CZ9803U1 - Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení - Google Patents
Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení Download PDFInfo
- Publication number
- CZ9803U1 CZ9803U1 CZ200010402U CZ200010402U CZ9803U1 CZ 9803 U1 CZ9803 U1 CZ 9803U1 CZ 200010402 U CZ200010402 U CZ 200010402U CZ 200010402 U CZ200010402 U CZ 200010402U CZ 9803 U1 CZ9803 U1 CZ 9803U1
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- desmopressin
- cleavage
- synthetic
- protected
- carboxyamidase
- Prior art date
Links
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 title claims description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 title claims description 8
- NFLWUMRGJYTJIN-NXBWRCJVSA-N desmopressin Chemical class C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSCCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(N)=O)=O)CCC(=O)N)C1=CC=CC=C1 NFLWUMRGJYTJIN-NXBWRCJVSA-N 0.000 title claims description 7
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 title claims description 4
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- 108700023418 Amidases Proteins 0.000 claims 1
- 102000005922 amidase Human genes 0.000 claims 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 21
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 13
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 5
- 238000005515 capillary zone electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- -1 hydroxybenzotriazole ester Chemical class 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N glycinamide Chemical group NCC(N)=O BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010000437 Deamino Arginine Vasopressin Proteins 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 229960004281 desmopressin Drugs 0.000 description 3
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 3-mercaptopropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCS DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 229930028154 D-arginine Natural products 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004642 Polyimide Substances 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N Vasopressin Natural products N1C(=O)C(CC=2C=C(O)C=CC=2)NC(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026383 Vasopressin-neurophysin 2-copeptin Human genes 0.000 description 1
- 108010004977 Vasopressins Proteins 0.000 description 1
- 102000002852 Vasopressins Human genes 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N argipressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)=O)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)C1=CC=CC=C1 KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010064 diabetes insipidus Diseases 0.000 description 1
- MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;n,n-dimethylformamide Chemical compound ClCCl.CN(C)C=O MQYQOVYIJOLTNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LLYKPZOWCPVRPD-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylpyridin-2-amine;n,n-dimethylpyridin-4-amine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1.CN(C)C1=CC=CC=N1 LLYKPZOWCPVRPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NFLWUMRGJYTJIN-UHFFFAOYSA-N n-[1-[(2-amino-2-oxoethyl)amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]-1-[7-(2-amino-2-oxoethyl)-10-(3-amino-3-oxopropyl)-13-benzyl-16-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carbonyl]pyrrolidi Chemical compound N1C(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)CCSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(=O)N)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 NFLWUMRGJYTJIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 1
- 229920001721 polyimide Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003726 vasopressin Drugs 0.000 description 1
- FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N xenon atom Chemical group [Xe] FHNFHKCVQCLJFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Oblast techniky 'V
Technické řešení se týká synthetických analogů Desmopressinu vzorce d 5 Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-[D-Arg]-GlyNH2 chráněných v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení.
Dosavadní stav techniky
Desmopressin (INN), synthetický analog peptidového hormonu vasopresinu, přirozené látky nacházející se v zadním laloku hypofyzy (přívěsku mozkového), je využíván v substituční léčbě Diabetes insipidus. Jeho účinek je závislý na farmaceutické formě, ve které je podáván. Při perorálním podání v tabletách je využita k biologickému účinku jen nepatrná část léčiva a to zřejmě z několika důvodů, jako je biodostupnost látky k ledvinným receptorům přes intestinální stěnu a potenciální inaktivace především v gastrointestinálním traktu. Synthetické obměny provedené v molekule peptidu (náhrada cysteinu kyselinou merkaptopropionovou a záměna L-formy argininu D-stereoisomerem) zvýšily jak lipofilitu látky tak její metabolickou stabilitu. Karboxyterminální část řetězce je již záměnou L-argininu D-argininem chráněna proti štěpení trypsinem nebo enzymy s podobnou aktivitou. Zůstává však amidická vazba koncového glycinu, která je přístupná působení karboxyamidopeptidasy odštěpující koncový glycinamid. Následkem působení tohoto enzymu vzniká DesGlyNH2 peptid, který je funkčně neaktivní. Byly připraveny analogy Desmopressinu, které byly modifikovány v karboxyterminální části peptidu tak, aby byla eliminována hydrolysa amidické vazby glycinamidu resp. odštěpení glycinamidu enzymy karboxyamidasového charakteru.
Podstata technického řešení
Předmětem technického řešení jsou synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenoi proti karboxyamidasovému štěpení, obecného vzorce I Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-A (I) kde A je [D-Arg]GlyNHR (látka I) nebo [D-Arg]NHR (látka II), kde R je alkyl obsahující 1 až 4 atomy uhlíku.
Synthetické analogy Desmopressinu se vyrobí tak, že na pryskyřici obsahující navázané funkční skupiny obecného vzorce NH R-CH2, kde R je alkyl obsahující 1 - 4, zejména 2 atomy uhlíku, se působí hydroxybenztriazolovým esterem N-chráněné příslušné aminokyseliny sekvence Desmopresinu a po ukončení celého požadovaného peptidu se peptid s pryskyřicí vysuší, uvolní se z pryskyřice spolu s chránícími skupinami směsi fluorovodíku s anizolem, peptid se rozpustí ve zředěné kyselině octové, zlyofilizuje a provede se jeho cyklizace uzavřením disulfidického můstku, načež se izoluje, zejména vysokoúčinnou kapalinou chromatografií.
Příklady provedení
Vysvětlení zkratek
Mpa - Kyselina β-merkaptopropionová,
-1 CZ 9803 Ul
| Boc | - t-Butoxycarbonyl, |
| Acm | - Acetamidomethyl, |
| Tyr (Cl2-Bzl) | - Dichlorbenzyl-tyrosin, |
| Trt | - Trityl, |
| DIEA | - Diisopropylethylamin, |
| DCM | - Dichlormetan, |
| HOBt ester | - Hydroxybenztriazolový ester |
| DCC | - Dicyklohexyl karbodiimid, |
| DMF | - Dmethylformamid, |
| DMAP | - Dimethylaminopyridin, |
| TFA | - Kyselina trifluoroctová, |
| RP-HPLC | - Vysokoúčinná kapalinová chromatografie na reversní fázi. |
| MS | - hmotová spektrometrie |
| CZE | - kapilární zonová elektroforesa. |
Příklad 1
Látka I byla synthetisována metodou na pevné fázi dle Merrifielda. K synthese byla použita speciální pryskyřice NH(Et)-CH2 - nosič (substituce 0,83 mmol/g pryskyřice). Jako semipermanentní chránění byla použita tertbutyloxykarbonylová skupina (Boc). Postranní řetězce byly chráněny takto: Mpa a Cys skupinou Acm, Tyr(2-Br-Z),' Asn(Trt), De-Arg(Tos). Synthesa byla prováděna v 0,3 mmol měřítku. Byl použit následující protokol synthesy:
1. Neutralizace pryskyřice 10 % DIEA v DCM, dvakrát po pěti minutách.
2. Promytí pryskyřice DCM, třikrát po jedné minutě.
3. Kondensace funkční skupiny pryskyřice s trojnásobným molámím přebytkem HOBt esterem (Boc) chráněné příslušné aminokyseliny po jednu hodinu. Ester byl připraven z příslušné chráněné (Boc) aminokyseliny a HBot působením DCC ve směsi DCM-DMF (poměr 9 : 1) při teplotě 0 °C a dobu třiceti minut. Od vzniklého esteru byla odfiltrována dicyklohexylmočovina, která byla promyta DCM a filtrát zahuštěn za laboratorní teploty a poté byl přidán DMF do výsledné koncentrace cca 0,1 M. Průběh reakce byl monitorován kvalitativním Kaiserovým testem. Pokud byl Kaiserův test negativní následoval další reakční krok (viz 4). Pokud byl
Kaiserův test negativní následoval další reakční krok (viz 4). Pokud byl positivní byl přidán DMAP, popřípadě byla pryskyřice promyta DCM a kondensace opakována s nově připraveným aktivním esterem.
4. Promytí pryskyřice 3,50 ml DMF (1 min) a 3,50 ml DCM (1 min).
5. Odstranění Boc skupiny bylo dosaženo působením 50 % TFA v DCM po dobu 30 minut.
6. Poté byla pryskyřice promyta 4,50 ml (1 minutové působení) DCM.
Po ukončení synthesy byla pryskyřice se zakotveným peptidem vysušena do konstantní váhy. Odštěpení peptidu z pryskyřice spolu s odštěpením chránících skupin bylo provedeno kapalným fluorovodíkem ve směsi HF: anisol (poměr 9 : 1) při 0 °C. Fluorovodík byl vyfoukán dusíkem při 0 °C, a anisol extrahován studeným diethyletherem (4 x 50 ml). Peptid byl rozpuštěn ve 20 % kyselině octové (5 x 50 ml), pryskyřice odfiltrována a roztok peptidu lyofilisován.
Cyklisace peptidu: Lyofilisát peptidu byl rozpuštěn v 100 ml roztoku 20 % kyseliny octové a za intensivního míchání a při laboratorní teplotě byl přidán 0,1 M jodu vmethanolu tak, aby na jednu S-Acm funkci přišlo 5 ekvivalentů jodu. Průběh reakce byl sledován RP-HPLC. Reakce byla zastavena přidáním 100 ml H2O po dosažení maximální tvorby produktu. Jod byl odstraněn vytřepáním do tetrachlormetanu a vodná fáze lyofilisována. Čistota peptidu byla analysována RP HPLC a určením hmotového spektra. Peptid byl isolován preparativní RP HPLC na přístroji fy Knauer a koloně 250 x 16 mm plněné Sepharonem SG X 08 (změní 10 pm). Peptid byl na kolonu nastříknut v množství 50 mg a z kolony eluován roztokem metanol-voda o lineárně
-2CZ 9803 Ul stoupající koncentraci (1 % za minutu, rychlostí 8,5 ml/min.) v 0,1 % TFA. Analytická RPHPLC byla provedena na přístroji firmy Spectra Physics, použitá kolona 250 x 4 mm byla naplněná Sepharonem SG X Cl8 (změní 10 pm), průtok 1 ml/min.
Příklad 2
Látka II byla synthetisována stejným způsobem jako v příkladu 1. Postranní skupiny aminokyselin byly chráněny jako v příkladu 1 a synthetický protokol sledoval postup udaný v příkladu 1. Cyklisace, čištění a analytika isolovaného peptidu bylo provedeno jako v příkladu 1.
Příklad 3
Kapilární zonová elektroforesa (CZE): Analysa čistoty připravených peptidů byla prováděna metodou CZE se zdrojem vysokého napětí 0-15 kV. Separačním prostorem byla křemenná kapilára s vnějším polyimidovým povlakem o vnitřním průměru 0,056 mm, vnějším průměrem 0,200 mm, celkové délce 315 mm a efektivní délce (od startu k detektoru) 200 mm. Peptidy byly analysovány v 0,5 M kyseliny octové, nebo v roztoku o složení 0,04 M Tris a 0,04 M Tricinu pH 8,1. Vzorek byl nanášen manuálně a měření bylo prováděno při laboratorní teplotě. Separace probíhala v režimu konstatního napětí 10,0 kV a proud dosahoval hodnot 9,5 - 10,8 μΑ. Detekce byla prováděna spektrofotometricky při 206 nm.
Příklad 4
Hmotová spektrometrie jednotlivých peptidů: Měření bylo prováděno metodou FAB, která spočívá v ionisaci testovaných vzorků pomocí urychlených atomů xenonu. Vzorek byl umístěn na glycerinovou matrici. Snímání spekter bylo prováděno vícekanálovou analysou při nízké rozlišovací schopnosti. Byl použit třísektorový hmotový spektrometr YAB-EQ s geometrií BEQQ vyrobený firmou VG Analytical Manchester. Iontový zdroj pracoval při uiychlovacím napětí 8 kV.
Příklad 5
Aminokyselinové složení peptidů. Peptidy byly hydrolysovány v 6 M HC1 při teplotě 110 °C po dobu 20 hodin a jednotlivé aminokyseliny separovány na přístroji D-500 (Durrum corp.). Zastoupení prolinu a cystinu nebylo vyhodnocováno.
Claims (1)
- NÁROKY NA OCHRANU1. Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxy30 amidasovému štěpení obecného vzorce IMpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-A (I) kde A je [D-Arg]GlyNHR (látka I) nebo [D-Arg]NHR (látka II), kde R je alkyl obsahující 1 až 4 atomy uhlíku.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ200010402U CZ9803U1 (cs) | 2000-02-16 | 2000-02-16 | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ200010402U CZ9803U1 (cs) | 2000-02-16 | 2000-02-16 | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ9803U1 true CZ9803U1 (cs) | 2000-03-27 |
Family
ID=5473814
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ200010402U CZ9803U1 (cs) | 2000-02-16 | 2000-02-16 | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ9803U1 (cs) |
-
2000
- 2000-02-16 CZ CZ200010402U patent/CZ9803U1/cs not_active IP Right Cessation
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Beyermann et al. | Rapid continuous peptide synthesis via FMOC amino acid chloride coupling and 4-(aminomethyl) piperidine deblocking | |
| Akaji et al. | Disulfide bond formation using the silyl chloride-sulfoxide system for the synthesis of a cystine peptide | |
| CA1312702C (en) | Oligopeptidyl nitrile derivatives, agents containing them, a process for their preparation, and their use | |
| JP2002533299A (ja) | 環状ペプチドの合成 | |
| Chorev et al. | Synthesis of partially modified retro-inverso substance P analogs and their biological activity | |
| EP0082568B1 (en) | Retro-inverso analogues of c-terminal penta and hexapeptides of substance p. | |
| EP0597997B1 (en) | Lanthionine bridged peptides | |
| US4636490A (en) | Novel peptidic derivatives inhibiting gastric secretion, process for preparing them and drugs containing them | |
| WO1993000359A1 (en) | Modified peptides transportable into the central nervous system | |
| RU2394836C2 (ru) | Пептид, обладающий нейротропной активностью | |
| EP0181121A2 (en) | Novel polypeptide and process for producing the same | |
| EP0227410A2 (en) | Peptide derivatives, their production and use | |
| CZ9803U1 (cs) | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení | |
| Cordeau et al. | Selenazolidine: A selenium containing proline surrogate in peptide science | |
| CZ292131B6 (cs) | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v C-terminální sekvenci proti karboxyamidasovému štěpení | |
| EP0636146B1 (en) | Tachykinin antagonist tricyclic compounds, preparation of same and pharmaceutical compositions containing such compounds | |
| Ryakhovsky et al. | Study of intramolecular aminolysis in peptides containing N-alkylamino acids at position 2 | |
| Kaur et al. | Synthesis and Biological Evaluation of Dehydrophenylalanine Containing Substance P Fragments. | |
| AU2014234400A1 (en) | Synthesis of hydantoin containing peptide products | |
| CZ9734U1 (cs) | Synthetické analogy Desmopressinu chráněné v N-terminální sekvenci proti endopeptidasovému štěpení | |
| US6417397B1 (en) | N-substituted alkylamino acids for use as amino-protecting groups | |
| Žertová et al. | The Analogs of 8-D-Homoarginin-vasopressin with O-Substituted Phenylalanine in Position 2: Synthesis and Some Biological Properties | |
| Procházka et al. | Analogs of Deamino Carba Oxytocin with Inhibitory Properties; Synthesis and Biological Activities | |
| Procházka et al. | The deamino-carba analogs of vasotocin. Synthesis and some biological properties | |
| EP1348714B1 (en) | Polypeptide useful as anti-allergic/antiasthmatic, methods for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing such polypeptide and their use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Utility model expired |
Effective date: 20040216 |