CZ292131B6 - Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení - Google Patents
Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení Download PDFInfo
- Publication number
- CZ292131B6 CZ292131B6 CZ2000537A CZ2000537A CZ292131B6 CZ 292131 B6 CZ292131 B6 CZ 292131B6 CZ 2000537 A CZ2000537 A CZ 2000537A CZ 2000537 A CZ2000537 A CZ 2000537A CZ 292131 B6 CZ292131 B6 CZ 292131B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- peptide
- desmopressin
- resin
- protected
- cleavage
- Prior art date
Links
- NFLWUMRGJYTJIN-NXBWRCJVSA-N desmopressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSCCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(N)=O)=O)CCC(=O)N)C1=CC=CC=C1 NFLWUMRGJYTJIN-NXBWRCJVSA-N 0.000 title claims abstract description 11
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 108010000437 Deamino Arginine Vasopressin Proteins 0.000 title claims abstract description 6
- 229960004281 desmopressin Drugs 0.000 title claims abstract description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 21
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 21
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- -1 hydroxybenzotriazole ester Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims abstract description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 3
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 abstract description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 abstract 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 abstract 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000005515 capillary zone electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N glycinamide Chemical group NCC(N)=O BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 3
- DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 3-mercaptopropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCS DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 2
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RSFRAYHQQBRTII-INIZCTEOSA-N (2r)-2-[benzyl(chloro)amino]-2-chloro-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@](Cl)(C(=O)O)N(Cl)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 RSFRAYHQQBRTII-INIZCTEOSA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 229930028154 D-arginine Natural products 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004642 Polyimide Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N Vasopressin Natural products N1C(=O)C(CC=2C=C(O)C=CC=2)NC(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026383 Vasopressin-neurophysin 2-copeptin Human genes 0.000 description 1
- 108010004977 Vasopressins Proteins 0.000 description 1
- 102000002852 Vasopressins Human genes 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N argipressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)=O)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)C1=CC=CC=C1 KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010064 diabetes insipidus Diseases 0.000 description 1
- MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;n,n-dimethylformamide Chemical compound ClCCl.CN(C)C=O MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFMVNSFONAZFOT-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;n-ethyl-n-propan-2-ylpropan-2-amine Chemical compound ClCCl.CCN(C(C)C)C(C)C UFMVNSFONAZFOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=CC=N1 PSHKMPUSSFXUIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFLWUMRGJYTJIN-UHFFFAOYSA-N n-[1-[(2-amino-2-oxoethyl)amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]-1-[7-(2-amino-2-oxoethyl)-10-(3-amino-3-oxopropyl)-13-benzyl-16-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carbonyl]pyrrolidi Chemical compound N1C(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)CCSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(=O)N)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 NFLWUMRGJYTJIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 229920001721 polyimide Polymers 0.000 description 1
- 210000001883 posterior pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229960003726 vasopressin Drugs 0.000 description 1
- FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N xenon atom Chemical group [Xe] FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Synthetick analogy Desmopressinu chr n n v C-termin ln sekvenci proti karboxyamidasov mu Üt pen obecn ho vzorce I, kde A je [D-Arg]GlyNHR (l tka 1) nebo [D-Arg]NHR (l tka 2), kde R je alkyl obsahuj c 1 a 4 atomy uhl ku. Vyr b se tak, e na prysky°ici obsahuj c nav zan funk n skupiny obecn ho vzorce NHR-CH.sub.2.n., kde R je alkyl obsahuj c 1 a 4, zejm na 2 atomy uhl ku, se p sob hydroxybenztriazolov²m esterem N-chr n n p° sluÜn aminokyseliny sekvence Desmopressinu a po ukon en cel ho po adovan ho peptidu se peptid s prysky°ic vysuÜ , uvoln se z prysky°ice spolu s chr nic mi skupinami sm s fluorovod ku s anizolem, peptid se rozpust ve z°ed n kyselin octov , lyofilizuje a provede se jeho cyklizace uzav°en m disulfidick ho m stku, na e se izoluje, zejm na vysoko· innou kapalinou chromatografi .\
Description
Vynález se týká synthetických analogů Desmopressinu vzorce
Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-[D-Arg]-GlyNH2 I i chráněných v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení.
Dosavadní stav techniky
Desmopressin (INN), synthetický analog peptidového hormonu vasopresinu, přirozené látky nacházející se v zadním laloku hypofýzy (přívěsku mozkového), je využíván v substituční léčbě Diabetes insipidus. Jeho účinek je závislý na farmaceutické formě, ve které je podáván. Při perorálním podání v tabletách je využita k biologickému účinku jen nepatrná část léčiva, a to zřejmě z několika důvodů, jako je biodostupnost látky k ledvinným receptorům přes intestinální stěnu a potenciální inaktivace především v gastrointestinálním traktu. Synthetické obměny provedené v molekule peptidu (náhrada cysteinu kyselinou merkaptopropionovou a záměna L-formy argininu D-stereoisomerem) zvýšily jak lipofilitu látky, tak její metabolickou stabilitu. Karboxyterminální část řetězce je již záměnou L-argininu D-argininem chráněna proti štěpení trypsinem nebo enzymy s podobnou aktivitou. Zůstává však amidická vazba koncového glycinu, která je přístupná působení karboxyamidopeptidasy odštěpující koncový glycinamid. Následkem působení tohoto enzymu vzniká DesGlyNH2 peptid, který je funkčně neaktivní. Byly připraveny analogy Desmopressinu, které byly modifikovány v karboxyterminální části peptidu tak, aby byla eliminována hydrolysa amidické vazby glycinamidu resp. odštěpení glycinamidu enzymy karboxyamidasového charakteru.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení, obecného vzorce I
Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-A
L_____________________________________I (I) kde A je [D-Arg]GlyNHR (látka 1) nebo [D-Arg]NHR (látka 2), kde R je alkyl obsahující 1 až 4 atomy uhlíku.
Synthetické analogy Desmopressinu se vyrábí tak, že na pryskyřici obsahující navázané funkční skupiny obecného vzorce NHR-CH2', kde R je alkyl obsahující 1 až 4, zejména 2 atomy uhlíku, se působí hydroxybenztriazolovým esterem N-chráněné příslušné aminokyseliny sekvence Desmopresinu a po ukončení celého požadovaného peptidu se peptid s pryskyřicí vysuší, uvolní se z pryskyřice spolu s chránícími skupinami směsi fluorovodíku s anizolem, peptid se rozpustí ve zředěné kyselině octové, lyofilizuje a provede se jeho cyklizace uzavřením disulfidického můstku, načež se izoluje, zejména vysokoúčinnou kapalinou chromatografií.
»1
Příklady provedení
Vysvětlení zkratek:
Mpa Boc Acm
Tyr(Cl2-Bzl) Trt DIEA DCM HOBt ester
DCC DMF DMAP TFA RP-HPLC
MS
CZE
Kyselina β -merkaptopropionová, t-Butoxylcarbonyl,
Acetamidomethyl,
Dichlorbenzyl-tyrosin,
Trityl,
Diisopropylethylamin,
Dichlormetan,
Hydroxybenztriazolový ester
Dicyklohexyl karbodiimid,
Dimethylformamid,
Dimethylaminopyridin,
Kyselina trifluoroctová,
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie na reversní fázi, hmotová spektrometrie kapilární zonová elektroforesa
Příklad 1
Látka 1 byla synthetisována metodou na pevné fázi dle Merrifielda. K synthese byla použita speciální pryskyřice NH(Et)-CH2-nosič (substituce 0,83 mmol/g pryskyřice). Jako semipermanentní chránění byla použita tertbutyloxykarbonylová skupina (Boc). Postranní řetězce byly chráněny takto: Mpa a Cys skupinou Acm. Tyr(2-Br-Z), Asn(Trt), De-Arg(Tos). Synthesa byla 30 prováděna v 0, 3mmol měřítku. Byl použit následující protokol synthesy:
1. Neutralizace pryskyřice 10 % DIEA v DCM, dvakrát po pěti minutách. 2. Promytí pryskyřice DCM, třikrát po jedné minutě. 3. Kondensace funkční skupiny pryskyřice s trojnásobným molámím přebytkem HOBt esterem (Boc) chráněné příslušné aminokyseliny po jednu hodinu. 35 Ester byl připraven z příslušné chráněné (Boc) aminokyseliny a HBot působením DCC ve směsi
DCM-DMF (poměr 9:1) při teplotě 0 °C a dobu třiceti minut. Od vzniklého esteru byla odfiltrována dicyklohexylmočovina, která byla promyta DCM a filtrát zahuštěn za laboratorní teploty a poté byl přidán DMF do výsledné koncentrace cca 0,1 M. Průběh reakce byl monitorován kvalitativním Kaiserovým testem. Pokud byl Kaiserův test negativní následoval 40 další reakční krok (viz 4). Pokud byl Kaiserův test negativní následoval další reakční krok (viz
4). Pokud byl positivní byl přidán DMAP, popřípadě byla pryskyřice promyta DCM a kondensace opakována snově připraveným aktivním esterem. 4.Promytí pryskyřice 3,50ml DMF (1 min) a 3,50 ml DCM (1 min). 5. Odstranění Boc skupiny bylo dosaženo působením 50% TFA v DCM po dobu 30 minut. 6. Poté byla pryskyřice promyta 4,50 ml (1 minutové 45 působení) DCM.
Po ukončení synthesy byla pryskyřice se zakotveným peptidem vysušena do konstantní váhy. Odštěpení peptidu z pryskyřice spolu s odštěpením chránících skupin bylo provedeno kapalným fluorovodíkem ve směsi HF: anisol (poměr 9:1) při 0 °C. Fluorovodík byl vyfoukán dusíkem při 50 0 °C, a anisol extrahován studeným diethyletherem (4x50 ml). Peptid byl rozpuštěn ve 20 % kyselině octové (5x50 ml), piyskyřice odfiltrována a roztok peptidu lyofilisován. Cyklisace peptidu. Lyofilisát peptidu byl rozpuštěn v 100 ml roztoku 20% kyseliny octové a za intensivního míchání a při laboratorní teplotě byl přidán 0,1 M jodu vmethanolu tak, aby na
-2CZ 292131 B6 jednu S-Acm funkci přišlo 5 ekvivalentů jodu. Průběh reakce byl sledován RP-HPLC. Reakce » byla zastavena přidáním 100 ml H2O po dosažení maximální tvorby produktu. Jod byl odstraněn μ vytřepáním do tetrachlormethanu a vodná fáze lyofílisována. Čistota peptidu byla analysována RP HPLC a určením hmotového spektra. Peptid byl isolován preparativní RP HPLC na přístroji fy Knauer a koloně 250 x 16 mm plněné Sepharonem SG X C18 (změní 10pm). Peptid byl na kolonu nastříknut v množství 50 mg a z kolony eluován roztokem methanol-voda o lineárně stoupající koncentraci (1 % za minutu, rychlostí 8,5 ml/min.) v 0,1 % TFA. Analytická RPHPLC byla provedena na přístroji firmy Spectra Physics. použitá kolona 250 x 4 mm byla naplněná Sepharonem SG X C18 (změní 10 pm), průtok 1 ml/min.
Příklad 2
Látka 2 byla synthetisována stejným způsobem. Postranní skupiny aminokyselin byly chráněny jako v příkladu 1 asynthetický protokol sledoval postup udaný v příkladu 1. Cyklisace, čištění a analytika isolovaného peptidu bylo provedeno jako v příkladu 1.
Příklad 3
Kapilární zonová elektroforesa (CZE). Analýsa čistoty připravených peptidů byla prováděna metodou CZE se zdrojem vysokého napětí 0-15 kV. Separačním prostorem byla křemenná kapilára s vnějším polyimidovým povlakem o vnitřním průměru 0,056 mm, vnějším průměrem 0,200 mm, celkové délce 315 mm a efektivní délce (od startu k detektoru) 200 mm. Peptidy byly analysovány v 0,5 M kyseliny octové, nebo v roztoku o složení 0,04 M Tris a 0,04 M Tricinu opH 8,1. Vzorek byl nanášen manuálně a měření bylo prováděno při laboratorní teplotě. Separace probíhala v režimu konstatního napětí 10,0 kV a proud dosahoval hodnot 9,5-10,8 μΑ. Detekce byla prováděna spektrofotometricky při 206 nm.
Příklad 4
Hmotová spektrometrie jednotlivých peptidů. Měření bylo prováděno metodou FAB, která spočívá v ionisaci testovaných vzorků pomocí urychlených atomů xenonu. Vzorek byl umístěn na glycerinovou matrici. Snímání spekter bylo prováděno vícekanálovou analýsou při nízké rozlišovací schopnosti. Byl použit třísektorový hmotový spektrometr YAB-EQ s geometrií BEQQ vyrobený firmou VG Analytical Manchester. Iontový zdroj pracoval při urychlovacím napětí 8 kV.
Příklad 5
Aminokyselinové složení peptidů. Peptidy byly hydrolysovány v 6M HCI při teplotě 110 °C po dobu 20 hodin a jednotlivé aminokyseliny separovány na přístroji D-500 (Durrum corp.). Zastoupení prolinu a cystinu nebylo vyhodnocováno.
Průmyslová využitelnost
Synthetické analogy Desmopressinu podle vynálezu lze využít v základním výzkumu a farmaceutickém průmyslu.
Claims (3)
1. Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení obecného vzorce 1
Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-A
2. Způsob výroby analogů Desmopresinu podle nároku 1 vzorce I, vyznačující se tím, že na pryskyřici obsahující navázané funkční skupiny obecného vzorce NHR-CH2-, kde R je alkyl obsahující 1 až 4 atomy uhlíku, se působí hydroxybenztriazolovým esterem N-chráněné příslušné aminokyseliny sekvence Desmopressinu a po ukončení celého požadovaného peptidu se peptid s pryskyřicí vysuší, uvolní se z pryskyřice spolu s chránícími skupinami směsí fluorovodíku s anizolem, peptid se rozpustí ve zředěné kyselině octové, lyofilizuje a provede se jeho cyklizace uzavřením disulfídického můstku, načež se izoluje, zejména vysokoúčinnou kapalinou chromatografií.
3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že alkyl ve funkčních skupinách navázaných na pryskyřici je ethyl.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2000537A CZ292131B6 (cs) | 2000-02-16 | 2000-02-16 | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ2000537A CZ292131B6 (cs) | 2000-02-16 | 2000-02-16 | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2000537A3 CZ2000537A3 (cs) | 2001-10-17 |
| CZ292131B6 true CZ292131B6 (cs) | 2003-08-13 |
Family
ID=5469610
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2000537A CZ292131B6 (cs) | 2000-02-16 | 2000-02-16 | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ292131B6 (cs) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10131692B2 (en) | 2013-07-26 | 2018-11-20 | Ferring B.V. | Vasopressin-2 receptor agonists |
-
2000
- 2000-02-16 CZ CZ2000537A patent/CZ292131B6/cs not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10131692B2 (en) | 2013-07-26 | 2018-11-20 | Ferring B.V. | Vasopressin-2 receptor agonists |
| US10745443B2 (en) | 2013-07-26 | 2020-08-18 | Ferring B.V. | Vasopressin-2 receptor agonists |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ2000537A3 (cs) | 2001-10-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI63391C (fi) | Analogifoerfarande foer framstaellning av nya hentriakontapeptider med opiat-agonist-aktivitet | |
| Beyermann et al. | Rapid continuous peptide synthesis via FMOC amino acid chloride coupling and 4-(aminomethyl) piperidine deblocking | |
| Cody et al. | Cyclic melanotropins. 9. 7-D-Phenylalanine analogues of the active-site sequence | |
| FI86432B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya tillvaexthormon-frigoerande peptider. | |
| JPH085916B2 (ja) | 新規カルシトニン誘導体 | |
| EP0082568B1 (en) | Retro-inverso analogues of c-terminal penta and hexapeptides of substance p. | |
| EP0597997B1 (en) | Lanthionine bridged peptides | |
| Sidorova et al. | The use of hydrogen peroxide for closing disulfide bridges in peptides | |
| FI82255C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya gonadoliberinderivat som paoverkar djurens foeroekningsprocesser. | |
| Manning et al. | Design of peptide oxytocin antagonists with strikingly higher affinities and selectivities for the human oxytocin receptor than atosiban | |
| US5731285A (en) | Tachiquinine antagonist tricyclic compounds, preparation of same and pharmaceutical compositions containing such compounds | |
| CZ292131B6 (cs) | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení | |
| WO1993000359A1 (en) | Modified peptides transportable into the central nervous system | |
| EP0181121A2 (en) | Novel polypeptide and process for producing the same | |
| Cordeau et al. | Selenazolidine: A selenium containing proline surrogate in peptide science | |
| CZ9803U1 (cs) | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení | |
| EP0636146B1 (en) | Tachykinin antagonist tricyclic compounds, preparation of same and pharmaceutical compositions containing such compounds | |
| CZ290347B6 (cs) | Cyklopeptidy stimulující uvolňování růstového hormonu a způsob jejich přípravy | |
| CZ9734U1 (cs) | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v N-terminální sekvenci proti endopeptidasovému štěpení | |
| CN105189465A (zh) | 合成含有乙内酰脲的肽产物 | |
| Ryakhovsky et al. | Study of intramolecular aminolysis in peptides containing N-alkylamino acids at position 2 | |
| YAJIMA et al. | Studies on Peptides. XXVI. Application of the Solid Phase Peptide Synthesis to the Screening Test of an Active Fragment proposed for Parathyroid Hormone | |
| Procházka et al. | Analogs of Deamino Carba Oxytocin with Inhibitory Properties; Synthesis and Biological Activities | |
| Žertová et al. | The Analogs of 8-D-Homoarginin-vasopressin with O-Substituted Phenylalanine in Position 2: Synthesis and Some Biological Properties | |
| JPH06509571A (ja) | タキキニン拮抗薬としての環状ヘキサペプチドの製法およびその薬学的化合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20040216 |