CN1443079A - 抗肿瘤剂的聚合缀合物 - Google Patents
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Abstract
描述了式(A)P-[W2]p-S0-[W1]r-[D]的抗肿瘤剂的水溶性聚合缀合物,其中P是水溶性聚合物;[W1]是式-HN-Z1-CO-残基,其中Z1代表直链或支链C2-C12亚烷基链或式-C6H4-CH2-O-残基;[W2]是式-HN-Z2-CO-残基,其中Z2代表直链或支链C2-C12亚烷基链;p和r是0或1;S0是肽残基,它可在肿瘤部位主要被基质金属蛋白酶明胶酶的作用而选择性裂解;[D]是抗肿瘤剂的残基。该缀合物具有比游离药物更强的抗肿瘤活性和更低的毒性。还描述了它们的制备方法、有用的中间体和含有它们的药物组合物。
Description
本发明涉及抗肿瘤剂的聚合缀合物,在肿瘤部位主要通过基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)的作用释放游离的活性药物。药物包括抗肿瘤剂,例如细胞毒素或参与肿瘤生长和传播的酶的抑制剂。本发明的第一个目的是提供聚合的药物缀合物,它在肿瘤部位主要通过基质金属蛋白酶明胶酶的作用选择性释放活性药物。有人已经报道了基质金属蛋白酶、确切为MMP2或明胶酶A的肿瘤分泌与实验性转移之间的相互关系(Liotta,L.A.等,J.Nat l.CancerInst.,81:556,1989;Nakajima,M.等,Cancer Res.,47:4869,1987)。有人发现MMP2在围绕转移肿瘤的侵袭前部的基质细胞内被高度表达(Salo,T.等,J.Biol.Chem.,258:3058,1983;Reponen,P.等,出处同上,267:7856,1992)。这种酶在各种肿瘤类型中被表达,包括皮肤(Pyke,C.等,Cancer Res.,52:1336,1992)、肺(Kodate,M.等,Pathol.International,47:461,1997;Nawrocki,B.等,International J.of Cancer,72:556,1997)、胃(Endo,K.等,Anticancer Research,17:225,3 1997)、结肠直肠(Liabakk,N.等,Cancer Res.,56:190,1996;Pyke,C.等,Am.J.Pathol.,142:359,1993)、乳腺(Gilles,C.等,Laboratory Invest.76:651,1997;Davies,B.等,Br.J.Cancer,67:1126,1993)、前列腺(Stearns,M.E.等,Oncology Res.,8:69,1996)、卵巢(Fishman,D.等,Invasion & Metastasis,16:150,1996)和膀胱(Miyake H.等,J.ofUrology,157:2351,1997)。
不同类抗肿瘤剂的聚合缀合物已经公开在PCT公报No.WO99/17805与WO 99/17804和美国专利5,773,522与5,618,790中。
本发明提供通式(A)的聚合的药物缀合物
P-[W2]p-S0-[W1]r-[D]
(A)
其中:
P是水溶性聚合物;
[W1]是式-HN-Z1-CO-残基,其中Z1代表直链或支链C2-C12亚烷基链或式-C6H4-CH2-O-残基;
[W2]是式-HN-Z2-CO-残基,其中Z2代表直链或支链C2-C12亚烷基链;
p和r是0或1;
S0是肽残基,它可在肿瘤部位被基质金属蛋白酶的作用选择性裂解;
[D]是抗肿瘤剂的残基。
因此,本发明提供通式(A)的抗肿瘤剂的聚合缀合物,它可以被基质金属蛋白酶、确切为明胶酶所裂解,释放式S1-[W1]r-[D]的中间体,其中S1是从S0衍生的肽,[W1]、[D]和r是如上所定义的,从中抗肿瘤剂D是自发释放的或者通过肿瘤组织中的蛋白水解酶的作用所释放。
本发明的另一方面是提供治疗实体肿瘤的方法,该方法包含新颖的通式(A)的聚合的药物缀合物的给药。
优选地,P是水溶性聚合物,例如聚谷氨酸、羧基化葡聚糖、羧基化聚乙二醇或基于羟丙基甲代丙烯酰胺的聚合物。最优选地,P是基于N-(2-羟丙基)甲代丙烯酰胺(N-(2-hydroxypropyl)methacryloylamide,HPMA)的聚合物。
优选地,[W1]不存在,也就是r=0,或者是自我牺牲性(self-imolative)对-氨基苄氧羰基连接基团(J.Med.Chem.vol.24,479(1991);PABC,-pNH-C6H4-CH2-O-CO-)。可以由Z1和Z2代表的C2-C12亚烷基链包含式-(CH2)3-、-CH2-C(CH3)2-CH2-和-(CH2)5-残基。优选地,[W2]是6-氨基己酸的残基,Z2=-(CH2)5-。
肽S0包含四至五个天然或合成氨基酸的序列。优选地,肽S0代表
Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:1),
Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO:2),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Leu(SEQ ID
NO:3),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Trp-Gly(SEQ ID NO:4),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-pFF-Gly(SEQ ID NO:5),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:6),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO:7),Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:8),Smc-Gly-Cys(Bn)-Trp(SEQ ID NO:9),Smc-Gly-Cys(Bn)-pFF(SEQ ID NO:10),Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO:11),Smc-Gly-Cys(Bn)-Trp-Gly(SEQ ID NO:12),Smc-Gly-Cys(Bn)-pFF-Gly(SEQ ID NO:13),Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:14),Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO:15),Smc-Gly-Leu-Trp(SEQ ID NO:16),Smc-Gly-Tha-Trp(SEQ ID NO:17),Smc-Gly-Met-Trp(SEQ ID NO:18),Smc-Gly-Tha-Trp-Gly(SEQ ID NO:19),Smc-Gly-Met-Trp-Gly(SEQ ID NO:20),Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:21),Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO:22),Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO:23),Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:24),Leu-Gly-Leu-Leu(SEQ ID NO:25),Leu-Gly-Leu-Trp(SEQ ID NO:26),Leu-Gly-Leu-Leu-Gly(SEQ ID NO:27),Leu-Gly-Leu-Trp-Gly(SEQ ID NO:28).
最优选的肽序列S0是:Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:1),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO:2),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:6),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQID NO:7),Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:8),Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ IDNO:11),Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:14),Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO:15),Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:21),Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO:22),Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO:23),Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:24),Leu-Gly-Leu-Leu(SEQ ID NO:25),Leu-Gly-Leu-Leu-Gly(SEQ ID NO:27).
本说明书中,Leu是亮氨酸,Trp是色氨酸,Met是甲硫氨酸,Met(O)是甲硫氨酸亚砜,Cys(Bn)是S-苄基半胱氨酸,Smc是S-甲基半胱氨酸,Tha是噻吩基丙氨酸,pFF是对-氟苯基甘氨酸,Gly是甘氨酸。
药物残基[D]是携带用于连接连接基团W1或肽S0的官能团的抗肿瘤剂残基。这类官能团包含羟基、羰基、羧基、伯或仲氨基和巯基。优选的抗肿瘤剂包括属于下类的细胞毒剂:长春花生物碱类、蒽环霉素类、紫杉烷类、细胞毒核苷类、喜树碱类、鬼臼毒素类、烷化剂类。这些种类的成员例如包括4-脱乙酰长春碱、4-脱乙酰长春新碱、长春地辛、多柔比星、4’-表多柔比星、柔红霉素、4-脱甲氧基柔红霉素、4’-脱氧-4’-碘多柔比星、3’-(2-甲氧基吗啉代)多柔比星、紫杉醇、多西他赛、5-氟尿嘧啶、喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、依托泊苷、雌莫司汀。本发明的其他抗肿瘤药物包括参与肿瘤生长和传播的酶的抑制剂。
本发明还提供用于制备通式(A)的药物缀合物的方法,该方法包含:使通式(1)化合物或对应的式(1’)盐衍生物
H-[W2]p-S0-[W1]r-[D] RH H-[W2]p-S0-[W1]r-[D]
(1) (1’)
其中[W1]、[W2]、p、r、S0和[D]是如上所定义的,RH是一种酸,
与携带适合与化合物(1)或(1’)偶联的官能团的聚合物P1反应。聚合物P1上适合与化合物(1)或(1’)连接的官能团包含羧基或活化的羧基,例如对-硝基苯基酯或咪唑甲酰基酯。优选地,(1’)中的RH代表HCl或CF3COOH。
本发明还提供式(1)化合物和对应的盐衍生物(1’)。它们可以按照不同的合成方法制备。一种方法包含优选在酸性条件下,从式(2)衍生物除去N-保护基团:
R2-[W2]p-S0-[W1]r-[D]
(2)
其中[W1]、[W2]、p、r、[D]和S0是如上所定义的,R2代表氨基保护基团,例如Boc(叔丁氧羰基)、Fmoc、三苯基甲硅烷基、二苯基亚甲基或三苯甲基,
得到如上所定义的通式(1)或(1’)化合物,再可选地通过温和的碱处理转化通式(1’)化合物为对应的游离氨基衍生物(1)。
式(2)衍生物优选地利用这样一种方法制备,该方法包含可选地在缩合剂的存在下,使式(3)化合物与式(4)化合物反应,
H-Sx-[W1]r-[D] R2-[W2]p-Sy-R1
(3) (4)
其中[W1]、[W2]、R2、p、r是如上所定义的,R1是羟基,或活化酯残基,例如对-硝基苯氧基或N-羟基琥珀酰亚氨基,或卤素,例如氯,Sx、Sy独立地是氨基酸或肽残基,其特征在于当连接在一起时,构成如上所定义的肽残基S0,
得到如上所定义的式(2)衍生物。优选地,Sy代表Met(O)-Gly,Smc-Gly或Leu-Gly,
Sx代表
Cys(Bn)-Leu,Cys(Bn)-Gly,Cys(Bn)-Gly-Leu,Cys(Bn)-Trp-Gly,-Cys(Bn)-pFF-Gly,Cys(Bn)-Gly-Gly,Cys(Bn)-Leu-Gly,Cys(Bn)-Trp,Cys(Bn)-pFF,Leu-Trp,Tha-Trp,Met-Trp,Tha-Trp-Gly,Met-Trp-Gly,Leu-Leu,Leu-Leu-Gly或Leu-Trp-Gly.
式(2)衍生物还可以利用这样一种方法制备,该方法包含使携带用于连接连接基团W1或肽S0的官能团的抗癌药D与N-保护的式(5)衍生物反应,
R2-[W2]p-S0-[W1]r-R1
(5)
其中[W1]、[W2]、R2、R1、p、r和S0是如上所定义的,
得到如上所定义的式(2)衍生物。
如上所定义的式(2)化合物的替代制备方法例如包含:
a)使药物D与式(6)化合物反应,
R2-[W1]r-R1
(6)
其中[W1]、r、R1和R2是如上所定义的,
b)从所得式(7)化合物除去保护基团,
R2-[W1]r-[D]
(7)
其中[W1]、r、R2和[D]是如上所定义的,
c)使所得式(8)衍生物
H-[W1]r-[D]
(8)
其中[W1]、r和[D]是如上所定义的,
与N-保护的式(9)衍生物反应,
R2-[W2]p-S0-R1
(9)
其中[W2]、R1、R2、p和S0是如上所定义的,
得到如上所定义的式(2)衍生物。
式(2)化合物的另一种制备方法包含使游离碱(10)
H-S0-[W1]r-[D]
(10)
其中[W1]、[D]、r和S0是如上所定义的,
与N-保护的并被活化的式(11)化合物反应,
R2-[W2]p-R1
(11)
其中[W2]、p、R1和R2是如上所定义的,
得到如上所定义的式(2)化合物。
式(4)、(5)和(9)化合物的制备遵照已知的肽制备工艺。例如,利用固相合成法,向附着于固相树脂、例如Wang树脂上的生长中的链逐步加入N-保护的氨基酸。优选地,N-保护基团是Fmoc。因此,在有机碱的存在下,例如二异丙基乙胺(DIPEA),在非质子有机溶剂中,例如二氯甲烷,N-保护的氨基酸的C-末端与树脂连接。链的延长是通过去保护/偶联周期的标准循环而完成的。优选地,Fmoc保护基团是用含20%哌啶的N-甲基-2-吡咯烷酮去保护的,偶联步骤是利用含TBTU、HOBt、DIPEA的N-甲基-2-吡咯烷酮进行的。树脂裂解可以利用二氯甲烷、乙酸、三氟乙酸的混合物(3/1/1,v/v)或二氯甲烷、三氟乙酸的混合物(99/1,v/v)完成。
式(3)和(10)化合物可以这样制备,使如上所定义的化合物(8)先后与N-保护的氨基酸或肽反应。式(6)、(7)、(8)和(11)起始化合物的制备遵照已知工艺。式(1)化合物的制备遵照类似于我们以前的PCT公报No.WO 99/17805与WO 99/17804和美国专利5,773,522与5,618,790所述的合成工艺。
下列合成流程阐述聚合物-药物-缀合物(A)的制备中间体式(1)和(1’)药物-缀合物的制备。例如在流程1中,阐述了7-乙基-10-羟基-20-O-[6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亚砜)-甘氨酰-(S-苄基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜树碱盐衍生物(1’a)的制备。合成过程包含先后向7-乙基-10-羟基-喜树碱(D1:12)连接N-保护的氨基酸。确切地说,在氩下,在活化剂的存在下,例如4-二甲氨基吡啶(DMAP),在无水非质子溶剂中,例如二甲基亚砜,使(12)与摩尔过量的、例如多达三摩尔当量的N-叔丁氧羰基-甘氨酸对-硝基苯基酯(Boc-G1y-ONP)反应。以这种方式,在化合物(12)的两个羟基化位置C-10和C-20引入被保护的氨基酸。反应通常可以进行8至48小时。反应通常在15至40℃的温度下进行。在仲胺,例如吗啉、1-氨基-脯氨醇的存在下,除去C-10位的取代基,得到在C-20单取代的N-Boc-甘氨酰衍生物(13)。氨基保护基团可以通过酸处理除去,例如在10至30℃的温度下用1.5N HCl的乙酸溶液或95%三氟乙酸水溶液处理10分钟至6小时,优选在室温下处理半小时,得到酸盐形式的20-O-甘氨酰衍生物(14’)。第二种氨基酸亮氨酸可以这样引入,即在缩合剂,例如1-羟基苯并三唑(HOBt)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)和二异丙基胺(DIPEA)的存在下,在无水非质子溶剂,优选二甲基甲酰胺中,使化合物(14’)与摩尔过量的、例如多达两摩尔当量的N-叔丁氧羰基-亮氨酸(Boc-Leu-OH)反应。反应通常可以进行8至48小时。反应通常在15至40℃的温度下进行。用吗啉处理,然后进行化合物(15)的N-保护基团的酸置换作用,得到7-乙基-10-羟基-20-O-(亮氨酰-甘氨酰)-喜树碱(16’)。在与前述连接亮氨酸相同的条件下,将该化合物按顺序用N-叔丁氧羰基-S-苄基半胱氨酸处理,得到化合物(17)和N-叔丁氧羰基-6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亚砜)-甘氨酰,制得盐形式的最终中间体(1’a),例如三氟乙酸盐衍生物。
a:Boc-Gly-ONp,DMSO,DMAP,rt,24h
b:吗啉
c:CF3COOH
d:Boc-Leu-OH,DMF,HOBt,TBTU,DIPEA,rt,18h
e:Boc-Cys(Bn)-OH,DMF,HOBt,TBTU,DIPEA,rt,18h
f:Boc-HN-(CH2)5-Met(O)-Gly-OH,DMF,HOBt,TBTU,DIPEA,rt,18h
流程2阐述携带序列6-氨基己酰-亮氨酰-甘氨酰-亮氨酰-亮氨酰的4-脱乙酰长春碱缀合物(1c)的制备过程。该过程开始于硫酸长春碱(20),它首先通过碱处理转化为游离碱,然后利用甲醇钠的无水甲醇溶液在C-4位脱酰化为化合物(21)。4-脱乙酰长春碱(21)与酰氯形式的N-保护的亮氨酰衍生物、例如Fmoc衍生物反应,得到Fmoc-亮氨酰衍生物(22)。除去N-保护基团,生成化合物(23),这通常是在哌啶与二甲基甲酰胺的混合物中进行的。6-氨基己酰-亮氨酰-亮氨酰-甘氨酰的连接通常是如上所述进行的,在N-保护基团的除去和盐的生成之后,制得(1c’)。流程2
如上所述,式(1)或(1’)化合物是可用于制备本发明式(A)聚合抗癌剂的中间体。
在不限制本发明范围的前提下,下面报道式(A)聚合的药物缀合物的实施例,其中水溶性聚合物P是基于N-(2-羟基丙基)甲代丙烯酰胺(HPMA)的。
在这样的情况下,以(A)表示的聚合的药物缀合物包含组成如下的可溶性聚合物P’:
(ii)3至15mol%的由式(26)代表的单元:
其中[W1]、[W2]、p、r、[D]和S0是如上所定义的,
其中R3代表羟基或式-NH-CH2-CH(OH)-CH3残基。
这种聚合的药物缀合物(A)还可以如下所代表:[(
25)]x;[(
26)]y;[(
27)]z,其中(
25)、(
26)和(
27)是如上所定义的单元,x是85至97mol%,y是3至15mol%,z是0至12mol%。
优选地,如上所定义的这种聚合的药物缀合物(A)含有90%或以上、更优选90%的由式(
25)代表的N-(2-羟基丙基)甲代丙烯酰胺单元。该缀合物还可以含有3至10mol%、更优选10mol%的由式(26)代表的甲代丙烯酰-甘氨酰衍生物单元。优选地,(A)不含有式(27)残基,也就是说z是0。
本发明还提供用于制备式(A)药物缀合物的方法,该方法包含使通式(1)化合物与活化的聚合物P1’反应,后者的基本组成如下:
(i)85至97mol%的由如上所定义的式(25)代表的N-(2-羟基丙基)甲代丙烯酰胺单元,和
其中R4是活性酯的残基,
再可选地用1-氨基-2-丙醇置换其余活性酯基团。
式P1’聚合物已经描述在Makromol.Chem.178,2159(1977)中。优选地,其中式(28)中的R4代表活性酯残基的聚合物(P1’)与式(1)化合物之间制备聚合的药物缀合物(A)的反应是在无水极性有机溶剂例如二甲基亚砜中进行的。反应通常可以在15至30℃的温度下、优选在室温下进行15小时;然后其余活性酯基团的氨解作用可以在1-氨基-2-丙醇的存在下、在室温下进行0.5至1小时。适宜将缀合物用乙酸乙酯沉淀,溶于乙醇,用乙酸乙酯沉淀。
例如,在室温下,在叔胺例如DPEA或三乙胺的存在下,将其中式(28)中的R4代表活性酯残基、例如对-硝基苯酚的聚合物P1’的15%(w/v)无水二甲基亚砜溶液用3%(w/v)的式(1’a-1’c)化合物处理15小时。然后加入1-氨基-2-丙醇的0.1%(w/v)DMF溶液,将反应混合物在室温下保持8小时。可以将所得聚合的药物缀合物(A1a-A1c)用乙酸乙酯沉淀,收集,用乙酸乙酯洗涤,然后用无水乙醇溶解,浓度10%(w/v),用磺酸型树脂处理,过滤,再次用乙酸乙酯沉淀。
活性药物在本发明的聚合缀合物中的含量是通过HPLC或吸光度光谱分析测定的。
式(A)的聚合的药物缀合物的分子量在5,000至45,000的范围内,优选从12,000至25,000。式(A)化合物和本发明的其他化合物是水溶性的,与游离药物相比显示更强的抗肿瘤活性和更低的毒性。它们可用于治疗白血病和实体肿瘤,例如结肠、结肠直肠、卵巢、乳腺、前列腺、肺、肾的肿瘤和黑素瘤。因此可以用这样一种方法治疗人,对其给以治疗有效量的本发明聚合缀合物。因而能够改善人类患者的疾病。
所采用的剂量范围将取决于给药的途径和受治疗患者的年龄、体重和状况。式(A)的聚合的药物缀合物以及式(1’)的可溶性盐衍生物通常是通过肠胃外途径给药的,例如肌内、静脉内或大丸剂输注。适合的剂量范围是每m2体表面积1至1000mg活性药物等价物,例如10至500mg/m2。
聚合的药物缀合物(A)或式(1’)的可溶性盐衍生物可以与药物载体或稀释剂一起配制成药物组合物。通常,它们被配制成肠胃外给药剂型,例如溶解在注射用水或生理盐水中。
酶测定
在缓冲液中、在若干蛋白水解酶(基质金属蛋白酶MMP、丝氨酸蛋白酶(弹性蛋白酶))的存在下和在血浆中研究了式(A)的聚合的药物缀合物的体外降解作用。
将聚合的药物缀合物(A)按标准浓度10mM溶于无菌蒸馏水。根据聚合物负载百分率(5-10wt%药物)计算药物等价物的浓度。在50mMTris/HCl pH 7.4缓冲液中测定化合物(A),缓冲液含有0.15M NaCl、10μM CaCl2、0.01mM乙酸锌和0.05%C12 E9。使聚合的药物缀合物在37℃下、在缓冲液中平衡5分钟,浓度从5至1000μM不等。加入酶(MMP)至最终浓度为50μM,开始反应。加入0.05% TFA缓冲液(pH 2.5)终止反应,使聚合的药物缀合物的水解作用在5%以内,随后通过aquapore OD300柱用RP-HPLC分析。
反应产物的量化是用RP-HPLC得到的。例如Perkin Elmer HPLC,其由ISS 200自动取样仪、Series 200LC泵和LC240荧光检测仪组成,或者作为替代选择的Waters HPLC,其由717+自动取样仪、Model 600泵和Model 474荧光计组成。
我们发现,本发明的式(A)和(1’)化合物在明胶酶的存在下选择性地释放抗肿瘤剂D,在血浆中和在其他蛋白水解酶的存在下基本上是稳定的。
下列实施例阐述本发明。
实施例1:7-乙基-10-羟基-20-O-甘氨酰-喜树碱三氟乙酸盐(14’)
将7-乙基-10-羟基-喜树碱(12)(2.1g,5.3mmol)溶于无水二甲基亚砜(50ml),加入N-叔丁氧羰基-甘氨酸对-硝基苯基酯(4.8g,16.2mmol)和二甲氨基吡啶(0.8g,6.5mmol)。将反应混合物在氩气氛和室温下搅拌24小时。然后加入吗啉(4.6ml),将反应混合物在室温下搅拌24小时。然后加入二氯甲烷(200ml)和0.5N HCl水溶液。分离有机相,用水洗涤(3×200ml)。在减压下除去有机溶剂,得到7-乙基-10-羟基-20-O-[叔丁氧羰基-甘氨酰]-喜树碱(13)。在kiesel凝胶板(Merck)上进行TLC,用二氯甲烷/甲醇(95/5,v/v)洗脱,Rf=0.3。
将化合物(13)溶于三氟乙酸(50ml 95%水溶液),1小时后在减压下除去溶剂,得到标题化合物(14’,收率3g),为三氟乙酸盐衍生物的形式。
实施例2:7-乙基-10-羟基-20-O-(亮氨酰-甘氨酰)-喜树碱三氟乙酸盐(16’)
将含有N-叔丁氧羰基-亮氨酸(2.49g,10mmol)、1-羟基苯并三唑(HOBt)(1.53g,10mmol)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)(3.21g,10mmol)与二异丙基乙胺(DIPEA)(3.5ml,20mmol)的二甲基甲酰胺(50ml)溶液与如实施例1所述制备的化合物(14’)(3g,5.28mmol)在含有DIPEA(1.75ml,10mmol)的二甲基甲酰胺(20ml)中的溶液混合30分钟。将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后加入吗啉(4.5ml,5.6mmol),将混合物搅拌6小时。然后在减压下蒸发溶剂,将残余物溶于二氯甲烷(200ml),用0.5N HCl水溶液、5%NaHCO3水溶液(200ml)和水(2×200ml)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥,然后在减压下除去溶剂,得到7-乙基-10-羟基-20-O-(N-叔丁氧羰基-亮氨酰-甘氨酰)-喜树碱(16)。在kiesel凝胶板(Merck)上进行TLC,用二氯甲烷/甲醇(95/5,v/v)洗脱,Rf=0.5。
将化合物(16)溶于三氟乙酸(50ml 95%水溶液),1小时后在减压下除去溶剂,得到标题化合物((16’),收率3g),用乙醚收集,为三氟乙酸盐衍生物的形式。
实施例3:7-乙基-10-羟基-20-O-[(S-苄基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜树碱三氟乙酸盐(18’)
按照与实施例2所述相同的条件使化合物(16’,3g)与N-叔丁氧羰基-(S-苄基-半胱氨酸)反应,得到7-乙基-10-羟基-20-O-[N-叔丁氧羰基-(S-苄基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜树碱(17),如实施例2所述转化为标题化合物(18’)。
实施例4:7-乙基-10-羟基-20-O-[6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亚砜)-甘氨酰-(S-苄基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜树碱三氟乙酸盐(1’a)
按照与实施例2所述相同的条件,将含有N-叔丁氧羰基-6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亚砜)-甘氨酸(0.358g,0.57mmol)的二甲基甲酰胺(DMF,5ml)溶液与化合物(18’)(0.257g,0.76mmol)的二甲基甲酰胺(2ml)溶液混合,然后除去Boc保护基团,制备标题化合物。
实施例5:N-(2-羟基丙基)甲代丙烯酰胺、7-乙基-10-羟基-20-O-[N-甲代丙烯酰-6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亚砜)-甘氨酰-(S-苄基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜树碱与N-(2-羟基丙基)甲代丙烯酰甘氨酰胺的共聚物(A1a)
向聚合物(P1’)(0.756g)的无水二甲基亚砜(4ml)溶液加入如实施例4所述制备的7-乙基-10-羟基-20-O-[6-氨基己酰-(甲硫氨酰-亚砜)-甘氨酰-(S-苄基-半胱氨酰)-亮氨酰-甘氨酰]-喜树碱三氟乙酸盐(1’a)(0.23g,0.193mmol)和三乙胺(0.53ml,0.396mmol)。将反应混合物在氩气氛和室温下搅拌24小时。然后加入0.1ml1-氨基-2-丙醇(0.3ml)在二甲基甲酰胺(10ml)中的溶液,继续搅拌8小时。然后在搅拌下向反应混合物加入乙酸乙酯(200ml)。收集沉淀,用乙酸乙酯洗涤,溶于乙醇(8ml),用磺酸型树脂(DOWEX 50-磺酸)处理30分钟。将溶液过滤,用乙酸乙酯沉淀。所得固体用乙醚洗涤,干燥至恒重,得到标题化合物(A1a)。收率0.8g,Mw 20,800,多分散性1.48,7-乙基-10-羟基-喜树碱的负载率7.5%(w/w%)。
实施例6:4-脱乙酰-4-O-亮氨酰-长春碱(23)
在剧烈搅拌下,向硫酸长春碱(20)(1.5g,1.65mmol)的水(15ml)溶液加入二氯甲烷(15ml)和浓氨(1.5ml)。5分钟后,倾析混合物,含水层用二氯甲烷萃取(3×15ml)。合并有机相,用水(30ml)和盐水(30ml)洗涤,经无水硫酸钠干燥,在减压下蒸发,得到游离碱形式的长春碱,用乙醚与己烷的混合物(1∶1)沉淀后收集之。得到1.31g(1.61mmol,收率98%)。将长春碱游离碱(60mg,0.06mmol)溶于无水甲醇(5ml),加入到甲醇钠溶液(NaOCH3,190mg,无水甲醇7ml)中,在室温下搅拌3小时。然后将反应混合物用二氯甲烷稀释,用冷盐水洗涤,然后用NaHCO3水溶液洗涤两次,最后再次用盐水洗至pH 7-8。分离有机层,经无水硫酸钠干燥,在减压下除去溶剂,得到4-脱乙酰长春碱的灰白色结晶性固体(21)(46mg)。在kiesel凝胶板(Merck)上进行TLC,用二氯甲烷/甲醇(90/10,v/v)洗脱,Rf=0.34。
将化合物(21)(0.2g,0.26mmol)的无水吡啶(4.5ml)溶液用Fmoc-Leu-Cl(0.385g,1.04mmol)的无水二氯甲烷(1.9ml)溶液处理。将反应混合物在室温下保持12小时。然后向反应混合物加入水(0.5ml),破坏过量的酰氯,在减压下蒸发溶剂。使残余物在乙酸乙酯与饱和NaHCO3之间分配,用盐水洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥,然后在减压下除去溶剂。在室温下将残余物溶于哌啶(1.3ml)与无水DMF(2.7ml)的混合物。30分钟后,在减压下除去溶剂,粗品油经过硅胶快速色谱纯化,使用氯仿与甲醇(95/5,v/v)作为洗脱系统,得到标题化合物(23)(0.178g,收率62%)。在kiesel凝胶板(Merck)上进行TLC,用二氯甲烷/甲醇(90/10,v/v)洗脱,Rf=0.3。
实施例7:4-脱乙酰-4-O-(6-氨基己酰-亮氨酰-甘氨酰-亮氨酰-亮氨酰)-长春碱三氟乙酸盐(1’c)
将N-叔丁氧羰基-6-氨基己酰-亮氨酰-甘氨酰-亮氨酰(0.17g,0.32mmol)与4-脱乙酰-4-O-亮氨酰-长春碱(23)(0.28g,0.32mmol)、TBTU(0.1g,0.32mmol)和HOBt(0.05g,0.32mmol)一起溶于无水二甲基甲酰胺(6ml)。加入二异丙基乙胺(0.1ml,0.26mmol)后,将反应混合物搅拌48小时。然后在减压下除去溶剂,使残余物在二氯甲烷与饱和NaHCO3之间分配。将有机层再次用饱和NaHCO3洗涤,最后用盐水洗涤。经无水硫酸钠干燥后,在减压下除去溶剂,得到粗品油,经过快速色谱纯化,使用氯仿/甲醇混合物(95/5,v/v)作为洗脱系统,得到4-脱乙酰-4-O-(叔丁氧羰基-6-氨基己酰-亮氨酰-甘氨酰-亮氨酰)-长春碱(24)(0.32g,收率75%)。在kiesel凝胶板(Merck)上进行TLC,用二氯甲烷/甲醇(90/10,v/v)洗脱,Rf=0.59。
将化合物(24)用二氯甲烷中的50%三氟乙酸溶液(2.5ml)处理。在室温下搅拌2小时后,在减压下除去溶剂,将残余物用甲苯处理两次,干燥,得到标题化合物(1c’),为二-三氟乙酸盐。
实施例8:N-(2-羟基丙基)甲代丙烯酰胺、4-O-(N-甲代丙烯酰-甘氨酰-6-氨基己酰-亮氨酰-甘氨酰-亮氨酰-亮氨酰)-长春碱与N-(2-羟基丙基)甲代丙烯酰甘氨酰胺的共聚物(A1c)
将如实施例7所述制备的化合物(1’c)(0.3g,0.22mmol)溶于无水二甲基亚砜(1.5ml),加入到P1’(1.5g)的无水二甲基亚砜(6ml)溶液中,然后加入二异丙基乙胺(0.7ml,0.25mmol)。在室温下搅拌24小时后,向反应混合物加入1-氨基-2-丙醇(0.1ml),1小时后,将反应混合物倒入乙酸乙酯(100ml)中。过滤含有(A1c)的沉淀,用乙醚洗涤,然后溶于15ml水(HPLC级),在G-25大小排阻柱体上纯化(7次,洗脱剂:水)。收集各部分,冷冻干燥后得到标题化合物(A1c)(1.2g,收率78%)。
抗肿瘤活性
通过i.v.途径试验化合物(A1a)与游离药物7-乙基-10-羟基喜树碱(12)相比对移植在裸鼠中的人结肠癌(HT29)的作用。发现A1a在所有试验剂量下都是无毒的,在最高试验剂量20mg/kg下产生98%的肿瘤抑制作用(表1)。
表1:A1a与7-乙基-10-羟基喜树碱(12)相比对人结肠癌(HT29)的抗肿瘤活性。i.v.处理q4dx6
化合物 | 剂量mg/kg | 总剂量mg/kg | TI% | Tox |
A1a | 10203040 | 60120180240 | 85979797 | 0/70/70/70/7 |
12 | 1020 | 60120 | 6797 | 0/73/7 |
肿瘤片段是s.c.植入的。
处理开始于肿瘤可触摸到之时。
TI%(肿瘤抑制%)是在第46天计算的。
Tox是死于毒性的小鼠数/总小鼠数。
序列表<110>Pharmacia & Upjohn S.p.A.<120>抗肿瘤剂的聚合缀合物<130>SEQUENCE S-S1’<140><141><150>GB 0018240.2<151>2000-07-25<160>28<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亚砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>1Xaa Gly Xaa Leu1<210>2<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亚砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>2Xaa Gly Xaa Gly1<210>3<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亚砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<220><223>人工序列描述:合成<400>3Xaa Gly Xaa Gly Leu1 5<210>4<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亚砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>4Xaa Gly Xaa Trp Gly1 5<210>5<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亚砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(4)<223>对氟苯基甘氨酸<400>5Xaa Gly Xaa Xaa Gly1 5<210>6<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亚砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>6Xaa Gly Xaa Gly Gly1 5<210>7<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>甲硫氨酸亚砜<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>7Xaa Gly Xaa Leu Gly1 5<210>8<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>8Xaa Gly Xaa Leu1<210>9<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>9Xaa Gly Xaa Trp1<210>10<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(4)<223>对氟苯基甘氨酸<400>10Xaa Gly Xaa Xaa1<210>11<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>11Xaa Gly Xaa Gly1<210>12<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>12Xaa Gly Xaa Trp Gly1 5<210>13<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(4)<223>对氟苯基甘氨酸<400>13Xaa Gly Xaa Xaa Gly1 5<210>14<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>14Xaa Gly Xaa Gly Gly1 5<210>15<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>15Xaa Gly Xaa Leu Gly1 5<210>16<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<400>16Xaa Gly Leu Trp1<210>17<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>噻吩丙氨酸<400>17Xaa Gly Xaa Trp1<210>18<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<400>18Xaa Gly Met Trp1<210>19<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<220><221>SITE<222>(3)<223>噻吩丙氨酸<400>19Xaa Gly Xaa Trp Gly1 5<210>20<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(1)<223>S-甲基半胱氨酸<400>20Xaa Gly Met Trp Gly1 5<210>21<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>21Leu Gly Xaa Leu1<210>22<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>22Leu Gly Xaa Gly1<210>23<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>23Leu Gly Xaa Leu Gly1 5<210>24<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<220><221>SITE<222>(3)<223>S-苄基半胱氨酸<400>24Leu Gly Xaa Gly Gly1 5<210>25<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<400>25Leu Gly Leu Leu1<210>26<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<400>26Leu Gly Leu Trp1<210>27<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<400>27Leu Gly Leu Leu Gly1 5<210>28<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述:合成<400>28Leu Gly Leu Trp Gly1 5
Claims (19)
1、式(A)的聚合的药物缀合物
P-[W2]p-S0-[W1]r-[D]
(A)
其中:
P是水溶性聚合物;
[W1]是式-HN-Z1-CO-残基,其中Z1代表直链或支链C2-C12亚烷基链或式-C6H4-CH2-O-残基;
[W2]是式-HN-Z2-CO-残基,其中Z2代表直链或支链C2-C12亚烷基链;
p和r是0或1;
S0是肽残基,它可在肿瘤部位被基质金属蛋白酶的作用选择性裂解;
[D]是抗肿瘤剂的残基。
2、根据权利要求1的聚合缀合物,其中[D]是携带用于连接如权利要求1所定义的式(A)缀合物的连接基团W1或肽S0部分的官能团的抗肿瘤剂残基;r是0或者[W1]是自我牺牲性对-氨基苄氧羰基连接基团,[W2]是6-氨基己酸残基;P是聚谷氨酸、羧基化葡聚糖、羧基化聚乙二醇或基于N-(2-羟丙基)甲代丙烯酰胺的聚合物。
3、根据权利要求1或2的聚合缀合物,其中肽S0包含四至五个天然或合成氨基酸的序列。
4、根据权利要求3的聚合缀合物,其中S0代表下式序列:Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:1),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO:2),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Leu(SEQ ID NO:3),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Trp-Gly(SEQID NO:4),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-pFF-Gly(SEQ ID NO:5),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:6),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO:7),Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:8),Smc-Gly-Cys(Bn)-Trp(SEQ ID NO:9),Smc-Gly-Cys(Bn)-pFF(SEQ ID NO:10),Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO:11),Smc-Gly-Cys(Bn)-Trp-Gly(SEQ ID NO:12),Smc-Gly-Cys(Bn)-pFF-Gly(SEQ ID NO:13),Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:14),Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ IDNO:15),Smc-Gly-Leu-Trp(SEQ ID NO:16),Smc-Gly-Tha-Trp(SEQ ID NO:17),Smc-Gly-Met-Trp(SEQ ID NO:18),Smc-Gly-Tha-Trp-Gly(SEQ ID NO:19),Smc-Gly-Met-Trp-Gly(SEQ ID NO:20),Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:21),Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO:22),Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO:23),Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:24),Leu-Gly-Leu-Leu(SEQ ID NO:25),Leu-Gly-Leu-Trp(SEQ ID NO:26),Leu-Gly-Leu-Leu-Gly(SEQ ID NO:27)或Leu-Gly-Leu-Trp-Gly(SEQ ID NO:28).
5、根据权利要求4的聚合缀合物,其中S0代表下式序列:
Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:1),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQID NO:2),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:6),Met(O)-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO:7),Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:8),Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO:11),Smc-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:14),Smc-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO:15),Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu(SEQ ID NO:21),Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly(SEQ ID NO:22),Leu-Gly-Cys(Bn)-Leu-Gly(SEQ ID NO:23),Leu-Gly-Cys(Bn)-Gly-Gly(SEQ ID NO:24),Leu-Gly-Leu-Leu(SEQ ID NO:25)或Leu-Gly-Leu-Leu-Gly(SEQ ID NO:27).
6、根据在先权利要求任意一项的聚合缀合物,其中抗肿瘤剂[D]是属于下类的细胞毒剂:长春花生物碱类、蒽环霉素类、紫杉烷类、细胞毒核苷类、喜树碱类、鬼臼毒素类或烷化剂类。
7、根据权利要求6的聚合缀合物,其中抗肿瘤剂[D]是4-脱乙酰长春碱、4-脱乙酰长春新碱、长春地辛、多柔比星、4’-表多柔比星、柔红霉素、4-脱甲氧基柔红霉素、4’-脱氧-4’-碘多柔比星、3’-(2-甲氧基吗啉代)多柔比星、紫杉醇、多西他赛、5-氟尿嘧啶、喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、依托泊苷或雌莫司汀。
8、根据在先权利要求任意一项的聚合缀合物,其中[P]是基于N-(2-羟基丙基)甲代丙烯酰胺的水溶性聚合物。
9、用于制备如权利要求1所定义的聚合缀合物的方法,该方法包含使通式(1)化合物或相应的式(1’)盐衍生物
H-[W2]p-S0-[W1]r-[D] RH H-[W2]p-S0-[W1]r-[D]
(1) (1’)
其中[W1]、[W2]、p、r、S0和[D]是如权利要求1所定义的,RH是一种酸,
与携带适合与化合物(1)或(1’)偶联的官能团的聚合物P1反应。
10、根据权利要求9的方法,其中聚合物[P1]上适合与如权利要求9所定义的化合物(1)或(1’)连接的官能团包含羧基或活化的羧基。
11、如权利要求9所定义的式(1)抗肿瘤衍生物或对应的式(1’)盐衍生物。
12、用于制备如权利要求11所定义的式(1)或(1’)化合物的方法,该方法包含
-从式(2)衍生物除去N-保护基团:
R2-[W2]p-S0-[W1]r-[D]
(2)
其中[W1]、[W2]、p、r、[D]和S0是如权利要求9所定义的,R2代表氨基保护基团,
-可选地通过温和的碱处理将所得通式(1’)化合物转化为相应的游离氨基衍生物(1)。
13、根据权利要求12的方法,其中N-保护基团的除去是在酸性条件下进行的,R2代表Boc(叔丁氧羰基)、Fmoc、三苯基甲硅烷基、二苯基亚甲基或三苯基甲基。
16、药物组合物,其中包含药学上可接受的稀释剂或载体和作为活性成分的如权利要求1至8或14任意一项所定义的聚合缀合物或如权利要求11所定义的式(1)或(1’)化合物。
17、用在人或动物治疗方法中的如权利要求1至8或14任意一项所定义的聚合缀合物或如权利要求11所定义的式(1)或(1’)化合物。
18、如权利要求1至8或14任意一项所定义的聚合缀合物或如权利要求11所定义的式(1)或(1’)化合物在药物制备中的用途,该药物用于治疗白血病或实体肿瘤。
19、根据权利要求18的用途,其中该实体肿瘤是结肠、结肠直肠、卵巢、乳腺、前列腺、肺、肾的肿瘤或黑素瘤。
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