CZ293959B6

CZ293959B6 - Léčivo s obsahem taxoidních derivátů

Info

Publication number: CZ293959B6
Application number: CZ2001604A
Authority: CZ
Inventors: Bisseryámarie@Christine; Vrignaudápatricia; Robertsásimon; Brealeyáclive
Original assignee: Aventisápharmaás@Áa
Priority date: 1998-08-17
Filing date: 1999-08-13
Publication date: 2004-08-18
Also published as: EP1109547A1; CZ2001604A3; NO20010654L; NO20010654D0; JP5354762B2; SK285212B6; IL141238A0; EE200100079A; ME00533B; NZ509965A; YU7901A; AU766168B2; BG65365B1; CA2340921C; KR20010085396A; HU230235B1; RS52011B; KR100710533B1; BG105264A; HUP0103748A2

Abstract

Léčivo s obsahem taxoidního derivátu obecného vzorce IŹ které prostupuje hematoencefalickou bariérouŹ pro léčení abnormální buněčné proliferace v mozku savcůŕ

Description

Léčivo s obsahem taxoidních derivátů

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká nového použití taxoidních derivátů.

Dosavadní stav techniky

Předmětem předkládané přihlášky je použití sloučeniny podle vynálezu k přípravě léčiva k léčení abnormální buněčné proliferace v mozku, a to dimethoxysloučeniny, její soli či solváty, přičemž tato dimethoxysloučenina, její sůl či solvát, vykazuje neočekávanou schopnost prostupovat hematoencefalickou bariérou.

Dokument WO 96/30355 popisuje 4a-acetoxy-2a-benzoyloxy-53,20-epoxy-13-hydroxy-7p,10|3-dimethoxy-9-oxo-ll-taxen-13a-yl-(2R,3S)-terc-butoxykarbonylamino-2-hydroxy-3fenylpropionát. Tento dokument však nepopisuje a neobsahuje ani zmínku, že by tato dimethoxysloučenina měla schopnost prostupovat hematoencefalickou bariérou. Tento dokument též nikterak nenaznačuje použití uvedené sloučeniny, její soli či solvátu, k léčení abnormální buněčné proliferace v mozku.

Také dokumenty WO 96/32387, WO 94/10169 a WO 92/98589 popisují taxoidní deriváty, nepopisují však stejný produkt jako předkládaná přihláška vynálezu.

Podstata vynálezu

Překládaný vynález se týká způsobu léčení abnormální buněčné proliferace v mozku u savců, včetně člověka, podáváním sloučeniny obecného vzorce I,

O

Z-0 ··

OCOCHj (I), ococ₆h₅ ve kterém

Z je atom vodíku nebo skupina obecného vzorce II, •3

OH ve kterém

- 1 CZ 293959 B6

R1 je benzoylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více stejnými nebo různými atomy nebo skupinami vybranými ze skupiny, kterou tvoří atomy halogenu a alkylové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo trifluormethylové skupiny;

thenoylová skupina nebo furoylová skupina nebo skupina R₂-O-C0-, kde R₂ je alkylová skupina obsahující 1 až 8 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkynylová skupina obsahující 3 až 8 atomů uhlíku, cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, cykloalkenylová skupina obsahující 4 až 6 atomů uhlíku nebo bicykloalkylová skupina obsahující 7 až 10 atomů uhlíku, tyto skupiny jsou popřípadě substituované jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří atomy halogenu a hydroxylová skupina, alkoxyskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, dialkylaminoskupina, ve které alkylové části obsahují 1 až 4 atomy uhlíku, piperidinoskupina nebo morfolinoskupina, 1-piperazinylová skupina popřípadě substituovaná v poloze 4 alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylalkylovou skupinou obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, cykloalkenylová skupina obsahující 4 až 6 atomů uhlíku, fenylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více atomy nebo skupinami vybranými z atomů halogenu a alkylových skupin obsahujících 1 až 4 atomy uhlíku nebo alkoxyskupin obsahujících 1 až 4 atomy uhlíku, kyanoskupina nebo karboxylová skupina nebo alkoxykarbonylová skupina, ve které alkylová část obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku,

- fenylová skupina nebo a- nebo β-naftylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více atomy nebo skupinami vybranými z atomů halogenu a alkylových skupin obsahujících 1 až 4 atomy uhlíku nebo alkoxyskupin obsahujících 1 až 4 atomy uhlíku nebo

- pětičlenná aromatická heterocyklická skupina s výhodou vybraná z furylové a thienylová skupiny,

- nebo nasycená heterocyklická skupina obsahující 4 až 6 atomů uhlíku, popřípadě substituovaná jednou nebo více alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 4 atomy uhlíku,

Rs je nerozvětvená nebo rozvětvená alkylová skupina obsahující 1 až 8 atomů uhlíku, nerozvětvená nebo rozvětvená alkenylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, nerozvětvená nebo rozvětvená alkynylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku,

-2CZ 293959 B6 fenylová nebo a- nebo β-naftylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více atomy nebo skupinami vybranými ze skupiny, kterou tvoří atomy halogenu a alkylová skupina, alkenylová skupina, alkinylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, alkoxyskupina, alkylthioskupina, aryloxyskupina, arylthioskupina, hydroxylová skupina, hydroxyalkylová skupina, merkaptoskupina, formylová skupina, acylová skupina, acylaminoskupina, aroylaminoskupina, alkoxykarbonylaminoskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, karboxylová skupina, alkoxykarbonylová skupina, karbamoylová skupina, alkylkarbamoylová skupina, dialkylkarbamoylová skupina, kyanoskupina, nitroskupina a trifluormethylová skupina, nebo pětičlenný aromatický heterocyklus obsahující jeden nebo více stejných nebo různých heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom dusíku, atom kyslíku a atom síry apopřípadě substituovaný jedním nebo více stejnými nebo různými substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří atomy halogenu a alkylová skupina, arylová skupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, alkoxykarbonylaminoskupina, acylová skupina, arylkarbonylová skupina, kyanoskupina, karboxylová skupina, karbamoylová skupina, alkylkarbamoylová skupina, dialkylkarbamoylová skupina nebo alkoxykarbonylová skupina, přičemž se rozumí, že v substituentech fenylové skupiny, a-nebo β-naftylové skupiny a aromatické heterocyklické skupiny obsahují alkylová skupiny nebo alkylové části jiných skupin 1 až 4 atomy uhlíku a že alkanylové a alkinylové skupiny obsahují 2 až 8 atomů uhlíku a že arylové skupiny jsou fenylová skupina nebo a- nebo β-naftylová skupina,

R4 je alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku v nerozvětveném nebo rozvětveném řetězci, alkenyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku v nerozvětveném nebo rozvětveném řetězci, alkynyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku v nerozvětveném nebo rozvětveném řetězci, cykloalkyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku nebo cykloakenyloxyskupina obsahující 4 až 6 atomů uhlíku, tyto skupiny jsou popřípadě substituované jedním nebo více atomy halogenu nebo alkoxyskupinami obsahujícími 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupinami obsahujícími 1 až 4 atomy uhlíku nebo karboxylovými skupinami, alkyloxykarbonylovými skupinami, které v alkylové části obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, kyanoskupinami nebo karbamoylovými skupinami nebo N-alkylkarbamoylovými skupinami nebo Ν,Ν-dialkylkarbamoylovými skupinami, jejichž každá alkylová část obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku nebo společně s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, tvoří nasycený pětičlenný nebo šestičlenný heterocyklický zbytek popřípadě obsahující druhý heteroatom vybraný z atomu kyslíku, atomu síry nebo atomu dusíku, popřípadě substituovaný alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinou nebo fenylalkylovou skupinou, ve které obsahuje alkylová část 1 až 4 atomy uhlíku,

R5 je alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku v nerozvětveném nebo rozvětveném řetězci, alkenyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, alkynyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, cykloalkyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku,

-3CZ 293959 B6 cykloalkenyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, tyto skupina jsou popřípadě substituované jedním nebo více atomy halogenu nebo alkoxyskupinami obsahujícími 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupinami obsahujícími 2 až 4 atomy uhlíku nebo karboxylovými skupinami, alkyloxykarbonylovými skupinami, které v alkylové části obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, kyanoskupinami nebo karbamoylovými skupinami nebo N-alkylkarbamoylovými skupinami nebo Ν,Ν-dialkylkarbamoylovými skupinami, jejichž každá alkylová část obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku nebo společně s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, tvoří nasycený pětičlenný nebo šestičlenný heterocyklický zbytek popřípadě obsahující druhý heteroatom vybraný z atomu kyslíku, atomu síry nebo atomu dusíku, popřípadě substituovaný alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinou nebo fenylalkylovou skupinou, ve které obsahuje alkylová část 1 až 4 atomy uhlíku, nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího solvátu, které prostupují hematoencefalickou bariérou.

S výhodou jsou aiylovými skupinami, které mohou představovat skupinu R₃, fenylová skupina nebo a- nebo β-naftylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více atomy nebo skupinami vybranými ze skupiny, kterou tvoří atomy halogenu (atom fluoru, atom chloru, atom bromu, atom jodu) a alkylová skupina, alkenylová skupina, alkynylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, alkoxyskupina, alkylthioskupina, aryloxyskupina, arylthioskupina, hydroxylová skupina, hydroxyalkylová skupina, merkaptoskupina, formylová skupina, acylová skupina, acylaminoskupina, aroylaminoskupina, alkoxykarbonylaminoskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, karboxylová skupina, alkoxykarbonylová skupina, karbamoylová skupina, dialkylkarbamoylová skupina, kyanoskupina, nitroskupina a triflormethylová skupina, přičemž se rozumí, že alkylové skupiny a alkylové části jiných skupin obsahují 1 až 4 atomy uhlíku, že alkenylové a alkinylové skupiny obsahují 2 až 8 atomů uhlíku a že arylovými skupinami jsou fenylová skupina nebo a- nebo β-naftylová skupina.

S výhodou heterocyklická skupina, která může představovat skupinu R₃, je pětičlenná aromatická heterocyklická skupina, obsahující jeden nebo více stejných nebo různých atomů, vybraných z atomu dusíku, atomu kyslíku a atomu síry, popřípadě substituovaná jedním nebo více stejnými nebo různými substituenty, vybranými ze skupiny, kterou tvoří atomy halogenu (atom fluoru, atom chloru, atom bromu, atom jodu) a alkylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, arylová skupina obsahující 6 až 10 atomů uhlíku, alkoxyskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, aiyloxyskupina obsahující 6 až 10 atomů uhlíku, aminoskupina, alkylaminoskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, dialkylaminoskupina obsahující v každé alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, acylaminoskupina, kde acylová část obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxykarbonylaminoskupina obsahující v alkoxylové části 1 až 4 atomy uhlíku, acylová skupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, arylkarbonylová skupina obsahující vaiylové části 6 až 10 atomů uhlíku, kyanoskupina, karboxylová skupina nebo karbamoylová skupina, alkylkarbamoylová skupina obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, dialkylkarbamoylová skupina obsahující v každé alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku nebo alkoxykarbamoylová skupina obsahující v alkoxylové části 1 až 4 atomy uhlíku.

S výhodou jsou skupiny R4 a R5, které mohou být stejné nebo různé, nerozvětvená nebo rozvětvená alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, která je popřípadě substituovaná skupinou vybranou ze skupiny, kterou tvoří methoxySkupina, ethoxyskupina, ethylthioskupina, karboxylová skupina, methoxykarbonylová skupina, ethoxykarbonylová skupina, kyanoskupina, karbamoylová skupina, N-methylkarbamoylová skupina, N-ethylkarbamoylová skupina, N,Ndimethylkarbamoylová skupina, Ν,Ν-diethylkarbamoylová skupina, N-pyrrolidinokarbonylová skupina nebo N-piperidinokarbonylová skupina.

Přesněji se předkládaný vynález týká sloučeniny vzorce I, kde Z je atom vodíku nebo skupina vzorce II, kde R¹ je benzoylová skupina nebo skupina vzorce R₂-O-CO-, kde R“ je terc-butylová

-4CZ 293959 B6 skupina a R₃ je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 6 atomů uhlíku, cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, fenylová skupina popřípadě substituovaná jednou nebo více stejnými nebo různými atomy nebo skupinami vybranými ze skupiny, kterou tvoří atomy halogenu (atom fluoru, atom chloru) a alkylová skupina (methylová skupina), alkoxyskupina (methoxyskupina), dialkylaminoskupina (dimethylmaminoskupina), acylaminoskupina (acetylaminoskupina), alkoxykarbonylaminoskupina (terc.-butoxykarbonylaminoskupina) nebo trifluormethylová skupina nebo 2- nebo 3-furylová skupina, 2nebo 3-thienylová skupina nebo 2- nebo 3-furylová skupina, 2-nebo 3-thienylová skupina nebo 2-, 4- nebo 5-thiazolylová skupina a R4 a R5, které mohou být stejné nebo různé, jsou každá nerozvětvená nebo rozvětvená alkoxyskupina obsahujíc 1 až 6 atomů uhlíku.

Ještě přesněji se předkládaný vynález týká sloučeniny vzorce I, kde Z je atom vodíku nebo skupina vzorce II, kde R] je benzoylová skupina nebo skupina R₂-O-CO-, kde R₂ je terc-butylová skupina a R₃ je izobutylová skupina, izobutenylová skupina, butenylová skupina, cyklohexylová skupina, fenylová skupina, 2-furylová skupina, 3-furylová skupina, 2-thienylová skupina, 3thienylová skupina, 2-thiazolylová skupina, 4-thiazolylová skupina nebo 5-thiazolylová skupina a R4 a R5, které mohou být stejné nebo různé, jsou každá methoxyskupina, ethoxyskupina nebo propoxyskupina.

Ještě výhodnější jsou sloučeniny vzorce I, kde R₃ je fenylová skupina a Ri je terc-butoxykarbonylová skupina, R4 a R₅, které mohou být stejné nebo různé, jsou methoxyskupina, ethoxyskupina nebo propoxyskupina.

Ještě výhodněji se předkládaný vynález týká 4a-acetoxy—2a-benzoyloxy-5p,20-epoxy-iphydroxy-7p,10|3-dimethoxy-9--oxo-ll-taxen-13a-yl-(2R,3S)-3-terc-butoxykarbonylamino2-hydroxy-3-fenylpropionátu vzorce la

-5I

Z mezinárodní patentové přihlášky WO 96/30355 je známá příprava derivátu podle předkládaného vynálezu pomocí dvou postupů. Podle prvního, vícekrokového, postupu se vyjde z 10deacetylbaccatinu vzorce III:

(lil), který se selektivně chrání v polohách 7 a 13, například ve formě silyletheru, potom následuje reakce se sloučeninou vzorce IV:

R-X (IV), kde R je skupina definovaná výše a X je reaktivní esterová skupina, jako je ester kyseliny sírové nebo sulfonové nebo atom halogenu, za získání sloučeniny nesoucí jednotku -OR v poloze 18 a silylové skupiny v polohách 7 a 13. Potom se silylové chránící skupiny nahradí atomy vodíku a získá se sloučenina, která stále nese skupinu -OR v poloze 10 a hydroxylové skupiny v polohách 7 a 13. Tento derivát se etherifikuje selektivně v poloze 7 reakcí s derivátem vzorce IV a získá se derivát vzorce I, kde Z je atom vodíku.

Poslední krok zahrnuje esterifikaci v poloze 13 podle způsobu, který je odborníků v této oblasti známý, kdy derivát vzorce Ia, kde Z je atom vodíku, reaguje v přítomnosti β-laktamu například podle způsobu popsaného v patentu EP 617 018, nebo v přítomnosti oxazolidinu, jak je popsáno například v mezinárodní patentové přihlášce WO 96/30355, uvedené výše. Po odstranění chránících skupin z poloh 7 a 10 se takto získá derivát vzorce Ia, kde Z je jiná, než atom vodíku a R je atom vodíku. Následující krok zahrnuje reakci v polohách 7 a 10 za současného působení činidla připraveného in šitu ze sulfoxidu vzorce V a anhydridu kyseliny (reakce Pummerova typu),

R-SO-R (V), kde R má stejný význam, jako bylo uvedeno výše, za vzniku alkylthioalkyloxylového meziproduktu v polohách 7 a 10.

Poslední krok, který poskytne požadovanou sloučeninu Ia, se provádí s meziproduktem získaným výše, působením aktivovaného Raneyova niklu.

Obecně se působení činidla připraveného in šitu ze sulfoxidu obecného vzorce V, s výhodou dimethylsulfoxidu, a anhydridu kyseliny octové, provádí v přítomnosti kyseliny octové nebo derivátu kyseliny octové, jako je halogenoctová kyselina, při teplotě 0 až 50 °C.

Obecně se působení aktivovaného Raneyova niklu v přítomnosti alifatického alkoholu nebo etheru provádí při teplotě -10 až 60 °C.

V patentové přihlášce FR 97-14 442 je popsán následující postup. Tento vynález umožňuje v jednom kroku přímo, selektivně a současně alkylovat dvě hydroxylové funkční skupiny v polohách 7 a 10 10-deacetylbaccatinu nebo jeho derivátu esterifikovaného v poloze 13, vzorce VI

-6CZ 293959 B6 (VI),

kde A je atom vodíku nebo postranní řetězec vzorce Ila níže:

kde G je chránící skupina hydroxylové funkční skupiny, Ri a R₃ mají stejný význam, jako ve vzorci Π nebo oxazolidinová jednotka vzorce lib:

(Hb), kde R] a R₃ mají stejný význam, jako ve vzorci II, R_a a Rb, které mohou být stejné nebo různé, jsou atom vodíku, nebo alkylová skupina, arylová skupina, atom halogenu, alkoxyskupina, arylalkylová skupina, alkoxyarylová skupina, halogenalkylová skupina, halogenarylová skupina, kde substituenty mohou popřípadě tvořit čtyřčlenný až sedmičlenný kruh.

Je výhodné použít jako výchozí látku 10-deacetylbaccatin, tj. sloučeninu vzorce III, což zlevní způsob a dále se předejde kroku chránění a odstranění chránící skupiny z meziproduktu, které byly nutné při dřívějších postupech.

Pokud jde o chránící skupiny G hydroxylových funkčních skupin ve vzorci Ila, je obecně výhodné vybrat všechny chránící skupiny popsané v knihách, jako je Greene a Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 1991, John Wiley & Sons, a MacOmie, Protective Groups in Organic Chemistry, 1975, Plenům Press, a které se odstraní za podmínek, které málo nebo vůbec nedegraduje zbytek molekuly, jako jsou například:

• ethery a s výhodou ethery, jako je methoxymethylether, 1-ethoxyethylether, benzyloxymethylether, p-methoxybenzyloxymethylether, benzylethery popřípadě substituované jednou nebo více skupinami, jako je methoxyskupina, atom chloru, nitroskupina, 1-methyl-lmethoxyethylether, 2-(trimethylsilyl)ethoxymethylether, tetrahydropyranylether a silylethery, jako jsou trialkylsilylethery, • karbonáty, j ako jsou trich lorethylkarbonáty.

Přesněji jsou skupiny R_a a R_b obecného vzorce lib vybrány ze skupin popsaných v mezinárodní patentové přihlášce WO 94/07878 a výhodnější deriváty jsou ty, kde R_a je atom vodíku a R_b je p-methoxyfenylová skupina.

Alkylační činidla jsou vybrána ze skupiny, kterou tvoří:

• alkylhalogenidy a s výhodou alkyljodidy (RI), • alkylsulfonáty, jako je methylsulfát, • oxoniové soli, jako jsou soli trialkyloxoniumborité kyseliny, zejména trimethyloxoniumtetrafluorborát (Me₃OBF₄).

S výhodou se použije methyljodid.

Alkylační činidlo se použije v přítomnosti anionizačního činidla, jako je jedna nebo více silných bází, v bezvodém médiu.

Mezi báze, které se mohou použít v bezvodém médiu, patří:

• hydridy alkalických kovů, jako je hydrid sodný nebo draselný, • alkoxidy alkalických kovů, jako je terc.butoxid draselný, • oxid stříbrný Ag₂O, • l,8-bis(dimethylamino)naftalen, • mono- nebo dikovové bazické směsi, které jsou popsané například v publikacích, jako je P. Caubére Chem. Rev. 1993, 93, 2317-2334 nebo M. Schlosser Mod. Synth. Methods (1992), 6, 227-271; zejména výhodné jsou kombinace alkyllithium/t-butoxid alkalického kovu nebo amid alkalického kovu/t-butoxid alkalického kovu. Jedna ze dvou bází se může generovat in šitu.

Mezi všemi možnými kombinacemi alkylačního činidla a anionizačního činidla je výhodné použít methyljodid v přítomnosti hydridu draselného.

Reakce se s výhodou provádí v organickém médiu, které je za reakčních podmínek inertní. S výhodou se použije například následující rozpouštědla:

• ethery, jako je tetrahydrofuran nebo domethoxyethan, • když se použije oxid stříbrný, je výhodné použít polární aprotická rozpouštědla, jako je dimethylformamid nebo aromatická rozpouštědla, jako je toluen, • když se použije l,8-bis(dimethylamino)naftalen, je výhodné použít alkylestery, jako je ethylacetát.

Z důvodu lepšího provedení předkládaného vynálezu je výhodné použít molámí poměr mezi anionizačním činidlem a substrátem vyšší než 2 a s výhodou 2 až 20.

-8CZ 293959 B6

Je také výhodné použít molámí poměr mezi alkylačním činidlem a substrátem vyšší než 2 a s výhodou 2 až 40.

Je výhodné použít reakční teplotu -30 °C až 80 °C.

Reakce s výhodou probíhá několik hodin až 48 hodin v závislosti na vybraných činidlech.

Po alkylačním kroku, pokud se provádí s 10-deacetylbaccatinem, následuje krok esterifíkace, který je odborníkům v této oblasti známý a je popsaný například v patentu EP 617 018 nebo mezinárodní patentové přihlášce WO 96/30355, které jsou uvedené výše.

Tedy podle prvního, tříkrokového způsobu se postup nejprve zahájí dialkylací 10-deacetylbaccatinu za použití alkylačního činidla v přítomnosti silné báze, ve druhém kroku se 10-deacetylbaccatin, dietherifíkovaný v polohách 7 a 10, kondenzuje s vhodně chráněným β-laktamem v přítomnosti alkylačního činidla vybrané ze skupiny, kterou tvoří terciární aminy a kovové báze, které zajišťují vznik alkoxidu v poloze 13. Odstranění chránicí skupiny z postranního řetězce se potom provede působením anorganické nebo organické kyseliny.

Podle druhého, tříkrokového způsobu se postup nejprve zahájí dialkylací 10-deacetylbaccatinu za použití alkylačního činidla v přítomnosti silné báze, v druhém kroku se 10-deacetylbaccatin dietherifíkovaný v polohách 7 a 10 kondenzuje v poloze 13 s axozolidinem v přítomnosti kondenzačního činidla, jako je diimidy, v přítomnosti aktivačního činidla, jako jsou doalkylaminopyridiny. Otevření oxazolidinu se dosáhne působením anorganické nebo organické kyseliny.

Podle třetího způsobu se postup zahájí esterifíkací v poloze 13 baccatinu, který je vhodně chráněný v polohách 7 a 10, β-laktamem nebo oxazolidinem v přítomnosti kondenzačního činidla a/nebo aktivačního činidla, které je popsáno ve výše uvedených dvou postupech. Po odstranění chránících skupin z poloh 7 a 10 se pomocí alkylačního činidla v přítomnosti silné báze provede dietherifíkace v polohách 7 a 10. Odstranění chránicí skupiny z postranního řetězce se dosáhne působením anorganické nebo organické kyseliny.

Produkty obecného vzorce I mají významné biologické vlastnosti.

In vitro měření biologické aktivity se provádí na tubulinu extrahovaném z mozku prasat, způsobem popsaným v M. L. Shelanski a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA. 70, 765-768 (1973). Studie depolymerace mikrotubulů na tubulin se provádí podle způsobu popsaného v G. Chauviére a kol., C. R. Acad. Sci., 293, série II, 501-503 (1981).

Bylo ověřeno, že sloučeniny vzorce I jsou in vivo aktivní u myší s transplantovaným B16 melanomem při dávkách 1 až 50 mg/kg intraperitoneálně, a také na další kapalné nebo pevné nádory.

Sloučeniny mají protinádorové vlastnosti, přesněji jsou aktivní proti nádorům, které jsou odolné vůči činidlům Taxol® a Taxotere®. Mezi takové nádory patří například nádory mozku, které mají zvýšenou expresi mdr 1 genu (genu odolného proti mnoha léčivům „multi drug resistent gene“). Odolnost proti mnoha léčivům je obvyklý termín týkající se odolnosti nádoru proti různým sloučeninám, které mají různé struktury a mechanismy působení. O toxoidech je obecně známo, že jsou vysoce rozeznávané pokusnými nádory, jako je P388/DOX, což je P388 linie myších leukemických buněk selektovaná na rezistenci k doxorubicinu (DOX), který má mdr 1. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou méně rozpoznané P388/DOX. přesněji jsou sloučeniny méně rozpoznané, než Taxotere® o mdr 1.

Sloučeniny vzorce I se zejména používají pro přípravu léčiva pro léčení abnormální proliferace buněk v mozku.

-9CZ 293959 B6

Sloučenina a hlavně sloučenina vzorce I, kde R4 a R₅ jsou obě methoxyskupina, prochází přes bariéru krev-mozek. Je aktivní v porovnání s dalšími známými taxoidy, jako je Taxol® a Taxotere®, pokud jde o léčení nádorů mozku.

Sloučenina vzorce I se může použít současně s nejméně jednou další terapeutickou léčbou. Je výhodnější použít ji s další terapeutickou léčbou zahrnující antineoplastická léčiva, monoklonální protilátky, uminoterapie, radioterapie nebo látkami modifikujícími biologickou odezvu. Z lymfokinů a cytokinů modifikujících biologickou odezvu se s výhodou použijí interleukiny, a, β, nebo δ interferony a TNF.

Sloučenina vzorce I se s výhodou podává parenterálně, například nitrožilně, intraperitoneálně, intramuskulámě nebo subkutánně.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

1. Úvod

Sloučenina vzorce laje na preklinických modelech účinným protirakovinným činidlem.

Zde jsou uvedeny analytické výsledky získané z farmakokinetické studie u myši při podání jedné dávky i.v.

Skupina samic myší C3H/HeN dostane sloučeninu nitrožilní cestou jako bolus v množství 40 mg/kg, což odpovídá 120 mg.m’². Vzorky krve a mozku se získají od všech dávkovaných zvířat usmrcených v intervalech až 72 hodin po dávce. Vzorky mozku a odpovídající vzorky plazmy se testovaly na obsah sloučeniny Ia pomocí testu LC-MS/MS.

2. Způsoby

Prostředek: 2,25 mg/1 rozsah obsahující 5 % Polysorbátu 80, 5 % ethanolu a 90 % vodného 5% roztoku glukózy.

Padesáti šesti samicím C3H/HeN myší o hmotnosti asi 20 g se každé podává sloučenina II pomocí i.v. bolu prostřednictvím ocasní žíly v injektovaném objemu 0,4 ml za celkové dávky 40 mg.kg’¹.

Vzorkování krve a tkáně:

Vzorkování: Krev pomocí srdeční punkce a játra a mozek pomocí pitvy po usmrcení oxidem uhličitým.

Časy odebírání vzorků: v 2, 5, 15, 30, 45 minutě, 1, 2, 4, 6, 8, 14,24,48 a 72 hodině po podání.

Úplná krev se odebere do heparinovaných zkumavek a odpovídající vzorky plazmy se získají odstředěním a zmrazením okamžitě na -20 °C. Tkáně se vysuší, zváží a zmrazí okamžitě na -20 °C. Všechny vzorky se odešlou k analýze zmražené. Podle předpisu se vzorky skladují při analýze zmražené na-18 °C.

LC-MS/MS analýza vzorků mozku a plazmy

Detekce: LC-MS/MS (Sciex API III plus) v tubro-spray módu

-10CZ 293959 B6

Použijí se následující podmínky hmotové spektroskopie:

Průtok nosného plynu 6 1/min.

Průtok plynu zmlžovače 0,6 1/min.

Turbo teplota 450 °C.

CGT 300 Plyn clony průtok 0,61/min Doba skenu 1 sken/sek Eluční dělicí poměr 1:10

Kolona: 75 x 4,6 mm Supelcosil ABZ plus (3 pm).

Mobilní fáze: acetonitril/methanol/octan amonný (10 mM); 40/25/35 objem/objem/objem.

Průtok: 1 ml/min.

Teplota: okolní.

Extrakce: Plazma: K 50 μΐ vzorku se přidá 100 μΐ acetonitrilu. Promíchá se, odstředí se, supernatant se vyjme, přidá se 100 μΐ mobilní fáze a nastříkne se 150 μΐ.

Mozek: K homogenizonanému vzorku (100 mg mozku s vodním homogenátem 1:1 hmotnostně) se přidá 100 μΐ acetonitrilu a promíchá se. Přidá se 1 ml diethyletheru, promíchá se, odstředí, odebere se organická vrstva a suší se nad dusíkem. Zrekonstruuje se v 200 μΐ mobilní fáze a nastříkne se 150 μΐ.

Kalibrační standardy: Plazma: Připraví se devět koncentrací 5, 10, 20, 50, 100, 200, 300, 400 a 500 ng/ml (sloučenina Ia). Připraví se přidáním vhodných alikvotů produktu (koncentrace = 0,1, 1 nebo 10 pg/ml) vethanolu k 0,5ml alikvotům plazmy myší. Každý vzorek se po přidání léku promíchá; pro test se odeberou alikvoty 50 μΐ.

Mozek: Připraví se jedenáct koncentrací 10, 20, 30, 100, 200, 300, 400, 500, 1000, 2500, a 5000 ng/g homogenizovaného mozku myši (1:1) hmotnostně mozek s vodou). Připraví se přidáním vhodných alikvotů produktu (koncentrace = 1, 10 nebo 100 pg/ml) vethanolu k 0,5, 1, 3 nebo 4 g homogenizovaného myšího mozku. Všechny vzorky se po přidání léčiva promíchají a pro test se odeberou 100 mg alikvoty.

Retenční časy: Léčivo; sloučenina Ia: ~ 2,3 minuty.

Účinnost extrakce: Plazma: asi 58 % při 200 ng/ml.

Mozek: asi 41 % při 500 ng/g a 39 % při 1000 ng/g.

3. Výsledky

3.1 Hladiny v plazmě

Následující tabulka obsahuje hladiny sloučeniny Ia v plazmě pozorované po i.v. podání sloučeniny Ic v dávce 40 mg/kg myším.

-11 CZ 293959 B6

Tabulka 1:

Předběžné koncentrace sloučeniny vzorce Ia v plazmě po i.v. podání 40 mg/kg myším

Čas po dávce (hod)	Koncentrace látky Ic v plazmě (ng/ml)
IV1	IV2	IV3	IV4	Průměr	± s.o.
2 min	52987	45942	49607	38994	46882	5994
5 min	36734	33538	32077	34903	34313	1984
15 min	20493	20897	21051	19459	20475	717
0,5 hod	10765	10344	9170	11232	10378	883
0,75 hod	7133	10948	8121	10148	9087	1764
1 hod	6017	7423	6693	6079	6553	655
-	4633	4337	4600	3564	4283	498
4 hod	1092	1110	835	830	962	150
6 hod	449	316	346	336	362	59
8 hod	204	199	195	154	188	23
14 hod	65	56	50	52	56	7
24	18 (blq)	15 (blq)	15 (blq)	16 (blq)	16	1
48	4 (blq)	n.d.	n.d.	4 (blq)	♦“» Λ	2
72	n.d.	n.d.	n.d.	n.d.	—	n.a.

n.a.: nepoužitelné,

n.d.: nedetekováno (< l.o.d. 4 ng/ml), blq.: pod limitem přesného stanovení (20 ng/ml).

o

3.2 Hladiny v mozku

Následující tabulka obsahuje celkové hladiny sloučeniny Ia v mozku pozorované po i.v. podání sloučeniny Ia v dávce 40 mg/kg myším.

- 12CZ 293959 B6

Tabulka 2

Předběžné koncentrace produktu Ic v mozku po i.v. podání 40 mg/kg myším

Čas po dávce (hod)	Koncentrace látky Ic v mozku (ng/g)
IV1	IV2	IV3	IV4	Průměr	± s .o.
2 min	6962	8817	8147	7630	7889	786
5 min	8344	8473	7762	8091	8167	313
15 min	5809	710 0	7641	6481	6758	791
0,5 hod	7262	6788	8317	6894	7315	698
0,75 hod	7675	8086	7513	7272	7637	342
1 hod	6424	8964	1747	7489	6156	3118
2 hod	7956	8418	6966	7017	7589	716
4 hod	7909	6939	6712	5459	6755	1008
6 hod	6688	7968	7350	3712	6430	1886
8 hod	9067	6977	8616	8342	8250	900
14 hod	9618	10048	7595	9271	9133	1074
24	7905	9842	7885	9052	8671	952
48	6660	8541	7704	7986	7723	789
72	5899	5511	5692	3894	5249	917

n.a.: nepoužitelné,

n.d.: nedetekováno (< l.o.d. 92 ng/g).

3.3 Farmakokinetické parametry

Následující tabulka obsahuje předběžné farmakokinetické parametry pro sloučeninu Ic získané po i.v. podání 40 mg/kg myším vypočtené pomocí průměrných údajů o hladině vplazmě a mozku.

Tabulka 3

Předběžné průměrné farmakokinetické údaje

Vzorek	AUC₀._M (h.pg.ml’¹ nebo g'¹’	CIT (l.h^.kg'¹)	Vdss (l.kg-¹)	Počátek T_l/2 (h)	Konec T_l/2 (h)
Plazma+	30,0	1,3	1,9	0,7	6,2
Plazma#	29,8	1,3	2,4	0,2	2,0
Mozek	787,8*	n.a.	n.a.	—	31,4

+ vypočteno z hodnot > l.o.d. 4 ng/ml, # vypočteno z hodnot > b.l.q. 20 ng/ml, * dopovídá AUCo_72h = 549,7 h.pg.g'¹

Dvouexponenciální rovnice byla proložena profily za použití interaktivního lineárního algoritmu nejmenších čtverců, který je součástí balíku SIPHAR. AUC se vypočten pomocí lichoběžníkového pravidla od času 0 do obou časů poslední hodnoty, která byla rovna nebo vyšší, než l.o.d.

-13CZ 293959 B6 + (4 ng-ml’¹) nebo l.o.q. # (20 ng.ml’¹) pro plazmu a až 72 hodin po dávce pro mozek a potom se extrapoluje na nekonečno.

Vysvětlivky:

AUCo-»: Plocha pod křivkou koncentrace v plazmě nebo mozku proti času t=0 (začátek infuze) do nekonečna.

Počátek T1/2: Počáteční (distribuce) poločasu rozpadu.

Konec T1/2: Koncový (eliminace) poločasu rozpadu (může se považovat za odhad, který je závislý pouze na frekvenci vzorkování v koncové fázi a citlivost testu).

C1_T: Celková clearance plazmy.

Vdss: Objem distribuce v rovnovážném stavu.

n.a.: neaplikovatelné.

4. Závěry • Hladiny sloučeniny Ic byly vysoké, jak je možno očekávat poi.v. dávce 40 mg/kg, ale klesaly rychle od maxima na 2 minutách (průměr 46,9 pg/ml) na méně než 1 pg/ml během 4 hodin (původní poločas rozpadu < 0,7 hod). Avšak hladiny přetrvávající výše jsou omezeny přesností stanovení (20 ng/ml) až 14 hodin po dávce a limitem detekce (4 ng/ml) až 24 hodin po dávce.

• Z detekovatelných hladin v plazmě (> 4 ng/ml) se vypočte konečný poločas rozpadu 6,2 hodiny. Je však třeba poznamenat, že konečný poločas rozpadu je v tomto případě velmi závislý na citlivosti testu a pokud se použijí pro výpočet farmakokinetických parametrů hladiny nad limitem přesnosti stanovení (20 ng/ml), potom spadá konečný poločas rozpadu do 2,0 hod.

Bylo určeno, že střední clearance v plazmě je 1,3 1/h.kg, což je významná část středního průtoku plazmy v játrech (vzhledem k průměrnému průtoku krve játry asi 5,2 1/h.kg).

• Při tomto druhu post i.v. podávání se ukázalo že, sloučenina Ic snadno prochází přes bariéru krev mozek. V prvním vzorkovacím čase byly zjištěny vysoké hladiny (7,9 pg/g ve 2 minutách), což naznačuje rychlou absorpci do této tkáně. Ačkoli byly pozorovány maximální hladiny 9,1 pg/g ve 14 hodinách, vysoké hladiny zůstaly až do posledního času vzorkování (5,3 pg/g v 72 hodinách). Není překvapení, že se látka pomalu odstraňuje z mozku při poločase rozpadu 31,4 hodiny. Na základě hodnot AUCo_« (788 h.pg/g proti 30 h.pg/g) jsou hladiny sloučeniny Ia v mozku asi dvacetkrát vyšší, než v plazmě.

Příklad 2

Hodnocení protinádorové aktivity sloučeniny Ia proti intrakraniálně implantovanému lidskému glyoglastomu U251 a SF-295 u myší NCr-nu

Pro hodnocení odezvy U251 a SF-295 glioblastomů na léčení sloučeninou Ia byly provedeny dvě studie. Při obou studiích se glyoblastomy U251 a SF-295 iniciovaly z intrakraniálně implantovaných buněk v objemu 10⁶ buněk na myš. Rozvrh léčby intrakraniálně implatovaných buněk glioblastomů U251 byl i.v., jednou denně, každý šestý den tři léčení (q6d x 3), přičemž byla

- 14CZ 293959 B6 léčba zahájena ve dni čtyři po implantaci. Rozvrh léčby intrakraniálně implantovaných buněk glioblastomu SF-295 byl i.v., jednou denně, každý čtvrtý den po třech léčbách (q4d x 3), přičemž se léčba zahájila ve dni dva po implantování. Při studii intrakraniální implantace se u sloučenin hodnotila jejich schopnost zvýšit délku života zvířat. V obou těchto případech se jako pozitivní kontrola použily modely těchto nádorů za léčení nitrosomočovinou.

Cílem těchto pokusů bylo zhodnotit protinádorový účinek sloučeniny Ia na modelech lidského glyoblastomového nádoru.

Při těchto pokusech se obecné techniky a postupy DCTD, NCI studií in vivo účinnosti upravily pro zvláštní aplikaci (In Vivo Cancer Models, NIH Publication č. 84-2635,1984). Tyto studie se prováděly pomocí ověřených přístupů (AAALAC registrační číslo 000634, AALAS členství č. 840723001, USDA reg. číslo 64-R-001, OPPR, PHS, NIH, AWA, č. ověření A3046-01). Tyto postupy jsou certifikovány ISO 9001. Výborem provádějícím dohled byl Southern Research Institutional Animal Care and Use Committee; použil se postup IACUC č. 96-8-50.

Roztoky:

Sloučenina Ia se připraví v 5 % ethanoíu, 5 % tween 80, 90 % D5W.

Nitrosomočovina se připraví v roztoku 2 % ethanoíu, 98 % fyziologického šalinu.

Dávkovači přípravky: Všechny dávkovači roztoky byly připraveny vSouthem Research Institute.

Podávání sloučenin: Sloučenina Ia se podává v 0,4 ml/myš vzhledem k celkovému průměru tělesné hmotnosti.

Nitrosomočovina se podává v 0,1 ml/10 g tělesné hmotnosti.

Stabilita sloučeniny: Sloučenina Ia byla skladována na ledu a podávána během 20 minut po přípravě.

Nitrosomočovina byla skladována na ledu a podávána během 45 minut po přípravě.

Podmínky skladování: Všechny sloučeniny byly skladovány v chlazených exsikátorech.

Opatření při manipulaci: Se sloučeninami se manipulovalo podle postupů vyžadovaných Safety Committee of Southern Research Institute. Všichni technici měli při podávání sloučenin úplné oblečení, rukavice a obličejové roušky a bezpečnostní brýle.

Všechna intrakraniálně implantovaná zvířata, u kterých bylo zřejmé, že umírají, byla usmrcena humánními prostředky. Protože studie účinnosti patří do této kategorii základního výzkumu, bylo ukončení pokusu založeno na výsledcích, které byly stanoveny jako optimální.

Druhy: Pro testy s intrakraniálně implantovaným U251 se použije šest osm týdnů starých athymických samic myší NCr-nu. Pro testy s intrakraniálně implantovaným SF-295 se použije šest osm týdnů starých athymických savců myší NCr-nu.

Odůvodnění: Pro množení lidských nádorových xenoštěpů, které jsou cílovou tkání pro vyvinuté sloučeniny, jsou potřeba imunodeficientní myši.

Zdroj: FCRDC (Animal Production Area), Frederick, MD pro testy s intrakraniálně implantovaným SF-295; Taconic Animal Farms, Germantown, NY pro testy s intrakraniálně implantovaným U251.

-15CZ 293959 B6

Počet a pohlaví: Celkem 160 samců se použilo pro testy s intrakraniálně implantovaným SF-295; celkem 154 samic se použilo pro testy s intrakraniálně implantovaným U251.

Hmotnost a věk: Na začátku každého testu se uvažovaly průměrné hmotnosti. Průměrná hmotnost myši s intrakraniálně implantovaným glioblastomem U251 byla 21 až 22 g. Průměrná hmotnost myši s intrakraniálně implantovaným glioblastomem SF-295 až 24 až 25 g.

Identifikace zvířat: Standardní ušní značky.

Karanténa: Všechny zvířata byla sedm dní před začátkem testu pozorována.

Držení a hygiena zvířat: Zvířata byla držena v izolovaných klecích uzavřených filtrem, po pěti na klec. Klece a stelivo se měnily dvakrát týdně.

Krmení a voda: Myši podávaly podle libosti Teklad Sterilizable 8656 Mouše Diet (Harlan Teklad). Také dostávaly filtrovanou vodu z koutku podle libosti.

Prostředí: Myši byly drženy podle SRI standardních pracovních podmínek ověžených IACUC výborem.

Při této studii se provedly dva pokusy (RP-36 a RP-38).

Jak bylo uvedeno výše, pomocí tohoto testu se hodnotila aktivita sloučeniny Ia proti intrakraniálním U251 a SF-295 glioblastomům u athymických myší MCr-nu. dávkování sloučeniny Ia bylo 30, 20 a 13,4 mg/kg/dávka. Pro oba pokusy s inrakraniální implantací byly buňky připraveny v koncentracích 3,33 x 10⁷ buněk na ml média a injektovány v objemu 0,03 ml na myš. Buňky byly injektovány do mozku napravo od středu nerezovou jehlou o velikosti 25, 3/8 palce. Pro pokus s U251 (RP-36) se použily kultivované buňky. Rozvrh léčení byl q6d x 3, iv, začátek ve dni 4 po implantaci. Pro pokus se SF-295 (RP-38) byl použit nádorový homogenát získaný z pevného nádoru. Rozvrh léčení byl q4d x 3, iv, začátek 2 dny po implantaci. Nitrosomočovina se podávala při každém testu pro srovnávací účely, protože je známá svou protinádorovou aktivitou. Dávkování bylo 27, 18 a 12 mg/kg/dávka a rozvrh léčby byl stejný, jako rozvrh při léčení produktem Ia při každém pokusu.

Při prvním pokusu (RP-36) byla každá sloučenina účinná při léčení intrakraniálně implantovaného glioblastomu U251. Léčení sloučeninou Ia vedlo k přežití pěti z deseti, čtyř z deseti a tří z deseti za 122 dní a ILS 176 %, 202 % a 144 % v tomto pořadí, pro skupinu dávkovanou 30, 20 (MTD) a 13,4 mg/kg/dávka. Léčení nitrosomočovinou vedlo kILS 205 % a 51 % u skupin dávkovaných 18 a 12 mg/kg/dávka, v tomto pořadí. Ve skupině dávkované 27 (MTD) a 18 mg/kg/dávka přežilo deset z deseti a sedm z deseti 122 dní.

Při druhém pokusu (PR-38) byla každá sloučenina účinná při léčení intrakraniálně implantovaného SF-295 glioblastomu. Léčení sloučeninou Ia při 30, 20 a 13,4 (MTD) mg/kg/dávka vedlo kILS -9%, 94% a 81% v tomto pořadí. Byla zjištěna určitá toxicita při dávkách 30 a 20 mg/kg/dávka, což bylo zřejmé z průměrného úbytku hmotnosti 7 g a 6 g během léčby. Ze skupiny dávkované 13,4 mg/kg/dávka přežilo 68 dní jedno z deseti zvířat. Nitrosomočovina byla toxická při vyšších dávkovaných hladinách 27 mg/kg/dávka, což bylo zřejmé z průměrného úbytku hmotnosti 7g během doby léčení. Léčení nitrosomočovinou v dávkách 27, 18 a 12 mg/kg/dávka vedlo kILS 50%, 131 % a 106%, v tomto pořadí. Při dávkované hladině 27 (MTD) mg/kg/den přežila dvě zvířata z deseti 68 dní a při dávkování 18 mg/kg/den přežilo jedno zvíře z deseti 68 dní.

Sloučenina Ia byla testována proti intrakraniálně implantovaným glioblastomům U251 a SF-295. Tato sloučenina byla aktivní proti těmto dvěma nádorovým kmenům ve všech implantovaných místech.

-16CZ 293959 B6

ODEZVA IC IMPLANTOVANÉHO GLIOBLASTOMU U251 NA LÉČBU SLOUČENINOU IA

XJ CO 2 a N O L o

o o rH o

II £ (U •n

oV⁵	'>Ί
				d
		o		<0
		<Ti		>
	•H			0
	xJ	O		xJ
	m	co		X
	0			(1)
	g	d		-m
	XJ	o		d
	0	o		•H
	E	5
	X	XJ		·-
	MU
	d			XJ
	CO	cn		to
	<d			0
	rH	X		Cl
	>CL)	O		N
	XJ	XJ		0
		ω		μ
	CTI
o		dr
•H	o			c
c	r*4	in		-rH
o				r~H
o	o	>		ιΰ
d	u			co
X)		ΐ^-1		\
	rH			X
Z¹	-	*		o
E	O	>o		XJ
				Cd
(0	II	XJ
		0		dP
	E	r—1
1	<D	N		cx
Φ	J3
O	0	rú
•rH		C		CJ
E		<u
Π5	d	>
CO	<CJ	.13		*
>	d		XJ
1	0	Oj
	XJ	•r\|		XJ
3	X	>kl		0
d	(U			í—l
1	-Γ-Ι			N
	d
O	Ή	<—I
Z		rH	0	'd
		l£>	CJ	d
•H		CJ		OJ
>co	•H	fx.		>
	r-H	cq		<0
E	(0		O
		0		£1
Ml!		X.	II	•rl
	K	>		>d
CJ	o		E	Cl
•H	XJ	Ό	<D
	Cd		•o	f3
		-	,Q	r;
r*	□¥>	fO	0	Ή
u		l-t		>
íú	Ol		'>1	0
		<CJ	d	>0
...	w	d	«5	0
CO	Ifl	•H	>	c
ΟΪ	1—1	d	0	O
	0	o	XJ	CO
		>0	Λί	0
r—1	XJ	33	<υ	Sh
	d	0	-Γ-»	x>
CO	0	rH	d	Ή
O	>3	CQ	Ή	Z

xj ’Λ

C xj O E x:

f—í

XJ σ>

Poznámka 1) Píro výpočet nebyli použiti jedinci přeživší 122 dní. Průměry vypočteny za použití všech mrtvých

2) S = usmrceno, umírající zvíře (použito při výpočtu).

-17CZ 293959 B6

ODEZVA IC IMPLANTOVANÉHO GLIOBLASTOMU SF-295 NA LÉČBU SLOUČENINOU IA

-H XJ

CO O β XJ o 'Φ c to φ rH >Φ XJ

CD

0
	rd υ
0	υ
O XJ	γ-1
β	-
Φ	ο
O XJ β	II ε
Φ	φ
ε	•η
04	Λ
0	0
i—I Φ	'>·.
>	β
Φ	Φ
Q	>
Λ	Ο XJ
Ο	24
Η	Φ
«3	ο
Φ	C
ω	•Η
Φ
Η	α Ή
φ	ι—1
υ	d
Γ4	ω
Φ
Ο	►X
υ	Ο Ο
Η	Cd
φ	οΡ
Ό Φ	CN
&4
1	id r—(
•Η	0 Μ
υ	XJ
Ε	β
rd	0
co

3= in Q oV o

(Ti o

C φ a)

XJ oV m

x O xj Cd oV in ťd >u

XJ O

Hl & ω «5 β v > <0 a rd r4 kO u C14 ffl tú > v-3 b d

•r4 d Φ >U

O r~1 cn xj to 0 CL. N O

U u o

φ ·,—1 Λ

O '>1 c <ΰ > O XJ X (U •o β •H β •H ř-4 <tí CO π o XJ Cd oV>

CN i

CN >0

XJ O

H

Dí CO 'CtJ β <U > tO

CL. H co

XJ O to 0 tu o XJ w Ή ca

Π5

XJ to o >4

XJ (rpzpust.); injektovaný objem = 0,1 cc/10 g těl. hmotnosti.

Poznámka 1) Pro výpočet nebyli použiti jedinci přeživší 68 dní. Průměry vypočteny za použití všech mrtvých

2) S — usmrceno z důvodu paralýzy (použito při výpočtu).

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Použití taxoidního derivátu obecného vzorce I, ve kterém

Z je atom vodíku nebo skupina obecného vzorce II, (II), ve kterém:

Ri je

- benzoylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více stejnými nebo různými atomy nebo skupinami vybranými ze skupiny, kterou tvoří atomy halogenu a alkylové skupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo trifluormethylové skupiny;

- thenoylová skupina nebo furoylová skupina nebo

- skupina Ro-O-CO-, kde R₂ je alkylová skupina obsahující 1 až 8 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, alkynylová skupina obsahující 3 až 8 atomů uhlíku, cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, cykloalkenylová skupina obsahující 4 až 6 atomů uhlíku nebo bicykloalkylová skupina obsahující 7 až 10 atomů uhlíku, tyto skupiny jsou popřípadě substituované jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří atomy halogenu a hydroxylová skupina, alkoxyskupina obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, dialkylaminoskupina, ve které alkylové části obsahují 1 až 4 atomy uhlíku, piperidinoskupina

-19CZ 293959 B6 nebo morfolinoskupina, 1-piperazinylová skupina popřípadě substituovaná v poloze 4 alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylalkylovou skupinou obsahující v alkylové části 1 až 4 atomy uhlíku, cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, cykloalkenylová skupina obsahující 4 až 6 atomů uhlíku, fenylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více atomy nebo skupinami vybranými z atomů halogenu a alkylových skupin obsahujících 1 až 4 atomy uhlíku nebo alkoxyskupin obsahujících 1 až 4 atomy uhlíku, kyanoskupina nebo karboxylová skupina nebo alkoxykarbonylová skupina, ve které alkylová Část obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku,

- fenylová skupina nebo a- nebo β-naftylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více atomy nebo skupinami vybranými z atomů halogenu a alkylových skupin obsahujících 1 až 4 atomy uhlíku nebo alkoxyskupin obsahujících 1 až 4 atomy uhlíku nebo

- pětičlenná aromatická heterocyklická skupina s výhodou vybraná z furylové a thienylové skupiny,

- nebo nasycená heterocyklická skupina obsahující 4 až 6 atomů uhlíku, popřípadě substituovaná jednou nebo více alkylovými skupinami obsahujícími 1 až 4 atomy uhlíku,

R3 je nerozvětvená nebo rozvětvená alkylová skupina obsahujíc 1 až 8 atomů uhlíku, nerozvětvená nebo rozvětvená alkenylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, nerozvětvená nebo rozvětvená alkynylová skupina obsahující 2 až 8 atomů uhlíku, cykloalkylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, fenylová nebo a- nebo β-naftylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více atomy nebo skupinami vybranými ze skupiny, kterou tvoří atomy halogenu a alkylová skupina, alkenylová skupina, alkynylová skupina, arylová skupina, arylalkylová skupina, alkoxyskupina, alkylthioskupina, aryloxyskupina, arylthioskupina, hydroxylová skupina, hydroxyalkylová skupina, merkaptoskupina, formylová skupina, acylová skupina, acylaminoskupina, aroylaminoskupina, alkoxykarbonylaminoskupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, karboxylová skupina, alkoxykarbonylová skupina, karbamoylová skupina, alkylkarbamoylová skupina, dialkylkarbamoylová skupina, kyanoskupina, nitroskupina a trifluormethylová skupina, nebo pětičlenný aromatický heterocyklus obsahující jeden nebo více stejných nebo různých heteroatomů vybraných ze skupiny, kterou tvoří atom dusíku, atom kyslíku a atom síry a popřípadě substituovaný jedním nebo více stejnými nebo různými substituenty vybranými ze skupiny, kterou tvoří atomy halogenu a alkylová skupina, arylová skupina, aminoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, alkoxykarbonylaminoskupina, acylová skupina, arylkarbonylová skupina, kyanoskupina, karboxylová skupina, karbamoylová skupina, alkylkarbamoylová skupina, dialkylkarbamoylová skupina nebo alkoxykarbonylová skupina, přičemž se rozumí, že v substituentech fenylové skupiny, a-nebo β-naftylové skupiny a aromatické heterocyklické skupiny obsahují alkylové skupiny nebo alkylové části jiných skupin 1 až 4 atomy uhlíku a že alkanylové a alkynylové skupiny obsahují 2 až 8 atomů uhlíku a že arylové skupiny jsou fenylová skupina nebo a- nebo β-naftylová skupina,

-20CZ 293959 B6

R4 je alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku v nerozvětveném nebo rozvětveném řetězci, alkenyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku v nerozvětveném nebo rozvětveném řetězci, alkynyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku v nerozvětveném nebo rozvětveném řetězci, cykloalkyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku nebo cykloakenyloxyskupina obsahující 4 až 6 atomů uhlíku, tyto skupiny jsou popřípadě substituované jedním nebo více atomy halogenu nebo alkoxyskupinami obsahujícími 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupinami obsahujícími 1 až 4 atomy uhlíku nebo karboxylovými skupinami, alkyloxykarbonylovými skupinami, které v alkylové části obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, kyanoskupinami nebo karbamoylovými skupinami nebo N-alkylkarbamoylovými skupinami nebo Ν,Ν-dialkylkarbamoylovými skupinami, jejichž každá alkylová část obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku nebo společně s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, tvoří nasycený pětičlenný nebo šestičlenný heterocyklický zbytek popřípadě obsahující druhý heteroatom vybraný z atomu kyslíku, atomu síry nebo atomu dusíku, popřípadě substituovaný alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinou nebo fenylalkylovou skupinou, ve které obsahuje alkylová část 1 až 4 atomy uhlíku,

Rs je alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku v nerozvětveném nebo rozvětveném řetězci, alkyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, alkenyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, cykloalkyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, cykloalkenyloxyskupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, tyto skupiny jsou popřípadě substituované jedním nebo více atomy halogenu nebo alkoxyskupinami obsahujícími 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupinami obsahujícími 2 až 4 atomy uhlíku nebo karboxylovými skupinami, alkyloxykarbonylovými skupinami, které v alkylové části obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, kyanoskupinami nebo karbamoylovými skupinami nebo N-alkylkarbamoylovými skupinami nebo Ν,Ν-dialkylkarbamoylovými skupinami, jejichž každá alkylová část obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku nebo společně s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, tvoří nasycený pětičlenný nebo šestičlenný heterocyklický zbytek popřípadě obsahující druhý heteroatom vybraný z atomu kyslíku, atomu síry nebo atomu dusíku, popřípadě substituovaný alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinou nebo fenylalkylovou skupinou, ve které obsahuje alkylová část 1 až 4 atomy uhlíku, kteiý prostupuje hematoencefalitickou bariérou, nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli nebo solvátu, pro přípravu léčiva k léčení abnormální buněčné proliferace v mozku.
2. Použití podle nároku 1 sloučeniny obecného vzorce I, kde Z je atom vodíku nebo skupina obecného vzorce II, kde R_t je benzoylová skupina nebo skupina vzorce R₂-O-CO-, kde R₂ je terc-butylová skupina a R₃ je alkylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, alkenylová skupina obsahujíc 2 až 6 atomů uhlíku, cykloakylová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku, fenylová skupina popřípadě substituovaná jedním nebo více stejnými nebo různými atomy nebo skupinami vybranými ze skupiny, které

-21 CZ 293959 B6 tvoří atomy halogenu a alkylová skupina, alkoxyskupina, dialkylaminoskupina, acylaminoskupina, alkoxykarbonylaminoskupina nebo trifluormethylová skupina nebo 2- nebo 3-furylová skupina, 2- nebo 3-thienylová skupina nebo 2-, 4- nebo 5-thiazolylová skupina a R4 a R₅ které mohou být stejné nebo různé, jsou každá nerozvětvená nebo rozvětvená alkoxyskupina obsahující 5 1 až 6 atomů uhlíku.
3. Použití podle nároku 2 sloučeniny obecného vzorce I, kde Z je atom vodíku nebo skupina obecného vzorce II, kde Ri je benzoylová skupina nebo skupina R₂-O-CO-, kde R₂ je tercbutylová skupina a R3 je izobutylová skupina, izobutenylová skupina, butenylová skupina, cyklo10 hexylová skupina, fenylová skupina, 2-furylová skupina, 3-furylová skupina, 2-thienylová skupina, 3-thienylová skupina, 2-thiazolylová skupina,
4-thiazolylová skupina nebo
5-thiazolylová skupina a R4 a R5, které mohou být stejné nebo různé, jsou každá methoxyskupina, ethoxyskupina nebo propoxyskupina.

15 4. Použití 4a-acetoxy-2a-benzoyloxy-5p,20-epoxy-lp-~hydroxy-73,10(3-dimethoxy-9oxo-11-taxen-l 3a-yl-(2R,3 S)-3-terc-butoxykarbonylamino-2-hydroxy-3-fenylpropionátu, který prostupuje hematoencefalickou bariérou, pro přípravu léčiva pro léčení abnormální buněčné proliferace v mozku.

20 5. Použití podle nároků 1 až 4, kde abnormální buněčnou proliferací je rakovina mozku.
6. Použití podle nároků 1, kdy je léčivo ve formě pro parenterální podávání.
7. Použití podle nároků 6, kdy je léčivo ve formě pro nitrožilní, intraperitoneální, intramusku25 lámí nebo subkutánní podávání.