CZ302799B6 - Biologicky úcinná frakce rostlinného melaninu, zpusob její výroby a její použití - Google Patents
Biologicky úcinná frakce rostlinného melaninu, zpusob její výroby a její použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ302799B6 CZ302799B6 CZ20010474A CZ2001474A CZ302799B6 CZ 302799 B6 CZ302799 B6 CZ 302799B6 CZ 20010474 A CZ20010474 A CZ 20010474A CZ 2001474 A CZ2001474 A CZ 2001474A CZ 302799 B6 CZ302799 B6 CZ 302799B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- plant
- biologically active
- active fraction
- melanins
- melanin
- Prior art date
Links
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 116
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 56
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 34
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 title claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 19
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 18
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 claims abstract description 9
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims abstract description 8
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 150000001765 catechin Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 claims abstract description 6
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 38
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 16
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 14
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 14
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 12
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 claims description 9
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 230000004154 complement system Effects 0.000 claims description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 claims description 3
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 3
- PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N (+)-catechin Chemical compound C1([C@H]2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C[C@@H]2O)=CC=C(O)C(O)=C1 PFTAWBLQPZVEMU-DZGCQCFKSA-N 0.000 claims description 2
- 229950001002 cianidanol Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 229910001854 alkali hydroxide Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 65
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 34
- 239000000047 product Substances 0.000 description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 24
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 24
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 21
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 14
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 13
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 13
- 239000002585 base Substances 0.000 description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 11
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 11
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 11
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 11
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 11
- 241000157282 Aesculus Species 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 7
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 6
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N abts Chemical compound S/1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N\N=C1/SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-CLFAGFIQSA-N 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 210000004694 pigment cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- -1 aromatic amino acids Chemical class 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SGNZYJXNUURYCH-UHFFFAOYSA-N 5,6-dihydroxyindole Chemical compound C1=C(O)C(O)=CC2=C1NC=C2 SGNZYJXNUURYCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000343557 Melanina Species 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 3
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 3
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 3
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 3
- 239000003574 free electron Substances 0.000 description 3
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 description 3
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 3
- 239000010903 husk Substances 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 230000005414 paramagnetic center Effects 0.000 description 3
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 3
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 3
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 3
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 3
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 3
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 3
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 3
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 3
- VIYKYVYAKVNDPS-HKGPVOKGSA-N (2s)-2-azanyl-3-[3,4-bis(oxidanyl)phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 VIYKYVYAKVNDPS-HKGPVOKGSA-N 0.000 description 2
- KVJHGPAAOUGYJX-UHFFFAOYSA-N 1,1,3,3-tetraethoxypropane Chemical compound CCOC(OCC)CC(OCC)OCC KVJHGPAAOUGYJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 2-thiobarbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=S)N1 RVBUGGBMJDPOST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MGADZUXDNSDTHW-UHFFFAOYSA-N 2H-pyran Chemical compound C1OC=CC=C1 MGADZUXDNSDTHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710134784 Agnoprotein Proteins 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008620 Fagopyrum esculentum Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 235000003935 Hippophae Nutrition 0.000 description 2
- 241000229143 Hippophae Species 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 108010029165 Metmyoglobin Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 2
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 2
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 2
- 241000238374 Sepia officinalis Species 0.000 description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 2
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 2
- 244000301083 Ustilago maydis Species 0.000 description 2
- 235000015919 Ustilago maydis Nutrition 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 239000001058 brown pigment Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 108010044238 ferrylmyoglobin Proteins 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 2
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 2
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000036564 melanin content Effects 0.000 description 2
- 108091043623 miR-1966 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- OENHRRVNRZBNNS-UHFFFAOYSA-N naphthalene-1,8-diol Chemical compound C1=CC(O)=C2C(O)=CC=CC2=C1 OENHRRVNRZBNNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000001429 visible spectrum Methods 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- DILDHNKDVHLEQB-XSSYPUMDSA-N 2-hydroxy-17beta-estradiol Chemical compound OC1=C(O)C=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DILDHNKDVHLEQB-XSSYPUMDSA-N 0.000 description 1
- XIMADJWJJOMVID-UHFFFAOYSA-N 2-phenyl-3,4-dihydro-2h-chromene-3,4-diol Chemical compound OC1C(O)C2=CC=CC=C2OC1C1=CC=CC=C1 XIMADJWJJOMVID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IITIZHOBOIBGBW-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole Chemical compound C1=CC=C2N(CC)CSC2=C1 IITIZHOBOIBGBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N Abietic-Saeure Natural products C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001232566 Chamaeleo sp. Species 0.000 description 1
- 206010011968 Decreased immune responsiveness Diseases 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHMIDUVKSGCHAU-UHFFFAOYSA-N Dopaquinone Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC(=O)C(=O)C=C1 AHMIDUVKSGCHAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 235000009419 Fagopyrum esculentum Nutrition 0.000 description 1
- DOJXGHGHTWFZHK-UHFFFAOYSA-N Hexachloroacetone Chemical compound ClC(Cl)(Cl)C(=O)C(Cl)(Cl)Cl DOJXGHGHTWFZHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002397 Kinins Human genes 0.000 description 1
- 108010093008 Kinins Proteins 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- AHMIDUVKSGCHAU-LURJTMIESA-N L-dopaquinone Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CC1=CC(=O)C(=O)C=C1 AHMIDUVKSGCHAU-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 241001344131 Magnaporthe grisea Species 0.000 description 1
- 241001330975 Magnaporthe oryzae Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N Rosin Natural products O(C/C=C/c1ccccc1)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 102000005686 Serum Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033220 Xanthine oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010093894 Xanthine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010208 anthocyanin Nutrition 0.000 description 1
- 229930002877 anthocyanin Natural products 0.000 description 1
- 239000004410 anthocyanin Substances 0.000 description 1
- 230000003217 anti-cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- 230000036782 biological activation Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- JJWKPURADFRFRB-UHFFFAOYSA-N carbonyl sulfide Chemical compound O=C=S JJWKPURADFRFRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000010001 cellular homeostasis Effects 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012993 chemical processing Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 239000000571 coke Substances 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000008406 cosmetic ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000005115 demineralization Methods 0.000 description 1
- 230000002328 demineralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- VJNCICVKUHKIIV-UHFFFAOYSA-N dopachrome Chemical compound O=C1C(=O)C=C2NC(C(=O)O)CC2=C1 VJNCICVKUHKIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 239000002038 ethyl acetate fraction Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N flavone Chemical compound O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 208000021302 gastroesophageal reflux disease Diseases 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 235000002532 grape seed extract Nutrition 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013095 identification testing Methods 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 229960004502 levodopa Drugs 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 description 1
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 1
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 description 1
- 230000003061 melanogenesis Effects 0.000 description 1
- 108010020344 melanoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003533 narcotic effect Effects 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005025 nuclear technology Methods 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 230000006365 organism survival Effects 0.000 description 1
- 235000020825 overweight Nutrition 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 230000010363 phase shift Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000590 phytopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 239000004069 plant analysis Substances 0.000 description 1
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000012667 polymer degradation Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003537 radioprotector Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 description 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 210000004895 subcellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 230000035922 thirst Effects 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N trans-cinnamyl beta-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC=CC1=CC=CC=C1 KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
- C09B61/00—Dyes of natural origin prepared from natural sources, e.g. vegetable sources
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/77—Sapindaceae (Soapberry family), e.g. lychee or soapberry
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
Abstract
Frakce rostlinného melaninu sestávající se z monomerních jednotek rostlinných flavonoidu, predevším katechinu a leukoantokyanidinu, se sumárním empirickým vzorcem H-formy [C.sub.34-59 .n.O.sub.14-23.n. H.sub.32-44 .n.N.sub.6-8.n.].sub.n.n., kde n = 6 až 8, s molekulovou hmotností (5 .+-. 1).10.sup.3.n., s množstvím -OH skupin 4,02 až 4,05 % hmotn., s množstvím =O skupin 1,04 až 1,06 % hmotn., s obsahem jednotlivých prvku v % hmotn.: C 49,44 až 49,52; H 5,10 až 5,73, N 1,15 až 1,24; O 41,20 až 42,10; s koncentrací nespárovaných elektronu 1018 až 1022 spin/g a jasnými spektrálními carami v oblastech 3433, 1620, 1400 a 1200 až 1100 cm.sup.-1.n.. Zpusob výroby frakce rostlinného melaninu spocívá v tom, že na rostlinnou surovinu, která obsahuje nativní polymer a/nebo základní stavební jednotky, jako katechiny a leukoantokyanidiny, se pusobí 0,05 až 0,3 M vodným roztokem hydroxidu alkalického kovu pri teplote 15 až 75 .degree.C, pH extraktu se upraví na hodnotu 1 až 2 prídavkem anorganické kyseliny na bázi chlóru, pricemž vyloucený sediment se vycistí a následne vysuší pri teplote 100 až 110 .degree.C.
Description
Oblast techniky
Vynález se týká melaninů, vhodných pro použití v potravinářském a farmaceutickém průmyslu, lékařství a elektronice.
Vynález se týká také způsobu výroby úzko molekulové frakce melaninů (tedy melaninů s úzkým rozmezím molekulové hmotnosti) ze surovin rostlinného původu tzv. fytomelaninu, který má definované a reproduko vatě tne fyzikálně-chemické vlastnosti a vyšší biologickou aktivitu než známé popsané rostlinné melaniny, a který je vhodný pro praktické použití v průmyslu a ve farmakologii.
Dosavadní stav techniky
Melaniny - všeobecný název pro skupiny vysokomolekulámích černých a hnědých pigmentů, vznikajících při oxidaci a polymerizaci fenolů. Melaniny se běžně nachází v přírodě a jsou jedním z nej častějších zoochromů. Nacházejí se ve vlasech, očích, kůži, ve vnitřních orgánech, jsou Často lokalizované v podstatě v povrchových částech organizmů. Dále se nachází v tmavých semenech, bobulích, lístcích květů, rostlin. Opálení člověka, kůže černochů a mnohé druhy živočichů vděčí svému zbarvení především melaninům jak je uvedeno například v Nicolaus R.A.: Melanins, Paris-Hermann 1968, strana 310; Ljach S.P., Rubán R.D.: Mikrobnie melaniny. Moskva. Nauka 1972, s. 184 a Bidzilja N.I.: Svobodnye radikály voblucennych rastenijach isemenach. Kiev. Naukova dumka 1972, strana 210. Samotný termín „melanin“ vznikl z řeckého slova a označoval význam „černý“. Melaniny jsou unikátní biopolymery, mající v živém organizmu především funkci ochrany proti UV-záření, ionizační radiaci, vysokým a nízkým teplotám. V poslední době se melaninogeneze představovala jako komplexní adaptace živých organizmů na hranicích adaptibility života. Je možné najít unikátní příklady rezistence živých organizmů k geofyzikálním a geochemickým faktorům v extrémních situacích. Jsou to především vysoce položené oblasti, kde ve výšce 4 až 5 km houby s černým pigmentem představují jedinou mikrofloru, a také horké písečnaté a chladné kamenité pouště některých regionů [Ljach S.P.: Mikrobnyj melaninogenez i ego funkcii. Moskva, Nauka 1981,274s; Ostrovskaja M., Doncov A.: FyziologiČeskyje funkcii melanina v organizme. Fyziologija čelověka 1985, strany 670 až 679.]. Známé jsou také organizmy, stabilní při ozáření subletálními dávkami řádu 900 Krad. Se ztrátou pigmentu klesá také inertnost k γ-záření. Nesmírně zajímavou představou jsou otázky týkající se melaninů z paleobiologického hlediska. Spory hub s vysokým obsahem melaninů se neobyčejně často objevují ve velkých množstvích ve vrstvách ze začátku „křídy“, kdy bylo prokázané vymření mnohých druhů zvířat a rostlin. Tato perioda je shodná s periodou přechodu Země pres „magnetickou nulu“, a tak také její neschopnosti ochrany před kosmickou radiací [Bidzilja N.I.: Svobodnye radikály v oblucennych rastenijach i semenach, Kiev. Naukova dumka 1972, strana 210; Ljach S.P.: Mikrobnyj melaninogenez i ego funkcii. Moskva, Nauka 1981, strana 274; Ostrovskaja M., Doncov A.: Fyziologičeskyje funkcii melanina v organizme, Fyziologija čelověka 1985, strany 670 až 679.]. Takže existuje také vědecky podložený základ myšlence, že melaniny byly ten „blahorodný“ materiál, který posloužil při chemické evoluci některých polymemích předbio logických struktur. Možnost výše uvedeného je daná charakterem samotného procesu syntézy těchto látek a také vlastností současných melaninů. Velkou pozornost sí především zasluhuje lehkost, s jakou se tyto pigmenty syntetizují při modelování podmínek, které, jak se předpokládá, existovaly na Zemi v periodě vzniku složitých látek z aromatických struktur [Blois M.S.: Proischozdenije předbio logičeskych systém. Moskva, Mir 1966, strana 464; Pavlovskaja T.E.: Abiogenez i nacalnyje stadii evolucii žizní. Moskva, Nauka 1968, strana 216; Blois M.S.: The melanins, their synthesis and structure. Photochem and Photobiol. Rev. 1978 roč. 3, strana 151; Swan G.A.: Current knowledge of melanin structure. Pigment cell. roč. 1. Basel: Harger 1973, strana 151.].
- 1 CZ 302799 B6
Klasifikace melaninů
Melaniny, v závislosti na biologických objektech, které je syntetizují, se rozdělují na tři základní skupiny: mikrobiální, živočišné a rostlinné. Existují také syntetické melaniny, které vznikají autooxidací 3,4-dioxidifenylalaninu (DOPA-melanin) jak uvádějí například Mason H.S.: In Pigment Cell Growth, Acad. Press lnv., N.Y. 1953, strana 235, Peers E.: Hystochemistry. Moscow, 1L 1962, strana 640, Keretz D.: Ann. intab. dermatoL din. esperimentele 1961, strana 268 a Thomas M.: Modem methods of plant analysis. Springer-Verlag. 1953, 4. strana 661. S mikrobiálními io melaniny se setkáváme pouze u některých mikroorganismů patřících především k rodům: Bacíllus, Pseudomonas a Azatobaster. Jsou to černé a hnědé, někdy červeno-hnědé pigmenty, všeobecně nerozpustné v organických rozpouštědlech, rozpustné v zásadách s nespecifickými spektrálními charakteristikami. Mnohé skutečnosti dokazují, že se jedná o oxidační procesy, které jsou základem při vzniku bakteriálních melaninů. Pozornost si vyžaduje ten fakt, že absolutní většina mikroorganismů syntetizujících tyto pigmenty patří k aerobním formám. Živočišné melaniny se lokalizují v povrchových tkáních - kůži, vlasech, srsti, peří a sítnici očí. Rostlinné melaniny jsou popsané velmi málo. Je známé, že se nachází v povrchových tkáních některých semen a plodů. Dosud jsou známé a popsané tři způsoby izolace melaninů rostlinného původu, a to fytomelaninu z Vitis Vínifera L. Tyto preparáty jsou však sumárními produkty se širokým spektrem fyzikálně20 chemických vlastností, což má za následek, že není možné použít tento produkt za základ léčiva, jak je uvedené v Zherebin J.L. a kol.: Sposob polučenija vodorostvorimogo melanina. t.A.S.SSSR patent.N.939446. 1983, Sendega R.V., Venger L.A., Baklanova L.V.: Sposob polučenija enomelanina. Patent A.S.SSSR N. 1345606. 1987 a Godzenko A.I. a kol.: Sposob polučenija enomelanina. Patent RU 07,09,93. bl.N.33-36. Mezi melaniny je nejvíce popsaný a známý tzv. syntetický melanin, a nebo také DOPA-melanin, který vzniká autooxidací 3,4dioxyfenylalaninu (DOPA). Oxidace DOPA probíhá takovým způsobem a takovými stadii, jako fermentativní autooxidace ty rozinu v živých organizmech, jejímž výsledkem je vznik živočišných a mikrobiálních melaninů. Schéma tohoto procesu je uvedené v Villee Claude A., Dethier Vincent G.: Biological principles and processes. Philadelphia—London-Toronto. 1971, strana 822 a Brechtlová, Halčák, Chandoga a kol.: Lekárska biochémia I., Asklepios. 1992, strana 228,
NH
TYROS1N
3,4-DIHYDROXVFENYLALANlN (DOPA)
HO
HO
CH -CH-COOH
NH
DOPACHROM
COOH
INDOLCHtNON
MELANIN
-3CZ 302799 B6
Chemická struktura a melaninogeneze
Chemická struktura přírodních melaninů není dodnes známá. Melaniny mají velice složitou polymerní strukturu a vykazují typovou různorodost, takže nemůžeme získat vyčerpávající popis struktury dokonce ani u těch pigmentů, které byly několik roků předmětem studia. V současnosti neexistuje dokonce ani jednotný názor na to, které sloučeniny odpovídají pojmu „melanin“. Mason popisuje melaniny jako vysoko molekulární polymery, které vznikají při enzymatické oxidaci fenolů, především pyrokatecholu, 3,4-dihydroxyfenylalaninu (DOPA) (Ia) a 5,6—dihydroxyindolu, [Mason H.S.: In Pigment Cell Growth, Acad. Press lne., N.Y. 1953, strana 235,].
(ta)
Podobný výrok napsal Nicolaus: „Přírodní melaniny jsou složité makromolekuly, které vznikají při enzymatické oxidaci orto-d i fenolů, většinou nenahrazených, takových jako 5,6-dihydroxyindol, pyrokatechinol a 1,8—dihydroxynaftalen“ [Nicolaus R.A.: Melanins, Paris-Hermann 1968, strana 310.].
OH OH
db)
Peers a Keretz popisují mel ani nové pigmenty, vznikající při oxidaci aromatických aminokyselin: ty rozinu a dihydroxyfenylalaninu [Peers E.: Hystochemistry. Moscow, IL 1962, 640s; Keretz D.: Ann.intab.dermatol,din.esperimentele 1961, strana 268.]. Thomas navrhuje považovat za melanin pouze dusík obsahující pigmenty, to je deriváty 5,6-dihydroxyindolu, který se nachází v oxidovaném nebo redukovaném stavu [Thomas M.: Modem methods of plant analysys Springer-Verlag. 1953,4. strana 661.].
V současnosti existují dvě základní teorie vzniku a struktury zumelaninů. První pojednává o tom, že zumelaníny jsou v podstatě homopolymery indoI-5,6-chinonu [Pulman B., Pulman A.: Kvantovaja biochemia. Moskva, Miř 1965, strana 654.]. Druhá, Nicolausova interpretace, vyplývá z množství experimentů uskutečňovaných na základě předpokladu, že v mechanizmu melanogeneze probíhá polymerizace volných radikálů různých monomerů. PolyfunkČnost monomerů a nepřítomnost strohé stavby vazeb mezi radikály vede k syntéze polymerů s nerovnoměrným obsahem a organizační strukturou, což nakonec přispělo k názoru, že v přírodě pravděpodobně neexistují dva absolutně shodné melaninové pigmenty [Nicolaus R.A.: Melanins, Paris-Hermann 1968, strana 310.]. Proto je melanin trojrozměrný polymer, jehož počet možných struktur se rovná množství druhů molekul melaninů v přírodě. Po dlouhou dobu se za základní model považoval pigment spor houby Ustilago maydis. Je to prakticky jediný melanin (mikrobiální), jehož struktura je všeobecně přezkoumaná a potvrzená. (Vzorec Ila)
-4CZ 302799 B6
(Ha)
Nicolaus usuzuje, že při polymerizacÍ pyrokatechinolu na melanin vznikají složíte cyklické struktury s kondenzovanými kruhy, které jsou přítomny v různých stupních oxidace [Nicolaus R.A.: Melanins, Paris-Hermann 1968, strana 310; Ljach S.P., Rubán R.D.: Mikrobnye melaniny. Moskva. Nauka 1972, strana 184.].
Druhým, v podstatě prozkoumaným melanínem je černý pigment, který vzniká ve zralých sporách houby Aspergillus niger. Patří do skupiny tzv. alomelaninů a nazývá se Aspergillus nigermelanín. [Nicolaus R.A.: Melanins, Paris-Hermann 1968, strana 310; Blois M.S.: Proíschozdenije předbiologičeskych systém. Moskva, Mir 1966, strana 464.] (Vzorec lib)
(lib)
V současnosti je možné předpokládat, že základ melaninogeneze v živých organizmech je proces založený na fermentační oxidaci tyrozinu přes DOPA v přítomnosti tyrozinázy na dopachinon, z kterého množstvím oxidací, dekarboxylací a konjugací vzniká pigment. To je „klasická cesta“.
Stejně tak ale někdy syntéza probíhá odlišnou cestou a melanogenem může být nejen tyrozin, ale také jiné fenoly, například pyrokatechinol. Ale přesto je třeba připomenout, že geneticky podmíněná schopnost vytvářet tyrozinázu a melaninové pigmenty v živých organizmech je celkově vysoce stabilní [Brechtlová, Halčák, Chandoga a kol.: Lekárska biochémia 1., Asklepios. 1992, strana 228; Škárka B., Ferenčík M.: Biochémia. Bratislava, Vydavatelství Alfa 1992, strana 846.].
-5 CZ 302799 B6
Identifikace melaninů
Jednou z příčin nedostatečného prozkoumání melaninů je problematika izolace z biologických objektů, protože tyto pigmenty jsou nerozpustné ve většině známých organických a minerálních rozpouštědel [Nicolaus R.A.: Melanins, Paris-Hermann 1968, strana 310; Ljach S.P.: Mikrobnyj melaninogenez i ego funkcii. Moskva, Nauka 1981, strana 274; Blois M.S.: The melanins, their synthesis and structure. Photochem and Photobiol. Rev. 1978 roč. 3, strana 151.]. Kromě toho se melanin nachází v biologických objektech in vivo a je pružně navázaný na jiné biopolymery: bílkoviny, polysacharidy, lipidy, ostatní pigmenty a příměsi.
Těžkosti a problémy oddělení (izolace) spočívají také v jejich koloidní podstatě a neschopnosti krystalizovat. To vede k tomu, že existují dvě základní metody izolace me lan i nových pigmentů.
První skupina metod spočívá nejdříve v extrakci melaninů vhodnými rozpouštědly a potom v odstranění doprovodných příměsí. Jediným, téměř univerzálním rozpouštědlem melaninů jsou 0,5 až l,0M vodné roztoky zásad NaOH a KOH. Tyto vlastnosti melaninů jsou podmíněné jejich póly fenolovou strukturou. Proto se také zásaditá extrakce používá na izolování z buněk a tkání živočichů, mikrobiálních a některých rostlinných objektů.
Druhá skupina metod extrakce melaninů se představuje jako způsob, při kterém se odstraňují všechny ostatní materiály kromě melaninů. Toto odstranění nepotřebných materiálů se uskutečňuje kyselou hydrolýzou a promýváním vhodnými rozpouštědly až do té doby, dokud nezůstane požadovaný preparát - melanin [Ljach S.P., Rubán R.D.: Mikrobnye melaniny, Moskva, Nauka 1972, strana 184.].
V důsledku chemické složitosti a různorodosti biologických materiálů a specifických vlastností samotných melaninů není možné navrhnout standardní metodu vhodnou pro všechny druhy přírodních melaninů, je nezbytný individuální přístup. Například, při extrakci ustilagomelaninu se používá druhý způsob preparativní techniky. Na spory houby Ustilago maydis se nechá působit koncentrovaná HCI a potom se postupně různými rozpouštědly odstraňují příměsi. Melaniny některých objektů se izolují v podstatě snadno „měkkými metodami“. Například melanin duhovky býčího oka a nebo melanin z atramentu chobotnice Sepia officinalis - sépiomelanin. Tyto preparáty se izolují bez zpracování kyselinou a nebo zásadami, jelikož se nachází v biologickém objektu ve formě sodných solí. Takových příkladů je však velmi málo. Jako základní se používá způsob zásadité extrakce s následným vy srážením kyselinou pro melaniny živočišného, mikrobiálního a také rostlinného původu [Nicolaus R.A.: Melanins, Paris-Hermann 1968, strana 310.].
Obsah melaninů v buňkách hub je značně odlišný v širokém rozmezí: od 2 až 3 % hmotn. až do 35 až 40 % hmotn. Obsah melaninů v rostlinných objektech je podstatně nižší, a to od 0,2 do 0,3 % hmotn. až 6 až 8 % hmotn.
Jedním z testů identifikace melaninů jsou VIS-spektra. Melaniny mají jasně spektrální ěárv absorpce, jednu v oblasti vlnových délek 1600 až 1700 cm'1, druhou v oblasti 3300 až 3500 cm' .
Tyto spektrální čáry odpovídají karbonylovým skupinám (absorpce v oblasti 1700 cm ), uhlíkuhlíkovým vazbám (absorpce v oblasti 1600 cm' ), NH4 a OH—skupinám (absorpce v oblastí 3300 až 3500 cm'1).
Pro melaniny přírodního i syntetického původu je charakteristické UV-spektrum, ve kterém nejsou píky, nemají ani jasná absorpční pásma, hlavně v oblasti krátkých vlnových délek. Podobná charakteristika je patrná také v oblasti viditelné části spektra s nakloněnou diagonálou v hranicích -0,0019 až -0,0040. Tyto optické charakteristiky jsou pro melaniny typické.
Charakteristické jsou také různé chemické reakce, s jejichž pomocí je možné vyvodit závěr o přítomnosti melaninových monomerů v preparátu:
-6CZ 302799 B6
a) nerozpustnost ve vodě a většině organických rozpouštědel
b) úplná rozpustnost v 0,5M NaOH a nebo KOH
c) vysrážení se z roztoků v přítomnosti FeCh
d) odbarvování při použití silných oxidačních Činidel (KMnO4, H2O2)
e) schopnost regenerovat amoniakální roztok AgNO3
Nej důležitější charakteristika melan lnových pigmentů je přítomnost paramagnetických center v koncentraci 1015 až 1018 spin/g [Nicolaus R.A.: Melanins, Paris-Hermann 1968, strana 310; Bidzilja N.I.: Svobodnye radikály v oblucennych rastenijach i semenach. Kiev. Naukova dumka 1972, strana 210; Ostrovskaja M., Doncov A.: Fyziologičeskyje funkcii melanina v organizme. Fyziologia čelověka 1985, strany 670 až 679.].
Z biologické stránky stanovení melaninové podstaty pigmentů obnáší izolování tyrozinázy a jejich substrátů v daných objektech, a také stanovení přímé vazby mezi tyrozinázovou aktivitou a melaninogenezí (pigmentogenezí).
Identifikace melaninu způsobem na základě jednoho-dvou testů je nejednoznačná, je nevyhnutelné použít celý komplex testování.
Přítomnost nezaplněné spodní energetické hladiny v melaninech a jejich schopnost „lovit“ z okolního prostředí nespárované elektrony vede k tomu, že melan in ochraňuje před radiačním zářením pohlcováním nespárovaných elektronů volných radikálů, vznikajících v systémech při účinku ionizující radiace [Bidzilja N.I.: Svobodnye radikály v oblucennych rastenijach i semenach. Kiev. Naukova dumka 1972, strana 210; Godzenko A.í. a kol.: Sposob polučenija enomelanina. Patent Ru. 07,09,93. bl.N.33-36.].
V posledních letech byly publikované výsledky experimentálních výzkumů, které potvrdily vlastnost melaninú ochraňovat před radiačním zářením. Přitom, tyto vlastnosti projevují melaniny nejen, když se nachází v objektu, ale také po jejich umělém zavedení do živého organizmu [Hill
H. Z., Hill G.J.: Eumělanin Causes DNA strand Breaks and ktlls Cells. - Pigments Cell Research
I, 1987, 163 až 170; Hill H.Z., Peak J.G., Peak M.J: Introduction of DNA-Protein crosslinks in melanotic cloudman S91 mouše melanoma cells by monochromatic 254 and 405 nm light. Pigment Cell Research 2: 1989, strany 427 až 430; Tsuneaki Chida, Hugh D. Sisler: Effect of inhibitors of melanin biosynthesis on appresorial penetration and reductive reactions ín Pyricularia oryzae and Pyricularia grisea. Pesticide Biochemistry and Physiology 29, 1987, strany 244 až 251; Jacobsohn M.K., Dobré V.C., Bránám Ch„ Jacobsohn G.M.: Oxidation of 2hydroxyestradiol and its incorporation into melanin by mushroom tyrosinase. J. Steroid Bíochem. Vol. 31, No. 4A, 1988, s. 377 až 385; Giovanni Sichel: Biosynthesis and functíon of melanins in hepatic pigmentary systém, Pigment Cell Research 1: 250 až 258, 1988.]. Experimenty, prováděné na černých buňkách kvasinek Nadsomiela nigra obsahujících melanin ukázaly, že černé buňky jsou podstatně rezistentnější k ozáření než buňky kvasinek, které neobsahovaly melaniny. Při umělém pěstování kvasinek v biologické půdě s obsahem hexachloracetonu, inhibitoru melaninogeneze, byla vypěstována kultura, která úplně ztratila rezistenci k záření [Chruljova I.M.: Issledovanije struktury i svojstv melanina i ego syntetičeskych analogov. Ref., Moskva 1973, strana 20; Baraboj V.A.: Biologičeskoe dejstvije rastitelnych fenolnych soedinenij. Kiev. Naukova dumka 1976, strana 260; Zherebin J.L. a kok: Farmakologičeskije svojstva enomelaninovych pigmentů. Doklady AN SSSR seria B 1984, s. 64 až 68.].
Výsledky praktických pokusů a přehled dostupné literatury dává předpoklad vyvinutí melaninového preparátu sloužícího jako účinná ochrana živých buněk organizmů vůči radiaci, vyrobeného na bázi přírodních materiálů a produktů látkové přeměny metabolizmu.
-7 CZ 302799 Β6
Protinádorová aktivita melaninových pigmentů
V současnosti je většina výzkumných pracovníků a vědců názoru, že rakovinná buňka se odlišuje od normální ne tím, že v ní chybí některé specifické látky, ale poměrem komponent biochemických systémů, patřících k normální buňce. Práce N. M. Emanuela a kol. potvrdily, že pro negativní růst je podstatná změna koncentrace volných radikálů v biochemických komponentách buňky, důsledkem je názor, že antioxidanty musí mít vliv na rozvoj těchto procesů.
To byl pro autory základ předpokladu, že tato ťýzikálně-chemická vlastnost melaninů, jako je antioxidační aktivita, je důležitý ukazatel procesu buněčného metabolizmu. Na tom je založena schopnost fenolových skupin reagovat s volnými radikály - s aktivními centry biochemického systému buňky. Elementární akt spolupůsobení inhibitoru s volným radikálem R vede v systému ke vzniku radikálu inhibitoru, stabilnějšího a méně reaktivního než vlastní radikál R [Chruljova I.M.: Issledovanije struktury i svojstv melanina i ego syntetiěeskych analogov. Ref., Moskva 1973, strana 20.].
Tato hypotéza byla potvrzena ve vědeckých pracích. V nich jako předmět výzkumu byl vybrán syntetický, přírodní (živočišný) a biosyntetický melanin. Živočišný melanin byl získán pomocí kyselino-zásadité metody z myšího melanomu Harding-Passa. Biosyntetický melanin se syntetizoval z DOPA v přítomnosti tyrozinázy, izolované z myšího melanomu Harding-Passa [Chruljova I.M., Berlin A.A.: Protivoopucholjevaja aktivnost syntetičeskych, biosyntetičeskych i prirodnych melaninů. Izvestija AN SSSR. 1973 č. 3, strany 438 až 442,]. Na základě provedených experimentů bylo dokázané, že melaniny nejsou karcinogenní a výsledky umožnily potvrdit, že melaniny mají schopnost protinádorové aktivity v dávkách od 150 do 250 mg/kg a dosahují účinku 50 až 60% inhibice růstu nádoru.
ímunogenní aktivita melaninových pigmentů
V současnosti existuje značné množství lékařských preparátů, jako v lékařství nikdy předtím. Téměř vždy, jako pravidlem, se po nějaké době v literatuře objevují články, pojednávající o zvýšené citlivosti k novému preparátu. Objevila se řada pokusů stanovit závislost mezi fýzikálněchemickými vlastnostmi a imunogenní aktivitou [Vladimirov V.G., Krasilmikov I.J., Arapov O.B.: Radioprotektory. Kiev. Naukova dumka, 1980, s. 264; VÍDAL cat. -Lekarstvennyje preparáty v Rosii, Astra-Pharm-Servis, Moskva, 1997, strana 1166.] léčivých sloučenin proto, aby bylo možné předpovídat a posoudit jejich alergenitu. Přesto dodnes není možná aplikace takovýchto pravidel za stavu současných vědeckých poznatků, ale jsou stanovené určité skutečnosti, které je možno shrnout následujícím způsobem.
Imunogenní aktivita antigenu závisí na jeho fýzikálně-chemických vlastnostech a na schopnosti imunizovaného organizmu odpovědět na daný antigen. Podle schopnosti indukce imunitní odpovědi je možné antigeny rozdělit na dvě skupiny - slabé a silné. Mezi látkami určité chemické podstaty jsou nejsilnějšími imunogeny bílkoviny, ale také polysacharidy, syntetické polypeptidy a jiné polymery mohou být při určitých podmínkách imunogeny [Koen S., Word P., Mat-CIassen R.: Immunology. Moskva Medicína. 1983, strana 400; Allergeny i immunopatologija v klinike i experimente, Sborník naučných trudov. Moskva 1988, strana 164; Buc M. a kol.: Klinická imunologia. Bratislava, Veda. 1997, strana 364.]. Dostatečně vysoká molekulová hmotnost je také podmínkou dostačující imunogenity antigenů. Například, pokud je molekulová hmotnost menší než 10 000, je pravidlem, že taková látka je slabě imunogenní.
Většina vysokomolekulámích bílkovin má molekulovou hmotnost větší než 100 000. Se zmenšením rozměrů a molekulové hmotnosti antigenů se ztrácí individualita jejich struktuiy, snižuje se cizorodost a imunogenní aktivita. Bylo zaznamenané, že čím složitější je struktura molekuly antigenu, tím víc je imunogenní. Příklad byl ukázán na imunogenitě syntetických polypeptidů. Jestliže byl polypeptid vytvořen z aminokyselinových zbytků jednoho druhu, byl slabě imunogenní. Pokud byl složen ze dvou a nebo tri druhů aminokyselin, tak získával imunogenní vlastnosti. Pří- 8 CZ 302799 B6 tomnost aromatických aminokyselin (například tyrozinu) v syntetických polypeptidech zabezpečuje imunogennost molekuly. Ukázalo se, že schopnost vyvolat vznik protilátek patří zejména látkám, které mají povrchově nabité skupiny.
Některé teorie spojuji imunitní aktivitu sloučenin také s pevnosti jejich molekuly, imunogennost, schopnost indukovat buněčnou a nebo humorální imunitní odpověď, tak do značné míry závisí na druhu a fyzikálně-chemických vlastnostech antigenu, rozměrech jeho molekuly, charakteru a množství i lokalizace antigen nich determinant v molekule antigenu.
Na základě výše uvedeného a ostatních všeobecných poznatků o vlastnostech živočišných, mikrobiálních, rostlinných a syntetických melaninů, všechny tyto látky vykazují imunogenní aktivitu, a podle všeho je možné je zařadit do skupiny slabých antigenů.
Farmakologické vlastnosti melaninů
Pří použití melaninů pro farmakologické účely má značný význam jejich rozpustnost. V dosud popsaných pracích se používaly preparáty melaninů ve formě vodných suspenzí a nebo suspenzí ve fyziologickém roztoku, aplikovaly se intramuskulámě, ale prakticky se nikdy nevstřebávaly, a proto měly pouze lokální účinek.
Nej účinnější jsou rozpustné melaniny aplikované perorálně nebo intravenózně. Byly vyrobené podobné preparáty, ale představovaly především pseudoglobulínové melanoproteiny, tj. komplexy chromogenních částí s bílkovinami, které nejsou schopné transportovat elektrony a mají sníženou schopnost obrany před působením radiace a toxických volných radikálů [Buc M. a kol.:
Klinická imunologia. Bratislava, Veda. 1997, strana 364; Ferenčík M., Štvrtinová V., Bemadič M.. Jakubovský J., Hulín I.: Zápal, horúčka, bolest. Bratislava, Slovák Academie Press. 1997. strana 216; Mayer V., Hallauer J., Baum M.K.: Ochorení způsobené nákazou vírusom HIV/AIDS. Bratislava, Vydavatelstvo Slovenskej Akadémie Vied, 1996, strana 364.].
Zájem se soustřeďuje na výzkum farmakologické aktivity (chromogenní) Části pigmentu ve vodě rozpustné, extrahované z rostlinných kultur - fytomelaninu.
Melaninové preparáty ve světě
V současnosti, především v období posledních 15 let, se soustřeďuje čím dál více pozornosti ve světě tnelaninům jako perspektivním preparátům pro mnoho oblastí v průmyslu a v lékařství. Melaniny v současnosti vyrábí více společností, nejznámější jsou produkty, které vyrábí a dodává SIGMA CHEMICAL Corp., USA [Sigma Chemical Co.: Biochemikalien und Reagenzien fůr die Naturwissen schaftliche Forschung. Deutschíand, 1997, s. 2736; The Merck Index, An encylope40 dia of Chemicals, drugs and biologicals, 12. vydání. Whitehouse Station, NJ. 1996, strana2668.].
Dosud byla osvojená výroba syntetického melaninů (tzv. DOPA-melanin) a sépiomelaninu, izolovaného z atramentové náplně Séphia officinalis. Preparáty jsou však především díky exotickým surovinám velmi drahé, v nedostatečném množství, a tak také všeobecně nedostupné pro široké použití. V malých množstvích se na laboratorní bázi vyrábí některé druhy melaninů živočišného a mikrobiálního původu, které ale kvůli značné komplikovanosti výroby a nedostatku základních surovin v současnosti nepředstavují seriózní a levné možnosti k osvojení průmyslové velkovýroby. Výroba melaninů rostlinného původu v chemicky čisté podobě k dnešnímu dni není známá.
Všechny známé procesy jsou založené na izolaci melaninů komplikovanými metodami z biologických struktur, ve kterých se nachází, nebo synteticky, to je autooxidací tyrozinu.
-9CZ 302799 B6
Podstata vynálezu
Výše uvedené nedostatky jsou do značné míry odstraněny biologicky účinnou frakcí melaninu podle vynálezu, jehož struktura vzniká jako výsledek polymerizace rostlinných ťlavonoidů, pře5 devším katechinů a Icukoanto-kyanidinů (III).
katechin
antokyanidin
flavon (lil)
Protože jde o amorfní látku, není možné určit přesnou strukturu. Jako příklad uvádíme jednu z nej pravdě podobnějších struktur vzorce IV, kde šipkami jsou zobrazeny další cesty možné polymerizace.
- 10CZ 302799 B6
kde R nezávisle představuje -OH, -COOH a nebo -NH2.
Základem molekuly fytomelaninu je struktura skládající se z monomemích jednotek rostlinných 5 flavonoidů podle vynálezu, především katechinů a leukoantokyanidinů. Protože samotný proces polymerizace a tím také počet možností vzniku různých struktur je značně velký, limitujícím faktorem je v tomto případě molekulová hmotnost Mh = (5 ± 1). 105 Da.
Empirický vzorec jedné z nej pravděpodobnějších struktur znázorněný vzorcem IV je [€34.590^]n, kde n = 6 až 8.
V následující tabulce č. 1 jsou uvedené fyzikálně-chemické vlastnosti látky vznikající jako výsledek polymerizace rostlinných flavonoidů podle námi navržené technologie.
Tabulka č. 1: Fyzikálně-chemické vlastnosti fytomelaninu
Molekulová hmotnost (5 ± 1). 103 Da
-OH skupiny 4,02 až 4,05 hmotn. %
-O skupiny 1,04 až 1,06 hmotn. %
Obsah jednotlivých prvku (% hmotn.)
C 49,44 až 49,52
H 5,10 až 5,73
N 1,15až 1,24
O 41,20 až 42,10
Koncentrace nespárovaných elektronů (spin/g) 101δ až 1022
Spektrum, 3433,1620,1400 (cm1) 1200 až 1100 „Melaniny rostlinného původu“ je pouze celkový sumární název pro tmavohnědé a černé pig20 menty rostlin, které jsou z chemického hlediska produkty oxidace flavan-3,4-dio!ů. V souvislosti
- 11 CZ 302799 Β6 s tím, že na vlastní reakci oxidační polymerizace má vliv celá řada faktorů, jako například teplota, pH-prostředí, hydromodul, poměr fází, doba reakce, obsah a koncentrace složek a podobně, mohou sejejí produkty částečně lišit a nemají přesné fyzikálně-chemické charakteristiky, a nebo se také značně odlišují jeden od druhého.
Tato struktura je nej pravděpodobnější při dodržení podmínek polymerizace při jejich syntéze z přírodních rostlinných surovin, podrobně popsaných dále, a odpovídajícího technologického postupu. Tyto podmínky prakticky vylučují cestu kondenzace flavonoidů s otevřením pyranového cyklu (schéma K. Freidenberga), ale odpovídající reakci podle schématu D.E. Katueno o spojení molekul „hlava k hlavě“ a „ocas k ocasu [Kretovich V.A.: Osnovy biochimii rastenij. Moskva. Vysšaja škola. 1970, strana 540.).
Přitom základem molekuly známých melaninů je pyrokatechinolová struktura (vzorec II), která vzniká jako výsledek při otevření py ranového cyklu molekul leukoantokyanidinů a následnou polymerizací vzniklých fragmentů. To je možné vysvětlit „tvrdšími“ podmínkami, přičemž jedna z hlavních příčin je používání vysokých koncentrací zásad 0,25 až 1,20 M, neadekvátních tepelných režimů, použití nedemineralizované vody v průběhu celého procesu nebo pouze částečně. Kromě toho, námi navrhovaná technologie zabezpečuje vznik struktury polymeru s nepříliš velkým stupněm kondenzace (n = 5 až 7), což má za následek možnost syntetizovat po chemické stránce homogenní produkt - polymer, fytomelanin, s určitými ťyzikálně-chemickými a biologickými charakteristikami a reprodukovátelnými vlastnostmi.
Izolace přírodního polymeru z biologických objektů je prakticky nemožná. Zvláště se to týká melaninů rostlinného původu, pro které neexistuje inertní rozpouštědlo. Jedinými rozpouštědly jsou pouze 0,5 až 1,0M vodné roztoky NaOH a nebo KOH. Jinak řečeno, proces rozpouštění není fyzikální proces, ale ve skutečnosti chemická reakce zásady a polymeru, která způsobuje destrukci vlastního nativního biopolymeru. Takovým zásahem se hrubě narušuje chemická podstata, dochází vlastně k rozkladu na jednotlivé fragmenty, které se dále spojují podle některého ze známých schémat oxidační polymerizace. Dalším postupem se odstraňují vzniklé příměsi a jiné produkty reakce.
V souvislosti s výše uvedeným, tímto postupem získaný produkt není jeho původní nativní forma, ale syntetický polymer, jenž je také charakterizován vlastnostmi náležejícími původním melaninům a této třídě sloučenin. Tak vlastně můžeme hovořit o syntéze produktu biochemickou cestou na bázi původních rostlinných surovin.
Identifikace
Jedním z testů identifikace fýtomelaninu jsou VIS-spektra.
Jasné spektrální čáry absorpce:
v oblasti vlnové délky 1600 až 1700 cm1 - v oblasti 3300 až 3500 cm1
Tyto spektrální čáry odpovídají karbonylovým skupinám (absorpce v oblasti 1700 cm’1), uhlí— uhlíkovým vazbám (absorpce v oblasti 1600 cm”1) (tab. č. 1).
a) nerozpustnost ve vodě a většině organických rozpouštědel
b) úplná rozpustnost v 0,5 M NaOH a nebo KOH
c) vysrážení z roztoků v přítomnosti FeCfi
d) odbarvení při použití silných oxidačních činidel (KMnO4, H2O2)
e) schopnost regenerovat amoniakální roztok AgNO3
- 12 CZ 302799 B6
Nejdůležitější charakteristika pro fytomelanin je přítomnost paramagnetických center (nespárovaných volných elektronů) v koncentraci 1018 až 1022 spin/g.
Způsob výroby frakce rostlinného meianinu spočívá v tom, že na rostlinnou surovinu se působí 0,05 až 0,3M vodným roztokem hydroxidu alkalického kovu při teplotě 15 až 75 °C, pH extraktu se upraví na hodnotu 1 až 2, přídavkem anorganické kyseliny na bázi chloru, přičemž vyloučený sediment se vyčistí a následně vysuší při 100 až 110 °C.
io Výhodně se čištění uskutečňuje promýváním roztokem kyseliny na bázi chloru s pH 1,0 až 3, až do dosáhnutí bezbarvé kapaliny nad sedimentem, následným promýváním etanolem a dalšími organickými polárními rozpouštědly. Při všech procesech se používá voda farmako logické kvality·
Po vysušení se produkt může podrobit ještě dalšímu čištění a aktivuje se semichinonový radikál.
Způsob přípravy látky, jejíž íyzikálně-chemické parametry odpovídají tab. č. 1, spočívá v následujících krocích:
Izolování sumárního produktu Základní surovina
Zásaditá reakce
Zásaditý extrakt filtrace,centrifugace, sedimentace kyselinou
Sediment fytomefaninu promývánt kyselými vodnými roztoky ? a farmakofogicky čistou vodou
Sediment fytomelaninu - H-forma sediment očištěný od příměsí a produktů
- 13CZ 302799 B6 degradace nativního pigmentu promývání etanolem
H-forma fytomelaninu očištěná od forem taninu rozpustných v etanolu, antokyanového komplexu promývání etylacetátem
H-forma fytomelaninu očištěná od etylacetátové frakce taninu a ligninu promývání acetonem ▼
H-forma fytomelaninu očištěná od ligninu a acetonové frakce taninu vysušení při 102 až 105 °C
H-forma fytomelaninu sumární produkt nerozpustný ve vodě
Získaný sumární produkt představuje frakci rostlinných melaninů s molekulovou hmotností Mh = (5 ± 2).103. Dalším stadiem technologického procesuje odstranění zbytkových doprovodných příměsí a produktů degradace nativního polymeru.
- 14 CZ 302799 B6
Resedimentace a doplňkové očištění
H-forma fýtomelaninu (sumární produkt) rozpuštění v zásadách, ir separace, ultracentrífugace
Očištěný zásaditý roztok sedimentace kyselinou,promývání farmakologicky čistou vodou ▼
H-forma fýtomelaninu očištěná od zbytkových množství doprovodných příměsí
Postupné promývání organickými rozpouštědly ph centrifugaci do absolutně bezbarvých promývacích roztoku ( D=0,000) vysušení při 102 až 105 QC ▼
H-forma fýtomelaninu očištěná od příměsí a produktů degradace nativního polymeru konečného produktu
H-forma fýtomelaninu očištěná od příměsí a produktů degradace nativního polymeru zpracování koncentrovanou kyselinou var pod zpětným chladičem ▼
H-forma fýtomelaninu homogenní po chemické stránce
- 15 CZ 302799 B6
- promývání farmakologicky čistou vodou do celkového odstranění Cl, promývání dimetylformamidem sušení produktu
V
H-forma fytomelaninu s molekulovou hmotnosttí (5±1).1O3 Da a koncentrací nesporovaných elektronů 1018 až 1022 spin/g zpracování NH4OH při pH 10,0 až 11,0 ▼
membránová filtrace ▼
Ve vodě rozpustná forma fytomelaninu (amoniakální roztok)
Konečný produkt může být připravený v následujících formách:
a) Suchý amorfní prášek tmavohnědé barvy s charakteristickým kovovým leskem, nerozpustný ve vodě.
b) Suchý amorfní prášek tmavohnědé barvy s charakteristickým kovovým leskem, rozpustný ve vodě.
io c) Vodný roztok fytomelaninu $ maximální koncentrací do 3 až 5 % hmotn. d) Pasta tmavohnědé barvy s obsahem základního produktu 10 až 15 % hmotn.
Podstatu vynálezu tvoří také farmaceutický prostředek, který obsahuje frakci rostlinného melani15 nu podle vynálezu a farmaceuticky přijatelný nosič.
Bylo zjištěno, že frakce rostlinného melaninu podle vynálezu je vhodná na použití jako léčivo, a to zejména jako antioxidant, pro blokování peroxidace lipidů, na aktivaci leukocytů, na regulaci a průběh komplementového systému.
Na základě dosažených výsledků uvedených dále a popisu biologické funkce látek melaninové povahy [Ferenčík M., Štvrtinová V., Bemadič M., Jakubovský J., Hulín 1.: Zápal, horúčka, bolest. Bratislava, Slovák Academie Press. 1997, strana 216; Mayer V., Hallauer J., Baum M.K.: Ochorení způsobené nákazou vírusom HIV/AIDS. Bratislava, Vydavatelstvo Slovenskej
Akademie Vied, 1996, strana 364; Sigma Chemical Co.: Biochemikalien und Reagenzien fur die Naturwissen schaftliche Forschung. Deutschland, 1997, s. 2736; Duračková Z., Bergendi L., Liptáková A., Muchová J.: Free radicals derived from oxygen and medicine. Bratislava Medical Journal, 1993 No. 8, strana 419 až 434; Ďuračková Z., Felix K., Feniková L., Kepštová I., Labuda J., West U.: Superoxide dismutase mimetic activity of a cyclic tetrameric Schiff base
N-coordinated Cu(II) complex. BioMetals 1995 No. 5, strana 183 až 187; Novák, M.:
- 16CZ 302799 B6
Neuroimmunology of The Alzheimefs Disease. Bratislava Medical Journal 1997, 98, strana 303 až 314.] můžeme vyvodit následující:
Poškození v lidském organizmu vzniká působením vnějších anebo vnitřních faktorů. Jako poškození je potřeba rozumět měřitelné změny, při kterých se poruší homeostáza intraceiulámtho prostředí natolik, že nitrobuněčné struktury, a také samotné buňky, nedokáží udržet a kompenzovat poruchu vlastními mechanizmy. V tomto momentu dochází k poruše subcelulámích struktur a ke ztrátě integrity buněk. Pokud proces postihne dostatečně velký počet buněk, tak se ireverzibilní buněčné poměry projeví ztrátou funkce příslušného orgánu. Výsledkem je porucha orgánů s následnými změnami funkcí celého organizmu.
Melaniny, a tím také fytomelanin, patří do skupiny látek, které se zúčastňují opravných opatření. To znamená, že nejde o látku, která nějakým způsobem kompenzuje ztrátu a nebo poruchu. Nejde ani o látku, která se uplatňuje jako faktor náhrady deficitu. Jde o látku aktivně zasahující do procesů, které se spustí při poškození homeostázy buněk a následně celých orgánů. Ve smyslu moderních koncepcí medicíny je řešení problému poškození buněk a orgánů principiálním řešením. Tento přístup plně respektuje nej modernější trendy v rozvoji vědeckého výzkumu v oblasti biologicko—lékařských věd.
Princip ztráty homeostázy buněk je základem vzniku všech poruch v lidském organizmu kromě geneticky podmíněných poruch. Ve své podstatě také působení fyzikálních faktorů jako je radiace, působení extrémních teplot a fyzikálních faktorů způsobuje poruchu struktury buněk. Také v těchto případech musí organizmus zabezpečit optimalizaci poměrů ve smyslu přežití organizmu. To, co následně v organizmu probíhá, je proces, na kterém se podílí mnoho mechanizmů a látek. Látka fytomelanin má v tomto procesu celkem zásadní postavení. Vyplývá to z toho, že v procesu poškození se aktivují mechanizmy zaměřené na odstranění poškozující škodliviny. Přitom vznikají látky, které mají vysokou bakterie idní účinnost a schopnost velmi intenzivně reagovat s jinými látkami, které se v místě poškození nachází. Látky zaměřené na likvidaci škodliviny nemají schopnost rozlišit mezi poškozením užitečným a neužitečným. V konečném důsledku tyto látky poškozují všechny struktury, které se nachází v místě jejích vzniku, tvorby a působení. Jde většinou o látky s nízkou molekulovou hmotností. Podobný proces poškození vzniká také tehdy, pokud dojde k poruše už poškozeného a adaptovaného orgánu a nebo tkáně. Tak při ateroskleróze vzniká jistý druh rovnovážného stavu mezi porušenou cévou, průtokem krve a tkání, která je zásobována krví z této cévy. Když se poruší integrita cévy preaterosklerotický proces, tak se této dramatické situace zúčastňují opět mechanizmy směrující k nápravě a přežití organizmu. Tyto také výše uvedené procesy nápravy poškození probíhají s účastí tvorby reaktivních intermediátů kyslíku, superoxidového an iontu, peroxidu vodíku, hydroxylového radikálu, singletového kyslíku a reaktivních intermediátů dusíku. Fytomelanin se na základě dosavadních analýz uplatňuje jako prostředek na „ovládání“ tvorby těchto látek. Tyto látky mají schopnost reagovat se škodlivinou, ale jejich významná úloha je v tom, že spouštějí kaskádu změn tvorby dalších látek, které se uplatňují jako poškozující látky a jako látky, které zabezpečují aktivaci a regulaci reparačních procesů. Těmito látkami se ovlivňuje výměna mezi buněčných informací. Dosud používané látky při léčbě mají charakter látek s tlumivým nebo stimulačním účinkem. Další látky mají funkci suplementace nebo kompetitivní inhibice.
V případě fytomelaninu jde o látku, jejíž účinek závisí na stavu aktivace pri poškození a na stavu aktivace systémů zúčastňujících se těchto složitých procesů (komplementový systém, koagulační systém a kininový systém). Fytomelanin se uplatňuje v pravém slova smyslu jako regulátor, který by mohl sloužit na to, aby se do důsledků ovládaly procesy, které probíhají spontánně.
Pro přípravu koncepce výzkumu celkového využití, v lékařství zaměřeného na objasnění úlohy této molekulové frakce melaninů rostlinného původu, je dále potřebné vytvořit a sledovat modelové situace na celém organizmu (reperťůzní poškození, kyslíkový a kalciový paradox). Šlo by o studie, které by měly definovat účast fytomelaninu při poškození a reparaci organizmu. Fytomelanin může být mimořádně perspektivní látka, její vazba na enzymy a na látky obsahující
- 17CZ 302799 B6 kovové prvky může znamenat velmi široké použití. Navíc látka, která se chová jako regulátor procesů, může nalézt použití při mnohých smrtelných chorobách a objasnění původu vzniku mnohých, dosud neobjasněných chorob.
Frakce fytomelaninu podle vynálezu, jako účinná látka pro použití jako léčivo, může být použitá v následujících farmako logických formách:
suchá látka rozpustná ve vodě, injekční forma, suchá látka pro perorální použití, roztok pro injekční aplikaci, roztok pro perorální použití, tablety, granule, kapsu le, dražé, suspenze, sirup, to gel, želé, mast, krémy, roztok pro vnější použití, roztok pro infúze, aerosolové formy, kosmetická přísada pro tekutiny, krémy, šampóny.
Příklady provedení vynálezu 15
Příklad 1
Způsob výroby Aesculus hippocasíauicum L. - fytomelaninu
Jako základní surovina pro izolování produktu byly použity slupky Aesculus hippocastanicum v množství 2000 g, předtím oddělené od jádra, promyté vodou a vysušené na max. 10 % hmotn. vody.
použité chemické látky:
- demineralizovaná voda ve farmakologické kvalitě
- HC1 37% dým. p.a.
- NaOH p.a.
- etanol p.a.
- etylester kyseliny octové p.a.
- aceton p.a.
- dimetylformamid p.a.
(Na sedimentaci a promývání je možné použít jakoukoliv kyselinu na bázi chloru, ale pro jednoduchost je nej v hodnější použít kyselinu chlorovodíkovou.)
Použitá technika:
- laboratorní sklo
- centrifuga Heraeus Megafuge 2
- vakuová odparka HeidolpH VRSTV 2000
- demineralizační stanice Werner Ro6
- magnetické míchadlo a příslušenství
- kontrolní a měřící technika ostatní zařízení a příslušenství (sušička,.....)
Izolování sumárního produktu z Aesculus hippocastanicum L,
- 18 CZ 302799 B6
Základní surovina
- vysušené slupky se rozdělily do 10 skleněných nádob, každá o objemu 3500 ml, a to tak, že 5 do každé nádoby jsme dali 200 g vysušených slupek Aescuius hippocastanicum, připravená surovina se zalila 0,3 M vodným roztokem NaOH, promíchala 30 min a celá směs se zahřála na teplotu 50 °C. Doba reakce byla 10 hodin.
io Zásaditý extrakt
- po 10 hodinách se extrakt očistil od hrubých mechanických příměsí na hrubém filtru a na centrifuze při 3500 ot/minutu se odstranily malé a mikroskopické mechanické nečistoty t5 - celkově se získalo 32 I zásaditého extraktu, který se rovnoměrně rozdělil do 10 skleněných reakčních lahví s objemem každé 20 1
- do každé láhve se do plného objemu dolila farmakologicky čistá voda a doplnila se HCI tak, aby se dosáhla hodnota pH 1,5
- celá směs se promíchala, v průběhu krátké doby vznikl sediment ěerveno-hnědé až tmavohnědé barvy, který se nechal 12 hodin sedimentovat
Sediment fytomelaninu Aescuius hippocastanicum L.
- získaný sediment se centrifugací oddělil od tekuté složky směsi
- sediment se dále promýval slabě kyselým vodným roztokem HCI o pH 1,5 až 3,0, dokud kapalina nad sedimentem nebyla bezbarvá (10 x opakované promývání) při poměru směsi 1:8.
Sediment fytomelaninu Aescuius hippocastanicum H—forma
- oddělený zakoncentrovaný sediment se dáte promyl etanolem a centrifugací se oddělil sediment od kapaliny
- etanolem se sediment promýval, dokud se etanol zabarvoval příměsemi v něm rozpustnými
- promývalo se postupně dále etylacetátem a následně acetonem, až do dosáhnutí stavu, kdy organická rozpouštědla nejsou zbarvená příměsemi, které se v nich rozpouštějí vysušení produktu na vzduchu při pokojové teplotě
- přemletí vysušeného produktu na laboratorním mlýnku na rozměr zrna 0,200 až 0,250 mm
- přesetí na laboratorním sítě 0,25 mm vysušení při teplotě 100 až 110 °C do trvalé hmotnosti
H-forma fytomelaninu Aescuius hippocastanicum ve vodě nerozpustný sumární produkt prášek tmavohnědé barvy s kovovým leskem
- 19CZ 302799 B6
Získaný sumární produkt představuje frakci rostlinných melaninu s Mh = (5±2). 10'1 Da. Další stadium technologického procesuje odstranění zbytkových doprovodných příměsí a produktů degradace nativního polymeru.
Resedimentace a doplňkové očištění
H-forma fýtomelaninu Aesculus hippocastanicum (sumární produkt)
Získaná H-forma se opětovně rozpustila v 20 1 0,3M NaOH, získaný zásaditý extrakt se centrifuio goval až do úplného odstranění mikroskopických mechanických příměsí. Centrifugace se prováděla při 3500 ot/minutu po dobu 25 minut. Získaný očištěný extrakt se zředil 5násobným množstvím farmakologicky čisté vody a přidala se HCÍ do pH 2,0. Dostatečné bylo 3násobné promytí vodným roztokem HCl při pH 2,0 až 3,0 pro úplné odstranění příměsí.
Dále se promýval organickými rozpouštědly v pořadí etanol, etylacetát, aceton při centrifugaci do absolutně bezbarvých promývacích roztoků (D=0,000). Produkt se vysušil při 102 až 105 °C.
Získala se H-forma fýtomelaninu Aesculus hippocastanicum očištěná od příměsí a produktů degradace nativního polymeru ve formě tmavohnědého prášku s charakteristickým kovovým les20 kem.
Konečný produkt
H-forma fýtomelaninu Aesculus hippocastanicum očištěná od příměsí a produktů degradace nativního polymeru
Získaný produkt se povařil s 6M HCl pod zpětným chladičem po dobu 6 hodin v poměru směsi 1:5. Produkt se promyl farmakologicky čistou vodou až do úplného odstranění Cl-, to bylo ověřené kvalitativní reakcí na C1-.
Získal se produkt - H-forma fýtomelaninu, homogenní po chemické stránce. Pro zvýšení biologické aktivity a aktivace semichinonového radikálu se produkt rozsuspendoval s dimetylformamidem 1:5, suspenze se rozdělila centrifugaci při 2400 ot/min po dobu 10 minut. Produkt se sušil při 102 až 105 °C po dobu 120 minut.
Na získání ve vodě rozpustné formy se preparát rozpustil ve vodném roztoku NH4OH, kteiý se připravil tak, aby hodnota pH byla 10 až 11, přebytečný amoniak byl odpařen ve vakuové odparce a část roztoku se zakoncentrovala na 1,375 % hmotn.
Ve vodě rozpustná forma fýtomelaninu tzv. Aesculus hippocastanicum - melanin. Získaný produkt je prášek tmavohnědé až černé barvy, který se beze zbytku rozpouští v redestilované (apyrogenní) vodě, maximální koncentrace je cca 5 % hmotn.
Preparát svými vlastnostmi odpovídá tabulce č. 1, přičemž koncentrace nespárovaných elektronů je 1019 spin/g.
Touto technologií se vyrobilo z 2000 g základní suroviny 17,565 g konečného produktu, to je 0,87 % hmotn., vztažené na celkovou hmotnost suroviny.
V závislosti na šarži slupek Aesculus hippocastanicum tedy základní suroviny se může počet promývání a množství použitých reagencií v určitých hranicích lišit od uvedeného příkladu. Samozřejmě tím také celkové množství konečného produktu může kolísat v rozmezí 0,7 až 1,15%.
-20CZ 302799 B6
Tato skutečnost a nepatrné rozdíly v technologii a výstupu konečného produktu jsou způsobené tím, žc přírodní suroviny, v konkrétním případě Aesculus hippocastanicum L., nemají identické chemické složení a homogennost, přičemž některé části v závislosti především na daných klimatických podmínkách a samotných stromech (rostlinách) se mohou také značně odlišovat.
Příklad 2 až 8
Jako základní surovina pro výrobu fytomelaninu se použily následující výchozí produkty:
Vžtis vinifera L.
Fagopyrum esculentum L.
Heliantus ctnnus Z.
Hippophae ramnoides L.
Thea L.
Vicefaba L.
Junglas regia L.
Tabulka č. 2: Fyzikálně-chemické vlastnosti rostlinných fytomelaninů
| č. | Druh Suroviny | Mh Da x103 | -OH % hmot. | =O % hmot. | Chemické složeni prvek, % hmot | EPR Spin/g | kabs ρ?,λ=46 5nm | |||
| C | H | N | O | |||||||
| 2 | Vitis vinifera L. | 5+1 | 4,05 | 1,06 | 49,52 | 5,73 | 1,14 | 41,20 | 10lS | 0,019 |
| 3 | F. esculentum | 5+1 | 4,08 | 1,03 | 49,63 | 5,84 | 1,20 | 41,49 | 1O78 | 0,019 |
| 4 | | Hefianthus a.L. | 5+1 | 4,04 | 1,00 | 49,58 | 5,46 | 1,32 | 41,66 | 1018 | 0,019 |
| 5 | Hippophae r.L. | 5+1 | 4,08 | 1,02 | 49,20 | 5,04 | 1,40 | 42,36 | 101s | 0,019 |
| 6 | Thea L. | 5+1 | 4,00 | 1,04 | 49,12 | 5,08 | 1,28 | 42,68 | 1O20 | 0,019 |
| 7 | Vice faba L | 5+1 | 4,09 | 1,06 | 49,80 | 4,95 | 1,28 | 42,92 | 101s | 0,019 |
| 8 | Junglas regia L. | 5+1 | 4,04 | 1,04 | 49,44 | 5,10 | 1,24 | 42,10 | 10” | 0,019 |
Spektrum pro všechny druhy (cm ’): 3433, 1620, 1400, 1200-1100
Tyto výchozí suroviny byly zpracovány stejným postupem, jako v příkladu 1. Vlastnosti získané frakce z těchto surovin byly v dobré shodě s vlastnostmi uvedenými v tabulce 1. Pokusy s uvedenými rostlinnými surovinami ukázaly, že fytomelanin je možné vyrobit - biosyntetizovat ze všech typů, přičemž samotný konečný produkt je stejný a nezávisí na druhu základní suroviny. Nicméně na základě tabulek a výše uvedené literatury je zřejmé, že pravděpodobný obsah meianinu v rostlinných objektech je nižší než námi dosažené hodnoty, to také svědčí o tom, že nezpolymerizované na konečný produkt - fytomelanin. Z toho důvodu je možné vyrobit fytomelanin také ze suroviny, která neobsahuje původní nativní polymer, ale pouze monomery základních stavebních jednotek polymeru - fytomelaninu. V tomto případě můžeme hovořit o syntéze produktu.
Na základě uvedeného je možné předpokládat, že všechny ostatní, zatím nesledované rostliny obsahující melanin (suroviny), také obsahují fytomelanin, který je možné získat v této popisované podobě, přičemž rozdíl představuje pouze příliš se nelišící koncentrace nespárovaných elektro-21 CZ 302799 B6 nů (paramagnetických center), což závisí na stupni aktivace semichinonového radikálu. Tento závěr se týká také jiných druhů surovin s dostatečným obsahem rostlinných flavonoidů, vhodných na polymerizaci fytomelaninu.
Za účelem zefektivnění promývacího procesu slabě kyselými vodnými roztoky (HC1) je možné použít tento roztok zahřátý na teplotu max. 75 °C, což má za následek snížení počtu promytí.
Na základě dosud dosažených výsledků a odvozených závěrů předpokládáme, že použitím nových způsobů aktivace (elektrochemickou cestou, ozářením, promytím, rozsuspendováním jinými vhodnými polárními rozpouštědly a kyselinami) semichinonového radikálu můžeme dosáhnout hodnotu EPR - koncentraci nespárovaných volných elektronů l022 sptn/g. Zároveň předpokládáme, na základě praktických výsledků, které jsou dále uvedené, že zvýšení této hodnoty zároveň zvyšuje biologickou aktivitu fytomelaninu a potencionalizuje jeho možnosti, a tím také možnosti a eventuální použití.
Ne vždy je potřeba provést resedimentaci, pokud výchozí produkt po první sedimentaci už odpovídá požadované kvalitě. To je způsobené různými druhy vstupní suroviny a tím také jejich různou kvalitou. V případě použití suroviny například černého fermentovaného vietnamského čaje, už původně zpracovaného na přímé použití, vstupní kvalita suroviny je natolik vysoká a produkt homogenní, že není potřebné použít čištění a resedimentaci na dosáhnutí konečného produktu odpovídajícího vlastnostmi tabulky č. 1 a vyznačujícího se biologickou aktivitou.
Earmakologické vlastnosti fytomelaninu
Na základě provedení toxikologických zkoušek bylo stanovené, že fytomelanin není toxicky a ani mutagenní preparát. Toxicita je velmi nízká, LD50 > 2500 mg/kg z čehož je možné vyvodit závěr, že látka je použitelná na základě předběžných výsledků jako fytofarmakum. Jako standard pro základní studie byl použit Aesculus híppocastanicum - melanin, dále už pouze fytomelanin, převedený do amoniakální formy a skladovaný při teplotě 8 až 10 °C po dobu 3 měsíců. Potom byl vzorek použit na experimentální určení biologické aktivity. Původní vzorek použitý na komplex testů stanovení biologické aktivity měl úroveň EPR 1,47 . IO18 spin/g. Další šarže, použitá na srovnání (SOD-like aktivita a IC50) měla hodnotu 2,8.1019 spin/g. Rozdíl vznikl v důsledku lepšího chemického vyčištění preparátu a aktivace semichinonového radikálu vícenásobným suspendováním v polárních organických rozpouštědlech.
Experimentálně byly určené některé antioxidační vlastností fytomelaninu, které můžeme shrnout následujícím způsobem za některých předpokladů a vysvětlením základních termínů.
Volné radikály jsou vysoce reaktivní molekuly odvozené od kyslíku a nebo dusíku a hrají kromě pozitivní úlohy v některých fyziologických procesech převážně negativní úlohu. Proti toxicitě volných radikálů existují v organizmu nebo obecněji v přírodě, látky schopné eliminovat. Tyto látky se obecně označují jako antioxidanty [Brechtlová, Halčák, Chandoga a kol.: Lekárska biochémia I., Asklepios. 1992, strana 228; Ďuračková Z., Bergendi L., Liptáková A., Muchová J.: Free radicals derived from oxygen and medicine. Bratislava Medical Journal, 1993, č. 8, strana 419 až 434; Ďuračková Z., Felix K., Feniková L., KepŠtová I., Labuda J., West U.: Superoxíde dismutase mimetic activity of a cyclic tetrameric Schiff base N-coordinated Cu(II) complex. BioMetals 1995, č. 5, strany 183 až 187.].
Sérií praktických experimentů na bázi současných moderních a ověřených metod byly stanoveny některé základní antioxidační vlastnosti, které potvrdily perspektivnost a široké možnosti použití v této oblasti, byly stanovené antioxidační vlastnosti této látky, fytomelaninu, s EPR pořadí 1018 spin/g.
-32CZ 302799 B6
Stanovení celkové antioxidační schopnosti (Total antioxidant status)
Na stanovení celkové antioxidační schopnosti se použil kit TAS firmy Randox, Velká Británie. 5 Metoda je založená na tvorbě radikálu Abts* (2,2’-azino-di-(3-etyíbenzthiazoÍine suiphonate)).
Tento radikál vzniká působením peroxidu vodíku na metmyoglobin, kdy vzniká ferrylmyoglobin, který reaguje s Abts za vzniku Abts* radikálu,
HX-Fe3+ + H2O2 -> X - (Fe4' = O) + H2O
Abts + X-(Fe4 = O) -> Abts* + HX-Fe3*
HX-Fe3+ metmyoglobin 15 X-{Fe4+-O) ferrylmyoglobin
Byly připraveny vzorky a pipetovaly se podle postupu uvedeného v kitu. Výsledky antioxidační schopnosti látky jsou vyjádřené jako koncentrace Troloxu, který byl použitý jako standard a výpočet antioxidační aktivity. Od naměřených absorbancí jsme odečítali absorbanci blanku a vypo20 čítali koncentraci Trolox-like ve vzorku podle vzorce:
( Abl — Avz)
Cvz = x Cst (Abi - Ast)
Výsledky jsou uvedené v následující tabulce č. 3.
Tabulka č. 3
| vzorek fytomelaninu M | Trolox-íike [Cj | Trolox-like [cj/ LX [c] |
| 0,1 | 0,663 | 6,63 |
| 0,01 | 0,113 | 11,29 |
| 0,1 | 1,215 | 12,15 |
| 0,1 | 1,216 | 12,16 |
| 0,1 | 1,047 | 10,47 |
Ze dvou roztoků fytomelaninu o koncentracích 0,1 a 0,01 mmol/I byla vypočítaná antioxidační schopnost na Trolox a představuje:
10,54 ± 1,02 mmol/1 Troloxu-like aktivity
Linearita byla ověřená v koncentrační závislosti, výsledky jsou uvedené v tabulce č. 3.
Zachování biologické aktivity jsme stanovili změřením TAS v roztoku v 0,7 a 14 dnech. Výsledky jsou uvedené v tabulce č. 4.
-23 CZ 302799 B6
Tabulka č. 4
| Den stanovení | Koncentrace (mmol/l) | ||
| 0,01 | 0,1 | _ | |
| 0 | 0,531 | 1,125 | 2,374 |
| 7 | 1,217 | ||
| 14 | 1,025 |
Stanovení antioxidační schopnosti fytomelaninu jako ve vodě rozpustného antioxidantu (ACW)
Na stanovení se použily roztoky kitu FAT, Berlín pro ACW (Antioxidant capacity in water soluble antioxidants)
- jako standard byl použit Trolox - rozpustná forma vitamínu E
- postupovalo se podle návodu uvedeného v kitu, přičemž na stanovení se použily roztoky fytomelaninu v koncentracích:
A = 1 mmol/1 (5 mg/ml)
B = 0,1 mmol/1 (10 x ředěný roztok A)
C = 0,01 mmol/1 (10 x ředěný roztok B)
Při měření ACW se antioxidační schopnost vyhodnotila jako posun přes „lag“ fázi křivky, který představuje posun křivek při použití standardu Troloxu, a ze kterých byla sestrojená kalibrační křivka, která je znázorněná na přiloženém obrázku.
Z této kalibrační křivky byla pomocí počítače vypočítaná koncentrace ACW a po přepočítání aktivity ACW na jednotku koncentrace fytomelaninu (0,0087:0,01) aktivita charakterizovaná ACW je aktivita fytomelaninu = 0,87 aktivity vitamínu E, pokud vyhodnocujeme posun „lag“ fáze, to je trapingovou aktivitu.
Pokud ale pro vyhodnocení použijeme plochu integrálu chemiluminiscenční křivky, což lépe odpovídá scavengerové aktivitě, tak v přepočtu na jednotkovou koncentraci fytomelaninu je 5,56 scavengerové aktivity Troloxu.
Stanovení SOD-like aktivity a IC50 fytomelaninu
Na stanovení SOD-like aktivity byla použitá chemiluminometrická metoda na chemiluminometru PHOTOCHEM, kde se na stanovení použil kit FAT, Berlín pro SOD aktivitu. Měření byla prováděna po dobu 3 minut a zaznamenával se integrál plochy chemiluminiscenční křivky, pomocí počítače byla přepočítaná hodnota na jednotkovou aktivitu SOD (hmotnosti) a ta představuje 0,2 aktivity SOD, v molové koncentraci přepočet na jednotkovou aktivitu je aktivita fytomelaninu 0,0316 aktivity SOD. Tento velký rozdíl je daný rozdílem v molekulové hmotnosti 5000 pro fytomelanin versus 32 000 pro SOD.
Aktivita SOD se vyjadřuje hodnotou IC50» což je koncentrace látky, při které je detekce volných radikálů inhibována na 50 %. Tato hodnota byla přepočítána přes hmotnost na 0,28 aktivity SOD.
Jestliže však byl použit fytomelanin se zvýšenou koncentrací volných nespárovaných elektronů na hodnotu 1019 spin/g, použitím výše uvedené metody jsme dosáhli následující výsledky, které jsou uvedené v tabulce č. 5.
-24CZ 302799 B6
Tabulka č. 5
| Vzorek č. | -íog ICso | % aktivity SOD |
| 1 | 6,171422 | 76,53 |
| ! 2 | 5,482290 | 67,98 |
| 3 | 5,768617 | 71,53 |
| 4 | 5,445406 | 67,53 |
Vliv fytomelaninu na degradaci DNA
Na určení vlivu fytomelaninu na degradaci DNA byla použitá chromozomální bovinní DNA a systém xantin-xantin oxidáza na tvorbu superoxidu.
2H+ io X + XO —> kyselina močová + O2“ + H2O
Reakční směs (1 ml) obsahovala 0,25 mg DNA/RZ, xantin 3,10 až 4 mol/1 RZ. Xantin-oxidáza byla přidávaná do reakční směsi tak, aby změna absorbance (510 nm) za minutu, což je ukazatel tvorby superoxidu, byla v rozmezí 0,03 až 0,04.
K reakční směsi byl buď přidaný nebo v kontrole nepřidaný určitý objem roztoku fytomelaninu. Reakční směs byla doplněná 25 nM fosfátovým pufrem při pH 7,4 na potřebný objem. Reakční směs byla doplněná 25 nM fosfátovým pufrem při pH 7,4 na potřebný objem. Reakční směs byla inkubovaná při 37 °C 60 minut. Reakce byla zastavena pomocí TCA (2,8% zásobní roztok)
- 0,75 ml. Po přidání 0,25 ml thiobarbiturové kyseliny (TBA) byla reakční směs v uzavřených zkumavkách ponechána při teplotě 95 °C, po dobu 30 minut. Po ochlazení byla spektrofotometricky proti blanku změřena a pomocí standardu tetraetoxy propanu (TEP) vypočítána tvorba koncového produktu oxidačního poškození DNA—malondialdehydu (MDA) v přepočtu na 1 mg DNA. Výsledky jsou uvedené v tabulce č. 6.
Tabulka č. 6
| ! t | DNA + X + XO | DNA + X + XO + | DNA + X-XO+ | ÍDNA + X-XO+ |
| fytomelanin mmol/l | 0,0 | 0,1 | 0,01 | 0,001 |
| MDA pmol/mg DNA | 4,87 ± 0,41 | 1,14 ±0,12 | 2,07 ±0,18 | 2,99 ±0,32 |
| n | 9 | 6 | 9 | 6 |
| Štěpení DNA | 100% | 23,4% | 42,5% | 61% |
| Inhibice štěpení | 0% | 76,6% | 57,5% | 39% |
-25 CZ 302799 B6
Na základě dosažených výsledků se zjistilo, že“ a) fytomelanin je schopný eliminovat volné radikály
b) fytomelanin vykazuje minimálně 10,00násobek aktivity rozpustné formy vitamínu E (Troloxu) při použití organického radikálu ABTS z kitu TAS, Randox, Anglie
c) fytomelanin vykazuje více scavengerovou než trapingovou aktivitu io d) fytomelanin vykazuje min. 5,50 scavengerové aktivity Troloxu
e) fytomelanin vykazuje min. 0,87 trapingové aktivity Troloxu
f) fytomelanin vykazuje min. 0,20 aktivity Superoxiddismutázy
g) fytomelanin je schopný inhibovat štěpení DNA superoxidem. Při koncentraci 0,01 mmol/1 štěpení DNA inhibuje na min. 57,5 %
h) se zvýšením koncentrace nespárovaných volných elektronů (EPR) se biologická aktivita fýtomelaninu stupňuje.
Dále bylo základními screeningovými testy stanoveno, že:
a) fytomelanin je schopný plně zablokovat peroxidaci lipidů
b) fytomelanin je schopný aktivovat (anergovat) leukocyty
c) fytomelanin má vliv na regulaci a průběh komplementového systému
d) fytomelanin má vliv na kontrakci cév (kapilár)
e) fytomelanin si zachovává stabilní a reprodukovatelné vlastnosti po dobu dlouhého období a neztrácí je ani při agresivním chemickém zpracování.
Průmyslová využitelnost
Fyzikálně-chemické vlastnosti a biologická aktivita umožňují použití fýtomelaninu ve vícero průmyslových oblastech, ale především v elektronickém a elektrochemickém průmyslu, živočišné výrobě, zemědělském průmyslu, ve výrobě a zpracování potravin, ve spotřební chemii a u nejmodemějších technologií nových materiálů patřících k melaninům v jaderných technologiích. Velmi zajímavým faktem je také, díky farmakologickým vlastnostem, uplatnění látky v různých modifikacích prakticky ve všech oblastech kosmetiky. Současná tendence uplatňování nových biotechnologií v ekologických a také jiných směrech dává velmi široké uplatnění také v tomto odboru, perspektivním pro budoucí tisíciletí.
Biologické použití
Na základě současných poznatků předpokládáme, že bude možné použití fýtomelaninu na léčení různých typů zhoubných rakovinných nádorů, poruch imunitního systému včetně AIDS, chorob krevního původu a poruch vyplývajících z porušení homeostázy buněk, složitých a těžko léčitelných psychických poruch organizmu (schizofrenie, epilepsie, ....), poruch nervového a ostatních regulačních systémů, závislosti na narkoticích. Na bázi této látky je možné vyrobit ochranný pre50 parat před radiací s binárním účinkem.
Na základě uvedených skutečností v dosud publikované literatuře a dosažených praktických výsledků ze základních screeningových testů předpokládáme použití fýtomelaninu jako: antioxi-26CZ 302799 B6 dantu, ochranné látky před radiací, fagostatika, cytostatika, antikarcínogenního přípravku, přípravku na léčení poruch imunitního systému, atd.
Claims (13)
- PATENTOVÉ NÁROKY io 1. Biologicky účinná frakce rostlinného melaninů sestávající z monomemích jednotek rostlinných flavonoidů, především katechinu a leukoantokyanidinů, se sumárním empirickým vzorcem H-formy:kde n - 6 až 8, s molekulovou hmotností s množstvím —OH skupin množstvím =O skupin [C34-59Oi4-23H32-Jl4N6_8]n, (5± 1).1O2 3 4,4,00 až 4,09 % hmotn.,1,00 až 1,06 % hmotn., s obsahem jednotlivých prvků v % hmotn.C 49,12 až 49,80,H 4,95 až 5,84,N 1,14 až 1,40,O 41,20 až 42,93, s koncentrací nespárovaných elektronů 1018 až 1022 spin/g, a s jasnými spektrálními čarami v oblastech 3433, 1620, 1400 a 1200 až 1100 cm“’, připravitelná izolací biologicky účinné frakce rostlinného melaninů, kde na rostlinnou surovinu, která obsahuje nativní polymer a/nebo základní stavební jednotky, jako katechiny a leukoantokyanidiny, se působí 0,05 až 0,3M vodným rozto35 kem hydroxidu alkalického kovu při teplotě 15 až 75 °C, pH extraktu se upraví na hodnotu 1 až 2 přídavkem anorganické kyseliny na bázi chloru, přičemž vyloučený sediment se vyčistí a následně vysuší při teplotě 100 až 110 °C.
- 2. Způsob izolace biologicky účinné frakce rostlinného melaninů podle nároku 1, vyzna40 č u j i c í se tím, že na rostlinnou surovinu, která obsahuje nativní polymer a/nebo základní stavební jednotky, jako katechiny, a leukoantokyanidiny, se působí 0,05 až 0,3M vodným roztokem hydroxidu alkalického kovu při teplotě 15 až 75 °C, pH extraktu se upraví na hodnotu 1 až2. přídavkem anorganické kyseliny na bázi chloru, přičemž vyloučený sediment se vyčistí a následně vysuší při teplotě 100 až 110 °C.
- 3. Způsob izolace biologicky účinné frakce rostlinného melaninů podle nároku 2, vyznačující se tím, že čištění se uskutečňuje promýváním roztokem kyseliny na bázi chloru s pH 1,0 až 3 až do dosáhnutí bezbarvé kapaliny nad sedimentem, následným promýváním organickým polárním rozpouštědlem.
- 4. Způsob izolace biologicky účinné frakce rostlinného melaninů podle nároku 3, vyznačující se tím, že vhodnými organickými rozpouštědly jsou etanol, etylacetát, aceton, dimetylformamid.-27CZ 302799 B6
- 5. Způsob izolace biologicky účinné frakce rostlinného melaninu podle nároků 2, 3 a/nebo 4, vyznačující se tím, že po vysušení se produkt znovu podrobí čištění a dále se aktivizuje semichinonový radikál.
- 6. Způsob izolace biologicky účinné frakce rostlinného melaninu podle nároku 5, vyznačující se tím, že na úplné odstranění minerální složky a další aktivaci sem ichino nového radikálu se používá anorganická kyselina na bázi chloru, jako je HC1 a HC!O4.
- 7. Způsob izolace biologicky účinné frakce rostlinného melaninu podle nároků 2 až 6, vyznačující se tím, že ve všech procesech se používá voda ve farmako logické kvalitě.
- 8. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje biologicky účinnou frakci rostlinného melaninu podle nároku 1, a farmaceuticky přijatelný nosič..
- 9. Biologicky účinná frakce rostlinného melaninu podle nároku 1, pro použití jako léčivo.
- 10. Biologicky účinná frakce rostlinného melaninu podle nároku 1, pro použití jako antioxidant.
- 11. Biologicky účinná frakce rostlinného melaninu podle nároku 1, pro použití k blokování peroxidace lipidů.
- 12. Biologicky účinná frakce rostlinného melaninu podle nároku 1, pro použití k regulaci aktivity leukocytů.
- 13. Biologicky účinná frakce rostlinného melaninu podle nároku 1, pro použití k regulaci a průběhu komplementového systému.výkres-28CZ 302799 B61/inhibice - ΐ(1/ιιπιθϊ of Trolox)Lag (sek) o 1 2 m (nmol)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SK1098-98A SK284664B6 (sk) | 1998-08-13 | 1998-08-13 | Biologicky účinná frakcia rastlinného melanínu, spôsob jej výroby, farmaceutický prostriedok s jej obsahom a jej použitie |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2001474A3 CZ2001474A3 (cs) | 2001-07-11 |
| CZ302799B6 true CZ302799B6 (cs) | 2011-11-16 |
Family
ID=20434262
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20010474A CZ302799B6 (cs) | 1998-08-13 | 1999-08-10 | Biologicky úcinná frakce rostlinného melaninu, zpusob její výroby a její použití |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6576268B2 (cs) |
| EP (1) | EP1104446B1 (cs) |
| AT (1) | ATE252619T1 (cs) |
| AU (1) | AU5078099A (cs) |
| CZ (1) | CZ302799B6 (cs) |
| DE (1) | DE69912291T2 (cs) |
| SK (1) | SK284664B6 (cs) |
| WO (1) | WO2000009616A1 (cs) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2004231997A1 (en) * | 2003-04-16 | 2004-11-04 | The University Of Mississippi | Immunostimulatory agents in botanicals |
| US8586090B2 (en) * | 2004-10-05 | 2013-11-19 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Melanin nanoshells for protection against radiation and electronic pulses |
| US20060281936A1 (en) * | 2005-03-23 | 2006-12-14 | Ramaswamy Mani | Biofermented grain-based phytolipids and methods for isolating, modifying and using same |
| WO2010064262A2 (en) * | 2008-12-05 | 2010-06-10 | Myko Tech Private Limited | A process for production of water soluble melanin using a strain of the fungus gliocephalotrichum |
| RU2565178C2 (ru) * | 2013-11-06 | 2015-10-20 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Иркутский государственный университет" | Способ получения пигмента-меланина из базидиоспор трутовых грибов |
| FR3035590B1 (fr) | 2015-04-30 | 2018-09-28 | Rosanna Carlini | Complexe proteomelanique bioassimilable, preparation et utilisations |
| EP3173098A1 (en) | 2015-11-27 | 2017-05-31 | Assistance Publique-Hopitaux De Paris | Immunostimulatory compositions |
| CN113549657B (zh) * | 2021-06-18 | 2023-06-20 | 南京师范大学 | 一种利用蓝草或蓝草加工剩余物制备黑色素的方法 |
| CN115736166A (zh) * | 2022-12-26 | 2023-03-07 | 浙江旺林生物科技有限公司 | 一种包含植物炭黑的墨鱼汁粉的加工方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1059540A (zh) * | 1991-06-27 | 1992-03-18 | 青岛大学 | 用黑芝麻提取黑色素的方法 |
| JPH04175377A (ja) * | 1990-11-08 | 1992-06-23 | Taenaka Kogyo Kk | メラニンの精製方法 |
| JPH0812557A (ja) * | 1994-06-29 | 1996-01-16 | Shiseido Co Ltd | 皮膚外用剤 |
| RU2083214C1 (ru) * | 1993-04-23 | 1997-07-10 | Голоунин Александр Васильевич | Способ получения меланина |
| WO1997034011A1 (fr) * | 1996-03-12 | 1997-09-18 | Svetlana Pavlovna Lyakh | Agent producteur d'une preparation antitumorale contenant de la melanine et denommee 'astromelanine' |
| WO1997034010A1 (fr) * | 1996-03-12 | 1997-09-18 | Svetlana Pavlovna Lyakh | Agent producteur d'une preparation antitumorale contenant de la melanine et denommee 'astromelanine' |
| RU2116036C1 (ru) * | 1997-06-06 | 1998-07-27 | Светлана Павловна Лях | Продуцент меланинсодержащей биологически активной добавки "астромеланин" |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5538752A (en) * | 1992-08-04 | 1996-07-23 | Regents Of The Univ. Of Minnesota | Melanin compositions and uses thereof and resulting products |
| RU2060818C1 (ru) * | 1994-01-04 | 1996-05-27 | Донцов Александр Евгеньевич | Способ получения меланинсодержащего фитосорбента и меланинсодержащий фитосорбент |
| FR2722498B1 (fr) * | 1994-07-12 | 1996-10-11 | Berkem Sa | Procede de preparation d'extraits contenant des composes polyphenoliques oligomeres de type catechique a partir de xources vegetales et extraits obtenus |
-
1998
- 1998-08-13 SK SK1098-98A patent/SK284664B6/sk not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-08-10 DE DE69912291T patent/DE69912291T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-10 AT AT99935267T patent/ATE252619T1/de active
- 1999-08-10 EP EP99935267A patent/EP1104446B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-08-10 CZ CZ20010474A patent/CZ302799B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-08-10 WO PCT/SK1999/000013 patent/WO2000009616A1/en active IP Right Grant
- 1999-08-10 AU AU50780/99A patent/AU5078099A/en not_active Abandoned
-
2001
- 2001-02-12 US US09/781,544 patent/US6576268B2/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH04175377A (ja) * | 1990-11-08 | 1992-06-23 | Taenaka Kogyo Kk | メラニンの精製方法 |
| CN1059540A (zh) * | 1991-06-27 | 1992-03-18 | 青岛大学 | 用黑芝麻提取黑色素的方法 |
| RU2083214C1 (ru) * | 1993-04-23 | 1997-07-10 | Голоунин Александр Васильевич | Способ получения меланина |
| JPH0812557A (ja) * | 1994-06-29 | 1996-01-16 | Shiseido Co Ltd | 皮膚外用剤 |
| WO1997034011A1 (fr) * | 1996-03-12 | 1997-09-18 | Svetlana Pavlovna Lyakh | Agent producteur d'une preparation antitumorale contenant de la melanine et denommee 'astromelanine' |
| WO1997034010A1 (fr) * | 1996-03-12 | 1997-09-18 | Svetlana Pavlovna Lyakh | Agent producteur d'une preparation antitumorale contenant de la melanine et denommee 'astromelanine' |
| RU2116036C1 (ru) * | 1997-06-06 | 1998-07-27 | Светлана Павловна Лях | Продуцент меланинсодержащей биологически активной добавки "астромеланин" |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69912291T2 (de) | 2004-04-29 |
| ATE252619T1 (de) | 2003-11-15 |
| CZ2001474A3 (cs) | 2001-07-11 |
| WO2000009616A1 (en) | 2000-02-24 |
| EP1104446A1 (en) | 2001-06-06 |
| US20020041905A1 (en) | 2002-04-11 |
| AU5078099A (en) | 2000-03-06 |
| EP1104446B1 (en) | 2003-10-22 |
| SK109898A3 (en) | 2000-12-11 |
| SK284664B6 (sk) | 2005-08-04 |
| DE69912291D1 (de) | 2003-11-27 |
| WO2000009616A8 (en) | 2001-07-19 |
| US6576268B2 (en) | 2003-06-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sicari et al. | Portulaca oleracea L.(Purslane) extracts display antioxidant and hypoglycaemic effects | |
| Parul et al. | In vitro nitric oxide scavenging activity of methanol extracts of three Bangladeshi medicinal plants | |
| Wang et al. | Chemical composition and biological activity of staghorn sumac (Rhus typhina) | |
| Abdoli et al. | Green synthesis of gold nanoparticles using Centaurea behen leaf aqueous extract and investigating their antioxidant and cytotoxic effects on acute leukemia cancer cell line (THP-1) | |
| CN102317468B (zh) | 腰果梨的原花色素、含有原花色素的组合物、及其用途 | |
| Husen et al. | Antioxidant potency of okra (Abelmoschus esculentus Moench) pods extract on SOD level and tissue glucose tolerance in diabetic mice | |
| CZ302799B6 (cs) | Biologicky úcinná frakce rostlinného melaninu, zpusob její výroby a její použití | |
| CN101505775B (zh) | 含有来自金合欢属树皮的物质的抗氧化组合物 | |
| Onyeka et al. | Effects of ethanolic root bark extract of Chrysophyllum albidum on serum superoxide dismutase, catalase and malondialdehyde in rat | |
| Khalid et al. | In-vitro assessment of antioxidant activity of Dalbergia latifolia barks extract against free radicals | |
| CHAITHADA et al. | Total Flavonoids, Total Phenolic Content and Antioxidant Activity from Fruits, Leaves, Twigs and Flowers of Mesua ferrea L. | |
| KR20070023845A (ko) | 백과 추출물 함유 화장료 조성물 및 이의 제조방법 | |
| Lee et al. | Antioxidant and biological activity in the leaves of Adzuki Bean (Vigna angularis L.) | |
| Osman et al. | Antioxidant activities of in vitro seedlings of Lycium barbarum (Goji) by diphenyl picrylhydrazyl (DPPH) assay | |
| Asaduzzaman et al. | Phytochemicals, nutritonal constituents, anti-bacterial and hypoglycemic activity of Aegle marmelos Lin. leaf extract in alloxan induced diabetic rats | |
| Shamtsyan et al. | Antiradical and antidiabetic activity of Pleurotus ostreatus extracts | |
| Chintu et al. | In-vitro antioxidant and antidiabetic activity of hydro alcoholic extract of Opuntia elatior fruit as well as quercetin | |
| Sarma et al. | Evaluation of antioxidant activity and nutraceutical property of Annona squamosa L. fruits found in Brahmaputra Valley agro-climatic condition | |
| Du Toit | Antioxidant content and potential of fresh and processed cladodes and fruit from different coloured cactus pear (Opuntia ficus-indica and Opuntia robusta) cultivars | |
| Song et al. | Pyracantha as a promising functional food: A comprehensive review on bioactive characteristics, pharmacological activity, and industrial applications | |
| Diane et al. | Triphytochemistry and effects of aqueous and hydro-ethanolic extracts of Spathodea campanulata P. beauv.(Bignoniaceae) on blood-sugar level and markers of pancreatitis in type 2 diabetic rats | |
| KR20090020216A (ko) | 그물바탕말속 추출물을 포함하는 미백용 조성물 | |
| Benoît et al. | Evaluation of the antioxidant activity of the aqueous extract of Catharanthus roseus (Apocynaceae) on hypertensive rats induced by 60% fructose | |
| Espinosa | Spectrophotometric determination of anthocyanin content in six common vegetables | |
| CN115524299A (zh) | 基于睡莲根茎提取物的药物抗氧化性研究方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20190810 |