CZ391098A3 - Způsob analýzy medicínských vzorků, které obsahují hemoglobin - Google Patents
Způsob analýzy medicínských vzorků, které obsahují hemoglobin Download PDFInfo
- Publication number
- CZ391098A3 CZ391098A3 CZ983910A CZ391098A CZ391098A3 CZ 391098 A3 CZ391098 A3 CZ 391098A3 CZ 983910 A CZ983910 A CZ 983910A CZ 391098 A CZ391098 A CZ 391098A CZ 391098 A3 CZ391098 A3 CZ 391098A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- sample
- value
- hemoglobin
- determined
- samples
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6827—Total protein determination, e.g. albumin in urine
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/84—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu stanovení složky (analytu) ve vzorku, který obsahuje volný hemoglobin, přičemž stanovení nastává pomocí optického měření a naměřená hodnota pro koncentraci složky se koriguje výpočetně. Tento způsob je vhodný zejména ke stanovení parametrů celkové bílkoviny, železa a albuminu v medicínském vzorku, například ve vzorku séra nebo plazmy.
Dosavadní stav techniky
Je obecně známo, že stanovení souboru složek je částečně ve značné míře narušeno hemolýzou. Aby se přesto získaly nezfalšované naměřené hodnoty, publikovaly se v minulosti rozdílné způsoby odrušení hemolýzy.
Jak se uvádí v patentu EP-0 268 025 Bl, vytvořila se pro jednotlivé stanovované složky grafická závislost mezi stupněm hemolýzy a výslednou chybou měření. Z toho se mohly odvodit korekční faktory, pomocí kterých se potom na bázi odděleného stanovení stupně hemolýzy výpočetně korigoval získaný výsledek analýzy.
Jay a Provasek rovněž popsali, že pomocí stanovení stupně hemolýzy a pomocí použití korekčního faktoru se mohou získat pravé hodnoty v hemolytických vzorcích (Clin Chem
38/6, 1026 (1992), popřípadě Clin Chem 39/9, 1804-1810 (1993)). Zde se zjišťuje stupeň hemolýzy odděleným stanovením obsahu hemoglobinu ve vzorku.
V patentovém spisu US 4,263,521 se doporučovalo, aby se kromě stanovované složky korigoval stupeň zakalení (X), hemolýzy (Y) a ikteru (Z) pomoci vzorce S' = S - α.Χ - β.Υ - γΖ. Přitom S' je korigovaná hodnota stanovované složky a α, βa γ jsou korekční faktory, které se získaly měřením vlivu zakalení, hemolýzy a ikteru pomocí referenčních kapalin. Určení X, Y a Z nastává vícekanálovým měřením a následným komplikovaným výpočtem ze získaných adsorpčních rozdílů s ohledem na podíl ostatních interferujících látek.
Jeden ze způsobů korekce rušení hemolýzou bez odděleného stanovení stupně hemolýzy se ukazuje v DE 44 27 492 Al. Zde se nalezla matematická souvislost mezi obsahem rušivých látek uvolněných hemolýzou z erytrocytů a předběžnou reakcí probíhající před hlavní reakcí. Pomocí stupně hemolýzy tím určeného v průběhu předběžné reakce se může korigovat výsledek analýzy získaný v hlavní reakci (stupeň,;ť.iv:ví.) za využití nalezené souvislosti mezi stupněm hemolýzy a příspěvkem rušení podle vzorce hodnota:.'tkú/v-or-k. = hodnota^u,,.,,.: hodnotapfeJMjr..5 re-k·.-* - hodnotaiíltk,;i/^ri+r.;,,;yt, přičemž látka znamená stanovovanou složku ve vzorku.
Často se rušení způsobené hemoglobinem elimunuje také měřením hodnoty slepého pokusu vzorku. Toto však neplatí pro stanovení celkové bílkoviny pomocí metody založené na biuretové reakci (Morgan et al. Microchem J 44, 282-287 (1991)) a také ne pro stanovení albuminu pomocí metody s bromkrezolovou zelení, případně bromkrezolovým purpurem. Pro stanovení železa je dále známo, že když se předem hemoglobin ze vzorku neodstraní dialýzou, potom stále dochází k rušení hemoglobinem (Sonntag, J Clin Chem Clin Biochem 24/2, 127-139 (1986)). Také u železa nelze rušení způsobené hemoglobinem odstranit jediným měřením hodnoty slepého pokusu vzorku.
Všechny výše popsané metody odrušení však mají tu nevýhodu, že jsou spojeny se značnou pracností (příprava vzorku dialýzou, popřípadě oddělené určování stupně hemolýzy, například pomocí stanovení obsahu hemoglobinu) a/nebo komplikovanými matematickými korekčními algoritmy.
Kromě toho jsou všechny popsané způsoby vztažené na odrušení chybných měření způsobených hemolýzou. S vývojem krevních náhražek na bázi hemoglobinu se ještě o mnoho brizantněji než dosud nastoluje problém odstranění rušení způsobených přirodním nebo syntetickým hemoglobinem, popřípadě sloučeninami analogickými hemoglobinu. Taková rušení se vyskytují za prvé také v nehemolytickém materiálu vzorků a za druhé také v mnohem vyšším stupni než u přírodní hemolýzy, protože při terapii s krevními náhražkami nemůže být obsah hemoglobinu v krevním séru nebo plazmě vyšší než 1000 mg/dl.
Úkolem předloženého vynálezu bylo poskytnutí způsobu odstranění rušení, která se vyvolávají přírodním hemoglobinem nebo sloučeninami analogickými hemoglobinu na bázi krevních náhražek a nedají se odstranit jednoduchým měřením hodnoty slepého pokusu vzorku. Tento způsob by měl být kromě toho ve srovnání s obvyklými způsoby spojen se spolehlivě sníženou pracností a zaručovat odrušení do alespoň 1000 mg/dl hemoglobinu.
♦ ♦
Úkol, který je základem vynálezu, se řešil tím, že se překvapivě nalezla souvislost mezi úrovní hodnoty slepého pokusu vzorku a stupněm narušení naměřených výsledků volným hemoglobinem. Tím je možno pomocí jednoduchého matematického korekčního vzorce přesně určit správnou hodnotu koncentrace stanovované složky také při vysokém obsahu hemoglobinu. Ve srovnáni se stavem techniky se způsob podle vynálezu výhodně vyznačuje tím, že k tomu, aby se korigovala naměřená hodnota medicínského vzorku obsahujícího hemoglobin, není potřebné ani oddělené určováni obsahu hemoglobinu, ani stanovení stupně předběžné reakce.
Podstata vynálezu
Předmětem předloženého vynálezu je proto způsob stanovení složky ve vzorku, který obsahuje volný hemoglobin, optickým měřením, přičemž naměřená hodnota koncentrace stanovované složky se koriguje pomocí těchto kroků:
(a) měření (b) měření dardu) (c) měřeni složky, hodnoty slepého pokusu analyzovaného vzorku, hodnoty slepého pokusu referenčního vzorku (stanneobsahujícího hemoglobin, nekorigované hodnoty koncentrace stanovované <d) korigování hodnoty získané v kroku (c) pomocí korelace s hodnotami získanými v kroku (a) a (b), aby se získala korigovaná hodnota koncentrace stanovované složky.
• ·* ·
Korigovaná hodnota koncentrace stanovované složky v kroku (d) způsobu podle vynálezu se určuje zejména podle následujícího vztahu:
Cř v=i- = — F.E1-—„u + F. Ε1 Γ-), přičemž
C'vzor-k je korigovaná hodnota koncentrace stanovované složky, Cvzoi-ěk je nekorigovaná naměřená hodnota koncentrace stanovované složky ve vzorku,
F je korekční faktor specifický pro test,
Elvzor^k je naměřená hodnota slepého pokusu ve vzorku a Elotand:ir.i je naměřená hodnota slepého pokusu v referenčním vzorku (standardu).
Metoda korekce podle vynálezu je vhodná pro způsoby, při kterých nastává stanovení složky pomocí optického měření, zejména pomocí optického měření při vlnových délkách, při kterých se projevuje rušení volným hemoglobinem nacházejícím se ve vzorku. Obzvláště přednostně nastává optické měření v rozsahu 500 až 750 nm.
Způsob podle vynálezu se hodí pro stanovení libovolných vzorků, ve kterých se nachází volný hemoglobin. Příklady takových vzorků jsou hemolytlcké vzorky séra nebo plazmy nebo vzorky, které obsahují krevní náhražky. Příklady pro krevní náhražky, které ve smyslu předloženého vynálezu spadají pod pojem „volný hemoglobin, jsou derivatizované, polymerizované, modifikované nebo příčně zesíťované deriváty hemoglobinu, zejména lidského hemoglobinu nebo hovězího hemoglobinu, a také rekombinantně vyrobený hemoglobin.
V jedné z přednostních forem provedení předloženého vynálezu se stanovuje obsah celkové bílkoviny ve vzorku. Toto stanovení nastává zejména podle metody založené na biuretové reakci. V další obzvláště přednostní formě provedení předloženého vynálezu se stanovuje obsah železa ve vzorku. Toto stanovení obsahu železa nastává zejména podle metody za použiti ferozinu. V ještě další obzvláště přednostní formě provedení se stanovuje obsah albuminu ve vzorku. Toto stanovení nastává zejména podle metody za použití bromofrezolové zeleně nebo bromkrezolového purpuru. Při stanovení tohoto parametru, při kterém dosud nebyla známa žádná jednoduchá metoda odrušení pro stanovení vzorků obsahujících hemoglobin, se způsobem podle vynálezu překvapivě dosahuje výrazného zjednodušení postupu měření.
Způsob podle vynálezu se dále vyznačuje tím, že dokonce ikterické vzorky s vysokým obsahem bilirubinu sě mohou bez problémů proměřovat do alespoň 20 mg/dl. Rušení lipemickými vzorky se může eliminovat pomocí použití přiměřeného optického vyjasňovače, který se například přidává k činidlu.
Jako vzorků se při způsobu podle vynálezu používá zejména vzorku séra nebo plazmy, obzvláště vzorek lidského séra nebo plazmy. Jako referenčních vzorků (standardů) se používá výhodně vzorků séra nebo plazmy klinicky zdravých probandů. Obzvláště přednostně se využívá poolu séra nebo plazmy bez hemoglobinu klinicky zdravých probandů.
Zvláštní výhoda způsobu podle vynálezu spočívá v tom, že se může provádět v automatickém analyzátoru, například v analytickém zařízení Boehringer Mannheim/Hitachi 704 nebo 717. Na základě jednoduchého matematického korekčního vzorce « ·
4· se může automatický analyzátor programovat tak, aby se již vydávala korigovaná hodnota koncentrace stanovované složky a aby již nebyla potřebná dodatečná výpočetní korekce.
Podstatným parametrem pro korekci naměřené koncentrace stanovované složky je korekční faktor F specifický pro test. Tento korekční faktor F se určuje zejména způsobem, který obsahuje tyto kroky:
(a) příprava série alespoň 3 vzorků se stejným obsahem stanovované složky, přičemž alespoň jeden ze vzorků neobsahuje hemoglobin a alespoň 2 ze vzorků obsahují rozdílné koncentrace volného hemoglobinu, (b) měření hodnoty slepého pokusu každého vzorku, přičemž se stanoví nárůst hodnoty slepého pokusu vzorku způsobený přítomností hemoglobinu ve srovnání se vzorkem neobsahujícím hemoglobin, (c) měření nekorigované koncentrace stanovované složky v každém vzorku, přičemž se stanoví zfalšování naměřené hodnoty způsobené přítomností hemoglobinu ve srovnání s referenčním vzorkem neobsahujícím hemoglobin a (d) korelace zfalšování naměřené hodnoty stanoveného v kroku (c) s nárůstem hodnoty slepého pokusu vzorku stanoveným v kroku (b), aby se získal korekční faktor specifický test.
Výhodně se při stanovení korekčního faktoru F připraví série vzorků, přičemž alespoň 5 a například 10 vzorků obsahuje rozdílné koncentrace volného hemoglobinu. Koncentrace ** φ
φ *
• · • φ φ * φφφφ φ φ · φ φ φ
Φφφφ volného hemoglobinu se pro sérii vzorků mění například v rozsahu 0 mg/dl až alespoň 1000 mg/dl.
Pro určitý vzorek obsahující volný hemoglobin ze série se určí korekční faktor F' specifický pro vzorky podle následuj íccího vztahu:
F' = AC : ΔΕ1 pricemz
AC je absolutní hodnota zfalšování měřené hodnoty pro právě jeden vzorek, způsobené přítomností volného hemoglobinu ve srovnání s referenčním vzorkem a
ΔΕ1 je nárůst hodnoty slepého pokusu pro právě jeden vzorek způsobený přítomností volného hemoglobinu ve srovnání s referenčním vzorkem.
Z korekčních faktorů F' stanovených pro dané vzorky se může určit korekční faktor F specifický pro test pomocí vytvoření průměrné hodnoty. Tímto způsobem se mohl stanovit korekční faktor F 0,332 při důkazu albuminu metodou s bromkrezolovou zelení, korekční faktor 0,290 při důkazu železa metodou s ferozinem a korekční faktor 0,115 při důkazu celkové bílkoviny metodou založenou na biuretové reakci. Při použití těchto korekčních faktorů se nalezla vynikající úroveň opětovného nalezení stanovované složky při vzorcích obsahujících hemoglobin.
Dále se vynález vysvětluje pomocí následujících příkladů.
• fc • ·· • · * • · * fcfc • fc «· ·· ·· fcfcfc fcfcfcfc • · fcfcfc · · · fc fcfc fc · ··♦ ··· • fc fc ♦ · · • fc fcfc ·· ··
Příklady provedení vynálezu
Obecné metody
1. Zjištění korekčního faktoru (viz také příklady 1 až 3)
Z poolu séra nebo plazmy klinicky zdravých probandů se naředí 11 vzorků rozdílným množstvím hemolyzátu, hemoglobinu nebo sloučeniny analogické hemoglobinu tak, že při neměnícím se obsahu stanovované složky vznikne koncentrační řada hemoglobinu, ve které nejnižši vzorek (= standard) neobsahuje žádný hemoglobin a nejvyšší vzorek obsahuje alespoň 1000 mg/dl hemoglobinu. Všechny vzorky této řady se proměřují danou zkouškou, přičemž pro každý vzorek se získá odpovídajíc jeho obsahu hemoglobinu ve srovnání se standardem zfalšovaná hodnota stanovované složky.
Pro každý vzorek se zjistí nárůst hodnoty slepého pokusu vzorku ΔΕ1, způsobený hemoglobinem, ve srovnání s hodnotou slepého pokusu vzorku neobsahujícího hemoglobin (= standard) : ΔΕ1 = Elv - ElM ?. Dále se pro každý vzorek zjistí absolutní hodnota zfalšování hodnoty stanovované složky AC, způsobeného hemoglobinem, ve srovnání s naměřenou hodnotou v standardu; Δ0 = C s.
Při dělení podílu rušení Ac absolutní hodnotou nárůstu hodnoty slepého pokusu vzorku ΔΕ1 se získá pro každý vzorek korekční faktor F'. . : = Ac : ΔΕ1.
Z takto získaných 10 jednotlivých faktorů koncentrační řady hemoglobinu se nyní vytvoří průměrný korekční faktor F. Tento faktor je pevnou veličinou, který se musí jednorázově • flfl « flflfl • · zjistit pro albumin, železo a celkovou bílkovinu, pro danou zkoušku je však potom konstantní.
2. Výpočet korigované hodnoty stanovované složky (viz také příklady 4 až 8)
Pomoci výpočetní korekce naměřené hodnoty stanovované složky vzorku C„ o rušivý podíl AC se zjistí korigovaná a tím nerušená hodnota stanovované složky daného vzorku rf ·
VT/-, p.gV ·
C'. = C.,.....- AC
c......
F.AE
F. (Ε1 v^or<,fe. -Elfjtsndard)
F . E1 γ .-η rn l· 4 F · EbtsTirH rH *
Standardem je, jak je popsáno výše, pool séra nebo plazmy neobsahující hemoglobin od klinicky zdravých probandů. Pro uvedené metody je vliv šíře kolísání měřených hodnot slepého pokusu různých vzorků pacientů na základě poměru hodnoty slepého pokusu k měrnému signálu zanedbatelně malá. Dokonce neruší ani ikterické vzorky s obsahem bilirubinu do alespoň 20 mg/dl. Rušení lipemickými vzorky se může eliminovat pomocí použití vhodného optického vyjasňovače, který se například přidává k činidlu. Ikterické a lipemické vzorky se vyrobily naředěním lidských sér s bilirubinem, případně Tntralipid1R1 analogickým Glick (Clin Chem 32/3, 470-475 (1986) ) .
V automaticky měřicím analytickém přistrojí, jako například v přístrojích Boehringer Mannheim/Hitachi 704 nebo 717, se může výpočet nerušené hodnoty stanovované složky • · • « « ··· ► · « < • · ♦· programovat tak, aby se vydávaly již korigované hodnoty a aby již nebyla potřebná dodatečná výpočetní korekce. Toto programování se provádí například pro albumin na přístroji Boehringer Mannheim/Hitachi 704 následovně:
1. Parametrový program: Chemické parametry:
| Test 1 | Test 2 | |
| Test | (BLALB) | (ALB) |
| Assay Code | 3-15-0 | 3-15-23 |
| Objem vzorku (μΐ) | 4 | 4 |
| Objem Rl (μΐ) | 350 | 350 |
| Objem R2 (μΐ) | 0 | 350 |
| Vlnové délky | 700-600 | 700-600 |
| Kalibrace | Faktor K | 1-0-0 |
| Std.(1) konc.-poz. (g/l) | 0, 00 | 0-1 |
| Std.(2) konc.-poz. (g/l) | Žádaná vstupní hodnota 2 |
2. Monitor: kalibrační monitor (1): pro test 1 při SI ext. zadat 0 a při K 100000.
3. Korigovaná hodnota stanovované složky se vypočítá pomocí „Calculated Test (viz manuál Boehringer Mannheim/Hitachi 704):
Calculated Test = (Test 2) - (Test 1) .F + koncentrace.t,MSH.
Test 2 je stanovení koncentrace naměřené nekorigované hodnoty složky, to · • to to to to to* • to • tototo to to to · to··· to • to *« ·» ·· ·· ··
Test 1 je stanovení extinkce hodnoty slepého pokusu,
F je zjištěný faktor pro albumin, železo, případně pro celkovou bílkovinu ke korekci rušení hemoglobinem, koncentrace3 = F.El ► a zadává se jako koncentrace.
Příklad 1
Zjištění korekčního faktoru pro stanovení albuminu metodou s bromkrezolovou zelení
Stanovení se provádělo na analytickém přístroji Boehringer Mannheim/Hitachi 704 s analytickým kódem (Assay-Code)
2-15-23 při 37 ’C. Použilo se následujících činidel:
činidlo 1: 75 mmol/l sukcinátového pufru, pH 4,2;
činidlo 2: 75 mmol/l sukcinátového pufru, pH 4,2; 0,3 mmol/l bromkrezolové zeleně.
Test se uskutečnil následovně: ke 4 μΐ vzorku se přidalo 350 μΐ činidla 1 a po stanovení hodnoty slepého pokusu 350 μΐ činidla 2. Potom se uskutečnilo po 2 min stanovení složky. K měření se použilo hlavní měřicí vlnové délky 600 nm a vedlejší měřicí vlnové délky 700 nm.
Výsledek tohoto pokusu je znázorněn v tabulce 1. Zjištěná hodnota korekčního faktoru specifického pro test byla 0,332.
Příklad 2
Zjištění korekčního faktoru pro stanovení železa metodou s ferozinem • ·· · • •fefe · « · · · · • 4 ·« *· ·· ·· ··
Stanovení se provádělo na analytickém přístroji Boehringer Mannheim/Hitachi 717 s analytickým kódem 2-24-30 při 37 °C. Použilo se následujicich činidel:
činidlo 1: 150 mmol/1 Na-acetátového pufru, pH 5,0; 4 mmol/1 guanidiniumchloridu; 100 mmol/1 thiomočoviny; detergent; činidlo 2: 150 mmol/1 askorbové kyseliny; 50 mmol/1 ferozinu.
Test se uskutečnil následovně: ke 20 μΐ vzorku se přidalo 250 μΐ činidla 1 a po stanovení hodnoty slepého pokusu vzorku 50 μΐ činidla 2. Potom se uskutečnilo po 1 min stanovení složky. K měření se použilo hlavní měřicí vlnové délky 546 nm a vedlejší měřicí vlnové délky 700 nm.
Výsledek tohoto pokusu je znázorněn v tabulce 2. Zjištěná hodnota korekčního faktoru specifického pro test byla 0,290.
Příklad 3
Zjištění korekčního faktoru pro stanovení celkové bílkoviny metodou založenou na biuretové reakci
Stanovení se provádělo na analytickém přístroji Boehringer Mannheim/Hitachi 717 s analytickým kódem (Assay-Code) 2-24-50 při 37 eC. Použilo se následujících činidel:
činidlo 1: 200 mmol/1 NaOH; 32 mmol/1 K-Na-tartarátu; činidlo 2: 200 mmol/1 NaOH; 32 mmol/1 K-Na-tartarátu; 30,5 mmol/1 KI; 12,15 mmol/1 Cu-sulfátu.
4
Test se uskutečnil následovně: k 7 μΐ vzorku se přidalo 250 μΐ činidla 1 a po stanovení hodnoty slepého pokusu 250 μΐ činidla 2. Potom se uskutečnilo po 5 min stanovení složky. K měření se použilo hlavní měřicí vlnové délky 546 nm a vedlejší měřicí vlnové délky 700 nm.
Výsledek tohoto pokusu je znázorněn v tabulce 3. Zjištěná hodnota korekčního faktoru specifického pro test byla 0,115.
Příklad 4
Použití korekčního faktoru pro stanovení albuminu
Korekčního faktoru zjištěného v příkladu 1 se použilo pro stanovení vzorků obsahujících hemoglobin, které se získaly naředěním s krevními náhražkami.
Test se uskutečnil tak, jak se popisuje v příkladu 1.
Vzorec pro výpočet korigované hodnoty koncentrace stanovované složky ve vzorku byl:
C,v--r.-i· = Cy-rreř — F.Elv-irnl: + F. Ε1 nřzsndard = Cí'.-.r»v “ F . Ε 1 ν-,-,ΓΟ(· +
0,3 g/1.
Výsledek tohoto pokusu je uveden v tabulce 4. Dá se vidět, že pomocí korekce se dosáhlo míry opětovného nalezení 100 ± 1 %.
Příklad 5
Použití korekčního faktoru pro stanovení železa
Za použití korekčního faktoru zjištěného v příkladu 2 se provádělo stanovení železa metodou s použitím ferozinu ve vzorcích obsahujících hemoglobin, které se získaly naředěním hemolyzátem.
Test se uskutečnil tak, jak se popisuje v příkladu 2.
Vzorec pro výpočet korigované hodnoty koncentrace stanovované složky byl:
CT-= Cv-nríl “ F*El----r.^’.- + F . E1 stsn'!· = Cvrnr-t — F,Elv,.-reV +
02,9 gg/dl.
Výsledek tohoto pokusu je uveden v tabulce 5. Dá se vidět, že pomocí korekce se dosáhlo vynikajícího opětovného nalezení železa, které bylo s výjimkou jediné hodnoty v rozsahu 100 ± 2,5 %.
Příklad 6
Použití korekčního faktoru pro stanovení celkové bílkoviny
Za použití korekčního faktoru zjištěného v příkladu 3 se provádělo stanovení celkové bílkoviny podle metody založené na biuretové reakci pro vzorky obsahující hemoglobin, které se získaly naředěním krevními náhražkami.
Test se uskutečnil tak, jak se popisuje v příkladu 3.
Vzorec pro výpočet korigované hodnoty koncentrace stanovované složky byl:
CL-..^ = Ο,—.· - F.E1,— + F.E1..-„-í»-! = C-,-.,.=·.· - F.El·,+
0,6 g/1.
Výsledek pokusů je uveden v tabulce 6. Dá se vidět, že opětovné nalezení pro celkovou bílkovinu ve velké většině případů bylo v rozsahu 100 ± 1 %.
Příklad .7
Stanovení albuminu v ikterických vzorcích
Pro stanovení albuminu metodou s bromkrezolovou zelení při ikterických vzorcích, získaných naředěním bilirubinem, se použilo korekčního faktoru, specifického pro test, zjištěného v příkladu 1.
Test se uskutečnil tak, jak se popisuje v příkladu 1. Vzorec pro výpočet korigované hodnoty stanovované složky byl takový, jak se popisuje v příkladu 4.
Výsledek tohoto pokusu je uveden v tabulce 7. Dá se vidět, že použití korekčního vzorce nevedlo k žádnému zhoršení při opětovném nalezení.
Příklad 8
Stanovení železa v lipemických vzorcích « · • 4 • · · ·
Korekčního faktoru specifického pro test, zjištěného v příkladu 2, se použilo pro stanovení železa metodou s ferozinem u lipemických vzorků, které se získaly naředěním s Intralipid(R).
Test se uskutečnil tak, jak se popisuje v příkladu 2. Vzorec pro výpočet korigované hodnoty stanovované složky byl takový, jak popisuje příklad 5.
Výsledek tohoto pokusu je uveden v tabulce 8. Dá se vidět, že za použití korekčního vzorce se nedosáhlo žádného zhoršeného opětovného nalezení u lipemických vzorků.
Tab. 1 «·
Tab. 2
• ·
Tak·.' 3·
Tab·.* 4
fc fc * « 'Tab'.’:
Tab. 6
2^
44 *4·*
Tab. 7 • ···
0
Tab. 8 ř/ 3310 ·· »0 ·· ' * 0 0 0 0
Claims (18)
1. Způsob stanovení složky ve vzorku, který obsahuje volný hemoglobin, optickým měřením, přičemž naměřená hodnota koncentrace stanovované složky se koriguje pomocí těchto kroků:
(a) měření hodnoty slepého pokusu analyzovaného vzorku, (b) měření hodnoty slepého pokusu referenčního vzorku neobsahujícího hemoglobin, (c) měření nekorigované hodnoty koncentrace stanovované složky, (d) korigování hodnoty získané v kroku (c) pomocí korelace s hodnotami získanými v kroku (a) a (b), aby se získala korigovaná hodnota koncentrace stanovované složky, kde korigovaná hodnota koncentrace stanovované složky se zjistí podle následujícího vztahu:
= Cv
- F.El, přičemž
C'vz-refc je korigovaná hodnota koncentrace stanovované složky, Cvzorť-k je nekorigovaná naměřená hodnota koncentrace stanovované složky ve vzorku,
F je korekční faktor specifický pro test,
Elvzorek je naměřená hodnota slepého pokusu ve vzorku a
Změněný list • ·
Μ
0 ·
0 ·♦· • · « • · « • 0*
El:t-.r.j:.rd je naměřená hodnota slepého pokusu v referenčním vzorku.
2. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že stanovení složky se provádí pomocí optického měření v rozsahu 600 až 700 nm.
3. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 2, vyznačující se tím, že se stanovuje vzorek, který obsahuje krevní náhražku.
4. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se stanovuje obsah celkové bílkoviny ve vzorku.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se tím, že se stanovení obsahu celkové bílkoviny nastává metodou založenou na biuretové reakci.
6. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se stanovuje obsah železa ve vzorku.
7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že stanovení obsahu železa nastává metodou za použití ferozinu.
8. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se stanovuje obsah albuminu ve vzorku.
Změněný list flfl flfl fl «fl « flflfl flfl « « · ·· fl · *
4 ·· ••flfl flflfl· fl
9. Způsob podle nároku 8,vyznačující se tím, že se stanovení obsahu albuminu provádí metodou za použití bromkrezolové zeleně nebo bromkrezolového purpuru.
10. Způsob podle jednoho z nároků laž9, vyznačující se tím, že se při stanovení lipemických vzorků přidává optický vyjasňovač.
11. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že se stanovení provádí na vzorku séra nebo plazmy.
12. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 11, vyznačující se tím, že se jako referenčních vzorků používá vzorků séra nebo plazmy klinicky zdravých probandů.
13. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 12, vyznačující se tím, že se způsob provádí v automatickém analyzátoru.
14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že se automatický analyzátor programuje tak, aby se vydávala již korigovaná hodnota koncentrace stanovované složky.
15. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že stanovení korekčního faktoru F, specifického pro test, zahrnuje tyto kroky:
(a) příprava série alespoň 3 vzorků se stejným obsahem stanovované složky, přičemž alespoň jeden ze vzorků neobsahuje hemoglobin a alespoň 2 ze vzorků obsahují rozdílné
Změněný list φφ • φ φ φ • φ φ φ » • φφ φφ ·· • · φ · φ φ φφ • · φ φ · φ φ φφ φφ φφφ φ φ φ φ · φ φ • φ φ φ φ φ · φ φ koncentrace volného hemoglobinu, (b) měření hodnoty slepého pokusu každého vzorku, přičemž se stanoví nárůst hodnoty slepého pokusu vzorku způsobený přítomností hemoglobinu ve srovnání se vzorkem neobsahujícím hemoglobin, (c) měření nekorigované koncentrace stanovované složky v každém vzorku, přičemž se stanoví zfalšování naměřené hodnoty způsobené přítomností hemoglobinu ve srovnání s referenčním vzorkem neobsahujícím hemoglobin, a (d) korelace zfalšování naměřené hodnoty stanoveného v kroku (c) s nárůstem hodnoty slepého pokusu vzorku stanoveným v kroku (b), aby se získal korekční faktor specifický pro test.
16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se tím, že se připraví série vzorků, přičemž alespoň 5 vzorků obsahuje rozdílné koncentrace volného hemoglobinu.
17. Způsob podle nároku 15 nebo 16, vyznačuj í cí se tím, že se připraví série vzorků, kterých koncentrace volného hemoglobinu se mění od 0 mg/dl do alespoň 1000 mg/dl.
18. Způsob podle jednoho z nároků 15 až 17, vyznačující se tím, že se zjistí korekční faktor F' specifický pro vzorek obsahující volný hemoglobin podle následujícího vztahu:
F' = AC : ΔΕΙ,
Změněný list »•4 • 4 ·· 44 » · 4 • 4 *44 ·· • · · • 44 *
• 4 pro daný ·· ·· • ·» · • · ·· • · · · · · · ·· ·» přičemž
Ac je absolutní hodnota zfalšování měřené hodnoty vzorek, způsobeného přítomnosti volného hemoglobinu, ve srovnání s referenčním vzorkem a
ΔΕ1 je nárůst hodnoty slepého pokusu pro daný vzorek způsobený přítomností volného hemoglobinu ve srovnání s referenčním vzorkem, a že korekční faktor F specifický pro test se určí vytvořením průměrné hodnoty korekčních faktorů F' stanovených pro dané jednotlivé vzorky.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19622089A DE19622089A1 (de) | 1996-05-31 | 1996-05-31 | Verfahren zur Analyse Hämoglobin enthaltender medizinischer Proben |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ391098A3 true CZ391098A3 (cs) | 1999-11-17 |
Family
ID=7795916
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ983910A CZ391098A3 (cs) | 1996-05-31 | 1997-05-30 | Způsob analýzy medicínských vzorků, které obsahují hemoglobin |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6207459B1 (cs) |
| EP (1) | EP0906569B1 (cs) |
| JP (1) | JP3814300B2 (cs) |
| KR (1) | KR20000016036A (cs) |
| CN (1) | CN1220007A (cs) |
| AT (1) | ATE208899T1 (cs) |
| AU (1) | AU3031497A (cs) |
| CA (1) | CA2255843C (cs) |
| CZ (1) | CZ391098A3 (cs) |
| DE (2) | DE19622089A1 (cs) |
| ES (1) | ES2163775T3 (cs) |
| IL (1) | IL126718A0 (cs) |
| NZ (1) | NZ332444A (cs) |
| PL (1) | PL330229A1 (cs) |
| TW (1) | TW408223B (cs) |
| WO (1) | WO1997045732A1 (cs) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7198955B1 (en) * | 1997-03-03 | 2007-04-03 | Nir Diagnostics Inc. | Method and apparatus for measurement of blood substitutes |
| DE19846300A1 (de) * | 1998-10-08 | 2000-04-13 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren zur Bestimmung von alkalischer Phosphatase unter Reduzierung von Hämoglobin-Störungen durch das Rate-Blank-Verfahren |
| DE19846301A1 (de) * | 1998-10-08 | 2000-04-13 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren zur Bestimmung von alkalischer Phospatase unter Beseitigung von Hämoglobin-Störungen |
| KR100343753B1 (ko) * | 2000-02-17 | 2002-07-20 | 강건 | 빌리루빈의 농도와 헤모글로빈의 함유량 측정기 |
| US20060205082A1 (en) * | 2005-03-10 | 2006-09-14 | Middleton John S | Reaction rate determination |
| JP2009031202A (ja) * | 2007-07-30 | 2009-02-12 | Hitachi High-Technologies Corp | 自動分析装置 |
| CN103376327A (zh) * | 2012-04-28 | 2013-10-30 | 通用电气公司 | 检测抗体或融合蛋白的浓度的方法 |
| WO2016024791A1 (en) | 2014-08-12 | 2016-02-18 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Sample test method, microfluidic device, and test device |
| KR102310652B1 (ko) * | 2014-08-12 | 2021-10-12 | 삼성전자주식회사 | 샘플 검사 방법, 미세유동장치 및 검사장치 |
| CN115508568A (zh) | 2019-01-29 | 2022-12-23 | 美国西门子医学诊断股份有限公司 | 降低血红蛋白A1c测定中的英脱利匹特/脂血干扰的浊度归一化算法和方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3310382A (en) * | 1963-02-04 | 1967-03-21 | George R Kingsley | Biuret reagent |
| US3533749A (en) * | 1967-09-12 | 1970-10-13 | Warner Lambert Pharmaceutical | Method for the determination of total albumin |
| US3558278A (en) * | 1967-12-26 | 1971-01-26 | Baxter Laboratories Inc | Determination of albumin |
| JPS5463785A (en) * | 1977-10-31 | 1979-05-22 | Hitachi Ltd | Colorimetric analysis method |
| JPS604929B2 (ja) * | 1977-11-11 | 1985-02-07 | 株式会社日立製作所 | 比色分析方法 |
| IT1100475B (it) * | 1978-11-08 | 1985-09-28 | R C O Ricerche Di Chimica Clin | Metodo e composizioni per la determinazione diretta del ferro mel stero ematico |
| JPS6350743A (ja) * | 1986-08-20 | 1988-03-03 | Hitachi Ltd | 溶血のある血液試料の分析方法 |
| US5151370A (en) * | 1990-10-11 | 1992-09-29 | Synermed, Inc. | Reagent and method for serum iron assay |
| US5945272A (en) * | 1993-06-04 | 1999-08-31 | Biotime, Incorporated | Plasma expanders and blood substitutes |
| DE4401754A1 (de) * | 1994-01-21 | 1995-07-27 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Eisen |
| DE4427492A1 (de) | 1994-08-03 | 1996-02-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Analyse einer medizinischen Probe unter Vermeidung von Störbeiträgen aufgrund von Hämolyse |
-
1996
- 1996-05-31 DE DE19622089A patent/DE19622089A1/de not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-05-13 TW TW086106364A patent/TW408223B/zh active
- 1997-05-30 DE DE59705397T patent/DE59705397D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-05-30 AT AT97925031T patent/ATE208899T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-05-30 IL IL12671897A patent/IL126718A0/xx unknown
- 1997-05-30 AU AU30314/97A patent/AU3031497A/en not_active Abandoned
- 1997-05-30 NZ NZ332444A patent/NZ332444A/xx unknown
- 1997-05-30 CZ CZ983910A patent/CZ391098A3/cs unknown
- 1997-05-30 JP JP54162897A patent/JP3814300B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-05-30 CA CA002255843A patent/CA2255843C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-05-30 KR KR1019980709599A patent/KR20000016036A/ko not_active Application Discontinuation
- 1997-05-30 US US09/147,288 patent/US6207459B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-05-30 PL PL97330229A patent/PL330229A1/xx unknown
- 1997-05-30 CN CN97194987A patent/CN1220007A/zh active Pending
- 1997-05-30 WO PCT/EP1997/002834 patent/WO1997045732A1/de not_active Application Discontinuation
- 1997-05-30 EP EP97925031A patent/EP0906569B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-05-30 ES ES97925031T patent/ES2163775T3/es not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0906569B1 (de) | 2001-11-14 |
| WO1997045732A1 (de) | 1997-12-04 |
| CA2255843A1 (en) | 1997-12-04 |
| CN1220007A (zh) | 1999-06-16 |
| JP2000512007A (ja) | 2000-09-12 |
| DE19622089A1 (de) | 1997-12-04 |
| DE59705397D1 (de) | 2001-12-20 |
| ATE208899T1 (de) | 2001-11-15 |
| ES2163775T3 (es) | 2002-02-01 |
| PL330229A1 (en) | 1999-05-10 |
| CA2255843C (en) | 2004-07-20 |
| JP3814300B2 (ja) | 2006-08-23 |
| EP0906569A1 (de) | 1999-04-07 |
| US6207459B1 (en) | 2001-03-27 |
| TW408223B (en) | 2000-10-11 |
| NZ332444A (en) | 1999-05-28 |
| IL126718A0 (en) | 1999-08-17 |
| KR20000016036A (ko) | 2000-03-25 |
| AU3031497A (en) | 1998-01-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6268167B1 (en) | Methods for determining an analyte in a plasma or serum sample which may be contaminated with interfering substances resulting from hemolysis | |
| Wang et al. | Methods for assessing the level of nutrition of the human subject. Estimation of vitamin B1 in urine by the thiochrome test | |
| US20110165608A1 (en) | Blood component measurement method utilizing hemolyzed whole blood, and kit for the method | |
| CN109613280B (zh) | 一种血清铁测定试剂盒及其制备方法和应用 | |
| Thode et al. | Evaluation of a new semiautomatic electrode system for simultaneous measurement of ionized calcium and pH | |
| CZ391098A3 (cs) | Způsob analýzy medicínských vzorků, které obsahují hemoglobin | |
| CH642750A5 (it) | Procedimento per la rapida determinazione del ferro nel siero sanguigno e miscela per l'esecuzione del procedimento. | |
| JP2004535568A (ja) | 全血、血漿、および血清における外因性血液代用物による干渉によって影響を受けた血液分析パラメータ結果の自動補正法 | |
| US4448889A (en) | Fluid analysis | |
| CN113092746B (zh) | 生化校准物质 | |
| HU188211B (en) | Process and reagent for determining glycolyzed hemoglobine | |
| CN109563535B (zh) | HbA1c的测定法 | |
| Datta et al. | Interference by IgG paraproteins in the Jaffe method for creatinine determination | |
| EP0448072A2 (en) | Process for assaying free hemoglobin and reagent kit for assaying free hemoglobin | |
| JP3598273B2 (ja) | ヘモグロビン妨害を排除しつつアルカリホスファターゼを測定する方法 | |
| Flachaire et al. | Assessment of the benzethonium chloride method for routine determination of protein in cerebrospinal fluid and urine. | |
| JP2000346848A (ja) | グルコースの測定方法及び測定装置 | |
| EP0579246A1 (en) | Method for removing unstable type saccharified hemoglobin | |
| Brody et al. | Centrifugal analyzer method for total bilirubin in serum by use of diazotized 2-chloroaniline-5-sulfonic acid. | |
| MXPA98009703A (en) | Method for the analysis of medical samples containing hemoglob | |
| JP4448685B2 (ja) | 総蛋白質定量方法および試薬 | |
| EP4300105A1 (en) | Method for stabilizing hemoglobin | |
| EP3492920A1 (en) | Method for measuring glycated albumin | |
| JPH02105061A (ja) | 塩化物濃度の測定方法 | |
| Bokelund | Empirical relations as interference correctives in multichannel analyzers |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |