CZ309422B6 - Povrchově modifikované částice - Google Patents
Povrchově modifikované částice Download PDFInfo
- Publication number
- CZ309422B6 CZ309422B6 CZ2020-535A CZ2020535A CZ309422B6 CZ 309422 B6 CZ309422 B6 CZ 309422B6 CZ 2020535 A CZ2020535 A CZ 2020535A CZ 309422 B6 CZ309422 B6 CZ 309422B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- particles
- core
- modified
- inner shell
- peg
- Prior art date
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 139
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims abstract description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 7
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 35
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 19
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 18
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 16
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 claims description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 238000000339 bright-field microscopy Methods 0.000 claims description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 11
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 11
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 claims description 11
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 claims description 11
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 10
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 10
- 108010087904 neutravidin Proteins 0.000 claims description 9
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 8
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 7
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 5
- UUEWCQRISZBELL-UHFFFAOYSA-N 3-trimethoxysilylpropane-1-thiol Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCS UUEWCQRISZBELL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 4
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 claims description 4
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 claims description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000007771 core particle Substances 0.000 claims description 4
- LRCFXGAMWKDGLA-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;hydrate Chemical compound O.O=[Si]=O LRCFXGAMWKDGLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960004029 silicic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 claims description 4
- UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N Carbon monoxide Chemical compound [O+]#[C-] UGFAIRIUMAVXCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 3
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DCQBZYNUSLHVJC-UHFFFAOYSA-N 3-triethoxysilylpropane-1-thiol Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCS DCQBZYNUSLHVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- SJECZPVISLOESU-UHFFFAOYSA-N 3-trimethoxysilylpropan-1-amine Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCN SJECZPVISLOESU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 2
- NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N ethyl (e)-3-[3-amino-2-cyano-1-[(e)-3-ethoxy-3-oxoprop-1-enyl]sulfanyl-3-oxoprop-1-enyl]sulfanylprop-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C\SC(=C(C#N)C(N)=O)S\C=C\C(=O)OCC NLFBCYMMUAKCPC-KQQUZDAGSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 claims description 2
- HDZGCSFEDULWCS-UHFFFAOYSA-N monomethylhydrazine Chemical compound CNN HDZGCSFEDULWCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 claims description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 2
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M lipoate Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 claims 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 abstract description 4
- 239000007769 metal material Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 32
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 239000011162 core material Substances 0.000 description 18
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 16
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 14
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 12
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 10
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 10
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 9
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N lipoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002078 nanoshell Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 7
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 6
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 5
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 5
- -1 biotin Chemical class 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 238000001946 ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 102100032218 Cytokine-inducible SH2-containing protein Human genes 0.000 description 4
- 101000943420 Homo sapiens Cytokine-inducible SH2-containing protein Proteins 0.000 description 4
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 4
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 3
- 238000012538 light obscuration Methods 0.000 description 3
- ZQMHJBXHRFJKOT-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[(1-methoxy-2-methyl-1-oxopropan-2-yl)diazenyl]-2-methylpropanoate Chemical compound COC(=O)C(C)(C)N=NC(C)(C)C(=O)OC ZQMHJBXHRFJKOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- XQMTUIZTZJXUFM-UHFFFAOYSA-N tetraethoxy silicate Chemical compound CCOO[Si](OOCC)(OOCC)OOCC XQMTUIZTZJXUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- MGQYHUDOWOGSQI-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[[bis[(1-tert-butyltriazol-4-yl)methyl]amino]methyl]triazol-1-yl]acetic acid Chemical compound N1=NN(C(C)(C)C)C=C1CN(CC=1N=NN(C=1)C(C)(C)C)CC1=CN(CC(O)=O)N=N1 MGQYHUDOWOGSQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropyl methacrylate Chemical compound CC(O)COC(=O)C(C)=C VHSHLMUCYSAUQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N Silver ion Chemical compound [Ag+] FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 239000007877 V-601 Substances 0.000 description 2
- 125000002355 alkine group Chemical group 0.000 description 2
- HAMNKKUPIHEESI-UHFFFAOYSA-N aminoguanidine Chemical compound NNC(N)=N HAMNKKUPIHEESI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000010461 azide-alkyne cycloaddition reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 2
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 125000000311 mannosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N methacrylamide Chemical compound CC(=C)C(N)=O FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BUTPBERGMJVRBM-UHFFFAOYSA-N methanol;methylsulfinylmethane Chemical compound OC.CS(C)=O BUTPBERGMJVRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 2
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 2
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 2
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- SYOANZBNGDEJFH-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydro-1h-triazole Chemical compound C1NNN=C1 SYOANZBNGDEJFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YTVQIZRDLKWECQ-UHFFFAOYSA-N 2-benzoylcyclohexan-1-one Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)C1CCCCC1=O YTVQIZRDLKWECQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N Tetraethyl orthosilicate Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)OCC BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000392 Zymosan Polymers 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 150000001615 biotins Chemical class 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000000982 direct dye Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004896 high resolution mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 238000010859 live-cell imaging Methods 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 150000002703 mannose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002082 metal nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- VHRYZQNGTZXDNX-UHFFFAOYSA-N methacryloyl chloride Chemical compound CC(=C)C(Cl)=O VHRYZQNGTZXDNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 208000017497 prostate disease Diseases 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 1
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000004416 surface enhanced Raman spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- YUYCVXFAYWRXLS-UHFFFAOYSA-N trimethoxysilane Chemical class CO[SiH](OC)OC YUYCVXFAYWRXLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002371 ultraviolet--visible spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
- G01N33/587—Nanoparticles
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y15/00—Nanotechnology for interacting, sensing or actuating, e.g. quantum dots as markers in protein assays or molecular motors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C17/00—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating
- C03C17/06—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating with metals
- C03C17/10—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating with metals by deposition from the liquid phase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
- C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
- C03C17/00—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating
- C03C17/22—Surface treatment of glass, not in the form of fibres or filaments, by coating with other inorganic material
- C03C17/23—Oxides
- C03C17/25—Oxides by deposition from the liquid phase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F220/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride ester, amide, imide or nitrile thereof
- C08F220/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms; Derivatives thereof
- C08F220/52—Amides or imides
- C08F220/54—Amides, e.g. N,N-dimethylacrylamide or N-isopropylacrylamide
- C08F220/58—Amides, e.g. N,N-dimethylacrylamide or N-isopropylacrylamide containing oxygen in addition to the carbonamido oxygen, e.g. N-methylolacrylamide, N-(meth)acryloylmorpholine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/551—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being inorganic
- G01N33/553—Metal or metal coated
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Geochemistry & Mineralogy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Glanulating (AREA)
- Manufacturing Of Micro-Capsules (AREA)
- Processes Of Treating Macromolecular Substances (AREA)
Abstract
Povrchově modifikované částice obsahující jádro, vnitřní slupku a vnější slupku, kde jádro je tvořeno nekovovým materiálem, vnitřní slupka je tvořena vrstvou kovu a vnější slupka je tvořena biokompatibilním polymemím kartáčem. Jejich aplikace umožňuje v biologických vzorcích přímou optickou detekci biomolekul jako jsou nukleové kyseliny, proteiny, polysacharidy a glykoproteiny.
Description
Povrchově modifikované částice
Oblast techniky
Vynález se týká částic, umožňujících přímou optickou detekci v in vitro diagnostice závažných onemocnění.
Dosavadní stav techniky
Diagnostické metody jsou v současnosti základem pro úspěšnou léčbu prakticky všech onemocnění. Laboratorní vyšetření vzorku tělních tekutin či tkání je často prováděno metodami tzv. in vitro diagnostiky. Takto získané výsledky slouží mimo jiné k vyhledávání nemocí (screening, například diabetes, onemocnění prostaty, nádory tlustého střeva a konečníku), k určení či upřesnění diagnózy, k určení prognózy či k epidemiologickým studiím. Biologický znak, (bio)marker, muže být vyšetřován na úrovni metabolické, genomické (DNA i RNA) nebo proteinové. Mezi nejčastěji používané techniky v této oblasti patří imunohistochemie (IHC) a in situ hybridizační techniky (ISH).
Principem IHC je stanovení zvýšené exprese proteinu na úrovni tkáňové anebo buněčné. Technické detaily provedení se od sebe v určitých bodech liší, například rozdílné doby inkubace, druhy použitých protilátek, jejich ředění atd. Nej častěji se technika provádí na paratinizovaných tkáních, které se nejprve deparafmizují a rehydratují. Poté se blokují nespecifické vazby imunoglobulinu v blokačním roztoku inertní bílkoviny. Po promytí se vzorky inkubují s primární anti-protilátkou. Po promytí je nejčastěji aplikována sekundární protilátka, konjugovaná s vhodným detekčním systémem. Vizualizace probíhá například pomocí enzymu peroxidázy a diaminobenzidinu za vzniku hnědého nerozpustného barviva, které vizualizuje oblast tkáně s pozitivním signálem. Preparát se zalije pod krycí sklíčko a hodnotí ve světelném mikroskopu. Problémem IHC detekce bývá například pozadí endogenní enzymatické aktivity (např. peroxidázová aktivita v makrofázích) i nižší ostrost signálu (difúze substrátu při enzymatické reakci) ve srovnání například s fluorescenčním značením.
Techniky ISH mají vysokou specifitu, reprodukovatelnost a rychlost stanovení (do 24 hodin). Pomocí nich lze stanovit počet jednotlivých onkogenů v buněčném jádře. Preparáty jsou přeneseny do vodného pufiru a následně denaturovány ve formamidovém pufiru, promývány ethanolem a inkubovány se značenou detekční sondou. Tyto metody ve velké většině využívají interakce synteticky připraveného úseku DNA (DNA detekční sonda), který nese chemickou nebo fluorescenční značku, která umožňuje přímou vizualizaci daného úseku DNA. V případě fluorescenčního značení (fluorescenční in situ hybridizace, FISH) se pozitivita signálu v buňkách přímo odečítá pod fluorescenčním mikroskopem. V případě detekčního systému enzymatického (chromogenic in situ hybridization, CISH) se DNA/RNA próba značí vhodně modifikovaným nukleosidem (např. biotin, skupina vhodná pro bioorthogonální kovalentní konjugaci atd.) a detekce se provádí nej častěji enzymatickým systémem v obdobném provedení i s podobnými nevýhodami jako v případě IHC. Signál lze odečíst pomocí mikroskopie ve světlém poli (tzv. „brightfield mikroskopie“)· Vzhledem k dostupnosti a nízké ceně světelných mikroskopů je technika CISH široce využívána v klinické diagnostice. Výhoda dostupnosti je ovšem vykoupena neostrostí signálu danou limitacemi enzymatického detekčního systému, nižší citlivostí metody ve srovnání s FISH a náročnější přípravou vzorku způsobenou inkubací s enzymy generujícími barevné látky.
V současné době existuje celá řada komerčně využívaných modifikovaných sond pro FISH značených různými fluorescenčními značkami, ale neexistuje žádná značka umožňující přímou detekci pomocí extinkce viditelného světla.
- 1 CZ 309422 B6
Intenzitu extinkce, a tedy i barevný kontrast ve viditelné oblasti poskytnutý danou sloučeninou, lze kvantifikovat pomocí extinkčního koeficientu εχ, kde λ označuje vlnovou délku světla, při které extinkci měříme. Barevnost organických i anorganických molekul je nej častěji způsobena absorpcí záření ve viditelné oblasti, spojenou s excitací vazebných elektronů. Běžná barviva vykazují nízké hodnoty εχ, které se pohybují v rozmezí přibližně 1.104 až 2.105 M1 cm1. Při takto nízkých hodnotách εχ a reálných hybridizačních a amplifikačních stechiometriích použitelných v IHC nebo ISH není možné pozorovat lokalizovaný kontrast pomocí mikroskopie ve světlém poli. Pro možnost přímého značení barvivém v IHC nebo ISH by muselo barvivo mít εχ minimálně o 5 až 6 řádu vyšší.
V nanosystémech tvořených vzácnými kovy (Au, Ag, Pt), je mechanizmus extinkce záření odlišný. Při interakci světelného záření s kovovou nanočásticí začnou volné fotony v mřížce kovu skupinově oscilovat se stejnou frekvencí, jako má působící světlo. Tento fenomén je známý jako lokalizovaná povrchová plazmonová rezonance, která se skládá ze dvou hlavních příspěvků: 1) rozptylu, kdy je dopadající světlo vyzářeno se stejnou energií, avšak všesměmě, 2) absorpce fotonů vytvářející charakteristický absorpční pás v UV-vis spektru, jejichž energie je v tomto případě přeměněna na teplo. Tyto dva příspěvky lze shrnout jako extinkci, kterou pozorujeme jako celkový optický projev kovových plazmonickýeh nanosystémů.
Z pohledu detekce ISH je významný fakt, že molámí extinkční koeficienty pro základní typy plazmonickýeh nanočástie jsou o 4 až 5 řádů vyšší než pro molekulární barviva (Jain P. K. et al., J. Phys. Chem. B 2006, 110, 7238-7248). Pro přímé použití však zlaté ani stříbrné nanočástice stále nemají dostatečné extinkční vlastnosti. Pro IHC/ISH tak byla v poslední době vyvinuta tzv. metalografická detekce založená na peroxidáze z křenu, která je konjugována k sekundární protilátce (Powell R. D. ct al., Hum. Pathol. 2007, 38. 1145 1159). V přítomnosti Ag+ dochází k jeho redukci na nanočástice kovového stříbra, které má intenzivnější absorpci než molekulární barviva a vyšší stabilitu zbarvení. Další metalografickou technikou je zesílení extinkce velmi malých zlatých nanočástie (< 2 nm), které jsou navázány pomocí konjugátů s protilátkami na cílovou strukturu (Tubbs R. et al., J. Mol. Histol. 2004, 35, 589-594). Zesílení se uskutečňuje pomocí sekundární redukce zlata nebo stříbra indukované preferenčně na povrchu částic. Nevýhodami těchto metalografických metod jsou, podobně jako u molekulárních barviv, dlouhé inkubační časy potřebné k sekvenčnímu navázání protilátek, časově náročná in situ redukce kovu, a vysoké pozadí způsobené nespecifickou redukcí na biomolekulách.
Kovové nanoskořápky jsou částice s nekovovým jádrem obaleným kovovou vrstvou. Představují jedny z nejvíce světlo absorbujících a zároveň rozptylujících nanostruktur známých v přírodě. Jejich molámí extinkční koeficient εχ dosahuje v maximu extinkce hodnot kolem 1012 M1 cm1 a ve srovnání s molekulárními barvivý leží přibližně o 7 až 8 řádů výše. Nanoskořápky byly dosud použity např. pro detekci a kvantifikaci analytů pomocí povrchově zesíleného Ramanova rozptylu, např. glukózy nebo proteinů (US 6699724 Bl). Dále byly použity např. pro uvolňování molekul ze svého povrchu způsobeného zahřátím nanoskořápek absorpcí světla v blízké infračervené oblasti (US 2020164072 Al). Pro podobné aplikace postačuje zakotvení nanoskořápek v zesíťovaném polymemím gelu nebo stabilizace povrchu nanoskořápek reakcí kovového povrchu s thiolovaným poly(ethylenglykolem), který se naváže na povrch pomocí vazeb kov-síra. Tento přístup navázání polymeru vede ke konformaci polymemího řetězce typu houba („mushroom conformation“), která poskytuje pouze základní koloidní ochranu.
Je známé, že pro vysoce selektivní aplikace nanočástie v biologickém prostředí je potřeba povrch nanočástie pokrýt tzv. biokompatibilním polymemím kartáčem („polymer brush“) (C. Cruje and D. B. Chithrani, Rev. Nanosci. Nanotechnol. 2014, 3, 20-30). Tento typ povrchu vykazuje uspořádání s vysokou plošnou hustotou polymeru a zajišťuje účinnou ochranu proti opsonizaci, nespecifické adsorpci biomolekul na povrch částic i prevenci adsorpce nanočástie na biologické struktury jako jsou, např. buněčná membrána a buněčné organely. U kovových nanoskořápek se však dosud nepodařilo takového typu pokrytí povrchu dosáhnout.
-2CZ 309422 B6
Podstata vynálezu
Předmětný vynález řeší problém přímé detekce v in vitro diagnostice pomocí extinkce světla za použití částic s nekovovým jádrem obaleným kovovou vrstvou, známých jako nanoskořápky (nanoshells), které jsou však zcela specificky povrchově modifikované.
Z pohledu IHC a ISH detekčních systémů dosahují extinkční vlastnosti nanoskořápek do oblasti, kde může být lokalizovaná extinkce způsobená pouhou vazbou nanočástic na cílovou buněčnou strukturu přímo pozorovatelná pomocí mikroskopie ve světlém poli (tedy za výhodných instrumentaěních podmínek podobných CISH). Oproti CISH ovšem není nutné použít enzymatický detekční systém, mezi jehož hlavní nevýhody patří neostrost signálu, nižší citlivost, nízká teplotní stabilita a nutnost dlouhodobého skladování v chladu, častá endogenní aktivita ve vyšetřovaných tkáních, která vede ke zvyšování pozadí a/nebo snižování specificky detekce.
Předmětný vynález předkládá částice s polymemí povrchovou modifikací, která nově umožňuje jejich koloidní stabilizaci v roztocích s iontovou silou (pufrech, médiích, krvi, biologických kapalinách) a především potlačení nespecifických interakcí s biomolekulami a biologickými rozhraními. Dále je popsán způsob jejich výroby a způsob připojení molekul, potřebných pro selektivní rozpoznání a následnou vizualizaci detekovaných biomarkerů přímo v tkáních a buňkách.
Předmětem vynálezu jsou povrchově modifikované částice obsahující jádro, vnitřní slupku a vnější slupku, kde jádro je tvořeno hydratovaným oxidem křemičitým a má průměr di v rozmezí 20 nm až 1 pm, vnitřní slupka je tvořena zlatém o tloušťce d2 v rozmezí 2 až 60 nm, vnější slupka o tloušťce d3 v rozmezí 2 až 200 nm je tvořena vrstvou polymeru obecného vzorce II
(Π), kde x = 2až50, y = 5až 5000, z = 0 až 2000, z/y = 0 až 0,4;
R jsou vzájemně stejné nebo různé, přičemž každé Rje zvoleno ze skupiny, zahrnující -CH;-C=CH a -(CHíjn-triazolyl-R1, kde R1 je vybrán ze skupiny -(PEG)p-mannosa (PEG = ethylenglykolový můstek), -(PEG)p-biotin, -(PEG)p-biotin-streptavidin, -(PEG)p-biotinavidin, (PEG)p-biotin-neutravidin, kde p = 1 až 20 a ve výhodném provedení p = 4 až 12; přičemž skupina PEG je navázána na triazolyl prostřednictvím koncové -CH2- skupiny, přičemž streptavidin, avidin a neutravidin jsou navázány nekovalentně pomocí komplexu s biotinem;
který je k povrchu vnitřní slupky uchycen pomocí atomů síry, vytvářejících vazbu Au-S s atomy kovu, jak znázorňují čárkované vazby označující atomy síry podílející se na vazbě Au-S.
-3 CZ 309422 B6
Materiálem jádra hydrátovaný oxid křemičitý. Hydrátovaný oxid křemičitý může být připravený pomocí Stoberova procesu, např. hydrolýzou tetraethoxy sílánu.
Vnitřní slupka má výhodně tloušťku d2 v rozmezí 3 až 25 nm, výhodněji 5 až 20 nm.
Vnější slupka má s výhodou tloušťku d3 v rozmezí 5 až 100 nm, výhodněji 10 až 60 nm.
Polymer II tvořící vnější slupku slouží k potlačení nespecifických interakcí modifikovaných částic v biologickém prostředí (tedy jako tzv. polymerní kartáč, angl. polymer brush) a k připojení molekul umožňujících selektivní rozpoznání a následnou vizualizaci detekovaných biomarkerů přímo v tkáních, buňkách a biologických vzorcích.
V částicích podle předkládaného vynálezu jsou obvykle jádro, vnitřní slupka a vnější slupka uspořádány v podstatě koncentricky.
Předmětem vynálezu je dále způsob přípravy povrchově modifikovaných částic, při němž se částice obsahující jádro a vnitřní slupku podrobí reakci se sloučeninou III
(III), kde x má výše uvedený význam, a která je případně ve směsi s kyselinou lipoovou v molámím poměru kyselina lipoová:III = 2:1 až 6:1, s výhodou 4:1, a následnou radikálovou polymerací monomeru IV
(IV), který případně obsahuje příměs 0 až 40 molámích % monomeru V
V—/ 'W' (V), kde R má výše uvedený význam, připraví polymer II
-4CZ 309422 B6
(Π), kde R, x, y, z mají výše uvedený význam, připojený na vnitřní slupku částic, čímž se vytvoří vnější slupka.
Předmětem vynálezu je také způsob přípravy povrchově modifikovaných částic, při němž se reakcí sloučeniny IIA
(IIA) s polymerem IIB
(IIB) připraví polymer IIC
-5CZ 309422 B6
OH (IIC), kde R, x, y, z mají výše uvedený význam, který se ve vodném prostředí, případně ve směsi s kyselinou lipoovou v molámím poměru kyselina lipoová:III = 2:1 až 6:1, s výhodou 4:1, podrobí reakci s částicemi obsahujícími jádro a vnitřní slupku, definovanými v nároku 1, za vzniku částic s navázaným polymerem II tvořícím vnější slupku.
Ve výhodném provedení je x = 3.
Částice obsahující jádro a slupku lze připravit s výhodou následujícím postupem:
- v prvním kroku se částice jádra uvedou do reakce s deriváty trialkoxysilanů vzorce R2Si(R3)3, kde R2 je vybrán z C2-C4 alkylu terminálně substituovaného merkapto nebo aminoskupinou, a R3 jsou vybrány ze skupiny zahrnující -OCH3 a -OCH2CH3,
- ve druhém kroku se na takto modifikované částice jádra navážou zlaté nanoěástice o průměru menším než 5 nm,
- ve třetím kroku se vzniklé částice, tvořené jádrem s navázanými zlatými nanoěásticemi, nechají reagovat s [AuCL ] v přítomnosti redukčního činidla, čímž se vytvoří vnitřní slupka.
S výhodou se v prvním kroku deriváty trialkoxysilanů zvolí ze skupiny, zahrnující (3merkaptopropyljtrimethoxysilan, (3 -merkaptopropyljtriethoxysilan, (3 -aminopropyl)trimethoxysilan, a (3-aminopropyl)triethoxysilan.
Nejvýhodněji se v prvním kroku použije (3-merkaptopropyl)trimethoxysilan.
S výhodou se ve třetím kroku redukční činidlo zvolí ze skupiny, zahrnující oxid uhelnatý, hydroxy lamin, hydrazin, methylhydrazin, kyselinu askorbovou, formaldehyd a acetaldehyd.
Pokud látky II až V obsahují chirální centra, pak vzorce II až V zahrnují čisté enantiomery i směsi enantiomerů včetně racemátu.
Přítomnost reaktivních skupin azidu, alkynu, aminu nebo karboxylové kyseliny v substituentu R polymeru II umožňuje snadné připojení dalších molekul a/nebo biomolekul k povrchově modifikovaným částicím, které pak mohou být použity k selektivnímu rozpoznání a následné vizualizaci detekovaných biomarkerů přímo v tkáních a buňkách.
Ve výhodném provedení se derivatizace, resp. tvorba substituentu R1 provádí tak, že se reaktivní skupina azidu, alkynu, aminu nebo karboxylové kyseliny v substituentu R v polymeru II ponechá
-6CZ 309422 B6 reagovat se svým reakčním komplementem, tj. např. azid s alkynem za vzniku triazolu, alkyn s azidem za vzniku triazolu, amin s karboxylovou kyselinou za vzniku amidu, karboxylová kyselina a aminem za vzniku amidu.
Konkrétně lze povrchově modifikované částice derivatizovat pro konjugaci k rozpoznávacím strukturám systémem biotin-streptavidin, biotin-avidin nebo biotin-neutravidin.
Tato derivatizace se provádí tak, že reaktivní skupina alkynu v polymeru II se ponechá reagovat s azidovaným derivátem biotinu, např. biotin-PEGn-azidem za katalýzy měďnými ionty. Vznikají tak povrchově modifikované částice nesoucí biotin, který se může vázat na cílové místo obsahující avidin, streptavidin nebo neutravidin. Částice modifikované biotinem mohou být dále derivatizovány nadbytkem avidinu, streptavidinu nebo neutravidinu, čímž vznikne povrch se schopností vázat biotin.
V dalším výhodném provedení se reaktivní skupina alkynu v polymeru II ponechá reagovat s azidovaným derivátem mannosy, např. mannosa-PEGr-azidem za katalýzy měďnými ionty. Vznikají tak povrchově modifikované částice nesoucí mannosu, která se může vázat na cílové místo obsahující receptor rozpoznávající mannosu, např. CD206 exprimovaný ve vysoké míře na membráně makrofágů. Po inkubaci takto modifikovaných nanoěástic s makrofágy je možné analyzovat fagocytámí aktivitu makrofágů pomocí průtokové cytometrie pouze pomocí zvýšeného rozptylu světla způsobeného modifikovanými nanoěásticemi, bez použití fluorescenčních značek.
Variací geometrických parametrů povrchově modifikovaných částic (průměr jádra, tloušťka vnitřní slupky, celkový průměr částice) lze připravit různé částice s odlišnými optickými vlastnostmi (molámí extinkění koeficient, poloha plazmonického extinkěního pásu, schopnost vytvářet kontrast při mikroskopii v procházejícím světle). Výchozí částice jádra lze připravit odborníkovi známými reakcemi a postupy, a některé silikagelové a polymerní částice jsou i komerčně dostupné.
Povrchově modifikované částice jsou využitelné pro řadu aplikací v in vitro diagnostice. Tyto aplikace zahrnují detekci biomolekul v biologických vzorcích na základě interakce modifikovaných částic s těmito biomolekulami. Biomolekula může být vybrána ze skupiny zahrnující nukleové kyseliny, proteiny, polysacharidy a glykoproteiny. Biologickým vzorkem se rozumí např. krev, krevní plazma, krevní sérum, moč, sperma, slzy, sliny, hlen, stolice, pot, výtěr, lymfa, mozkomíšní mok, buněčná suspenze, tkáň.
Ve výhodném provedení lze povrchově modifikované částice použít i v systému detekce integrované formy viru HPV16 v genomu lidských buněk karcinomu děložního čípku. V tomto provedení je genová sonda značená digoxigeninem hybridizována s DNA buněk a následně modifikována biotinylovanou protilátkou proti králičím imunoglobulinům. Přítomnost virové DNA je následně vizualizována pomocí povrchově modifikovaných nanoěástic derivatizovaných neutravidinem a projevuje se jako tmavé kontrastní skvrny na světlém pozadí. Takto provedená detekce umožňuje rychlou, přesnou a velmi ostrou identifikaci přítomnosti HPV16 v nádorových buňkách.
Pro vizualizaci proteinů je možné derivatizovat povrchově modifikované nanoěástice pomocí ligandů, které se na tyto proteiny váží.
Předmětný vynález tedy předkládá částice, kde jádro je tvořeno hydratovaným oxidem křemičitým, obaleným zlatou vrstvou a povrchem, který je modifikován biokompatibilním polymemím kartáčem. Toto řešení poskytuje výhody v oblasti zobrazování cílových struktur v tkáních v běžném světelném mikroskopu, konkrétně přímé a snadné provedení detekce, ostřejší, méně difiizní signál a chemickou i biologickou dlouhodobou stabilitu nanoěástic se širokými možnostmi uplatnění v diagnostice a bioanalýze. Předmětný vynález dále poskytuje výhody v
-7 CZ 309422 B6 oblasti průtokové cytometric a hemocytometrie, kdy extrémní rozptyl způsobený částicemi po jejich příjmu do buňky umožňuje přímou identifikaci i kvantifikaci takto označených buněk pouze pomocí rozptylu světla, bez nutnosti použít fluorescenční detekci. Optické vlastnosti částic - polohu a šířku plazmonického absorpčního pásu - lze pro jednotlivá použití ladit velikostí a geometrií částic, složením a velikostí nekovového jádra a tloušťkou skořápky.
Objasnění výkresů
Obrázek 1: Extinkční spektra modifikovaných částic A) A6, A7 a A8, B) B6 a B7, normalizovaná na absorpční maximum. Jednotlivé modifikace povrchu nemají vliv na polohu spektrálních maxim série A i série B.
Obrázek 2: Dynamický rozptyl světla pro modifikované částice A) A6, A7 a A8, B) B5, B6 a B7 měřený ve vodě, pufru PBS (PBS) a lOx koncentrovaném pufru PBS (lOx PBS). Pro obě série částic A a B je patrná vysoká koloidní stabilita charakterizovaná stabilní polohou distribučního histogramu, která je nezávislá na prostředí. Vystavení modifikovaných částic prostředí lOx PBS představuje robustní zkoušku, která odpovídá iontové síle přibližně řádově vyšší, než je přítomna ve fyziologickém prostředí.
Obrázek 3: Mikrografy modifikovaných částic AI, A3, A4, Bl, B3 a B4 z transmisního elektronového mikroskopu. Pro každou ze série A a B je demonstrován postupný růst částice: AI a B1 jsou výchozí silikagelové částice, A3 a B3 jsou silikagelové částice s navázanými zlatými nanočásticemi, A4 a B4 jsou kompaktní modifikované částice. Velikosti měřítek: pro částice AI, A3, A4 je měřítko vždy 100 nm. Pro částici B1 200 nm, B3 100 nm a pro B4 200 nm.
Obrázek 4: Detekce lidského papilomaviru (HPV16) v buňkách cervikálního karcinomu (SiHa) pomocí in situ hybridizace virové DNA s detekcí pomocí modifikovaných částic A8. Specifický signál HPV16 je vizualizován pomocí mikroskopie ve světlém poli jako tmavé, vysoce kontrastní skvrny na světlém pozadí lokalizované v oblasti buněčného jádra. V praktickém provedení jsou použity specifické barvy: jádro je podbarveno pomocí jaderné červeně (růžová barva jádra), vizualizace pomocí A8 poskytuje tmavě modrou barvu. Zvětšení 20x.
Obrázek 5: Analýza fagocytózy myšími makrofágy J774A.1 pomocí průtokové cytometric bez fluorescenčního značení. (A) Distribuce buněk po 3 hodinách v kontrolní skupině bez modifikovaných částic (Kontrola), s modifikovanými částicemi (B6) a s modifikovanými částicemi derivatizovanými mannosou (B7). Proces fagocytózy byl monitorován pomocí „dot plotů“ vizualizujících velikost (přímý rozptyl světla, FSC-A) a granularitu (boční rozptyl světla, SSC-A) jednotlivých buněk. (B) Dynamika distribuce buněk v jednotlivých kvadrantech. Specifický příjem modifikovaných částic makrofágy se projevuje výrazným nárůstem signálu v kvadrantu Ql, který narůstá i s časem.
Obrázek 6: Mikroskopie ve světelném poli živých makrofágů J774A.1 pro časy 0 až 18 h. Byly testovány tyto varianty: médium bez částic (kontrola), médium obsahující kontrolní modifikované částice B6 nesoucí pouze polymer (negativní kontrola) a modifikované částice B7 derivatizované mannosou (obě částice ve finální koncentraci 7,3 pmol.l1). Fagocytóza byla zřetelně pozorovatelná pouze pro specifickou variantu obsahující B7 s navázanou mannosou jako výrazná změna optického kontrastu v oblastech buněk.
Obrázek 7 schematicky ukazuje strukturu povrchově modifikované částice, která obsahuje jádro 1, vnitřní slupku 2 a vnější slupku 3, kde jádro 1 je tvořeno hydratováným oxidem křemičitým a má průměr di, vnitřní slupka 2 je tvořena vrstvou zlata M o tloušťce d2, a vnější slupka 3 o tloušťce d3 je tvořena vrstvou polymeru.
-8CZ 309422 B6
Seznam zkratek
| DCM DIPEA UPLC-MS TLC MeOH DMSO HRMS UPLC QDa ACN PEG | dichlormethan W-diisopropylcthylamin ultra účinná kapalinová chromatografie-hmotnostní spektrometrie chromatografie na tenké vrstvě methanol dimethylsulfoxid hmotnostní spektrometrie s vysokým rozlišením ultra účinná kapalinová chromatografie kvadrupólový detektor v hmotnostní spektrometrii acetonitril polyethylenglykol |
Příklady uskutečnění vynálezu
Příklad 1
Syntéza ligandu pro polymeraci
500 mg B0C-PEG4-NH2 (1,0 ekv.) bylo rozpuštěno do 50 ml DCM a 446 μΐ (1,5 ekv.) DIPEA bylo přidáno do reakční směsi, která byla následně zchlazena v ledové lázni. 167 μΐ (1,0 ekv.) methakryloylchloridu bylo přidáno po kapkách po dobu zhruba 5 minut. Reakce byla ponechána, aby se postupně vytemperovala na pokojovou teplotu a byla míchána přes noc. Ráno byla reakční směs vytřepána 2x 10% (vždy objemová procenta, není-li uvedeno jinak) KHSO4, 2x nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a Ix solankou, vždy 30 ml. Organická fáze byla poté vysušena bezvodým síranem hořečnatým a odpařena na odparce. Podle UPLC-MS analýzy surového produktu měl odparek čistotu více než 95 % (Rt= 3,7 min., identifikováno m/z: 361,4 [M+H]+ 261,3 [M -Boc, +H]+. TLC analýza (čistý EtOAc, Rf = 0,3) potvrdila po obarvení roztokem 3% KMnO4 jedinou majoritní přítomnou látku. Produkt VI byl použit v následujícím kroku bez jakékoliv další purifikace.
(VI)
Surový odpařený produkt VI byl rozpuštěn v 2 ml kyseliny trifluoroctové (TFA) a roztok byl 5 min. sonikován v lázni, aby se podpořilo odchránění chránící skupiny Boc. Poté byla TFA odpařena v proudu dusíku. Po úplném odstranění TFA byl vzniklý produkt VII použit v následujícím kroku bez další purifikace.
(VII)
639 mg (1,0 ekv.) látky VII bylo rozpuštěno v 50 ml DCM a následně bylo přidáno 1,06 ml (3,5 ekv.) DIPEA. pH reakční směsi bylo zkontrolováno, aby bylo zásadité (pokud nebyla TFA
-9CZ 309422 B6 odstraněna dostatečně, je potřeba více DIPEA). 528 mg (1,0 ekv) N-hydroxysuccinimidylesteru kyseliny lipoové bylo přidáno najednou a reakce byla míchána přes noc. Chromatografie na preparativních TLC deskách (Analtech P02015 Silica Gel GF UNIPLATE, 2000 pm, 200 mm šířka, 200 mm délka, použity 4 desky pro separaci) byla provedena jako jediná čisticí metoda (5 % MeOH v DCM, Rf= 0,5, UV aktivní). Skvrna obsahující produkt byla vyškrábána a produkt extrahován na fritě čistým MeOH. Látka byla dále používána v podobě roztoku v MeOH, protože odpaření a zakoncentrování roztoku vedlo k samovolné polymerizaci. Pouze malá část roztoku byla odpařena pro určení koncentrace. Bylo izolováno 390 mg produktu VIII v roztoku MeOH (finální izolovaný výtěžek po 3 krocích byl 51%). Tento roztok byl stabilní a byl skladován po dobu mnoha měsíců v mrazáku při -80 °C. Analýza UPLC-MS detekovala pouze jeden pík (Rt = 3,7 min, čistota 97 %).
(VIII)
Pro analýzu NMR byl roztok postupně odpařen do DMSO. Ή NMR (400 MHz, DMSO-Je) δ 7,92 (NH, t. J= 5,7 Hz, 1H), 7,84 (NH, t, J= 5,6 Hz, 1H), 5,65 (CH2=, dq, J= 1,9, 1,0 Hz, 1H), 5,32 (CH2=, h, J= 1,5 Hz, 1H), 4,14 (q, J = 5,2 Hz, 3H), 3,66 až 3,56 (m, 1H), 3,54 až 3,47 (m, 4H), 3,46 až 3,39 (m, 1H) 3,26 (q, J= 6,1 Hz, 2H), 3,21 až 3,15 (m, 6H), 3,14 až 3,06 (m, 2H), 2,41 (dtd, J = 12,9, 6,5, 5,5 Hz, 1H), 2,07 (t, J= 7,3 Hz, 2H), 1,93 až 1,79 (m, 4H), 1,66 (dtd, J = 13,6, 7,9, 7,4, 5,5 Hz, 1H), 1,58 až 1,42 (m, 3H), 1,40 až 1,28 (m, 2H). 13C NMR (101 MHz, DMSO-ó/6) δ 172,63, 168,06, 140,30, 119,57, 70,18, 70,03, 69,60, 69,26, 56,62, 38,92, 38,55, 35,57, 34,56, 28,74, 25,48, 19,06. HRMS vypočtené pro C20H37O5N2S2: m/z [M+H]+: 449,21384; nalezeno 449,21378.
Analýza UPLC-MS: data byly získána na systému Waters acquity UPLC systém napojeným na qDA detektor. Jako kolona byla použita 2,1 x 100 mm C18 1,7 pm Acquity Waters. 7-minutový gradient byl nastaven následovně: 2% ACN po dobu 1 minuty, poté gradient do 100% ACN v následujících 5 minutách, následovaný 1 minutou čistým ACN.
Příklad 2
Příprava modifikovaných částic
a) Příprava silikagelových částic
Silikagelové částice byly připraveny ve dvou krocích. Nejprve byla připravena zárodečná zrna částic. Bylo rozpuštěno 4,55 mg argininu v 3,45 ml vody. Roztok byl převrstven směsí cyklohexanu (225 pl) a tetraethoxyorthosilikátu (275 pl). Směs byla zahřáta na 60 °C a ponechána míchat 20 hodin. Poté byla spodní fáze obsahující silikagelová zárodečná zrna oddělena.
Pro další růst silikagelových částic různých velikostí bylo smícháno 39,5 ml ethanolu, 11 ml H2O a 466 pl připraveného roztoku silikagelových zárodečných zrn. Po důkladném promíchání byl přidán za míchání tetraethoxyorthosilikát a 0,9 ml 24,5% roztoku NH40H. Množství tetraethoxyorthosilikátu bylo měněno podle požadované velikosti částic. Například pro přípravu částic Al o průměru 58 nm bylo přidáno 180 pl; pro přípravu větších částic B1 o průměru 95 nm bylo přidáno 1000 pl. Reakce probíhala přes noc při teplotě místnosti. Částice byly promyty ethanolem.
-10 CZ 309422 B6
b) Příprava thiolovaných silikagelových částic
Částice AI nebo B1 (10 mg) připravené v předchozím kroku byly smíchány s 11,5 ml vody, 37,5 ml ethanolu a roztok byl 10 minut probubláván argonem. Za stálého míchání byly přidány roztoky (3-merkaptopropyl)trimethoxysilanu a l,2-bis(triethoxysilyl)ethanu v množství vhodném pro dané velikosti silikagelových částic (pro vznik A2: 14,5 μΐ k částicím AI; pro vznik B2: 8 μΐ k částicím Bl). Za stálého míchání bylo přidáno 0,9 ml 24,5 % roztoku NH40H a reakční směs byla ponechána reagovat 4 hodiny při teplotě místnosti v inertní atmosféře argonu. Připravené thiolované částice byly promyty ethanolem.
c) Příprava silikagelových částic s navázanými zlatými nanočásticemi
Nejprve byly připraveny zlaté nanočástice o průměru <5 nm přidáním 2 ml 1% roztoku kyseliny terachlorozlatité k roztoku chloridu tetrakis(hydroxymethyl)fosfonia (1,34 pmol.l1 v 50 ml 10 mmol.r1 roztoku NaOH). Částice modifikované thiolem (A2, B2) byly smíchány s tímto roztokem. Vzniklé částice s navázanými zlatými nanočástice (A3, B3) byly promyty vodou.
d) Růst vnitřní slupky
Částice A3 nebo B3 byly smíchány se zlatícím roztokem (250 mg K2CO3, 174 mg HAuCU, 1 litr vody, pH 9,5) a probublány oxidem uhelnatým. Poměr množství částic a zlatícího roztoku závisel na velikosti částice a požadované tloušťce zlaté vrstvy. Pro 0,5 mg částic A3 bylo použito 72 ml roztoku za vzniku částic A4, pro 0,5 mg částic B3 bylo použito 40 ml zlatícího roztoku za vzniku B4. Částice byly odděleny sedimentací.
Příklad 3
Příprava částic s vrstvou hydrofilního polymeru
K pozlaceným částicím A4 rozředěným do 700 ml vody byla přidána směs ligandu VIII a kyseliny lipoové (14,4 ml 10 mmol.l1 lipoové kyseliny a 3,6 ml 10 mmol.l1 ligandu VIII), pH bylo upraveno na 9,5. Výměna ligandu probíhala 3 dny. Vzniklé částice A5 byly zakoncentrovány sedimentací.
K částicím B4 rozředěným do 500 ml byla přidána směs ligandu VIII a kyseliny lipoové (9,64 ml 10 mmol. I1 lipoové kyseliny a 2,41 ml 10 mmol. I1 ligandu), pH bylo upraveno na 9,5. Výměna ligandu probíhala 3 dny. Vzniklé částice B5 byly zakoncentrovány sedimentací.
Koncentrovaný roztok částic A5 (45 ml odpovídající 5 mg silikagelových částic) byl smíchán za stálého míchání s roztokem HPMA (9,72 g v 84 ml vody, pH 11) a probublán argonem. K roztoku byla přidána směs monomeru a iniciátoru v methanolu pod argonem [486 μΐ alkynového monomeru 7V-(prop-2-yn-l-yl)methakrylamidu, 466 μΐ dimethyl 2,2'-azobis(2-methylpropionátu) (V-601) v 14,6 ml methanolu]. Směs byla zahřívána na 60 °C po dobu 48 hodin. Vzniklé částice A6 byly promyty methanolem a poté PBS s 0,1 % hmotn. detergentem Tween.
Koncentrovaný roztok částic B5 (30 ml odpovídající 6,75 mg silikagelových částic) byl smíchán za stálého míchání s roztokem HPMA (5 g v 53,75 ml vody, pH 11) a probublán argonem. K roztoku byla v inertní atmosféře argonu přidána směs monomeru a iniciátoru v methanolu [250 μΐ A-(prop-2-yn-l-yl)methakrylamidu, 300 μΐ iniciátoru V-601 v 9,375 ml methanolu). Směs byla zahřívána na 60 °C po dobu 48 hodin. Vzniklé částice B6 byly promyty methanolem a poté PBS s 0,1% hmotn. detergentem Tween.
Příklad 4
Derivatizace modifikovaných částic pomocí biotinu a neutravidinu
-11 CZ 309422 B6
Částice A6 o hmotnosti odpovídající 180 pg silikagelového jádra byly modifikovány biotinem pomocí azid-alkynové cykloadice katalyzované měďnými ionty. Částice byly naředěny do 600 pl a smíchány s 1 pl 12,5 mmol.11 biotin-PEGn-azidu (BroadPharm, San Diego, USA, katalog, č. BP-21626). Ve finálním objemu 700 μΐ byly použity koncentrace činidel: 77 pmol.l1 CuSO4, 155 pmol.l1 2-(4-((bis((l-(terc-butyl)-lH-l,2,3-triazol-4-yl)methyl)amino)methyl)-lH-l,2,3triazol-l-yl)octová kyselina (ligand BTTAA), 3,86 mmol.l1 askorbát sodný a 3,86 mmol.l1 aminoguanidin. Reakce byla ponechána reagovat 2 hodiny a poté byly částice A7 7x promyty v PBS. Polovina částic A7 byla smíchána s 200 μΐ neutravidinu v PBS (1 mg/ml) a ponechána přes noc reagovat při 4 °C. Částice A8 byly promyty v PBS s 0,1% hmota, detergentem Tween.
Příklad 5
Derivatizace modifikovaných částic pomocí mannosy
Částice B6 byly modifikovány mannosou pomocí azid-alkynové cykloadice katalyzované měďnými ionty. Částice byly naředěny do 4,5 ml a smíchány s 377 μΐ 10 mmol.l1 mannosaPEG4-azidu (0,74 mmol.l1) (BroadPharm, San Diego, USA, katalog, č. BP-23832). Ve finálním objemu 5089 μΐ byl 0,15 mmol.l1 CuSOr, 0,3 mmol.l1 ligandu BTTAA, 1,48 mmol.l1 askorbát a 1,48 mmol.l1 aminoguanidin. Reakce byla ponechána reagovat 2 hodiny a poté byly mannosylované částice B7 7x promyty PBS s 0,1% hmota, detergentem Tween.
Příklad 6
Charakterizace modifikovaných částic
Bylo proměřeno extinkční spektrum připravených modifikovaných částic (obr. 1). V použité nízké pikomolámí koncentraci všechny částice vykazovaly intenzivní absorpční pásy v oblasti vhodné pro detekci signálu.
Byl změřen dynamický rozptyl světla připravených modifikovaných částic v koncentracích odpovídajících jednotkám pmol.l1 ve vodě, pufru PBS a lOx koncentrovaném pufru PBS, který vzhledem ke své vysoké iontové síle představuje velmi robustní test koloidní stability (obr. 2). Všechny modifikované částice prokázaly vysokou stabilitu i v prostředí lOx koncentrovaného pufru PBS, což svědčí o silné stabilizační funkci polymeru chránícího interakční rozhraní modifikovaných částic.
Struktura částic v jednotlivých krocích přípravy byla dokumentována pomocí transmisní elektronové mikroskopie (JEOU JEM-1011, napětí 80 kV) (obr. 3). Pozorované změny odpovídají mechanizmu růstu a dokumentují přítomnost očekávaných struktur, včetně vzniklých „nanoskořápek“.
Příklad 7
In situ hybridizace virové DNA v nádorových buňkách
Polymerem modifikované částice s vysokým optickým kontrastem v procházejícím světle, derivatizované neutravidinem (A8), byly použity pro detekci cílových sekvencí DNA v genomu nádorových buněk. V tomto případě šlo o nádorové buňky cervikálního karcinomu (SiHa), které se vyznačují přítomností 2 až 3 kopií integrované formy viru HPV16 na 1 jádro. Fixované buňky anebo přímo nádorová tkáň byly imobilizované na sklíčko, DNA byla denatarována a hybridizována genově specifickou DNA sondou značenou digoxigeninem. Přebytek sondy byl odmyt, buňky byly dále inkubovány s králičí protilátkou proti digoxigeninu a následně biotinylovanou protilátkou proti králičím imunoglobulinům. Buňky byly poté inkubovány s roztokem částic A8 derivatizovaných neutravidinem, který se váže na biotin. Nadbytek částic byl
-12 CZ 309422 B6 odmyt a pro lepší strukturální rozpoznání buněk byla jádra podbarvena neutrální červení. Specifický signál HPV16 byl vizualizován pomocí mikroskopie ve světlém poli jako tmavé, vysoce kontrastní skvrny na světlém pozadí lokalizované v oblasti buněčného jádra (obr. 4). Tento příklad demonstruje použití modifikovaných částic pro in vitro diagnostiku.
Příklad 8
Využití modifikovaných částic pro detekci fagocytámí aktivity
Měření fagocytámí aktivity profesionálně fagocytujících buněk je ukazatelem parametrů nespecifické buněčné imunity. Její vyšetření se rutinně klinicky provádí z krevních buněk pacienta pomocí fagocytózy fluorescenčně značených mannosylovaných částic (například latex, zymozan apod.), barvením mikroskopicky nebo na průtokovém cytometru. Fluorescenční průtoková cytometrie je ovšem nákladné a sofistikované zařízení, které není v každé hematologické laboratoři běžně dostupné. Vzhledem k extrémním rozptylovým vlastnostem modifikovaných částic je lze využít pro měření fagocytámí aktivity např. průtokovou cytometrií v nativních, fluorescenčně nebarvených buňkách, pomocí hemocytometrie, nebo pomocí mikroskopie ve světlém poli s automatizovanou analýzou obrazu. Jako modelové makrofágy byla použita myší buněčná linie J774A.1 (ATCC® TIB-67™) kultivovaná v Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium s 10% fetálním hovězím sérem a antibiotiky (lOOU/lOOpg penicillin/streptomycin).
Cytometrická detekce
Den před experimentem bylo vysazeno 6xl05 J774A. 1 buněk na 60 mm kultivační misku. Po 24 hodinách bylo přidáno čerstvé médium bez částic (kontrola), médium obsahující kontrolní modifikované částice B6 nesoucí pouze polymer (negativní kontrola) a modifikované částice B7 s navázanou mannosou (obě částice ve finální koncentraci 7,3 pmol.l1). Buňky byly sklizeny v časových intervalech 0, 1, 3 a 6 h od přidání média s částicemi nebo bez částic a následně byly bez fixace měřeny pomocí detekce rozptylu světla. Výsledky jsou shrnuté na obr. 5. Je patrné, že mannosylované částice B7 byly selektivně a intenzivně přijímány makrofágy, příjem byl časově podmíněný a že cytometrická metoda bez použití fluorescenčního značení byla pro detekci fagocytámí aktivity velmi citlivá.
Detekce pomocí mikroskopie ve světlém poli
Den před experimentem bylo vysazeno IxlO4 J774A.1 buněk na 96 jamkovou desku. Po 24 hodinách bylo přidáno čerstvé médium bez částic (kontrola), médium obsahující kontrolní modifikované částice B6 nesoucí pouze polymer (negativní kontrola) a modifikované částice B7 s navázanou mannosou (obě částice ve finální koncentraci 7,3 pmol.l1). Znázornění živých buněk (live cell imaging) v časových intervalech 0, 1, 3, 6, 12 a 18 h po přidání média s částicemi nebo bez nich byl proveden pomocí vysokokapacitní analýzy na mikroskopu discovery systém Cell Voyager CV7000 (Yokogawa, Japan) při 37 °C v 5 % CO2 v režimu světelného pole. Výsledky jsou shrnuté na obr. 6. Podobně jako v případě cytometrické detekce, mikroskopická metoda bez použití fluorescenčního značení byla pro detekci fagocytámí aktivity velmi citlivá. Mannosylované částice B7 byly selektivně a intenzivně přijímány makrofágy a příjem byl časově podmíněný.
Průmyslová využitelnost
Předmětný vynález řeší problém přímé detekce v in vitro diagnostice pomocí extinkce světla za použití povrchově modifikovaných částic s nekovovým jádrem obaleným kovovou vrstvou, na níž je zachycen biokompatibilní polymerní kartáč. Jejich aplikace umožňuje v biologických vzorcích přímou detekci biomolekul zahrnujících nukleové kyseliny, proteiny, póly sacharidy a
-13 CZ 309422 B6 glykoproteiny. Biologickým vzorkem se rozumí např. krev, krevní plazma, krevní sérum, moč, sperma, slzy, sliny, hlen, stolice, pot, výtěr, lyrnfa, mozkomíšní mok, buněčná suspenze či tkáňový vzorek.
Claims (8)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Povrchově modifikované částice vyznačující se tím, že obsahují jádro, vnitřní slupku a vnější slupku, kde jádro je tvořeno hydratovaným oxidem křemičitým a má průměr di v rozmezí 20 nm až 1 μτη, vnitřní slupka je tvořena zlatém o tloušťce d2 v rozmezí 2 až 60 nm, vnější slupka o tloušťce ds v rozmezí 2 až 200 nm je tvořena vrstvou polymeru obecného vzorce II(Π), kde x = 2 až 50, y = 5 až 5000, z = 0 až 2000, z/y = 0 až 0,4;Rjsou vzájemně stejné nebo různé, přičemž každé Rje zvoleno ze skupiny, zahrnující -CH2C=CH a -(CH2)n-triazolyl-R1, kde R1 je vybrán ze skupiny -(PEG)p-mannosa, kde PEG = ethylenglykolový můstek, -(PEG)p-biotin, -(PEG)p-biotin-streptavidin, -(PEG)p-biotin-avidin, (PEG)p-biotin-neutravidin, kde p = 1 až 20 a ve výhodném provedení p = 4 až 12: přičemž skupina PEG je navázána na triazolyl prostřednictvím koncové -CH2- skupiny, a přičemž streptavidin, avidin a neutravidin jsou navázány nekovalentně pomocí komplexu s biotinem;který je k povrchu vnitřní slupky uchycen pomocí atomů síry, vytvářejících vazbu Au-S s atomy kovu, jak znázorňují čárkované vazby označující atomy síry podílející se na vazbě Au-S.
- 2. Povrchově modifikované částice podle nároku 1, vyznačující se tím, že vnitřní slupka má tloušťku d2 v rozmezí 3 až 25 nm, výhodněji 5 až 20 nm; a/nebo vnější slupka má tloušťku d3 v rozmezí 5 až 100 nm, výhodněji 10 až 60 nm.
- 3. Způsob přípravy povrchově modifikovaných částic podle kteréhokoliv z nároků 1 a 2, vyznačující se tím, že částice obsahující jádro a vnitřní slupku, definované v nároku 1, se podrobí reakci se sloučeninou III(III), kde x má význam uvedený v nároku 1, a která je případné ve směsi s kyselinou lipoovou v molámím poměru kyselina lipoová:III = 2:1 až 6:1, s výhodou 4:1, a následné radikálové polymerací monomeru IV- 15 CZ 309422 B6který případně obsahuje příměs 0 až 40 % mol. monomeru V (V), kde R má význam uvedený v nároku 1, za přípravy polymeru II(Π), kde R, x, y, z mají význam uvedený v nároku 1, navázaného na vnitřní slupku, čímž se vytvoří vnější slupka.
- 4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že částice obsahující jádro a vnitřní slupku se připraví následujícím postupem:- v prvním kroku se částice jádra modifikují reakcí s deriváty trialkoxysilanů vzorce R2Si(R3)3, kde R2 je vybrán z CSaž Ců alkylu terminálně substituovaného merkapto nebo aminoskupinou, a R3 jsou vybrány ze skupiny zahrnující -OCH3 a -OCH2CH3,- ve druhém kroku se na takto modifikované částice jádra navážou zlaté nanočástice o průměru menším než 5 nm,- ve třetím kroku se vzniklé částice, tvořené jádrem s navázanými zlatými nanočásticemi, nechají reagovat s [AuCU ] v přítomnosti redukčního činidla, čímž se vytvoří vnitřní slupka.
- 5. Způsob přípravy podle nároku 4, vyznačující se tím, že v prvním kroku se deriváty trialkoxysilanů zvolí ze skupiny, zahrnující (3-merkaptopropyl)trimethoxysilan, (3merkaptopropyl)triethoxysilan, (3-aminopropyl)trimethoxysilan, a (3-aminopropyl)triethoxysilan.
- 6. Způsob přípravy podle nároku 4, vyznačující se tím, že ve třetím kroku se redukční činidlo zvolí ze skupiny, zahrnující oxid uhelnatý, hydroxylamin, hydrazin, methylhydrazin, kyselinu askorbovou, formaldehyd a acetaldehyd.
- 7. Použití částic podle kteréhokoliv z nároků 1 a 2 pro in vitro detekci biomolekul v biologických vzorcích na základě interakce polymeru vnější slupky částic, derivatizovaného ligandem,- 16CZ 309422 B6 schopným selektivní vazby s těmito biomolekulami, zahrnujícími nukleové kyseliny, proteiny, póly sacharidy a glykoproteiny.
- 8. Použití podle nároku 7 pro in vitro detekci biomolekul v biologických vzorcích, zvolenou z metod in situ hybridizace virové DNA v nádorových buňkách, cytometrie a detekce pomocí5 mikroskopie ve světlém poli.
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2020-535A CZ309422B6 (cs) | 2020-09-29 | 2020-09-29 | Povrchově modifikované částice |
| US18/028,669 US20230366886A1 (en) | 2020-09-29 | 2021-09-29 | Surface modified particles |
| AU2021353733A AU2021353733A1 (en) | 2020-09-29 | 2021-09-29 | Surface modified particles |
| EP21802198.8A EP4222494A1 (en) | 2020-09-29 | 2021-09-29 | Surface modified particles |
| CA3193521A CA3193521A1 (en) | 2020-09-29 | 2021-09-29 | Surface modified particles |
| PCT/CZ2021/050103 WO2022068982A1 (en) | 2020-09-29 | 2021-09-29 | Surface modified particles |
| IL301812A IL301812A (en) | 2020-09-29 | 2021-09-29 | Surface modified particles |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2020-535A CZ309422B6 (cs) | 2020-09-29 | 2020-09-29 | Povrchově modifikované částice |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2020535A3 CZ2020535A3 (cs) | 2022-04-06 |
| CZ309422B6 true CZ309422B6 (cs) | 2022-12-28 |
Family
ID=78516442
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2020-535A CZ309422B6 (cs) | 2020-09-29 | 2020-09-29 | Povrchově modifikované částice |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20230366886A1 (cs) |
| EP (1) | EP4222494A1 (cs) |
| AU (1) | AU2021353733A1 (cs) |
| CA (1) | CA3193521A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ309422B6 (cs) |
| IL (1) | IL301812A (cs) |
| WO (1) | WO2022068982A1 (cs) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ309422B6 (cs) * | 2020-09-29 | 2022-12-28 | Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v. v. i. | Povrchově modifikované částice |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010139942A2 (en) * | 2009-06-02 | 2010-12-09 | University Of Strathclyde | Nanoparticle for biomolecule delivery |
| US20140045169A1 (en) * | 2012-08-13 | 2014-02-13 | Sudx Life Science Corp. | Glycan immobilized metal nanoparticles and use thereof for early hiv-1 detection |
| WO2017012568A1 (en) * | 2015-07-22 | 2017-01-26 | Gnt Biotech & Medicals Corporation | Ph-sensitive linkers for delivering a therapeutic agent |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6699724B1 (en) | 1998-03-11 | 2004-03-02 | Wm. Marsh Rice University | Metal nanoshells for biosensing applications |
| EP2165185B1 (en) * | 2007-06-26 | 2015-08-19 | Massachusetts Institute of Technology | Controlled modification of semiconductor nanocrystals |
| US20200164072A1 (en) | 2018-10-05 | 2020-05-28 | William Marsh Rice University | Nanocomplexes for remotely-triggered guest molecule release and methods for fabricating the same |
| CZ309422B6 (cs) * | 2020-09-29 | 2022-12-28 | Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v. v. i. | Povrchově modifikované částice |
| CZ34808U1 (cs) * | 2020-09-29 | 2021-01-28 | Ústav organické chemie a biochemie AV ČR, v. v. i. | Povrchově modifikované částice |
-
2020
- 2020-09-29 CZ CZ2020-535A patent/CZ309422B6/cs unknown
-
2021
- 2021-09-29 WO PCT/CZ2021/050103 patent/WO2022068982A1/en unknown
- 2021-09-29 IL IL301812A patent/IL301812A/en unknown
- 2021-09-29 US US18/028,669 patent/US20230366886A1/en active Pending
- 2021-09-29 AU AU2021353733A patent/AU2021353733A1/en active Pending
- 2021-09-29 EP EP21802198.8A patent/EP4222494A1/en not_active Withdrawn
- 2021-09-29 CA CA3193521A patent/CA3193521A1/en active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010139942A2 (en) * | 2009-06-02 | 2010-12-09 | University Of Strathclyde | Nanoparticle for biomolecule delivery |
| US20140045169A1 (en) * | 2012-08-13 | 2014-02-13 | Sudx Life Science Corp. | Glycan immobilized metal nanoparticles and use thereof for early hiv-1 detection |
| WO2017012568A1 (en) * | 2015-07-22 | 2017-01-26 | Gnt Biotech & Medicals Corporation | Ph-sensitive linkers for delivering a therapeutic agent |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| G. Pramanik a kol. : "Gold nanoclusters with bright near-infrared photoluminiscence" Nanoscale 10, 3792-3798 (2018) * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP4222494A1 (en) | 2023-08-09 |
| US20230366886A1 (en) | 2023-11-16 |
| CA3193521A1 (en) | 2022-04-07 |
| AU2021353733A1 (en) | 2023-06-08 |
| IL301812A (en) | 2023-05-01 |
| CZ2020535A3 (cs) | 2022-04-06 |
| WO2022068982A1 (en) | 2022-04-07 |
| AU2021353733A9 (en) | 2024-05-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yu et al. | Cu 2+-selective naked-eye and fluorescent probe: its crystal structure and application in bioimaging | |
| EP1937850B1 (en) | Methods and compositions for labeling nucleic acids | |
| US9260656B2 (en) | Fluorescent silica nano-particle, fluorescent nano-material, and biochip and assay using the same | |
| EP3810721B1 (en) | Fluorescent particles with molecularly imprinted fluorescent polymer shells for cell staining applications in cytometry and microscopy | |
| JP3098545B2 (ja) | ビス−ジカチオンアリールフラン類を用いる核酸および細胞骨格成分の蛍光検出方法 | |
| Yang et al. | Distinguishing breast cancer cells using surface-enhanced Raman scattering | |
| US20060183247A1 (en) | Detection method for specific biomolecular interactions using fret between metal nanoparticle and quantum dot | |
| Wang et al. | Colorimetric determination of the early biomarker hypoxia-inducible factor-1 alpha (HIF-1α) in circulating exosomes by using a gold seed-coated with aptamer-functionalized Au@ Au core-shell peroxidase mimic | |
| US20080299555A1 (en) | Multicolor chromogenic detection of biomarkers | |
| WO2015141856A1 (ja) | プローブ試薬および該プローブ試薬を用いたｆｉｓｈ | |
| JP2014507949A (ja) | 核染色のための量子ドットの適用 | |
| KR100979727B1 (ko) | 금 할로우 나노입자 및 광학 이미징 기술을 이용한 암세포판별법 | |
| CN114410786A (zh) | 用于检测肿瘤微小核酸标志物的表面增强拉曼散射检测试剂盒及其制备方法与应用 | |
| CZ309422B6 (cs) | Povrchově modifikované částice | |
| Zhang et al. | In-situ and amplification-free imaging of hERG ion channels at single-cell level using a unique core-molecule-shell-secondary antibody SERS nanoprobe | |
| CZ34808U1 (cs) | Povrchově modifikované částice | |
| Lv et al. | Aptamer based strategy for cytosensing and evaluation of HER-3 on the surface of MCF-7 cells by using the signal amplification of nucleic acid-functionalized nanocrystals | |
| CN107219213B (zh) | 酶引导晶体生长增强拉曼光谱表面效应检测双酚a的方法 | |
| US10775304B2 (en) | Fluorescent nanosensors and uses thereof | |
| Linares et al. | One-step synthesis of polymer core–shell particles with a carboxylated ruthenium complex: A potential tool for biomedical applications | |
| CN113281514B (zh) | 一种检测肝癌细胞外泌体的SPRi生物传感器及其制备与应用 | |
| US20210373022A1 (en) | Methods and kits for detecting exosomal protein | |
| Li et al. | Highly sensitive and specific resonance Rayleigh scattering detection of esophageal cancer cells via dual-aptamer target binding strategy | |
| Ansari et al. | Surface-enhanced Raman spectroscopic detection of cancer biomarkers in intact cellular specimens | |
| TW202109013A (zh) | 使用金奈米粒子之精胺的直接比色法檢測 |