CZ301004B6 - Cílené deriváty paclitaxelu, jejich zpusob výroby a jejich použití - Google Patents
Cílené deriváty paclitaxelu, jejich zpusob výroby a jejich použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ301004B6 CZ301004B6 CZ20070441A CZ2007441A CZ301004B6 CZ 301004 B6 CZ301004 B6 CZ 301004B6 CZ 20070441 A CZ20070441 A CZ 20070441A CZ 2007441 A CZ2007441 A CZ 2007441A CZ 301004 B6 CZ301004 B6 CZ 301004B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- paclitaxel
- succinyl
- phe
- targeted
- gnrh
- Prior art date
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 150000004579 taxol derivatives Chemical class 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 9
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 claims abstract description 54
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 claims abstract description 27
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 claims abstract description 27
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 7
- 125000004080 3-carboxypropanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C(O[H])=O 0.000 claims abstract description 6
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 10
- 125000002668 chloroacetyl group Chemical group ClCC(=O)* 0.000 claims description 4
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- -1 -OH Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 abstract 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 9
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 6
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 5
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 208000007093 Leukemia L1210 Diseases 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 2
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 2
- 101000573199 Homo sapiens Protein PML Proteins 0.000 description 2
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 2
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 2
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 2
- 102000054896 human PML Human genes 0.000 description 2
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 2
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNVPNXKRAUBJGW-UHFFFAOYSA-N (2-chloroacetyl) 2-chloroacetate Chemical compound ClCC(=O)OC(=O)CCl PNVPNXKRAUBJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBNOJYDPFALIQZ-LAVNIZMLSA-N 2'-succinyltaxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](OC(=O)CCC(O)=O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RBNOJYDPFALIQZ-LAVNIZMLSA-N 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- 102000008238 LHRH Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010021290 LHRH Receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N chloroacetic acid Chemical compound OC(=O)CCl FOCAUTSVDIKZOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940106681 chloroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000039 congener Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- WUESWDIHTKHGQA-UHFFFAOYSA-N cyclohexylurea Chemical compound NC(=O)NC1CCCCC1 WUESWDIHTKHGQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 description 1
- 230000002267 hypothalamic effect Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- PEECTLLHENGOKU-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-4-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1.CN(C)C1=CC=NC=C1 PEECTLLHENGOKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000003488 releasing hormone Substances 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Cílený derivát paclitaxelu obecného vzorce II, v nemž R.sup.1.n. znamená raménko: sukcinyl, sukcinyl-triethylenglykol, sukcinyl-Phe-Phe-OH, chloracetyl, acetyl-S-Cys-OH nebo N-maleimidobutyryl a R.sup.2.n. znamená fragment molekuly peptidového hormonu GnRH, zpusob výroby uvedeného cíleného derivátu, podle kterého se k molekule paclitaxelu naváže pres vhodné raménko peptidový hormon ci jeho derivát, pricemž se toto navázání provede ve dvou krocích, kdy se v prvním kroku na paclitaxel naváže raménko a ve druhém kroku je na volné koncové skupiny ramének navázán takový fragment GnRH, který odpovídá typu skupiny raménka, na kterou se váže, a použití cíleného derivátu paclitaxelu jako cytostatického léciva.
Description
Předložený vynález se týká cílených derivátů paclitaxelu, způsobu jejich výroby a jejich použití.
Dosavadní stav techniky
Paclitaxel vzorce 1
je přírodní produkt, který byl poprvé popsán Wanim v roce 1971 (J, Amer. Chem. Soc. 93,232515 2327). Paclitaxel je s úspěchem používán při léčbě rakoviny vaječníků, prsu a plic. Jeho cytostatická aktivita je spojena se stabilizací mikrotubulů a následným ukončením proliferace buňky (Suffnes M, CRC Press lne., Paclitaxel-science and aplications, 1995.).
Cílený derivát cytostatika je molekula skládající se z daného cytostatika, biologicky aktivní látky 20 a raménka, které obě části spojuje.
Biologicky aktivní látka hraje roli navigátora dané molekuly k receptorům látce vlastním. Na těchto specifických receptorech je molekula cíleného cytostatika zachycena a koncentrována. Díky tomuto efektu dochází ke snížení dávky léku pacientovi a minimalizaci negativních vedlejších účinků cytostatika na ostatní buňky.
Cílený derivát cytostatika se do buňky dostává receptorem zprostředkovanou endocytózou (Harrison G S., Wierman Μ E, Nett T M and Glode L M, Gonadotropin-releasíng hormone and íts receptor in normál and malignant cells, Endocrine-Related Cancer (2004) 11 725-748.).
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou cílené deriváty paclitaxelu obecného vzorce II
O (II),
Cl 301004 B6 v němž
R1 znamená sukcinyl, sukcinyl-triethylenglykol, sukcinyl-Phe-Phe-OH, chloracetyl, acetyl-SCys-OH nebo N-maleimidobutyryl a
R2 znamená fragment molekuly GnRH.
Dále se předložený vynález týká způsobu výroby sloučenin obecného vzorce II ajejich použití.
V našem případě byla biologicky aktivní látkou zvolena molekula hormonu GnRH a její analogy. GnRH je hypotalamický peptidový hormon ovlivňující funkci vypouštění hormonů FSH a LH ío z hypofyzí, GnRH, a tedy i jeho receptory, se nacházejí nejen v hypoíyze, ale i vendometriu, placentě, prsu, vaječnících, prostatě a varlatech (Clayton and Catt 1981, Wierman 1996, Huime and Lambalk 2001, Limonta et al. 2003.). Důležitým faktorem je, že GnRH receptory byly ve zvýšeném množství objeveny na nádorových buňkách hormonálně responsibi Iních nádorů (Kang et al, 2000, Bedecarrats and Kaiser 2003). Při syntéze nebyla ze sterických důvodů použita celá molekula GnRH, ale pouze biologicky aktivní fragment.
Deriváty paclitaxelu jsou připravovány modifikací hydroxylové skupiny na 2' uhlíku postranního řetězce. Tato hydroxylové skupina je vybrána ze dvou důvodů
a) vykazuje nejvyšší reaktivnost ze všech tří volných OH skupin na molekule paclitaxelu a
b) je využívána pro tvorbu tzv. „prodrug“. Tato prodrug paclitaxelu jsou založena na faktu, že hydroxylové skupina na 2' uhlíku postranního řetězce paclitaxelu je důležitá pro vazbu této molekuly na mikrotubuly. Pokud tedy dojde k navázání raménka právě přes tuto skupinu, dochází k inaktivaci paclitaxelu. Ke zpětné aktivaci cytostatické funkce paclitaxelu dochází po vstupu prodrug do buňky, kde dojde kjejich rozpadu na volný paclitaxel a ostatní doprovodné připojené látky. Na rozpadu prodrug a uvolnění paclitaxelu se podílí pH a enzymy nacházející se v buňce (Cavallaro G, Licciardi M, Caliceti P, Salmaso S and Gíammona G, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 58 (2004) 151-159.).
Syntéza cíleného derivátu paclitaxelu obecného vzorce II se skládá ze dvou stupňů:
A) v prvním krokuje na paclitaxel navázáno raménko. Volba vhodného raménka je založena na faktu, že na straně, kde se raménko váže přes OH skupinu paclitaxelu, musí být volná karboxyskupina pro tvorbu esterové vazby a na druhé straně raménka musí být taková skupina, která umožní následné napojení fragmentu GnRH. Tato skutečnost dává možnost přípravy mnoha druhů ramének ajejich napojení.
Tak 2 -O-sukcinyl-paclitaxel byl připraven navázáním kyseliny jantarové na hydroxylovou skupinu na 2' uhlíku postranního řetězce paclitaxelu, toto raménko končí volnou karboxylovou skupinou.
Triethylenglykol-2-O-sukcinyl-paclitaxel byl připraven prodloužením molekuly 2-Osukcinyl-paclitaxdu o molekulu triethylenglykolu. Toto raménko končí volnou OH skupinou.*
Phe-Phe-2-O-sukdnyl-paditaxd vznikl spojením volné karboxyskupiny sukcinátu a aminové skupiny dipeptidu Phe-Phe. Toto raménko vlastní volnou karboxylovou skupinu na a uhlíku dané aminokyseliny.*
2-O-chloracetyl-pciditaxel byl připraven navázáním chloroctové kyseliny na hydroxylovou skupinu na 2' uhlíku postranního řetězce paclitaxelu, toto raménko končí volným CL*
Cys(OH)-S-2-O-acetyl-paelitaxel vznikl reakcí volné skupiny Cl na 2-O-chloracetyl-paclitaxelu a SH skupiny na cysteinu. Toto raménko obsahuje volnou karboxyskupinu, NH2 skupina je chráněna.*
2-O-(N-maleimidobutyryl)-paclitaxel byl připraven vazbou N-maleimidomáselné kyseliny na hydroxylovou skupinu na 2' uhlíku postranního řetězce paclitaxelu; toto raménko končí volnou maleimidovou skupinou,* *Tato raménka jsou připravována z části podle všeobecných pravidel organických syntéz a z části io je čerpáno z literatury. V následujících přesných popisech syntéz bude vždy uveden zdroj informací.
Β) V druhém kroku je na volné koncové skupiny ramének vázán takový fragment GnRH, který odpovídá typu skupiny raménka, na kterou se váže. Tak byly připraveny fragmenty GnRH svolnou karboxyskupinou (pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-LeuOH), svolnou NH2 skupinou (H-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-GlyNH2) a fragmenty GnRH prodloužené na C-konci o cystein s volnou SH skupinou (pHis-Trp-Ser-Tyr-GIy-Leu_Arg-Pro-CysNH2).
Cytostatické účinky byly měřeny nejen u cílených molekul, ale také u molekul vzniklých napoje20 ním raménka na paclitaxel. Měření byla prováděna na buněčných liniích: cervikálního karcinomu HeLa S3 [Human cervix carcinoma HeLa S3 cells (ATCC CCL 2.2)], lidských T-lymfobíastoidech CCRF-CEM [CCRF/CEM T lymphoblastoid cells (ATCC CCL 119)], myších leukemických buňkách L1210 [Mouše leukemia L 1210 cells (ATCC CCL 219)] a HL-60 lidských promyelocytických buňkách leukémie.
Testy byly prováděny v CO2 inkubátoru při 37 °C (72 h) a vyhodnoceny konvenčními technikami (na počítači buněk Serono 150+, barvením methylenovou modří a buněčným testem viability XTT). Cytostatická účinnost (hodnoty IC5q) jednotlivých sloučenin byla posouzena podle jejich schopnosti inhibovat růst uvedených buněčných kultur.
Příklady provedení vynálezu
V dalším textu budou používány následující zkratky:
DCC Ν,Ν'-dicyklohexylkarbodiimid DIEA diisopropylethylamin DIPC ΜΑ'-diisopropylkarbodiimid DMAP 4-(dimethylamino)pyrÍdin DMF dimethylformamid
GnRH gonadotropiny uvolňující hormon NHS N-hydroxysukcinimid
TBTU 0-(benzotriazol-1 -yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium-tetrafluorborát TEA triethylamin
Příklad 1
Příprava 2 -O-sukcinylpaclitaxelu
Bylo postupováno analogicky podle Deutsch Η M and Zalkow L H, Synthesis of congeners and prodrugs. 3. Water-soluble prodrugs of paclitaxel with potent antitumor activity. J. Med. Chem.
32 (1989), str. 788-792.
450 mg (4,5 mmol) anhydridu kyseliny jantarové a 250 mg (0,29 mmol) paclitaxelu bylo rozpuštěno v 10 ml suchého pyridinu. Po 3 hodinách míchání za teploty místnosti a kontroly stavu syntézy na HPLC bylo rozpouštědlo odstraněno na vakuové odparce. Ke zbytku bylo přidáno ml destilované vody, směs byla míchána 20 minut a filtrována. Precipitát byl rozpuštěn v acetonu do něhož byla pomalu přidávána destilovaná voda. Vzniklá bílá sraženina byla zfiltrována.
Molekulová hmotnost 953, MS (ESI +) analýza potvrdila výslednou látku 2-O-sukcinyl5 paclitaxel (viz obrázek 1).
Příklad 2
Příprava triethylenglykol-2 f-O-sukcinyl-paclitaxelu io Kombinace kondenzačního činidla a báze byla vybrána podle Greenwaid R B, Gilbert C W, Pendri A, Conover C D, XiaJ, Martinez A, Journal of Medicinal Chemistiy 39 (2): 424-431 JAN 19 1996.
Triethylenglykol (10 μΐ, 0,07 mmol) byl za teploty místnosti rozpuštěn v 0,5 ml bezvodého dichlormethanu. Tato směs byla vychlazena na 0°C, poté byly přidány kondenzační činidlo DIPC (2 μΐ, 0,01 mmol), 2'-O-sukcinyl-paclitaxel (10 mg, 0,01 mmol) a báze DMAP (5 mg, 0,04 mmol). Směs byla míchána 16 hodin při teplotě místnosti a poté bylo rozpouštědlo odpařeno na rotační vakuové odparce. Byla provedena HPLC analýza konečné směsi. Látka byla identifikována na základě MS (ESI +) analýzy. Frakce s očekávanou hmotností 1085,6 byla izolována
2o na preparativní HPLC. Molekulární hmotnost analogu je 1085,6. V hmotnostním spektru je hlavním maximem molekulární adukt (M+Na)+ o hmotnosti 1108,4 (viz obrázek 2).
Příklad 3
Příprava Phe-Phe-2 -O-sukcinyl-paclitaxelu
Aktivace karboxylové skupiny pomocí NHS: 10 mg (0,01 mmol) 2'-O-sukcinyl-paclitaxelu 2,4 mg (0,02 mmol) NHS a 4,3 mg (0,02 mmol) DCC bylo rozpuštěno v 0,5 ml dichlormethanu. Poté byly přidány 4 μΐ (0,02 mmol) DIE A. Směs byla míchána za teploty místnosti. Po 19 hodinách bylo rozpouštědlo odpařeno na vakuové odparce.
mg (0,005 mmol) aktivovaného 2'-O-sukcinyl-paclitaxelu a 2 mg (0,006 mmol) dipeptidu Phe-Phe bylo rozpuštěno v 0,5 ml DMF. Směs byla míchána za teploty místnosti 6 hodin. Poté byla směs Iyofilízována a podrobena analýze na MS (ESI +). Molekulová hmotnost derivátu je 1247. V hmotnostním spektru je hlavním maximem molekulární adukt (M+Na)+ o odpovídající hmotnosti 1270,3 (viz obrázek 3).
Příklad 4
Příprava 2 -O-chloracetyl-paclitaxelu
15 mg (0,018 mmol) paclitaxelu bylo rozpuštěno v 0,5 ml dichlormethanu pod ochrannou atmosférou argonu. Směs byla vychlazena na 0°C. Bylo přidáno 3,3 mg (0,019 mmol) anhydridu kyseliny chloroctové a 3 μΐ (0,015 mmol) DIEA. Směs byla míchána za teploty místnosti a tmy 15 hodin. Průběh reakce byl sledován HPLC. Látka byla čištěna pomocí preparativní TLC a analyzována MS (ESI +), Molekulová hmotnost 929,5. V hmotnostním spektru je hlavním maxi45 mem adukt (M+Na)+ o odpovídající hmotnosti 952,1 (viz obrázek 4).
Příklad 5
Příprava Cys(OH)S-2 -O-acetyl-paclitaxelu
10 mg (0,01 mmol) 2ř O-chloracetyl-paclitaxelu a 5 mg (0,02 mmol) N-Boc-Cys-OH bylo rozpuštěno v 0,5 ml DMF. Poté byly přidány 3 μΙ (0,015 mmol) DIEA, Směs byla míchána ve tmě a v ochranné atmosféře argonu po dobu 18 hodin. Směs byla Iyofilízována a podrobena analýze
MS (ESI +). V hmotnostním spektru je hlavním maximem adukt (M+Na)+ o odpovídající hmotnosti 1137,2 (viz obrázek 5).
Příklad 6
Příprava 2 -O-(N-maleimidobutyryl)-paclitaxelu
Příprava anhydridu N-maleimidomáselné kyseliny: 10 mg (0,05 mmol) N-maleimidomáselné kyseliny bylo rozpuštěno v 0,5 ml dichlormethanu. Do roztoku přidáváme po kapkách TEA, dokud se N-maleimidomáselná kyselina všechna nerozpustí. Poté bylo přidáno 5 mg io (0,02 mmol) DCC. Směs byla míchána za teploty 10 ŮC a za tmy 5 hodin. Po 5 hodinách došlo k vysrážení N, N M icy klohexy lmočoviny, která byla odstraněna odstřeďováním a filtrací přes mikrofiltr. Poté bylo odstraněno rozpouštědlo na vakuové odparce.
Směs byla rozpuštěna v 0,5 ml dichlormethanu, bylo přidáno 10 mg (0,01 mmol) paclitaxelu a
5 μΐ pyridinu. Směs byla míchána za teploty místnosti po dobu 15 hodin. Poté bylo rozpouštědlo odpařeno na vakuové odparce. Směs byla čištěna na HPLC a analyzována na MS (ESI +). V hmotnostním spektru je hlavním maximem adukt (M+Na)+ o odpovídající hmotnosti 1141,2 (viz obrázek 6).
Příklad 7
Příprava cíleného derivátu GnRH-2 'O-sukcinyl-paclitaxelu (1. způsob)
85,8 mg (0,09 mmol) 2'-O-sukcinyl-paclitaxelu a 28,9 mg (0,09 mmol) TBTU bylo rozpuštěno v 10 ml bezvodého DMF. Do směsi bylo přidáno 31 μΐ (0,18 mmol) DIEA. Po 2 minutách míchání za teploty místnosti bylo přidáno 59,4 mg (0,09 mmol) fragmentu GnRH (H-Tyr-GlyLeu-Arg-Pro-GlyNH2). Směs byla míchána za teploty místnosti 2 hodiny. Poté byla směs lyofilizována. Výsledná látka paclitaxel-sukcinát-GnRH byla čištěna HPLC a analyzována MS (ESI +) (viz obrázek 7).
Příklad 8
Příprava cíleného derivátu GnRH-2 -O-sukcinyl-paclitaxelu (2. způsob)
Aktivace karboxylové skupiny 2'-O-sukcinyl-paclitaxelu pomocí NHS: 10 mg (0,01 mmol) 2'-O-sukcinyI-paclitaxelu, 2,4 mg (0,02 mmol) NHS a 4,3 mg (0,02 mmol) DCC bylo rozpuště35 no v 0,5 ml dichlormethanu. Poté byly přidány 4 μΐ (0,02 mmol) DIEA. Směs byla míchána za teploty místnosti. Po 19 hodinách bylo rozpouštědlo odpařeno na vakuové odparce.
mg aktivovaného 2'-O-sukcinyl-paclitaxelu a 3 mg (0,005 mmol) fragmentu GnRH (H-TyrGly-Leu-Arg-Pro-GlyNH2) bylo rozpuštěno v 0,5 ml DMF. Směs byla míchána za teploty místnosti po dobu 6 hodin. Poté byla směs lyofilizována, výsledná látka paclitaxel-sukcinátGnRH byla čištěna HPLC a analyzována MS (ESI +).
Příklad 8
Cytostatická aktivita
Cytostatická aktivita jednotlivých derivátů paclitaxelu byla měřena na rakovinných buňkách HeLa S3 [Human cervix carcinoma HeLa S3 cells (ATCC CCL 2.2)], HL-60 lidských promyelocytických buňkách leukémie, myších leukemických buňkách L1210 [Mouše leukemia L 1210 cells (ATCC CCL 219)] a lidských T-Iymfoblastoídech CCRF-CEM [CCRF/CEM T lymphoblastoid cells (ATCC CCL 119)]. Hodnota cytostatické aktivity je vyjádřena jako hodnota IC5o v následující tabulce.
| ICS0 (nmol.l'*) | ||||
| LJ210 | HL-60 | HeLaS3 | CCRF-CEM | |
| GnRH-2 '-O-sukcinyl-paclitaxel | 220 | 18 | 7 600 | 24 |
| triethylenglykol-2'-0-sukcinyí-paclitaxel | 381 | 110 | 133 | 40 |
| Cys(OH)-S-2'-O-acetyl-paclitaxel | 81,6 | 21,6 | >1000 | 20 |
| Phe-Phe-2ř-O-sukcinyl-paclitaxel | 315 | 73,3 | >1000 | 73,9 |
| paclitaxel | 94 | 20 | 35 | 16 |
Průmyslová využitelnost
Cílené deriváty paclitaxelu podle vynálezu mohou být využity ve zdravotnictví a farmaceutickém průmyslu,
Claims (7)
1. Cílený derivát paclitaxelu obecného vzorce II v němž
R1 znamená raménko: sukcinyl, sukcinyl-triethylenglykol, sukcinyl-Phe-Phe-OH, chloracetyl, acetyl-S-Cys-OH nebo N-maleimidobutyryi a
R2 znamená fragment, 1-11 aminokyselinových jednotek, molekuly peptidového hormonu GnRH.
2. Cílený derivát paclitaxelu podle nároku 1, v němž se jako raménko využije sukcinyl.
3. Cílený derivát paclitaxelu podle nároku 1 nebo 2, v němž se jako peptidový hormon použije GnRH a jeho analoga a deriváty.
io
4. Způsob výroby cíleného derivátu podle kteréhokoliv z nároků 1 až3, vyznačující se tím, že se k molekule paclitaxelu přes vhodné raménko, např. sukcinyl, sukcinyl-triethylenglykol, sukcinyl-Phe-Phe-OH, chloracetyl, acetyl-S-Cys-OH nebo N-maleimidobutyryl, naváže peptidový hormon či jeho derivát.
5. Způsob výroby podle nároku 4, vyznačující se tím, že se provádí ve dvou krocích, kdy se v prvním kroku na paclitaxel naváže raménko, sukcinyl, sukcinyl-triethylenglykol, sukcinyl-Phe-Phe-ΌΗ, chloracetyl, acetyl-S-Cys-OH nebo N-maleimidobutyryl, a ve druhém kroku je na volné koncové skupiny ramének, -COOH, -OH, -Cl, -maleimid, navázán
20 fragment GnRH, s volnou -COOH, -NH2, -SH skupinou, který odpovídá typu raménka, na které se váže.
6. Způsob výroby podle nároku 4 nebo 5, vyznačující se tím, že se v prvním kroku vyrobí 2'-O-sukcinyl-paclitaxel, triethylengiykol-2'-O-sukcinyl-paclitaxel, Phe-Phe-2'Ό25 sukcinyl-paclitaxel, 2'-O-chloracetyl-paclitaxel, Cys(OH)-S-2'-O-acetyl-paclitaxel nebo 2'-0-(N-maleimidobutyryl)-paclitaxel.
7. Použití cíleného derivátu paclitaxelu podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3 pro přípravu cytostatického léčiva.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20070441A CZ301004B6 (cs) | 2007-06-27 | 2007-06-27 | Cílené deriváty paclitaxelu, jejich zpusob výroby a jejich použití |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20070441A CZ301004B6 (cs) | 2007-06-27 | 2007-06-27 | Cílené deriváty paclitaxelu, jejich zpusob výroby a jejich použití |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2007441A3 CZ2007441A3 (cs) | 2009-01-07 |
| CZ301004B6 true CZ301004B6 (cs) | 2009-10-07 |
Family
ID=40175543
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20070441A CZ301004B6 (cs) | 2007-06-27 | 2007-06-27 | Cílené deriváty paclitaxelu, jejich zpusob výroby a jejich použití |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ301004B6 (cs) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ303072B6 (cs) * | 2009-02-13 | 2012-03-21 | Zentiva, K.S. | Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH rízeným uvolnováním kancerostatika |
| CZ306653B6 (cs) * | 2015-10-30 | 2017-04-19 | Ústav experimentální botaniky AV ČR, v. v. i. | Deriváty paclitaxelu, způsob výroby a použití |
| US20210038730A1 (en) * | 2018-04-03 | 2021-02-11 | University Of Portsmouth Higher Education Corporation | Peptide nanofibers |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6380161B1 (en) * | 1999-06-21 | 2002-04-30 | Inkine Pharmaceutical Company, Inc. | Compositions for treating chemotherapy-resistant tumor cells and targeted chemotherapy compositions |
| US20020155992A1 (en) * | 1999-04-13 | 2002-10-24 | Jingya Xu | Poly (dipeptide) as a drug carrier |
-
2007
- 2007-06-27 CZ CZ20070441A patent/CZ301004B6/cs not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020155992A1 (en) * | 1999-04-13 | 2002-10-24 | Jingya Xu | Poly (dipeptide) as a drug carrier |
| US6380161B1 (en) * | 1999-06-21 | 2002-04-30 | Inkine Pharmaceutical Company, Inc. | Compositions for treating chemotherapy-resistant tumor cells and targeted chemotherapy compositions |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Cavallaro G. et al.: European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 2004, 58. 151-159 * |
| Huang Ch-M. et al.: Chemistry & Biology 2000, 7 (7), 453-461 * |
| Liu D.Z., Sinchaikul S. et al.: Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2007, 17, 617-620 * |
| Safavy A., Bonner J.A. et al.: Bioconjugate Chemistry 2003, 14 (2), 302-310 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ303072B6 (cs) * | 2009-02-13 | 2012-03-21 | Zentiva, K.S. | Polymerní konjugáty paclitaxelu a docetaxelu s pH rízeným uvolnováním kancerostatika |
| CZ306653B6 (cs) * | 2015-10-30 | 2017-04-19 | Ústav experimentální botaniky AV ČR, v. v. i. | Deriváty paclitaxelu, způsob výroby a použití |
| US20210038730A1 (en) * | 2018-04-03 | 2021-02-11 | University Of Portsmouth Higher Education Corporation | Peptide nanofibers |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2007441A3 (cs) | 2009-01-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK2678037T3 (en) | Branched linker for protein pharmaceutical conjugates | |
| US5773522A (en) | Polymer-bound camptothecin derivatives | |
| EP3218392B1 (en) | Macrocyclic peptides useful as immunomodulators | |
| US11413281B2 (en) | Ternary conjugate of antitumor drug, and synthesis and application | |
| EP3152223B1 (en) | Mitomycin conjugate | |
| EP3459546B1 (en) | Multi-arm polymeric targeting anti-cancer conjugate | |
| HUP0300093A2 (en) | Taxane prodrugs | |
| EP2646456A1 (en) | Process for the preparation of morpholinyl anthracycline derivatives | |
| AU2018255458B2 (en) | Multi-arm targeted anti-cancer conjugate | |
| WO2007112348A2 (en) | Prodrug composition | |
| JP2002518405A (ja) | ビタミンｂ１２誘導体及びそれらの製造方法 | |
| JP2004504358A (ja) | 抗腫瘍薬のポリマー複合体 | |
| TW200922623A (en) | Polymeric drug delivery systems containing an aromatic allylic acid | |
| EP2824108B1 (en) | Tetracyclic anthraquinone derivatives | |
| CZ301004B6 (cs) | Cílené deriváty paclitaxelu, jejich zpusob výroby a jejich použití | |
| RU2697519C1 (ru) | Средство пептидной природы, включающее псма-связывающий лиганд на основе производного мочевины, способ его получения и применение для получения конъюгата с лекарственным и диагностическим агентом | |
| EP2123283A1 (en) | The tetracyclic anthraquinones possessing anti-cancer effect | |
| EP3928797B1 (en) | Cd44 targeted multi-arm conjugate | |
| US20240408226A1 (en) | Antibody drug conjugate intermediate containing sn38 and its preparation method | |
| EP2405944B1 (en) | Prodrugs | |
| KR20030024800A (ko) | 제약학적 활성 화합물 | |
| HK40044642A (en) | Macrocyclic peptides useful as immunomodulators | |
| CZ306653B6 (cs) | Deriváty paclitaxelu, způsob výroby a použití | |
| HK40016053B (en) | Multi-arm targeted anti-cancer conjugate | |
| HK40016053A (en) | Multi-arm targeted anti-cancer conjugate |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20160627 |