CZ292131B6 - Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení - Google Patents
Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení Download PDFInfo
- Publication number
- CZ292131B6 CZ292131B6 CZ2000537A CZ2000537A CZ292131B6 CZ 292131 B6 CZ292131 B6 CZ 292131B6 CZ 2000537 A CZ2000537 A CZ 2000537A CZ 2000537 A CZ2000537 A CZ 2000537A CZ 292131 B6 CZ292131 B6 CZ 292131B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- peptide
- desmopressin
- resin
- protected
- cleavage
- Prior art date
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Synthetick analogy Desmopressinu chr n n v C-termin ln sekvenci proti karboxyamidasov mu Üt pen obecn ho vzorce I, kde A je [D-Arg]GlyNHR (l tka 1) nebo [D-Arg]NHR (l tka 2), kde R je alkyl obsahuj c 1 a 4 atomy uhl ku. Vyr b se tak, e na prysky°ici obsahuj c nav zan funk n skupiny obecn ho vzorce NHR-CH.sub.2.n., kde R je alkyl obsahuj c 1 a 4, zejm na 2 atomy uhl ku, se p sob hydroxybenztriazolov²m esterem N-chr n n p° sluÜn aminokyseliny sekvence Desmopressinu a po ukon en cel ho po adovan ho peptidu se peptid s prysky°ic vysuÜ , uvoln se z prysky°ice spolu s chr nic mi skupinami sm s fluorovod ku s anizolem, peptid se rozpust ve z°ed n kyselin octov , lyofilizuje a provede se jeho cyklizace uzav°en m disulfidick ho m stku, na e se izoluje, zejm na vysoko· innou kapalinou chromatografi .\
Description
Vynález se týká synthetických analogů Desmopressinu vzorce
Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-[D-Arg]-GlyNH2 I i chráněných v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení.
Dosavadní stav techniky
Desmopressin (INN), synthetický analog peptidového hormonu vasopresinu, přirozené látky nacházející se v zadním laloku hypofýzy (přívěsku mozkového), je využíván v substituční léčbě Diabetes insipidus. Jeho účinek je závislý na farmaceutické formě, ve které je podáván. Při perorálním podání v tabletách je využita k biologickému účinku jen nepatrná část léčiva, a to zřejmě z několika důvodů, jako je biodostupnost látky k ledvinným receptorům přes intestinální stěnu a potenciální inaktivace především v gastrointestinálním traktu. Synthetické obměny provedené v molekule peptidu (náhrada cysteinu kyselinou merkaptopropionovou a záměna L-formy argininu D-stereoisomerem) zvýšily jak lipofilitu látky, tak její metabolickou stabilitu. Karboxyterminální část řetězce je již záměnou L-argininu D-argininem chráněna proti štěpení trypsinem nebo enzymy s podobnou aktivitou. Zůstává však amidická vazba koncového glycinu, která je přístupná působení karboxyamidopeptidasy odštěpující koncový glycinamid. Následkem působení tohoto enzymu vzniká DesGlyNH2 peptid, který je funkčně neaktivní. Byly připraveny analogy Desmopressinu, které byly modifikovány v karboxyterminální části peptidu tak, aby byla eliminována hydrolysa amidické vazby glycinamidu resp. odštěpení glycinamidu enzymy karboxyamidasového charakteru.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení, obecného vzorce I
Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-A
L_____________________________________I (I) kde A je [D-Arg]GlyNHR (látka 1) nebo [D-Arg]NHR (látka 2), kde R je alkyl obsahující 1 až 4 atomy uhlíku.
Synthetické analogy Desmopressinu se vyrábí tak, že na pryskyřici obsahující navázané funkční skupiny obecného vzorce NHR-CH2', kde R je alkyl obsahující 1 až 4, zejména 2 atomy uhlíku, se působí hydroxybenztriazolovým esterem N-chráněné příslušné aminokyseliny sekvence Desmopresinu a po ukončení celého požadovaného peptidu se peptid s pryskyřicí vysuší, uvolní se z pryskyřice spolu s chránícími skupinami směsi fluorovodíku s anizolem, peptid se rozpustí ve zředěné kyselině octové, lyofilizuje a provede se jeho cyklizace uzavřením disulfidického můstku, načež se izoluje, zejména vysokoúčinnou kapalinou chromatografií.
»1
Příklady provedení
Vysvětlení zkratek:
Mpa Boc Acm
Tyr(Cl2-Bzl) Trt DIEA DCM HOBt ester
DCC DMF DMAP TFA RP-HPLC
MS
CZE
Kyselina β -merkaptopropionová, t-Butoxylcarbonyl,
Acetamidomethyl,
Dichlorbenzyl-tyrosin,
Trityl,
Diisopropylethylamin,
Dichlormetan,
Hydroxybenztriazolový ester
Dicyklohexyl karbodiimid,
Dimethylformamid,
Dimethylaminopyridin,
Kyselina trifluoroctová,
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie na reversní fázi, hmotová spektrometrie kapilární zonová elektroforesa
Příklad 1
Látka 1 byla synthetisována metodou na pevné fázi dle Merrifielda. K synthese byla použita speciální pryskyřice NH(Et)-CH2-nosič (substituce 0,83 mmol/g pryskyřice). Jako semipermanentní chránění byla použita tertbutyloxykarbonylová skupina (Boc). Postranní řetězce byly chráněny takto: Mpa a Cys skupinou Acm. Tyr(2-Br-Z), Asn(Trt), De-Arg(Tos). Synthesa byla 30 prováděna v 0, 3mmol měřítku. Byl použit následující protokol synthesy:
1. Neutralizace pryskyřice 10 % DIEA v DCM, dvakrát po pěti minutách. 2. Promytí pryskyřice DCM, třikrát po jedné minutě. 3. Kondensace funkční skupiny pryskyřice s trojnásobným molámím přebytkem HOBt esterem (Boc) chráněné příslušné aminokyseliny po jednu hodinu. 35 Ester byl připraven z příslušné chráněné (Boc) aminokyseliny a HBot působením DCC ve směsi
DCM-DMF (poměr 9:1) při teplotě 0 °C a dobu třiceti minut. Od vzniklého esteru byla odfiltrována dicyklohexylmočovina, která byla promyta DCM a filtrát zahuštěn za laboratorní teploty a poté byl přidán DMF do výsledné koncentrace cca 0,1 M. Průběh reakce byl monitorován kvalitativním Kaiserovým testem. Pokud byl Kaiserův test negativní následoval 40 další reakční krok (viz 4). Pokud byl Kaiserův test negativní následoval další reakční krok (viz
4). Pokud byl positivní byl přidán DMAP, popřípadě byla pryskyřice promyta DCM a kondensace opakována snově připraveným aktivním esterem. 4.Promytí pryskyřice 3,50ml DMF (1 min) a 3,50 ml DCM (1 min). 5. Odstranění Boc skupiny bylo dosaženo působením 50% TFA v DCM po dobu 30 minut. 6. Poté byla pryskyřice promyta 4,50 ml (1 minutové 45 působení) DCM.
Po ukončení synthesy byla pryskyřice se zakotveným peptidem vysušena do konstantní váhy. Odštěpení peptidu z pryskyřice spolu s odštěpením chránících skupin bylo provedeno kapalným fluorovodíkem ve směsi HF: anisol (poměr 9:1) při 0 °C. Fluorovodík byl vyfoukán dusíkem při 50 0 °C, a anisol extrahován studeným diethyletherem (4x50 ml). Peptid byl rozpuštěn ve 20 % kyselině octové (5x50 ml), piyskyřice odfiltrována a roztok peptidu lyofilisován. Cyklisace peptidu. Lyofilisát peptidu byl rozpuštěn v 100 ml roztoku 20% kyseliny octové a za intensivního míchání a při laboratorní teplotě byl přidán 0,1 M jodu vmethanolu tak, aby na
-2CZ 292131 B6 jednu S-Acm funkci přišlo 5 ekvivalentů jodu. Průběh reakce byl sledován RP-HPLC. Reakce » byla zastavena přidáním 100 ml H2O po dosažení maximální tvorby produktu. Jod byl odstraněn μ vytřepáním do tetrachlormethanu a vodná fáze lyofílisována. Čistota peptidu byla analysována RP HPLC a určením hmotového spektra. Peptid byl isolován preparativní RP HPLC na přístroji fy Knauer a koloně 250 x 16 mm plněné Sepharonem SG X C18 (změní 10pm). Peptid byl na kolonu nastříknut v množství 50 mg a z kolony eluován roztokem methanol-voda o lineárně stoupající koncentraci (1 % za minutu, rychlostí 8,5 ml/min.) v 0,1 % TFA. Analytická RPHPLC byla provedena na přístroji firmy Spectra Physics. použitá kolona 250 x 4 mm byla naplněná Sepharonem SG X C18 (změní 10 pm), průtok 1 ml/min.
Příklad 2
Látka 2 byla synthetisována stejným způsobem. Postranní skupiny aminokyselin byly chráněny jako v příkladu 1 asynthetický protokol sledoval postup udaný v příkladu 1. Cyklisace, čištění a analytika isolovaného peptidu bylo provedeno jako v příkladu 1.
Příklad 3
Kapilární zonová elektroforesa (CZE). Analýsa čistoty připravených peptidů byla prováděna metodou CZE se zdrojem vysokého napětí 0-15 kV. Separačním prostorem byla křemenná kapilára s vnějším polyimidovým povlakem o vnitřním průměru 0,056 mm, vnějším průměrem 0,200 mm, celkové délce 315 mm a efektivní délce (od startu k detektoru) 200 mm. Peptidy byly analysovány v 0,5 M kyseliny octové, nebo v roztoku o složení 0,04 M Tris a 0,04 M Tricinu opH 8,1. Vzorek byl nanášen manuálně a měření bylo prováděno při laboratorní teplotě. Separace probíhala v režimu konstatního napětí 10,0 kV a proud dosahoval hodnot 9,5-10,8 μΑ. Detekce byla prováděna spektrofotometricky při 206 nm.
Příklad 4
Hmotová spektrometrie jednotlivých peptidů. Měření bylo prováděno metodou FAB, která spočívá v ionisaci testovaných vzorků pomocí urychlených atomů xenonu. Vzorek byl umístěn na glycerinovou matrici. Snímání spekter bylo prováděno vícekanálovou analýsou při nízké rozlišovací schopnosti. Byl použit třísektorový hmotový spektrometr YAB-EQ s geometrií BEQQ vyrobený firmou VG Analytical Manchester. Iontový zdroj pracoval při urychlovacím napětí 8 kV.
Příklad 5
Aminokyselinové složení peptidů. Peptidy byly hydrolysovány v 6M HCI při teplotě 110 °C po dobu 20 hodin a jednotlivé aminokyseliny separovány na přístroji D-500 (Durrum corp.). Zastoupení prolinu a cystinu nebylo vyhodnocováno.
Průmyslová využitelnost
Synthetické analogy Desmopressinu podle vynálezu lze využít v základním výzkumu a farmaceutickém průmyslu.
Claims (3)
1. Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení obecného vzorce 1
Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-A
2. Způsob výroby analogů Desmopresinu podle nároku 1 vzorce I, vyznačující se tím, že na pryskyřici obsahující navázané funkční skupiny obecného vzorce NHR-CH2-, kde R je alkyl obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, se působí hydroxybenztriazolovým esterem N-chráněné příslušné aminokyseliny sekvence Desmopressinu a po ukončení celého požadovaného peptidu se peptid s pryskyřicí vysuší, uvolní se z pryskyřice spolu s chránícími skupinami směsí fluorovodíku s anizolem, peptid se rozpustí ve zředěné kyselině octové, lyofilizuje a provede se jeho cyklizace uzavřením disulfídického můstku, načež se izoluje, zejména vysokoúčinnou kapalinou chromatografií.
3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že alkyl ve funkčních skupinách navázaných na pryskyřici je ethyl.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CZ2000537A CZ292131B6 (cs) | 2000-02-16 | 2000-02-16 | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CZ2000537A CZ292131B6 (cs) | 2000-02-16 | 2000-02-16 | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ2000537A3 CZ2000537A3 (cs) | 2001-10-17 |
CZ292131B6 true CZ292131B6 (cs) | 2003-08-13 |
Family
ID=5469610
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ2000537A CZ292131B6 (cs) | 2000-02-16 | 2000-02-16 | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CZ (1) | CZ292131B6 (cs) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10131692B2 (en) | 2013-07-26 | 2018-11-20 | Ferring B.V. | Vasopressin-2 receptor agonists |
-
2000
- 2000-02-16 CZ CZ2000537A patent/CZ292131B6/cs not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10131692B2 (en) | 2013-07-26 | 2018-11-20 | Ferring B.V. | Vasopressin-2 receptor agonists |
US10745443B2 (en) | 2013-07-26 | 2020-08-18 | Ferring B.V. | Vasopressin-2 receptor agonists |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CZ2000537A3 (cs) | 2001-10-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Beyermann et al. | Rapid continuous peptide synthesis via FMOC amino acid chloride coupling and 4-(aminomethyl) piperidine deblocking | |
US4758550A (en) | Calcitonin derivatives | |
Cody et al. | Cyclic melanotropins. 9. 7-D-Phenylalanine analogues of the active-site sequence | |
FI86432C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya tillvaexthormon-frigoerande peptider. | |
EP0082568B1 (en) | Retro-inverso analogues of c-terminal penta and hexapeptides of substance p. | |
EP0597997B1 (en) | Lanthionine bridged peptides | |
Sidorova et al. | The use of hydrogen peroxide for closing disulfide bridges in peptides | |
FI82255C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya gonadoliberinderivat som paoverkar djurens foeroekningsprocesser. | |
Manning et al. | Design of peptide oxytocin antagonists with strikingly higher affinities and selectivities for the human oxytocin receptor than atosiban | |
US5731285A (en) | Tachiquinine antagonist tricyclic compounds, preparation of same and pharmaceutical compositions containing such compounds | |
CZ292131B6 (cs) | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení | |
WO1993000359A1 (en) | Modified peptides transportable into the central nervous system | |
CZ9803U1 (cs) | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení | |
EP0636146B1 (en) | Tachykinin antagonist tricyclic compounds, preparation of same and pharmaceutical compositions containing such compounds | |
Cordeau et al. | Selenazolidine: a selenium containing proline surrogate in peptide science | |
CZ290347B6 (cs) | Cyklopeptidy stimulující uvolňování růstového hormonu a způsob jejich přípravy | |
CN105189465A (zh) | 合成含有乙内酰脲的肽产物 | |
CZ9734U1 (cs) | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v N-terminální sekvenci proti endopeptidasovému štěpení | |
Ryakhovsky et al. | Study of intramolecular aminolysis in peptides containing N-alkylamino acids at position 2 | |
YAJIMA et al. | Studies on Peptides. XXVI. Application of the Solid Phase Peptide Synthesis to the Screening Test of an Active Fragment proposed for Parathyroid Hormone | |
Procházka et al. | Analogs of Deamino Carba Oxytocin with Inhibitory Properties; Synthesis and Biological Activities | |
Žertová et al. | The Analogs of 8-D-Homoarginin-vasopressin with O-Substituted Phenylalanine in Position 2: Synthesis and Some Biological Properties | |
JPH06509571A (ja) | タキキニン拮抗薬としての環状ヘキサペプチドの製法およびその薬学的化合物 | |
Procházka et al. | The deamino-carba analogs of vasotocin. Synthesis and some biological properties | |
Meutermans et al. | Synthesis of α-aspartyl-containing cyclic peptides |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20040216 |