CZ344998A3 - Způsob výroby morfogenetického proteinu zrání kosti - Google Patents
Způsob výroby morfogenetického proteinu zrání kosti Download PDFInfo
- Publication number
- CZ344998A3 CZ344998A3 CZ983449A CZ344998A CZ344998A3 CZ 344998 A3 CZ344998 A3 CZ 344998A3 CZ 983449 A CZ983449 A CZ 983449A CZ 344998 A CZ344998 A CZ 344998A CZ 344998 A3 CZ344998 A3 CZ 344998A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- maturation
- gly
- arg
- bone
- leu
- Prior art date
Links
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 title claims abstract description 39
- 101710167839 Morphogenetic protein Proteins 0.000 title claims description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 13
- 230000005070 ripening Effects 0.000 title 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 claims abstract description 65
- 102000004961 Furin Human genes 0.000 claims abstract description 57
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 claims abstract description 57
- 101100472152 Trypanosoma brucei brucei (strain 927/4 GUTat10.1) REL1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 56
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims abstract description 37
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims abstract description 36
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 20
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims description 20
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 12
- 230000001002 morphogenetic effect Effects 0.000 claims description 11
- 108010049931 Bone Morphogenetic Protein 2 Proteins 0.000 claims description 3
- 108010049974 Bone Morphogenetic Protein 6 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100024506 Bone morphogenetic protein 2 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100022525 Bone morphogenetic protein 6 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010049955 Bone Morphogenetic Protein 4 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100024505 Bone morphogenetic protein 4 Human genes 0.000 claims description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims 2
- 108010049870 Bone Morphogenetic Protein 7 Proteins 0.000 claims 1
- 102100022544 Bone morphogenetic protein 7 Human genes 0.000 claims 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 claims 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 abstract description 71
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 10
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 35
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 9
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 9
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 9
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 8
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- BBQABUDWDUKJMB-LZXPERKUSA-N Ile-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C([O-])=O BBQABUDWDUKJMB-LZXPERKUSA-N 0.000 description 5
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 5
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 5
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 5
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 5
- 101001022148 Homo sapiens Furin Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 4
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 4
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 102100038946 Proprotein convertase subtilisin/kexin type 6 Human genes 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 3
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LBJYAILUMSUTAM-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asn-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O LBJYAILUMSUTAM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N Arg-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OTCJMMRQBVDQRK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 2
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 108010080379 Fibrin Tissue Adhesive Proteins 0.000 description 2
- ATRHMOJQJWPVBQ-DRZSPHRISA-N Glu-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O ATRHMOJQJWPVBQ-DRZSPHRISA-N 0.000 description 2
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001098833 Homo sapiens Proprotein convertase subtilisin/kexin type 6 Proteins 0.000 description 2
- HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N L-arginyl-L-glutamic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HFKJBCPRWWGPEY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 2
- XBBKIIGCUMBKCO-JXUBOQSCSA-N Leu-Ala-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XBBKIIGCUMBKCO-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 2
- QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N Lys-Phe Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 QCZYYEFXOBKCNQ-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N N-L-alanyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 WUGMRIBZSVSJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 AJHCSUXXECOXOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IUVYJBMTHARMIP-PCBIJLKTSA-N Phe-Asp-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O IUVYJBMTHARMIP-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 2
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 2
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 2
- HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N Thr-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N HYLXOQURIOCKIH-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 2
- YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N Thr-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- DVLHKUWLNKDINO-PMVMPFDFSA-N Trp-Tyr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DVLHKUWLNKDINO-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 2
- QAYSODICXVZUIA-WLTAIBSBSA-N Tyr-Gly-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QAYSODICXVZUIA-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 2
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 2
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 108010073101 phenylalanylleucine Proteins 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000004746 tooth root Anatomy 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- RVLOMLVNNBWRSR-KNIFDHDWSA-N (2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O RVLOMLVNNBWRSR-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HHGYNJRJIINWAK-FXQIFTODSA-N Ala-Ala-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HHGYNJRJIINWAK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N Ala-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)N JBVSSSZFNTXJDX-YTLHQDLWSA-N 0.000 description 1
- DVWVZSJAYIJZFI-FXQIFTODSA-N Ala-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O DVWVZSJAYIJZFI-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- IMMKUCQIKKXKNP-DCAQKATOSA-N Ala-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)CCCN=C(N)N IMMKUCQIKKXKNP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- LWUWMHIOBPTZBA-DCAQKATOSA-N Ala-Arg-Lys Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O LWUWMHIOBPTZBA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FXKNPWNXPQZLES-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FXKNPWNXPQZLES-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N Ala-Asp-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KIUYPHAMDKDICO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N Ala-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BEMGNWZECGIJOI-WDSKDSINSA-N Ala-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BEMGNWZECGIJOI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- MFMDKJIPHSWSBM-GUBZILKMSA-N Ala-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MFMDKJIPHSWSBM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- SUHLZMHFRALVSY-YUMQZZPRSA-N Ala-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)NCC(O)=O SUHLZMHFRALVSY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)N HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YXXPVUOMPSZURS-ZLIFDBKOSA-N Ala-Trp-Leu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)=CNC2=C1 YXXPVUOMPSZURS-ZLIFDBKOSA-N 0.000 description 1
- AOAKQKVICDWCLB-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N AOAKQKVICDWCLB-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- HJVGMOYJDDXLMI-AVGNSLFASA-N Arg-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N HJVGMOYJDDXLMI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N Arg-Arg-Thr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N NABSCJGZKWSNHX-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- UABKKMXFBRQKKI-BJDJZHNGSA-N Arg-Cys-Ser-Arg Chemical compound N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O UABKKMXFBRQKKI-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- CRCCTGPNZUCAHE-DCAQKATOSA-N Arg-His-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)CC1=CN=CN1 CRCCTGPNZUCAHE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N QYLJIYOGHRGUIH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UAOSDDXCTBIPCA-QXEWZRGKSA-N Arg-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N UAOSDDXCTBIPCA-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- COXMUHNBYCVVRG-DCAQKATOSA-N Arg-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O COXMUHNBYCVVRG-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N JQFZHHSQMKZLRU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- NGTYEHIRESTSRX-UWVGGRQHSA-N Arg-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N NGTYEHIRESTSRX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- BNYNOWJESJJIOI-XUXIUFHCSA-N Arg-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N BNYNOWJESJJIOI-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N Arg-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- STHNZYKCJHWULY-AVGNSLFASA-N Arg-Pro-His Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O STHNZYKCJHWULY-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N Arg-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N IJYZHIOOBGIINM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- DNLQVHBBMPZUGJ-BQBZGAKWSA-N Arg-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O DNLQVHBBMPZUGJ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- LFAUVOXPCGJKTB-DCAQKATOSA-N Arg-Ser-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N LFAUVOXPCGJKTB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N Arg-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KMFPQTITXUKJOV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- LRPZJPMQGKGHSG-XGEHTFHBSA-N Arg-Ser-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O LRPZJPMQGKGHSG-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- XTWSWDJMIKUJDQ-RYUDHWBXSA-N Arg-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XTWSWDJMIKUJDQ-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N Arg-Tyr Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccc(O)cc1)C(=O)O UVTGNSWSRSCPLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IZSMEUDYADKZTJ-KJEVXHAQSA-N Arg-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IZSMEUDYADKZTJ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- PFOYSEIHFVKHNF-FXQIFTODSA-N Asn-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PFOYSEIHFVKHNF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- LXTGAOAXPSJWOU-DCAQKATOSA-N Asn-Arg-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N LXTGAOAXPSJWOU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N Asn-Asp Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HZYFHQOWCFUSOV-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- OLGCWMNDJTWQAG-GUBZILKMSA-N Asn-Glu-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O OLGCWMNDJTWQAG-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFMIYIMKQIMDPK-BQBZGAKWSA-N Asn-His Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 FFMIYIMKQIMDPK-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- YGHCVNQOZZMHRZ-DJFWLOJKSA-N Asn-His-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N YGHCVNQOZZMHRZ-DJFWLOJKSA-N 0.000 description 1
- RVHGJNGNKGDCPX-KKUMJFAQSA-N Asn-Phe-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N RVHGJNGNKGDCPX-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- ZNYKKCADEQAZKA-FXQIFTODSA-N Asn-Ser-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O ZNYKKCADEQAZKA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ULZOQOKFYMXHPZ-AQZXSJQPSA-N Asn-Trp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O ULZOQOKFYMXHPZ-AQZXSJQPSA-N 0.000 description 1
- DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N Asp-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- JGDBHIVECJGXJA-FXQIFTODSA-N Asp-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JGDBHIVECJGXJA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- CELPEWWLSXMVPH-CIUDSAMLSA-N Asp-Asp-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CELPEWWLSXMVPH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PSLSTUMPZILTAH-BYULHYEWSA-N Asp-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PSLSTUMPZILTAH-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- POTCZYQVVNXUIG-BQBZGAKWSA-N Asp-Gly-Pro Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O POTCZYQVVNXUIG-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- PGUYEUCYVNZGGV-QWRGUYRKSA-N Asp-Gly-Tyr Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PGUYEUCYVNZGGV-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JNNVNVRBYUJYGS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N Asp-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- SAKCBXNPWDRWPE-BQBZGAKWSA-N Asp-Met-Gly Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N SAKCBXNPWDRWPE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N Asp-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CZIVKMOEXPILDK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ALMIMUZAWTUNIO-BZSNNMDCSA-N Asp-Tyr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ALMIMUZAWTUNIO-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 101100228200 Caenorhabditis elegans gly-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JIVJXVJMOBVCJF-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asn-Cys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N JIVJXVJMOBVCJF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- UXIYYUMGFNSGBK-XPUUQOCRSA-N Cys-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UXIYYUMGFNSGBK-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- XLLSMEFANRROJE-GUBZILKMSA-N Cys-Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N XLLSMEFANRROJE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 101100298295 Drosophila melanogaster flfl gene Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- UTKICHUQEQBDGC-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N UTKICHUQEQBDGC-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- JPHYJQHPILOKHC-ACZMJKKPSA-N Glu-Asp-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O JPHYJQHPILOKHC-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- UGSVSNXPJJDJKL-SDDRHHMPSA-N Glu-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N UGSVSNXPJJDJKL-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 1
- SWRVAQHFBRZVNX-GUBZILKMSA-N Glu-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O SWRVAQHFBRZVNX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- CUPSDFQZTVVTSK-GUBZILKMSA-N Glu-Lys-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O CUPSDFQZTVVTSK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- GTFYQOVVVJASOA-ACZMJKKPSA-N Glu-Ser-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N GTFYQOVVVJASOA-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- VNCNWQPIQYAMAK-ACZMJKKPSA-N Glu-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VNCNWQPIQYAMAK-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N Glu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- MFVQGXGQRIXBPK-WDSKDSINSA-N Gly-Ala-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O MFVQGXGQRIXBPK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LJPIRKICOISLKN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- OGCIHJPYKVSMTE-YUMQZZPRSA-N Gly-Arg-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OGCIHJPYKVSMTE-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N Gly-Arg-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCN=C(N)N OVSKVOOUFAKODB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XCLCVBYNGXEVDU-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YZACQYVWLCQWBT-BQBZGAKWSA-N Gly-Cys-Arg Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O YZACQYVWLCQWBT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- LGQZOQRDEUIZJY-YUMQZZPRSA-N Gly-Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)CN)C(O)=O LGQZOQRDEUIZJY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)CN CCQOOWAONKGYKQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- PDAWDNVHMUKWJR-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-His Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 PDAWDNVHMUKWJR-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- YIWFXZNIBQBFHR-LURJTMIESA-N Gly-His Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CN=CN1 YIWFXZNIBQBFHR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- ADZGCWWDPFDHCY-ZETCQYMHSA-N Gly-His-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CN=CN1 ADZGCWWDPFDHCY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YTSVAIMKVLZUDU-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O YTSVAIMKVLZUDU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YIFUFYZELCMPJP-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O YIFUFYZELCMPJP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N Gly-Leu-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O CCBIBMKQNXHNIN-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N Gly-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- CLNSYANKYVMZNM-UWVGGRQHSA-N Gly-Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N CLNSYANKYVMZNM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FXGRXIATVXUAHO-WEDXCCLWSA-N Gly-Lys-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCCN FXGRXIATVXUAHO-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- VNNRLUNBJSWZPF-ZKWXMUAHSA-N Gly-Ser-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VNNRLUNBJSWZPF-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- YXTFLTJYLIAZQG-FJXKBIBVSA-N Gly-Thr-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YXTFLTJYLIAZQG-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N Gly-Thr-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCC(O)=O JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 1
- ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- GBYYQVBXFVDJPJ-WLTAIBSBSA-N Gly-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)CN)O GBYYQVBXFVDJPJ-WLTAIBSBSA-N 0.000 description 1
- GJHWILMUOANXTG-WPRPVWTQSA-N Gly-Val-Arg Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O GJHWILMUOANXTG-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N His-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 NIKBMHGRNAPJFW-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ZZLWLWSUIBSMNP-CIUDSAMLSA-N His-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZZLWLWSUIBSMNP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CYHWWHKRCKHYGQ-GUBZILKMSA-N His-Cys-Glu Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N CYHWWHKRCKHYGQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JCOSMKPAOYDKRO-AVGNSLFASA-N His-Glu-Lys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N JCOSMKPAOYDKRO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- RAVLQPXCMRCLKT-KBPBESRZSA-N His-Gly-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O RAVLQPXCMRCLKT-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- ZUELLZFHJUPFEC-PMVMPFDFSA-N His-Phe-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 ZUELLZFHJUPFEC-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- QSPLUJGYOPZINY-ZPFDUUQYSA-N Ile-Asp-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N QSPLUJGYOPZINY-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- DCQMJRSOGCYKTR-GHCJXIJMSA-N Ile-Asp-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DCQMJRSOGCYKTR-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- VQUCKIAECLVLAD-SVSWQMSJSA-N Ile-Cys-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N VQUCKIAECLVLAD-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- BEWFWZRGBDVXRP-PEFMBERDSA-N Ile-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BEWFWZRGBDVXRP-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- KOPIAUWNLKKELG-SIGLWIIPSA-N Ile-His-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N KOPIAUWNLKKELG-SIGLWIIPSA-N 0.000 description 1
- CMNMPCTVCWWYHY-MXAVVETBSA-N Ile-His-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N CMNMPCTVCWWYHY-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- PWDSHAAAFXISLE-SXTJYALSSA-N Ile-Ile-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PWDSHAAAFXISLE-SXTJYALSSA-N 0.000 description 1
- OUUCIIJSBIBCHB-ZPFDUUQYSA-N Ile-Leu-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OUUCIIJSBIBCHB-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N Ile-Lys-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N UIEZQYNXCYHMQS-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- UAELWXJFLZBKQS-WHOFXGATSA-N Ile-Phe-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)NCC(O)=O UAELWXJFLZBKQS-WHOFXGATSA-N 0.000 description 1
- AGGIYSLVUKVOPT-HTFCKZLJSA-N Ile-Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N AGGIYSLVUKVOPT-HTFCKZLJSA-N 0.000 description 1
- PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N L-leucyl-L-phenylalanine Natural products CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UILIPCLTHRPCRB-XUXIUFHCSA-N Leu-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N UILIPCLTHRPCRB-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N Leu-Arg-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N YOZCKMXHBYKOMQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- JKGHDYGZRDWHGA-SRVKXCTJSA-N Leu-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O JKGHDYGZRDWHGA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LLBQJYDYOLIQAI-JYJNAYRXSA-N Leu-Glu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O LLBQJYDYOLIQAI-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- OXRLYTYUXAQTHP-YUMQZZPRSA-N Leu-Gly-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OXRLYTYUXAQTHP-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KGCLIYGPQXUNLO-IUCAKERBSA-N Leu-Gly-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O KGCLIYGPQXUNLO-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N Leu-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N Leu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O IEWBEPKLKUXQBU-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- FOBUGKUBUJOWAD-IHPCNDPISA-N Leu-Leu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 FOBUGKUBUJOWAD-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BGZCJDGBBUUBHA-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N Leu-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LRKCBIUDWAXNEG-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PNPYKQFJGRFYJE-GUBZILKMSA-N Lys-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNPYKQFJGRFYJE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- XFIHDSBIPWEYJJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XFIHDSBIPWEYJJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N Lys-Arg Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N NPBGTPKLVJEOBE-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- GQUDMNDPQTXZRV-DCAQKATOSA-N Lys-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O GQUDMNDPQTXZRV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WGCKDDHUFPQSMZ-ZPFDUUQYSA-N Lys-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN WGCKDDHUFPQSMZ-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- XFBBBRDEQIPGNR-KATARQTJSA-N Lys-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O XFBBBRDEQIPGNR-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O HGNRJCINZYHNOU-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N Lys-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- ALGGDNMLQNFVIZ-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Asp Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N ALGGDNMLQNFVIZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HVAUKHLDSDDROB-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- WDTLNWHPIPCMMP-AVGNSLFASA-N Met-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O WDTLNWHPIPCMMP-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- IVCPHARVJUYDPA-FXQIFTODSA-N Met-Asn-Asp Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N IVCPHARVJUYDPA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N Met-Glu-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- SXWQMBGNFXAGAT-FJXKBIBVSA-N Met-Gly-Thr Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SXWQMBGNFXAGAT-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- UROWNMBTQGGTHB-DCAQKATOSA-N Met-Leu-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O UROWNMBTQGGTHB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100165560 Mus musculus Bmp7 gene Proteins 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N N-formyl-L-phenylalanine Chemical compound O=CN[C@H](C(=O)O)CC1=CC=CC=C1 NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N Nalpha-L-Leucyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 BQVUABVGYYSDCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- OZILORBBPKKGRI-RYUDHWBXSA-N Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 OZILORBBPKKGRI-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N Phe-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AYPMIIKUMNADSU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- CGOMLCQJEMWMCE-STQMWFEESA-N Phe-Arg-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 CGOMLCQJEMWMCE-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- HCTXJGRYAACKOB-SRVKXCTJSA-N Phe-Asn-Asp Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N HCTXJGRYAACKOB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- XMPUYNHKEPFERE-IHRRRGAJSA-N Phe-Asp-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 XMPUYNHKEPFERE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- RFEXGCASCQGGHZ-STQMWFEESA-N Phe-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O RFEXGCASCQGGHZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N Phe-Gly-Asn Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WPTYDQPGBMDUBI-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- RFCVXVPWSPOMFJ-STQMWFEESA-N Phe-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 RFCVXVPWSPOMFJ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N Phe-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- RMKGXGPQIPLTFC-KKUMJFAQSA-N Phe-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RMKGXGPQIPLTFC-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- OWSLLRKCHLTUND-BZSNNMDCSA-N Phe-Phe-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CC=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N OWSLLRKCHLTUND-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ROHDXJUFQVRDAV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JHSRGEODDALISP-XVSYOHENSA-N Phe-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JHSRGEODDALISP-XVSYOHENSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- AJCRQOHDLCBHFA-SRVKXCTJSA-N Pro-His-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AJCRQOHDLCBHFA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- KLSOMAFWRISSNI-OSUNSFLBSA-N Pro-Ile-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KLSOMAFWRISSNI-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N Pro-Pro Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 RWCOTTLHDJWHRS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N Ser-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HRNQLKCLPVKZNE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N Ser-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N Ser-Gly-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AEGUWTFAQQWVLC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- BPMRXBZYPGYPJN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BPMRXBZYPGYPJN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N Ser-Gly-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- MQQBBLVOUUJKLH-HJPIBITLSA-N Ser-Ile-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O MQQBBLVOUUJKLH-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VFWQQZMRKFOGLE-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Cys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O VFWQQZMRKFOGLE-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- ILZAUMFXKSIUEF-SRVKXCTJSA-N Ser-Ser-Phe Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ILZAUMFXKSIUEF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N Ser-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- UQGAAZXSCGWMFU-UBHSHLNASA-N Ser-Trp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N UQGAAZXSCGWMFU-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- BCAVNDNYOGTQMQ-AAEUAGOBSA-N Ser-Trp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)NCC(O)=O BCAVNDNYOGTQMQ-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- FHXGMDRKJHKLKW-QWRGUYRKSA-N Ser-Tyr-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FHXGMDRKJHKLKW-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 101710135785 Subtilisin-like protease Proteins 0.000 description 1
- 101150006914 TRP1 gene Proteins 0.000 description 1
- MQCPGOZXFSYJPS-KZVJFYERSA-N Thr-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MQCPGOZXFSYJPS-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- VFEHSAJCWWHDBH-RHYQMDGZSA-N Thr-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VFEHSAJCWWHDBH-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- SWIKDOUVROTZCW-GCJQMDKQSA-N Thr-Asn-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N)O SWIKDOUVROTZCW-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- PAOYNIKMYOGBMR-PBCZWWQYSA-N Thr-Asn-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N)O PAOYNIKMYOGBMR-PBCZWWQYSA-N 0.000 description 1
- IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O IOWJRKAVLALBQB-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 1
- LMMDEZPNUTZJAY-GCJQMDKQSA-N Thr-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O LMMDEZPNUTZJAY-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- DGOJNGCGEYOBKN-BWBBJGPYSA-N Thr-Cys-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O DGOJNGCGEYOBKN-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- XPNSAQMEAVSQRD-FBCQKBJTSA-N Thr-Gly-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XPNSAQMEAVSQRD-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 1
- GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N Thr-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 1
- FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N Thr-Leu-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O FIFDDJFLNVAVMS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- MGJLBZFUXUGMML-VOAKCMCISA-N Thr-Lys-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MGJLBZFUXUGMML-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N Thr-Ser-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N)O XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N Thr-Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 1
- VGNLMPBYWWNQFS-ZEILLAHLSA-N Thr-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N)O VGNLMPBYWWNQFS-ZEILLAHLSA-N 0.000 description 1
- FBQHKSPOIAFUEI-OWLDWWDNSA-N Thr-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FBQHKSPOIAFUEI-OWLDWWDNSA-N 0.000 description 1
- OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N Thr-Val-Ala Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O OGOYMQWIWHGTGH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- 208000010641 Tooth disease Diseases 0.000 description 1
- XNRJFXBORWMIPY-DCPHZVHLSA-N Trp-Ala-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O XNRJFXBORWMIPY-DCPHZVHLSA-N 0.000 description 1
- AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N Trp-Ala-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 AVYVKJMBNLPWRX-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 1
- VEYXZZGMIBKXCN-UBHSHLNASA-N Trp-Asp-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N VEYXZZGMIBKXCN-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- PKUJMYZNJMRHEZ-XIRDDKMYSA-N Trp-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PKUJMYZNJMRHEZ-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- LDMUNXDDIDAPJH-VMBFOHBNSA-N Trp-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N LDMUNXDDIDAPJH-VMBFOHBNSA-N 0.000 description 1
- VPRHDRKAPYZMHL-SZMVWBNQSA-N Trp-Leu-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 VPRHDRKAPYZMHL-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- NWQCKAPDGQMZQN-IHPCNDPISA-N Trp-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NWQCKAPDGQMZQN-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZJPSMXCFEKMZFE-IHPCNDPISA-N Trp-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZJPSMXCFEKMZFE-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- CKKFTIQYURNSEI-IHRRRGAJSA-N Tyr-Asn-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CKKFTIQYURNSEI-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QZOSVNLXLSNHQK-UWVGGRQHSA-N Tyr-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 QZOSVNLXLSNHQK-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- HKYTWJOWZTWBQB-AVGNSLFASA-N Tyr-Glu-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 HKYTWJOWZTWBQB-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- NJLQMKZSXYQRTO-FHWLQOOXSA-N Tyr-Glu-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 NJLQMKZSXYQRTO-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AOLHUMAVONBBEZ-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- OFHKXNKJXURPSY-ULQDDVLXSA-N Tyr-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OFHKXNKJXURPSY-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- VYQQQIRHIFALGE-UWJYBYFXSA-N Tyr-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 VYQQQIRHIFALGE-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- UEOOXDLMQZBPFR-ZKWXMUAHSA-N Val-Ala-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N UEOOXDLMQZBPFR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N Val-Glu-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- 108010024078 alanyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 108010043240 arginyl-leucyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010068380 arginylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 210000002805 bone matrix Anatomy 0.000 description 1
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 208000015100 cartilage disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 108010009297 diglycyl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L disodium;(4-nitrophenyl) phosphate;hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000003028 enzyme activity measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010062266 glycyl-glycyl-argininal Proteins 0.000 description 1
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010078326 glycyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010020688 glycylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010084389 glycyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010036413 histidylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010018006 histidylserine Proteins 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 102000050253 human FURIN Human genes 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- DVCSNHXRZUVYAM-BQBZGAKWSA-N leu-asp Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O DVCSNHXRZUVYAM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010025153 lysyl-alanyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 108010018625 phenylalanylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108010077112 prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 239000013636 protein dimer Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 108010029384 tryptophyl-histidine Proteins 0.000 description 1
- 108010015666 tryptophyl-leucyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010017949 tyrosyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/51—Bone morphogenetic factor; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone-inducing factor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Description
Způsob výroby morfogenetického proteinu zrání kosti
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu výroby morfogenetického proteinu zrání kosti. Blíže se vynález týká způsobu výroby morfogenetického proteinu zrání kosti, který spočívá v přinucení zpracovacího enzymu, aby působil na prekurzor morfogenetického proteinu kostí.
Dosavadní stav techniky
Existenci proteinového kostního morfogenetického faktoru v základní kostní hmotě objevil Urist a kol. (Science 150, str. 893 až 899, 1965), který ho nazval kostní morfogenetický protein (který je dále označován zkratkou BMP). V posledních letech bylo klonováno mnoho genů odvozených z BMP a o každém z nich je známo, že patří do supergenové rodiny transformačního růstovému faktoru β (který je v dalším textu označován zkratkou TGF-β). Z některých z nich už byly vyrobeny rekombinantní proteiny. Používá se jich k potvrzení kostní morfogenetické aktivity a očekává se jejich použití k ošetřování kostních neduhů.
O každém ze shora popsaných proteinů, patřících do supergenové rodiny TGF-β se předpokládá, že se z jeho genové struktury, syntetizované jako prekurzor in vivo a po podrobení různému zpracování, vytvoří peptidový homodimer zrání (aktivní typ). O lidském ZGF-βί zrání je známo, že je to dimer peptidů zbytků COOH-terminálu 112 (Nátuře 316, str. 701 až 705, 1985). V praxi je známo, že v savčí buňce zavedení prekurzor kódující cDNA k produkci BMP-2 nebo BMP-6/Vgr-l zavádí vedle peptidového dimeru zrání, různé peptidové dimery (homodimery sestáva• · · ·
- 2 jící z monomerů o velké molekulové hmotnosti a sestávajících z monomerů s vysokou molekulovou z monomeru zrání) majících větší molekulovou hmotnost než zrání v kultuře supernatantu (Grown Factors 7, str. 139 až 150; J. Biol.Chem. str. 1595 až 1609, 1994). Má se zato, že tyto peptidové dimery mající větší molekulovou hmotnost než zrání odpovídají molekuly při zpracování z prekurzoru na zrání. Peptidové dimery mající větší molekulovou hmotnost než zrání jsou v dalším textu označovány jako prekurzorové dimery. Je technicky velmi obtížné selektivně vyrobit, ze zhora popsaných různých dimerů, peptidový dimer určité molekulové hmotnosti, například dimer zrání ve velkém měřítku; nebo provádět účinně separaci dimeru zrání. Je tedy vysoce žádoucí vyvinout způsob, jak čelit takové technické obtížnosti.
Podstata vynálezu
Způsob výroby morfogenetického proteinu zrání kosti, spočívá podle vynálezu v tom, že se prekurzor morfogenetického proteinu zrání kosti zpracovává zpracovacím enzymem.
Vynález se tedy týká účinného způsobu selektivní výroby, v savčích buňkách, dimeru zrání stejné molekulové hmotnosti ze směsi prekurzorových dimerů o různé molekulové hmotnosti morfogenetického kostního proteinu ve velém měřítku.
V posledních letech byla identifikována skupina proteáz podobných Kex2, furinu, PC-2, PC-3, PACE4, PC6 jako zpracovací enzymy proti prekurzoru proteinu u vyšších živočichů (Biochem. J. 299, str. 1 až 18, 1994). Z nich má furin hydrofobní transmembránovou oblast na terminálu COOH a lokálně existuje v membráně Golgi. Na sekvenci cDNA kódující lidský furin upozornil už van den Ouweland a kol. (Nucleic Acid Res. 18, str. 664, 1990). Ukázalo se, že furin rozeznává Arg-Χι-X2-Arg (kde Xi znamená jakoukoli aminokyselinu a X2 znamená jakoukoli aminoheterodimerů hmotností a • · • · · 9
' 9 ··· · • · • 999 kyselinu, ale hlavně Lys nebo Arg) jako sekvenci 4 aminokyselin proti směru exprese od jeho místa štěpení (J. Biol. Chem. 266, str. 12127 až 12130, 1991). Nadto se uvádí, že je-li expresována v savčí buňce pouze NH2- terminálová doména furinu bez transmembránové domény, vylučuje se jako sekret vně buňky a štěpná aktivita, specifická pro sekvenci aminokyselin, je zachována i na místě sekrece (J. Biol. Chem. 269, str. 25830 až 25837, 1994) .
Podle vynálezu se především podařila účinná výroba, v savčích buňkách, pouze dimeru zrání bez prekurzorových dimerů ve velké míře pomoci shora popsaného furinu založená na rekombinantní DNA technologii.
Způsobem podle vynálezu je možno vyrábět morfogenetický protein zrání kosti přinucením zpracovacího enzymu působit na prekurzor morfogenetického proteinu.
Podle vynálezu je zpracovací enzym přinucen působit na prekurzor morfogenetického proteinu začleňováním jak expresního vektoru prekurzoru kostního morfogenetického proteinu, tak začleňováním expresního vektoru zpracovacího enzymu do kmene savčí buňky. Buněčný kmen se kultivuje a pak se separací získá ze supernatantu kultury morfogenetický protein zrání kosti.
Podle vynálezu je zpracovací enzym přinucen také působit na prekurzor morfogenetického proteinu přidáním supernatantu kultury obsahujícího zpracovací enzym do kultury supernatantu obsahující prekurzory kostního morfogenetického proteinu. Morfogenetický protein zrání kosti se získá inkubací výsledné směs i.
Výroba se s výhodou provádí zaváděním jak expresního vektoru lidského prekurzoru MP52, tak expresního vektoru sekrečního furinového mutantu do savčího buněčného kmene, kultivací ·-· « · ► · « 4
I · ·· ··« · 4
9 4 • * ♦* « · · * · · ·’· buněčného kmene a pak se separací ze supernatantu kultivace vyrábí kostní morfogenetický protein.
Zde používaný pojem morfogenetický protein zrání kosti znamená kostní morfogenetický protein, který se v podstatě skládá ze sekvence aminokyselin homologické s terminálem COOH 112 aminokyselinových zbytků lidského TGF-βΙ aktivního typu. Má se zato, že aktivita kostního morfogenetického proteinu existuje v oblasti aminokyselinové sekvence homologické s terminálem COOH 112 aminokyselinových zbytků lidského TGF-βΙ aktivního typu, takže je žádoucí, aby kostní morfogenetický protein neobsahoval jinou oblast sekvence aminokyselin.
Příkladem procesního enzymu použitelného podle vynálezu je skupina proteáz podobných Kex2, furinu, PC-2, PC-3, PACE4 a PC6. Furinu se dává přednost. Může se použít cDNA kódující furin, základní sekvence DNA kódující celou furinovou sekvenci aminokyselin, výhodná je však základní sekvence DNA, kódující část sekvence aminokyselin (která je dále označována jako furinový mutant sekrečního typu), která nezahrnuje transmembránovou oblast a kromě toho si udržuje štěpnou aktivitu, specifickou pro sekvenci aminokyselin.
Podle výhodného provedení vynálezu se klonuje fragment DNA, obsahující sekreční furinový mutant cDNA, z celkové RNA, extrahované z kmene lidských buněk PeptG2 (ATCC HB8O65), metodou RT-PCR pomocí syntetizovaného primeru DNA. Sekreční furinový mutant cDNA má, jako svou základní sekvenci DNA, nukleotid č. 163 až nukleotid č. 2014, jak je uvedeno v SEQ ID No:l v seznamu sekvencí. Tento fragment DNA se začleňuje do expresního vektoru, čímž se zkonstruuje expresní vektor sekrečního furinového mutantu. Expresaní vektor, kterého se použije, obsahuje v protisměrné sekvenci eukaryotového promotoru poly(A)přidaný signál, což je místo restrikčního enzymu ke klonování genu k expresi. Tento expresní vektor může dále obsahovat mař« * · · · 4 » 4 4 4 4 · · < I · · 4 4 4 * « · « ♦ · ·
4 44 44*4 4 »44 4 4 ·
44« ·· 4 4 · · ker odolný proti drogám, výhodný pro selekci transformantu. Mezi příklady takových expresních vektorů patří lidský zesilovač transkripce promotoru cytomegaloviru, polylinker, poly(A)přidaný signál hovězího růstového hormonu apRc/CMV (obchodní produkt společnosti INVITROGEN lne.) obsahující markér odolný proti neomycinu.
Vynález je použitelný ke způsobu výroby kostního morfogenetického proteinu patřícího do supergenové rodiny lidského TGF-β, blíže k výrobě morfogenetického proteinu zrání kosti, sestávajícího z monomerů o stejné molekulové hmotnosti, například MP52, BMP-2, BMP-4, BMP-6 nebo BMP-7. Obzvlášt výhodným je jako kostní morfogenetický protein lidský MP52, popsaný ve světových přihláškách vynálezu číslo WO93/16O99 nebo WO95/ 04819 a mající morfogenetickou aktivitu. Podle výhodného provedení se začleňuje do expresního vektoru cDNA, která kóduje lidský prekurzor MP52 ke konstrukci expresního vektoru lidského prekurzoru MP52, následovaná zavedením do savčí buňky, čímž se připraví linie savčích buněk, která produkuje prekurzor a dimer zrání MP52. Mezi příklady savčí buňky, vhodné jako hostitelská buňka, patří vaječná buňka čínského křečka (CHO), buňka BHK, buňka 293 a myší buňka L. Přednost se dává buňce CHO. Do takto získané linie produkující lidský MP52 (MC-2: depoziční číslo FERM BP-5142) se začlení expresní vektor sekrečního furinového mutantu ke společné expresi obou proteinů, přičemž se získá pouze dimer zrání MP52 v kultivačním supernatantu.
Přeměnu z prekurzorového proteinu na jeho zrání lze také získat smísením roztoku obsahujícího zpracovací enzym s roztokem obsahujícím prekurzor a inkubací získané směsi přes noc při teplotě 32 až 40 “C, s výhodou 37 °C.
Morfogenetiekého proteinu zrání kosti, získaného způsobem podle vynálezu, je možno použít k ošetřování nebo k prevenci <4 «94» poruch kostí, chrupavek nebo zubů nebo pro umělé zubní kořeny, když se do něj přidá podle potřeby farmaceuticky kompatibilní nosič, přísada, ředidlo a/nebo excipient.
K léčení chorob způsobených kostním dysbolismem se může morfogenetický protein zrání kosti podávat systemicky jedním z mnoha možných způsobů, například injekčně intravenosními injekcemi, intramuskulárními nebo intraperioneálními injekcemi, orálním podáváním nebo parenterálně jako čípky.
K ošetřování kostních zlomenin se může morfogenetický protein zrání kosti podávat systemicky nebo lokálně injekcemi, orálním podáním nebo parenterálním podáním. Výhodné je také implantovat matrici obsahující morfogenetický protein zrání kosti do oblasti zlomeniny. Vhodnými příklady matrice jsou přírodní polymery jako je kollagenové nebo fibrinové lepidlo nebo syntetické polymery jako je kopolymer polymléčné kyseliny a glykolové kyseliny.
V případě ortopedické rekonstrukce, transplantace kosti nebo umělého kořene zubu se může aplikovat morfogenetický protein zrání kosti na povrch kosti nebo implantovaného zubu pokrytého kollagenovou pastou fibrinovým lepidlem nebo jiným lepidlem. V případě transplantace kosti je možno použít přírodních nebo umělých kostí.
Dávka morfogenetického proteinu zrání kosti se řídí účelem a způsobem podání. Obecně je při systemickém podávání dávka 1 gg až 100 gg/kg, zatímco u lokálního podání je to s výhodou 30 gg až 30 mg/místo.
Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení pomocí přiložených obrázků.
4 444 ♦ 4 • *
4
44· · « 44 44 99
9 9 4 · 9 9 9 « 4 4 9 9 99
4 44 4444 4 • 4 4 4 4 4 • 4« 44 · · 99
Seznam obrázků
Na obr. 1
Na obr. 2
Na obr. 3
Na obr. 4 je plasmidová mapa expresního vektoru pDfurpRC/CMV {7,2 kb) lidského sekrečního furinového mutantu. je plasmidová mapa expresního vektoru pMSS99 (5,0 kb) lidského MP52.
je fotografie analysy westernového přenosu za zredukovaných podmínek ukazující supernatant kultury prosté séra buněčné linie, která koexpresuje dimer zrání lidského MP52 a lidského sekrečního furinového mutantu.
je fotografie analysy westernového přenosu za zredukovaných podmínek ukazující, že různé dimery lidského prekurzoru MP52 jsou převedeny na zrání MP52 nutící lidský sekreční furinový mutant působit na dimery.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Výroba dimeru lidského prekurzoru MP52 liniemi CHO buněk, které expresují lidský sekreční furinový mutant a lidský MP52.
(1) Klonování furinového mutantu cDNA sekrečního typu a konstrukce jeho expresního vektoru
Lidský furinový protein má strukturu sestávající ze signálního peptidu, proteázové domény podobné subtilisinu, transmembránové domény a boční cytoplasmové domény ve významovém pořadí z domény terminálu NH2. Podle vynálezu byl klonován mutant cDNA lidského sekrečního furinu kódující proteázovou doménu NH2 terminálu bez transmembránové domény metofou RT-PCR a zajištěn pro expresi.
flfl fl fl fl flfl · • · flfl ·♦· ♦ · ♦ · ♦ • fl flfl • flflfl • fl » · fl •
fl • flflfl
Z lidské buňky HepG2 se extrahuje veškerá RNA a s tím jako se šablonou se podrobuje reversní transkripci polymerázou rTth RNA protisměrný primer 1 sekvence proti směru exprese (sekvence cDNA lidského furinu Č. 931 až 914, jak je uvedeno v SEQ ID No:l seznamu sekvencí) a protisměrný dimer 2 sekvence po směru exprese (č. 2095 a 2071). Tyto produkty v kombinaci s posměrným dimerem 3 (SEQ ID No:2 seznamu sekvencí) a protisměrný primer 4 (SEQ ID No:3 seznamu sekvencí) a spolu s posměrným primerem 5 (SEQ ID No:4 seznamu sekvencí) a s protisměrným primerem 6 (SEQ ID No:5 seznamu sekvencí) se podrobí reakci PCR, přičemž se získají fragmenty cDNA na protisměrné a na posměrné straně. Tyto fragmenty se spojí a začlení se do Hindíll-Salí místa plasmidu pUC119 (obchodní produkt společnosti Tekara Shuzo Co, Ltd.), čímž se získá mutant cDNA sekrečního furinu kódující 595 aminokyselin. Výsledná cDNA je potvrzena digescí s restrikčním enzymem a určením základní sekvence DNA. Zjištuje se, že mutant cDNA sekrečního furinu má jako základní sekvenci DNA, nukleotidy č. 163 až 2014 SEQ ID No:l seznamu sekvencí. Sekvence DNA mutantu tohoto lidského sekrečního furinu cDNA se liší od sekvence DNA uváděné van den Ouwelandem a kol. tím, že báze č. 165 je adenin, takže byla eliminována iniciace kodonu, který má podle předpokladu škodlivý vliv na translaci a je tudíž nepotřebný; a že báze č. 2004 je adenin, takže byl vytvořen koncový kodon. Pak se vyřízne mutant cDNA sekrečního furinu digescí s Hindi 11-Xbal a následuje začlenění do místa Hindi 11-Xbal vektoru pRc/CMV (obchodní produkt společnosti INVITROGEN INC.), čímž se připraví pDfurpRC/CMV, expresní vektor lidského mutantu cDNA sekrečního furinu znázorněný na obr. 1.
(2) Konstrukce lidského expresního vektoru MP52
Z lidského genu MP52 obsahujícího plasmid pSK52s, poskytnutého Dr. Hoettenem (Biopharm GmbH), se izoluje fragment DNA, obsahující lidský gen MP52, digescí s /řindlll, následným začleněním do místa ffíndlll vektoru pABstop, který poskytl Dr. Zettlmeissl (Behringwerke AG), čímž se připraví pMSS99, lidský expresní vektor MP52 znázorněný na obr. 2. Jeho struktura se potvrdí stanovením základní sekvence DNA a digescí s restrikčním enzymem. Jako výsledek zjištěno, že základní sekvence DNA lidského MP52 pMSS99 jsou nukleotidy č. 576 až 2279 SEQ ID No:6 seznamu sekvencí.
(3) Stanoveni MC2, to je linie vaječných buněk čínského křečka (CHO), která produkuje různé prekurzory lidských dimerů MP5 2
Do buněk CH0-DUKX-B11, které poskytl Dr.Zettlmeiss1 (Behringwerke AG), tedy mutantních kmenů buněk CHO, se zavedou pMSA99 a pSVOAdhfr, které poskytl Dr.Zettlmeissl, kalciumfosfátDNA metodou koprecipitace. Pak se vytvoří pomocí methotrexatu (MTX) velkovýroba buněčné linie lidského MP52 metodou amplifikace genu.
pMS99 (10 pg) a pSVOAdhfr (2 gg) se rozpustí v 1 ml 25 mM HEPES, 140 mM NaCI a 0,75 mM Na2HP04 (pH 7,05) a následuje smísení s 50 μΐ 2,5 M CaCl2 . Precipitát se ponechá nad buňkami CHO-DUKx-Bll v 10-cm misce a nechá se stát 30 minut při teplotě místnosti. Do vrstvy buněk se přidá 8 ml media MEM-ALPHA (MEM-a+) obsahujícího ribo- a deoxyribonuk1eotid, přidá se 10% zárodečného telecího séra a výsledná směs se kultivuje 4 až 6 hodin v inkubátoru s CO2. Po 3-minutovém zpracování 10% glycerolem při teplotě místnosti se buňky kultivují na mediu MEM-a+ obsahujícím 10 % FBS. Kultivované buňky se pak očkují opět na mediu MEM-ALPHA (MEM-or ) prostém ribo- a deoxyribonukleotidu, obsahujícím 10 % dialyzovaného FBS a transformanty se oddělí. Produkce lidského MP52 se detekuje analýzou westernovým přenosem jak popsáno dále v odstavci (5).
Do media produkujívcího buněčné kmeny lidského MP52 se ·· ··- ♦· • · · · · * • · « · ·· • · « ···♦ · • 9 · · · • 99 99 99 ···· ··· přidá MTX. Se zvyšováním koncentrace MTX na 400 nM se získá buněčná linie MC-2 produkující lidský dimer MP52 různých molekulových hmotností a lidský dimer zrání MP52. Výsledná buněčná linie MC-2 je uložena v národním institutu National Institue of Bioscience and Human Technology, Agency of Industrial Science and Technology (1-3, Higashi 1-Chome, Tsukubashi, Ibaraki-ken) od 21. června 1995 pod depositním číslem FERM BP-5142.
(4) Vytvoření ko-expresní buněčné linie lidského MP52 a lidského sekrečního furinového mutantu zavedením expresního vektoru lidského sekrečního furinového mutantu do lidského MP52 produkujícího buněčnou linii MC-2.
Ko-expresní buněčná linie lidského MP52 a lidského sekrečního furinového mutantu se vytvoří zavedením expresního vektoru lidského sekrečního furinového mutantu do buněčné linie CHO MC-2, což vytvoří různé prekursorové dimery lidského MP52 a dimer zrání MP52 společnou precipitací fosforečnanu vápenatého a DNA a pak selekcí buněk transformantu v přítomnosti 333 Ug/ml G418 a 400 nM MTX.
Podobným způsobem jako podle příkladu 1 (2) se vytvoří společný precipitát fosforečnanu vápenatého a DNA pomocí pDfurpRC/CMV (4,8 ug). Po překrytí buněk MC-2 v 10 cm misce, se nechají stát 30 minut při teplotě místnosti. Do vrstvy buněk se přidá 8 ml ribo- a deoxyribonukleotidu prostého media NEM-ALPHA (MEM-a-) obsahujícího 10% FBS a výsledná směs se kultivuje 4 až 6 hodin v inkubátoru CO2. Po zpracování 10% glycerolem 3 minuty při teplotě místnosti, se buňky kultivují 2 dny na mediu MEM-a obsahujícího 10 % FBS. Kultivované buňky se pak opět očkujído media MEM-a obsahujícího 10 % FBS, 400 nM MTX a 333 ug/ml G418 a kmeny transformantu se oddělí. Výroba lidského MP52 se detekuje analýzou westernový přenos, jak je popsáno v odstavci (5). Výroba lidského sekrečního furino• 4 44
4 4 ♦
4 44
4 4 4
4 4
44 • 4 4 44·
- 11 aktivity enzymu, jak supernatantů kultury,
Zjistilo se, MP52 mající vého mutantu se detekuje metodou měření je popsáno v odstavci (6). Jeden ze prostý sera výsledných ko-expresních buněčných linií lidského furinu MP52 a lidského sekrečního furinového mutantu, se každodenně podrobuje výměně media a spojené supernatanty kultury se podrobí polyakrylamidové elektroforéze za redukčních podmínek následované analýzou westernový přenos. Její výsledky jsou na snímku na obr. 3. Do každé dráhy se nalije 0,5 μΐ supernatantu kultury. Dráhy 1, 2 a 3 jsou kulturní supernatanty 1., 2. a 3. dne. Pás zrání monomeru MP52 je naznačen šipkou.
že v supernatantu není detekován žádný prekurzor velkou molekulovou hmotnost a veškerý MP52 byly peptidy s molekulovou hmotností přibližně 15K, což odpovídalo zrání monomerů MP52. Výsledkem analyzy za neredukčních podmínek tvoří tyto peptidy dimer zrání MP52, z nichž každý má molekulovou hmotnost přibližně 28K. Vyrobené množství dimerů pomocí ko-expresní linie buněk je přibližně 8 gg/ml/24 hodin, což je 3 až 8-krát více než při použití buněčné linie MC-2, expresující MP52. Tudíž při použití ko-expresní linie lidské MP52 a lidského sekrečního furinového mutantu se podle vynálezu podařilo hned napoprvé vyprodukovat dimery zrání MP52 pouze ve větším měřítku než konvenční metodou.
(5) Detekce lidského MP52 v supernatantu kultury analýzou westernového přenosu
Proteiny supernatantu kultury se oddělí SDS-polyakrylamidovou gelovou elektroforézou (15 až 25% polyakrylamidový gradientový gel, Daichi Kagaku Co. Ltd.) následovanou přenosem proteinu na membránu PVDF (Clear Blot Membrane-P, ATTO). Membrána se blokuje Block Ace (Dainippon Pharmaceutical Co. Ltd.) jednu hodinu, promyje se Tris-pufrovou solankou (TBS) a pak se zpracovává přes noc 10 gg/ml kuřecí protilátky proti lidské MP52. Membrána se promyje TBS, obsahující 0,1% Tween 20 (TTBS) a následně se zpracuje alkalickým fosfatáza-králík anti-kuře··*· cím komplexem IgG (Sigma A9171). Membrána se promyje TTBS a pás příslušející MP52 se zviditelní kitem alkalického fosfatázového substrátu (BIO-RAD).
(6) Detekce aktivity lidského sekrečního furinového mutantu v supernatantu kultury
Zředí se 20 μΐ supernatantu kultury 30 μΐ čisté vody a smísí se se 200 μΐ roztoku fluorescenčního substrátu; inkubuje se se 125 mM MES/NaOH (hodnota pH 7,0), obsahujícího 100 μΜ Boc-Arg-Arg-Va1-Arg-MCA (obchodní produkt společnosti Protein Technology Institute) 1,25 Mm CaCÍ2 10 minut při teplotě 37 °C. Fluorescence AMC se měří při excitační vlnové délce 380 nm a emisní vlnové délce 450 nm. Pokud jde o aktivitu furinu, je jako 1 jednotka (U) definována aktivita k uvolnění 1 pmol AMC za minutu.
(7) Čištění zrání MP52 vytvořeného ko-expresí s mutantem lidského sekrečního furinu a analýza NH2-terminální aminokyselinové sekvence
Se supernatantem séra prosté kultury ko-expresního buněčného kmene lidského MP52 a mutantu lidského sekrečního furinu se smísí 0,1 objemových dílů 0,2M natriumfosfátového pufru (hodnota pH 6,0). Výsledná směs se aplikuje na sloupec HiTrap SF (1 ml, Pharmacia) vyvážený 20 mM natriumfosfátového pufru, obsahujícího 50 mM NaCl a následuje promytí stejným pufrem. Protein se pak eluuje O,IM natriumfosfátovým pufrem (hodnota pH 6,0) obsahujícím 6M guanidinchlorovodíkové kyseliny. Eluát se aplikuje na reverzní fázový HPLC sloupec Resource RPC (3 ml, Pharmacia) a protein se eluuje 25 až 55% acetonitrilem. Frakce, obsahující zrání MP52, se podrobí NH2-koncové aminokyselinové sekvenční analýze pulzním kapalino plynovým fázovým sekvencerem (Applied Biosystems model 476). Výsledky jsou v tabulce I.
| 99 ·»(·· 9 9 9 · • 9 4 O 9 9 · — 1 J — 9 9 •••9 9 9 | 99 99 9 9 9 9 9 9 9 9 9 99 • 9 9 99 99 | |||
| Tabulka I | ||||
| Cyklus | Aminokyselinová sekvence 1 | (pmol; | Aminokyselinová sekvence 2 | (pmol) |
| 1 | Arg | 11,95 | Ala | 25,51 |
| 2 | Ala | 28^75 | Pro | 14,75 |
| 3 | Pro | 17,55 | Leu | 18,07 |
| 4 | Leu | 16,47 | Ala | 14,46 |
| 5 | Ala | 16,99 | Thr | 5,02 |
| 6 | Thr | 7,15 | Arg | 7,38 |
| 7 | Arg | 9,21 | Gin | 9,08 |
| 8 | Gin | 9,54 | Gly | 13,23 |
| 9 | Gly | 11,29 | Lys | 5,29 |
| 10 | Lys | 8,04 | Arg | 6,52 |
| Na | základě hodnot v | tabulce | se předpokládá, že | sekvence |
aminokyselin 1 a sekvence aminokyselin 2 byly odvozeny ze sekvence aminokyselin z Arg 354 a z Ala 355 SEQ ID No:6 seznamu sekvencí, a že jejich molární poměr je 1:1.
Příklad 2
Konverze lidského prekurzorového dimeru MP52 na dimer zrání mutantem lidského sekrečního furinu (1) Stanovení linie buněk CHO, která produkuje mutant lidského sekrečního furinu
Do buněk CH0-DUKX-B11, poskytnutých Dr. Zettlmeisslem • * 0 · ·» · 4 « · · ·· · ·
0 0 0
0· · 0000 0 »·0
00 ··
0 0 0 0 0
0 0 00
0 0 00* · ♦
0 0 0 0
00 ·· (Behringwerke AG), se kalcimfosfát DNA ko-precipitačním způsobem začlení expresní vektor mutantu lidského sekrečního furinu, pDfurpRC/CMV, popsaný v příkladu 1 (1). Transformantové buňky se oddělí v přítomnosti G418, čímž se vytvoří vysoce expresní kmen mutantu lidského sekrečního furinu.
Podobným způsobem jako podle příkladu 1 (3) se připraví ko-precipitát pDfurpRC/CMV a fosfátu vápenatého, překryjí se buňky CH0-DUKX-B11 v 10 cm misce a nechá se stát 30 minut při teplotě místnosti. Do vrstvy buněk se přidá 8 ml riboa deoxyribonukleotid obsahující medium MEM-ALPHA (MEM-a+), obsahující 10 % FBS, načež následuje kultivace v inkubátoru CO2 po dobu 4 až 6 hodin. Po zpracování buněk 10% glycerolem 3 minuty při teplotě místnosti, se očkuje opět na medium MEM-a+ obsahující 10 % FBS a 400 pg/ml G418, přičemž se transformant oddělí. Buněčná linie, produkující mutant lidského sekrečního furinu, se detekuje způsobem měření aktivity enzymu popsaným v příkladu 1(6) a získají se linie buněk s aktivitou furinu 500 až 1000 U/ml/24 hodin.
(2) Konverze lidského prekurzoru dimeru MP52 na zrání mutantem lidského sekrečního furinu
Se séra prostým kultivačním supernatantem (obsahujícím prekurzor a dimery zrání MP52) lidského MP52 produkujícího buněčné linie CHO MC-2, se smísí v různých poměrech séra prostý supernatant kultury (1000 U/ml) expresní buněčné linie mutantu lidského sekrečního furinu a následuje inkubace přes noc při teplotě 37 °C. Po ukončení reakce se provede analýza westernovým přenosem, popsaná v příkladu 1(5) za redukčních podmínek a detekuje se konverze prekurzoru MP52 na zrání. Výsledky jsou patrny ze snímku na obr. 4. Do každé dráhy 1 až 5 se nalije část supernatantu MC-2 kultury a různé objemy supernatantu kultury expresní buněčné linie mutantu lidského sekrečního furinu. Konečná koncentrace mutantu lidského sekrečního furinu • fr frfrfr·
| • fr fr«frfr • · * · | • fr ·· • · frfr • · frfr | |||
| - 15 - | fr fr • fr • fr • frfrfr · | • • | • · · frfrfr frfr fr frfrfr frfr | |
| je 0 U/ml ve dráze 1. | 50 U/Ml ve dráze | 21, 100 | U/ml | ve dráze |
| 3, 200 U/ml ve dráze 4 | a 400 U/ml ve | dráze 5. | Pruh | monomeru |
| zrání MP52 je vyznačen | šipkami A a B, | zat ímco | pruh | monomeru |
zrání MP52 je vyznačen šipkou C. Jak vyplývá z obr. 4, změnila přísada supernatantu kultury buněčné linie expresující mutant lidského sekrečního furinu tak, aby konečná aktivní koncentrace byla alespoň 200 U/ml úplně na zrání ΜΡ52. Výsledkem je, že množství dimeru růstu ΜΡ52 vzrostlo třikrát.
Průmyslová využitelnost
Morfogenetický protein zrání kosti se vhodně získá jeho separací ze směsi dimerů morfogenetických proteinů, které jsou produkovány savčími buňkami a mají různé molekulové hmotnosti, je však obtížné selektivně vyrábět morfogenetický protein zrání kostí ve velkém měřítku nebo získávat morfogenetický protein zrání kostí účinně, jelikož dosud nebyla vyvinuta technologie jeho účinného oddělování z uvedené směsi. Způsob podle vynálezu však umožňuje připravovat morfogenetický protein zrání kostí z prekurzoru kostního morfogenetického proteinu, čímž umožňuje jeho výrobu ve velkém měřítku. Kromě toho je morfogenetický protein zrání kostí, získaný způsobem podle vynálezu, vysoce čistou látkou sestávající z peptidú v podstatě stejné molekulové hmotnosti, takže se obzvlášf dobře hodí pro použití jako léčivo.
«« · * · ·
Sekvenční listina
Informace pro SEQ ID NO:1
Délka: 4180
Typ: aminokyselina
Řetězcovítost: dvouřetězcová
Topologie: lineární
Typ molekuly: peptid
Fragmentový typ:
Původní zdroj:
organismus: homo sapiens typ tkáně: lidské hepatoma
Charakterist ika” lokace:
jiné informace: zpracovací enzym furin
Popis sekvence: SEQ ID NO:1:
GCGGGGAAGC AGCAGCGGCC AGGATGAATC CCAGGTGCTC TGGAGCTGGA TGGTGAAGGT 60 CGGCACTCTT CACCCTCCCG AGCCCTGCCC GTCTCGGCCC CATGCCCCCA CCAGTCAGCC 120 CCGGGCCACA GGCAGTGAGC AGGCACCTGG GAGCCGAGGC CCTAAGACCA GGCCAAGGAG 180
ACGGGCGCTC CAGGGTCCCA GCCACCTGTC CCCCCC ATG GAG CTG AGG CCC TGG 234
| Met | Glu | Leu | Arg | Pro | Trp | |||||||||||
| 1 | 5 | |||||||||||||||
| TTG | CTA | TGG | GTG | GTA | GCA | GCA | ACA | GGA | ACC | TTG | GTC | CTG | CTA | GCA | GCT | 282 |
| Leu | Leu | Trp | Val | Val | Ala | Ala | Thr | Gly | Thr | Leu | Val | Leu | Leu | Ala | Ala | |
| 10 | 15 | 20 | ||||||||||||||
| GAT | GCT | CAG | GGC | CAG | AAG | GTC | TTC | ACC | AAC | ACG | TGG | GCT | GTG | CGC | ATC | 330 |
| Asp | Ala | Gin | Gly | Gin | Lys | Val | Phe | Thr | Asn | Thr | Trp | Ala | Val | Arg | Ile | |
| 25 | • 30 | 35 | ||||||||||||||
| CCT | GGA | GGC | CCA | GCG | GTG | GCC | AAC | AGT | GTG | GCA | CGG | AAG | CAT | GGG | TTC | 378 |
| Pro | Gly | Gly | Pro | Ala | Val | Ala | Asn | Ser | Val | Ala | Arg | Lys | His | Gly | Phe | |
| 40 | 45 | 50 | ||||||||||||||
| CTC | AAC | CTG | GGC | CAG | ATC | TTC | GGG | GAC | TAT | TAC | CAC | TTC | TGG | CAT | CGA | 426 |
| Leu | Asn | Leu | Gly | Gin | Ile | Phe | Gly | Asp | Tyr | Tyr | His | Phe | Trp | His | Arg | |
| 55 | 60 | 65 | 70 | |||||||||||||
| GGA | GTG | ACG | AAG | CGG | TCC | CTG | TCG | CCT | CAC | CGC | CCG | CGG | CAC | AGC | CGG | 474 |
| Gly | Val | Thr | Lys | Arg | Ser | Leu | Ser | Pro | His | Arg | Pro | Arg | His | Ser | Arg | |
| 75 | 80 | 85 | ||||||||||||||
| CTG | CAG | AGG | GAG | CCT | CAA | GTA | CAG | TGG | CTG | GAA | CAG | CAG | GTG | GCA | AAG | 522 |
| Leu | Gin | Arg | Glu | Pro | Gin | Val | Gin | Trp | Leu | Glu | Gin | Gin | Val | Ala | Lys | |
| 90 | 95 | 100 | ||||||||||||||
| CGA | CGG | ACT | AAA | CGG | GAC | GTG | TAC | CAG | GAG | CCC | ACA | GAC | CCC | AAG | TTT | 570 |
| Arg | Arg | Thr | Lys | Arg | Asp | Val | Tyr | Gin | Glu | Pro | Thr | Asp | Pro | Lys | Phe | |
| 105 | 110 | 115 | ||||||||||||||
| CCT | CAG | CAG | TGG | TAC | CTG | TCT | GGT | GTC | ACT | CAG | CGG | GAC | CTG | AAT | GTG | 618 |
| Pro | Gin | Gin | Trp | Tyr | Leu | Ser | Gly | Val | Thr | Gin | Arg | Asp | Leu | Asn | Val | |
| 120 | 125 | 130 | ||||||||||||||
| AAG | GCG | GCC | TGG | GCG | CAG | GGC | TAC | ACA | GGG | CAC | GGC | ATT | GTG | GTC | TCC | 666 |
| Lys | Ala | Ala | Trp | Ala | Gin | Gly | Tyr | Thr | Gly | His | Gly | Ile | Val | Val | Ser | |
| 135 | 140 | 145 | 150 | |||||||||||||
| ATT | CTG | GAC | GAT | GGC | ATC | GAG | AAG | AAC | CAC | CCG | GAC | TTG | GCA | GGC | AAT | 714 |
| Ile | Leu | Asp | Asp | Gly | Ile | Glu | Lys | Asn | His | Pro | Asp | Leu | Ala | Gly | Asn | |
| 155 | 160 | 165 | ||||||||||||||
| TAT | GAT | CCT | GGG | GCC | AGT | TTT | GAT | GTC | AAT | GAC | CAG | GAC | CCT | GAC | CCC | 762 |
| Tyr | Asp | Pro | Gly | Ala | Ser | Phe | Asp | Val | Asn | Asp | Gin | Asp | Pro | Asp | Pro | |
| 170 | 175 | 180 | ||||||||||||||
| CAG | CCT | CGG | TAC | ACA | CAG | ATG | AAT | GAC | AAC | AGG | CAC | GGC | ACA | CGG | TGT | 810 |
• · · · ·« • · « • « • · • * • · · · * • · · ·
| Gin | Pro | Arg | Tyr Thr | Gin | Met | Asn | Asp | Asn | Arg | His | Gly | Thr | Arg Cys | |
| 185 | 190 | 195 | ||||||||||||
| GCG GGG GAA GTG GCT | GCG GTG GCC | AAC | AAC | GGT | GTC | TGT | GGT | GTA GGT | 858 | |||||
| Ala | Gly | Glu | Val Ala | Ala Val | Ala | Asn | Asn | Gly | Val | Cys | Gly | Val Gly | ||
| 200 | 205 | 210 | ||||||||||||
| GTG | GCC | TAC | AAC GCC | CGC | ATT | GGA GGG | GTG | CGC | ATG | CTG | GAT | GGC GAG | 906 | |
| Val | Ala | Tyr | Asn Ala | Arg | Ile | Gly Gly Val | Arg Met | Leu Asp | Gly Glu | |||||
| 215 | 220 | 225 | 230 | |||||||||||
| GTG ACA GAT | GCA GTG | GAG | GCA | CGC TCG | CTG | GGC | CTG | AAC | CCC | AAC CAC | 954 | |||
| Val | Thr | Asp | Ala Val | Glu | Ala | Arg Ser | Leu | Gly | Leu | Asn | Pro | Asn His | ||
| 235 | 240 | 245 | ||||||||||||
| ATC | CAC | ATC | TAC AGT | GCC | AGC | TGG GGC | CCC | GAG | GAT | GAC | GGC | AAG ACA | 1002 | |
| Ile | His | Ile | Tyr Ser | Ala | Ser | Trp Gly | Pro | Glu | Asp Asp Gly | Lys Thr | ||||
| 250 | 255 | 260 | ||||||||||||
| GTG | GAT | GGG | CCA GCC | CGC | CTC | GCC | GAG GAG | GCC | TTC | TTC | CGT | GGG GTT | 1050 | |
| Val | Asp Gly | Pro Ala | Arg Leu | Ala | Glu | Glu | Ala | Phe | Phe | Arg Gly Val | ||||
| 265 | 270 | 275 | ||||||||||||
| AGC | CAG | GGC | CGA GGG | GGG | CTG GGC | TCC | ATG | TTT | GTC | TGG GCC | TCG GGG | 1098 | ||
| Ser | Gin | Gly Arg Gly Gly | Leu | Gly | Ser | Ile | Phe | Val | Trp | Ala | Ser Gly | |||
| 280 | 285 | 290 | ||||||||||||
| AAC | GGG | GGC CGG GAA | CAT | GAC | AGC | TGC | AAC | TGC | GAC | GGC | TAC | ACC AAC | 1146 | |
| Asn | Gly Gly Arg Glu | His | Asp | Ser | Cys | Asn | Cys | Asp | Gly | Tyr | Thr Asn | |||
| 295 | 300 | 305 | 310 | |||||||||||
| AGT | ATC TAC ACG CTG | TCC | ATC | AGC | AGC | GCC | ACG | CAG | TTT | GGC | AAC GTG | 1194 |
• · • · · ·
| Ser Ile Tyr Thr Leu Ser | Ile Ser | Ser | Ala Thr Gin Phe Gly Asn | |||||||||||
| 315 | 320 | 325 | ||||||||||||
| CCG | TGG | TAC | AGC | GAG GCC | TGC | TCG | TCC | ACA | CTG | GCC | ACG ACC | TAC | ||
| Pro | Trp | Tyr | Ser | Glu | Ala | Cys | Ser | Ser | Thr | Leu | Ala | Thr | Thr | Tyr |
| 330 | 335 | 340 | ||||||||||||
| AGT | GGC | AAC | CAG AAT | GAG AAG | CAG | ATC | GTG ACG ACT | GAC | TTG | CGG | ||||
| Ser | Gly | Asn | Gin | Asn | Glu | Lys | Gin | Ile | Val | Thr | Thr | Asp | Leu | Arg |
·· · 4 4 4 4 44 • · · 44 44 4444 4 • * 444 444
4444 4 444 44 ·· 44
Val
AGC 1242
Ser
CAG 1290
Gin
345 350 355
AAG TGC ACG GAG TCT CAC ACG GGC ACC TCA GCC TCT GCC CCC TTA GCA 1338
Lys Cys Thr Glu Ser His Thr Gly Thr Ser Ala Ser Ala Pro Leu Ala
360 365 370
GCC GGC ATC ATT GCT CTC ACC CTG GAG GCC AAT AAG AAC CTC ACA TGG 1386
Ala Gly Ile Ile Ala Leu Thr Leu Glu Ala Asn Lys Asn Leu Thr Trp
375 380 385 390
• * • ·
| Gin Asn | Trp | Thr Thr Val Ala Pro Gin Arg Lys Cys Ile Ile Asp Ile | ||||||||||||||
| 440 | 445 | 450 | ||||||||||||||
| CTC | ACC | GAG | CCC | AAA | GAC | ATC | GGG AAA | CGG | CTC | GAG | GTG | CGG | AAG ACC | 1626 | ||
| Leu | Thr | Glu | Pro | Lys | Asp | Ile | Gly Lys | Arg | Leu | Glu | Val | Arg Lys | Thr | |||
| 455 | 460 | 465 | 470 | |||||||||||||
| GTG ACC | GCG | TGC | CTG | GGC | GAG | CCC | AAC | CAC | ATC | ACT | CGG CTG | GAG | CAC | 1674 | ||
| Val | Thr | Ala | Cys | Leu | Gly | Glu | Pro | Asn | His | Ile | Thr | Arg Leu | Glu | His | ||
| 475 | 480 | 485 | ||||||||||||||
| GCT | CAG | GCG | CGG | CTC | ACC | CTG | TCC | TAT | AAT | CGC | CGT | GGC GAC | CTG | GCC | 1722 | |
| Ala | Gin | Ala | Arg | Leu | Thr | Leu | Ser | Tyr | Asn | Arg Arg Gly Asp | Leu | Ala | ||||
| 490 | 495 | 500 | ||||||||||||||
| ATC | CAC | CTG | GTC | AGC | CCC | ATG GGC | ACC | CGC | TCC ACC | CTG | CTG GCA | GCC | 1770 | |||
| Ile | His | Leu | Val | Ser | Pro | Met | Gly | Thr | Arg | Ser | Thr | Leu | Leu | Ala | Ala | |
| 505 | 510 | 515 | ||||||||||||||
| AGG | CCA | CAT | GAC | TAC | TCC | GCA | GAT | GGG | TTT | AAT | GAC | TGG GCC | TTC | ATG | 1818 | |
| Arg Pro | His | Asp Tyr | Ser | Ala | Asp Gly | Phe | Asn | Asp | Trp Ala | Phe | Met | |||||
| 520 | 525 | 530 | ||||||||||||||
| ACA ACT | CAT | TCC | TGG | GAT | GAG | GAT | CCC | TCT | GGC | GAG | TGG | GTC | CTA | GAG | 1866 | |
| Thr | Thr | His | Ser | Trp Asp | Glu | Asp | Pro | Ser | Gly | Glu | Trp | Val | Leu | Glu | ||
| 535 | 540 | 545 | 550 | |||||||||||||
| ATT | GAA | AAC | ACC | AGC | GAA | GCC | AAC | AAC | TAT | GGG ACG | CTG | ACC | AAG | TTC | 1914 | |
| Ile | Glu | Asn | Thr | Ser | Glu | Ala | Asn | Asn | Tyr | Gly Thr | Leu | Thr | Lys | Phe | ||
| 555 | 560 | 565 | ||||||||||||||
| ACC | CTC | GTA | CTC | TAT | GGC | ACC | GCC | CCT | GAG GGG CTG | CCC | GTA | CCT | CCA | 1962 |
• 4 ·
Pro Pro
2004
| Thr | Leu Val Leu 570 | Tyr Gly Thr | Ala Pro Glu Gly Leu Pro Val | ||||||||||
| 575 | 580 | ||||||||||||
| GAA | AGC | AGT | GGC | TGC | AAG | ACC | CTC | ACG | TCC | AGT | CAG | GCC | TGA |
| Glu | Ser | Ser | Gly | Cys | Lys | Thr | Leu | Thr | Ser | Ser | Gin | Ala | 444 |
| 585 | 590 | 595 |
GTGGTGTGCG AGGAAGGCTT CTCCCTGCAC CAGAAGAGCT GTGTCCAGCA CTGCCCTCCA 2064
GGCTTCGCCC CCCAAGTCCT CGATACGCAC TATAGCACCG AGAATGACGT GGAGACCATC 2124
CGGGCCAGCG TCTGCGCCCC CTGCCACGCC TCATGTGCCA CATGCCAGGG GCCGGCCCTG 2184
ACAGACTGCC TCAGCTGCCC CAGCCACGCC TCCTTGGACC CTGTGGAGCA GACTTGCTCC 2244
CGGCAAAGCC AGAGCAGCCG AGAGTCCCCG CCACAGCAGC AGCCACCTCG GCTGCCCCCG 2304
GAGGTGGAGG CGGGGCAACG GCTGCGGGCA GGGCTGCTGC CCTCACACCT GCCTGAGGTG 2364
GTGGCCGGCC TCAGCTGCGC CTTCATCGTG CTGGTCTTCG TCACTGTCTT CCTGGTCCTG 2424
CAGCTGCGCT CTGGCTTTAG TTTTCGGGGG GTGAAGGTGT ACACCATGGA CCGTGGCCTC 2484
ATCTCCTACA AGGGGCTGCC CCCTGAAGCC TGGCAGGAGG AGTGCCCGTC TGACTCAGAA 2544
GAGGACGAGG GCCGGGGCGA GAGGACCGCC TTTATCAAAG ACCAGAGCGC CCTCTGATGA 2604
GCCCACTGCC CACCCCCTCA AGCCAATCCC CTCCTTGGGC ACTTTTTAAT TCACCAAAGT 2664
ΛΤΤΤΊΊΤΤΛΤ CTTGGGACTG CCTTTGGACC CCAGCTGGGA GGCAAGAGGG GTGGAGACTG 2724
TTTCCCATCC TACCCTCGGG CCCACCTGGC CACCTGAGGT GGGCCCAGGA CCAGCTGGGG 2784
CGTGGGGAGG GCCGTACCCC ACCCTCAGCA CCCCTTCCAT GTGGAGAAAG GAGTGAAACC 2844
TTTAGGGCAG CTTGCCCCGG CCCCGGCCCC AGCCAGAGTT CCTGCGGAGT GAAGAGGGGC 2904
AGCCCTTGCT TGTTGGGATT CCTGACCCAG GCCGCAGCTC TTGCCCTTCC CTGTCCCTCT 2964
AAAGCAATAA TGGTCCCATC CAGGCAGTCG GGGGCTGGCC TAGGAGATAT CTGAGGGAGG 3024
AGGCCACCTC TCCAAGGGCT TCTGCACCCT CCACCCTGTC CCCCAGCTCT GGTGAGTCTT 3084
GGCGGCAGCA GCCATCATAG GAAGGGACCA AGGCAAGGCA GGTGCCTCCA GGTGTGCACG 3144
• · · · • · · · · • c> · ·
TGGCATGTGG CCTGTGGCCT GTGTCCCATG ACCCACCCCT GTGCTCCGTG CCTCCACCAC
CACTGGCCAC CAGGCTGGCG CAGCCAAGGC CGAAGCTCTG GCTGAACCCT GTGCTGGTGT
CCTGACCACC CTCCCCTCTC TTGCACCCGC CTCTCCCGTC AGGGCCCAAG TCCCTGTTTT
CTGAGCCCGG GCTGCCTGGG CTGTTGGCAC TCACAGACCT GGAGCCCCTG GGTGGGTGGT
GGGGAGGGGC GCTGGCCCAG CCGGCCTCTC TGGCCTCCCA CCCGATGCTG CTTTCCCCTG
TGGGGATCTC AGGGGCTGTT TGAGGATATA TTTTCACTTT GTGATTATTT CACTTTAGAT
GCTGATGATT TGTTTTTGTA TTTTTAATGG GGGTAGCAGC TGGACTACCC ACGTTCTCAC
ACCCACCGTC CGCCCTGCTC CTCCCTGGCT GCCCTGGCCC TGAGGTGTGG GGGCTGCAGC
ATGTTGCTGA GGAGTGAGGA ATAGTTGAGC CCCAAGTCCT GAAGAGGCGG GCCAGCCAGG
CGGGCTCAAG GAAAGGGGGT CCCAGTGGGA GGGGCAGGCT GACATCTGTG TTTCAAGTGG
GGCTCGCCAT GCCGGGGGTT CATAGGTCAC TGGCTCTCCA AGTGCCAGAG GTGGGCAGGT
GGTGGCACTG AGCCCCCCCA ACACTGTGCC CTGGTGGAGA AAGCACTGAC CTGTCATGCC
CCCCTCAAAC CTCCTCTTCT GACGTGCCTT TTGCACCCCT CCCATTAGGA CAATCAGTCC
CCTCCCATCT GGGAGTCCCC TTTTCTTTTC TACCCTAGCC ATTCCTGGTA CCCAGCCATC
TGCCCAGGGG TGCCCCCTCC TCTCCCATCC CCCTGCCCTC GTGGCCAGCC CGGCTGGTTT
TGTAAGATAC TGGGTTGGTG CACAGTGATT TTTTTCTTGT AATTTAAACA GGCCCAGCAT
TGCTGGTTCT ATTTAATGGA CATGAGATAA TGTTAGAGGT TTTAAAGTGA TTAAACGTGC
AGACTATGCA AACCAG
3204
3264
3324
3384
3444
3504
3564
3624
3684
3744
3804
3864
3924
3984
4044
4104
4164
4180
Informace pro SEQ ID NO:2
Délka: 29
Typ: nukleová kyselina
Řetězcovítost: jednořetězcová
Topologie: lineární
Typ molekuly: jiná nukleová kyselina
Původní zdroj:ne organismus: ne kmen: ne
Charakteristika: furinový primer 3 mající smysl Popis sekvence: SEQ ID NO:2:
Informace pro SEQ ID NO:3
Délka: 26
Typ: nukleová kyselina
Řetězcovítost: jednořetězcová
Topologie: lineární
Typ molekuly: jiná nukleová kyselina
Původní zdroj:ne organismus: ne kmen: ne
Charakteristika: furinový primer 4 nemající smysl Popis sekvence: SEQ ID N0:3:
Informace pro SEQ ID N0:4
Délka: 26
Typ: nukleová kyselina
Řetězcovítost: jednořetězcová
Topologie: lineární
Typ molekuly: jiná nukleová kyselina
Původní zdroj:ne organismus: ne kmen: ne
Charakteristika: furinový primer 5 mající smysl Popis sekvence: SEQ ID NO:4:
Informace pro SEQ ID N0:5
Délka: 30
Typ: nukleová kyselina
Řetězcovítost: jednořetězcová
Topologie: lineární
Typ molekuly: jiná nukleová kyselina
Původní zdroj:ne organismus: ne kmen: ne
Charakteristika: furinový primer 6 nemající smysl Popis sekvence: SEQ ID N0:5:
Informace pro SEQ ID N0:6 Délka: 2703 Typ: aminokyselina Řetězcovítost: dvouřetězcová Topologie: lineární Typ molekuly: peptid Fragmentový typ:
Původní zdroj:
organismus: homo sapiens « · · · · • ·· typ tkáně: lidské embryo Charakterist ika lokace:
jiné informace: kostní morfogenetický protein MP52 Popis sekvence: SEQ ID NO:6:
CCATGGCCTC GAAAGGGCAG CGGTGATTTT TTTCACATAA ATATATCGCA CTTAAATGAG 60
TTTAGACAGC ATGACATCAG AGAGTAATTA AATTGGTTTG GGTTGGAATT CCGTTTCCAA 120
TTCCTGAGTT CAGGTTTGTA AAAGATTTTT CTGAGCACCT GCAGGCCTGT GAGTGTGTGT 180
GTGTGTGTGT GTGTGTGTGT GTGTGTGTGA AGTATTTTCA CTGGAAAGGA TTCAAAACTA 240
GGGGGAAAAA AAAACTGGAG CACACAGGCA GCATTACGCC ATTCTTCCTT CTTGGAAAAA 300
TCCCTCAGCC TTATACAAGC CTCCTTCAAG CCCTCAGTCA GTTGTGCAGG AGAAAGGGGG 360
CGGTTGGCTT TCTCCTTTCA AGAACGAGTT ATTTTCAGCT GCTGACTGGA GACGGTGCAC 420
GTCTGGATAC GAGAGCATTT CCACTATGGG ACTGGATACA AAGACACACC CGGCAGACTT 480
CAAGAGTCTC AGACTGAGGA GAAAGCCTTT CCTTCTGCTG CTACTGCTGC TGCCGCTGCT 540
TTTGAAAGTC CACTCCTTTC ATGGTTTTTC CTGCCAAACC AGAGGCACCT TTGCTGCTGC 600
CGCTGTTCTC TTTGGTGTCA TTCAGCGGCT GGCCAGAGG ATG AGA CTC CCC AAA 654
Met Arg Leu Pro Lys
| CTC | CTC | ACT | TTC | TTG | CTT | TGG | TAC | CTG | GCT | TGG | CTG | GAC | CTG | GAA | TTC |
| Leu | Leu | Thr | Phe | Leu | Leu | Trp | Tyr | Leu | Ala | Trp | Leu | Asp | Leu | Glu | Phe |
| -20 | -15 | -10 | |||||||||||||
| ATC | TGC | ACT | GTG | TTG | GGT | GCC | CCT | GAC | TTG | GGC | CAG | AGA | CCC | CAG | GGG |
| Ile | Cys | Thr | Val | Leu | Gly | Ala | Pro | Asp | Leu | Gly | Gin | Arg | Pro | Gin | Gly |
| -5 | 1 | 5 | 10 | ||||||||||||
| ACC | AGG | CCA | GGA | TTG | GCC | AAA | GCA | GAG | GCC | AAG | GAG | AGG | CCC | CCC | CTG |
• 4 44
4 4 4 • · 44
4 · 4 4
4 » · · 4
»»»·
| Thr | Arg | Pro | Gly | Leu | Ala | Lys | Ala | Glu | Ala | Lys | Glu | Arg | Pro | Pro | Leu | |
| 15 | 20 | 25 | ||||||||||||||
| GCC | CGG | AAC | GTC | TTC | AGG | CCA | GGG | GGT | CAC | AGC | TAT | GGT | GGG | GGG | GCC | 846 |
| Ala | Arg | Asn | Val | Phe | Arg | Pro | Gly | Gly | His | Ser | Tyr | Gly | Gly | Gly | Ala | |
| 30 | 35 | 40 | ||||||||||||||
| ACC | AAT | GCC | AAT | GCC | AGG | GCA | AAG | GGA | GGC | ACC | GGG | CAG | ACA | GGA | GGC | 894 |
| Thr | Asn | Ala | Asn | Ala | Arg | Ala | Lys | Gly | Gly | Thr | Gly | Gin | Thr | Gly | Gly | |
| 45 | 50 | 55 | ||||||||||||||
| CTG | ACA | CAG | CCC | AAG | AAG | GAT | GAA | CCC | AAA | AAG | CTG | CCC | CCC | AGA | CCG | 942 |
| Leu | Thr | Gin | Pro | Lys | Lys | Asp | Glu | Pro | Lys | Lys | Leu | Pro | Pro | Arg | Pro | |
| 60 | 65 | 70 | ||||||||||||||
| GGC | GGC | CCT | GAA | CCC | AAG | CCA | GGA | CAC | CCT | CCC | CAA | ACA | AGG | CAG | GCT | 990 |
| Gly | Gly | Pro | Glu | Pro | Lys | Pro | Gly | His | Pro | Pro | Gin | Thr | Arg | Gin | Ala | |
| 75 | 80 | 85 | 90 | |||||||||||||
| ACA | GCC | CGG | ACT | GTG | ACC | CCA | AAA | GGA | CAG | CTT | CCC | GGA | GGC | AAG | GCA | 1038 |
| Thr | Ala | Arg | Thr | Val | Thr | Pro | Lys | Gly | Gin | Leu | Pro | Gly | Gly | Lys | Ala | |
| 95 | 100 | 105 | ||||||||||||||
| CCC | CCA | AAA | GCA | GGA | TCT | GTC | CCC | AGC | TCC | TTC | CTG | CTG | AAG | AAG | GCC | 1086 |
| Pro | Pro | Lys | Ala | Gly | Ser | Val | Pro | Ser | Ser | Phe | Leu | Leu | Lys | Lys | Ala | |
| 110 | 115 | 120 | ||||||||||||||
| AGG | GAG | CCC | GGG | CCC | CCA | CGA | GAG | CCC | AAG | GAG | CCG | TTT | CGC | CCA | CCC | 1134 |
| Arg | Giu | Pro | Gly | Pro | Pro | Arg | Glu | Pro | Lys | Glu | Pro | Phe | Arg | Pro | Pro | |
| 125 | 130 | 135 | ||||||||||||||
| CCC | ATC | ACA | CCC | CAC | GAG | TAC | ATG | CTC | TCG | CTG | TAC | AGG | ACG | CTG | TCC | 1182 |
·« 99
9 4
I 9 99
9 9 <
9 <
• · » 9
| Pro Ile | Thr | Pro His Glu Tyr Met Leu Ser Leu Tyr Arg Thr Leu Ser | ||||||||||||||
| 140 | 145 | 150 | ||||||||||||||
| GAT | GCT | GAC AGA AAG GGA GGC | AAC | AGC | AGC | GTG AAG | TTG | GAG | GCT | GGC | 1230 | |||||
| Asp | Ala | Asp Arg Lys | Gly Gly | Asn | Ser | Ser | Val | Lys | Leu | Glu | Ala | Gly | ||||
| 155 | 160 | 165 | 170 | |||||||||||||
| CTG GCC | AAC | ACC ATC | ACC | AGC | TTT | ATT | GAC | AAA | GGG | CAA | GAT | GAC | CGA | 1278 | ||
| Leu | Ala | Asn | Thr | Ile | Thr | Ser | Phe | Ile | Asp | Lys | Gly | Gin | Asp Asp Arg | |||
| 175 | 180 | 185 | ||||||||||||||
| GGT | CCC | GTG | GTC | AGG AAG | CAG AGG | TAC | GTG | TTT | GAC | ATT | AGT | GCC CTG | 1326 | |||
| Gly | Pro | Val | Val | Arg Lys | Gin | Arg Tyr | Val | Phe | Asp | Ile | Ser | Ala Leu | ||||
| 190 | 195 | 200 | ||||||||||||||
| GAG | AAG | GAT | GGG | CTG | CTG GGG | GCC | GAG | CTG | CGG | ATC | TTG | CGG AAG AAG | 1374 | |||
| Glu | Lys | Asp | Gly | Leu | Leu | Gly | Ala | Glu | Leu | Arg | Ile | Leu | Arg | Lys | Lys | |
| 205 | 210 | 215 | ||||||||||||||
| CCC | TCG | GAC | ACG | GCC | AAG | CCA | GCG | GCC | CCC | GGA | GGC | GGG | CGG GCT | GCC | 1422 | |
| Pro | Ser | Asp | Thr | Ala | Lys | Pro | Ala Ala | Pro | Gly | Gly Gly Arg Ala | Ala | |||||
| 220 | 225 | 230 | ||||||||||||||
| CAG | CTG | AAG | CTG | TCC | AGC | TGC | CCC | AGC | GGC | CGG | CAG | CCG | GCC | TCC | TTG | 1470 |
| Gin | Leu | Lys | Leu | Ser | Ser | Cys | Pro | Ser | Gly Arg | Gin | Pro | Ala | Ser | Leu | ||
| 235 | 240 | 245 | 250 | |||||||||||||
| CTG GAT | GTG | CGC | TCC | GTG | CCA | GGC | CTG | GAC GGA | TCT | GGC | TGG | GAG | GTG | 1518 | ||
| Leu Asp | Val | Arg | Ser | Val | Pro | Gly | Leu | Asp Gly | Ser | Gly Trp | Glu | Val | ||||
| 255 | 260 | 265 | ||||||||||||||
| TTC GAC | ATC | TGG AAG | CTC | TTC | CGA | AAC | TTT AAG | AAC | TCG GCC | CAG | CTG | 1566 |
• · · · «· ·♦ ·· · · ♦ · ♦ · · flflfl · · ·· • flflfl· ··· fl fl fl · · fl fl · • flfl ·· ·· ··
| Phe | Asp | Ile | Trp | Lys | Leu | Phe | Arg | Asn | Phe | Lys | Asn | Ser | Ala | Gin | Leu | |
| 270 | 275 | 280 | ||||||||||||||
| TGC | CTG | GAG | CTG | GAG | GCC | TGG | GAA | CGG | GGC | AGG | GCC | GTG | GAC | CTC | CGT | 1614 |
| Cys | Leu | Glu | Leu | Glu | Ala | Trp | Glu | Arg | Gly | Arg | Ala | Val | Asp | Leu | Arg | |
| 285 | 290 | 295 | ||||||||||||||
| GGC | CTG | GGC | TTC | GAC | CGC | GCC | GCC | CGG | CAG | GTC | CAC | GAG | AAG | GCC | CTG | 1662 |
| Gly | Leu | Gly | Phe | Asp | Arg | Ala | Ala | Arg | Gin | Val | His | Glu | Lys | Ala | Leu | |
| 300 | 305 | 310 | ||||||||||||||
| TTC | CTG | GTG | TTT | GGC | CGC | ACC | AAG | AAA | CGG | GAC | CTG | TTC | TTT | AAT | GAG | 1710 |
| Phe | Leu | Val | Phe | Gly | Arg | Thr | Lys | Lys | Arg | Asp | Leu | Phe | Phe | Asn | Glu | |
| 315 | 320 | 325 | 330 | |||||||||||||
| ATT | AAG | GCC | CGC | TCT | GGC | CAG | GAC | GAT | AAG | ACC | GTG | TAT | GAG | TAC | CTG | 1758 |
| Ile | Lys | Ala | Arg | Ser | Gly | Gin | Asp | Asp | Lys | Thr | Val | Tyr | Glu | Tyr | Leu | |
| 335 | 340 | 345 | ||||||||||||||
| TTC | AGC | CAG | CGG | CGA | AAA | CGG | CGG | GCC | CCA | CTG | GCC | ACT | CGC | CAG | GGC | 1806 |
| Phe | Ser | Gin | Arg | Arg | Lys | Arg | Arg | Ala | Pro | Leu | Ala | Thr | Arg | Gin | Gly | |
| 350 | 355 | 360 | ||||||||||||||
| AAG | CGA | CCC | AGC | AAG | AAC | CTT | AAG | GCT | CGC | TGC | AGT | CGG | AAG | GCA | CTG | 1854 |
| Lys | Arg | Pro | Ser | Lys | Asn | Leu | Lys | Ala | Arg | Cys | Ser | Arg | Lys | Ala | Leu | |
| 365 | 370 | 375 | ||||||||||||||
| CAT | GTC | AAC | TTC | AAG | GAC | ATG | GGC | TGG | GAC | GAC | TGG | ATC | ATC | GCA | CCC | 1902 |
| His | Val | Asn | Phe | Lys | Asp | Met | Gly | Trp | Asp | Asp | Trp | Ile | Ile | Ala | Pro | |
| 380 | 385 | 390 | ||||||||||||||
| CTT | GAG | TAC | GAG | GCT | TTC | CAC | TGC | GAG | GGG | CTG | TGC | GAG | TTC | CCA | TTG | 1950 |
• · · » · · ·· *
| Leu | Glu | Tyr | Glu | Ala | Phe | His | Cys | Glu | Gly | Leu | Cys | Glu | Phe | Pro | Leu | |
| 395 | 400 | 405 | 410 | |||||||||||||
| CGC | TCC | CAC | CTG | GAG | CCC | ACG | AAT | CAT | GCA | GTC | ATC | CAG | ACC | CTG | ATG | 1998 |
| Arg | Ser | His | Leu | Glu | Pro | Thr | Asn | His | Ala | Val | Ile | Gin | Thr | Leu | Met | |
| 415 | 420 | 425 | ||||||||||||||
| AAC | TCC | ATG | GAC | CCC | GAG | TCC | ACA | CCA | CCC | ACC | TGC | TGT | GTG | CCC | ACG | 2046 |
| Asn | Ser | Met | Asp | Pro | Glu | Ser | Thr | Pro | Pro | Thr | Cys | Cys | Val | Pro | Thr | |
| 430 | 435 | 440 | ||||||||||||||
| CGG | CTG | AGT | CCC | ATC | AGC | ATC | CTC | TTC | ATT | GAC | TCT | GCC | AAC | AAC | GTG | 2094 |
| Arg | Leu | Ser | Pro | Ile | Ser | Ile | Leu | Phe | Ile | Asp | Ser | Ala | Asn | Asn | Val | |
| 445 | 450 | 455 | ||||||||||||||
| GTG | TAT | AAG | CAG | TAT | GAG | GAC | ATG | GTC | GTG | GAG | TCG | TGT | GGC | TGC | AGG | 2142 |
| Val | Tyr | Lys | Gin | Tyr | Glu | Asp | Met | Val | Val | Glu | Ser | Cys | Gly | Cys | Arg |
460 465 470
TAG CAGCACTGGC CCTCTGTCTT CCTGGGTGGC ACATCCCAAG AGCCCCTTCC 2195
475
TGCACTCCTG GAATCACAGA GGGGTCAGGA AGCTGTGGCA GGAGCATCTA CACAGCTTGG 2255
GTGAAAGGGG ATTCCAATAA GCTTGCTCGC TCTCTGAGTG TGACTTGGGC TAAAGGCCCC 2315
CTTTTATCCA CAAGTTCCCC TGGCTGAGGA TTGCTGCCCG TCTGCTGATG TGACCAGTGG 2375
CAGGCACAGG TCCAGGGAGA CAGACTCTGA ATGGGACTGA GTCCCAGGAA ACAGTGCTTT 2435
CCGATGAGAC TCAGCCCACC ATTTCTCCTC ACCTGGGCCT TCTCAGCCTC TGGACTCTCC 2495
TAAGCACCTC TCAGGAGAGC CACAGGTGCC ACTGCCTCCT CAAATCACAT TTGTGCCTGG 2555
TGACTTCCTG TCCCTGGGAC AGTTGAGAAG CTGACTGGGC AAGAGTGGGA GAGAAGAGGA 2615
GAGGGCTTGG ATAGAGTTGA GGAGTGTGAG GCTGTTAGAC TGTTAGATTT AAATGTATAT 2675
TGATGAGATA AAAAGCAAAA CTGTGCCT
2703
Claims (8)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob výroby morfogenetického proteinu zrání kosti, vyznačující se tím, že se prekurzor morfogenetického proteinu zrání kosti zpracovává zpracovacím enzymem.
- 2. Způsob podle nároku 1,vyznaču jící se t í m, že se- zavádí expresní vektor pro prekurzor morfogenetického proteinu zrání kosti a zpracovacího enzymu transformovaného do savčí buňky,- kultivuje se kultura savčích buněk, při čemž se vytváří morfogenetický protein zrání kosti a- oddělí se vyčištěný morfogenetický protein zrání kosti od supernatantu kultury.
- 3. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že se morfogenetický protein zrání kosti volí ze souboru zahrnujícího zrání MP52, BMP-2, BMP-4, BMP-6 a BMP-7.
- 4. Způsob podle nároku 1 až 3,vyznačující se t í m, že zpracovacím enzymem je furin.
- 5. Způsob podle nároku 1 až 4, vyznačující se t í m , že zpracovacím enzymem je furin sestávající z úplné sekvence aminokyselin.
- 6. Způsob podle nároku 1 až 4, vyznačující se t í m, že zpracovacím enzymem je mutant sekrečního furinu.
- 7. Způsob podle nároku 1 až 5,vyznačující se t í m, že se- zavádí expresní vektor pro prekurzor MP52 a mutant sekrečního furinu transformovaného do savčí buňky,- kultivuje se kultura savčích buněk, přičemž se vytváří mor• ♦ • to toto » to to 4 ► « * · to · 4 to· « ·· ·· fogenetický protein zrání kosti a- odděluje se vyčištěný morfogenetický protein zrání kosti od supernatantu kultury.
- 8. Způsob výroby raorfogenetického proteinu zrání kosti, vyznačující se tím, že se- přidává roztok obsahující zpracovací enzym do roztoku obsahujícího prekurzor morfogenetického proteinu zrání kosti- a směs se inkubuje.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8130618A JPH09295945A (ja) | 1996-04-30 | 1996-04-30 | 成熟型骨誘導因子の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ344998A3 true CZ344998A3 (cs) | 1999-03-17 |
Family
ID=15038542
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ983449A CZ344998A3 (cs) | 1996-04-30 | 1997-04-28 | Způsob výroby morfogenetického proteinu zrání kosti |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0915168A4 (cs) |
| JP (1) | JPH09295945A (cs) |
| KR (1) | KR20000065110A (cs) |
| AU (1) | AU2408497A (cs) |
| CA (1) | CA2253233A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ344998A3 (cs) |
| IL (1) | IL126760A0 (cs) |
| NO (1) | NO985041D0 (cs) |
| PL (1) | PL329610A1 (cs) |
| WO (1) | WO1997041250A1 (cs) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1074620A1 (en) * | 1999-08-06 | 2001-02-07 | HyGene AG | Monomeric protein of the TGF-beta family |
| US6596526B1 (en) * | 2000-06-09 | 2003-07-22 | Baxter Aktiengesellschaft | Furin polypeptides with improved characteristics |
| US20130230901A1 (en) * | 2012-02-14 | 2013-09-05 | Portola Pharmaceuticals, Inc. | Process for making recombinant antidote to factor xa inhibitor |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK0574402T3 (da) * | 1990-11-26 | 1998-05-18 | Chiron Corp | Ekspression af PACE i værtsceller og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
| ATE204606T1 (de) * | 1991-12-06 | 2001-09-15 | Genentech Inc | Prohormon konvertase transformierte zellen. |
| IL110589A0 (en) * | 1993-08-10 | 1994-11-11 | Bioph Biotech Entw Pharm Gmbh | Growth/differentiation factor of the TGF- beta family |
-
1996
- 1996-04-30 JP JP8130618A patent/JPH09295945A/ja active Pending
-
1997
- 1997-04-28 AU AU24084/97A patent/AU2408497A/en not_active Abandoned
- 1997-04-28 EP EP97919717A patent/EP0915168A4/en not_active Withdrawn
- 1997-04-28 PL PL97329610A patent/PL329610A1/xx unknown
- 1997-04-28 IL IL12676097A patent/IL126760A0/xx unknown
- 1997-04-28 CZ CZ983449A patent/CZ344998A3/cs unknown
- 1997-04-28 WO PCT/JP1997/001474 patent/WO1997041250A1/ja not_active Application Discontinuation
- 1997-04-28 KR KR1019980708701A patent/KR20000065110A/ko not_active Application Discontinuation
- 1997-04-28 CA CA002253233A patent/CA2253233A1/en not_active Abandoned
-
1998
- 1998-10-29 NO NO985041A patent/NO985041D0/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0915168A1 (en) | 1999-05-12 |
| AU2408497A (en) | 1997-11-19 |
| IL126760A0 (en) | 1999-08-17 |
| KR20000065110A (ko) | 2000-11-06 |
| JPH09295945A (ja) | 1997-11-18 |
| NO985041L (no) | 1998-10-29 |
| WO1997041250A1 (fr) | 1997-11-06 |
| PL329610A1 (en) | 1999-03-29 |
| EP0915168A4 (en) | 1999-11-17 |
| NO985041D0 (no) | 1998-10-29 |
| CA2253233A1 (en) | 1997-11-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU640115B2 (en) | Cloning and expression of transforming growth factor beta-2 | |
| JP3681069B2 (ja) | Ｂｍｐ−１１組成物 | |
| JP2740417B2 (ja) | ヒト神経成長因子の遺伝子組換えによる調製法 | |
| EP0723588B1 (en) | Activin receptors-like kinase (alk), belonging to the tgf receptor family and/or to the bmp receptor family | |
| CA2220010A1 (en) | Bmp-15 compositions | |
| JPH06508990A (ja) | Ｂｍｐ−９組成物 | |
| CA2082052A1 (en) | Mammalian expression of the bmp-2 family | |
| WO1994001557A1 (en) | Bone formation-inducing protein | |
| EA000582B1 (ru) | Белок, соответствующий зрелому участку морфогенетического белка кости мр-52, фармацевтическая композиция для лечения заболеваний и дефектов хрящей и костей и способ получения белка | |
| EP1078054B1 (en) | Monomeric mp52/gdf-5 with bone morphogenetic activity and medicinal agent containing the same for preventing and treating diseases of cartilage and bone | |
| JP2002511762A (ja) | ネズミおよびヒトのサーベラス様蛋白およびそれらを含有する組成物 | |
| HUT52550A (en) | Process for production of a new, tgf-betha 1/betha 2 chimera betha transformating increasing factor | |
| US7288633B2 (en) | Modified human thymic stromal lymphopoietin | |
| ES2286817T3 (es) | Proteina condromodulina-i humana. | |
| CZ344998A3 (cs) | Způsob výroby morfogenetického proteinu zrání kosti | |
| CA2224289A1 (en) | New protein hmw human mp52s | |
| EP0473080B1 (en) | Chondromodulin-I protein | |
| MXPA98008915A (en) | Process to produce the bone morphogenetic protein by madurac | |
| AU783059B2 (en) | Recombinant sequence, its preparation and use | |
| JP3527760B2 (ja) | 新規骨形成誘導蛋白質、それをコードするｄｎａ及び該蛋白質の製造方法並びにそれを有効成分とする骨形成誘導剤 | |
| GB2210620A (en) | Transforming growth factor beta -2 | |
| KR100247216B1 (ko) | 골 유도 조성물 | |
| CN1224467A (zh) | 生产成熟型骨形态发生蛋白的方法 | |
| IL103749A (en) | Method for production of transforming growth factor beta 2 | |
| MXPA00000242A (en) | Murine and human cerberus-like proteins and compositions comprising them |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |