TW408223B - Method for the determination of an analyte in a sample containing free haemoglobin by optical measurement - Google Patents
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Description
408223 A7 B7 經濟部中夹標率局工消许合作.社印製 五、發明説明(1 ) 本發明是有關於含有自由態血紅素之樣品中決定分析 物之方法*其中利用光學偵測進行決定,且分析物濃度之 偵測值以數學方法校正。特別地本方法適於決定醫藥樣品 中之變數,如總蛋白質,鐵及白蛋白,如在血清或血漿樣 品中。+ 大體上已知,在決定許多分析物方面,溶血可干擾某 些例子達相當程度》然而爲了得到不可僞造的偵測值,過 去已發展各種方法以減少溶血之干擾》 如專利案Ε Ρ — D - 2 6 8 0 2 5 Β 1中所述,某 些分析物在溶血程度及造成之偵測誤差間發展出座檫相互 關係。校正因子可自此中衍生,其可用數學方法校正基於 ’溶血程度分別決定基礎下所得之分析結果。 Jay及Provasek也描述提及,決定溶血程度及利用 校正因子可在溶血樣品中得到不可僞造之數值(Clin Chem 38/6 , 1026 (1992)及 Clin Chem. 39/5 ,1804- 1 810 (1993 ) ) * 在此例 子中,經由分別偵測樣品中H b含量可決定溶血程度》 於專利文獻US 4,263,512中建議,除了 分析物外也決定混濁度(X),溶血作用(Y)及黃疸( Z)裎度,且藉化式S’ r z 之助校正所測及之分析物數值(S )。在此例中,3’爲 經校正之分析物數值,且a +,.jS及r爲校正因子’其利用 參考液體偵測混濁度,溶血及黃疸之影響而得。X,Y及 z經由多管道偵測及接下來由所得之吸光度差異之複雜估 本紙张尺度適用中囤國家標準(CNS )八4規格(2丨OX297公釐)_ 4 - !1,!!,! (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂 d_ 408223
A7 J ____B7 __ 五、發明説明(2 ) 計而決定,並考慮其他干擾物質之個別比例》 在未分別決定溶血程度下校正溶血干擾的一個方法求 於DE 44 27492 A1。在此頃發現,於紅血球 溶血所釋出之干擾物質含量及在主反應前發生之前一反應 之間有數學相互關係》於主反應中所得之分析結果(速率 總和)可藉著在前一反應中以此方式決定之溶血程度之助 校正*所利用的是於溶血程度及依據下式:速率物質/樣 .品=速率總和一速率前反應一速率物質/紅血球,(其中 物質表示於樣品中欲決定之組份)造成干擾間之相互關係 〇 通常血紅素的干擾也可由偵測樣品空白值未消除。然 而此並不應用至利用Biuret方法所進行的總蛋白質之決 定(Μ 〇 r g a π e t a 1 · , M i c r 〇 c h e m J · 4 4,2 8 2 — 經濟部中央標準局努工消赍合作社印聚 287 (1991)),且也不應用於利用溴甲酚一綠及 溴甲酚一紫方法所進行的白蛋白之決定•再者已知血紅素 之干擾始終出現在H b未以透析法先自樣品中移去之鐵之 決定中(Sonntag, J· Clin.. Chem. Cli.n. Biochem 24/2,127— 139 ( 1 986 ) ) » 同時在鐵之 例子中,僅僅測度樣品空白值將無法消除Hb干擾。 然而,上述關於消除干擾的所有方法均有其缺點,即 其中渉及大量之工作(以透析法製備樣品或分別決定溶血 程度’如決定H b含量)及/或複雜的數學校正方法。 此外所述的方法均是有關消除由溶血所造成之錯誤測 度。發展出以血紅素爲基礎之血液替代品,使得以天然或 5 (請先聞讀背面之注$項再填鸾本頁) 本纸浓尺度適用中囷國家標準(CNS ) Α4規格(210X297公釐) 408223 經濟部中央摞準局只工消贤合作社印裝 A7 ___B7_ 五、發明説明(3 ) 合成血紅素或類血紅素化合物移去干擾之話題較先前更具 關鍵性。此種干擾之後在一方面是於未溶血樣品中發生而 在另一方面較於天然溶血例中有更大的程度,因爲在血液 替代品之治療中,血液血清或血漿中血紅素之含量可高於 1000毫克/公合。 本發明目的是提出消除干擾的方法,其由天然血紅素 或以合成H b或類H b化合物爲基礎之血液替代品所引起 的,且無法以單純測度樣品空白值而消除。此外,此方法 和傳統方法比較下工作量顯著減少,且可保證干擾之消除 高達至少10 0 0毫克/公合H b。 本發明目的之達成在於發現樣品空白值水平及由自由 態血紅素所造成的偵測結果僞造程度間有令人驚訝之相互 關係。結果將有可能藉簡易數學校正方程式之助,確實決 定分析物濃度之校正值.,即使H b含量很高之時。和技藝 中所陳述的比較下,依據本發明的方法其有益的特徵在於 H b含量之分別決定及前一反應程度之決定在校正含有 .Η b之醫藥樣品測度值上均不必要。 因此本發明的主題是以光學測度決定含有自由態血紅 素樣品中分析物之方法,其中分析物濃度之測度值以下一 步驟校正之. (a )偵測欲分析樣品之空白值, (b )偵測無血紅素之參考樣品之空白值, (c )偵測分析物濃度之未校正值,及 (d )以步驟(a )及(b )所得之值相互關係來校正於 请 先 閲 面 之 注
I i 私紙张尺度適用中國國家標準(CNS > A4規格(210 X 297公釐)_ 經濟部中央標準扃員工消费合作社印製 408223 A7 ______B7_ 五、發明説明(4 ) 步驟(c )中所得之數值,以得分析物濃度之經校 正值* 依據本發明方法(d )步驟,分析物濃度之校正值較 好依據以下關係決定: · C’樣品=C樣品-F · E1樣品+F · E1參考樣品 其中C’樣品爲分析物濃度之經校正值, C樣品爲樣品中分析物濃度之未經校正的測度值, F是測試一特異的校正因子, E 1樣品是在樣品中偵測之空白值,及 E :參考樣品爲參考樣品中偵測之空白值。 依據本發明的校正方法適於以光學測度決定分析物之 方法,特別是在樣品中所存在之自由態血紅素會發生干擾 之波長下。光學偵測在5 0 0 - 7 5 0毫微米範圍中可特 性地進行。 依據本發明之方法適於決定其中爲在有自由態血紅素 之任何樣品。此種.樣品之實例有溶血的血清或血漿樣品或 含有血液替代品之.樣品。靥於本發明意義內之^自由態血 紅素〃一詞中之血液替代品實例包括血紅素之經衍生化, 聚合化•經修飾或交聯的衍生物,特別是人類血紅素或牛 血紅素以及經重組產製之血紅素。 在依據本發明方法之較佳具體實例中,所決定的是樣 本紙張尺度適用中國國家標率_( CNS > A4規格(210X297公釐) (請先閲讀背面之注$項再填寫本頁) 訂 -7 - 408223 A7 B7 五、發明説明(5 ) 品之蛋白質總含量。此決定較好依據Biuret方法進行。 於本發明進一步特佳之具體實例中,所決定的是樣品中之 之鐵含量。鐵含量的此決定較好依ferrozine方法進行 β又在進一步特佳具體實例中,決定樣品之白蛋白含量。 白蛋白含量的此決定較好依溴甲酚-綠或溴甲酚一紫方法 進行。於決定這些變數的偵測步驟,其中在決定含有血紅 素樣品中先前並無消除干擾的簡易方法可知,可依本發明 之方法令人驚訝地簡化。 依據本發明方法的進一步特色在於其在膽紅素高達至 少2 〇毫克/公合之高含量黃疸_品中甚至也可容易地測 度。利用適合的清除劑(如其加至試劑中)可消除由脂血 樣品所致之干擾: 於依據本發明之方法中,較好以血清或血漿樣品,.且 特別是人類血清或血漿樣品爲樣品。而來自臨床上健康測 試個體之血清或血漿樣品可有益地充作參考樣品。特別有 益的是使用來自臨床健康受試個體之無血紅素的血清或血 漿匯集物。 經濟部中央標準局只工消费含作社印^ (請先聞讀背面之注意事項再填寫本I) 依據本發明方法的特別優點在於其可於自動化分析儀 上進行,如在 Boehringer Mannheim/Hitachi 7 0 4 或 7 1 7分析儀。由於簡易的數學校正方程式,自動化分析 儀可以此方式設計程式,如此輸出的已是分析物濃度之經 校正值,且接下來將勿需數學校正。 在對所偵測之分析物濃度進行校正時,一個重要的變 數是測試一特異的校正因子F。此校正因子F較好以包括 本紙张尺度適用中國國家標準{ CNS ) A4規格(2丨0X297公釐) 408223 經濟部中央標準局良工消f合作社印製 A7 B7 五、發明説明(6 ) 下列的步驟決定之: (a )製備有相同分析物含量之至少三樣品系列,其中至 少有一個樣品不含血紅素及至少二個樣品含有不同 濃度的自由態血紅素* (b )偵測各樣品之空白值,於此決定由於血紅素存在造 成樣品空白值和無血紅素樣品比較下之增加* (c )偵測各樣品中未校正之分析物濃度,並決定由於血 紅素存在和無血紅素參考樣品比較下所致之偵測值 之僞造,及 (d )將於步驟(c )中所決定之偵測值之僞造以於步驟 (b )所決定之樣品空白值之增加來校正,以得到測試一 特異的校正因子。 當決定校正因子F時,較好製備至少5個樣品系列, ,例如製備1 0個樣品,其中含有不同濃度的自由態血紅 素。例如,自由態血紅素濃度可由0毫克/公合變化至高 達1000毫克/公合。 針對來自含有自由態血紅素系列之特定樣品*可依據 以下相互關係決定樣品特異的校正因子F ’ : F,=△ C : △ E1 其中:△(:是與參考樣品比較下,由於各樣品中存在之自 由態血紅素所致之偵測值之僞造量,且 本紙张尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(2丨0X297公釐) (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂· 408223 A7 __. ’ ._B7 ___ 五、發明説明(7 ) △E1是與參考樣品比較下,由於各樣品中存在之 自由態血紅素所致之樣品空白值之增加·
計算個別樣品所決定之校正因子F’之平均值,可決 定測試一特異的校正因子F。於此方式中,以溴甲酚-綠 方法所進行之白蛋白測試可決定0· 332之校正因子F ,以.ferrozine方法進行之鐵測試可得〇 · 2 9 0之校 正因子F,且以Biuret方法進行之總蛋白質測試可得 0.115之校正因子》當使用這些校正因子,可發現在 含有血紅素之樣品中,欲決定之分析物有極隹之回收率。 本發明經由以下實例進一步閱明: 一般方法: 1 ·校正因子之決定(也參見實例1 一 3 ): 鯉濟部中央樣準局負工消费合作社印製 在來自臨床上健康受試個.體的1 1個血清或血漿匯集 物樣品中,摻和入不同含量的溶血產物,血紅素或類H b 化合物,在此方式下可形成有固定分析物含量之H b濃度 系列,其中最低樣品(=參考物)不含H b,而最高樣品 含有至少1 〇 〇 〇毫克/公合Hb。此系列的所有樣品均 利用個別的試驗測定,.以針對依其H b含量而定之各樣品 得到相較於參考物之經僞造分析物數值。 針對各樣品決定出由於H b所致之樣品空白值之增加 △ E 1 ,此並與無Hb樣品(=參考物)之樣品空白值比 較: 10 本紙決尺度適用中國國家榇準(CNS ) A4規格(210X297公澄) 408223__B7_____ 五、發明説明(8) △ E1=E1樣品-El參考物 此外也決定針對各樣品,由H b所致之分析物值之僞 造△ C量,此::典與參考物中測及之分析物值比較: △ C = C樣品-C參考物 當干擾組份除以樣品空白值增加值ΔΕ 1,可得 各樣品之校正因子: F'樣品= 再自以此方式所得的H b濃度系列0個個別因子中估 算出平均校正因子F。此因子爲一個固定的變數’其於白 蛋白,鐵及總蛋白質中僅必須決定一次’然而之後在個別 試驗中均爲固定值。 . 經濟部中央標準局只工消费合作社印製 2 ·經校正之分析值之估計(也參見實例4 _ 8 ): 由樣品所測及之分析物數值(C樣品)經干擾組份( △ C )之數學方法校正,可決定出個別樣品在無干擾下之 經校正且因此是的分析值(C·樣品)。
C,樣品=C樣品一AC C,樣品=C樣品一 F · △ E -11 本纸依尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 408223 A7 B7
五、發明説明(9 ) C’樣品=C樣品一 F 樣品=C樣品—F (E1樣品一E1參考物) E 1樣品+ F · — E 1參考物 經濟部中央標準局爲4消资合作社印掣 如先前所述*參考物爲臨床上健康受試個體之無H b 血清或血漿匯集物。在所述之方法中,各種病人樣品所測 及之樣品空白值變異範圍之影響是可忽略的,此乃樣品空 白值及所測及訊號間之相互關係之故》甚至至少2 0毫克 /公合膽紅素含量之黃疸樣品也不會干擾。脂血樣品之干 擾可利用適合的清除劑消除•如加在試劑之中》黃疸及脂 血樣品可由人類血清摻入膽紅素及Intralipid®而製備 '類似 G.lick 所述(Clin· Chem. 3 2/ 3,4 7 0 — 4 7 5 ( 1 9 8 6 ))。 在可自動偵測之分析儀中*如Boehringer Mannhei-111/1143(:1^ 7 0 4或7 17儀器,未受干擾之分析物數 值之計算可輸入程式,如此印出來的僅是經校正值,且接 下來將不必再作數學校正。此程式之輸入可如下在Boeh-ringer Mannheim/Hitachi 7 0 4儀器上進行白蛋白之分 析: 本紙烺尺度適用中國國家標準(CNS ) Μ規格(210X297公釐) 12 _ 19 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) «裝· 订_ 經濟部中央標準局負工消疗合作社印製 408223 at __B7 五、發明説明(10) 1 .變數程式:化學變數: 測試1 測試2 測試 (BLALB) (ACB) 分析碼 3-15-0 3-15-23 樣品量(微升) 4 4 R1量(微升) 350 350 R2量(微升) 0 35 0 波長 200-600 700-600 測定 K-因子 1-0-0 std.(l) cone, -pos(克 / 升) 0.00 0-1 std.(2)conc. -pos (克 /升) 標的值-2 本紙张尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) (請先閱讀背®'之注t事項再填寫本頁)
13 - A7 B7 408223 五、發明説明(11) 2 .偵測器:測定偵測器(1 ):於測試.1時,於S 1吸 光度時輸入0,於K輸入100,〇〇〇 .3,經校正之分析物數值以計算測試估算 er Mannheim/Hitechi 7 0 4 操作手冊): 計算測試=(測試2 ) —(測試1 ) F+濃度參考物 測試2是決定所測得之未校正分析物濃度值, 測試1是決定樣品空白值之吸光度 F是決定白蛋白,鐵或總蛋白質時之因子以校正H b之干 擾 濃度參考物=F · E1參考物,且以濃度輸入 啻例 校正因子之決定以依溴甲酚一綠方法決定白蛋白. 經濟部中央標準局只工消资合作社印1i 此決定分析在 3 7Ϊ 下1 Boe.hringer Mannheim/Hit-achi 704分析儀上進行,並使用分析碼2 — 15 — 2 3。使用以下試劑: 試劑1:7 5毫莫耳/升琥珀酸鹽緩衝溶液’?1^4.2 試劑2 : 7 5毫莫耳/升琥珀酸鹽緩衝溶液’ PH4. 2 0. 3毫莫耳/升溴甲酚—綠 本紙张尺度通用中國國家標準(CNS ) A4規格(2丨〇父297公釐)乂 A7 B7 408223 五、發明説明(12) 測試步驟如下:3 5 0微升試劑1加至4微升樣品中 ,而於決定樣品空白值之後加入3 5 0微升試劑2。再2 分鐘後決定分析物。於測試中使用6 0 0毫微米之主波長 及700毫微米之次波長。 此決定之結果示於表1。經決定知測試一特異的校正 因子數值爲0.332。 窨例2 : 校正因子之決定以依據ferrozine方法決定鐵 此決定分析在 3 7°C 下,Boehri+nger Mannheim/Hit-achi 717分析儀上進行,利用分析碼2 — 24 — 30 .。使用以下試劑: 試劑1 : 15. 0毫莫耳/升醋酸鈉緩衝溶液,pH5. 0 4毫莫耳/升氯化胍;1 0 0毫莫耳/升硫脲; 去污劑; 試劑2 : 1 5 0毫莫耳/升抗壞血酸,5 0毫莫耳/升 ferrozine 試驗步驟如下:2 5 0微升試劑1加至2 0微升樣品 ,並於決定樣品空白值後加入5 0微升試劑2。再於丨分 鐘後決定分析物。於此測試中使用5 4 6毫微米之主波長 及700毫微米之二次波長。 木紙浪尺度適用中國國家標準(CNS ) Α4規格(210Χ297公釐)- {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局負工消费合作社印製 15 - Α7 Β7 五、發明説明(l3) 此實驗的結果示於表2中。經決.定知試驗—特異的校 正因子爲0 . 2 9。 曾例3 校正因子之決定以依據Biuret方法決定總蛋白質 此決定,分析在 3 7 °C,Boeh.ringer Mannheim/Hitac-hi 71 7分析儀上進行,利用分析碼2 — 24 — 50。 使用以下試劑: 試劑1:200毫莫耳/升NaOH;32毫莫耳/升酒 石酸鉀鈉; 試劑2:200毫莫耳/升NaOH;32毫莫耳/升酒 石酸鉀鈉;.............. 30_ 5毫莫耳/升KI;12.15毫莫耳/ 升硫酸酮 經濟部中央標準局®::工消费合作社印裂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 試驗步驟如下:2 5 0微升試劑1加至7微升樣品中 ,並於決定樣品空白值之後加入2 5 0微升試劑2。之後 於5分鐘後決定分析物》於此試驗中使用5 4 6毫微米之 主波長及7 0 0毫微米之二次波長 此實驗之結果示於表3中β經決定知試驗一特異的校 正因子0 . 1 1 5 * 眚例4 於白蛋白決定中使用校正方程式 本紙汍尺度適用中國國家樣準(CNS ) Α4規格(210X297公釐) 408223 A7 B7 經濟部中央標準局只工消费>作杜印製 五、發明説明(14) 於實例1中所決定之校正因子用於含有血紅素樣品之 決定中,其係得自血液替代品之摻入。 試驗步驟如實例1所述。 如下之方程式可用來計算樣品中經校正的分析物濃度 〇 C,樣品=C樣品一 F · E 1樣品+ F · E 1參考物 =C樣品一F.E1樣品+0. 3克/升 此實驗的結果示於表4·可看出以此校正可達到 100±1%之回收率。 窗例5 於鐵之決定中使用校正方程式 依據ferrozine方法決定鐵,其中並使用於實例2中 所決定之校正因子,且樣品中含有血紅素,其係由溶血產 物之摻入而得。 測試步驟如實例2所述。 用於計算經校正分析值之方程式如下: C’樣品=C樣品一F · E 1樣品+F · E 1參考物 =C樣品—F.E1樣品+2. 9微克/公合 此實驗結果示於表5。可看出除了單一數值之外*可 達到鐵極佳之回收,數值在1 0 0%土 2 . 5%範圍中。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
T 装- 訂 本紙张尺度適用ts囡家橾準(CNS ) A4規格(2I0X297公釐) -17 - 408223 A7 B7 經濟部中央樣準局負工消费>作社印災 五、發明説明(is) 眚例6 於總蛋白質之決定中使用校正方程式 使用於實例3所決定之校正因子,以決定依Biuret 方法之總蛋白質,樣品中含有血紅素,其由血液替代品之 摻入而得β實驗如實例3所述地進行。 用於計算經校正分析值之方程式如下: C’樣品=C樣品-F · Ε1樣品+F · Ε1參考物 =C樣品-F · E1樣品+ 0. 6克/升 實驗結果示於表6。可看出在大多數例子中總蛋白質 之回收範圍在100±1%。 實例7 在黃疸樣品中決定白蛋白 依據溴甲酚一綠方法決定黃疸樣品中之白蛋白,其中 並使用於實例中所決定之試驗一特異的校正因子,此樣品 由膽紅素之摻入而得。 試驗步驟如實例1所述。計算經校正之分析值之方程 式如實例4所述。 此實驗的結果示於表7。可看出使用校正方程式不會 造成回收之變糟。 眚例8 冬纸张尺度適汛中囤國家標隼(CNS ) A4現格(2丨〇><297公4 ) (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 408223 A7 B7 五、發明説明(16 ) 決定脂血樣品中之鐵 - 依據ferrozine方法決定脂血樣品中之鐵,其中使用 於實例2中所決定之試驗一特異的校正因子,此樣品由 Intralipid®之摻入而得。 試驗步驟如實例2所述。計算經校正之分析物數值之 方程式示於實例5 » 實驗結果示於表8。可看出使用校正方程式不會造成 脂血樣品中回收之變糟。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
T 裝. 訂 經濟部中央標準局負工消费合作11印^ 19 - 本纸汝尺度適用中國國家標準^^^从規格㈠⑴乂四了公釐) 五、發明説明(i?) 表1 經濟部中央標準局只工消"合作社印來 樣品編號 Hb含量 [毫克/公合] E1樣品 [mA] <5 El [mA] C樣品 (=偵測值) [克/升] 5C [克/升] F樣品 [克/升] 1(=參考樣品) 0 1.0 — 32.4 — — 2 200 6.8 5.8 34.3 1.9 0.328 3 400 12.5 11.5 36.1 3.7 0.322 4 600 18.1 17.1 38.0 5.6 0.328 5 800 23.5 22.5 40.0 7.6 0.338 6 1000 29.0 28.0 41.8 9.4 0.336 7 1200 34.5 33.5 43.8 11.4 0.340 8 1400 39.7 38.7 45.4 13.0 0.336 9 1600 44.9 43.9 47.0 14.6 0.333 10 1800 50.4 49.4 48.7 16.3 0.330 11 2000 56.6 55.6 50.9 18.5 0.333 F=0.332 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本袖^尺度適用中國國家標苹(〔阳)六4規格(210'乂297公釐) -20 - A7 ___^0822^_ 五、發明説明(is) 表2 經濟部中央標準局只工消作社印^ 樣品編號 Hb含量 [毫克/公合] E1樣品 [mA] <5 El [mA] C樣品 (=偵測值) [克/升] 5C [克/升] F樣品 [克/升] 1(=參考樣品) 0 10.1 — 80.0 — 一 2 100 46.8 36.7 89.3 9.3 0.253 3 200 75.6 65. 5 99.3 19.3 0.295 4 300 114.0 103.9 110.3 30.3 0.292 5 400 146.2 136.1 120.3 40.3 0.296 6 500 180.8 170.7 129.0 49.0 0.287 7 600 214.0 203.9 140.0 60.0 0.294 8 700 245.4 235.3 150.3 70.3 0.299 9 800 280.9 270.8 157.3 77.3 0.286 10 800 314.4 304.3 166.7 86.7 0.285 11 1000 340.0 329.9 183.0 103.0 0.312 F=0.290 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸〈良尺度適用中囤國家標隼(〔奶)八4規格(210'/297公釐) -21 Μ 經濟部中央標準局月工消资合作社印製 408223 五、發明説明(I9) 表 3 樣品編號 Hb含量 [毫克/公合] E1樣品 .[mA] <5 El [mA] C樣品 (=偵測值) [克/升] SC [克/升] F樣品 [克/升] 1(=參考樣品) 0 5.1 — 55.2 — — 2 200 21.7 16.6 57.0 1.8 0.108 3 400 37.8 32.7 58.6 3.4 0.104 4 600 53.9 48.8 61.1 5.9 0.121 5 800 70.9 65.8 63.4 8.2 0.125 6 1000 86.4 81.3 64.9 9.7 0.119 7 1200 103.4 98.3 66.9 11.7 0.119 8 1400 120.1 115.0 68.5 13.3 0.116 9 1600 135.7 130.6 70.1 14.9 0.114 10 1800 152.9 147.8 72.4 17.2 0.116 11 2000 167.8 162.7 73.5 18.3 0.112 F=0.115 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙张尺度適用中园國家標準(CNS ) Α4規格(210X297公釐) -22 - 408223 A7 B7 五、發明説明(2() 經濟部中央標準局Μ工消费合作社印製 表4 經校正之白蛋白數值 樣品編號 Hb缝 測得之白蛋白數值 E1樣品 FXE1樣品 [毫克/ [mA] [克/升] C’樣品 回收率 公合] 品 回收率 [克/升] [克/升] [%] F=0. 322g/l 1(=##樣品) 0 32.4 — 1.0 0. 3* 32.4 — 2 200 34.3 105.9 6.8 2.3 32.3 99.7 3 400 36.1 111.4 12.5 4.2 32.2 99.4 4 600 38.0 117.3 18.1 6.0 32.3 99.7 5 800 40.0 123.5 23.5 7.8 32.5 100.3 6 1000 41.8 129.0 29.0 9.6 32.5 100.3 7 1200 43.8 135.2 34.5 11.5 32.6 100.6 8 1400 45.4 140.1 39.7 13.2 32.5 100.3 9 1600 47.0 145.1 44.9 14.9 32.4 100.0 10 1800 48.7 150.3 50.4 16.7 32.3 99.7 11 2000 50.9 157.1 56.6 18.8 32.4 100.0 *FxEl 參考樣品 本紙悵尺度適用中园國家標準(CNS ) Α4規格(210X297公釐) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
*1T -23 - 408223 A7 B7 五、發明説明(21) 經濟部中央標準局只工消费釜作杜印裝 表5 樣品編號 Hb缝 [毫克/ 公合] 測得之鐵數值 E1樣品 [mA] FXE1樣品 [毅/升] 經概之鐵數值 C’樣品[ 毫克/升] 回收率 [%] 0^1品[ 毫克/升] 回收率 [%] 1(=參考樣品) 0 80.0 10.1 F=0. 290^g/dl 2. 9* 80.0 2 100 89.3 111.6 46.8 13.6 78.6 98.2 3 200 99.3 124.1 75.6 21.9 80.3 100.4 4 300 110.3 137.9 114.0 33.1 80.1 100.1 5 400 120.3 150.4 146.2 42.4 80.8 101.0 6 500 129.0 161.2 180.8 52.4 79.5 99.4 7 600 140.0 175.0 214.0 62.1 80.8 101.0 8 700 150.3 187.9 245.4 71.2 82.0 102.5 9 800 157.3 196.6 280.9 81.5 78.7 98.4 10 900 166.7 208.4 314.4 91.2 78.4 98.0 11 1000 183.0 228.8 340.0 98.6 87.3 109.1 *FxEl 參考樣品 本紙悵尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X 297公釐) 一 24 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) *-° 408223 五、發明説明(1% A7 B7 經濟部中央標準局只工消资合作杜印製 表6 樣品編號 Hb含童 [毫克/ 公合] 測得的總蛋白質 數值 E1樣品 [raA] FXE1樣品 [克/升] 經校正之總蛋白質 數值 00?品 [克/升] 回收率 [%] C’樣品 [克/升] 回收率 Μ 1(=參考樣品) 0 55.2 5.1 F=0.15g/l 0.6* 55.2 2 200 57.0 103.3 21.7 2.5 55.1 99.8 3 400 58.6 106.2 37.8 4.3 54.9 99.5 4 600 61.1 110.7 53.9 6.2 55.5 100.5 5 800 63.4 114.9 70.9 8.2 55.8 101.1 6 1000 64.9 117.6 86.4 9.9 55.6 100.7 7 1200 66.9 121.2 103.4 11.9 55.6 100.7 8 1400 68.5 124.1 120.1 13.8 55.3 100.2 9 1600 70.1 127.0 135.7 15.6 55.1 99.8 10 1800 72.4 131.2 152.9 17.6 55.4 100.4 11 2000 73.5 133.2 167.8 19.3 54.8 99.3 *FxEl 參考樣品 本紙汍尺度適用中园國家標準(CNS ) Λ4規格(210X297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 408223 at _B7 五、發明説明(2$ 7表 經濟部中央標準局Μ工消作杜印製 經校正之白蛋白數值 樣品編號 離素 測得的白蛋白數值 E1樣品 FXE1樣品 [mA] [克/升] C’樣品 回收率 _/ 品 回收率 [克/升] [%] 公合] [克/升] [%] F=0.322g/l 1(=#考樣品) 0 48.3 ― 0.8 0.3* 48.3 ― 2 6 47.9 99.2 0.8 0.3 47.9 99.2 3 13 48.0 99.4 0.9 0.3 48.0 99.4 4 20 47.9 99.2 0.8 0.3 47.9 99.2 5 26 48.2 99.8 0.9 0.3 48.2 99.8 6 33 48.2 99.8 1.4 0.5 48.0 99.4 7 40 48.1 99.6 1.8 0.6 47.8 99.0 8 46 48.5 100.4 1.8 0.6 48.2 99.8 9 53 48.8 101.0 2.0 0.7 48.4 100.2 10 60 47.8 99.0 2.0 0.7 47.4 98.1 11 66 48.3 100.0 2.0 0.7 47.9 99.2 ί—!7ί (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙浓尺度適用中S國家標準(CNS ) Α4規格(210Χ297公釐) -26 - 408223 A7 B7 五、發明説明(2今 經濟部中央標準扃只工消t合作杜印製 表8 樣品編號 intralipid 含量 [較/公合 ] 測得的鐵數值 El樣品 ίιπΑ] FXE1樣品 [毫克/升] 經校正之鐵數值 C’樣品[ 毫克/升] 回收率 [%] C樣品[ 毫克/升] 回收率 Μ 1(=參考樣品) 0 82.7 13.2 F=0.290//g/dl 3.8 81.8 2 100 83.7 101.2 13.1 3.8 82.8 101.2 3 200 84.7 102.4 13.0 3.8 83.8 102.4 4 300 84.3 101.9 13.2 3.8 83.4 102.0 5 400 86.0 104.0 13.3 3.9 85.0 103.9 6 500 81.3 98.3 13.4 3.9 80.3 98.2 7 600 84.3 101.9 13.6 3.9 83.3 101.8 8 700 80.7 97.6 13.3 3.9 79.7 97.4 9 800 86.7 104.8 13.4 3.9 85.7 104.8 10 900 85.3 103.1 13.4 3.9 84.3 103.1 11 1000 82.7 100.0 13.6 3.9 81.7 99.9 本紙汍尺度適用中园國家標準(CNS > A4規格(210X297公釐) -27 -
Claims (1)
- 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 獅22 3逛产”…爲3_六、申請專利範圍 附件1一1 :第86106364號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國88 年 1 月修正 1 . 一種以光學偵測決定含有自由態血紅素樣品中分 析物之方法,其中分析物濃度之偵測值以下列步驟校正之 (a )偵測欲分析樣品之空白值, (b )偵測無血紅素之參考樣品之空白值, (c )偵測分析物濃度之未經校正值,及 (d )將於步驟(a )及(b )中所得之數值互成關係以 校正於步驟(c )中所得之數值,以得分析物濃度 之經校正值; 其中分析物濃度之校正值係根據下列關係式加以計算: C’樣品=C樣品-F · E1樣品+F · E1參考樣品 其中C’樣品爲分析物濃度之經校正數值, C樣品爲樣品中分析物濃度之未經校正的偵測值, F是試驗一特異的校正因子, E 1樣品是樣品中測得的空白值,且 E 1參考樣品是參考樣品中之偵測值; 其中樣品一特異的校正因子F·係用於測定含有自由態血 紅素之樣品,其係根據下列關係式予以測定: 本紙張尺度適用中國國家梂準(CNS ) A4規格(210 X 297公釐) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 經濟部中央橾準局負工消費合作社印裝 408223 A8 B〇 C8 D8 六、申請專利範圍 F’ =△ C = A El 其中:△(:是與參考樣品比較下,針對個別樣品由於自由 態血紅素存在所致之偵測值之僞造量,且 △ E 1是與參考樣品比較下,針對個別樣品由於自 由態血紅素存在所致之樣品空白值之增加, 並且試驗一特異的校正因子F,係經由計算針對個 別樣品所決定之校正因子F’之平均值而決定的。 2. 如申請專利範圍第1項之方法,其中測定分析物 係以6 0 0 — 7 0 0毫微米範圍中之光學測度來進行· 3. 如申請專利範圍第1項之方法,其中所測定之樣 品係含有血液替代品· 4. 如申請專利範圍第1項之方法,其中係測定樣品 之總蛋白質含量。 5 ·如申請專利範圍第4項之方法,其中總蛋白質含 量之測定係依Biuret方法來進行β 6.如申請專利範圍第1項之方法,其中係測定樣品 之鐵含量。 7 ·如申請專利範圍第6項之方法,其中鐵含量之測 定係依據ferrozine方法來進行。 8 ·如申請專利範圍第1項之方法,其中係測定樣品 之白蛋白含量* 9 .如申請專利範圍第8項之方法,其中白蛋白含量 之測定係依據溴甲酣-綠或溴甲酿~紫方法來進行。 本紙張尺度適用中國國家揉準(CNS)A4規格(210X297公釐)~~·~~~ ~ ' -?- --------"裝"-- t - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本I) 、1T 40^223 ?88 D8 經濟部中央橾率局負工消費合作社印製 六、申請專利範圍 1 0 .如申請專利範圍第1項之方法,其中於測定脂 血樣品時加入清除劑· 1 1 ·如申請專利範圍第1項之方法,其中測定係在 血清或血漿樣品上進行。 1 2 .如申請專利範圍第1項之方法,其中係利用臨 床上健康之受試者的血清或血漿樣品作爲參考樣品· 1 3 .如申請專利範圍第1項之方法,其中該方法係 在自動化分析儀上進行。 14.如申請專利範圔第13項之方法,其中自動化 分析儀備有程式,如此分析物濃度之經校正值可印出來· 1 5 .如申請專利範圍第1項之方法,其中決定試驗 -特異的校正因子F係包括以下步驟: (a )製備有相同分析物含量的至少三個樣品系列,其中 至少一樣品不含血紅素且至少二樣品含有不同的自 由態血紅素濃度, (b )偵測各樣品之空白值,以決定由於血紅素存在所引 起的樣品空白值較無血紅素樣品增加, (c )偵測各樣品未經校正的分析物濃度,以決定由於血 紅素存在所引起的偵測值僞造,此並與無血紅素之 參考樣品比較,及 (d )以在步驟(b )所決定之樣品空白值增加來校正步 驟(c )中所決定之偵測值之僞造,以得到測試— 特異的校正因子。 1 6 如申請專利範圍第1 5項之方法,其中製備一 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 、1T ·ν 本紙張尺度適用中國國家梂準(CNS ) Α4規格(210Χ297公釐) A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 系列樣品,該系列樣品中有至少5個含有不同自由態血紅 素濃度之樣品》 17.如申請專利範圍第15或16項之方法,其中 製備一系列樣品•其濃度由0毫克/公合至1 0 0 0毫克 /公合的自由態血紅素。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本1) 裝 -* K 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Α·4規格(210X297公嫠)
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