CZ304597A3 - Permanentní buněčná linie a způsob rozmnožování virů vztekliny a způsob důkazu virů vztekliny, jakož i způsob důkazu inhibitorů rozmnožování virů vztekliny - Google Patents
Permanentní buněčná linie a způsob rozmnožování virů vztekliny a způsob důkazu virů vztekliny, jakož i způsob důkazu inhibitorů rozmnožování virů vzteklinyInfo
- Publication number
- CZ304597A3 CZ304597A3 CZ973045A CZ304597A CZ304597A3 CZ 304597 A3 CZ304597 A3 CZ 304597A3 CZ 973045 A CZ973045 A CZ 973045A CZ 304597 A CZ304597 A CZ 304597A CZ 304597 A3 CZ304597 A3 CZ 304597A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- virus
- cell line
- rabies
- rabies virus
- cpe
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
- C12N2760/00011—Details
- C12N2760/20011—Rhabdoviridae
- C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
- C12N2760/20151—Methods of production or purification of viral material
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Permanentní buněčná linie a způsob rozmnožování virů vztekliny a způsob důkazu virů vztekliny, jakož i způsob důkazu inhibitorů rozmnožování virů vztekliny
Oblast techniky
Vynález se týká permanentní buněčné linie a způsobu rozmnožování infekčního viru vztekliny a jeho kvantitativního důkazu pomocí cytopatogenního efektu (CPE) za použití této buněčné linie, jakož i způsobu důkazu inhibitorů rozmnožování virů vztekliny.
Dosavadní stav techniky
Pro produkci proteinů a antigenů virů jsou zapotřebí živé buňky. Podle dosavadního stavu techniky se k tomuto účelu používají diploidní buněčné kmeny nebo permanentní buněčné linie, pokud se pro produkci žádaných proteinů nebo antigenů virů hodí. Permanentní buněčné linie mají oproti diploidním buněčným kmenům tu výhodu, že se vyznačují neomezeným růstem, to znamená, že jsou imortalizovány. V širokých mezích pasáží mají tyto permanentní buněčné linie neměnné vlastnosti, pokud jde o rozmnožování buněk a antigenů virů, protože u nich nedochází k žádné diferenciaci buněk jako u diploidních kmenů. Vedle omezené životnosti (počtu pasáží) diploidních buněčných kmenů spočívá další závažný nedostatek v tom, že orgány, tkáně, jakož i kuřecí embrya, která jsou zapotřebí jako zdroj pro diploidní buněčné kmeny, nejsou v dostatečném množství a vždy k disposici. Dále může být výchozí materiál latentně nebo/a inaparentně kontaminován (viry, mykoplasmaty, bakteriemi), čímž nemůže být zaručena reprodukovatelná produkce ant i genů.
Pokud se týká viru vztekliny, je sice známo, že je tento možno rozmnožovat v buněčných kulturách řady druhů, ale v literatuře existuje jen málo poukazů na to, že při tom dochází k cytopatogennímu efektu (Egert a spol., Acta Virol. 33 (1989), 353 až 358, Consales a spol., J. Virol. Meth. 27 ·· ·· (1990), 227 až 286, Campbell a Charlton, v: Development in veterinary virology: Rabi es Kluwer Academie Publishers, Boston, Dordrecht, Londýn, 1988). U cytopatogenního efektu (CPE) se jedná vždy o specifické rozrušení buněk (lýzu), podmíněné viry, které je možno snadno prokázat mikroskopicky.
Obvykle však probíhá tkáňových kulturách bez popřípadě cytopatogenní a Koprowski, Laboratory rozmnožování virů vztekliny v CPE (Campbell a Charlton (1988)), změny jsou jen nepravidelné (Kaplan techniques in rabies, 111.vyd. Wld.
Hlth. Org. Monograph Serie 23, Ženeva (1973)) nebo se vyskytují jen přechodně (Smith a spol., Intervirol. 8 (1977), 92 až 99), takže spolehlivý důkaz virů vztekliny pomocí vyhodnocení CPE u těchto buněčných linií není možný.
Podstata vynálezu
Účelem vynálezu bylo umožňující získat permanentní soby, které by neměly shora které by umožňovaly obecně vztekliny efektu důkaz.
vyřešit technický problém buněčnou linii, popřípadě způuvedené nevýhody, to znamená, rozmnožování infekčních virů a s výskytem cytopatogenniho s lepším výtěžkem (CPE), což umožňuje jejich senzitivní kvantitativní
K vyřešení tohoto technického problému dochází využitím v nárocích vyznačených forem provedení.
Bylo nyní neočekávaně zjištěno, že se viry vztekliny rozmnožují v permanentní buněčné linii PH-2 podle vynálezu s cytopatogenním efektem (CPE) s vysokým výtěžkem. Jiné druhy virů z různých čeledí virů, jako jsou pikornaviry, herpesviry, paramyxoviry, reoviry a togaviry, je možno v této buněčné linii rovněž rozmnožovat. Tato buněčná linie je vhodná jak pro produkci antigenů virů, tak také pro průkaz virů a protilátek. Zejména překvapivé je, že se v této buněčné linii dá rozmnožovat k rabdovirům náležející virus vztekliny vždy s cytopatogenním efektem (CPE), čímž se tato buněč• ·
9 · · · · ~ — · ·
9 9 · · · · • · · 9 · ·· · • · 9 9 9 · 9 9 9 • · · · · · • · * · 9· 99 99 ná linie zejména hodí k jednoduchému důkazu a ke kvantitativnímu stanovení viru vztekliny a (neutralizujících) protilátek viru vztekliny.
Předmětem vynálezu je tedy permanentní buněčná linie PH-2 a od ní odvozené buněčné linie. Buněčná linie PH-2 je uložena u DSM Deutsche Sammlung fur Mikroorganismen v Braunschweigu pod číslem DSM ACC 2165. Podle výhodného provedení se vynález týká způsobu rozmnožování virů vztekliny s cytopatogenním efektem, který spočívá v tom, že se buněčná linie podle vynálezu infikuje virem, který má být rozmnožen, za vhodných podmínek se inkubuje a po dosažení dostatečně vysokého titru virových částic se tyto oddělí a vyčistí.
Ze získaných virových částic je možno získat a vyčistit o sobě známými způsoby, například ultracentrifukací, ultrafiltrací, chromatografií a pod. z fyzikálně dezintegrovaných částic virů antigeny virů. Tyto takto získané antigeny mohou být použity mimo jiné k výrobě očkovací látky nebo k diagnostickým účelům. Podle dalšího výhodného provedení se vynález týká způsobu získávání částic virů vztekliny, který spočívá v tom, že po získání částic virů se z nich získají antigeny virů a vyčistí se.
Skutečnost, že se pomocí buněčné linie podle vynálezu dají viry vztekliny rozmnožovat nejen účinněji než buněčnými liniemi podle známého stavu techniky, nýbrž také že při současně se vykytujícím cytopatogenním efektu, umožňuje senzitivní a jednoduchý důkaz virů vztekliny ve vzorcích a jejich kvantitativní stanovení.
Další výhodné provedení se týká tedy způsobu důkazu virů vztekliny pomocí cytopatogenního efektu, který spočívá v tom, že se buněčná linie podle vynálezu přivede do styku se vzorkem, o němž se předpokládá, že obsahuje virus vztekliny, který má být prokázán, buňky se inkubují a rozmnožující se virus se prokáže mikroskopickým zjištěním CPE. K provedení tohoto způsobu se vzorek viru dodá k buněčné kultuře naočkované na ·· ·· — 4* — ** ·· ···· • · · · · · · · · · ···· · · · · · · · • · · · · · ··· · ··· · ····· · ·· ······ ·· · · ·· · mikrotitračních destičkách nebo jiných odborníkům známých miskách pro buněčné kultury a ponechá se v ní buď až do konce pokusu nebo se po dané době adsorpce odstraní s médiem buněčné kultury a nahradí se čerstvým médiem pro buněčné kultury. Buněčné kultury se pravidelně, například až do 5. až 7. dne po naočkování mikroskopicky prohlížejí za účelem zjištění CPE .
Podle zvláště výhodného provedení se způsob prokazování podle vynálezu vyznačuje tím, že prokazovací citlivost je asi o jeden stupeň logio vyšší ve srovnání se stavem techniky (fluorescenční protilátková technika (FITC)).
Pomocí buněčné linie podle vynálezu mohou kromě toho být stanoveny také inhibitory rozmnožování virů. Tyto inhibitory mohou působit na všech stupních replikace virů - adsorpce/penetrace, uncoating nukleové kyseliny virů, transkripce a translace, jakož i posttranslační modifikace proteinů, asambláž a vypuzení (budding). Přitom se může jednat o neutralizující protilátku, chemické nebo biologické ligandy proti receptorům virů a buněk, chemoterapeutika, interferon nebo jiné cytokiny. Inhibici rozmnožování virů je možno prokázat tím, že v buněčné linii podle vynálezu není CPE. Provedení pokusu k prokázání inhibice je odborníkům známé.
Vynález se tedy také týká způsobu průkazu inhibitorů rozmnožování virů vztekliny, který spočívá v tom, že se inhibice rozmnožování virů vztekliny v buněčné linii podle vynálezu prokazuje v přítomnosti inhibitoru nepřítomností CPE.
.5·Příklady provedení vynálezu
Následující příklady mají za účel objasnit vynález.
Příklad 1
Získání buněčné linie PH-2
Za účelem vývoje permanentní buněčné linie PH-2 se smísily primární buňky koňské kůže s několika současně v laboratoři rozmnoženými permanentními buňkami opičích ledvin (Vero-M). Přitom bylo s překvapením zjištěno, že morfologicky od Vero-buněk odlišné buňky přerostly fibroblasty koňské kůže. Tyto buňky byly izolovány a označeny jako buňka PH-2.
Karyotypizace buňky PH-2 ve srovnání s Vero-M-buňkou je znázorněna v tabulce 1. PH-2-buňka má oproti Vero-M-buňce odlišný počet chromozomů, jakož i odlišnou sestavu rozdělení chromozomů.
Tabulka 1
| Počet chromozomů | Rozdělení chromozomů | |||
| metacentric- ky | submetacentričky tsubtelocentr ic k3 | akrocentricky ttelocentricky | ||
| Vero-bunecna linie ..... | 55 | 19 | 21 | 15 |
| ťii-z-ounecna linie | 55 | 20 | 27 | 9 |
V PH-2-buněčné linii se rozmnožuje virus vztekliny na rozdíl od výchozí buněčné linie (Vero) s CPE.
- ·®
Příklad 2
Srovnávací titrace viru vztekliny, kmen Flury LEP (ATCC VR-138), v kulturách kuřecích fibroblastů (standardní metoda) a PH-2-buněčných kulturách
Virus rozmnožený v kulturách kuřecích fibroblastů byl získán z produkce Behringwerke AG.
Buňky kuřecích fibroblastů byly podle předpisu naočkovány 24 hodin před zahájením titrace na mikrotitrační destičky. K nanesení PH-2-buněk na mikrotitrační destičky došlo bezprostředně před zahájením titrace. Jako médium pro inokulaci buněk bylo u kuřecích fibroblastů použito médium 3 s 1% fetálním telecím sérem (FKS) a NSP, pro PH-2-buňky EME-médium a 2% FKS a NSP.
Virus vztekliny byl zředěn v logio-stupnich v médiu 3. Vždy z jednoho zředění bylo 8 misek/stupeň zředění příslušného druhu kultury naočkováno 200 μΐ/miska. Potom následovala inkubace kultur v CO2-inkubátoru při 37 °C.
Titr byl odečítán u kultur kuřecích fibroblastů po zbarvení buněk s protilátkami značenými FITC (fluorescenční metoda) 3 až 5 dní po započetí testu, u PH-2-kultur mikroskopicky pomocí virem vztekliny vyvolaného CPE 5. až 7. den po započetí testu. Vyhodnocení titru bylo provedeno metodou podle Kárbera.
Výsledky srovnávacích titrací jsou uvedeny v následující tabulce 2.
Tabulka 2
| Číslo pokusu | Titr v log^g/ml | |
| v kuřecích fibroblastech | v PH-2-buňkách | |
| 1 | 8,0 | 9,0 |
| 2 | V | 8,8 |
| 3 | 7,5 | 8,6 |
| 4 | 7,9 | 8,2 |
| 5 | 7,1 | 8,0 |
| 6 | 6,7 | 7,5 |
| 7 | 6,0 | 7,2 |
| 8 | 4,8 | 6,0 |
| 9 | 4,1 | 5,2 |
| 10 | 3,0 | 4,8 |
| 11 | 2,3 | 4,0 |
| Vyhodnocení testů | Fluorescenční metoda | CPE |
Jak vyplývá ze srovnávacích pokusů, jsou titry zjištěné v PH-2-buňkách mikroskopickým důkazem v průměru o jeden logio-stupeň vyšší než titry nalezené v kuřecích fibroblastech. Tím se ukazuje, že vedle značného zjednodušení způsobu průkazu viru vztekliny je tato metoda také podstatně senzitivnější oproti prokazovacím způsobům, které jsou podle známého stavu techniky k dispozici.
Příklad 3
Rozmnožování viru vztekliny v PH-2-buňkách (rozmnožovací křivka)
PH-2-buňky hustě zarostlých Rouxových misek byly po náhradě média EME-médiem bez séra infikovány virem vztekliny (MOI (multiplicity of infection:0,01) a inkubovány při 37 °C. Podle v tabulce 3 uvedených časových odstupů byly z Rouxovy misky odebrány vzorky a byl stanoven obsah infekčních virových částic. Nalezené hodnoty jsou uvedeny v následující tabulce 3.
| 0 | 1 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | |
| Titr/ml v log/lC | 4,5 | 4,5 | Λ4 | Λ5 | 8,0 | 8,3 | 7,4 |
Jak vyplývá z hodnot v tabulce 3, je možno virus vztekliny rozmnožovat v PH-2-buněčné linii s vysokými titry. Je tedy tato buněčná linie pro produkci antigenu viru vztekliny velmi vhodná.
Příklad 4
Zkoumání reprodukovatelnosti titru u viru vztekliny v různých PH-2-pasážích
Vyšlo se ze stejného přípravku viru vztekliny, kmen
Flury LEP a stanovil se titr v 36., 85. a 100. pasáži
PH-2-buněk.
Následující tabulka 4 obsahuje výsledky pokusných řad.
Tabulka 4
| PH-2 pasáž | Titr viru vztekliny v log^/ml | ||
| Pokus 1 | Pokus 2 | Pokus 3 | |
| 36 | 6,9 | 5,9 | 7,1 |
| 85 | 6,5 | 6.9 | 7,1 |
| 100 | n.s. | 6,9 | 6,9 |
n.s. = nebyl stanoven
Jak vyplývá z výsledků uvedených v této tabulce, vykazuje PH-2-buněčná linie ve zkoušených rozsazích pasáží, mezi
36. a 100. pasáží proti viru vztekliny nezměněnou senzitivitu.
Claims (6)
1. Permanentní buněčná linie s označením PH-2 DSM ACC2165) nebo od ní odvozená buněčná linie.
(č.uložení
2. Způsob rozmnožování virů vztekliny s cytopatogenním efektem (CPE), vyznačující se tím, že se buněčná linie podle nároku 1
a) infikuje virem, který má být rozmnožen,
b) buňky se inkubují a
c) po dosažení dostatečně vysokého titru virových částic se tyto oddělí a vyčistí.
3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že po stupni c) se antigeny virů oddělí z virových částic a vyčistí.
4. Způsob důkazu virů vztekliny pomocí cytopatogenního efektu, způsobeného rozmnožením virů v buněčné linii podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že se
a) buněčná linie přivede do styku se vzorkem, který by měl obsahovat virus vztekliny, který má být prokázán,
b) buňky se inkubují a
c) stanoví se virus po počátku inkubace mikroskopickým zjišťováním CPE podmíněného virovou infekcí.
5. Způsob podle nároku 4, vyznačující se t i m , že citlivost průkazu je asi o jeden stupeň logio vyšší ve srovnání s fluorescenční proti látkovou technikou (FITC).
6. Způsob důkazu inhibitorů rozmnožování virů vztekliny, v y z n a č u j i c i s e t i m , že inhibice rozmnožování virů vztekliny v buněčné linii podle nároku 1 se prokazuje za přítomnosti inhibitoru nepřítomností CPE.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19512057A DE19512057A1 (de) | 1995-03-31 | 1995-03-31 | Zellinie und Verfahren zur Vermehrung von Tollwutviren und deren quantitativen Nachweis |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ304597A3 true CZ304597A3 (cs) | 1998-01-14 |
Family
ID=7758407
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ973045A CZ304597A3 (cs) | 1995-03-31 | 1996-01-30 | Permanentní buněčná linie a způsob rozmnožování virů vztekliny a způsob důkazu virů vztekliny, jakož i způsob důkazu inhibitorů rozmnožování virů vztekliny |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5830638A (cs) |
| EP (1) | EP0817836B1 (cs) |
| JP (1) | JP3632032B2 (cs) |
| KR (1) | KR100397247B1 (cs) |
| AT (1) | ATE263834T1 (cs) |
| AU (1) | AU719795B2 (cs) |
| BR (1) | BR9607783A (cs) |
| CA (1) | CA2216630C (cs) |
| CZ (1) | CZ304597A3 (cs) |
| DE (2) | DE19512057A1 (cs) |
| ES (1) | ES2218579T3 (cs) |
| MX (1) | MX9707444A (cs) |
| SK (1) | SK131097A3 (cs) |
| WO (1) | WO1996030499A1 (cs) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU1957299A (en) | 1998-01-09 | 1999-07-26 | Governing Council Of The University Of Toronto, The | Presenilin protein interactions |
| DE10044648A1 (de) * | 2000-09-08 | 2002-03-21 | Aventis Behring Gmbh | Verfahren zur Vermehrung oder zur Entfernung von Cirocoviren aus biologischem Material |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4664912A (en) * | 1984-10-01 | 1987-05-12 | Wiktor Tadeusz J | Process for the large scale production of rabies vaccine |
-
1995
- 1995-03-31 DE DE19512057A patent/DE19512057A1/de not_active Withdrawn
-
1996
- 1996-01-30 KR KR1019970706794A patent/KR100397247B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1996-01-30 AU AU45399/96A patent/AU719795B2/en not_active Ceased
- 1996-01-30 DE DE59610968T patent/DE59610968D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-30 WO PCT/EP1996/000424 patent/WO1996030499A1/de active IP Right Grant
- 1996-01-30 MX MX9707444A patent/MX9707444A/es unknown
- 1996-01-30 JP JP52882796A patent/JP3632032B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-30 BR BR9607783A patent/BR9607783A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-01-30 CA CA2216630A patent/CA2216630C/en not_active Expired - Fee Related
- 1996-01-30 US US08/913,317 patent/US5830638A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-30 ES ES96901343T patent/ES2218579T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-30 CZ CZ973045A patent/CZ304597A3/cs unknown
- 1996-01-30 EP EP96901343A patent/EP0817836B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-01-30 AT AT96901343T patent/ATE263834T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-01-30 SK SK1310-97A patent/SK131097A3/sk unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE19512057A1 (de) | 1996-10-02 |
| US5830638A (en) | 1998-11-03 |
| EP0817836B1 (de) | 2004-04-07 |
| KR100397247B1 (ko) | 2003-12-24 |
| WO1996030499A1 (de) | 1996-10-03 |
| ES2218579T3 (es) | 2004-11-16 |
| KR19980703389A (ko) | 1998-10-15 |
| AU719795B2 (en) | 2000-05-18 |
| CA2216630C (en) | 2010-01-26 |
| DE59610968D1 (de) | 2004-05-13 |
| EP0817836A1 (de) | 1998-01-14 |
| MX9707444A (es) | 1997-12-31 |
| AU4539996A (en) | 1996-10-16 |
| CA2216630A1 (en) | 1996-10-03 |
| JPH11502412A (ja) | 1999-03-02 |
| BR9607783A (pt) | 1998-07-07 |
| SK131097A3 (en) | 1998-02-04 |
| ATE263834T1 (de) | 2004-04-15 |
| JP3632032B2 (ja) | 2005-03-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rubin | An analysis of the assay of Rous sarcoma cells in vitro by the infective center technique | |
| Gendelman et al. | Tropism of sheep lentiviruses for monocytes: susceptibility to infection and virus gene expression increase during maturation of monocytes to macrophages | |
| Vanderplasschen et al. | A novel virus binding assay using confocal microscopy: demonstration that the intracellular and extracellular vaccinia virions bind to different cellular receptors | |
| Weiss | Rhabdovirus pseudotypes | |
| Garner et al. | Mycoplasma detection in cell cultures: a comparison of four methods | |
| Brussel et al. | Use of a new RNA next generation sequencing approach for the specific detection of virus infection in cells | |
| Sakoda et al. | Establishment of a serum-free culture cell line, CPK-NS, which is useful for assays of classical swine fever virus | |
| CN106754724A (zh) | 一种永生化的牛精原干细胞系及其构建方法 | |
| Ventura et al. | Virus and antibody diagnostics for swine samples of the Dominican Republic collected in regions near the border to Haiti | |
| CZ304597A3 (cs) | Permanentní buněčná linie a způsob rozmnožování virů vztekliny a způsob důkazu virů vztekliny, jakož i způsob důkazu inhibitorů rozmnožování virů vztekliny | |
| Habel | Malignant transformation by polyoma virus | |
| Kawai et al. | A sensitive bioassay system for detecting defective interfering particles of rabies virus | |
| Schmidt et al. | Comparison of immunofluorescence and immunoperoxidase staining for identification of rubella virus isolates | |
| Kosaka et al. | Failure to detect papovavirus-associated T antigens in human brain tumor cells by anticomplement immunofluorescence | |
| Nomura et al. | Mutation of polioviruses with respect to size of plaque: I. Selection of minute plaque mutants of three types of polioviruses in tissue cultures | |
| Zhang et al. | Identification of IgH gene rearrangement and immunophenotype in an animal model of Epstein–Barr virus‐associated lymphomas | |
| Vacquier et al. | In vitro infectivity assay for mouse mammary tumor virus. | |
| Dangler et al. | Limitations of in situ hybridization for the detection of bluetongue virus in blood mononuclear cells | |
| Smith | An enzyme immunoassay for identification and quantification of infectious murine parvovirus in cultured cells | |
| Al-Garib et al. | Detection of antibody-forming cells directed against Newcastle disease virus and their immunoglobulin class by double immunoenzyme histochemistry | |
| CN115219726B (zh) | 一种SARS-CoV-2假病毒检测血清中中和抗体滴度的方法 | |
| Mamman et al. | Serological detection and distribution of viruses associated with lima beans (Phaseolus lunatus L.) in Kaduna State, Nigeria | |
| WO1992009704A1 (en) | Method for in situ detection and identification of nucleic acid sequences | |
| Luciano et al. | A general method for the detection of potyviral gene products in plant protoplasts and tissue | |
| Lawson | Pathogen detection and elimination |