CZ296014B6 - Způsob vazby zbytku aminokyseliny na peptidový řetězec - Google Patents
Způsob vazby zbytku aminokyseliny na peptidový řetězec Download PDFInfo
- Publication number
- CZ296014B6 CZ296014B6 CZ2001159A CZ2001159A CZ296014B6 CZ 296014 B6 CZ296014 B6 CZ 296014B6 CZ 2001159 A CZ2001159 A CZ 2001159A CZ 2001159 A CZ2001159 A CZ 2001159A CZ 296014 B6 CZ296014 B6 CZ 296014B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- amino acid
- peptide
- binding
- fmoc
- resin
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 118
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 84
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 title claims abstract description 17
- 230000008878 coupling Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 title claims abstract description 10
- UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N triphosgene Chemical compound ClC(Cl)(Cl)OC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 66
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 59
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 52
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 29
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 16
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 83
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 83
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 77
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 52
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 28
- -1 bis- (trichloromethyl) carbonate compound Chemical class 0.000 claims description 28
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 22
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 22
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 16
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 14
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 10
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims description 10
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 9
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 8
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 5
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 5
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- YHRUOJUYPBUZOS-UHFFFAOYSA-N 1,3-dichloropropane Chemical compound ClCCCCl YHRUOJUYPBUZOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SBZXBUIDTXKZTM-UHFFFAOYSA-N diglyme Chemical compound COCCOCCOC SBZXBUIDTXKZTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 claims description 3
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 2
- 125000000467 secondary amino group Chemical class [H]N([*:1])[*:2] 0.000 claims description 2
- HPYNZHMRTTWQTB-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylpyridine Chemical compound CC1=CC=CN=C1C HPYNZHMRTTWQTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- SMUQFGGVLNAIOZ-UHFFFAOYSA-N quinaldine Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C)=CC=C21 SMUQFGGVLNAIOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims 2
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000000532 dioxanyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000005897 peptide coupling reaction Methods 0.000 claims 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 13
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 abstract description 4
- 238000010952 in-situ formation Methods 0.000 abstract description 3
- 238000009795 derivation Methods 0.000 abstract description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 52
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 48
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 47
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 22
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 20
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 20
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 17
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 17
- 150000001805 chlorine compounds Chemical class 0.000 description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 description 15
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N sym-collidine Natural products CC1=CN=C(C)C(C)=C1 GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 10
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 10
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N anhydrous collidine Natural products CC1=CC=NC(C)=C1C HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N collidine Natural products CC1=CC=C(C)C(C)=N1 UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 7
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-Trimethylpyridine Chemical compound CC1=CC(C)=NC(C)=C1 BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- DYWUPCCKOVTCFZ-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-amino-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C(C[C@H](N)C(O)=O)C2=C1 DYWUPCCKOVTCFZ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 5
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 5
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical class CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- CSMYOORPUGPKAP-IBGZPJMESA-N (2r)-3-(acetamidomethylsulfanyl)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CSCNC(=O)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CSMYOORPUGPKAP-IBGZPJMESA-N 0.000 description 4
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 4
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 4
- HCUYBXPSSCRKRF-UHFFFAOYSA-N diphosgene Chemical compound ClC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl HCUYBXPSSCRKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- WHQSYGRFZMUQGQ-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;hydrate Chemical compound O.CN(C)C=O WHQSYGRFZMUQGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 3
- AUHZEENZYGFFBQ-UHFFFAOYSA-N 1,3,5-Me3C6H3 Natural products CC1=CC(C)=CC(C)=C1 AUHZEENZYGFFBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 3
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 3
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 3
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 3
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 3
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 2
- LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N (2s,3r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]butanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@H](OC(C)(C)C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N 0.000 description 2
- SJHPCNCNNSSLPL-CSKARUKUSA-N (4e)-4-(ethoxymethylidene)-2-phenyl-1,3-oxazol-5-one Chemical compound O1C(=O)C(=C/OCC)\N=C1C1=CC=CC=C1 SJHPCNCNNSSLPL-CSKARUKUSA-N 0.000 description 2
- KNKRKFALVUDBJE-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichloropropane Chemical compound CC(Cl)CCl KNKRKFALVUDBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YVHVGFSDGHMIIG-UHFFFAOYSA-N 2-(2-tert-butylsulfonylethynylsulfonyl)-2-methylpropane Chemical compound CC(C)(C)S(=O)(=O)C#CS(=O)(=O)C(C)(C)C YVHVGFSDGHMIIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanoic acid Chemical compound CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N Cys-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700009653 PTR-3205 Proteins 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N Thr-Phe-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N 0.000 description 2
- NLKUJNGEGZDXGO-XVKPBYJWSA-N Tyr-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NLKUJNGEGZDXGO-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001350 alkyl halides Chemical class 0.000 description 2
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 125000000732 arylene group Chemical group 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002993 cycloalkylene group Chemical group 0.000 description 2
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 229920006130 high-performance polyamide Polymers 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000012434 nucleophilic reagent Substances 0.000 description 2
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- QGKLPGKXAVVPOJ-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-3-one Chemical compound O=C1CCNC1 QGKLPGKXAVVPOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical group C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 125000005717 substituted cycloalkylene group Chemical group 0.000 description 2
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RMTDKXQYAKLQKF-INIZCTEOSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 RMTDKXQYAKLQKF-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- ZYJPUMXJBDHSIF-LLVKDONJSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZYJPUMXJBDHSIF-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-1-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- RWLSBXBFZHDHHX-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-2-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=C21 RWLSBXBFZHDHHX-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- VVQIIIAZJXTLRE-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-amino-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCC[C@H](N)C(O)=O VVQIIIAZJXTLRE-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-azaniumyl-2-cyclohexylacetate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1CCCCC1 WAMWSIDTKSNDCU-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- GTVVZTAFGPQSPC-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-azaniumyl-3-(4-nitrophenyl)propanoate Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 GTVVZTAFGPQSPC-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- IZKGGDFLLNVXNZ-KRWDZBQOSA-N (2s)-5-amino-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-5-oxopentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 IZKGGDFLLNVXNZ-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HLTFNSIDIOESMY-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane;1-methoxy-2-(2-methoxyethoxy)ethane Chemical compound C1COCCO1.COCCOCCOC HLTFNSIDIOESMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BLCJBICVQSYOIF-UHFFFAOYSA-N 2,2-diaminobutanoic acid Chemical compound CCC(N)(N)C(O)=O BLCJBICVQSYOIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MGHMWKZOLAAOTD-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)NC(C(=O)O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 MGHMWKZOLAAOTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001431 2-aminoisobutyric acid group Chemical group [#6]C([#6])(N*)C(*)=O 0.000 description 1
- WTOFYLAWDLQMBZ-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-3-thiophen-2-ylpropanoate Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CS1 WTOFYLAWDLQMBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSWYUZQBLVUEPH-UHFFFAOYSA-N 3-(azaniumylmethyl)benzoate Chemical group NCC1=CC=CC(C(O)=O)=C1 GSWYUZQBLVUEPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 4-amino-L-phenylalanine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N)C=C1 CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- TYMIFYJJOPYXBG-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl piperidine-1-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N1CCCCC1 TYMIFYJJOPYXBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N Cysteine Chemical compound SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 125000000030 D-alanine group Chemical group [H]N([H])[C@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N Fenclonine Chemical group OC(=O)C(N)CC1=CC=C(Cl)C=C1 NIGWMJHCCYYCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N N-methyl-L-valine Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(O)=O AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- HPECNYCQLSVCHH-BZSNNMDCSA-N Phe-Cys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=CC=C2)C(=O)O)N HPECNYCQLSVCHH-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000009298 Trigla lyra Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N Trp-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 DZHDVYLBNKMLMB-ZFWWWQNUSA-N 0.000 description 1
- WKQNLTQSCYXKQK-VFAJRCTISA-N Trp-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WKQNLTQSCYXKQK-VFAJRCTISA-N 0.000 description 1
- POORJMIIHXHXAV-SOYHJAILSA-N [(3ar,5r,5as,8as,8br)-2,2,7,7-tetramethyl-5,5a,8a,8b-tetrahydro-3ah-di[1,3]dioxolo[4,5-a:5',4'-d]pyran-5-yl]methanol Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H]2OC(C)(C)O[C@@H]2[C@H]2OC(C)(C)O[C@H]21 POORJMIIHXHXAV-SOYHJAILSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- DLAMVQGYEVKIRE-UHFFFAOYSA-N alpha-(methylamino)isobutyric acid Chemical compound CNC(C)(C)C(O)=O DLAMVQGYEVKIRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- AYJPQGDWEDBSTK-UHFFFAOYSA-N amino-(2-amino-2-oxoethyl)carbamic acid Chemical group OC(=O)N(N)CC(N)=O AYJPQGDWEDBSTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 150000004982 aromatic amines Chemical class 0.000 description 1
- 150000001491 aromatic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000005129 aryl carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- KFDKSWDECHPONU-UHFFFAOYSA-N bis(trichloromethyl) carbonate Chemical group ClC(Cl)(Cl)OC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl.ClC(Cl)(Cl)OC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl KFDKSWDECHPONU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SBGUYEPUJPATFD-UHFFFAOYSA-N bromo(tripyrrolidin-1-yl)phosphanium Chemical compound C1CCCN1[P+](N1CCCC1)(Br)N1CCCC1 SBGUYEPUJPATFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004566 building material Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000007810 chemical reaction solvent Substances 0.000 description 1
- FZFAMSAMCHXGEF-UHFFFAOYSA-N chloro formate Chemical compound ClOC=O FZFAMSAMCHXGEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- RNPXCFINMKSQPQ-UHFFFAOYSA-N dicetyl hydrogen phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOP(O)(=O)OCCCCCCCCCCCCCCCC RNPXCFINMKSQPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000006345 epimerization reaction Methods 0.000 description 1
- DWYMPOCYEZONEA-UHFFFAOYSA-L fluoridophosphate Chemical compound [O-]P([O-])(F)=O DWYMPOCYEZONEA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000002222 fluorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000002256 galaktoses Chemical class 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000005040 ion trap Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1,1-diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(NC)C1=CC=CC=C1 SHDMMLFAFLZUEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007335 nucleophilic acyl substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- LFAGQMCIGQNPJG-UHFFFAOYSA-N silver cyanide Chemical compound [Ag+].N#[C-] LFAGQMCIGQNPJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 125000005415 substituted alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/08—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1019—Tetrapeptides with the first amino acid being basic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Polyamides (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
Abstract
Popisuje se způsob použití trifosgenu jako účinného vazebného činidla při peptidové syntéze vytvářením chloridu aminokyseliny in situ z chráněné aminokyseliny. Tento způsob je zvláště vhodný pro vazebné reakce na stericky bráněné zbytky aminokyselin nebo pro další jiné vazby. Navíc může být stejné činidlo použito pro derivatizaci peptidů tvorbou amidové vazby mezi volným aminem na peptidu a karboxylovou kyselinou nebo pro vazbu aminokyseliny na pevný nosič.
Description
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká způsobu vytváření chloridů aminokyselin in šitu s použitím bis— (trichlormethyl)karbonátu, běžně známého jako trifosgen, a způsobů použití tohoto postupu pro syntézu peptidů na pevné fázi a pro derivatizaci pevného nosiče.
Dosavadní stav techniky
V oboru syntézy peptidů jsou některé vazebné reakce známé jako obtížně proveditelné, zvláště takové reakce, které se týkají vazby na objemově nebo stericky bráněné aminokyselinové zbytky, jako jsou N-alkylované, C-alkylované a C“-rozvětvené aminokyseliny. Aby bylo možno dosáhnout přijatelných výtěžků při provádění těchto reakcí, byla vyvinuta řada speciálních vazebných činidel. Mezi další známé postupy pro zlepšení výtěžku vazebných reakcí patří použití předem vytvořených chloridů aminokyselin.
Obecné použití chloridů chráněných aminokyselin při syntéze peptidů na pevné fázi (solid phase peptide synthesis, SPPS) je omezené zejména proto, že chloridy fluorenylmethoxykarbonyl (Fmoc) aminokyselin, které mají vedlejší řetězce chráněné labilními ochrannými skupinami včetně bez omezení skupin t-butyl (t-Bu), t-butoxykarbonyl (Boc) nebo trityl (Trt), mají omezenou stabilitu při skladování. Například chloridy Fmoc-aminokyselin (AA) s vedlejšími řetězci chráněnými t-Bu nemohly obecně být použity. V některých případech (kyselina asparagová a kyselina glutamová) nemohly být chloridy získány a v jiných případech (tyrosin, serin, threonin) byla jejich stabilita při skladování nedostatečná pro praktické použití. Navíc je příprava chloridů odvozených od sloučenin Fmoc-lysin(Boc), Fmoc-tryptofan(Boc), Fmoc-cystein(Trt), Fmocglutamin(Trt) a Fmoc-arginin-2,2,5,7,8-pentamethylchroman-6-sulfonyl(Pmc) problematická, protože dochází k vedlejším reakcím a látky vyžadují speciální reakční podmínky a čištění (Carpino a další, Acc. Chem. Res. 29: 268, 1996). Tento problém také ztěžuje obecné použití předem vytvořených chloridů Fmoc-aminokyselin při automatické syntéze peptidů. Přes tato omezení se chloridy kyselin používaly v SPSS zvláště pro sestavování bráněných sekundárních aminokyselin (viz Carpino a další, 1996 výše, a tam uvedené odkazy).
Vazba chráněných aminokyselin na N“-alkylované aminokyseliny byla dosud považována za obtížnou jak v roztoku, tak i na pevné fázi. Tato vazba byla používána u modelových peptidů pro demonstraci účinnosti nových, účinnějších vazebných metod. V těchto modelech by byly jako nukleofílní činidla použity N-methylované aminokyseliny, protože bylo zjištěno, že vazba na N-methylované aminokyseliny se sterickou zábranou na C“ (např. N-methylvalin a kyselina N-methylaminoizomáselná) probíhá mnohem pomaleji než vazba na prolin. Některá vazebná činidla a metody aktivace, jako je brom-tris-pyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfát (PyBroP) (Coste a další, Tetrahedron Lett. 31, 669, 1990), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (HOAt)/O-(7azabenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetramethyluroniumhexa-fluorfosfát (HATU) (Carpino a další, J. Chem. Soc., Chem. Commun. 201, 1994), urethanem chráněné N-karboxyanhydridy (UNCA) (Spencer a další, Int. J. Pep. Prot. Res. 40: 282, 1992) a halogenidy kyselin (Carpino a další, 1996 výše) byly zvláště doporučeny pro dosažení vazby na N-alkylaminokyseliny.
Bylo zjištěno, že metoda používající chloridy kyselin je nejlepší způsob vazby chráněných aminokyselin na stericky bráněné deriváty aminokyselin, jako jsou N-alkylaminokyseliny v průběhu SPPS kostry cyklických peptidů. Aby bylo možno předejít omezením spojeným s metodou předem vytvářených chloridů kyselin, a aby bylo možno použít tohoto způsobu obecně při SPPS, bylo by výhodné vyvinout účinnou a obecně použitelnou metodu umožňující vytváření chloridů Fmoc-aminokyselin (Fmoc-AA) in šitu.
-1 CZ 296014 B6
Reakční činidlo bis-(trichlormethyl)karbonát (BTC) (Councler, C., Ber. Dtsch. Chem. Ges.VP. 1697, 1880), nazývané také hexachlordimethylkarbonát nebo „trifosgen“, je pevná stabilní náhrada fosgenu, ekvivalentní 3 mol fosgenu. Trifosgen byl používán jako účinné karbonylační činidlo pro syntézu různých aza-analogů peptidů obsahujících aza-alanin, kyselinu aza-asparagovou a zbytky aza-asparaginu na pevné fázi (André a další, J. Pep. Sci. 3: 429, 1997).
Použití trifosgenu jako reakčního činidla pro tvorbu izokyanátů nebo jiných reakčních sloučenin použitelných v chemii peptidů bylo popsáno v Eckert DE3440141, Nippon Kayaku JP 10007623. Byla také popsána použitelnost trifosgenu při výrobě různých meziproduktů pro farmaceuticky účinné látky (Hoffman a další, DD292452). Nikde se neuvádí ani nenavrhuje, že trifosgenové reakční činidlo je vhodné pro vytváření chloridů chráněných aminokyselin in šitu, tedy jako vazebného činidla při SPPS (přehled viz Cotarca a další, Synthesis 553, 1996).
Plynný fosgen byl dlouho ceněný při reakcích jak v laboratorním, tak i v provozním měřítku, i když byla také velmi dokumentována nebezpečí, zvláště nebezpečí pro dýchací trakt. Kapalný trichlormethylchloroformát, běžně známý jako „difosgen“ (Fridgen, L. N. a Prol, J. J., J. Org. Chem. 54: 3231, 1989), který byl již použit jako náhrada fosgenu, se ukázal jako použitelný ve všech běžných reakcích využívajících fosgenu, ale pro jeho kapalné skupenství představuje doprava a skladování této sloučeniny stále značné riziko. Protože je BTC krystalická pevná látka (teplota tání 81 až 83 °C), je bezpečnější a umožňuje snadnou manipulaci, je možno toto činidlo používat pro všechny aplikace, kde se vyžaduje fosgenová chemie (Cotarca a další, výše). Z hlediska chemické syntézy poskytuje 1 mol BTC tři molární ekvivalenty fosgenu, který reaguje s hydroxylovými a aminovými skupinami a skupinami karboxylových kyselin jako nukleofílními Činidly, za vytvoření chloroformátu, izokyanátů nebo acylchloridu. Vezmeme-li v úvahu všechny tyto vlastnosti spolu se skutečností, že BTC je levný a méně náchylný k hydrolýze než fosgen, je překvapivé, že dosud nebylo uvažováno použití BTC jako obecného vazebného činidla.
Analogy peptidů s cyklizovanou kostrou
Cyklizace v kostře (backbone cyclization) je způsob, který umožňuje konverzi peptidů na konformačně omezená peptidomimetika s požadovanými farmakologickými vlastnostmi jako je metabolická stabilita, selektivita a zlepšená biologická dostupnost (Gilon a další, Biopolymers 32: 745,1991; Býka další, J. Med. Chem. 39: 3174,1996; Gilon a další, J. Med. Chem. 42: 919,1998).
Při cyklizaci kostry se atomy N“ a/nebo C“ v peptidové kostře spojují různými mezemíkovými skupinami (spacers). Pro syntézu peptidů s cyklickou N-kostrou bylo připraveno velké množství ortogonálně chráněných fúnkcionalizovaných N“-alkylaminokyselin (N-vazebné jednotky) (Bitan a další, J. Chem. Soc., Perkin trans. I, 1501, 1997a; Muller a další, J. Org. Chem. 62: 411, 1997). Tyto jednotky byly zařazovány do peptidů pomocí SPPS nebo metodami reakcí v roztoku a po ortogonálním odstranění ochranných skupin z ω-funkčních skupin na N“-alkylu se tyto látky cyklizují. Kritickým krokem při syntéze cyklických peptidů s N-kostrou je vazba chráněných aminokyselin na stericky bráněný sekundární amin N“(to-funkcionalizovaný alkyl) aminokyselinový zbytek na peptidylové pryskyřici.
Syntéza cyklických peptidů s N-kostrou, které zahrnovaly Na(<a-funkcionalizovaný alkyl)glycinové stavebné jednotky, byla již popsána. V těchto případech bylo dosaženo vazby chráněných aminokyselin na sekundární amin vazebné jednotky Gly navázané na peptidylovou pryskyřici vícenásobnými reakcemi s benzotriazol-l-yl-oxy-tris-(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfátem BOP nebo PyBroP, jako vazebnými činidly (Bitan a další, J. Pept. Res. 49: 421, 1997b; Byk a další, 1996 výše). Obecně však bylo zjištěno, že vazba chráněných aminokyselin na stavební jednotky jiné než Gly (cyklické stavební jednotky neobsahující v kostře Gly) je obtížná a dokonce nemožná.
Bylo ukázáno, že vazba mnoha Fmoc-aminokyselin na stericky bráněné sekundární aminy včetně řady stavebních jednotek neobsahujících Gly navázaných na peptidylovou pryskyřici, by mohla
-2CZ 296014 B6 být uskutečněna se středními až vysokými výtěžky použitím metody využívající chloridy kyselin, ale nikoli fluoridů kyselin (Carpino a další, 1996 výše), nebo jiná reakční činidla jako je PyBrOP (Coste a další, výše, HOAt/HATU Carpino 1994, výše), 2-(2-oxo-l(2H)-pyridyl)-l,l,3,3-bispentamethylenuroniumtetrafluorborát (TOPPipU) Henkleinet a další, „Peptides, 1990“, Proč, of the 21' European Peptide Symposium, E. Giralt a D. Andreu, ed., str. 67 ESCOM Leiden, 1990), UNCA (Spencer a další, 1992) a Mukaiymovo činidlo (Mukaiyama T., Angew. Chem., Int. Ed. Ing., 18: 7078, 1979).
Podstata vynálezu
Předmětem předkládaného vynálezu je poskytnutí způsobu zlepšení obtížně proveditelných vazebných reakcí při SPPS. Dalším předmětem vynálezu je poskytnutí způsobu zlepšení výtěžku požadovaného stereoizomeru při syntéze peptidů na pevné fázi. Ještě dalším předmětem je poskytnutí způsobů pro umožnění vícečetné paralelní syntézy (multiple parallel synthesis, MPS). Dalším předmětem je poskytnutí způsobů pro navázání chráněných aminokyselin na funkcionalizované pevné nosiče nebo pro navázání biologicky nebo lékařsky důležitých ligandů na peptid nebo peptidylovou pryskyřici v průběhu SPPS. Dalším předmětem vynálezu je poskytnutí způsobů pro cyklizaci peptidů navázaných na pevný nosič. Dalším předmětem je poskytnutí způsobů pro tvorbu močovinové vazby zařazené v sekvenci nebo jako můstek cyklizovaných peptidů.
Podle předkládaného vynálezu se poskytuje způsob vytváření chloridů chráněných aminokyselin in šitu použitím činidla jako je fosgen, difosgen nebo výhodněji trifosgen. Chloridy chráněných aminokyselin vytvořené tímto způsobem jsou použitelné zvláště při vazebné reakci zbytku aminokyseliny na peptidový řetězec. Mohou být také použity pro vazbu uhlohydrátové skupiny na peptidový řetězec.
Vytváření chloridů kyselin in šitu použitím způsobů podle předkládaného vynálezu tedy dále poskytuje způsob, při kterém je možno navázat další biologicky důležité kyseliny, včetně bez omezení kyseliny glukuronové, DTPA a DOTA, na peptidový řetězec přes aminovou kostru, nebo funkční skupinu postranního řetězce aminokyseliny. Nyní bylo zjištěno, že podle předkládaného vynálezu může být pro vytváření chloridů chráněných aminokyselin in šitu bis-(trichlormethyl)karbonát, známý také pod triviálním chemickým názvem trifosgen. Použití tohoto způsobu předchází mnoha problémům spojeným s obtížnými kroky vazebných reakcí při SPPS, zvláště v případech, kdy se kroku vazebné reakce účastní stericky bráněné zbytky aminokyselin, nebo analogy aminokyselin s velkým objemem.
Poskytují se metody pro použití BTC jako pohodlného a účinného vazebného činidla pro obtížně proveditelné vazby při SPPS. Tyto metody poskytují značně vyšší výtěžky požadovaného produktu při SPPS se zachováním konfigurace a bez nežádoucích vedlejších reakcí, a umožňují také provádění vícečetných paralelních peptidových syntéz. Tyto metody také umožňují syntézu komplexních analogů peptidů s vícečetnými cyklizacemi, například bř- a tricyklických peptidů.
Jeden způsob podle předkládaného vynálezu poskytuje způsob vazby zbytku aminokyseliny na peptidový řetězec, který zahrnuje následující kroky:
(i) poskytne se zbytek aminokyseliny s volnou karboxylovou skupinou a blokovanou aminoskupinou, popřípadě s dalšími blokovanými funkčními skupinami vedlejších řetězců;
(ii) provede se reakce blokované aminokyseliny s bis-(trichlormethyl)karbonátem v rozpouštědle, které je vzhledem k této reakci inertní, za získání chloridu aminokyseliny;
(iii) provede se neutralizace volné kyseliny přidáním organické báze;
(iv) získaná suspenze obsahující chlorid aminokyseliny se přidá ke sloučenině zvolené ze skupiny zahrnující peptid s blokovaným karboxylovým koncem a volným aminovým koncem, a peptidylovou pryskyřici obsahující alespoň jeden volný aminový konec; a
-3CZ 296014 B6 (v) použije se reakčních podmínek umožňujících vazbu chloridu aminokyseliny na peptid za získání peptidu prodlouženého o jeden zbytek aminokyseliny.
Druhý způsob podle předkládaného vynálezu zahrnuje způsob vazby zbytku aminokyselin na pevný nosič, který zahrnuje následující kroky:
(i) poskytne se zbytek aminokyseliny s volnou karboxylovou skupinou a blokovanou aminoskupinou, popřípadě s dalšími blokovanými funkčními skupinami vedlejších řetězců;
(ii) provede se reakce blokované aminokyseliny s bis-(trichlormethyl)karbonátem v rozpouštědle, které je vzhledem k této reakci inertní, za získání chloridu aminokyseliny;
(iii) provede se neutralizace volné kyseliny přidáním organické báze;
(iv) získaná suspenze obsahující chlorid aminokyseliny se přidá ke sloučenině zvolené ze skupiny zahrnující pryskyřici obsahující alespoň jeden volný aminový konec a pevný nosič nesoucí funkční skupinu schopnou vazby na chlorid; a (v) použije se reakčních podmínek umožňujících vazbu chloridu aminokyseliny na pevný nosič.
Nejvýhodnější provedení podle předkládaného vynálezu je shrnuto ve schématu 1.
Schéma 1
Uskutečnění obtížně proveditelné vazby s použitím BTC v rozpouštědle, které je vůči této reakci
| inertní | ||
| -Fmoc-AA-OH + | BTC | |
| I | II |
Fmoc-AA-Cl III
R
HN-CH-CO-peptidyl-pryskyřice
IV
THF, dioxan diglym,
1,3-dichlorpropan
R3N při 50 °C 1 h dvojí vazebná reakce
R
I
Fmoc-AA-N-CH-CO-peptidyl-pryskyřice
R» V
-4CZ 296014 B6
| BCT = | Bis-(trichlormethyl)karbonát (trifosgen) |
| Fmoc-AA = | Fluorenylmethoxykarbonyl-proteinogenní cc-aminokyselina |
| R = | Vedlejší řetězce všech proteinogenních a-aminokyselin |
| R' = | CH3, (CH2)n=2_4-NH-Alloc, (CH2)n=2_3-COOAllyl |
| R3N = | terciární nebo aromatický amin |
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 Chromatogram HPLC produktu získaného v příkladu 38.
Obr. 2 Analýza produktu získaného v příkladu 38 hmotnostní spektrometrií.
Obr. 3 Chromatogram HPLC produktu získaného v příkladu 49.
Obr. 4 Chromatogram HPLC produktu získaného v příkladu 55.
Obr. 5 Chromatogram HPLC PTR 3227 získaného v příkladu 63.
Obr. 6 Analýza PTR 3229 získaného v příkladu 64 hmotnostní spektrometrií.
Obr. 7 Analýza PTR 3237 získaného v příkladu 65A hmotnostní spektrometrií.
Obr. 8 Chromatogram HPLC s hmotnostní spektrum PTR 3231 získaného v příkladu 65B.
Obr. 9 Chromatogram HPLC a hmotnostní spektrum peptidů MPS č. 20 získaného v příkladu 66.
Obr. 10 Chromatogram HPLC a hmotnostní spektrum analogu cyklosporinu syntetizovaného v příkladu 67.
Podrobný popis vynálezu
Podle předkládaného vynálezu se poskytují způsoby pro vytváření chloridů chráněných aminokyselin in šitu s použitím činidel jako je fosgen, difosgen nebo trifosgen. Ve všech výhodných provedeních uváděných v předkládaném vynálezu se jako příkladů postupů používá syntézy peptidů na pevné fázi, ačkoli jsou tyto postupy velmi vhodné také pro v oboru známou syntézu peptidů v roztoku. Navíc mohou být stejné postupy potenciálně použitelné pro vazbu jiných skupin na peptidový řetězec, včetně bez omezení vazby uhlohydrátové skupiny na peptidový řetězec, a pro způsoby vícečetné paralelní syntézy peptidů. Způsoby podle předkládaného vynálezu jsou také velmi vhodné pro syntézu komplexních peptidových analogů jako jsou bi- a tricyklické peptidy, a pro syntézu analogů cyklosporinu, které obsahují sedm stericky bráněných N-methylaminokyselin. Způsoby jsou také vhodné pro tvorbu močovinové vazby v sekvenci, nebo jako můstku u cyklizovaných peptidů.
Zkratky
Při popisu vynálezu a způsobech jeho provádění a využití se používají některé zkratky.
Například AA označuje aminokyselinu; ACN je acetonitril; Alloc je allyloxykarbonyl; Boc je t-butoxykarbonyl; BOP je benztriazol-l-yl-oxy-tris-(dimethylaminofosfoniumhexafluorofosfát; BCT je bis-(trichlormethyl)karbonát; DCM je dichlormethan; DIEA je diizopropylethylamin; DOTA je kyselina tetraazacyklodekantetraoctová; DTPAje kyselina diethylentriaminpentaoctová; Fmoc je fluorenylmethoxykarbonyl; Gin je glutamin; HATUje 0-(7-azabenzotriazol-l-yl)-
1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfát; HOAt je l-hydroxy-7-azabenztriazol; HPPA je kyselina parahydroxyfenylpropionová; MBHA je methylbenzhydrylamin; Me je methyl; MPS je vícečetná paralelní syntéza (multiple parallel synthesis); NMP je N-methylpyrrolidon; Pmc je 2,2,5,7,8-pentamethylchroman-6-sulfonyl; PyBrOP je brom-tris-pyrrolidino-fosfoniumhexa
-5CZ 296014 B6 fluorfosfát; SPPS je syntéza na pevné fází; t-Bu je t-butyl; TFA je kyselina trifluoroctová; THF je tetrahydrofuran; TIS je triizopropylsilan; TOPPipU je 2-(2-oxo-l(2H)-pyridyl)-l,l,3,3-bispentamethylenuroniumtetrafluorborát; Trt je trityl; UNCA označuje urethanem chráněné N-karboxyanhydridy.
Aminokyseliny
Aminokyseliny používané v rámci tohoto vynálezu jsou dostupné komerčně nebo mohou být získány rutinními metodami syntézy. Přirozeně kódované aminokyseliny a jejich deriváty jsou reprezentovány třípísmenovými kódy podle konvenci IUPAC. Jestliže není uvedeno jinak, byl použit L izomer. D izomery se označují písmenem „D“ před zkratkou zbytku.
Seznam nekódovaných aminokyselin: Abu je kyselina 2-aminomáselná, Aib je kyselina 2-aminoizomáselná, β-Ala je β-alanin, Amb je kyselina 3-aminomethylbenzoová; ChxGly znamená cyklohexylglycin, Dab znamená kyselinu diaminomáselnou, GABA znamená kyselinu gama aminomáselnou, Hcys je homocystein, lNal je 1-naftylalanin, 2Nal je 2-naftylalanin, Nva je norvalin, (p-Cl)Phe je para chlorfenylalanin, (p-NH2)Phe je para aminofenylalanin, (p-F)Phe je para fluorfenylalanin, (p-NO2)Phe je para nitrofenylalanin, Sar je sarkosin, Thi je thienylalanin.
Jak se používá v popisu a nárocích, „blokované aminokyseliny“ označují aminokyseliny, ve kterých je reaktivní skupina chráněná specifickou blokující nebo ochrannou skupinou, která může být selektivně odstraněna, a alternativně může být označována termínem „chráněná aminokyselina“ známých v oboru.
Jak se zde používá, „peptid cyklický v kostře“, znamená analog lineárního peptidu, který obsahuje alespoň jednu vazebnou jednotku, která byla spojena za vytvoření můstku přes dusík alfa peptidové kostry s další stavební jednotkou, nebo s další aminokyselinou v sekvenci. Výraz „stavební jednotka“ označuje N“-(o-funkcionalizovaný derivát aminokyseliny.
Stavební jednotky používané při syntéze peptidů cyklizovaných vkostře
Termín „stavební jednotka“ označuje N“-m-funkcionalizovaný derivát kyseliny obecného vzorce 1:
B-N-CH(R’)-CO-OH
I
X
I
A—G (1) kde X je mezemíková skupina zvolená ze skupiny alkylen, substituovaný alkylen, arylen, cykloalkylen a substituovaný cykloalkylen; R' je postranní řetězec aminokyselin, popřípadě svázán se specifickou ochrannou skupinou; B je ochranná skupina zvolená ze skupiny alkoxy, substituovaný alkoxy nebo arylkarbonyl a G je funkční skupina zvolená ze skupiny aminy, thioly, alkoholy, karboxylové kyseliny a estery, aldehydy, alkoholy a alkylhalidy; a A je specifická ochranná skupina skupiny G.
Tato stavební jednotka zabudovaná do sekvence peptidu bude mít následující strukturu:
-6CZ 296014 B6
---------N-CH(R’)-CO--------X
-----------G (2) kde X je mezemiková skupina zvolená ze skupiny alkylen, substituovaný alkylen, ary len, cykloalkylen a substituovaný cykloalkylen; R' je postranní řetězec aminokyseliny, popřípadě s navázanou specifickou ochrannou skupinou; a G je funkční skupina zvolená ze skupiny aminy, thioly, alkoholy, karboxylové kyseliny a estery, a alkylhalidy; která je zabudována do peptidové sekvence a potom selektivně cyklizována prostřednictvím funkční skupiny G s jedním z postranních řetězců aminokyselin v uvedené peptidové sekvenci, nebo s dalším ω-funkcionalizovaným derivátem aminokyseliny.
Stavební jednotky se zkracují třípísmenovým kódem odpovídající modifikované aminokyseliny následovaným typem reaktivní skupiny (N pro amin, C pro karboxyl) a uvedením počtu mezemíkových methylenových skupin. Například označení GlyC2 popisuje modifikovaný zbytek Gly s karboxylovou reaktivní skupinou a dvouuhlíkovým methylenovým mezemíkem, a označení PheN3 znamená modifikovanou fenylalaninovou skupinu s aminoreaktivní skupinou a tříuhlíkovým methylenovým mezemíkem.
Metody pro výrobu těchto stavebních jednotek se popisují v mezinárodních patentových přihláškách zveřejněných jako WO 95/33765 a WO 98/04583 a v patentech US 5 723 575; 5 811 391; 5 883 293; 5 874 529 a 5 770 687, přičemž všechny tyto prameny se výslovně zařazují do předkládaného popisu odkazem, tak, jak se uvádějí ve svém celku.
Obecné postupy
Ve většině následujících příkladů byly používané určité postupy které jsou pro jednoduchost dále shrnuty v odstavci obecných postupů.
Obecný postup A: SPPS modelových peptidů g Rinkovy amidmethylbenzhydrylaminové pryskyřice (MBHA) (0,55 mmol/g) byl ponechán nabobtnat 1,5 h v N-methylpyrrolidonu (NMP) v reakční nádobě opatřené dnem ze sintrovaného skla a umístěné na třepačce. Ochranná skupina Fmoc byla odstraněna 20% piperidinem v NMP (dvakrát 15 min, vždy 8 ml). Po promytá NMP (5 x, 8 ml, 2 min) byla odstranění Fmoc monitorováno Kaiserovým testem.
Vazebný cyklus byl prováděn s Fmoc AA nebo Fmoc N-Me AA nebo Fmoc-stavební jednotkou (3 ekvivalenty) PyBrOP (3 ekvivalenty) diizopropylethylamin (DIEA) (6 ekvivalentů) v NMP (8 ml) 1 h při pokojové teplotě. Ukončení reakce bylo monitorováno Kaiserovým testem a rozpouštědlo bylo odstraněno filtrací. Pryskyřice byla promyta NMP (5 x, 8 ml, 2 min). Ochranná skupina Fmoc byla odstraněna jako výše. Vazba Fmoc AA nebo Fmoc N-Me AA nebo Fmocstavební jednotky na AA-pryskyřici byla prováděna jak bylo popsáno výše s použitím PyBrOP jako vazebného činidla. Vazba Fmoc AA nebo Fmoc N-Me AA nebo Fmoc-vazebné jednotky na N-Me nebo vazebnou jednotku-pryskyřice byla prováděna podle postupu popsaného jako obecný postup B. Prodlužování peptidu bylo prováděno opakováním odstraňování ochranné skupiny Fmoc a vazebného cyklu popsaného výše. Konečné odstranění ochranné skupiny Fmoc bylo následováno promytím (NMP 5 x 8 ml, 2 min, a dichlormethan (DMC) 3 x 8 ml, 2 min).
-7CZ 296014 B6
Peptidy lová pryskyřice byla sušena ve vakuu. Rychlé odštěpení bylo prováděno tak, že malé množství peptidylové pryskyřice bylo zpracováno použitím 95% kyseliny trifluoroctové (TFA) s obsahem 1 % triizopropylsilanu (TIS) a 4 % H2O. Rozpouštědla byla odstraněna v proudu dusíku a zbytek byl vložen do směsi voda : acetonitril (ACN s obsahem 0,1 % TFA). Po filtraci byl roztok nastříknut na HPLC a/nebo do hmotnostního spektrometru.
Obecný postup B: Vazba sloučenin Fmoc-AA na AA peptidylovou pryskyřici a na N-alkylovanou AA pryskyřici použitím BTC
Fmoc AA nebo Fmoc N-Me AA nebo Fmoc-stavební jednotka (5 ekv., 0,275 mmol) a BTC (1,65 ekv., 0,09 mmol) byly rozpuštěny buď v tetrahydrofuranu (THF), dioxanu, diglymu, nebo v 1,3-dichlorpropanu za získání 0,15M roztoku, do kterého byl přidán 2,4,6-kolidin (14 ekv., 0,75 mmol) za získání bílé suspenze. Tato suspenze byla vlita do N-Me AA nebo stavební jednotky-peptidyl-pryskyřice předem promyté vhodným rozpouštědlem. Směs byla protřepávána při 50 °C 1 h a zfiltrována. Peptidylová pryskyřice byla promyta DCM, ponechána nabobtnat pomocí vhodného reakčního rozpouštědla a vazebná reakce byla ještě jednou opakována. V případech, kdy byla vazebná reakce prováděna s Fmoc-AA na AA peptidylovou pryskyřici, byly použity pouze 3 ekv. sloučenin Fmoc-AA, 1 ekv. BTC a 8 ekv. 2,4,6-kolidinu v dioxanu při pokojové teplotě po dobu 1 h.
Obecný postup C: Vazba Fmoc AA nebo N-Me AA nebo vazebných jednotek na funkcionalizovaný pevný nosič
Fmoc AA nebo Fmoc NMeAA nebo Fmoc-stavební jednotka ve formě chloridu byly připraveny in sítu jak bylo popsáno v postupu B. Suspenze v dioxanu byla vlita na předaktivované sklo nebo na hydroxymethylovaný polystyren. Směs byla třepána při 50 °C 1 h a zfiltrována. Derivatizovaný nosič byl promyt DCM. Stupeň derivatizace byl určen Fmoc piperidinovou metodou.
Obecný postup D: Derivace amino- nebo hydroxypeptidylové pryskyřice
Kyseliny jako je 1,2,3,4-tetra-O-acetylglukoronová kyselina, diethylentriaminpentaoctová kyselina (DTPA), tetraazocyklo-dekantetraoctová kyselina (DOTA) nebo parahydroxyfenylpropionová kyselina (HPPA) byly převedeny na odpovídající chloridy kyselin použitím BTC, jak bylo popsáno v postupu B. Suspenze byla vlita do amino- nebo hydroxypeptidylové pryskyřice a zahřívána 1 h při 50 °C. Po zfiltrování a promytí byla derivatizovaná peptidylová pryskyřice štěpena a charakterizována jak se popisuje v postupech A, G a H.
Obecný postup E: SPPS peptidů cyklizovaných v kostře - cyklizace a štěpení
Peptidylové pryskyřice obsahující dvě vazebné jednotky byly syntetizovány použitím obecných postupů A & B. Ochranné skupiny Allyl/Alloc byly odstraněny reakcí s tetrakis(trifenylfosfin)paladiem, 5% kyselinou octovou a 2,5% N-methylmorfolinem v DCM v atmosféře argonu po dobu 1,5 h při pokojové teplotě. Peptidová pryskyřice byla promyta chloroformem a potom NMP. Cyklizace byla prováděna v NMP s PyBOP (3 ekvivalenty) a DIEA (6 ekvivalentů) 1 h při pokojové teplotě. Po promytí NMP byla cyklizace opakována. Peptid cyklický v kostře byl zbaven ochranných skupin a odštěpen z pryskyřice působením 10 ml směsi TFA 94 %, voda 2,5 %, TIS 1 % a ethandithiol 2,5 % při 0 °C v atmosféře argonu 0,5 hod a při pokojové teplotě 1 až 3 h. Pryskyřice byla odstraněna filtrací a promyta dalším množstvím TFA, spojené roztoky byly odpařeny proudem dusíku za získání oleje, který po zpracování chladným etherem (40 ml) ztuhnul. Ether byl odstraněn po centrifugaci a pevná látka byla sušena ve vysokém vakuu přes noc za získání surového peptidů.
Obecný postup F: Cyklizace peptidů obsahujících dvě N-stavební jednotky použitím BTC
Peptidylové pryskyřice s obsahem dvou N-stavebních jednotek byly syntetizovány obecnými postupy A, B a E. Cyklizace byla prováděna v dioxanu s BTC (0,33 ekv.) při pokojové teplotě
-8CZ 296014 B6
h. Chemické postupy a charakterizace byly prováděny podle popisu v obecných postupech E, G aH.
Obecný postup G: Analýza surových peptidů HPLC
Vzorek surových peptidů byl rozpuštěn v rozpouštědle A (voda + 0,1% TFA) a nastříknut do přístroje HPLC (kolona Cl8 250 x 4 mm, průtok 1 ml/min). Jako eluent byla použita rozpouštědla A a B (ACN, 0,1% TFA). Hydrofobní peptidy byly eluovány použitím lineárního gradientu od 90 % do 10 % A v průběhu 35 min. Hydrofílní peptidy byly eluovány použitím lineárního gradientu od 100 % do 10 % A v průběhu 35 min. Peptidy byly detekovány online UV detekto1 o rem nastaveným na 214 nm.
Obecný postup H: Analýza peptidů hmotnostní spektrometrií
Surové peptidy nebo frakce jímané z HPLC byly analyzovány hmotnostním spektrometrem s kvadrupólovým analyzátorem nebo hmotnostním spektrometrem s iontovou pastí.
Vynález bude nyní blíže popsán na příkladech týkajících se konkrétních peptidů a peptidomimetických sloučenin. Tyto příklady nemají být považovány za omezující a předpokládá se, že vynález není omezen rozsahem příkladů, ale rozsahem nároků následujících po popisu.
Příklady provedení vynálezu
Chloridy karboxylových kyselin se nejpohodlněji připravují, jestliže reaguje BTC s karboxylovými kyselinami v rozpouštědle, které je vzhledem k BTC inertní, při teplotách v rozmezí mírně 25 nad pokojovou teplotou až do teploty varu pod zpětným chladičem, s výhodou v přítomnosti
DMF nebo terciárních aminů jako katalyzátorů. Je důležité, že použité rozpouštědlo má být inertní vzhledem k BTC, aby bylo možno dosáhnout požadovaných výsledků syntézy.
S ohledem na tyto předpoklady a na skutečnost, že v případě předem připravených chloridů slou30 cenin Fmoc-AA byly nejlepší konverze získány zahříváním vNMP, prováděli přihlašovatelé předběžné studie s BTC za následujících podmínek: sloučeniny Fmoc-AA (3 ekv.) a BTC (1,2 ekv.) reagovaly vNMP a potom byl přidán DIEA (12 ekv.). Po půlhodině při pokojové teplotě byly aktivované AA přilévány k peptidové pryskyřici, která byla ponechána nabobtnat při 65 °C 1 h. Dvojí vazba za těchto podmínek poskytla požadované peptidy, ale se ztrátou stereo35 chemického uspořádání. Změna báze na slabší stericky bráněný 2,4,6-kolidin nezlepšila významným způsobem stereochemickou integritu vazby, jak je ukázáno v tabulce 1.
Závěrem je možno uvést, že i když je rozpouštědlo NMP velmi účinné při obecných postupech syntézy peptidů na pevné fázi, jak je v oboru dobře známo, není vhodným reakčním činidlem pro 40 vazby zprostředkované BTC.
-9CZ 296014 B6
Tabulka 1: Shrnutí obtížně proveditelných reakcí s použitím BTC/NMP při 65
| Poměr isomerů (c) | 0> v“ | v- | CO | to | a> | | 1:20 | co V“ | X— Φ E o j# c Φ x? | jeden isomer | jeden isomer | |
| . 'p -Q cc 3 | T~ ¢0 a“ CM + CM N“ 0' CM | CM to CN ·+ O ’Τ CM | IO CD Ν' r~ + co CN •sr | CO co co + a> <53 CN | CN N b-? +· O Nh? | CO <D T~ + •^r o co T“* | σ> o. o (N 4· O N> σΓ τ— | o? Ν- έο V* | N> co G) V“ | CN N* 0) V“ | |
| M. h. produktu | O c Φ NI Φ «J c | CO co co” 00 to | CO 00 co CD | co CD | σΓ CN mt | 0) N | Τ’ N-T co N | V tn o to | Τ’’ N~ Ν' | CO r~ CD UO | Γ-’ LD ΙΛ |
| o c Φ s o CL >x > | xr U) co ID | r- co CO CD | <3> CN CN CD -q- | co co 04 | CN CO o o Ν' | Ν’ CO cd' ID N“ | V CO o CD | CD CO o h’Τ | CD c? o o to | σ> co cď tO LO | |
| 0 N _ rt) g o | O o | O o. v- | a o T— | O o | O o | O O | ID σ> | o 0) | o CN | o CM | |
| Produkt | e» X Z 1 U. x: H co Z ro < 1 co > 1 o u. < | CN X z X— XT H có Z as < f Φ x: CL 1 O) < | <N X 1 k~ JC H* 1 CO O a < > φ JZ CL. | fN X z 1 j5 1 CO O < π Φ -J | X Z » i— co 2 03 > t Φ a_ | ÍN X z 1 u. x: H co 2 φ > 1 zs Φ -J | ΓΝ x z 4 U x: H* 1 CO O 3 Φ -J 1 Φ x: a. | 04 X z 1 Ur JZ H 4 CO o z; Φ 4 ZF ai _j | Ol X 1 ČL 1». CO Z C0 > ♦ Φ x: a. | Ο» X z 1 CL |— l CO Z Φ > i Φ u | |
| H .? | co CM | co CM | O CM CD | o <N <o | V CM N- | r~ CN NÝ | ID ’Ν cd | to T. o | O) xT T~ | 03 xf | |
| Substrát | c E 1 JZ H co Z co < | ,c £ 4 U. x: CO Z co < | a E JZ H· 1 CO o < | c £ 4 k_ X H 4 CO O «j < | c E 4 V. JZ H <6 «j > | Je e .£ <1 X 1— t co o as > | c E u. x: H 4 CO Z3 Φ _J | tz ix 1 u x: 1 CO ZJ Φ -J | íZ ix t IX u. 1- < CO Z > | .Ξ E 1 d. u. H 1 CO Z C3 > | |
| No. | v- | CN | co | «φ | tn | <o | N* | 00 | CJ> | O r— |
V případech 1 - 2 byl jako báze použit DIEA. Retenční časy (R.T.) substrátu se uvádějí pro Frrioc-chráněný derivát Experimenty 3-10 byly prováděny v MPS formátu v 5,5 mM měřítku s kolidinem jako bází.
(c) Založeno na integraci plochy pod křivkou získané analýzou HPLC.
(b) Analyzováno obecným postupem G pro hydrofobní peptidy.
(c) Isomery mají stejnou molekulovou hmotnost, ale různé retenční časy.
-10CZ 296014 B6
Schéma 2
Navrhovaný mechanizmus pro vazbu v NMP působením BTC
(COj + CIjC-0)
Fmoc-(D.L)AA-BU-peptidyl-pryskyřice
Pro vysvětlení racemizace materiálů Fmoc AA v průběhu jejich účinné vazby zprostředkované BTC na materiál stavební jednotka-peptidyl-pryskyřice v NMP navrhují autoři přihlášky mechanizmus (schéma 2), při kterém nadbytek NMP reaguje sBTC za vytvoření sloučeniny 1, která ztrátou fosgenu a CO2 poskytla meziprodukt 2 Vilsmayerova typu. Přídavek opticky čisté FmocAA k chlorimiovému iontu 2 a odstranění chloridu poskytnou aktivní ester 3, který se váže na peptidovou pryskyřici. Na druhé straně, N-alkoxykarbonylem chráněný aminoaktivní ester 3 přechází podle dosavadních znalostí za bazické katalýzy na oxazolon 4, který snadno racemizuje. Další experimenty se stericky bráněnými polárními aminokyselinami nesoucími chráněné postranní řetězce, poskytly nedostatečné výsledky, jak je ukázáno v tabulce 2.
Tabulka 2: Souhrn experimentů s použitím BTC/NMP s polárními aminokyselinami
| No. | Fmoc-A A | Substrát | % konverze | M. h. produktu | R.T. min (d) | |
| vypočt. | nalez | |||||
| 11 | Arg(Pmc) | AlaC3-Thr-Rink | 30(a)-100(b) | 471,23 | 472,3 | 8,07 |
| 12 | Glu(tBu) | LeuC3-Thr-Rink | 10(a)-50(b) | 486,32 | 487,0 | 14,60 |
| 13 | Glu(tBu) | AlaC3-Thr-Rink | 30{c) | 444,27 | 445,8 | 9,50 |
| 14 | Gln(Trt) | AlaC3-Thr-Rink | 30 (C) | 443,28 | 444,9 | 8,52 |
| 15 | Met | AlaC3-Thr-Rink | 20(c) | 446,27 | 447,9 | 13,08 |
| 16 | Trp(Boc) | AlaC3-Thr-Rink | 80 (C) | 501,3 | 502,8 | 16,22 |
(a) Po 1 h při 75 °C (b) Po třech vazebných cyklech při 65 °C (c) Po dvou vazebných cyklech při 65 °C (d) Analyzováno obecným postupem G pro hydrofobní peptidy
-11 CZ 296014 B6
Celkový nedostatek těchto aminokyselin a velké množství jiných polárních a aromatických sloučenin Fmoc AA pro vazbu na materiály stavební jednotky-peptidyl-pryskyřice s většími zábranami, a také skutečnost, že v případě Fmoc-Asn(Trt) a Fmoc-His(Trt) nebyla pozorována žádná reakce, i v případě materiálu Ala-vazebná jednotka-peptidyl-pryskyřice v NMP, způsobily nut5 nost změny na inertní rozpouštědlo pro reakci. Dvojí vazba Fmoc-Val a Fmoc-Ile na Να-(ωkarba!lyloxypropyl)-Ala (označovaný AlaC3) a N“-(ro-karballyloxypropyl)-Leu (označovaný LeuC3)-peptidylové pryskyřice s použitím BTC v THF po dobu pouze 1 h při 50 °C ovšem poskytla požadovaný peptid s konverzí 100% a bez detekovatelné racemizace. Tyto výsledky přiměly autory vynálezu testovat celou řadu dalších syntetických reakcí, které zahrnují vazbu ío všech proteinogenních Fmoc-AA (s výjimkou Gly) na celou řadu materiálů vazebné jednotkypeptid-pryskyřice a také na N-Me-Ala a N-Me-Phe-peptidylové pryskyřice, kdy se mění velikost a pořadí peptidylové části. Výsledky jsou ukázány v tabulce 3 a v tabulce 4.
Tabulka 3: Souhrn obtížně proveditelných vazebných reakcí s použitím BTC/THF, dioxanu, diglymu nebo DCP
| No. | Fmoc-AA | Substrát | % konverze | H. h. produktu | R.T. min (d) | |
| vypočt. | nalez | |||||
| 17 | Ala | AiaN3-Rink | 100 A,B | 502,9 A 583,4 B | 503,9 A 584,4 8 | 9,45 AX 11,65 BY |
| 18 | Ala | AlaC2-Rink | 100 | 554,1 | 555,1 | 13,92 Y |
| 19 | Ala | AlaC3-Rink | 100 A,B | 682.4 A 633.5 B | 683.4 A 634.5 8 | 14,13 AY 13,37 Bv |
| 20 | Ala | AlaN2-Rink | 100 A.B | 569,3 A 488,16 8 | 570,3 A 489,2 8 | 11,01 AY 9,79 8X |
| 21 | Ala | LeuN4-Ser-Rink | 90 | 443,15 | 444,9 | 23,30 x |
| 22 | D-Ala | AlaN2-peptid-Rink | 100 | 682,4 | 683,4 | 14,13 Y |
| 23 | Arg(Pmc) | PheC2-Thr-Rink | 94 | 533,33 | 534,3 | 24,38 Y |
| 24 | Asp(tBu) | LysC3-Thr-Rink | 100 | 487,31 | 488,9 | 15,67 Y |
| 25 | Cys(Trt) | ValC3-Thr~Rink | 100 | 446,26 | 447,1 | 26,39 Y |
| 26 | Glu(tBu) | LysC3-Thr-Rink | 70 | 501,33 | 502,2 | 16,81 Y |
| 27 | Gln(Trt) | PheC2-Thr-Rink | 100 | 505,28 | 506,2 | 28,97 Y |
| 28 | Gln(Trt) | ValC3-Thr-Rink | 82 | 471,2 | 472,2 | 22,95 Y |
| 29 | Gln(Trt) | LeuN4-Ser-Rink | 100 | 500,9 | 501,9 | 12,34 x |
| 30 | D-Leu | LeuN4-Ser-Rink | 100 | 486,0 | 487,0 | 17,70 x |
| 31 | Leu | PheN2-Gln-Rink | 100 | 1081,7 | 1082,7 | 17,31 x |
| 32 | Leu | LysC3-Thr-Rink | 100 | 485,37 | 486,2 | 22,43 Y |
| 33 | Ile | LeuC3-Thr-Rink | 80 | 470,36 | 472,0 | 18,97 x |
-12CL 296014 B6
| No. | Fmoc-AA | Substrát | % konverze | H. h. produktu | R.T. min (d) | |
| vypočt | nalez | |||||
| 34 | Lys(Boc) | LeuN4-Ser-Rink | 100 | 501,0 | 502,0 | 11,26 x |
| 35 | Lys(Boc) | PheC2-Thr-Rink | 100 | 505,32 | 506,1 | 24,53 Y |
| 36 | Lys(Boc) | ValC3-Thr-Rink | 56 | 472,2 | 473,0 | 22,12 Y |
| 37 | Lys(Boc) | PheN2-Rink | 100 | 1002,4 | 1003,4 | 23,21 x |
| 38 | D-Lys(Boc) | PheN2-Rink | 100 | 1002,4 | 1003,4 | 23,02 x |
| 39 | D-Lys(Boc) | PheN2-Rink | 100 | 968,4 | 969,5 | 22,71 * |
| 40 | Met | LeuN4-Ser-Rink | 100 | 503,15 | 504,9 | 16,08 x |
| 41 | Phe | AlaC3-peptid-Rink | 100 | 1716,0 | 1716,8 | 14,76 x |
| 42 | Phe | AlaN2-Rink | 100 | 678,49 | 679,9 | 20,45 x |
| 43 | Phe | N-MePhe-N- MePhe-Rink | 100 | 528,2 | 529,9 | 22,06 Y |
| 44 | PheC1 | N-Me-Ala-Ala- -AlaN2-Rink | 100 | 616,8 | 617,8 | 16,25 Y |
| 45 | PheC2 | N-MeAla-Ala- AlaN3-Rink | 100 | 502,9 | 503,9 | 9,45 x |
| 46 | PheC2 | N-MeAla-Ala- AlaN2-RÍnk | 100 | 488,2 | 489,2 | 9,79 x |
| 47 | N-MePhe | N-MePheRink | 100 | 528,2 | 529,9 | 22,06 Y |
| 48 | N-MePhe | N-MePhe-N- MePhe-Rink | 100 | 500,18 | 501,2 | 18,52 x |
| 49 | Pro | ValC3-Thr-Rink | 100 | 440,31 | 441,2 | 25,95 Y |
| 50 | Ser(tBu) | LysC3-Thr-Rink | 100 | 459,32 | 460,1 | 15,61 Y |
| 51 | Thr(tBu) | AlaC2-peptid-Rink | 100 | 1587,4 | 1588,7 | 19,25 Y |
| 52 | Thr(tBu) | AlaC3-peptid-Rink | 100 | 1601,4 | 1602,7 | 19,67 Y |
| 53 | Thr(tBu) | ValC3-Thr-Rink | 53 | 444,3 | 445,1 | 24,35 Y |
| 54 | Trp(tBoc) | ValN3-Trp-Rink | 100 | 629,38 | 630,2 | 20,01 x |
-13CZ 296014 B6
| No. | Fmoc-AA | Substrát | % konverze | M. h. produktu | R.T. min (d) | |
| vypočt. | nalez | |||||
| 55 | Trp(Boc) | ValC3-Thr-Rink | 100 | 529,33 | 530,1 | 17,80* |
| 56 | Tyr(tBu) | LeuN3-Amb-Ala- -Arg-Rink | 100 | 1322,6 | 1323,6 | 19,05 * |
| 57 | D-Tyr(tBu) | AlaN3-Rink | 100 | 1716,8 | 1716,8 | 14,76 x |
| 58 | Val | AlaC3-Thr-Rink | 100 | 414,29 | 416,0 | 14,93 x |
| 59 | Val | LysC3-Thr-Rink | 92 | 471,35 | 472,1 | 19,49 Y |
| 60 | Val | ValC3-Thr-Rink | 66 | 442,32 | 443,1 | 14,94 * |
| 61 | PheC3 | Thr-Rink | 100 | 391,23 | 392,9 | 10,64 x |
Údaje molekulové hmotnosti produktu
V případech 17, 18, 19, 20, 22, 31, 37, 44, 45, 46, 57 odpovídají údaje cyklickým peptidům.
V případech 42, 51, 52, 56 odpovídají údaje peptidům chráněným Allyl/Alloc.
V případech 22, 41, 48, 51, 52 odpovídají údaje lineárním peptidům.
V případech 43, 47 odpovídají údaje Ac-N-tripeptidu.
Peptidová sekvence
7a) PheC2-NMeAla-Ala-AlaN3-NH2,
7b) GlyC 1 -Ala-Lys-(D)Ala-Ala-AlaN3-NH2,
18) Ala-Ala-Lys-(D)Ala-Ala-AlaC2-NH2,
19A) (D)Ala-AlaN2-Ala-Lys-(D)Ala-Ala-AlaC3-NH2,
9b) AlaN2-Ala-Lys-(D)Ala-Ala-AlaC3-NH2,
20A) GlyC l-Ala-Lys-(D)Ala-Ala-AlaN2-NH2,
20b) PheC2-N-MeAla-Ala-AlaN2-NH2,
22) (D)Ala-AlaN2-Ala-Lys-(D)Ala-Ala-AlaC3-NH2,
31) TrpC3-Ser-Glu-Tyr-Leu-PheN2-Gln-NH2,
37) PheCl-Phe-Phe-(D)Trp-(L)Lys-PheN2-NH2,
8) PheC 1 -Phe-Phe-(D)Trp-(D)Lys-PheN2-NH2,
39) PheCl-Phe-Lleu-(D)Trp-(D)Lys-PheN2-NH2,
41) Biotin-Trp-Arg-Lys(D)Arg-Phe-AlaC3-Leu-Arg-(D)Tyr-AlaN3-NH2,
42) PheCl-Ala-Phe-AlaN2-NH2,
47) Phe-NMePhe-NMePhe-NH2,
48) NMePhe-NMePhe-NMePhe-NH2,
51) Thr-AlaC2-Ser-Glu-Asn-His-Leu-Arg-His-Ala-LeuN3-Ser-NH2,
52) Thr-AlaC3-Ser-Glu-Asn-His-Leu-Arg-His-Ala-LeuN3-Ser-NH2,
-14CZ 296014 B6
56) TrpC3-Ser-Glu-Tyr-LeuN3-Amb-Ala-Arg-NH2,
57) Biotin-Trp-Arg-Lys(D)Arg-Phe-AlaC3-Leu-Arg-(D)Tyr-AlaN3-NH2.
Metody analýzy HPLC x Analyzováno obecným postupem G pro hydrofobní peptidy Y Analyzováno obecným postupem G pro hydrofílní peptidy
Jak je vidět v tabulce 3, konverze většiny vazebných reakcí byla kvantitativní bez ohledu na vstupující látky Fmoc-AA, strukturu vazebné jednotky, sekvenci a velikost peptidylové části.
V následujícím popisu označují tučná čísla v závorkách čísla příkladu podle tabulky 3.
Tři peptidy (26, 36 a 53) poskytly konverzi nižší než 70 %. Je třeba poznamenat, že tyto vazebné reakce nebyly optimalizovány.
Na rozdíl od metody používající předem vytvořené chloridy kyselin, kde největší problém spočíval v labilitě ochranných skupin na vedlejších řetězcích, využití metod podle předkládaného vynálezu pro uskutečnění vazebné reakce následujících sloučenin Fmoc-AA poskytlo v podstatě úplnou konverzi: Arg(Pmc) (23), Asp(t-Bu) (24), Cys(Trt) (25), Lys(Boc) (34, 35), Ser(t-Bu) (50), Thr(t-Bu) (51, 52), Trp(Boc) (54) a Tyr(t-Bu) (56, 57). Protože ochrannou skupinu vedlejšího řetězce Boc je možno snadno odstranit kyselinami, autoři vynálezu monitorovali její stabilitu Keiserovým testem v průběhu BTC-zprostředkovanou vazebnou reakcí Fmoc-Lys(Boc) (34, 39). Při všech těchto reakcích byl Keiserův test negativní a požadované peptidy cyklické v kostře byly získány ve vynikajících výtěžcích, aniž by byly v surovém získaném materiálu přítomny vedlejší produkty. Z těchto výsledků je možno vyvodit závěr, že vazba s použitím BTC za výše popsaných podmínek neodstraňuje citlivé ochranné skupiny vedlejšího řetězce normálně používané při syntéze peptidů na pevné fázi využívající chemických reakcí typu Fmoc.
Autoři vynálezu ukázali, že většina chloridů sloučenin Fmoc-AA v průběhu vazebných reakcí na materiál vazebná jednotka-peptidyl-pryskyřice v různých rozpouštědlech s nebo bez použití kolidinu jako báze neracemizují. Zjištění stupně racemizace v průběhu vazebných reakcí zprostředkovaných BTC v rozpouštědle inertním vůči této reakci je založeno na následujících výsledcích: (a) jak je ukázáno v tabulce 1, jestliže dojde k racemizaci, na HPLC se naleznou dva vrcholy s identickou hmotností. V případě všech peptidů uvedených v tabulce 3, včetně peptidů, které poskytly nízké výtěžky (21, 23, 26, 28, 33, 36, 53, 58, 59), měl požadovanou molekulovou hmotnost pouze hlavní vrchol, (b) Vazebná reakce Fmoc-Lys(Boc) a Fmoc-D-Lys(Boc) na materiál PheN2 vazebná jednotka-pryskyřice, další uspořádání peptidů, odstranění ochranných skupin Allyl/Alloc, cyklizace a odstranění z pryskyřice poskytovaly dva diastereomemí peptidy cyklické v kostře (37, 38) s kvantitativní konverzí. Profil HPLC každého jednotlivého surového diastereomeru ukázal jediný oddělený vrchol se stejnou hmotností a rozdílnými retenčními časy. Navíc poskytl společný nástřik na kapilární elektroforézu těchto dvou diastereomerů 37 a 38 dva rozdílné vrcholy. Nepřítomnost racemizace v průběhu vazebné reakce chloridů Fmoc-AA na materiál stavební jednotka-peptidyl-pryskyřice je způsobena vysokou reaktivitu chloridů kyselin vůči nukleofilní substituci acylu ve srovnání s pomalejší tvorbou oxazolonu. Protože vazebná reakce zprostředkovává BTC v rozpouštědlech inertních vůči této reakci probíhá přes tvorbu chloridu kyseliny in šitu, není překvapující, že taková vazebná reakce obecně probíhá bez racemizace.
Aby bylo možno nalézt omezení BTC týkající se podpory obtížně proveditelných vazebných reakcí, autoři vynálezu syntetizovali peptidy 44 - 46, ve kterých byly různé vazebné jednotky Phe navázány na materiál N-Me-Ala-peptidyl-pryskyřice. Navíc byla prováděna vazebná reakce Fmoc-Phe v peptidu 43 na materiál N-Me-Phe-N-Me-Phe-pryskyřice a v případě peptidu 48 byla prováděna vazebná reakce Fmoc-N-Me-Phe na materiál N-Me-Phe-N-Me-Phe-pryskyřice. Všechny tyto opakované vazby probíhaly v krátkém čase při kvantitativní konverzi, což vede k závěru, že BTC je možno vhodně zvolit jako reakční činidlo pro usnadnění obtížně proveditelných vazebných reakcí u SPPS.
-15CZ 296014 B6
U většiny peptidů uvedených v tabulce 3 byla reakce prováděna na materiálu di-peptidyl-vazebná jednotka-pryskyřice. Aby bylo možno testovat schopnost BTC uskutečňovat vazebné reakce na stavební jednotku navázanou v jiných polohách podél peptidového řetězce, byla prováděna vazebná reakce v polohách 4 - 6 a 11 (peptidy 56, 41, 22, 51 a 52). Tabulka 4 ukazuje přehled peptidů syntetizovaných vazebnou reakcí BTC a uvádí korelace typu vstupující vazebné jednotky s polohou vazby podél peptidového řetězce. Zatímco vazebné reakce na polohách 4 až 6 probíhaly za normálních podmínek, vazba k poloze 11 vyžadovala pro dosažení kvantitativní konverze šesti cyklů.
| v. 03 CO | ||||||||||||||
| Φ | CM | |||||||||||||
| CM ω φ xí CL | co | |||||||||||||
| τΟ Φ XX CL | ||||||||||||||
| CD JZ Ol | to | CO | - | |||||||||||
| en CL | - | T- | ||||||||||||
| o | ||||||||||||||
| cn 3» | CN | |||||||||||||
| c: O | ca | CN | CN | |||||||||||
| ro > | CM | Y— | CN | CN | ||||||||||
| o <D | <N | CO | ||||||||||||
| _Φ | ca | -Ct T- | CN | |||||||||||
| Z 03 D | CM | |||||||||||||
| w < a | CO | |||||||||||||
| ca < | ΜΓ·* | CM | CO | CN | ||||||||||
| jednotka | co z ca < | CN O ca < | co O ca < | MeJ o ca < | to O ca < | CN Z ca < | CM Z Φ JZ | O φ -C £L | CN O Φ 4Z Cl | co Z Φ jC a. | Z Z Φ —1 | CO Z a φ | CO O Z Φ -J |
-16CZ 296014 B6
Tabuika 4 pokračování
| Aminokyselina navazovaná na stavební jednotku | 1 Ser | CN | |||||||||
| Met 1 | |||||||||||
| CN o <u xz 0. | co | ||||||||||
| ΤΟ Φ JZ CL | co | ||||||||||
| Φ JZ a. | co | CN | CN | - | |||||||
| Phg | |||||||||||
| DLys | |||||||||||
| Lys | CN | ||||||||||
| c 0 | CN | CN | «3 U> | ||||||||
| Val | CN | CN | |||||||||
| Leu | CN | ||||||||||
| 0) | |||||||||||
| Z3 Φ u Q | |||||||||||
| DAla | |||||||||||
| Ala | CN | ||||||||||
| Stavební jednotka | LysN3 | LysC3 | Xt O <λ | CO 2 CO > | ValN3 | Φ x: CL Φ 2 z | NMeAla | cn O Sk 0 | NMeGly | CN Z a. u. i— Q |
- 17CZ 296014 B6
Tabulka 4: pokračování
| Aminokyselina navazovaná na stavební jednotku | GA8A | |||||||||||||
| 0 Φ S Z | o | - | ||||||||||||
| CN O 2» 0 | ..... | b- | 0» | |||||||||||
| zr 0 | X—«* m co | |||||||||||||
| ω «·*» o | •v* | |||||||||||||
| Q. u. | CN | |||||||||||||
| o l0. | σ> | |||||||||||||
| U. H Q | T— | |||||||||||||
| u. >» H | ||||||||||||||
| 4> XX CL 4> 2 Z | ||||||||||||||
| l·»» JZ H | CN co T— | ÍO •v r~ | T~* | |||||||||||
| </> X | * | |||||||||||||
| o tft < | ||||||||||||||
| Cl ΙΛ < | CN | - | ||||||||||||
| E? <ť | CM | |||||||||||||
| Stavební jednotka | co Z co < | CN O CO < | co 0 co < | <r O CO < | m O CO < | 04 Z 03 < | CN Z Φ je a. | O Φ CL | CN O <Ď -C CL | <0 Z <e sz OL | Nt Z □ a> -I | co Z ZS Φ -J | <O O ZJ 0) |
-18CZ 296014 B6
Tabulka 4: pokračování
| i 1 Aminokyselina navazovaná na stavební jednotku | 1 i GABA 1 | ||||||||||
| 0 © Z | X. <0 cm’ | ||||||||||
| CN O □ | |||||||||||
| 3 O | CN | ||||||||||
| w >· ϋ | CN | ||||||||||
| e t- | CN | CN | |||||||||
| o uCL | CN | ||||||||||
| k» >% H Q | |||||||||||
| u. >> | |||||||||||
| Φ x: CL ω 2 | 04 CO | T“ | |||||||||
| u x: | * * CM | CN | |||||||||
| ω X | |||||||||||
| c cn < | uC | ||||||||||
| CL <r> < | CN | ||||||||||
| CD u< | % | ||||||||||
| Stavební jednotka | CO Z w >» | CO O <Λ | O </> | CO O ro > | CO Z > | Φ -C £L Φ s Z | < Φ 2 Z | CO O □ | >> 0 Φ 2 Z | CN Z CL l— H Q |
-19CZ 296014 B6
Poznámky k tabulce 4
Čísla v tabulce ukazují polohu stavební jednotky (od C-konce), ke které byla AA navázána s >80 % konverzí, založeno na HPLC a potvrzeno MS.
* Dvojí vazba s 5 ekv. AA, 1,5 ekv. BTC (0,33 ekv. na AA), 14 ekv. kolidinu v inertním rozpouštědle (0,14M) při 50 °C 1 h ** Pouze 20% konverze s epimerizací nr Reakce neprobíhá
() Počet vazebných cyklů # 5 až 10% *** 50 o/o a Předaktivace BTSA b Předaktivace materiálu vazebná jednotka-peptidylová pryskyřice pomocí BTSA, 4-7 vazebných cyklů a přídavek AgCN
Použití BTC pro vazebné reakce Fmoc-His(Trt) a FmocAsn(Trt) bylo neúspěšné. Vazebná reakce Fmoc-His(Trt) poskytla pouze 25% konverzi s celkovou racemizací, a v případě FmocAsn(Trt) reakce vůbec neprobíhala.
Příklad 62: Syntéza bicyklického peptidu PTR 3205
Dva gramy Rinkova amidu (pryskyřice MBHA, NOVA, 0,46 mmol/gram) byly ponechány nabobtnat přes noc v NMP v reaktoru opatřeném dnem ze sintrovaného skla a připevněném na třepačku. Fmoc byl z pryskyřice odstraněn s použitím 25% piperidinu v NMP (16 ml) dvakrát 15 min. Po důkladném promytí 7 x NMP (10 až 15 ml), vždy po dobu 2 minut, byla provedena vazebná reakce Phe-N3 použitím Fmoc-Phe-N3-OH (3 ekv., 2,76 mmol, 1,46 g) rozpuštěného v NMP (16 ml) a aktivovaného PyBroP (2,76 mmol, 1,28 g) a DIEA (6 ekv., 5,52 mmol, 0,95 ml) 4 min při pokojové teplotě a směs byla potom převedena do reaktoru pro uskutečnění vazebné reakce 1 h při pokojové teplotě. Po provedení reakce byla peptidová pryskyřice promyta NMP (10 až 15 ml) 7 x vždy 2 min. Ukončení reakce bylo monitorováno kvalitativním Kaiserovým testem. Odstranění Fmoc a promytí bylo prováděno výše popsaným postupem s následným promytím THF (10 až 15 ml) třikrát vždy 2 min a Fmoc-Cys(Acm)-OH (5 ekv., 4,6 mmol, 1,9 g) byl navázán na materiál stavební jednotka-peptidyl-pryskyřice s použitím bis-(trichlormethyl)karbonátu (1,65 ekv., 1,518 mmol, 0,45 g) a kolidinu (14 ekv., 12,88 mmol, 1,7 ml) v THF (30 až 35 ml, za získání směsi 0,14M) při 50 °C 1 h a tato vazebná reakce byla opakována. Zařazení Thr, Lys, (D)Trp, Phe, Cys a PheC3 bylo prováděno vazebnými cykly (monitorování kvalitativním Kaiserovým testem) použitím Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-(D)Trp(Boc)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Cys(Acm)-OH a Fmoc-PheC3-OH, přičemž v každém reakčním cyklu byla aminokyselina rozpuštěná v NMP a aktivována PyBroP a DIEA, a po vazebné reakci byla peptidová pryskyřice promyta a potom byl odstraněn Fmoc důkladným promytím NMP, jak bylo popsáno výše pro první vazebnou reakci. Po ukončení sestavení peptidu byly z materiálu peptidyl-pryskyřice odstraněny ochranné skupiny allyl/alloc za následujících podmínek: peptidylová pryskyřice byla promyta DCM (10 až 15 ml) třikrát vždy 2 min a směsí DCM-AcOH-NMM (92,5 %, 5 %, 2,5 %) třikrát 2 min. 3 g Pd(P(Ph)3)4 byly rozpuštěny ve výše uvedené směsi (80 ml) a získaná žlutá suspenze byla převedena do reaktoru a směs obsahující peptidyl-pryskyřici byla odplyněna (probubláváním argonu přes dno reaktoru ze sintrovaného skla) a potom byla důkladné třepána 2 hodiny v temnu. Materiál peptidyl-pryskyřice byl promyt DCM, CHC13 a NMP (celkem 15 x vždy 2 min). Byla provedena cyklizace použitím PyBOP (3 ekv., 2,76 mmol, 1,436 g) a DIEA (6 ekv., 5,52 mmol, 0,95 ml) v NMP (20 ml) při pokojové teplotě 1 h a druhá cyklizace přes noc za stejných podmínek. Peptidylová pryskyřice byla pro-20CZ 296014 B6 myta NMP a potom směsí DMF-voda (15 ml, 4:1) třikrát 2 min. K materiálu peptidyl-pryskyřice byl přidán roztok I2 (5 ekv., 4,6 mmol, 1,16 g) ve směsi DMF-voda (23 ml, 4:1) a směs byla třepána při pokojové teplotě 40 min pro dosažení cyklizace Cys-Cys. Peptidylová pryskyřice byla odfiltrována a důkladně promyta směsí DMF/voda, DMF, NMP, DCM, CHC13 a roztokem 5 2% kyseliny askorbové v DMF. Po konečném odstranění ochranné skupiny Fmoc a promytí jako výše a dalším promytí MeOH, s následným sušením peptidylové pryskyřice ve vakuu 20 min, byl peptid z pryskyřice odštěpen použitím 98% TFA, 2,5% TIS a 2,5% vody v celkovém objemu směsi 30 ml po dobu 30 min při 0 °C v atmosféře argonu a potom 1,5 h při pokojové teplotě. Roztok byl zfiltrován přes extrakční filtr do polypropylenové zkumavky, pryskyřice byla promyta ío 5 až 6 ml směsi a 4 až 5 ml TFA, roztok byl odpařen v proudu N2 za získání olejovitého zbytku, který působením chladného Et2O ztuhnul. Centrifugace a dekantace vrstvy Ět2O a působení dalším podílem chladného Et2O s následnou centrifugací, dekantací a sušením bílé pevné látky ve vakuu přes noc poskytlo surovou látku PTR 3205 (0,388 g) s následující strukturou:
(CH2)2---------------CO—NH-----------------(CH2)2-----------co—nn------------(CH^, (D)Phe-— Gly ~ Phe“Cys—Phe —(D)Trp —Lys—Thr — Cys — Phe—Lys ”NH2
Příklad 63: Syntéza tricyklického peptidů PTR 3227
PTR 3227 je tricyklický peptid cyklický v kostře s následující strukturou:
---c0-----------------------------HN--
V této sloučenině propojuje jeden můstek stavební jednotku (Gly-C2) s postranním řetězcem zbytku Lys, druhý můstek propojuje dvě stavební jednotky (Phe-N2 a Phe-C2) a třetí je disulfidický můstek vytvořený mezi dvěma zbytky Cys. Nyní bude popsán postup syntézy tohoto analogu:
g Rinkova amidu (pryskyřice MBHA, Novabiochem, 0,46 mmol/g) byl ponechán nabobtnat 25 přes noc v NMP v reaktoru opatřeném dnem ze sintrovaného skla a připevněném na třepačku.
Fmoc byl z pryskyřice odstraněn použitím 25% piperidinu v NMP (16 ml) dvakrát 15 min. Po důkladném promytí 7x NMP (10 až 15 ml) vždy 2 min, byla provedena vazebná reakce Lys(Dde) použitím materiálu Fmoc-Lys(Dde)-OH (3 ekv., 1,38 mmol, 0,735 g) rozpuštěného v NMP (8 ml) a aktivovaného PyBroP (1,38 mmol, 0,64 g) a DIEA (6 ekv., 2,76 mmol, 0,47 ml) 30 4 min při pokojové teplotě a potom byla směs převedena do reaktoru k vazebné reakci prováděné h při pokojové teplotě. Po vazebné reakci byla peptidová pryskyřice promyta NMP (10 až ml) 7 x vždy 2 min. Ukončení reakce bylo monitorováno kvalitativním Kaiserovým testem. Odstranění Fmoc a promytí bylo prováděno s následující vazbou Fmoc-PheN2-OH (3 ekv.,
1,38 mmol, 0,71 g), jak bylo popsáno výše. Po vazebné reakci byl odstraněn Fmoc a bylo prove35 děno promytí NMP, peptidová pryskyřice byla potom promyta THF (10 až 15 ml) třikrát vždy min a byl navázán Fmoc-Cys(Acm)-OH (5 ekv., 2,3 mmol, 0,95 g) na materiál Bu-peptidylpryskyřice s použitím BTC (1,65 ekv., 0,759 mmol, 0,225 g) a kolidinu (14 ekv., 6,44 mmol, 0,85 ml) v THF (16 ml, za získání 0,14M směsi) při 50 °C 1 h. Tato obtížně proveditelná vazebná reakce byla opakována ještě jednou. Sestavení Thr, Lys, (D)Trp, Phe, Cys aPheC2 bylo
-21 CZ 296014 B6 provedeno vazebnými cykly (monitorováno kvalitativním Kaiserovým testem) s použitím FmocThr(tBu)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-(D)Trp(Boc)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Cys(Acm)-OH a Fmoc-PheC2-OH, v každém reakčním cyklu byla aminokyselina rozpuštěna v NMP a aktivována PyBroP a DIEA, po vazebné reakci byla peptidová pryskyřice promyta a Fmoc byl odstraněn s následným důkladným promytím NMP, jak bylo popsáno výše pro první vazebnou reakci. Po sestavení PheC2 byly z peptidylové pryskyřice odstraněny ochranné skupiny ally 1/alloc za následujících podmínek: peptidylová pryskyřice byla promyta DCM (10 až 15 ml) třikrát vždy 2 min, a směsí DCM-AcOH-NMM (92,5 %, 5 %, 2,5 %) třikrát vždy 2 min. Ve výše uvedené směsi (40 ml) bylo rozpuštěno 1,5 g Pd(P(Ph)3)4 a získaná žlutá suspenze byla převedena do reaktoru a směs s peptidylovou pryskyřicí byla odplyněna (probubláváním plynného argonu dnem reaktoru) a potom důkladně třepána 2 hodiny v temnu. Peptidylová pryskyřice byla promyta DCM, CHC13 a NMP (celkem 15 x vždy 2 min). Proběhla cyklizace použitím PyBOP (3 ekv., 1,38 mmol, 0,72 g) a DIEA (6 ekv., 2,76 mmol, 0,475 ml) v NMP (10 ml) při pokojové teplotě 1 h a druhá cyklizace přes noc za stejných podmínek.
Odstranění ochranných skupin Fmoc bylo provedeno jak bylo popsáno výše s následným promytím NMP, potom byla provedena vazebná reakce Fmoc-GlyC2-OH na cyklický peptid s použitím 5 ekv., Bu (2,3 mmol, 0,94 g), BCT (1,65 ekv., 0,759 mmol, 0,225 g) a kolidinu (14 ekv., 6,44 mmol, 0,85 ml) vTHF (16 ml, za získání 0,14M směsi) při 50 °C 1 h, a tento obtížně proveditelný reakční postup byl prováděn ještě jednou. Vazebná reakce (D)-Phe na dekapeptidovou pryskyřici byla provedena použitím Boc-(D)-Phe-OH (4 ekv., 1,84 mmol, 0,488 g) a PyBroP (1,84 mmol, 0,857 g) jako vazebného činidla a DIEA (8 ekv., 3,68 mmol, 0,63 ml) jako báze ve směsi DMF/DCM (1:1,8 ml) jednou po dobu 1,5 h, a potom byl proveden druhý vazebný cyklus za stejných podmínek 2 h při pokojové teplotě. Potom bylo po promytí provedeno selektivní odstranění Dde z Νε postranního řetězce Lys (v poloze 1 vzhledem k C-konci) použitím 2% hydrazinu v DMF (25 ml x 3 min x 3) při pokojové teplotě, a potom po promytí DMF a NMP byly z peptidylové pryskyřice odstraněny allylové ochranné skupiny, jak bylo popsáno výše, s použitím 0,75 g Pd(P(Ph)3)4. Peptidylová pryskyřice byla promyta CHC13, DCM a NMP a potom byla provedena cyklizace PyBOP, jak bylo popsáno výše (Kaiserův test byl negativní). Po praní směsí DMF-voda (12,5 ml, 4:1) třikrát vždy 2 min byl do peptidylové pryskyřice přidán roztok I2 (5 ekv., 2,3 mmol, 0,583 g) ve směsi DMF-voda (12,5 ml, 4:1) a směs byla třepána při pokojové teplotě 40 min pro dosažení cyklizace Cys-Cys. Peptidylová pryskyřice byla odfiltrována a důkladně promyta směsí DMF/voda, DMF, NMP, DCM, CHC13 a také 2% kyselinou askorbovou v DMF a potom samotným DMF. Po promytí DCM a MeOH s následným sušením peptidylové pryskyřice ve vakuu po dobu 20 min byl peptid z pryskyřice odštěpen použitím 95% TFA, 2,5% TIS a 2,5 %vvody v celkovém množství směsi 15 ml po dobu 30 min při 0 °C v atmosféře argonu, a potom 1,5 h při pokojové teplotě. Roztok byl zfíltrován přes extrakční filtr do polypropylenové zkumavky, pryskyřice byla promyta 5 až 6 ml výše uvedené směsi a 4 a 5 ml TFA, roztok byl odpařen v proudu dusíku za získání olejového zbytku, který působením chladného Et2O ztuhnul. Centrifugace a dekantace Et2O vrstvy a působení další části chladného Et2O s následnou centrifugací a dekantací a sušení bílé pevné látky ve vakuu přes noc poskytlo surovou látku PTR-3227 (72 mg, 10 %). Chromatogram HPLC surového peptidů je ukázán na obr. 5.
Příklad 64: Vazebná reakce galaktózového derivátu na peptid cyklický v kostře za získání PTR 3229
Peptid cyklický v kostře byl zbaven ochranných skupin Fmoc a potom promyt NMP a THF. Vazebný cyklus použitím l,2:3,4-di-0-izopropyliden-D-galaktopyranózy (5 ekv., 1,15 mmol, 0,3 g) a 0,33 ekv. BTC (0,379 mmol, 0,112 g) jako reakčního činidla a 14 ekv. kolidinu (3,22 mmol, 0,425 ml) jako báze v THF (15 ml) při pokojové teplotě byl prováděn 1 h. Po promytí DCM a MeOH byl peptid odštěpen z pryskyřice použitím TFA (95 %), TIS (2,5 %) a vody (2,5 %) v celkovém objemu 15 ml směsi po dobu 1,5 h při pokojové teplotě. Po dalším zpracování byl získán surový PTR-3229 (0,176 g) se sekvencí galaktóza-Dab-Phe-Trp-(D)Trp-Lys
-22CZ 296014 B6
Thr-Phe-Gly(C3)-NH2. Tento peptidový analog obsahuje můstek propojující stavební jednotku GlyC3 a zbytek Dab. Analýza hmotnostního spektra surového peptidů je ukázána na obr. 6.
Příklad 65: Tvorba močovinové vazby použitím BTC
A: Tvorba močovinové vazby v můstku vazbou Ile (izokyanátový derivát vytvořený pomocí BTC) na Lys-peptidylovou pryskyřici za vytvoření peptidového analogu PTR 3237 s následující strukturou:
Analýza hmotnostního spektra tohoto surového peptidů je uvedena na obr. 7.
B: Tvorba močovinové vazby v sekvenci použitím diaminu se provádí následujícím způsobem: k 5 ekv. hydrochloridu mono Fmoc-diaminu vCH2C12 (0,15M), byl přidán 1 ekv. DIEA (pro neutralizaci hydrochloridu). Po 1 min byl přidán 1,55 ekv. BTC a suspenze byla míchána 2 minuty, a potom bylo přidáno 14 ekv. DIEA. Po 1 min byl získaný roztok přidán kpeptidylové pryskyřici a směs byla míchána 1 h při pokojové teplotě, s následným promytím CH2C12 a NMP. Získaný peptidový analog cyklický v kostře, označený PTR 3241, má následující strukturu:
OH
o ch2 o
II I II
HN-C~NH-CH-C~Trp—(D)Trp— Lys—Thr—Phe-pGly-NH2 (Ch2)2------ΝΉ-----co------------------------(CH2)3
Chromatogram HPLC a hmotnostní spektrum surového peptidů jsou znázorněny na obr. 8.
Příklad 66: Vícečetná paralelní syntéza použitím BTC
Přibližně 500 oddělených peptidů bylo syntetizováno v MPS formátu použitím BTC jako vazebného činidla. Příklad výsledků syntézy pro 24 peptidů je uveden v tabulce 5.
-23CZ 296014 B6
| Hmotnostní spektrum | Nalezeno | 889,2 | 963,1 | 790,1 | 938,9, 462,9 (cyklický tri peptid) | 878,1 | 790, 434 (cyklický tripeptid) | 70S | 859 | 818 | 878,1 | CM «3 CO | CO <0' O O0 |
| Kvalit.výsl. | z-*s + * | 4- 4· | (++) j | t 4· w | (++) | 1 + »W* | T i· | T i- | 4· 4- | 4- 4* | T + | (++) | |
| Vypočt. | 888,41 | i 962,42 | 789,33 | 938,39 | 877,36 | 789,31 | 704,28 | CO co kO 00 | 817,36 | 877,37 | co CO_ t— CO co | 806,31 | |
| 1-. JK ř— | u. xz H | u. xz H | u. JZ H | u. XZ | fcnp JZ H | Vw JC I— | txx· j= | 5— xz H | kw· xz l·* | u. XX H | έ I- | ||
| Φ JC. CL | Φ JZ Ct | Φ JZ CL | ® JZ 0- | Phe | Φ jC CL | <D XZ O. | <0 JZ O. | Φ JZ CL | Φ XZ CL | Φ «ΧΖ CL | Φ x: (L | ||
| CM Q « 4 | CM O Φ C 0- | GlyC2 I | co □ w X _J | co U 3 Φ _l | co 2 > | CM O «3 < | CM O 0> «c £t* | CM u X 0 | co 0 w X —1 | 1 LeuC3 | <0 O 75 > | ||
| JE 0 | c | c 0 | c 0 | <5 | c 0 | >> 0 | X 0 | X 0 | 0 | x 0 | X 0 | ||
| 75 > | 0 V» | « > | w < | i— Φ 0 | >> 0 | 4 | >N O | 0 k< | «i—* s | tfí < | OJ < | ||
| cn u. < | O) U. < | < | >· h* | k_ H | 0 | < | u. X H | Φ | 3 Φ | Φ 5 | |||
| GlyN3 | CO X 0 | co Z x 0 | CO Z 0 | <0 Z x 0 | <0 z X 0 | CO Z >> O | co Z x O | co Z X 0 | CO Z >» 0 | CO X 0 | co Z X 0 | ||
| cu | XI | O | T5 | Φ | U—. | CD | xz | w | Xi | 0 | Ό | ||
| x~“ | V“ | - | - | T~ | V- | - | CM | CM | CM | CM | |||
| - | CM | co | <0 | r- | CO | a> | 0 x— | - | CM v |
-24CZ 296014 B6
Tabulka 5: pokračování
| Nalezeno | σ> CM CJ> | tj OS Q. 'cl + Ξ X5 Cl <0 a. Έ C, co «7 m <o o a> | 748,9 | <0 a. a •f S a. OJ a *c x-*· co <0 M* | 1---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 1 975,9, 448(tripeptid+piper.), 893,9 (?) | z-X 0) a ?· « + X 5 z cl 4· CL ’C CD «*>* - 3 <0 5 03 00 ¢0 | co 00 | co“ <o <33 | o cm' CO «3 | 964,9 | -να» OO | CO oo co |
| Kvalit.výsl. | \ 4· + v? | 4^ 1 4· | + + | i x/ | z*x 1 | i X-ν' | <-x 4· 4· X/1 | xx 4· .4* | + £ | ✓*x 4· * X*· | v 4* x-> | **x 4· 4· X-** |
| Vypočt. | σ> CO oo CM co | CM * xf O 0> | <33 CM_ co’ M· X | <33 CO <n o o | T~ xr in b* a> | b* CO O* oo 00 | <» CO o CO CO | o co co’ «Ο <33 | <n co CM* co oo | xr Mf M·' co <33 | Jx. CO o CD 00 | Xt U0 00 co |
| 5— H | i— S= H | u. XZ H | Uw x: H | Im jC 1- | u. se F- | u. x: t- | u. H | t— JC | w Xi F- | W XT | u, x: F- | |
| Φ JE cl | o> C CL | 03 JC | <D Xi a. | 0) xz CL | a> JCi a. | 03 «*- CL | Φ XZ 0. | 03 CL | 03 Xi CL | <— 03 x: a. | 03 j~ CL | |
| CM Q ta < | CM O to jS a | CM U X 0 | CO Q ω _j | «0 O □ 03 -J | CO O « > | CM O « < | CM O 03 £ CL | CM U X 0 | co O « > -J | co 0 3 03 ~J | CO U « > | |
| Jí Μ» | s | JJJ | 03 | 0) | 3 03 _J | O 03 -1 | 3 Φ _J | 3 Φ | 3 Φ _J | 3 Φ _J | ||
| 5k H | 03 | 0 | Q. « < | CX ω < | >7 o | u. >> H· | cx V) < | cx v> < | C 0 | u. Φ 0 | 8 CL | |
| Φ X5 CL | o CL | v03 ω | u. x: F- | CL l_ F- | i— >» h* | ro > | a> se CL | 2. | 0? SZ CL | Zl 0 | c 0 | |
| CO Z X 0 | CO Z >1 O | co Z X 0 | CO Z >H 0 | co Z X 0 | <o z X 0 | co Z X 0 | CO Z >> 0 | co Z X 0 | co Z >* 0 | co Z X 0 | CO Z X 0 | |
| Φ | Η- | 03 | c | CO | SZ | o | T3 | Φ | 03 | SZ | ||
| CM | CM | CM | CM | CO | co | CO | CO | CM | co | ¢0 | co | |
| CO | u> | CO v- | rx | co | 03 | o CM | τCM | CM CM | co CM | CM |
-25CZ 296014 B6
Poznámky k tabulce 5
Postup obtížně proveditelné reakce: předaktivace AA mimo automatický syntezátor peptidů (ACT 396 s Labtech 4 firmy Advanced ChemTech).
Pět ekv. AA ve 150 ml dioxanu + 1,65 ekv. BCT ve 150 μΐ dichlorpropanu, míchání, po 1 min bylo přidáno 14 ekv. kolidinu v dichlorpropanu.
Předaktivované aminokyseliny byly na destičku přeneseny manuálně.
Reakce 3 x 1 h při 60 °C.
Příklady chromatogramu HPLC a hmotnostních spekter surového peptidů MPS (č. 20 v tabulce 5) jsou uvedeny v obr. 9.
Příklad 67: Syntéza analogu cyklosporinu použitím BTC
Reakční činidlo BCT bylo použito u obtížně proveditelných vazebných reakcích při syntéze analogu cyklosporinu s následující sekvencí:
Ala-NMeLeu-NMeLeu-NMeVal-NMeLeu-Abu-Sar-NMeLeu-Val-NMeLeu-Ala-NH2
Tato peptidomimetická látka je lineární derivát cyklosporinového analogu popsaného v článku Raman a další, J. Org. Chem. 63: 5734, 1998. Chromatogram HPLC a hmotnostní spektrum surového peptidů jsou uvedeny v obr. 10.
Claims (16)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob vazby zbytku aminokyseliny na peptidový řetězec, vyznačující se tím, že zahrnuje následující kroky:(i) poskytne se zbytek aminokyseliny s volnou karboxylovou skupinou a blokovanou aminoskupinou, popřípadě s dalšími blokovanými funkčními skupinami vedlejších řetězců;(ii) provede se reakce blokované aminokyseliny s bis-(trichlormethyl)karbonátem v rozpouštědle, které je vzhledem k této reakci inertní, za získání chloridu aminokyseliny;(iii) provede se neutralizace volné kyseliny přidáním organické báze;(iv) získaná suspenze obsahující chlorid aminokyseliny se přidá ke sloučenině zvolené ze skupiny zahrnující peptid s blokovaným karboxylovým koncem a volným aminovým koncem, a peptidylovou pryskyřici obsahující alespoň jeden volný aminový konec; a (v) použije se reakčních podmínek umožňujících vazbu chloridu aminokyseliny na peptid za získání peptidů prodlouženého o jeden zbytek aminokyseliny.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že peptidový řetězec obsahuje v N-koncové poloze stericky bráněný zbytek.
- 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že se dále provádí zahřívání reakční směsi v průběhu vazebné reakce chloridu aminokyseliny speptidem.
- 4. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se dále do reakční směsi chloridu aminokyseliny a peptidů přidává katalyzátor.-26CZ 296014 B6
- 5. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že stericky bráněný zbytek v N-koncové poloze peptidového řetězce zahrnuje stericky bráněný sekundární amin.
- 6. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že stericky bráněný zbytek v N-koncové poloze peptidového řetězce zahrnuje zbytek N-alfa(co-funkcionalizovaný)alkylaminokyseliny.
- 7. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že inertní rozpouštědlo se volí ze skupiny dioxan, tetrahydrofuran, diglym a 1,3-dichlorpropan.
- 8. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že vazebná reakce peptidů dále zahrnuje vícečetnou paralelní peptidovou syntézu.
- 9. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že vazebné činidlo se poskytuje ve stechiometrickém poměru alespoň přibližně jedna třetina molárního ekvivalentu vzhledem ke zbytku aminokyseliny.
- 10. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že báze se volí ze skupiny kolidin, diizopropylethylamin, pyridin, dimethylpyridin a chinaldin.
- 11. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že aminoskupina aminokyseliny se blokuje blokující skupinou zvolenou ze skupiny fluorenylmethoxykarbonyl a /erc-butoxykarbonyl.
- 12. Způsob vazby zbytku aminokyseliny na pevný nosič, vyznačující se tím, že zahrnuje následující kroky:(i) poskytne se zbytek aminokyseliny s volnou karboxylovou skupinou a blokovanou aminoskupinou, popřípadě s dalšími blokovanými funkčními skupinami vedlejších řetězců;(ii) provede se reakce blokované aminokyseliny s bis-(trichlormethyl)karbonátem v rozpouštědle, které je vzhledem k této reakci inertní, za získání chloridu aminokyseliny;(iii) provede se neutralizace volné kyseliny přidáním organické báze;(iv) získaná suspenze obsahující chlorid aminokyseliny se přidá ke sloučenině zvolené ze skupiny zahrnující pryskyřici obsahující alespoň jeden volný aminový konec a pevný nosič nesoucí funkční skupinu schopnou vazby na chlorid; a (v) použije se reakčních podmínek umožňujících vazbu chloridu aminokyseliny na pevný nosič.
- 13. Použití sloučeniny bis-(trichlormethyl)karbonátu pro syntézu chloridů aminokyselin in šitu v průběhu peptidové syntézy.
- 14. Použití sloučeniny fosgenu pro syntézu chloridů aminokyselin in šitu v průběhu peptidové syntézy.
- 15. Použití sloučeniny difosgenu pro syntézu chloridů aminokyselin in šitu v průběhu peptidové syntézy.
- 16. Použití podle některého z nároků 13 až 15, kde peptidová syntéza se provádí na pevné fázi.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IL12531498A IL125314A (en) | 1998-07-12 | 1998-07-12 | Processes for attaching amino acids using a bite - (trichloromethyl) carbonate |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2001159A3 CZ2001159A3 (cs) | 2001-09-12 |
| CZ296014B6 true CZ296014B6 (cs) | 2005-12-14 |
Family
ID=11071733
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2001159A CZ296014B6 (cs) | 1998-07-12 | 1999-07-11 | Způsob vazby zbytku aminokyseliny na peptidový řetězec |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6512092B2 (cs) |
| EP (1) | EP1097164A4 (cs) |
| JP (1) | JP2002520331A (cs) |
| KR (1) | KR20010071853A (cs) |
| CN (1) | CN1317011A (cs) |
| AU (1) | AU754560B2 (cs) |
| CA (1) | CA2334076A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ296014B6 (cs) |
| HU (1) | HUP0102884A3 (cs) |
| IL (1) | IL125314A (cs) |
| NZ (1) | NZ509304A (cs) |
| PL (1) | PL345532A1 (cs) |
| WO (1) | WO2000002898A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA200100370B (cs) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20040091451A1 (en) * | 2000-05-29 | 2004-05-13 | Marie-Therese Charreyre | Biocompatible polymer for fixing biological ligands |
| EP1373190A2 (de) | 2001-03-28 | 2004-01-02 | Bayer Chemicals AG | Verfahren zur herstellung von carbonsäureamiden |
| US7205385B2 (en) * | 2004-11-12 | 2007-04-17 | General Electric Company | Polymerization method for the synthesis of polypeptide imaging agents |
| CN101203527A (zh) * | 2005-05-31 | 2008-06-18 | 耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展公司 | 主链环化的促黑皮质素激素（αMSH）类似物 |
| FI20055653L (fi) * | 2005-12-08 | 2007-06-09 | Wallac Oy | Leimausreagenssi |
| KR100831858B1 (ko) | 2006-05-23 | 2008-05-22 | 한기종 | 새로운 펩타이드결합 생성방법 |
| GB2472563B (en) * | 2009-04-28 | 2013-02-27 | Univ Leicester | Method of preparing hairpin and cyclic polyamides |
| WO2011024175A1 (en) | 2009-08-28 | 2011-03-03 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Macrocyclic compounds, compositions comprising them and methods for preventing or treating hiv infection |
| WO2013111129A1 (en) | 2012-01-23 | 2013-08-01 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Stabilized peptide helices for inhibiting dimerization of chemokine c motif receptor 2 (ccr2) |
| WO2015087334A1 (en) | 2013-12-15 | 2015-06-18 | Yissum Research Develoment Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Viperistatin-derived peptides and uses thereof |
| US10662225B2 (en) | 2016-06-07 | 2020-05-26 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Backbone cyclized inhibitory peptides of myeloid differentiation factor 88 (MyD88) |
| KR20250007021A (ko) | 2017-06-09 | 2025-01-13 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | N-치환 아미노산을 포함하는 펩타이드의 합성 방법 |
| EP3684794B1 (en) | 2017-09-19 | 2025-08-06 | Yissum Research and Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Somatostatin prodrugs |
| WO2019197466A1 (en) * | 2018-04-10 | 2019-10-17 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Method for cleavage of solid phase-bound peptides from the solid phase |
| CN110818771B (zh) * | 2018-08-14 | 2023-01-17 | 陈铭 | 使用氨基酸离子液体的羰基硫介导多肽合成 |
| KR20210098476A (ko) | 2018-11-30 | 2021-08-10 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 펩티드 화합물 또는 아마이드 화합물의 탈보호법 및 고상 반응에 있어서의 탈수지 방법, 및 펩티드 화합물의 제조 방법 |
| EP3927737A1 (en) | 2019-02-21 | 2021-12-29 | Yissum Research Development Company of the Hebrew University of Jerusalem Ltd. | Par4 derived peptides, analogs and uses thereof |
| WO2022003673A1 (en) | 2020-06-30 | 2022-01-06 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Humanin analogs and uses thereof |
| CN114047269B (zh) * | 2022-01-13 | 2022-04-15 | 浙江湃肽生物有限公司南京分公司 | 一种乙酰基六肽-8的检测方法 |
| WO2025141573A1 (en) | 2023-12-27 | 2025-07-03 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Ltd. | Calreticulin peptidomimetic inhibitors and prodrugs |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3440141A1 (de) * | 1984-11-02 | 1986-05-07 | Heiner Dipl.-Chem. Dr. 8000 München Eckert | Verwendung von kohlensaeure-bis-trichlormethylester als proreagens fuer phosgen |
| TW304957B (cs) | 1991-06-18 | 1997-05-11 | Lilly Co Eli | |
| US5198548A (en) * | 1992-01-30 | 1993-03-30 | Warner-Lambert Company | Process for the preparation of D(-) and L(+)-3,3-diphenylalanine and D(-) and L(+)-substituted 3,3-diphenylalanines and derivatives thereof |
-
1998
- 1998-07-12 IL IL12531498A patent/IL125314A/en not_active IP Right Cessation
-
1999
- 1999-07-11 CN CN99810807A patent/CN1317011A/zh active Pending
- 1999-07-11 WO PCT/IL1999/000378 patent/WO2000002898A1/en not_active Application Discontinuation
- 1999-07-11 CZ CZ2001159A patent/CZ296014B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1999-07-11 NZ NZ509304A patent/NZ509304A/xx unknown
- 1999-07-11 AU AU46454/99A patent/AU754560B2/en not_active Ceased
- 1999-07-11 KR KR1020017000457A patent/KR20010071853A/ko not_active Ceased
- 1999-07-11 JP JP2000559127A patent/JP2002520331A/ja active Pending
- 1999-07-11 CA CA002334076A patent/CA2334076A1/en not_active Abandoned
- 1999-07-11 HU HU0102884A patent/HUP0102884A3/hu unknown
- 1999-07-11 PL PL99345532A patent/PL345532A1/xx not_active Application Discontinuation
- 1999-07-11 EP EP99929678A patent/EP1097164A4/en not_active Withdrawn
-
2001
- 2001-01-09 US US09/756,223 patent/US6512092B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-01-12 ZA ZA200100370A patent/ZA200100370B/en unknown
-
2002
- 2002-12-18 US US10/321,648 patent/US7045592B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2002520331A (ja) | 2002-07-09 |
| EP1097164A1 (en) | 2001-05-09 |
| US6512092B2 (en) | 2003-01-28 |
| WO2000002898A1 (en) | 2000-01-20 |
| AU754560B2 (en) | 2002-11-21 |
| AU4645499A (en) | 2000-02-01 |
| NZ509304A (en) | 2003-01-31 |
| ZA200100370B (en) | 2001-07-26 |
| EP1097164A4 (en) | 2005-05-25 |
| IL125314A (en) | 2004-07-25 |
| CZ2001159A3 (cs) | 2001-09-12 |
| IL125314A0 (en) | 1999-03-12 |
| CN1317011A (zh) | 2001-10-10 |
| HUP0102884A3 (en) | 2002-02-28 |
| HUP0102884A2 (hu) | 2002-01-28 |
| US7045592B2 (en) | 2006-05-16 |
| KR20010071853A (ko) | 2001-07-31 |
| US20010007037A1 (en) | 2001-07-05 |
| US20030195331A1 (en) | 2003-10-16 |
| CA2334076A1 (en) | 2000-01-20 |
| PL345532A1 (en) | 2001-12-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ296014B6 (cs) | Způsob vazby zbytku aminokyseliny na peptidový řetězec | |
| Falb et al. | In situ generation of Fmoc‐amino acid chlorides using bis‐(trichloromethyl) carbonate and its utilization for difficult couplings in solid‐phase peptide synthesis | |
| Biron et al. | Optimized selective N‐methylation of peptides on solid support | |
| DK2084176T3 (en) | BOC AND FMOC PHASE PHASEPETTE SYNTHESIS | |
| JP2679786B2 (ja) | 非ペプチド結合を有するペプチド合成方法 | |
| KR101087859B1 (ko) | 인슐린친화성 펩타이드 합성법 | |
| CN102268082B (zh) | 一种齐考诺肽的固相合成方法 | |
| CZ295838B6 (cs) | Způsob výroby peptidů | |
| CZ490689A3 (en) | Peptides antagonizing effects of bradykinin, process of their preparation and pharmaceutical composition containing thereof | |
| EP0270376B1 (en) | Calcitonin gene-related peptide derivatives | |
| KR20130127443A (ko) | 데가렐릭스 및 이의 중간 화합물의 제조 방법 | |
| CN109180803A (zh) | 生长抑素及其制备方法和药物组合物 | |
| CN100357313C (zh) | 非靶位点胺基被保护的肽,其制备方法以及使用该肽制备特异性地结合的peg肽的方法 | |
| Kappel et al. | Methionine anchoring applied to the solid-phase synthesis of lysine-containing'head-to-tail'cyclic peptides | |
| Cavallaro et al. | Solid‐phase synthesis of a dendritic peptide related to a retinoblastoma protein fragment utilizing a combined boc‐and fmoc‐chemistry approach | |
| EP3939990A1 (en) | Novel intermediate used for biologically active polypeptide and method for preparing same | |
| Gilon | E. Falb T. Yechezkel Y. Salitra | |
| IES84882Y1 (en) | Boc and fmoc solid phase peptide synthesis | |
| IE20070687U1 (en) | Boc and fmoc solid phase peptide synthesis | |
| WO2007077112A1 (en) | Methods for the synthesis of arginine-containing peptides | |
| WO2001051505A1 (en) | Nα-2-(4-NITROPHENYLSULFONYL)ETHOXYCARBONYL-AMINO ACID FLUORIDES AND PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20060711 |