leu Ile Val Cys Val Pro Asn Pro 425 430 Pro Leu
Asp Glu Lys 435 Gin Pro Thr Leu Pro 440 Ala Thr Met Leu Ile Arg 445 Val Lys
Thr Ser 450 Asp Ala 465 Glu Asp Ala Asp Glu 455 Leu His Lys Ile Leu Leu Glu 460 Lys Lys
(2} INFORMACE PRO SEKVENCI £ 1 IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 17 :
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 715 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární {ii} TYP MOLEKULY: protein (ix). ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1..715 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 17:
Met 1 Ala Lys Arg Val 5 Ala Asp Ala Gin Ile Gin Arg Glu Thr Tyr Asp
10 15
ser Asn Glu Ser Asp Asp Asp Val Thr Pro Ser Thr Lys Val Ala Ser
20 25 30
ser Ala Val Met Asn Arg Arg Lys Ile Ala Met Pro Lys Arg Arg Met
35 40 45
Ala Phe Lys Pro Phe Gly Ser Ala Lys Ser Asp Glu Thr Lys Gin Ala
50 55 60
Ser Ser Phe Ser Phe Leu Asn Arg Ala Asp Gly Thr Gly Glu Ala Gin
65 70 75 80
Val Asp Asn Ser Pro Thr Thr Glu Ser Asn Ser Arg Leu Lys Ala Leu
85 90 95
Asn Leu Gin Phe Lys Ala Lys Val Asp Asp Leu Val Leu Gly Ly3 Pro
100 105 110
Leu Ala Asp Leu Arg Pro Leu Phe Thr Arg Tyr Glu Leu Tyr Ile Lys
115 120 125
Asn Ile Leu Glu Ala Pro Val Lys Phe Ile Glu Asn Pro Thr Gin Thr
130 135 140
Lys Gly Asn Asp Ala Lys Pro Ala Lys Val Glu Asp Val Gin Lys Ser
145 150 155 160
Ser Asp Ser Ser Ser Glu Asp Glu Val Lys Val Glu Gly Pro Lys Phe
165 170 175
Thr Ile Asp Ala Lys Pro Pro Ile Ser Asp Ser Val Phe Ser Phe Gly
180 185 190
Pro Lys Lys Glu Asn Arg Lys Lys Asp Glu Ser Asp Ser Glu Asn Asp
195 200 205
Ile Glu Ile Lys Gly Pro Glu Phe Lys Phe Ser Gly Thr Val Ser Ser
210 215 220
Asp Val Phe Lys Leu Asn Pro Ser Thr Asp Lys Asn Glu Lys Lys Thr
225 230 235 240
Glu Thr Asn Ala Lys Pro Phe Ser Phe Ser Ser Ala Thr Ser Thr Thr
245 250 255
4 • *
Glu Gin Thr Lys 260 Ser Lys Asn Pro Leu 265 Ser Leu Thr Glu Ala 270 Thr Lys
Thr Asn Val Asp Asn Asn Ser Lys Ala Glu Ala Ser Phe Thr Phe Gly
275 280 285
Thr Lys His Ala Ala Asp Ser Gin Asn Asn Lys Pro Ser Phe Val Phe
290 295 300
Gly Gin Ala Ala Ala Lys Pro Ser Leu Glu Lys Ser Ser Phe Thr Phe
305 310 315 320
Gly Ser Thr Thr Ile Glu Lys Lys Asn Asp Glu Asn Ser Thr Ser Asn
325 330 335
Ser Lys Pro Glu Lys Ser Ser Asp Ser Asn Asp Ser Asn Pro Ser Phe
340 345 350
Ser Phe Ser Ile Pro Ser Lys Asn Thr Pro Asp Ala Ser Lys Pro Ser
355 360 365
Phe Asn Phe Gly Val Pro Asn Ser Ser Lys Asn Glu Thr Ser Lys Pro
370 375 380
Val Phe Ser Phe Gly Ala Ala Thr Pro Ser Ala Lys Glu Ala Ser Gin
385 390 395 400
Glu Asp Asp Asn Asn Asn Val Glu Lys Pro Ser Ser Lys Pro Ala Phe
405 410 415
Asn Phe Ile Ser Asn Ala Gly Thr Glu Lys Glu Lys Glu Ser Lys Lys
420 425 430
Asp Ser Lys Pro Ala Phe Ser Phe Gly Ile Ser Asn Gly Ser Glu Ser
435 440 445
Lys Asp Ser Asp Lys Pro Ser Leu Pro Ser Ala Val Asp Gly Glu Asn
450 455 460
Asp Lys Lys Glu Ala Thr Lys Pro Ala Phe Phe Gly Ile Asn Thr Asn
465 470 475 480
Thr Thr Lys Thr Ala Asp Thr Lys Ala Pro Thr Phe Thr Phe Gly Ser
485 490 495
Ser Ala Leu Ala Asp Asn Lys Glu Asp Val Lys Lys Pro Phe Ser Phe
500 505 510
Gly Thr Ser Gin Pro Asn Asn Thr Pro Ser Phe Ser Phe Gly Lys Thr
515 520 525
Thr Ala Asn Leu Pro Ala Asn Ser Ser Thr Ser Pro Ala Pro Ser Ile
530 535 540
Pro Ser Thr Gly Phe Lys Phe Ser Leu Pro Phe Glu Gin Lys Gly Ser
545
550
555
560
Gin Thr Thr Thr Asn Asp Ser Lys Glu Glu Ser Thr Thr Glu Ala Thr 565 570 575 • · φ Φ Φ Β · ♦ · Φ · • * ·· Φ Φ Φ · · · φ · φ · · Φ Φ φφφ ·Φ« »» «ΦΦΦΦΦΦ Φ» ΦΦ
Gly Asn Glu Ser Gin Asp Ala Thr 580 Lys 585 Val Asp Ala Thr Pro 590 Glu Glu
Ser Lys Pro Ile Asn Leu Gin Asn Gly Glu Glu Asp Glu Val Ala Leu
595 600 605
Phe Ser Lys Ala Lys Leu Met Thr Phe Asn Ala Glu Thr Lys Ser Tyr
610 615 620
Asp Ser Arg Gly Val Gly Glu Met Lys Leu Leu Lys Lys Lys Asp Asp
625 630 635 640
Pro Ser Lys Val Arg Leu Leu Cys Arg Ser Asp Gly Met Gly Asn Val
645 650 655
Leu Leu Asn Ala Thr Val Val Asp Ser Phe Lys Tyr Glu Pro Leu Ala
660 665 670
Pro Gly Asn Asp Asn Leu Ile Lys Ala Pro Thr Val Ala Ala Asp Gly
675 680 685
Lys Thr Tyr Ile Val Lys Phe Lys Gin Lys Glu Glu Gly Arg Ser Phe
690 695 700
Thr Lys Ala Ile Glu Asp Ala Lys Lys Glu Lys
705 710 715
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM < ČÍSLEM 18 :
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 335 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární
(li) TYP MOLEKULY: protein
(ix) ZNAKY: (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...335
(xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 18
Met Ala Lys Arg Val Ala Glu Lys Glu Leu Thr Asp Arg Asn Trp Asp
1 5 10 15
Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu Met Gly Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu
20 25 30
Glu Val Met Lys Asn Arg Ala Val Lys Lys Ala Lys Arg Arg Asn Val
35 40 45
Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Gly Ala Phe Lys Gly Phe Lys Gly Leu
50 55 60
Val Val Pro Ser Gly Gly Gly Gly Phe Ser Gly Phe Gly Gly Ser Gly
65 70 75 80
• 0 0 ·
Gly Lys Pro Leu Glu Gly Leu Thr Asn Gly Asn Ser Thr Asp Asn Ala
85 90 95
Thr Pro Phe Ser Asn Val Lys Thr Ala Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe
100 105 110
Gly Ser Phe Ala Val Asn Gly Pro Phe Thr Ala Glu Lys Lys Ser Asp
115 120 125
Ala Ala Gin Gly Ala Thr ser Ala Ser Phe Ser Phe Gly Lys Lys Ile
130 135 140
Glu Ser Ser Ala Leu Gly Ser Leu Ser Ser Gly Ser Leu Thr Gly Phe
145 150 155 160
Ser Phe Ser Ala Gly Ser Ser Ser Leu Phe Gly Lys Asp Ala Ala Gin
165 170 175
Ser Lys Ala Ala Ser Ser Leu Phe Ser Ala Lys Ala Ser Glu Ser Pro
180 185 190
Ala Gly Gly Gly Ser Ser Glu Cys Arg Asp Gly Glu Glu Glu Glu Asn
195 200 205
Asp Glu Pro Pro Lys Val Val Val Thr Glu Val Lys Glu Glu Asp Ala
210 215 220
Phe Tyr Ser Lys Lys Cys Lys Leu Phe Tyr Lys Lys ASp Asn Glu Phe
225 230 235 240
Lys Glu Lys Gly Val Gly Thr Leu His Leu Lys Pro Thr Ala Thr Gin
245 250 255
Lys Thr Gin Leu Leu Val Arg Ala Asp Thr Asn Leu Gly Asn Ile Leu
260 265 270
Leu Asn Val Leu Ile Ala Pro Asn Met Pro Cys Thr Arg Thr Gly Lys
275 280 285
Asn Asn Val Leu Ile Val Cys Val Pro Asn Pro Pro Leu Asp Glu Lys
290 295 300
Gin Pro Thr Leu Pro Ala Thr Met Leu Ile Arg Val Lys Thr Ser Glu
305 310 315 320
Asp Ala Asp Glu Leu His Lys Ile Leu Leu Glu Lys Lys Asp Ala
325 330 335
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM 1 ČÍSLEM 19:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 310 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (i i) TYP MOLEKULY: protein • fc fc fc • · • · • * • fc (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...310 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 19:
Met Ala 1 Ly9 Arg Val Ala 5 Glu Lys Glu Leu 10 Thr Asp Arg Asn Trp 15 Asp
Glu Glu Asp Glu Val Glu Glu Met Gly Thr Phe Ser Val Ala Ser Glu
20 25 30
Glu Val Met Lys Asn Arg Ala Val Lys Lys Ala Lys Arg Arg Asn Val
35 40 45
Gly Phe Glu Ser Asp Ser Gly Gly Ala Phe Lys Gly Phe Lys Gly Leu
50 55 60
Val Val Pro Ser Gly Gly Gly Gly Phe Ser Gly Phe Gly Gly Ser Gly
65 70 75 80
Gly Lys Pro Leu Glu Gly Leu Thr Asn Gly Asn Ser Thr Asp Asn Ala
85 90 95
Thr Pro Phe Ser Asn Val Lys Thr Ala Ala Glu Pro Lys Ala Ala Phe
100 105 110
Gly Ser Phe Ala Val Asn Gly Pro Thr Thr Leu Val Asp Lys Val Ser
115 120 125
Asn Pro Lys Thr Asn Gly Asp Ser Asn Gin Pro Pro Ser Ser Gly Pro
130 135 140
Ala Ser Ser Thr Ala Cys Pro Gly Asn Ala Tyr His Lys Gin Leu Ala
145 ISO 155 160
Gly Leu Asn Cys Ser Val Arg Asp Trp Ile Val Lys His Val Asn Ile
165 170 175
Asn Pro Leu Cys Asp Leu Thr Pro Ile Phe Lys Asp Tyr Glu Arg Tyr
180 185 190
Leu Ala Thr Ile Glu Lys Gin Leu Glu Asn Gly Gly Gly Ser Ser Ser
195 200 205
Glu Ser Gin Thr Asp Arg Ala Thr Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu
210 215 220
Phe Gly Ser Thr Lys Leu Gin Gin Glu Ser Pro Phe Ser Phe His Gly
225 230 235 240
Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu Lys Val Glu Phe Thr Ala Glu Lys
245 250 255
Lys Ser Asp Ala Ala Gin Gly Ala Thr Ser Ala Ser Phe Ser Phe Gly
260 265 270
• * • · · · · « φ ·· · · »·· ·· · · · ··« ·· ·«· ·«·« ·· ··
Lys Lys Ile 275 Glu Ser Ser Ala Leu 200 Gly Ser Leu Ser Ser 285 Gly Ser Leu
Thr Gly Phe ser Phe Ser Ala Gly Ser Ser Ser Leu Phe Gly Lys Asp
290 295 300
Ala Ala Glu Lys Glu Leu
305 310 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 20:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 132 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKYj (A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...132 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 20:
Thr Thr Leu Val 1 Asp Lys Val 5 Ser Asn Pro 10 Lys Thr Asn Gly Asp 15 Ser
Asn Gin Pro Pro Ser Ser Gly Pro Ala Ser Ser Thr Ala Cys Pro Gly
20 25 30
Asn Ala Tyr His Lys Gin Leu Ala Gly Leu Asn Cys Ser val Arg Asp
35 40 45
Trp Ile Val Lys His Val Asn Thr Asn Pro Leu Cys Asp Leu Thr Pro
50 55 60
Ile Phe Lys Asp Tyr Glu Arg Tyr Leu Ala Thr Ile Glu Lys Gin Leu
65 70 75 80
Glu Asn Gly Gly Gly Ser Ser Ser Glu Ser Gin Thr Asp Arg Ala Thr
85 90 95
Ala Gly Met Glu Pro Pro Ser Leu Phe Gly Ser Thr Lys Leu Gin Gin
100 105 110
Glu Ser Pro Phe Ser Phe His Gly Asn Lys Ala Glu Asp Thr Ser Glu
115 120 125
Lys Val Glu Phe 130 *· · • · · · · • · · · * • · ··· · · • · · · · • •v·*· · · · · (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 21:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 21:
AGAAAGCAAA GCGCAGAAAT GT 22 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 22:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ií) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...21 (xí) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 22:
CAAATCCAGA AAAGCGTCCT C 21 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 23:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...24 (Xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 23:
TGAAGAATAG AGCCATAAAG AAAG ··« · • · • · 1 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 24:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 páru baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...21 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 24:
AGAAAAGCGT CCTCCTCCAG A 21 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 25:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 24 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...24 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 25:
TGAAGAATAG AGCCATAAAG AAAG 24 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 26:
AGCGCCACTA ACCAAATCCA GA « Β • · · · · · · · ·
Β Β Β Β Β* »· · Β » · Β I»»Β * · · · V · Β Β
Β· · ΒΒ »·»·»·» «Β ♦ Β (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 27:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 páru baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 27:
AGAAAGCAAA GCGCAGAAAT GT 22 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 28:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 28:
GAAAAGCGTC CTCCTCCAGA AG 22 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 29:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 29:
GAAAGCAAAG CGCAGAAATG TT (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 3 0:
*«· (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...21 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 30:
CTCCAGCGCC ACTACCAAAT C 21 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI Ξ IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 31:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 20 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE; lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...20 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 31:
CCCGCACGGA GCAGTTCAAG 20 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 32:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (íi) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 32:
GCAGCGGCAG ATCCCAAGGT AG • * • * a · · • « (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 33:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 17 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (íx) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1 ... 17 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 33:
GGCATCCTTT TTCTCCA 17 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 34:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 22 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...22 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 34:
CGTTCTTATC GTCTCTGTGT TC 22 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 35:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 19 párů bázi (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...19 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 35:
GCATCCTTTT TCTCCAGTA v v * 9 • a a a a n a » < «4 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 36:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 18 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...18 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 36:
TGTTCCAAAT CCACCAAT 18 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 37:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 19 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...19 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 37:
GTCTGCATCC TCGCTGGTT 19 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 38:
(í) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (íi) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...21 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 38:
CGTTCTTATC GTCTGTGTTC C (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 39:
«·0 (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 18 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...18 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 39:
TTTTACCCGA ATCAACAT 18 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 40:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 21 párů baží (B) TYP: nukleová kyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: DNA (genomová) (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: exon (B) POZICE: 1...21 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 40:
GTACGCGAAC AGGGAAGAAT A 21 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S jEM 41 (i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 212 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...212
(xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 41 :
Arg Val Ser Asn Gly Ser Pro Ser Leu Glu Arg Met Asp Ala Arg Gin
1 5 10 15
Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu Phe Gly Pro Val
20 25 30
* Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys His Cys Arg Asp Met
35 40 45
Glu Glu Ala Ser Gin Arg Lys Trp Asn Phe Asp Phe Gin Asn His Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gin Glu Val Glu Arg Gly Ser Leu
65 70 75 80
Pro Glu Phe Tyr Tyr Arg Pro Pro Arg Pro Pro Lys Ser Ala Cys Lys
85 90 95
Val Leu Ala Gin Glu Ser Gin Asp Val Ser Gly Ser Arg Gin Ala Val
100 105 110
Pro Leu Ile Gly Ser Gin Ala Asn Ser Glu Asp Arg His Leu Val Asp
115 120 125
Gin Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gin Ala Gly Leu Ala Glu Gin Cys
130 135 140
Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp Ser Ser Ser Gin Ile
145 150 155 160
Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser Asp Gly Ser Pro Asn
165 170 175
Ala Gly Thr Val Glu Gin Thr Pro Lys Lys Pro Gly Leu Arg Arg Gin
v 180 185 190
Thr Arg Val Asp Leu Gin Pro Ser Phe Arg Ala Asn Phe Leu Phe Met
195 200 205
Ile Phe Ile Lys
210
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 42;
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 183 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein • ♦ (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...183
(xi Met 1 ) POPIS SEKVENCE: : SEKVENCE ID. Lys 10 C. Pro 42 :
Asp Ala Arg Gin Ala 5 Asp His Pro Ser Ala Cys Arg 15 Asn
Leu Phe Gly Pro Val Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Αερ Leu Glu Lys
20 25 30
His Cys Arg Asp Met Glu Glu Ala Ser Gin Arg Lys Trp Asn Phe Asp
35 40 45
Phe Gin Asn His Lys Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gin Glu Val
50 55 60
Glu Arg Gly Ser Leu Pro Glu Phe Tyr Tyr Arg Pro Pro Cys Pro Pro
65 70 75 80
Lya Ser Ala Cys Lys Val Leu Ala Gin Glu Ser Gin Asp Val Ser Gly
85 90 95
Ser Arg Gin Ala val Pro Leu Ile Gly Ser Gin Ala Asn Ser Glu Asp
100 105 110
Arg His Leu Val Asp Gin Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gin Ala Gly
115 120 125
Leu Ala Glu Gin Cys Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp
130 135 140
Ser Ser Ser Gin Ile Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser
145 150 155 160
Asp Gly Ser Pro Asn Ala Gly Thr Val Glu Gin Thr Pro Lys Lys Pro
165 170 175
Gly Leu Arg Arg Gin Thr Arg
180
2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 43:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 199 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ; protein (J3) POZICE: 1...199 (xí) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 43:
Arg Val 1 Ser Asn Gly 5 Ser Pro Ser Pro Glu 10 Arg Met Asp Ala Arg 15 Gin
Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu Phe Gly Pro Val
20 25 30
Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys His Cys Arg Asp Met
35 40 45
Glu Glu Ala Ser Gin His Lys Trp Asn Phe Asp Phe Gin Asn His Arg
50 55 60
Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gin Glu Val Glu Arg Gly Ser Leu
65 70 75 80
Pro Glu Phe Tyr Tyr Arg Pro Pro Arg Pro Pro Lys Ser Ala Cys Lys
85 90 95
Val Leu Ala Gin Glu Ser Gin Asp Val Ser Gly Ser Arg Gin Ala Val
100 105 110
Pro Leu Ile Gly Ser Gin Ala Asn Ser Glu Asp Arg His Leu Val Asp
115 120 125
Gin Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gin Ala Gly Leu Ala Glu Gin Cyg
130 135 140
Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp Ser Ser Ser Gin Ile
145 150 155 160
Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser Asp Gly Ser Pro Asn
165 170 175
Ala Gly Thr Val Glu Gin Thr Pro Lys Lys Pro Gly Pro Arg Arg Gin
180 185 190
Thr Arg Val Asp Leu Gin Pro
195
2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČN ÍM ČÍSLEM 44 :
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 199 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ÍX) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...199 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 44:
Arg Val 1 Ser Asn Gly 5 Ser Pro Ser Leu Glu 10 Arg Met Asp Ala Arg 15 Gin
Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu Phe Gly Pro Val
20 25 30
Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys His Cys Arg Asp Met
35 40 45
Glu Glu Ala Ser Gin Arg Lys Trp Asn Phe Asp Phe Gin Asn His Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gin Glu Val Glu Arg Gly Ser Leu
65 70 75 80
Pro Glu Phe Tyr Tyr Gly Pro Pro Arg Pro Pro Lys Ser Ala Cys Lys
85 90 95
Val Leu Ala Gin Glu Ser Gin Asp Val Gly Gly Ser Arg Gin Ala Val
100 105 110
Pro Leu Ile Gly Ser Gin Ala Asn Ser Glu Asp Arg His Leu Val Asp
115 120 125
Gin Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gin Ala Gly Leu Ala Glu Gin Cys
130 135 140
Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp Ser Ser Ser Gin Ile
145 150 155 160
Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser Asp Gly Ser Pro Asn
165 170 175
Ala Gly Thr Val Glu Gin Thr Pro Lys Lys Pro Gly Leu Arg Arg Gin
180 185 190
Thr Arg Val Asp Leu Gin Pro
5 (2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 45:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 199 aminokyselin (B) TYP.- aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...199 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 45:
Val Ser Asn Gly Ser Pro Ser Leu Glu Arg Met Asp Ala Arg Gin Ala 15 10 15 • 9 9 9 • · ·· · ·
70 · fc • · • * fcfcfcfc • « • * • • fc
« »« · · •
Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu Phe Gly Pro Val Asn
20 25 30
His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys His Cys Arg Asp Met Glu
35 40 45
Glu Ala Ser Gin Arg Lys Trp Asn Phe Asp Phe Gin Asn His Lys Pro
50 55 60
Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gin Glu Val Glu Arg Gly Ser Leu Pro
65 70 75 80
Glu Phe Tyr Tyr Gly Pro Pro Arg Pro Pro Lys Ser Ala Cys Lys Val
85 90 95
Leu Ala Gin Glu Ser Gin Asp Val Ser Gly Ser Arg Gin Ala Val Pro
100 105 110
Leu Ile Gly Ser Gin Ala Asn Ser Glu Asp Arg His Leu Val Asp Gin
115 120 125
Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gin Ala Gly Leu Ala Glu Gin Cys Pro
130 135 140
Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp Ser Ser Ser Gin Ile Lys
145 150 155 160
Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser Asp Gly Ser Pro Asn Ala
165 170 175
Gly Thr Val Glu Gin Thr Pro Lys Lys Pro Gly Leu Arg Arg Gin Thr
180 185 190
Arg Val Asp Leu Gin Pro Ser
195
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 46:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 220 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...220
(xi ) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 46
Asn Val Arg Val Ser Asn Gly Ser Pro Ser Leu Glu Arg Met Asp Ala
1 c 10 15
Arg Gin Ala Asp His Pro Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu Phe Gly Pro
20 25 30
71 4 * • · • · • • • * * · • · 4 · 4 « 4 •
• 4
Val Asn His 35 Gly Glu Leu Thr Arg 40 Asp Leu Glu Lys His 45 Cys Arg Asp
Met Glu 50 Glu Ala Ser Gin Arg 55 Lys Trp Asn Phe Asp 60 Phe Gin Asn His
Lys 65 Pro Leu Glu Gly Arg 70 Tyr Glu Trp Gin Glu 75 Val Glu Arg Gly Ser 80
Leu Pro Glu Phe Tyr 85 Tyr Arg Pro Pro Arg 90 Pro Pro Lys Ser Ala 95 Cys
Lys Val Pro Ala 100 Gin Glu Ser Gin Asp 105 Val Ser Gly Ser Arg 110 Gin Ala
Val Pro Leu 115 Ile Gly Ser Gin Ala 120 Asn Ser Glu Asp Arg 125 His Leu Val
Asp Gin 130 Met Pro Asp Ser Ser 135 Asp Asn Gin Ala Gly 140 Leu Ala Glu Gin
Cys 145 Pro Gly Met Arg Lys 150 Arg Pro Ala Ala Glu 155 Asp Ser Ser Ser Gin 160
Ile Lys Arg Ala Asn 165 Arg Thr Glu Glu Asn 170 Val Ser Asp Gly Ser 175 Pro
Asn Ala Gly Thr 180 Val Glu Gin Thr Pro 185 Lys Lys Pro Gly Leu 190 Arg Arg
Gin Thr Arg 195 Val Asp Leu Gin Pro 200 Ser Phe Arg Ala Asn 205 Phe Leu Phe
Met Ile 210 Phe Ile Ile Lys Val 215 Ile Lys Lys Ile Ser 220
(2) INFORMACE PRO SEKVENCI Ξ IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 47:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 183 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein (B) POZICE: 1...183
(xi ) POPIS SEKVENCE : SEKVENCE ID. C. 47 :
Met Asp Ala Arg Gin Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cy3 Arg Asn
1 5 10 15
Leu Phe Gly Pro Val Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys
20 25 30
His Cys Gin Asp 35 Met Glu Glu Ala Ser Gin Arg 40 Lys Trp 45 Asn Phe Asp
Phe Gin Asn His Lys Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gin Glu Val
50 55 60
Glu Arg Gly Ser Leu Pro Glu Phe Tyr Tyr Arg Pro Pro Arg Pro Pro
65 70 75 80
Lys Ser Ala Cys Lys Val Leu Ala Gin Glu Ser Gin Asp Val Ser Gly
85 90 95
Ser Arg Gin Ala Val Pro Leu Ile Gly Ser Gin Ala Asn Ser Glu Asp
100 105 110
Arg His Leu Val Asp Gin Met Pro Asp Ser Ser Asp Asn Gin Ala Gly
115 120 125
Leu Ala Glu Gin Cys Pro Gly Met Arg Lys Arg Pro Ala Ala Glu Asp
130 135 140
Ser Ser Ser Gin Ile Lys Arg Ala Asn Arg Thr Glu Glu Asn Val Ser
145 150 155 160
Asp Gly Ser Pro Asn Ala Gly Thr Val Glu Gin Thr Pro Lys Lys Pro
165 170 175
Gly Leu Arg Arg Gin Thr Arg
180
2) INFORMACE PRO SEKVENCI S IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 48 :
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 138 aminokyselin (B) TYP; aminokyselina (C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: protein
(B) poz: ICE: 1 . . . i: 38
(x: i) : POPI S SEKVENCE : S] EKVENCE ID č 4 8 :
Met Asp Ala Arg Gin Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn
1 5 10 15
Leu Phe Gly Pro Val Asn His Gly Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys
20 25 30
His Cys Arg Asp Met Glu Glu Ala Ser Gin Arg Lys Trp Asn Phe Asp
35 40 45
Phe Gin Asn His Lys Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gin Glu Val 50 55 60 ♦ · * 4 Μ • φ · ♦ · ««« · ·
Glu 65 Arg Gly Ser Leu Pro Glu Phe Tyr Tyr Gly Pro Pro Arg Pro Pro 80
70 75
Lys Ser Ala Cys Lys Val Leu Ala Gin Glu Ser Gin Asp Val Ser Gly
85 90 95
Ser Arg Gin Ala Val Pro Leu Ile Gly Ser Gin Ala Asn Ser Glu Asp
' 100 105 110
Arg His Leu Val Asp Gin Met Pro Asp Ser Ser Asp Ser Gin Ala Gly
115 120 125
Leu Ala Glu Gin Cys Pro Gly Met Arg Lys
130 135
«z v »*
INFORMACE PRO SEKVENCI £ 5 IDENTIFIKAČNÍM ČÍSLEM 49.·
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 197 aminokyselin (B) TYP: aminokyselina.
(C) TYP VLÁKNA: jednoduché (D) TOPOLOGIE: lineární (íí) TYP MOLEKULY: protein (ix) ZNAKY:
(A) JMÉNO/OZNAČENÍ: .protein (B) POZICE: 1...197 (xi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE ID. Č. 49:
Met Ser Asn Val Arg Val ser Asn Gly Ser Pro Ser Leu Glu Arg Met
1 5 10 15
ASp Ala Arg Gin Ala Asp His Pro Lys Pro Ser Ala Cys Arg Asn Leu
20 25 30
Phe Gly Pro Val Asn His Glu Glu Leu Thr Arg Asp Leu Glu Lys His
35 40 45
Cys Arg Asp Met Glu Glu Ala Ser Gin Arg Lys Trp Asn Phe Asp Phe
50 55 60
Gin Asn His Lys Pro Leu Glu Gly Arg Tyr Glu Trp Gin Glu Val Glu
65 70 75 80
Arg Gly Ser Leu Pro Glu Phe Tyr Tyr Arg Pro Pro Arg Pro Pro Lys
85 90 95
Ser Ala Cys Lys Val Leu Ala Gin Glu Ser Gin Asp Val Ser Gly Ser
100 105 110
Arg Gin Ala Val Pro Leu Ile Gly Ser Gin Ala Asn Ser Glu Asp Arg
115 120 125
t?
,1
%) • ** • · « · • · · ··· ·· • · · » ·· • v · ·«·· · * · · · ·
999 9999 99 99
Híb Leu 130 val Asp Gin Met Pro 135 Asp Ser Ser Asp Asn 140 Gin Ala Gly Leu
Ala 145 Glu Gin Cys Pro Gly 150 Met Arg Lys Arg Pro 155 Ala Ala Glu Asp Ser 160
Ser Ser Gin Asn Lys 165 Arg Ala Asn Arg Thr 170 Glu Glu Asn Val Ser 175 Asp
Gly Ser Pro Asn Ala Gly Thr Val Glu Gin Thr Pro Lys Lys Pro Gly
180 185 190
Leu Arg Arg Gin Thr 195
• · · * · 9 0 9 9 • 9 · ft·*· · ftft · · · •ftft···· ·· ·· 75 ipíH
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (33)

1. Protein, který inhibuje p27, a tím ruší inhibici buněčné proliferace způsobovanou proteinem p27.
2. Protein podle nároku 1, který obsahuje sekvenci aminokyselin pl63 uvedenou v tab. 6 (sekvence identifikačního čísla 16) nebo její části.
3. Protein podle nároku 2, kde části sekvence aminokyselin pl63 jsou vybrány ze skupiny obsahující peptidy se sekvencí aminokyselin v polohách 1 až 24 (sekvence id. č. 2), v polohách 137 až 196 (sekvence id. č. 4), v polohách 215 až 265 (sekvence id. č, 6), v polohách 239 až 272 (sekvence id. č. 8), v polohách 399 až 438 (sekvence id. č. 10) a v polohách 307 až 469 (sekvence id. č. 12), vztaženo k číslování poloh podle tab. 6.
4. Protein, který se může z proteinu podle nároku 2 odvodit delecí funkčních domén, a ve kterém je ze sekvence id. č. 16 podle tab. 6 deletována (odstraněna) vazebná doména pro p27 nebo vazebná doména pro ran.
5. Protein podle nároku 4, který po delecí vazebné domény p27 poskytne protein s aminokyselinovou sekvencí podle tab. 8 (sekvence id. č. 18) a delecí vazebné domény ran poskytne protein s aminokyselinovou sekvencí podle tab. 9 (sekvence id. č. 19).
6. Protein, který se může odvodit z proteinu podle nároku 2 delecí všech aminokyselinových sekvencí kromě úseku vazebné domény p27.
« · a * a t · a <
• · 4 a a · · • v • « a · ·
7. Protein podle nároku 6, který obsahuje sekvencí aminokyselin uvedenou v tab. 10 (sekvence id. č. 20).
8. Protein podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 7, přičemž se jedná o odpovídající homologický protein nebo jeho odpovídající část, a sice člověka nebo jiného druhu savce.
9. Protein podle nároku 8, který obsahuje aminokyselinovou sekvenci lidského homologů pl63.
10. DNA, která kóduje protein podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9.
11. DNA podle nároku 10, která
a) obsahuje nukíeotidovou sekvenci uvedenou v tab. 3 (sekvence id. č. 1) nebo její část,
b) hybridi zuje se sekvencí uvedenou v odstavci a) za stringentních (přísných) podmínek, nebo
c) je ve srovnání se sekvencí uvedenou v odstavci a) změněna způsobem odpovídajícím degeneraci genetického kódu, a přesto kóduje stejnou aminokyselinovou sekvenci.
12. DNA podle nároku 11 pro použití jako primer pro PCR, přičemž nukleotidová sekvence primerů pro PCR je vybrána ze skupiny obsahující sekvence id. č. 21 až id. č. 3 0 uvedené v tab. 12a, sekvence id. č. 31 až id. č. 32 uvedené v tab. 12b a sekvence id. č. 33 až id. č. 40 uvedené v tab. 12c.
13. Použití DNA podle nároku 10 nebo 11 k prokázání a/nebo kvantifikaci pl63 mRNA v buňce a/nebo tkáni.
• * « 0 00
0 0 * 0000 0
0 0 0 0 0
0000000 00 00 • 0
0 0 9 1
0 0 0 00 0 · ·
14. Použití podle nároku 13, kde se prokázání a/nebo kvantifikace provede northernovým přenosem.
15. Použití podle nároku 13, kde se prokázání a/nebo kvantifikace provede pomocí PCR.
*
16. Použití podle nároku 15, kde se pro PCR použije primer podle nároku 12.
17. Použití podle nároku 13, kde se prokázání a/nebo kvantifikace provede pomocí fluorescenční hybridizace in šitu.
18. Použití proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9 pro přípravu protilátky, která se na tento protein váže.
19. Protilátka a fragment této protilátky, které se váží na vazebnou doménu pro protein p27 proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9.
t
20. Protilátka a fragment této protilátky, které se váží na vazebnou doménu pro protein ran proteinu podle jednoho nebo 1 několika nároků z nároků 1 až 9.
21. Použití protilátky podle nároku 19 nebo 20 k prokázání proteinu podle jednoho nebo několika nároků 1 nebo 2 v buňce, tkáni nebo tělní tekutině.
• ♦* • 4 · < · 4
4 · · ·«·· » • · · · · «·«·«·· · * » 4
22. Antisense nukleová kyselina, která je komplementární k části DNA podle nároku 10 nebo 11, přičemž tato část leží v úseku nukleotidů kódujícím aminokyseliny 121 až 467.
23. Antisense nukleová kyselina podle nároku 22, která je vybrána ze skupiny obsahující triplexovou DNA, syntetické oligonukleotidy, antisense RNA a ribozymy.
24. Použití antisense nukleové kyseliny podle nároku 22 nebo 23 pro inhibici proliferace buňky, přičemž tato buňka je s antisense nukleovou kyselinou v kontaktu in vitro nebo in vivo.
25. Konstrukt nukleové kyseliny kódující antisense nukleovou kyselinu podle nároku 22 nebo 23 pro inhibici proliferace buňky, kde DNA kódující antisense sekvenci nukleové kyseliny je spojena alespoň s jednou aktivační sekvencí, a pak je zavedena do cílové buňky jako holá DNA, nebo jako DNA vložená do nevirového vektoru nebo do virového vektoru.
26. Použití proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9, kdy se pro vyhledávání inhibitorů využije vzájemné působení mezi uvedeným proteinem a buněčným vazebným partnerem.
27. Použití podle nároku 26, kdy se využije systém dvou hybridů („two-hybrid-system}.
28. Použití podle nároku 26, kdy se využije afinitní systém, ve kterém se na pevnou fázi váže pl63 nebo jeho vazebná doména pro p27, pevná fáze se pak inkubuje se zkoušenou látkou a nakonec se prostřednictvím značeného vazebného φ φ • · φ φ · φ · * partnera proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9 stanoví inhibice vazby vazebného partnera s uvedeným proteinem.
·»
29. Použití podle nároku 28, kde vazebný partner je vybrán ze skupiny obsahující p2 7 a ran.
30. Použití proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 3 až 9 jako inhibitoru funkce proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1, 2, 8 a 9.
31. Použití protilátky podle nároku 19 nebo 20 jako inhibitoru funkce proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1, 2, 8 a 9.
32. Konstrukt nukleové kyseliny obsahující DNA podle nároku 10 nebo 11 operativně spojenou s aktivační sekvencí, která umožňuje expresi proteinu podle jednoho nebo několika nároků z nároků 1 až 9 v buňce.
33. Použití konstruktu nukleové kyseliny podle nároku 32 pro
CZ984225A 1997-12-20 1998-12-18 Protein ihnibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace CZ422598A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19756975A DE19756975A1 (de) 1997-12-20 1997-12-20 Bindungspartner für Inhibitoren von cyclinabhängigen Kinasen und ihre Verwendung zur Suche nach Inhibitoren, zur Diagnose oder zur Therapie einer Erkrankung

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ422598A3 true CZ422598A3 (cs) 1999-07-14

Family

ID=7852804

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ984225A CZ422598A3 (cs) 1997-12-20 1998-12-18 Protein ihnibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace
CZ984223A CZ422398A3 (cs) 1997-12-20 1998-12-18 Konstrukty nukleové kyseliny, jejichž aktivita je ovlivněna inhibitory kináz závislých na cyklinu, způsob přípravy takových konstruktů a jejich použití pro přípravu léčiva

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ984223A CZ422398A3 (cs) 1997-12-20 1998-12-18 Konstrukty nukleové kyseliny, jejichž aktivita je ovlivněna inhibitory kináz závislých na cyklinu, způsob přípravy takových konstruktů a jejich použití pro přípravu léčiva

Country Status (15)

Country Link
US (1) US6265562B1 (cs)
EP (2) EP0926236A1 (cs)
JP (2) JPH11313686A (cs)
KR (2) KR19990063284A (cs)
CN (2) CN1227871A (cs)
AR (2) AR017887A1 (cs)
AU (2) AU747246B2 (cs)
BR (2) BR9805152A (cs)
CA (2) CA2255141A1 (cs)
CZ (2) CZ422598A3 (cs)
DE (1) DE19756975A1 (cs)
HU (1) HUP9802961A3 (cs)
ID (2) ID21582A (cs)
PL (2) PL330452A1 (cs)
TR (2) TR199802649A3 (cs)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19751587A1 (de) 1997-11-21 1999-07-29 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Onkogen- oder virusgesteuerte Expressionssysteme
GB9727512D0 (en) * 1997-12-31 1998-02-25 Adprotech Plc Fuzzy genes and their application in molecular adjuvants
DE19831420A1 (de) * 1998-07-14 2000-01-20 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Expressionssysteme enthaltend chimäre Promotoren mit Bindungsstellen für rekombinante Transkriptionsfaktoren
GB0008582D0 (en) * 2000-04-08 2000-05-31 Adprotech Plc DNA immunization vectors
GB0025229D0 (en) * 2000-10-14 2000-11-29 Adprotech Ltd Veterinary immunisation vectors
WO2003048311A2 (en) * 2001-11-29 2003-06-12 Institutes For Pharmaceutical Discovery, Llc Regulated expression of recombinant dna
EP1943265B1 (en) * 2005-10-01 2012-09-12 Charles Stout Regulatable fusion promoters
KR101445903B1 (ko) 2007-05-02 2014-09-29 메리얼 리미티드 향상된 발현 및 안정성을 갖는 ｄｎａ 플라스미드
EP3187585A1 (en) 2010-03-25 2017-07-05 Oregon Health&Science University Cmv glycoproteins and recombinant vectors
PL2691530T3 (pl) 2011-06-10 2019-02-28 Oregon Health & Science University Glikoproteiny i rekombinowane wektory CMV
US20130189754A1 (en) 2011-09-12 2013-07-25 International Aids Vaccine Initiative Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies
US9402894B2 (en) 2011-10-27 2016-08-02 International Aids Vaccine Initiative Viral particles derived from an enveloped virus
ES2631608T3 (es) 2012-06-27 2017-09-01 International Aids Vaccine Initiative Variante de la glicoproteína Env del VIH-1
US20150065381A1 (en) 2013-09-05 2015-03-05 International Aids Vaccine Initiative Methods of identifying novel hiv-1 immunogens
EP2873423B1 (en) 2013-10-07 2017-05-31 International Aids Vaccine Initiative Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers
EP3069730A3 (en) 2015-03-20 2017-03-15 International Aids Vaccine Initiative Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers
EP3072901A1 (en) 2015-03-23 2016-09-28 International Aids Vaccine Initiative Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers
US20210230221A1 (en) * 2017-01-03 2021-07-29 Bioatla, Llc Protein therapeutics for treatment of senescent cells

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0455424A3 (en) * 1990-05-02 1992-04-29 Merck & Co. Inc. Mammalian inducible promoter cascade system
US5866755A (en) * 1993-06-14 1999-02-02 Basf Aktiengellschaft Animals transgenic for a tetracycline-regulated transcriptional inhibitor
US5464758A (en) * 1993-06-14 1995-11-07 Gossen; Manfred Tight control of gene expression in eucaryotic cells by tetracycline-responsive promoters
GB9506466D0 (en) 1994-08-26 1995-05-17 Prolifix Ltd Cell cycle regulated repressor and dna element
DE19524720A1 (de) 1995-07-12 1997-01-16 Hoechst Ag Zellspezifische Gentherapie mit Hilfe eines neuen Promotors für den "Tissue Inhibitor of Metalloproteinasn-3"
DE19605279A1 (de) 1996-02-13 1997-08-14 Hoechst Ag Zielzellspezifische Vektoren für die Einschleusung von Genen in Zellen, Arzneimittel enthaltend derartige Vektoren und deren Verwendung
DE19605274A1 (de) 1996-02-13 1997-08-14 Hoechst Ag Nukleinsäurekonstrukte für die zellzyklusregulierte Expression von Genen, derartige Konstrukte enthaltende Zellen sowie deren Verwendung zur Herstellung von Heilmitteln
DE19751587A1 (de) * 1997-11-21 1999-07-29 Hoechst Marion Roussel De Gmbh Onkogen- oder virusgesteuerte Expressionssysteme

Also Published As

Publication number Publication date
CN1225367A (zh) 1999-08-11
CA2255141A1 (en) 1999-06-20
KR19990063285A (ko) 1999-07-26
AU9720498A (en) 1999-07-08
ID21582A (id) 1999-06-24
TR199802649A2 (xx) 1999-07-21
HUP9802961A2 (hu) 1999-07-28
TR199802648A3 (tr) 1999-07-21
BR9805151A (pt) 2000-03-21
HUP9802961A3 (en) 2000-04-28
EP0926236A1 (de) 1999-06-30
BR9805152A (pt) 2000-03-21
US6265562B1 (en) 2001-07-24
AR016436A1 (es) 2001-07-04
EP0926237A3 (de) 2000-01-05
CN1227871A (zh) 1999-09-08
TR199802648A2 (xx) 1999-07-21
PL330452A1 (en) 1999-06-21
KR19990063284A (ko) 1999-07-26
AU747246B2 (en) 2002-05-09
JPH11313686A (ja) 1999-11-16
PL330451A1 (en) 1999-06-21
AU9720598A (en) 1999-07-08
CA2255143A1 (en) 1999-06-20
TR199802649A3 (tr) 1999-07-21
HU9802961D0 (en) 1999-02-01
JPH11308997A (ja) 1999-11-09
DE19756975A1 (de) 1999-06-24
ID21534A (id) 1999-06-24
EP0926237A2 (de) 1999-06-30
CZ422398A3 (cs) 1999-07-14
AU758030B2 (en) 2003-03-13
AR017887A1 (es) 2001-10-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ422598A3 (cs) Protein ihnibující p27, DNA kódující takový protein a jejich použití k průkazu RNA, pro hledání inhibitorů a ke stimulaci buněčné proliferace
Cook et al. Two novel targets of the MAP kinase Kss1 are negative regulators of invasive growth in the yeast Saccharomyces cerevisiae.
Harper et al. The p21 Cdk-interacting protein Cip1 is a potent inhibitor of G1 cyclin-dependent kinases
Kosugi et al. PCF1 and PCF2 specifically bind to cis elements in the rice proliferating cell nuclear antigen gene.
Mochizuki et al. Identification and cDNA cloning of a novel human mosaic protein, LGN, based on interaction with Gαi2
Sharp et al. The vaccinia virus E3L gene product interacts with both the regulatory and the substrate binding regions of PKR: implications for PKR autoregulation
Ghiara et al. A cyclin B homolog in S. cerevisiae: chronic activation of the Cdc28 protein kinase by cyclin prevents exit from mitosis
Hengartner et al. Temporal regulation of RNA polymerase II by Srb10 and Kin28 cyclin-dependent kinases
Ching et al. Cloning of three novel neuronal Cdk5 activator binding proteins
CA2146965C (en) Cyclin complex rearrangement and uses related thereto
Fotedar et al. A conserved domain of the large subunit of replication factor C binds PCNA and acts like a dominant negative inhibitor of DNA replication in mammalian cells.
Prendergast et al. Mbh 1: a novel gelsolin/severin‐related protein which binds actin in vitro and exhibits nuclear localization in vivo.
Fülöp et al. The Medicago CDKC; 1‐CYCLINT; 1 kinase complex phosphorylates the carboxy‐terminal domain of RNA polymerase II and promotes transcription
Janoueix‐Lerosey et al. Identification of a specific effector of the small GTP‐binding protein Rap2
JP2001510347A (ja) ＩＫＫ−βタンパク質、核酸及び方法
JP3500156B2 (ja) ＩκＢキナーゼ類
Grueneberg et al. Sequence-specific targeting of nuclear signal transduction pathways by homeodomain proteins
NO323532B1 (no) Fremgangsmate for identifisering av kjemoterapeutiske midler ved bruk av transkripsjonsfaktor DP-1
Kolman et al. Serine-173 of the Epstein-Barr virus ZEBRA protein is required for DNA binding and is a target for casein kinase II phosphorylation.
Qian et al. GRSF-1: a poly (A)+ mRNA binding protein which interacts with a conserved G-rich element
Hirano et al. ROM7/BEM4 encodes a novel protein that interacts with the Rho1p small GTP-binding protein in Saccharomyces cerevisiae
US5846764A (en) Materials and methods relating to proteins that interact with casein kinase I
Rao et al. Δelk-1, a Variant of Elk-1, Fails to Interact with the Serum Response Factor and Binds to DNA with Modulated Specificity
JP2001510684A (ja) アッセイ、治療法及び治療手段
Lee et al. Salpα and Salpβ, growth-arresting homologs of Sam68

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic