JP2004504358A

JP2004504358A - 抗腫瘍薬のポリマー複合体

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Publication number: JP2004504358A
Application number: JP2002513503A
Authority: JP
Inventors: スアラト，アントニーノ; アンジエルツチ，フランチエスコ; カルーソ，ミケーレ; スコラロ，アレツサンドラ; ボルピ，ダニエーレ; ザマイ，モレノ
Original assignee: フアルマシア・イタリア・エツセ・ピー・アー
Priority date: 2000-07-25
Filing date: 2001-07-09
Publication date: 2004-02-12
Also published as: WO2002007770A2; CN1443079A; WO2002007770A3; GB0018240D0; EP1317287A2; US20030195152A1; AU2001289635A1

Abstract

式（Ａ）：Ｐ−［Ｗ_２］_ｐ−Ｓ_０−［Ｗ_１］_ｒ−［Ｄ］（式中、Ｐは水溶性ポリマーであり、［Ｗ_１］は、式−ＨＮ−Ｚ_１−ＣＯ−（式中、Ｚ_１は線状又は分枝Ｃ_２−Ｃ_１２アルキレン鎖又は式−Ｃ_６Ｈ_４−ＣＨ_２−Ｏ−の残基を表わす）の残基であり、［Ｗ_２］は、式−ＨＮ−Ｚ_２−ＣＯ−（式中、Ｚ_２はＣ_２−Ｃ_１２の線状又は分枝アルキレン鎖を表わす）の残基であり、ｐ及びｒは０又は１であり、Ｓ_０は、主としてマトリックスメタロプロテイナーゼ、ゼラチナーゼの作用によって腫瘍部位で選択的に開裂されるペプチド残基であり、［Ｄ］は抗腫瘍薬の残基である）の抗腫瘍薬の水溶性ポリマー複合体。該複合体は遊離薬剤に比べて高い抗腫瘍活性と低い毒性を有する。それらの調製のための方法、有用な中間体及びそれらを含む医薬組成物も記述する。

Description

【０００１】
本発明は、主としてマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の作用によって腫瘍部位で遊離活性薬剤を放出する抗腫瘍薬のポリマー複合体に関する。この薬剤には、細胞毒性物質又は腫瘍の増殖と拡大に関わる酵素の阻害因子のような抗腫瘍性物質を含む。本発明の第一の目的は、主としてマトリックスメタロプロテイナーゼ、ゼラチナーゼの作用によって腫瘍部位において活性薬剤を選択的に放出するポリマー薬剤複合体を提供することである。マトリックスメタロプロテイナーゼ、特にＭＭＰ２又はゼラチナーゼＡ、の腫瘍分泌と実験的転移の間の相関が報告されている（Ｌｉｏｔｔａ，Ｌ．Ａ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔ．，８１：５５６、１９８９；Ｎａｋａｊｉｍａ，Ｍ．ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，４７：４８６９、１９８７）。ＭＭＰ２は転移性腫瘍の侵襲最前部の周囲の間質細胞において高度に発現されることが認められた（Ｓａｌｏ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５８：３０５８，１９８３；Ｒｅｐｏｎｅｎ，Ｐ．ら、同上、２６７：７８５６，１９９２）。この酵素は、皮膚（Ｐｙｋｅ，Ｃ．ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，５２：１３３６，１９９２）、肺（Ｋｏｄａｔｅ，Ｍ．ら、Ｐａｔｈｏｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，４７：４６１，１９９７；Ｎａｗｒｏｃｋｉ，Ｂ．ら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊ．ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ，７２：５５６，１９９７）、胃（Ｅｎｄｏ，Ｋ．ら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７：２２５、３，３　１９９７）、直腸結腸（Ｌｉａｂａｋｋ，Ｎ．ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．，５６：１９０，１９９６；Ｐｙｋｅ，Ｃ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１４２：３５９，１９９３）、乳房（Ｇｉｌｌｅｓ，Ｃ．ら、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｉｎｖｅｓｔ．，７６：６５１，１９９７；Ｄａｖｉｅｓ，Ｂ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，６７：１１２６，１９９３）、前立腺（Ｓｔｅａｒｎｓ，Ｍ．Ｅ．ら、Ｏｎｃｏｌｏｇｙ　Ｒｅｓ．，８：６９、１９９６）、卵巣（Ｆｉｓｈｍａｎ，Ｄ．ら、Ｉｎｖａｓｉｏｎ　＆　Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，１６：１５０，１９９６）及び膀胱（Ｍｉｙａｋｅ　Ｈ．ら、Ｊ．ｏｆ　Ｕｒｏｌｏｇｙ，１５７：２３５１，１９９７）を含めて、様々な腫瘍型において発現される。
【０００２】
種々のクラスの抗腫瘍薬のポリマー複合体が既にＰＣＴ特許願第ＷＯ９９／１７８０５号及びＷＯ９９／１７８０４号ならびに米国特許第５，７７３，５２２号及び５，６１８，７９０号の中で開示されている。
【０００３】
本発明は、一般式（Ａ）：
【０００４】
【化８】

（式中、Ｐは水溶性ポリマーであり、
［Ｗ_１］は、式−ＨＮ−Ｚ_１−ＣＯ−（式中、Ｚ_１は線状又は分枝Ｃ_２−Ｃ_１２アルキレン鎖又は式−Ｃ_６Ｈ_４−ＣＨ_２−Ｏ−の残基を表わす）の残基であり、
［Ｗ_２］は、式−ＨＮ−Ｚ_２−ＣＯ−（式中、Ｚ_２はＣ_２−Ｃ_１２の線状又は分枝アルキレン鎖を表わす）の残基であり、
ｐ及びｒは０又は１であり、
Ｓ_０は、マトリックスメタロプロテイナーゼの作用によって腫瘍部位で選択的に開裂されうるペプチド残基であり、および
［Ｄ］は抗腫瘍薬の残基である）
のポリマー薬剤複合体を提供する。
【０００５】
それ故、発明は、マトリックスメタロプロテイナーゼ、特にゼラチナーゼによって開裂されて、式Ｓ_１−［Ｗ_１］_ｒ−［Ｄ］（式中、Ｓ_１はＳ_０から誘導されるペプチドであり、［Ｗ_１］、［Ｄ］及びｒは上記で定義したとおりである）の中間体を放出し、かかる中間体から抗腫瘍薬Ｄが自然に又は腫瘍組織中に存在する蛋白質分解酵素の作用によって放出される、一般式（Ａ）の抗腫瘍薬のポリマー複合体を提供する。
【０００６】
本発明のもう１つの局面は、一般式（Ａ）の新規ポリマー薬剤複合体の投与を含む、固体腫瘍を治療する方法を提供することである。
【０００７】
好ましくは、Ｐは、ポリグルタミン酸、カルボキシル化デキストラン、カルボキシル化ポリエチレングリコール又はヒドロキシプロピルメタアクリルアミドに基づくポリマーのような水溶性ポリマーである。最も好ましくは、ＰはＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルアミド（ＨＰＭＡ）に基づくポリマーである。
【０００８】
好ましくは［Ｗ_１］は存在しないか、すなわちｒ＝０であるか、又は自己犠牲性ｐ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーである（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．ｖｏｌ．２４、４７９（１９９１）；ＰＡＢＣ、−ｐＨＮ−Ｃ_６Ｈ_４−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＯ−参照）。Ｚ_１及びＺ_２が表わしうるＣ_２−Ｃ_１２アルキレン鎖は、式（ＣＨ_２）_３−；−ＣＨ_２−Ｃ（ＣＨ_３）_２−ＣＨ_２；及び−（ＣＨ_２）_５−の残基を含む。好ましくは［Ｗ_２］は６−アミノヘキサン酸の残基、Ｚ_２＝−（ＣＨ_２）_５−である。
【０００９】
ペプチドＳ_０は４から５個の天然又は合成アミノ酸からの配列を含む。
【００１０】
好ましくは、ペプチドＳ_０は、
Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号１）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ（配列番号２）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ（配列番号３）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ（配列番号４）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＰ−Ｇｌｙ（配列番号５）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号６）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号７）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号８）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ（配列番号９）、Ｓｍｃ−ＧＩｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ（配列番号１０）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ（配列番号１１）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ（配列番号１２）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ−Ｇｌｙ（配列番号１３）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号１４）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１５）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ（配列番号１６）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｔｈａ−Ｔｒｐ（配列番号１７）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｒｐ（配列番号１８）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｔｈａ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ（配列番号１９）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ（配列番号２０）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号２１）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ（配列番号２２）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２３）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号２４）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ（配列番号２５）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ（配列番号２６）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２７）またはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ（配列番号２８）
を表わす。
【００１１】
最も好ましいペプチド配列Ｓ_０は、
Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号１）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ＧＩｙ（配列番号２）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号６）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号７）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号８）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ（配列番号１１）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−ＧＩｙ（配列番号１４）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１５）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号２１）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ（配列番号２２）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２３）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号２４）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ（配列番号２５）またはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２７）である。本明細書において、Ｌｅｕはロイシンであり、Ｔｒｐはトリプトファンであり、Ｍｅｔはメチオニンであり、Ｍｅｔ（Ｏ）はメチオニンスルホキシドであり、Ｃｙｓ（Ｂｎ）はＳ−ベンジル−システインであり、ＳｍｃはＳ−メチルシステインであり、Ｔｈａはチエニルアラニンであり、ｐＦＦはｐ−フルオロフェニルグリシンであり、Ｇｌｙはグリシンである。
【００１２】
薬剤残基［Ｄ］は、リンカーＷ_１又はペプチドＳ_０の結合のための官能基を担う抗腫瘍薬の残基である。そのような官能基は、ヒドロキシ、カルボニル、カルボキシ、第一又は第二アミノ基及びスルフィドリルを含む。好ましい抗腫瘍薬は、ビンカアルカロイド類、アントラサイクリン、タキサン、細胞傷害性ヌクレオシド、カンプトテシン、ポドフィロトキシン、アルキル化剤のクラスに属する細胞傷害性物質を含む。それらのクラスの成員は、例えば、４−デアセチル−ビンブラスチン、４−デアセチル−ビンクリスチン、ビンデシン、ドキソルビシン、４’−エピドキソルビシン、ダウノルビシン、４−デメトキシ−ダウノルビシン、４’−デオキシ−４’−ヨードドキソルビシン、３’−（２−メトキシモルホリノ）ドキソルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、５−フルオロウラシル、カンプトテシン、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、エトポシド、エストラムスチンを含む。本発明の他の抗腫瘍薬は、腫瘍の増殖と拡大に関わる酵素の阻害因子を含む。
【００１３】
本発明はまた、一般式（Ａ）の薬剤複合体を調製するための方法であって、一般式（１）の化合物又は式（１’）の対応する塩誘導体：
【００１４】
【化９】

（式中、［Ｗ_１］、［Ｗ_２］、ｐ、ｒ、Ｓ_０及び［Ｄ］は上記で定義したとおりであり、そしてＲＨは酸である）を、化合物（１）又は（１’）との結合のための適当な官能基を担うポリマーＰ１と反応させることを含む方法を提供する。化合物（１）又は（１’）への結合のためのポリマーＰ１上の適当な官能基は、ｐ−ニトロフェニルエステル又はイミダゾイルエステルエステルのようなカルボキシル基又は活性化カルボキシル基を含む。好ましくは、（１’）におけるＲＨはＨＣｌ又はＣＦ_３ＣＯＯＨを表わす。
【００１５】
式（１）の化合物及び対応する塩誘導体（１’）も、本発明によって提供される。それらは下記のような種々の合成方法に従って調製することができる。１つの方法は、好ましくは酸性条件下で、式（２）：
【００１６】
【化１０】

（式中、［Ｗ_１］、［Ｗ_２］、ｐ、ｒ、［Ｄ］及びＳ_０は上記で定義したとおりであり、Ｒ_２は、Ｂｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル）、Ｆｍｏｃ、トリフェニルシリル、ジフェニルメチレン又はトリフェニルメチルのようなアミノ保護基を表わす）
の誘導体からＮ保護基を除去して、上記で定義したような一般式（１）又は一般式（１’）の化合物を生成し、任意に、弱塩基処理によって一般式（１’）の化合物を対応する遊離アミノ誘導体（１）に転換することを含む。
【００１７】
式（２）の誘導体は、好ましくは、式（３）の化合物を式（４）の化合物
【００１８】
【化１１】

（式中、［Ｗ_１］、［Ｗ_２］、Ｒ_２、ｐ、ｒは上記で定義したとおりであり、Ｒ_１はヒドロキシ基又はｐ−ニトロフェノキシ又はＮ−ヒドロキシスクシニミド基のような活性化エステルの残基又は塩素のようなハロゲンであり、そしてＳ_ｘ、Ｓ_ｙは、独立して、アミノ酸であるか又は任意に縮合剤の存在下で、互いに連結されたとき上記で定義したようなペプチド残基Ｓ_０を形成することを特徴とするペプチド残基である）と反応させて、上記で定義したような式（２）の誘導体を得ることを含む方法で調製される。好ましくは、Ｓ_ｙはＭｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ又はＬｅｕ−Ｇｌｙを表わし、Ｓ_ｘはＣｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ−Ｇｌｙ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ、Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ、Ｌｅｕ−Ｔｒｐ、Ｔｈａ−Ｔｒｐ、Ｍｅｔ−Ｔｒｐ、Ｔｈａ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｍｅｔ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ又はＬｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙを表わす。
【００１９】
式（２）の誘導体はまた、リンカーＷ_１又はペプチドＳ_０への結合のための官能基を担う抗腫瘍薬Ｄを、式（５）：
【００２０】
【化１２】

（式中、［Ｗ_１］、［Ｗ_２］、Ｒ_２、Ｒ_１、ｐ、ｒ及びＳ_０は上記で定義したとおりである）のＮ保護された誘導体と反応させて、上記で定義したような式（２）の誘導体を生成することを含む方法でも調製しうる。
【００２１】
上記で定義したような式（２）の化合物の調製のための代替的方法は、例えば：
ａ）薬剤Ｄを式（６）：
【００２２】
【化１３】

（式中、Ｗ_１、ｒ、Ｒ_１及びＲ_２は先に定義したとおりである）
の化合物と反応させ、
ｂ）生じた式（７）：
【００２３】
【化１４】

（式中、Ｗ_１、ｒ、Ｒ_２及び［Ｄ］は先に定義したとおりである）
の化合物から保護基を除去し、
ｃ）生じた式（８）：
【００２４】
【化１５】

（式中、Ｗ_１、ｒ及び［Ｄ］は先に定義したとおりである）
の誘導体を、式（９）：
【００２５】
【化１６】

（式中、Ｗ_２、Ｒ_１、Ｒ_２、ｐ及びＳ_０は先に定義したとおりである）
のＮ保護された誘導体と反応させて、上記で定義したような式（２）の誘導体を得ることを含む。式（２）の化合物の調製のためのもう１つの方法は、遊離塩基（１０）：
【００２６】
【化１７】

（式中、Ｗ_１、［Ｄ］、ｒ及びＳ_０は先に定義したとおりである）
を、式（１１）：
【００２７】
【化１８】

（式中、Ｗ_２、ｐ、Ｒ_１及びＲ_２は先に定義したとおりである）
のＮ保護された活性化化合物と反応させて、上記で定義したような式（２）の化合物を得ることを含む。
【００２８】
式（４）、（５）及び（９）の化合物の調製は、ペプチドの調製のための既知の手法に従う。例えば、Ｎ保護されたアミノ酸を段階的に加えることを通して、ワン（Ｗａｎｇ）樹脂のような固体樹脂に結合された鎖を伸長させる固相合成法を使用することによる。好ましくはＮ保護基はＦｍｏｃである。Ｎ保護されたアミノ酸のＣ末端を、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）のような有機塩基の存在下に塩化メチレンのような非プロトン性溶媒中で樹脂に結合する。標準的な脱保護／結合サイクルの反復によって鎖の伸長が達成される。好ましくは、Ｎ−メチル−２−ピロリドン中ピペリジン２０％でＦｍｏｃ保護基をブロック解除し、Ｎ−メチル−２−ピロリドン中ＴＢＴＵ、ＨＯＢｔ、ＤＩＰＥＡで結合段階を実施する。樹脂の開裂は、塩化メチレン、酢酸、トリフルオロ酢酸（３／１／１　ｖ／ｖ）又は塩化メチレン、トリフルオロ酢酸（９９／１　ｖ／ｖ）の混合物によって実施しうる。
【００２９】
式（３）及び（１０）の化合物は、上記で定義したような化合物（８）をＮ保護されたアミノ酸又はペプチドと連続的に反応させることによって調製しうる。式（６）、（７）、（８）及び（１１）の出発化合物の調製は既知の手順に従う。式（１）の化合物の調製は、我々の先のＰＣＴ特許願第ＷＯ９９／１７８０５号及びＷＯ９９／１７８０４号ならびに米国特許第５，７７３，５２２号及び５，６１８，７９０号に述べられているのと同様の合成手順に従う。
【００３０】
ポリマー薬剤複合体（Ａ）の製造のための中間体である、式（１）及び式（１’）の薬剤複合体の調製を下記の合成スキームに示す。例えばスキーム１では、７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−（６−アミノヘキサノイル−（メチオニル−スルホキシド）−グリシル−（Ｓ−ベンジル−システイニル）−ロイシル−グリシル）−カンプトテシン塩誘導体（１’ａ）の調製が例示されている。合成方法は、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（Ｄ_１：１２）へのＮ保護されたアミノ酸の連続的な結合を含む。特に、（１２）を、アルゴン下に４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）のような活性化剤の存在下で、ジメチルスルホキシドのような無水非プロトン性溶媒中過剰のモル、例えば３モル当量までのＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−グリシンｐ−ニトロフェニルエステル（Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＮＰ）と反応させる。このようにして、保護されたアミノ酸を化合物（１２）のＣ−１０とＣ−２０の両方のヒドロキシル化位置に導入する。反応は、典型的には８−４８時間実施することができる。反応は、典型的には１５−４０℃の温度で実施する。モルホリン、１−アミノ−プロリノールのような第二アミンの存在下でＣ−１０の位置の置換基を除去して、Ｃ−２０位のモノ置換Ｎ−Ｂｏｃ−グリシル−誘導体（１３）を得る。１０°−３０℃の温度で１０分間から６時間、好ましくは室温で３０分間、酢酸又は９５％水性トリフルオロ酢酸中１．５Ｎ　ＨＣｌのような酸処理によってアミノ保護基を除去し、酸性塩の形態の２０−Ｏ−グリシル−誘導体（１４’）を得ることができる。第二のアミノ酸、ロイシンは、化合物（１４’）を、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオボレート（ＴＢＴＵ）及びジイソプロピルアミン（ＤＩＰＥＡ）のような縮合剤の存在下に、無水非プロトン性溶媒、好ましくはジメチルホルムアミド中過剰のモル、例えば２モル当量までのＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−ロイシン（Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ）と反応させることによって導入しうる。反応は、典型的には８−４８時間実施することができる。反応は、典型的には１５−４０℃の温度で実施する。モルホリンで処理し、次いで化合物（１５）のＮ保護基を酸置換して、７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−（ロイシル−グリシル）−カンプトテシン（１６’）を得る。次に、トリフルオロ酢酸塩誘導体のような塩の形態で最終中間体（１’ａ）を生成するためのロイシンの結合に関して先に述べたのと同じ条件で、この化合物をＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｓ−ベンジルシステインで処理して、化合物（１７）及びＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノヘキサノイル−（メチオニル−スルホキシド）−グリシルを得る。
【００３１】
【化１９】

【００３２】
スキーム２は、配列、６−アミノヘキサノイル−ロイシル−グリシル−ロイシル−ロイシル（１ｃ）を担う４−デアセチルビンブラスチンの複合体を調製するための方法を示す。方法は、硫酸ビンブラスチン（２０）から出発し、それを最初にアルカリ処理によって遊離塩基に変換して、次に乾燥メタノール中ナトリウムメチラートを用いてＣ−４位で脱アシル化して化合物（２１）を生成する。４−デアセチル−ビンブラスチン（２１）を、塩化アシルの形態の、Ｆｍｏｃ誘導体のようなＮ保護されたロイシルの誘導体と反応させて、Ｆｍｏｃ−ロイシル−誘導体（２２）を得る。化合物（２３）を生成するためのＮ保護基の除去は、典型的にはジメチルホルムアミド中のピペリジンの混合物において実施する。６−アミノヘキサノイル−ロイシル−ロイシル−グリシルの連結は、典型的には、Ｎ保護基の除去と塩形成後に（１ｃ’）を生成するために前述したように実施する。
【００３３】
【化２０】

【００３４】
先に示したように、式（１）又は（１’）の化合物は、本発明の目的である式（Ａ）のポリマー抗癌薬の製造のための有用な中間体である。
【００３５】
本発明の範囲を限定することなく、水溶性ポリマーＰがＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルアミド（ＨＰＭＡ）に基づく、式（Ａ）のポリマー薬剤複合体の例を下記に報告する。
【００３６】
そのような場合、（Ａ）として示すポリマー薬剤複合体は、
（ｉ）８５から９７ｍｏｌ％の、式（２５）：
【００３７】
【化２１】

によって表わされるＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルアミド単位、
（ｉｉ）３−１５ｍｏｌ％の、式（２６）：
【００３８】
【化２２】

（式中、［Ｗ_１］、［Ｗ_２］、ｐ、ｒ、［Ｄ］及びＳ_０は上記で定義したとおりである）
によって表わされる単位、
（ｉｉｉ）０から１２ｍｏｌ％の、式（２７）：
【００３９】
【化２３】

（式中、Ｒ_３はヒドロキシ基又は式−ＮＨ−ＣＨ_２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ_３の残基を表わす）
によって表わされるＮ−メタアクリロイル−グリシン又はＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイル−グリシンアミド単位
から成る可溶性ポリマーＰ’を含む。
【００４０】
このポリマー薬剤複合体（Ａ）はまた、次のように表わすこともできる：
［（２５）］_ｘ；［（２６）］_ｙ；［（２７）］_ｚ
（式中、（２５）、（２６）及び（２７）は上記で定義した式の単位であり、ｘは８５から９７ｍｏｌ％、ｙは３から１５ｍｏｌ％、そしてｚは０から１２ｍｏｌ％である）。
【００４１】
好ましくは、上記で定義したようなこのポリマー薬剤複合体（Ａ）は、式（２５）によって表わされるＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルアミド単位を９０％又はそれ以上、より好ましくは９０％の割合で含む。複合体はまた、３から１０ｍｏｌ％、より好ましくは１０ｍｏｌ％の、式（２６）によって表わされるメタアクリロイル−グリシル−誘導体を含みうる。好ましくは、（Ａ）は式（２７）の残基を含まない、すなわちｚは０である。
【００４２】
本発明はまた、式（Ａ）の薬剤複合体を調製するための方法であって、一般式（１）の化合物を、
（ｉ）８５から９７ｍｏｌ％の、上記で定義したような式（２５）によって表わされるＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルアミド単位、及び
（ｉｉ）３から１５ｍｏｌ％の、式（２８）：
【００４３】
【化２４】

（式中、Ｒ_４は活性エステルの残基である）
によって表わされるＮ−メタアクリロイル−グリシル単位から必須として成る活性化ポリマーＰ１’と反応させること、および任意に残存する活性エステル基を１−アミノ−２−プロパノールで置換することを含む方法を提供する。
【００４４】
式Ｐ１’のポリマーは既にＭａｋｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．１７８、２１５９（１９７７）の中で記述されている。好ましくは、式（２８）中のＲ_４が活性エステルの残基を表わすポリマー（Ｐ１’）と、ポリマー薬剤複合体（Ａ）を調製するための式（１）の化合物との間の反応は、ジメチルスルホキシドのような無水極性有機溶媒中で実施する。反応は、典型的には１５から３０℃の温度、好ましくは室温で１５時間実施することができ、その後室温で３０分間から１時間、１−アミノ−２−プロパノールの存在下に、残存する活性エステル基のアミノリシスを実施することができる。複合体を酢酸エチルで適切に沈殿させ、エタノールに溶解して、酢酸エチルで沈殿させる。
【００４５】
例えば、乾燥ジメチルスルホキシド中１５％（ｗ／ｖ）の濃度で提供される、式（２８）のＲ_４がｐ−ニトロフェノールのような活性エステルの残基を表わすポリマーＰ１’を、室温で１５時間、ＤＰＥＡ又はトリエチルアミンのような第三アミンの存在下に、式（１’ａ−１’ｃ）の化合物、３％（ｗ／ｖ）で処理する。次にＤＭＦ中１−アミノ−２−プロパノール、０．１％（ｗ／ｖ）を加え、反応混合物を室温で８時間保持する。生じたポリマー薬剤複合体（Ａ１ａ−Ａ１ｃ）を酢酸エチルで沈殿させ、収集して、酢酸エチルで洗い、その後１０％（ｗ／ｖ）の濃度で無水エタノールに溶解して、スルホン酸樹脂で処理し、ろ過して、再び酢酸エチルで沈殿させる。
【００４６】
方法をスキーム３及び４に示す。
【００４７】
【化２５】

【００４８】
本発明のポリマー複合体中の活性薬剤の含量は、ＨＰＬＣ又は吸光分光分析によって決定する。
【００４９】
式（Ａ）のポリマー薬剤複合体は、５，０００から４５，０００、好ましくは１２，０００から２５，０００の範囲の分子量である。式（Ａ）の化合物及び本発明の他の化合物は水溶性であり、遊離薬剤と比較して高い抗腫瘍活性と低い毒性を示す。それらは、白血病及び結腸、結腸直腸、卵巣、乳房、前立腺、肺、腎腫瘍のような固体腫瘍、そしてまた黒色腫の治療においても有用である。それ故、治療上有効な量の本発明のポリマー複合体を投与することを含む方法によってヒトを治療することができる。それによってヒト患者の状態を改善することができる。
【００５０】
採用する用量範囲は、投与経路ならびに治療する患者の年齢、体重及び状態に依存するであろう。式（Ａ）のポリマー薬剤複合体ならびに式（１’）の可溶性塩誘導体は、典型的には非経口経路によって、例えば筋肉内、静脈内又はボーラス注入によって投与される。適当な用量範囲は、体表面積１ｍ^２当り１から１０００ｍｇ当量の活性薬剤、例えば１０から５００ｍｇ／ｍ^２である。
【００５１】
ポリマー薬剤複合体（Ａ）又は式（１’）の可溶性塩誘導体は、製薬上許容される担体又は希釈剤と共に製薬組成物に製剤することができる。典型的にはそれらは、例えば注射用蒸留水又は生理食塩水に溶解することにより、非経口投与用に製剤される。
【００５２】
酵素アッセイ
式（Ａ）のポリマー薬剤複合体のインビトロでの分解を、緩衝液中、及びいくつかの蛋白質分解酵素（マトリックスメタロプロテイナーゼ、ＭＭＰ、セリンプロテアーゼ（エラスターゼ））の存在下で、及び血漿中で検討した。
【００５３】
ポリマー薬剤複合体（Ａ）を１０ｍＭの標準濃度で滅菌蒸留水に溶解した。濃度はポリマー充填パーセンテージ（５−１０重量％薬剤）に従って薬剤の当量として算定した。０．１５Ｍ　ＮａＣｌ、１０μＭ　ＣａＣｌ_２、０．０１ｍＭ酢酸亜鉛及び０．０５％Ｃ_１２Ｅ_９を含む５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ　ｐＨ７．４緩衝液中で化合物（Ａ）を検定した。ポリマー薬剤複合体を５から１０００μＭの範囲の異なる濃度で、緩衝液中３７℃で５分間平衡させる。５０μＭの最終濃度まで酵素（ＭＭＰ）を加えて反応を開始させる。０．０５％ＴＦＡ緩衝液（ｐＨ２．５）を加えることにより、ポリマー薬剤複合体の５％以内の加水分解で酵素反応を停止させ、その後アクアポアＯＤ３００カラムを通してＲＰ−ＨＰＬＣによって分析する。
【００５４】
ＲＰ−ＨＰＬＣによって反応産物の定量を行う。例えば、ＩＳＳ　２００自動試料採取器、Ｓｅｒｉｅｓ　２００ＬＣポンプ及びＬＣ２４０蛍光検出器から成るＰｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ　ＨＰＬＣ、又は代替的に、７１７プラス自動試料採取器、Ｍｏｄｅｌ　６００ポンプ及びＭｏｄｅｌ　４７４蛍光分析器から成るＷａｔｅｒｓ　ＨＰＬＣを用いる。
【００５５】
我々は、本発明の式（Ａ）及び（１’）の化合物がゼラチナーゼの存在下で抗腫瘍薬Ｄを選択的に放出し、血漿中及び他の蛋白質分解酵素の存在下で実質的に安定であることを認めた。
【００５６】
下記の実施例は本発明を例示するものである。
【００５７】
実施例１：７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−グリシル−カンプトテシントリフルオロアセテート（１４’）
７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン（１２）（２．１ｇ、５．３ｍｍｏｌ）を無水ジメチルスルホキシド（５０ｍｌ）に溶解し、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−グリシンｐ−ニトロフェニルエステル（４．８ｇ、１６．２ｍｍｏｌ）及びジメチルアミノピリジン（０．８ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２４時間、攪拌しながらアルゴン気体中に保持した。その後モルホリン（４．６ｍｌ）を加え、反応混合物を室温で２４時間攪拌した。次に塩化メチレン（２００ｍｌ）と水性０．５Ｎ　ＨＣｌを加えた。有機相を分離し、水（３×２００ｍｌ）で洗った。有機溶媒を減圧下で除去して、７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−（ｔ−ブトキシカルボニル−グリシル）−カンプトテシン（１３）を得た。キーセルゲル（ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ）プレート（Ｍｅｒｃｋ）でのＴＬＣ、塩化メチレン／メタノール（９５／５　ｖ／ｖ）溶出系、Ｒｆ＝０．３。
【００５８】
化合物（１３）をトリフルオロ酢酸（９５％水溶液５０ｍｌ）に溶解し、１時間後、減圧下で溶媒を除去して、トリフルオロ酢酸塩誘導体の形態で表題の化合物（１４’、収量３ｇ）を得た。
【００５９】
実施例２：７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−（ロイシル−グリシル）−カンプトテシントリフルオロアセテート（１６’）
Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−ロイシン（２．４９ｇ、１０ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（１．５３ｇ、１０ｍｍｏｌ）、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオボレート（ＴＢＴＵ）（３．２１ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（３．５ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）を含むジメチルホルムアミド（５０ｍｌ）の溶液を、３０分後に、ＤＩＰＥＡ（１．７５ｍｌ、１０ｍｍｏｌ）を含むジメチルホルムアミド（２０ｍｌ）中、実施例１で述べたように調製した化合物（１４’）（３ｇ、５．２８ｍｍｏｌ）の溶液と混合した。反応混合物を室温で一晩攪拌した。次にモルホリン（４．５ｍｌ、５．６ｍｍｏｌ）を加え、混合物を６時間攪拌した。その後減圧下で溶媒を蒸発させ、残留物を塩化メチレン（２００ｍｌ）で溶解し、水性０．５Ｎ　ＨＣｌ、水性５％ＮａＨＣＯ_３（２００ｍｌ）及び水（２×２００ｍｌ）で洗った。有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、その後減圧下で溶媒を除去して、７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−ロイシル−グリシル）−カンプトテシン（１６）を得た。キーセルゲルプレート（Ｍｅｒｃｋ）でのＴＬＣ、塩化メチレン／メタノール（９５／５　ｖ／ｖ）溶出系、Ｒｆ＝０．５。
【００６０】
化合物（１６）をトリフルオロ酢酸（９５％水溶液５０ｍｌ）に溶解し、１時間後、減圧下で溶媒を除去して表題の化合物（１６’、収量３ｇ）を得、それをエチルエーテルによりトリフルオロ酢酸塩誘導体の形態で収集した。
【００６１】
実施例３：７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−（−（Ｓ−ベンジル−システイニル）−ロイシル−グリシル）−カンプトテシントリフルオロアセテート（１８’）
化合物（１６’：３ｇ）を、実施例２で述べたのと同じ条件に従ってＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−（Ｓ−ベンジル−システイン）と反応させ、７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−（Ｓ−ベンジル−システイニル）−（ロイシル−グリシル））−カンプトテシン（１７’）を得、それを実施例２で述べたようにして表題の化合物（１８’）に変換した。
【００６２】
実施例４：７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−（６−アミノヘキサノイル−（メチオニル−スルホキシド）−グリシル−（Ｓ−ベンジル−システイニル）−ロイシル−グリシル）−カンプトテシントリフルオロアセテート（１’ａ）
Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノヘキサノイル−（メチオニル−スルホキシド）−グリシン（０．３５８ｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を含むジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、５ｍｌ）の溶液を、ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）中の化合物（１８’）（０．２５７ｇ、０．７６ｍｍｏｌ）の溶液と混合し、その後Ｂｏｃ保護基を除去することにより、実施例２で述べたのと同じ条件に従って表題の化合物を調製した。
【００６３】
実施例５：Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルアミド、７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−（Ｎ−メタアクリロイル−６−アミノヘキサノイル−（メチオニル−スルホキシド）−グリシル−（Ｓ−ベンジル−システイニル）−ロイシル−グリシル）カンプトテシン及びＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルグリシンアミドのコポリマー（Ａ１ａ）
ポリマー（Ｐ１’）（０．７５６ｇ）の無水ジメチルスルホキシド（４ｍｌ）中の溶液に、実施例４で述べたように調製した７−エチル−１０−ヒドロキシ−２０−Ｏ−（６−アミノヘキサノイル−（メチオニル−スルホキシド）−グリシル−（Ｓ−ベンジル−システイニル）−ロイシル−グリシル）−カンプトテシントリフルオロアセテート（１’ａ）（０．２３ｇ、０．１９３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．５３ｍｌ、０．３９６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２４時間、攪拌しながらアルゴン気体中に保持した。次にジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中の１−アミノ−２−プロパノール（０．３ｍｌ）の溶液０．１ｍｌを加えて、８時間攪拌を続けた。その後酢酸エチル（２００ｍｌ）を攪拌しながら反応混合物に加えた。沈殿物を採集し、酢酸エチルで洗って、エタノール（８ｍｌ）で溶解し、スルホン酸樹脂（ＤＯＷＥＸ　５０−スルホン酸）で３０分間処理した。溶液をろ過し、酢酸エチルで沈殿させた。生じた固体をエチルエーテルで洗い、恒量で乾燥して、表題の化合物（Ａ１ａ）を得た。収量０．８ｇ；分子量２０，８００、多分散性１．４８、７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシンの充填７．５％（ｗ／ｗ％）。
【００６４】
実施例６：４−デアセチル−４−Ｏ−ロイシル−ビンブラスチン（２３）
水中（１５ｍｌ）の硫酸ビンブラスチン（２０）（１．５ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）の溶液に、強く攪拌しながら塩化メチレン（１５ｍｌ）と濃アンモニア（１．５ｍｌ）を加えた。５分後に混合物を傾瀉し、水相を塩化メチレン（３×１５ｍｌ）で抽出した。混合有機相を水（３０ｍｌ）とブライン（３０ｍｌ）で洗い、無水硫酸ナトリウム上で乾燥して、減圧下で蒸発させて遊離塩基形態のビンブラスチンを得、それをエチルエーテルとヘキサン（１：１）の混合物で沈殿させた後収集した。収量１．３１ｇ（１．６１ｍｍｏｌ、９８％収率）。
【００６５】
ビンブラスチン遊離塩基（６０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を乾燥メタノール（５ｍｌ）に溶解し、メトキシドナトリウム（ＮａＯＣＨ_３、１９０ｍｇ；乾燥メタノール７ｍｌ）の溶液に加えて、室温で３時間攪拌した。その後反応混合物を塩化メチレンで希釈し、冷ブライン、次にＮａＨＣＯ_３の水溶液で２回、そして最後に再びブラインでｐＨ７−８まで洗った。有機相を分離して取り、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧下で溶媒を除去して、４−デアセチルビンブラスチン（２１）（４６ｍｇ）のオフホワイト色の結晶性固体を得た。キーセルゲルプレート（Ｍｅｒｃｋ）でのＴＬＣ、塩化メチレン／メタノール（９０／１０　ｖ／ｖ）溶出系、Ｒｆ＝０．３４。
【００６６】
無水ピリジン（４．５ｍｌ）中の化合物（２１）（０．２ｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を、無水塩化メチレン（１．９ｍｌ）に溶解したＦｍｏｃ−Ｌｅｕ−Ｃｌ（０．３８５ｇ、１．０４ｍｍｏｌ）の溶液で処理した。反応混合物を室温で１２時間保持した。その後水（０．５ｍｌ）を反応混合物に加えて過剰の酸性塩化物を破壊し、減圧下で溶媒を蒸発させた。残留物を酢酸エチルと飽和ＮａＨＣＯ_３の間で分配し、ブラインで洗った。有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、その後減圧下で溶媒を除去した。残留物を室温でピペリジン（１．３ｍｌ）と無水ＤＭＦ（２．７ｍｌ）の混合物に溶解した。３０分後に減圧下で溶媒を除去し、クロロホルムとメタノール（９５／５　ｖ／ｖ）を溶出系として使用するシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィーによって粗油を精製し、表題の化合物（２３）（０．１７８ｇ、６２％収率）を得た。キーセルゲルプレート（Ｍｅｒｃｋ）でのＴＬＣ、塩化メチレン／メタノール（９０／１０　ｖ／ｖ）溶出系、Ｒｆ＝０．３。
【００６７】
実施例７：４−デアセチル−４−Ｏ−（６−アミノヘキサノイル−ロイシル−グリシル−ロイシル−ロイシル）−ビンブラスチントリフルオロアセテート（１’ｃ）
Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノヘキサノイル−ロイシル−グリシル−ロイシル（０．１７ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）を、４−デアセチル−４−Ｏ−ロイシル−ビンブラスチン（２３）（０．２８ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（０．１ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（０．０５ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）と共に乾燥ジメチルホルムアミド（６ｍｌ）に溶解した。ジイソプロピルエチルアミン（０．１ｍｌ、０．２６ｍｍｏｌ）を加えた後、反応混合物を４８時間攪拌した。次に減圧下で溶媒を除去し、残留物を塩化メチレンと飽和ＮａＨＣＯ_３の間で分配した。有機相を再び飽和ＮａＨＣＯ_３で洗い、最後にブラインで洗った。無水硫酸ナトリウム上で乾燥した後、減圧下で溶媒を除去して粗油を得、それを、クロロホルム／メタノール（９５／５　ｖ／ｖ）の混合物を溶出系として使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、４−デアセチル−４−Ｏ−（ｔ−ブトキシカルボニル−６−アミノヘキサノイル−ロイシル−グリシル−ロイシル）−ビンブラスチン（２４）（０．３２ｇ、７５％収率）を得た。ｋｉｅｓｅｌｇｅｌプレート（Ｍｅｒｃｋ）でのＴＬＣ、塩化メチレン／メタノール（９０／１０　ｖ／ｖ）溶出系、Ｒｆ＝０．５９。
【００６８】
化合物（２４）を、塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸５０％（２．５ｍｌ）で処理した。室温で２時間攪拌したあと、減圧下で溶媒を除去し、残留物をトルエンで２回処理して乾燥させ、表題の化合物（１ｃ’）をジ−トリフルオロ酢酸塩として得た。
【００６９】
実施例８：Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルアミド、４−Ｏ−（Ｎ−メタアクリロイル−グリシル−６−アミノヘキサノイル−ロイシル−グリシル−ロイシル−ロイシル）−ビンブラスチン及びＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルグリシンアミドのコポリマー（Ａ１ｃ）
実施例７で述べたように調製した化合物（１’ｃ：０．３ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を無水ジメチルスルホキシド（１．５ｍｌ）に溶解し、無水ジメチルスルホキシド（６ｍｌ）に溶解した（Ｐ’１）（１．５ｇ）の溶液に加え、次いでジイソプロピルエチルアミン（０．７ｍｌ、０．２５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２４時間攪拌したあと、１−アミノ−２−プロパノール（０．１ｍｌ）を反応混合物に加え、１時間後、反応混合物を酢酸エチル（１００ｍｌ）に注ぎ入れた。（Ａ１ｃ）を含む沈殿物をろ過し、エチルエーテルで洗って、その後水（ＨＰＬＣグレード）１５ｍｌに溶解し、Ｇ−２５サイズ排除カートリッジで精製した（７回、溶離液：水）。プールした分画から、凍結乾燥後に表題の化合物（Ａ１ｃ）（１．２ｇ、７８％収率）を得た。
【００７０】
抗腫瘍活性
化合物（Ａ１ａ）を、ｉ．ｖ．経路により遊離薬剤７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン（１２）と比較して、ヌードマウスに移植したヒト結腸癌（ＨＴ２９）に関して試験した。Ａ１ａは試験したすべての用量で非毒性であることが認められ、２０ｍｇ／ｋｇの最高試験用量で９８％の腫瘍阻害を与えた（表１）。
【００７１】
【表１】

Claims

式（Ａ）：

（式中、Ｐは水溶性ポリマーであり、
［Ｗ_１］は、式−ＨＮ−Ｚ_１−ＣＯ−（式中、Ｚ_１は線状又は分枝Ｃ_２−Ｃ_１２アルキレン鎖又は式−Ｃ_６Ｈ_４−ＣＨ_２−Ｏ−の残基を表わす）の残基であり、
［Ｗ_２］は、式−ＨＮ−Ｚ_２−ＣＯ−（式中、Ｚ_２はＣ_２−Ｃ_１２の線状又は分枝アルキレン鎖を表わす）の残基であり、
ｐ及びｒは０又は１であり、
Ｓ_０は、マトリックスメタロプロテイナーゼの作用によって腫瘍部位で選択的に開裂されうるペプチド残基であり、および
［Ｄ］は抗腫瘍薬の残基である）
のポリマー薬剤複合体。
［Ｄ］が、請求項１で定義された式（Ａ）の複合体のリンカーＷ_１又はペプチドＳ_０部分の結合のための官能基を担う抗腫瘍薬の残基であり、ｒが０であるか又は［Ｗ_１］が自己犠牲性ｐ−アミノベンジルオキシカルボニルリンカーであり、［Ｗ_２］が６−アミノヘキサン酸の残基であり、および（Ｐ）がポリグルタミン酸、カルボキシル化デキストラン、カルボキシル化ポリエチレングリコール又はＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルアミドに基づくポリマーである、請求項１に記載のポリマー複合体。
ペプチドＳ_０が４から５個の天然又は合成アミノ酸からの配列を含む、請求項１又は２に記載のポリマー複合体。
Ｓ_０が式：
Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号１）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ（配列番号２）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ（配列番号３）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ（配列番号４）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−ＣｙｓｃＢｎ）−ｐＦＦ−ＧＩｙ（配列番号５）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ＧｌｙＧｌｙ（配列番号６）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号７）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号８）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｉｐ（配列番号９）、Ｓｍｃ−ＧＩｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＰＦ（配列番号１０）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ（配列番号１１）、Ｓｍｃ−ＧｌｙＣｙｓ（Ｂｎ）−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ（配列番号１２）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ｐＦＦ−Ｇｌｙ（配列番号１３）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号１４）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１５）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ（配列番号１６）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｔｈａ−Ｔｒｐ（配列番号１７）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｒｐ（配列番号１８）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｔｈａ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ（配列番号１９）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ（配列番号２０）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号２１）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ（配列番号２２）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２３）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号２４）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ（配列番号２５）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ（配列番号２６）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２７）またはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ（配列番号２８）
の配列を表わす、請求項３に記載のポリマー複合体。
Ｓ_０が式：
Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号１）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−ＧＩｙ（配列番号２）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号６）、Ｍｅｔ（Ｏ）−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号７）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号８）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ（配列番号１１）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−ＧＩｙ（配列番号１４）、Ｓｍｃ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１５）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ（配列番号２１）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ（配列番号２２）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２３）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ（Ｂｎ）−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（配列番号２４）、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ（配列番号２５）またはＬｅｕ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号２７）
の配列を表わす、請求項４に記載のポリマー複合体。
抗腫瘍薬［Ｄ］が、ビンカアルカロイド類、アントラサイクリン、タキサン、細胞傷害性ヌクレオシド、カンプトテシン、ポドフィロトキシンまたはアルキル化剤のクラスに属する細胞傷害性物質である、上記請求項のいずれか一項に記載のポリマー複合体。
抗腫瘍薬［Ｄ］が、４−デアセチル−ビンブラスチン、４−デアセチル−ビンクリスチン、ビンデシン、ドキソルビシン、４’−エピドキソルビシン、ダウノルビシン、４−デメトキシ−ダウノルビシン、４’−デオキシ−４’−ヨードドキソルビシン、３’−（２−メトキシモルホリノ）ドキソルビシン、パクリタキセル、ドセタキセル、５−フルオロウラシル、カンプトテシン、７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、エトポシドまたはエストラムスチンである、請求項６に記載のポリマー複合体。
（Ｐ）がＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルアミドに基づく水溶性ポリマーである、上記請求項のいずれか一項に記載のポリマー複合体。
一般式（１）：
の化合物又は式（１’）：

（式中、［Ｗ_１］、［Ｗ_２］、ｐ、ｒ、Ｓ_０及び［Ｄ］は請求項１で定義したとおりであり、およびＲＨは酸である）
の対応する塩誘導体を、化合物（１）又は（１’）との結合のための適切な官能基を担うポリマーＰ１と反応させることを含む、請求項１で定義されたポリマー複合体を調製するための方法。
請求項９で定義された化合物（１）又は（１’）の結合のためのポリマー（Ｐ１）上の適切な官能基がカルボキシル基又は活性化カルボキシル基を含む、請求項９に記載の方法。
請求項９で定義された、式（１）の抗腫瘍性誘導体または式（１’）の対応する塩誘導体。
−式（２）：

（式中、［Ｗ_１］、［Ｗ_２］、ｐ、ｒ、［Ｄ］及びＳ_０は請求項９で定義したとおりであり、およびＲ_２はアミノ保護基を表わす）
の誘導体からＮ保護基を除去すること、および
−任意に、生じた一般式（１’）の化合物を弱塩基処理によって対応する遊離アミノ誘導体（１）に転換すること
を含む、請求項１１で定義された式（１）又は（１’）の化合物を調製するための方法。
Ｎ保護基の除去を酸性条件下で実施し、Ｒ_２がＢｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニル）、Ｆｍｏｃ、トリフェニルシリル、ジフェニルメチレンまたはトリフェニルメチル基を表わす、請求項１２に記載の方法。
（ｉ）８５から９７ｍｏｌ％の、式（２５）：

によって表わされるＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルアミド単位、
（ｉｉ）３から１５ｍｏｌ％の、式（２６）：

（式中、［Ｗ_１］、［Ｗ_２］、ｐ、ｒ、［Ｄ］およびＳ_０は請求項１で定義したとおりである）
によって表わされる単位、
（ｉｖ）０から１２ｍｏｌ％の、式（２７）：

（式中、Ｒ_３はヒドロキシ基または式−ＮＨ−ＣＨ_２−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ_３の残基を表わす）
によって表わされるＮ−メタアクリロイル−グリシン又はＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイル−グリシンアミド単位から成る水溶性ポリマー（Ｐ）を含む、請求項１に記載のポリマー薬剤複合体。
請求項９で定義されるような式（１）又は（１’）の化合物を、
（ｉ）８５から９７ｍｏｌ％の、請求項１４で定義したような式（２５）によって表わされるＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタアクリロイルアミド単位、及び
（ｉｉ）３から１５ｍｏｌ％の、式（２８）：

（式中、Ｒ_４は活性エステルの残基である）
によって表わされるＮ−メタアクリロイル−グリシン単位
から成る活性化水溶性ポリマー（Ｐ１’）と反応させること、および任意に残存する活性エステル基を１−アミノ−２−プロパノールで置換することを含む、請求項１４で定義されたような薬剤複合体を調製するための方法。
製薬上許容される希釈剤又は担体と、有効成分として、請求項１から８又は１４のいずれか一項で定義されたポリマー複合体あるいは請求項１１で定義された式（１）又は（１’）の化合物を含む製薬組成物。
治療によるヒト又は動物の身体の処置方法において使用するための、請求項１から８または１４のいずれか一項で定義されたポリマー複合体または請求項１１で定義された式（１）もしくは（１’）の化合物。
白血病又は固体腫瘍を治療するための薬剤の製造における、請求項１から８または１４のいずれかで定義されたポリマー複合体または請求項１１から１３で定義された式（１）もしくは（１’）の化合物の使用。
固体腫瘍が、結腸、結腸直腸、卵巣、乳房、前立腺、肺もしくは腎腫瘍または黒色腫である、請求項１８に記載の使用。