CZ307916B6 - Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem a její použití - Google Patents

Abstract

Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem obsahující částice extraktu z oddenku rostlinys obsahem alespoň 95 hmotn. % kurkuminu rozemletého na velikosti 130 až 250 nm ve směsi s manitolem v hmotnostním poměru 1 až 2:2 v orodispergovatelném nosiči, který obsahuje 20 až 50 hmotn. % tapiokového škrobu, 15 až 30 hmotn. % rozdrobněného bambusového vlákna, 10 až 20 hmotn. % kysele hydrolyzovaného dextrinu, přičemž kurkumin v extraktu je 100% biologicky dostupný přes ústní sliznice.

Description

Oblast techniky

Orodispergovatelná tablety s obsahem vysoce biodostupného kurkuminu jako doplněk stravy.

Dosavadní stav techniky

Kurkumin je žluté barvivo izolované z kurkumy, neboli indického šafránu, extraktu pocházejícího z oddenku kurkumovníku dlouhého (Curcuma Longa). Kurkumin je nejvíce biologicky aktivní složkou kurkumy a přitahuje velkou pozornost z důvodu velkého počtu provedených a dokončených vědeckých studií, které naznačují, že může mít mnoho zdravotních výhod. Kurkumin je předmětem intenzivního výzkumu například pro své protinádorové účinky, své preventivní účinky proti civilizačním chorobám, preventivní účinky proti rozvoji Alzheimerovy a Parkinsonovy choroby, a v neposlední řadě pro své protizánětlivé a analgetické účinky.

Extrakt z kurkumy je výtažkem z oddenku rostliny Curcuma longa. Tomuto extraktu jsou přisuzovány mnohé prospěšné zdravotní účinky na kardiovaskulární systém, imunitní systém, činnost jater, trávení, činnost nervové soustavy, funkci dýchacího systému, stav pokožky, a průběh zánětlivých reakcí. Nejvíce bioaktivní součástí tohoto výtažku je kurkumin.

X, X..

ÓCHs

H3CC>

Kurkumový extrakt je běžně dostupný ve formě tablet, tvrdých tobolek, měkkých želatinových tobolek ve formě emulze.

Jsou známy různé formulace a postupy pro přípravu orodispergovatelných tablet a minitablet. Tyto tablety jsou vhodné pro všechny pacienty, kteří mají obtíže s polykáním tablet nebo je neradi polykají, jak děti, tak senioři. Orodispergovatelná formulace jsou alternativou pro tyto zákazníky a zvyšují aplikační komfort při užívání doplňků stravy. Orodispergovatelná lékové formy jsou rovněž výhodné pro pacienty trpící nauzeou, zvracením, či průjmem. Díky tomu, že je účinná látka podána prostřednictvím orodispergovatelné lékové formy, dochází k rychlejší absorpci, která probíhá z menší části přes ústní sliznice, většina aktivní látky se ale vstřebává v pre-gastrické části trávicího traktu, čímž dochází k výraznému snížení first-pass efektu jatemího metabolismu, což vede k výraznému zvýšení účinnosti podávané aktivní látky a její dávky. Tímto mechanismem léková forma zlepšuje klinický efekt některých aktivních látek zvýšením jejich biodostupnosti a snížením výskytu vedlejších účinků díky obchvatu first-pass efektu jatemího metabolismu. Formulace orodispergovatelných přípravků je náročná z několika různých důvodů. Především se tato léková forma musí velmi rychle rozpadat v dutině ústní. Předčasné uvolnění aktivní látky v ústech navíc může vést k problémům s aplikací díky nepříjemné chuti aktivní látky. Zvolená léková forma by měla být dostatečně porézní, aby se rychle rozpadala, zároveň ale musí vydržet mechanickou námahu během transportu, uskladnění a aplikace. Je obecně známo, že porézní struktury jsou velmi citlivé k vzdušné vlhkosti, tudíž se u nich mohou vyskytnout problémy se stabilitou při dlouhodobém skladování. Konečně, orodispergovatelná léková forma s požadovanými organoleptickými a farmakokinetickými vlastnostmi musí také být vyráběna v komerčně smysluplných a využitelných počtech.

- 1 CZ 307916 B6

Byly vyvinuty různé způsoby přípravy a výroby orálně dispergovatelných formulací, které zajišťují jejich rychlý rozpad v dutině ústní, mezi tyto technologie patří například sprcjové sušení, lyofilizace a vlhká granulace.

Technika sprejového sušení zahrnuje rozprášení roztoku aktivní látky, pomocných látek nebo směsi obojího v komoře, kde je udržována vysoká teplota. Tento postup není vhodný pro zpracování termolabilních aktivních látek nebo pomocných látek. Navíc, sprejové sušení je velmi drahé a pro tento proces jsou charakteristické vysoké ztráty výsledného produktu.

Lyofilizace je technika odstranění vlhkosti či rozpouštědla z roztoku sníženou teplotou a v podmínkách sníženého tlaku. Ve velkém produkčním měřítku bohužel ztrácí efektivitu, je rovněž omezena vysokou cenou vybavení, je časově náročná a procesní podmínky jsou těžko udržitelné. Příkladem může být technologie Zydis®. Tablety připravené touto technikou jsou velmi křehké a musí být transportovány, skladovány a aplikovány ve speciálním obalu - upravené formě klasického blistru. O těchto formulacích pojednávají patenty US 4642903, US 5188825, US 5631023, US 5827541, US 5976577.

Vlhká granulace je technika aglomerace, s jejíž pomocí je možné získat granulovaný prášek vysoké pevnosti, který se pomalu rozpadá a není tedy vhodný pro orodispergovatelná lékové formy. Využití rozpouštědel a přidaných kroků sušení, které tato technika vyžaduje, navíc mohou vést ke změnám v polymorfické a pseudopolymorfické formě aktivní nebo pomocné látky a k její degradaci.

Jednou z otázek, která je spojena s kurkuminem, je otázka jeho biologické dostupnosti. I při vysokých dávkách nativního kurkuminu, jen velmi malé množství dosáhne oběhu po orálním podání vzhledem k jeho rychlé metabolické přeměně jak v játrech, tak ve střevní stěně. Kurkumin podaný samostatně je tělem velmi špatně absorbován a tělo z podané dávky efektivně zpracuje jen zlomek. Pro zvýšení účinnosti a biodostupnosti se vyrábí kapsle s obsahem sójového lecitinu (Meriva), zkoumá se použití nanotechnologií (Theracurcumin) či rozpuštění ve vodě s užitím polyvinylpyrrolidonu. U této metody se uvádí až 46násobně zvýšená absorpce v porovnání se standardní směsí kurkuminu. Velmi účinnou možností, je společné podání kurkuminu a piperinu, extraktu z černého pepře. Piperin v těle dokáže zablokovat trávicí enzymy, které zpracovávají kurkumin. Další možností je doporučení zvýšit rozpustnost kurkuminu tím, že se napřed nechá rozpustit ve vroucí vodě po dobu 10 minut (Kurien, 2009). Jiné výzkumy však došly k závěru, že se kurkumin teplotou degraduje. Curcumin C3 reduct od firmy Swanson je použit ve formě tetrahydrokurkuminoidů, mají také vyšší stabilitu při normálních fyziologických hodnotách pH.

Kurkumin C3 komplex, od firmy Sabinsa, popsaný v patentovém dokumentu WO97/03674 byl použit pro porovnání s označením produkt B. Tento produkt je tvořen z extraktu kurkumy s 95 % kurkuminu, demethoxykurkuminu a bisdementhoxykurkuminu o 300 mg. Extrakt je smíchán spolu s piperinem 2 mg, celulózou a stearanem hořečnatým a jsou dohromady uzavřeny do želatinových kapslí.

Liftea kurkumin byl použit pro porovnání s označením produkt A. Liftea kurkumin je přípravek extraktu z kurkumy (95% kurkuminoidů) o 157 mg s 300 mg inulinu v želatinové kapsli s obsahem stearanu hořečnatého (protispékavá látka). Pro porovnání jsme stanovili velikost částic extraktu z kurkumy s výsledkem 2 až 15 pni u obou produktů.

Podstata vynálezu

V rámci vědecko-výzkumné spolupráce se podařilo zvýšit rozpustnost a biodostupnost kurkuminu jako účinné látky pro orodispergovatelné tablety a minitablety. Byla vyvinuta orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem obsahující částice extraktu z oddenku

-2CZ 307916 B6 rostliny Curcuma longa s obsahem alespoň 95 hmotn. % kurkuminu rozemletého na velikosti 130 až 250 nm ve směsi s mannitolem v hmotnostním poměru 1 až 2:2 v orodispergovatelném nosiči, který obsahuje 20 až 50 hmotn. % tapiokového škrobu, 15 až 30 hmotn. % rozdrobněného bambusového vlákna, 10 až 20 hmotn. % kysele hydro lyžovaného dextrinu, přičemž kurkumin v extraktu je 100% biologicky dostupný přes ústní sliznice, má 220x lepší rozpustnost a 200x lepší vstřebatelnost a biologickou vstřebatelnost pro lidské buňky.

Orodispergovatelné tablety (ODT) a minitablety (ODMT) navíc umožňují vstřebání kurkuminu přímo přes sliznici úst a pre-gastrické části trávicí soustavy, bez nutnosti průchodu zažívacím traktem. Tablety a minitablety jsou vhodné pro vegany i vegetariány, a dokonce i pro osoby s potravinovou alergií, neobsahují laktózu ani lepek. Po prostém smísení jednotlivých komponent s aktivní látkou do tableto viny následuje přímá komprese tablet a minitablet a není tak potřeba žádná granulace ani další výrobní krok či pridatná látka. Tablety a minitablety se nemusí zapíjet, stačí je pouze rozpustit v ústech. Způsob výroby tablet a minitablet je časově nenáročný, s vysokou výtěžností produktu a při výrobě nedochází ke změnám formy aktivní látky a snížení její účinnosti.

Extrakt z kurkuminu je zpracováván tryskovým mletím s velice uniformní výslednou distribucí částic, střední velikost částic se pohybuje okolo 170 nm. Poměrové zastoupení částic je v intervalu od 130 až 250 nm. Kurkumin se mele se stabilizátorem, s výhodou s mannitolem, v hmotnostním poměru 1:2 na suché cestě v tryskovém mlýnu. Podávači tlak je 207 až 483 kPa, což odpovídá 30 až 70 PSI, mlecí tlak 207 až 483 kPa, a mletí je dvakrát zopakováno. Tím je docíleno požadované střední velikosti částic a úzké distribuce částic, která zajišťuje vysokou biodostupnost kurkuminu.

Zjistili jsme, že mletý kurkumin o velikosti zrna 100 nm až 200 nm jev porovnání s nativním kurkuminem (střední velikost částic 2 až 15 pm) až 100% biodostupný a vstřebatelný do organismu. Mletý kurkumin se přidá k pomocné látce, tableto vině, jež vytvoří výslednou formu tablety, která je v ústech snadno rozpustná a je vyrobena převážně z přírodních surovin. Navíc musí být ke kurkuminu přidán piperin a lipid, s výhodou lecithin. Piperin zablokuje funkci trávicích enzymů, zpracovávajících kurkumin a nepřímo zvýší jeho biodostupnost. Lipid, rozpouští kurkumin a zlepší vstřebávání kurkuminu do tkání, čímž také zvýší jeho biodostupnost.

Směs mletého kurkuminu, mannitolu, piperinu a lecithinu je smíšena s tableto vinou, která se skládá z několika složek a jež je připravena procesem fluidní granulace. Touto metodou je docíleno vzniku porézní struktury granulovaného prášku, který se rychle rozpadá a zároveň má dostatečnou odolnost. Během fluidní granulace jsou plniva (tapiokový škrob, bambusová vláknina) uvedena do vznosu, který je vytvořen proudem ohřátého vzduchu. Do vzniklého fluidního lůžka je aplikován roztok pojivá obsahující dextrin a Stevio-Rebauosid A, případně s výhodou isomalt, sorbitol. Úkolem pojivá je vytvořit fyzické propojení mezi jednotlivými volnými částicemi prášku (škrob, rozdrobněná bambusová vláknina) s výsledným vytvořením granulám. Vzniklý granulát je ve vznosu vysušen a následně jsou k němu s výhodou přidána sladidla (erythritol, sorbitol nebo xylitol), která po rozpuštění v ústech zanechávají příjemný pocit, dále je s výhodou přidán předželovaný škrob, oxid křemičitý a glyceryl dibehenát, směs je poté řádně promíchána.

Pro lepší pocit v ústech po aplikaci tablety, je možné s výhodou použít aroma nebo příchuť, například pomerančovou, peprmintovou, citrónovou, jahodovou, banánovou, malinovou, višňovou, třešňovou a další.

Po přidání kurkuminu, piperinu, mannitolu a lipidu, mohou být vylisovány kompaktní libovolně velké tablety a minitablety, jež se balí do vlhko těsného obalu, mohou být samostatně baleny do blistrů. Po vyloupnutí z blistru jsou tablety a mini tablety aplikovány do úst a rozpadají se již po 35 vteřinách.

-3 CZ 307916 B6

Biodostupnost kurkuminu v orodispergovatelné tabletě byla porovnávána s komerčně dostupným přípravkem označeným jako produkt A a B. Biodostupnost a rozpustnost byla testována pomocí měření fluorescence tablety rozpuštěné v roztoku a po absorpci do nádorových buněk - in vitro testy. Příklady dokládají, že skutečně dochází k prostupu mletého kurkuminu do buněk, a to 13 krát účinněji, kdy relativní intenzita zelené fluorescence kurkuminu v buněčném jádru produktu A a B činí 2,33, resp. 1,93, zatímco relativní intenzita zelené fluorescence kurkuminu v buněčném jádru biodostupného kurkuminu podle vynálezu činí 22,74. V přepočtu biodostupnost produktů A a B je pouze 10% a 8% oproti biodostupnému kurkuminu podle vynálezu. Testy rozpustnosti biologicky dostupného kurkuminu byly realizovány v PBS pufru a ukazují, že k úplnému rozpuštění tablety může dojít už za 30 vteřin. Rozpustnost byla měřena pomocí intenzity fluorescence, která byla u biodostupného kurkuminu 220 krát vyšší než u produktu A.

Rozsáhlému testování byly podrobeny také formulace s nativním kurkuminem, které obsahovaly laktózu, syrovátku a další cukry, tyto formulace se však při testech biologické dostupnosti a rozpustnosti nejevily jako optimálně funkční v požadovaných podmínkách. Jako optimální se projevilo složení tapiokový škrob (20 až 70 hmotn. %), rozdrobněná bambusová vláknina (12 až 30 hmotn. %), erythritol (12,5 až 50 hmotn. %), předželovaný škrob (0,01 až 10 hmotn. %), kysele hydrolyzovaný dextrin (10 až 20 hmotn. %), oxid křemičitý a glyceryl dibehenát (0,01 až 4,0 hmotn.).

Funkci oxidu křemičitého a glyceryldibehenátu mohou také plnit jiné kluzné látky, například stearan hořečnatý, stearan hlinitý, lauryl sulfát sodný, mastek, polyethylen glykol, kyselina stearová, kyselina boritá, a to při koncentraci 1 až 10 hmotn. %, s výhodou 1 až 5 hmotn. %. Aroma lze aplikovat v koncentraci 0,01 až 10 hmotn. %

Tablety mají váhu 150 až 300 mg a průměr tablet je 7 až 12 mm. Minitablety mají váhu 35 až 70 mg a průměr 4 až 6 mm. Minitablety mají pevnost 5 až 100 N, s výhodou 20 až 50 N a jejich oděr je menší než 1 hmotn. %.

Stejně taky bylo testováno rozsáhlé spektrum vzorků s různou velikostí částic mletého kurkuminového extraktu, přičemž nej lepší rozpustnost a biodostupnost byla prokázána u mletého kurkuminu o velikosti 165 až 180 nm.

Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem obsahuje částice extraktu z oddenku rostliny Curcuma longa s obsahem alespoň 95 hmotn. % kurkuminu rozemletého na velikosti 130 až 250 nm ve směsi s mannitolem v hmotnostním poměru 1 až 2:2 v orodispergovatelném nosiči. S výhodou je velikost částic extraktu 165 až 180 nm a částice jsou rozemlety suchým tryskovým mletím.

Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem obsahuje lecitin v hmotnostním poměru 1:1,5 vůči extraktu kurkuminu a piperin v hmotnostním poměru 0,001:1 vůči extraktu kurkuminu.

Orodispergovatelný nosič obsahuje 50 až 70 hmotn. % tapiokového škrobu, 12 až 30 hmotn. % rozdrobněného bambusového vlákna, 10 až 20 hmotn. % kysele hydro lyžovaného dextrinu, s výhodou 1 až 10 hmotn. % Stevio-Rebauosidu A. Dále může orodispergovatelný nosič obsahovat 10 až 20 hmotn. % isomaltu. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem s výhodou obsahuje orodispergovatelného nosiče až 95 hmotn. %. Orodispergovatelný nosič s výhodou obsahuje 12,5 až 50 hmotn. % erythritolu nebo sorbitolu nebo xylitolu nebo jejich směs. Dále může obsahovat 1 až 8 hnu % kluzných látek, přičemž kluznými látkami jsou 1 až 4 hmotn. % oxidu křemičitého a 0,01 až 4 hmotn. % glycerolu dibehenátu a 0,01 až 10 hmotn. % předželovaného škrobu. S výhodou mohou být kluznými látkami také stearan hořečnatý, stearan hlinitý, lauryl sulfát sodný, mastek, polyethylen glykol, kyselina stearová, kyselina boritá nebo jejich směs. Orodispergovatelný nosič může obsahovat také 0,01 až 10 hmotn. % aroma nebo

-4CZ 307916 B6 příchutě. Orodispergovatelné tablety s biodostupným kurkuminem jsou vhodné jako doplněk stravy.

Objasnění výkresů

Obr. 1. Certifikát z analýzy použitého extraktu kurkuminu

Obr. 2. Analýza velikosti částic v pomletém vzorku extraktu kurkuminu (tlak podávači = 50 PSI, tlak mlecí = 70 PSI, mleto jednou) připraveného dle příkladu 1.

Obr. 3. Analýza velikosti částic v pomletém vzorku extraktu kurkuminu (tlak podávači = 50 PSI, tlak mlecí = 50 PSI, mleto dvakrát) připraveného dle příkladu 2.

Obr. 4. Snímky z fluorescenčního inverzního mikroskopu Leica DM IRB fázového kontrastu, fluorescenčně obarveného jádra a fluorescence kurkuminu, 1 - mletý kurkumin podle příkladu 2, 2 - nativní kurkumin mikronizovaný ve složení jako tableta 1 podle př. 6, 3 - nativní kurkumin mikronizovaný s tabletovinou dle př. 4A (tzn. bez lecitinu a piperinu), 4 - nativní kurkumin mikronizovaný s mannitolem, lecitinem a piperinem, 5 - nativní kurkumin mikronizovaný s mannitolem u buněčné linie U-2, lidský osteosarkom.

Obr. 5. Snímky z fluorescenčního inverzního mikroskopu Leica DM IRB fázového kontrastu, fluorescenčně obarveného jádra a fluorescence kurkuminu, 1 - mletý kurkumin podle příkladu 2, 2 - nativní kurkumin mikronizovaný ve složení jako tableta 1 podle př. 6, 3 - nativní kurkumin mikronizovaný s tabletovinou dle př. 4A (tzn. bez lecitinu a piperinu), 4 - nativní kurkumin mikronizovaný s mannitolem, lecitinem a piperinem, 5 - nativní kurkumin mikronizovaný s mannitolem u buněčné linie MCF-7, lidský karcinom prsu.

Obr. 6. Snímky z fluorescenčního inverzního mikroskopu Leica DM IRB fluorescence kurkuminu, 1 - mletý kurkumin podle příkladu 1,2 - mletý kurkumin podle příkladu 2, 3 kurkuminm z produktu A, 4 - kurkumin z produktu B u buněčné linie U-2, lidský osteosarkom.

Obr. 7. Snímky z fluorescenčního inverzního mikroskopu Leica DM IRB fázového kontrastu, fluorescenčně obarveného jádra a fluorescence mletého kurkuminu podle příkladu 2 u buněčných kultur, porovnání formulace mletého kurkuminu podle tohoto vynálezu s komerčně dostupnými produkty A B.

Obr. 8. Grafické vyjádření biodostupnosti odvozené od fluorescence forem kurkuminu z obr. 7.

Obr. 9. Tabulka stanovení intenzit fluorescence jednotlivých vzorků kurkuminu ze snímků obr. 6.

Obr. 10. Graf závislosti intenzity fluorescence v roztoku na době rozpouštění. Kurkumin se zmenšenou velikostí částic disponoval částicemi kurkuminu o velikosti 2 až 15 pni z produktu A, Neo Curcumin ODT je označen mletý kurkumin podle příkladu 2.

Obr. 11. Tabulka stanovení intenzit fluorescence jednotlivých rozpuštěných vzorků kurkuminu

Příklady uskutečnění vynálezu

Příklad 1

Zpracování výchozího extraktu

-5 CZ 307916 B6

Jako výchozí surovina pro extrakci byla použita kurkuma z oddenku rostliny Curcuma longa L.. Extrakt obsahoval 97,03 hmotn. % kurkuminu a obsah popela byl 0,05 hmotn. %. Kompletní certifikát analýzy použitého extraktu je zobrazen v Obr. 1.

g Extraktu kurkuminu bylo mleto na suché cestě v laboratorním tryskovém mlýnu spolu s mannitolem v hmotn. poměru 1:2. Vstupní podávači tlak byl 70 PSI (344,738 kPa) a tlak mlecí byl 50 PSI (482,633 kPa). Mletí bylo provedeno jednou po dobu 96 minut o teplotě 25 °C. Výsledná střední velikost částic mletého kurkuminu byla měřena pomocí dynamického světelného rozptylu a pohybovala se kolem 335,735 nm. Detailní výsledky analýzy mletého extraktu obsahuje obr. 2. Tato střední velikost části byla stanovena za nevyhovující pro použití jako vysoce vstřebatelná účinná látka.

Příklad 2

Zpracování výchozího extraktu

Jako výchozí surovina pro extrakci byla použita kurkuma botanického názvu Curcuma longa L. Extrakt obsahoval 97,03 hmotn. % kurkuminu a obsah popela byl 0,05 hmotn. %. Kompletní certifikát analýzy použitého extraktu je zobrazen v Obr. 1.

g Extraktu kurkuminu bylo mleto na suché cestě v laboratorním tryskovém mlýnu spolu s mannitolem v hmotn. poměru 1:2. Vstupní podávači tlak byl 50 PSI (482,633 kPa) a tlak mlecí byl 50 PSI (482,633 kPa). Mletí bylo provedeno dvakrát po sobě po dobu 96 minut a teplotě 25 °C. Výsledná střední velikost částic kurkuminu byla měřena pomocí dynamického světelného rozptylu, přičemž byla stanovena na 171,17 nm, což byla nejnižší dosažená střední velikost částic; distribuce částic byla 134,16 až 246,98 nm. Detailní výsledky analýzy mletého extraktu obsahuje obr. 3. Tato střední velikost Částic byla stanovena za vyhovující pro použití jako vysoce vstřebatelná účinná látka.

Příklad 3

Příprava tabletoviny/excipientu

Tableto vina, jako nosná matrix tablet a minitablet, bez aktivních látek, byla připravena procesem fluidní granulace. Během fluidní granulace bylo 713,294 g tapiokového škrobu a 124,802 g rozdrobněného bambusového vlákna Vitacel Baf-40 uvedeno do vznosu, tvořeného proudem vzduchu ohřátého na 80 až 90 °C. Do vytvořeného fluidního lůžka byl postupně aplikován roztok, který byl tvořen rozpuštěním 14,799 g LyckebyPlus 1200H a 0,636 g Stevia-Rebausiode A v horké vodě. Po aplikaci roztoku byl vzniklý granulát ve vznosu vysušen, dokud neobsahoval 4 až 8 hmotn. % zbytkové vlhkosti. Následně ke granulátu bylo přidáno 125,246 g Erylite F8030, 8,350 g Sweely gel soft, 8,583 g Aerosil 200F a 4,291 g Compritol ATO 888. Výsledná směs byla následovně řádně promíchána v jednoduchém planetovém mísiči po dobu 5 minut.

Procesní parametry fluidní granulace:

Fáze fluidní granulace	Čas (min)	Propustnost ventilu (%)	Teplota na vstupu (°C)	Teplota na výstupu f C)	Teplota produktu (°C)
Předehřáli přístroje	To - Tio	15-25	20- 100	16-35	16-40
Granulace aplikace pojivá	]. R1 * T30	15-35	70- 100	30 - 40	25-35
Sušeni granulátu	Γ: .· - 1	25-35	45 - 80	30 - 35	30-40

-6CZ 307916 B6

Příklad 4

Příklad 4A

Příprava tabletoviny/excipientu

Tableto vina, jako nosná matrix tablet a minitablet, bez aktivních látek, byla připravena procesem fluidní granulace. Během fluidní granulace bylo 692,562 g tapiokového škrobu a 221,525 g rozdrobněného bambusového vlákna uvedeno do vznosu, tvořeného proudem ohřátého vzduchu. Do vytvořeného fluidního lůžka byl postupně aplikován roztok, který byl tvořen rozpuštěním

15.845 g Lyckeby plus 1200H a 0,883 g Stevio-rebauosidu A v horké vodě. Po aplikaci roztoku byl vzniklý granulát ve vznosu vysušen, dokud neobsahoval 4 až 8 hmotn. % zbytkové vlhkosti. Následně ke granulátu bylo přidáno 225,699 g erythritolu, 22,598 g předželovaného škrobu, 15,223 g oxidu křemičitého a 30,615 g glyceryl dibehenátu. Výsledná směs byla následovně řádně promíchána.

Příklad 4B

Příprava tabletoviny/excipientu

Tableto vina, jako nosná matrix tablet a minitablet, bez aktivních látek, byla připravena procesem fluidní granulace. Během fluidní granulace bylo 559,512 g tapiokového škrobu a 215,525 g rozdrobněného bambusového vlákna uvedeno do vznosu, tvořeného proudem ohřátého vzduchu. Do vytvořeného fluidního lůžka byl postupně aplikován roztok, který byl tvořen rozpuštěním 16,799 g isomaltu (GalenlQ 800/801) a 0,883 g Stevio-rebauosidu A v horké vodě. Po aplikaci roztoku byl vzniklý granulát ve vznosu vysušen, dokud neobsahoval 4 až 8 hmotn. % zbytkové vlhkosti. Následně ke granulátu bylo přidáno 130,699 g erythritolu, 43,250 g předželovaného škrobu, 17,645 g oxidu křemičitého a 17,645 g glyceryl dibehenátu. Výsledná směs byla následovně řádně promíchána.

Příklad 4C

Příprava tabletoviny/excipientu

Tableto vina, jako nosná matrix tablet a minitablet, bez aktivních látek, byla připravena procesem fluidní granulace. Během fluidní granulace bylo 706,512 g tapiokového škrobu a 240,802 g rozdrobněného bambusového vlákna uvedeno do vznosu, tvořeného proudem ohřátého vzduchu. Do vytvořeného fluidního lůžka byl postupně aplikován roztok, který byl tvořen rozpuštěním

13.845 g sorbitolu (NeoSorb) a 0,883 g Stevio-rebauosidu A v horké vodě. Po aplikaci roztoku byl vzniklý granulát ve vznosu vysušen, dokud neobsahoval 4 až 8 hmotn. % zbytkové vlhkosti. Následně ke granulám bylo přidáno 133,204 g erythritolu, 36,725 g předželovaného škrobu, 17,082 g oxidu křemičitého a 21,341 g glyceryl dibehenátu. Výsledná směs byla následovně řádně promíchána.

Příklad 5

Výroba minitablety 1

Ke 400 g tableto viny připravené podle příkladu 4 bylo přidáno: 20 g mletého kurkumimu, 40 g mannitolu, 30 g lecitinu, 0,2 g piperinu a 6,67 g pomerančového aroma. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 50 mg.

Výroba minitablety 2

Ke 400 g tableto viny připravené podle příkladu 3 bylo přidáno: 20 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 2, 40 g mannitolu, 30 g lecitinu, 0,2 g piperinu a 6,67 g peprmintového aroma. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 50 mg.

Výroba minitablety 3

Ke 223 g tabletoviny připravené podle příkladu 4 bylo přidáno: 80 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 2, 16 g mannitolu, 30 g lecitinu, 0,2 g piperinu a 6,67 g pomerančového aroma. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 50 mg.

Výroba minitablety 4

Ke 223 g tabletoviny připravené podle příkladu 3 bylo přidáno: 80 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 2, 16 g mannitolu, 30 g lecitinu, 0,2 g piperinu a 6,67 g peprmintového aroma. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 50 mg.

Výroba minitablety 5

Ke 400 g tabletoviny připravené podle příkladu 4 bylo přidáno: 20 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 2, 40 g mannitolu, 30 g slunečnicového lecitinu a 0,17 g piperinu. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 50 mg.

Výroba minitablety 6

Ke 409 g tabletoviny připravené podle příkladu 3 bylo přidáno: 20 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 1, 40 g mannitolu, 30 g slunečnicového lecitinu a 0,17 g piperinu. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 50 mg.

Příklad 6

Výroba tablety 1

Ke 1903 g tabletoviny připravené podle příkladu 3 bylo přidáno: 20 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 2, 40 g mannitolu, 30 g lecitinu, 0,2 g piperinu a 6,67 g pomerančového aroma. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 150 mg.

Výroba tablety 2

Ke 1903 g tabletoviny připravené podle příkladu 4 bylo přidáno: 20 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 2, 40 g mannitolu, 30 g lecitinu, 0,2 g piperinu a 6,67 g peprmintového aroma. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 200 mg.

-8CZ 307916 B6

Výroba tablety 3

Ke 1633 g tableto viny připravené podle příkladu 3 bylo přidáno: 8 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 2, 16 g mannitolu, 12 g lecitinu, 0,8 g piperinu a 6,67 g pomerančového aroma. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 200 mg.

Výroba tablety 4

Ke 1633 g tabletoviny připravené podle příkladu 4 bylo přidáno: 8 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 2, 16 g mannitolu, 12 g lecitinu, 0,8 g piperinu a 6,67 g peprmintového aroma. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 200 mg.

Výroba tablety 5

Ke 1423 g tabletoviny připravené podle příkladu 3 bylo přidáno: 15 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 2, 30 g mannitolu, 12 g lecitinu, 0,8 g piperinu a 6,67 g pomerančového aroma. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 300 mg.

Výroba tablety 6

Ke 1423 g tabletoviny připravené podle příkladu 4 bylo přidáno: 15 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 2, 30 g mannitolu, 12 g lecitinu, 0,8 g piperinu a 6,67 g peprmintového aroma. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 150 mg.

Výroba tablety 7

Ke 1250 g tabletoviny připravené podle příkladu 3 bylo přidáno: 167 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 2, 333 g mannitolu, 250 g slunečnicového lecitinu a 0,16 g. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 200 mg.

Výroba tablety 8

Ke 1250 g tabletoviny připravené podle příkladu 4 bylo přidáno: 167 g mletého kurkumimu, připraveného podle příkladu 1, 333 g mannitolu, 250 g slunečnicového lecitinu a 0,16 g. Všechny složky byly zhomogenizovány a spojeny přímým lisováním a vznikly tak kompaktní, porézní tablety o hmotnosti tablety 300 mg.

Příklad 7

Experimenty biodostupnosti (vstřebatelnosti) - in vitro nádorové buňky

Bylo připraveno několik typů formulací kurkuminu:

- biodostupný kurkumin podle příkladu 2,

- nativní kurkumin mikronizovaný ve složení jako tableta 1 podle př. 6,

- nativní kurkumin mikronizovaný s tabletovinou dle př. 4A (tzn. bez lecitinu a piperinu),

- nativní kurkumin mikronizovaný s mannitolem, lecitinem a piperinem,

- nativní kurkumin mikronizovaný s mannitolem

-9CZ 307916 B6

Formulace kurkuminu (4 mg) byly resuspendovány v 1 ml PBS (pufrovaný fyziologický roztok), sonikovány na sonikační lázni 5 min a 40 μΐ této suspenze bylo přidáno do 2 ml kultivačního média k buňkám (buněčná linie U-2 OS, lidský osteosarkom; buněčná linie MCF-7, lidský karcinom prsu). Inkubace s buňkami probíhala v inkubátoru při 37 °C po dobu 1 hodiny a potom bylo do média přidáno na 15 min referenční barvivo Hoechst 33342 (výsledná koncentrace 0,5 μΜ), které fluorescenčně značí buněčná jádra. Buňky byly opláchnuty médiem bez fenolové červeně, prohlíženy fluorescenčním inverzním mikroskopem Leica DM IRB s použitím olejového imerzního objektivu (x63) a snímány kamerou DFC 480. Stejné buněčné pole bylo snímáno pomocí normálního světla (fázový kontrast), a fluorescencenčních kostek Leica A (excitation filter BP340-380 and long pass filter LP 425 pro emisi) zobrazující modrou fluorescenci Hoechst 33342 a Leica 13 (excitation filter BP 450-490 and longpass filter LP 515 pro emisi) zobrazující zelenou fluorescenci kurkuminu. Všechny testované varianty kurkuminu byly snímány kamerou se stejným nastavením, aby bylo možné jejich vzájemné porovnání. Snímky jsou zobrazeny na obr. č. 4 a 5. In vitro experimenty potvrdili prostupnost vytvořené formulace do buněčného systému.

Kvantitativní stanovení kurkuminu v buňce měřením fluorescence buněčných lyzátů a fluorescenční mikroskopií

Byla vyvinuta spolehlivá citlivá metoda pro fluorescenční stanovení kurkuminů.

Metoda se opírá o kvantifikaci fluorescenční látky kurkuminu. Metodika byla použita pro stanovení účinnosti pro intracelulámí transport kurkuminových formulací, kde výsledky byly porovnávány s nativním a mikronizováným kurkuminem, kde jsme pozorovali velmi nízkou intracelulámí absorpci, zatímco některé z testovaných formulací poskytovaly vysoké hodnoty intracelulámí fluorescence, které byly kvantitativně vyhodnoceny.

Podle našeho postupu je možné kvantifikovat kurkumin v buňce přímo nebo v buněčných lyzátech bez nutnosti předčistění vzorku. Vyhodnocení intensity fluorescence bylo provedeno pomocí obrazové analýzy softwarovým zpracováním obrazu fotek buněk z mikroskopu, kdy se měřil poměr relativní intenzity zelené fluorescence v jednotlivých vzorcích.

Na základě nejlepší prostupnosti kurkuminu do buněčného systému byl vybrán jako optimální biodostupný kurkumin připravené dle příkladu 2.

Příklad 8

Porovnání rozpustnosti orodispergovatelné tablety s obsahem vysoce biodostupného kurkuminu s komerčními produkty A a B

Tableta 1 připravená dle příkladu 6 a tablety produktu A a B (4 mg kurkuminu) byly resuspendovány v 1 ml vody za stálého míchání magnetickým míchadlem při teplotě 37 °C. Byla hodnocena intenzita fluorescence v čase během 1 hodiny. Nárůst fluorescence roztoku značil rozpouštění tablety a uvolňování kurkuminu. Maxima fluorescence a tudíž úplného rozpuštění tablety dokládá graf na obrázku 10.

U formulace kurkuminu podle tohoto vynálezu bylo dosaženo až 220x lepší rozpustnosti oproti komerčně dostupné nativní formě kurkuminu.

Příklad 9

Porovnání biodostupnosti orodispergovatelné tablety s obsahem vysoce biodostupného kurkuminu s komerčními produkty A a B

- 10CZ 307916 B6

Tableta 1 připravená podle příkladu 6 (2 mg kurkuminu) a další 2 komerčně dostupné přípravky (2 mg kurkuminu) byly resuspendovány v 1 ml PBS (pufrovaný fyziologický roztok), sonikovány na sonikační lázni 5 min a 40 ul této suspenze bylo přidáno do 2 ml kultivačního média k buňkám lidského osteosarkomu. Inkubace s buňkami probíhala v inkubátoru při 37 °C po dobu 1 hodiny a potom bylo do média přidáno na 15 min referenční barvivo Hoechst 33342 (výsledná koncentrace 0,5 μΜ), které fluorescečně značí buněčná jádra. Buňky byly opláchnuty médiem bez fenolové červeně, prohlíženy flourescenčním inverzním mikroskopem Leica DM IRB s použitím olejového imerzního objektivu (x63) a snímány kamerou DFC 480. Stejné buněčné pole bylo snímáno pomocí normálního světla (fázový kontrast), a fluorescencenčních kostek Leica A (excitation filter BP340-380 and long pass filter LP 425 pro emisi) zobrazující modrou fluorescenci Hoechst 33342 a Leica 13 (excitation filter BP 450-490 and longpass filter LP 515 pro emisi) zobrazující zelenou fluorescenci kurkuminu. Všechny testované varianty kurkuminu byly snímány kamerou se stejným nastavením, aby bylo možné jejich vzájemné porovnání. In vitro experimenty potvrdili prostupnost vytvořené nano- formulace s ODT do buněčného systému mnohem větší než u nativního kurkuminu v komerčně dostupných preparátech (Obr. 6).

U formulace kurkuminu podle tohoto vynálezu bylo dosaženo skutečné biodostupnosti, které byla odvozena z porovnání intenzit fluorescencí biodostupného kurkuminu podle vynálezu oproti komerčně dostupné nativní formě kurkuminu produktů A a B.

Průmyslová využitelnost

Doplněk stravy ve formě tablet volně rozpustných v ústech, obsahující vysoce vstřebatelný kurkumin.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (14)

1. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem, vyznačující se tím, že obsahuje částice extraktu z oddenku rostliny Curcuma longa s obsahem alespoň 95 hmotn. % kurkuminu rozemletého na velikosti 130 až 250 nm ve směsi s mannitolem v hmotnostním poměru 1 až 2:2 v orodispergovatelném nosiči, přičemž orodispergovatelný nosič obsahuje 20 až 50 hmotn. % tapiokového škrobu, 15 až 30 hmotn. % rozdrobněného bambusového vlákna, 10 až 20 hmotn. % kysele hydrolyzovaného dextrinu.

2. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 1, vyznačující se tím, že velikost částic extraktu je 165 až 180 nm.

3. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že částice jsou rozemlety suchým tryskovým mletím.

4. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje lecitin v hmotnostním poměru 1:1,5 vůči kurkuminu.

5. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 4, vyznačující se tím, že obsahuje piperin v hmotnostním poměru 0,001:1 vůči kurkuminu.

- 11 CZ 307916 B6

6. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 1, vyznačující se tím, že orodispergovatelný nosič obsahuje 1 až 10 hmotn. % Stevio-Rebauosidu A.

7. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 1 nebo 6, vyznačující se tím, že orodispergovatelný nosič obsahuje 1 až 10 hmotn. % isomaltu.

8. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 1, vyznačující se tím, že orodispergovatelného nosiče obsahuje až 95 hmotn. %.

9. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 1, vyznačující se tím, že orodispergovatelný nosič obsahuje 20 až 50 hmotn. % erythritolu nebo sorbitolu nebo xylitolu nebo jejich směs.

10. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 1, vyznačující se tím, že orodispergovatelný nosič obsahuje 1 až 8 hmotn. % kluzných látek.

11. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 1, vyznačující se tím, že orodispergovatelný nosič obsahuje kluzné látky, kterými jsou 1 až 4 hmotn. % oxidu křemičitého a 0,01 až 4 hmotn. % glycerolu dibehenátu a 0,01 až 10 hmotn. % předželovaného škrobu.

12. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 10, vyznačující se tím, že kluznými látkami jsou stearan hořečnatý, stearan hlinitý, lauryl sulfát sodný, mastek, polyethylen glykol, kyselina stearová, kyselina boritá nebo jejich směs.

13. Orodispergovatelná tableta s biodostupným kurkuminem podle nároku 1, vyznačující se tím, že orodispergovatelný nosič obsahuje 0,01 až 10 hmotn. % aroma nebo příchutě.

14. Použití orodispergovatelné tablety s biodostupným kurkuminem podle nároku 1 jako doplněk stravy.