CZ287623B6 - Nový průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps paspali - Google Patents
Nový průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps paspali Download PDFInfo
- Publication number
- CZ287623B6 CZ287623B6 CZ19942456A CZ245694A CZ287623B6 CZ 287623 B6 CZ287623 B6 CZ 287623B6 CZ 19942456 A CZ19942456 A CZ 19942456A CZ 245694 A CZ245694 A CZ 245694A CZ 287623 B6 CZ287623 B6 CZ 287623B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- production
- acid
- medium
- inoculum
- claviceps paspali
- Prior art date
Links
- 241000124224 Claviceps paspali Species 0.000 title claims abstract description 16
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 4
- RJNCJTROKRDRBW-UHFFFAOYSA-N d-paspalic acid Natural products C1=CC(C2C=C(CN(C2C2)C)C(O)=O)=C3C2=CNC3=C1 RJNCJTROKRDRBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- RJNCJTROKRDRBW-TZMCWYRMSA-N (6ar,10ar)-7-methyl-4,6,6a,7,8,10a-hexahydroindolo[4,3-fg]quinoline-7-ium-9-carboxylate Chemical compound C1=CC([C@H]2C=C(CN([C@@H]2C2)C)C(O)=O)=C3C2=CNC3=C1 RJNCJTROKRDRBW-TZMCWYRMSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 229960003133 ergot alkaloid Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 8
- 239000002243 precursor Substances 0.000 abstract description 3
- YSEXMKHXIOCEJA-FVFQAYNVSA-N Nicergoline Chemical compound C([C@@H]1C[C@]2([C@H](N(C)C1)CC=1C3=C2C=CC=C3N(C)C=1)OC)OC(=O)C1=CN=CC(Br)=C1 YSEXMKHXIOCEJA-FVFQAYNVSA-N 0.000 abstract description 2
- 229960003642 nicergoline Drugs 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 21
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- ZAGRKAFMISFKIO-UHFFFAOYSA-N Isolysergic acid Natural products C1=CC(C2=CC(CN(C2C2)C)C(O)=O)=C3C2=CNC3=C1 ZAGRKAFMISFKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 9
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 8
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 8
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 8
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 7
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 7
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 7
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 6
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 6
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 6
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- ZAGRKAFMISFKIO-QMTHXVAHSA-N lysergic acid Chemical compound C1=CC(C2=C[C@H](CN([C@@H]2C2)C)C(O)=O)=C3C2=CNC3=C1 ZAGRKAFMISFKIO-QMTHXVAHSA-N 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- ZAGRKAFMISFKIO-IINYFYTJSA-N (6ar,9s)-7-methyl-6,6a,8,9-tetrahydro-4h-indolo[4,3-fg]quinoline-9-carboxylic acid Chemical compound C1=CC(C2=C[C@@H](CN([C@@H]2C2)C)C(O)=O)=C3C2=CNC3=C1 ZAGRKAFMISFKIO-IINYFYTJSA-N 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001330453 Paspalum Species 0.000 description 2
- 241000576755 Sclerotia Species 0.000 description 2
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O SURQXAFEQWPFPV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 2
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 description 2
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 2
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 2
- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NUKQEEMKQGMUQH-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(N)=N NUKQEEMKQGMUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(N)=NN=O WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZHJGWYRLJUCMRT-UHFFFAOYSA-N 5-[6-[(4-methylpiperazin-1-yl)methyl]benzimidazol-1-yl]-3-[1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]ethoxy]thiophene-2-carboxamide Chemical compound C=1C=CC=C(C(F)(F)F)C=1C(C)OC(=C(S1)C(N)=O)C=C1N(C1=C2)C=NC1=CC=C2CN1CCN(C)CC1 ZHJGWYRLJUCMRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N ammonium dihydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].OP(O)([O-])=O LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000387 ammonium dihydrogen phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- NGPGDYLVALNKEG-UHFFFAOYSA-N azanium;azane;2,3,4-trihydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O NGPGDYLVALNKEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001058 brown pigment Substances 0.000 description 1
- QHFQAJHNDKBRBO-UHFFFAOYSA-L calcium chloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Cl-].[Cl-].[Ca+2] QHFQAJHNDKBRBO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- SCVOEYLBXCPATR-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SCVOEYLBXCPATR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004686 pentahydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001175 peptic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000007362 sporulation medium Substances 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N triammonium citrate Chemical group [NH4+].[NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O YWYZEGXAUVWDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Nový průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps paspali CCM 8176, využitelný pro výrobu námelových alkaloidů, zejména kyseliny paspalové, submerzním způsobem kultivace. Kyselina paspalová je výhodným prekurzorem pro výrobu terapeuticky využívaných námelových alkaloidů, zejména nicergolinu.ŕ
Description
Nový průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps paspali
Oblast techniky
Vynález se týká nového vysokoprodukčního kmene Claviceps paspali, využitelného pro výrobu námelových alkaloidů, zejména kyseliny paspalové, submerzním způsobem kultivace. Kyselina paspalová je výhodným prekurzorem pro výrobu terapeuticky využívaných námelových alkaloidů, zejména nicergolinu, může však sloužit i k parciální syntéze peptidických námelových alkaloidů.
Dosavadní stav techniky
Kyselina paspalová byla poprvé vyizolována ze saprofytní kultury Claviceps paspali (Helv.Chim.Acta, 47, 1052, /1964/). Chemickou izomerizací může být kyselina paspalová převedena na kyselinu lysergovou, která, připravena hydrolýzou peptidických námelových alkaloidů, je běžným meziproduktem výroby řady farmaceutických aktivních substancí (Helv.Chim.Acta, 51,1372/1968/).
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je nový vysokoprodukční kmen Claviceps paspali CCM 8176, využitelný pro výrobu námelových alkaloidů, zejména kyseliny paspalové, submerzním způsobem kultivace.
Uvedený saprofytický kmen Claviceps paspali CCM 8176 byl vyšlechtěn z původní parazitické formy Claviceps paspali, izolované z trávy Paspalum sp. z oblasti severního pobřeží Portugalska. Z pozitivně otestovaných chemicky 0,1 % roztokem chloridu rtuťnatého sterilizovaných sklerocií, byla asepticky izolována aska a monoaskovým rozsevem byl získán základní biologický materiál pro mutační zákroky. Po pěti stabilizačních kultivacích na syntetickém agarem ztuženém médiu byly otestovány produkční a růstové parametry jednotlivých izolátů a bylo vybráno 15 kmenů, které byly vystaveny mutagennímu působení nitrosoguanidinu, resp. Nmethyl-N-nitrosoguanidinu (NTG). Životaschopní mutanti byli opět stabilizováni pěti pasážemi na agarem ztuženém syntetickém médiu a otestováni na produkční a růstové parametry. Nejlepší mutanti byli vystaveni vysoké koncentraci NTG s frekvencí přežívání 0,005 % mutantů. Uvedenou kombinací selekčních a mutačních postupů se nám podařilo získat nový vysokoprodukční kmen Claviceps paspali CCM 8176.
Na syntetické půdě roste kmen Claviceps paspali CCM 8176 pomalu, po 14 dnech kultivace dosahují kolonie průměr 8 až 10 mm. Teplotní optimum kmene je při 24 °C. Kmen tvoří kompaktní bílé až béžové mycelium, bez výrazné vůně a tvoří okrový až hnědý exsudát. Po 7 až 10 dnech dochází k produkci béžového až hnědého pigmentu, který je uvolňován do kultivačního média. Konidie se začínají tvořit po 10 dnech kultivace, kplné sporulaci dochází po 14 dnech růstu.
Mycelium je tvořeno větvenými hyfami o průměru 4 až 6 pm, které jsou přehrazeny četnými septy. Kmen tvoří současně dva typy konidií, drobné, kulovité až vejčité kulovité mikrokonidie o velikosti (2 až 3) x (3 až 4) pm a protáhlé makrokonidie o rozměrech (2 až 4) x (8 až 10) pm, vyrůstající na krátkých laterálních konidioforech zakončených fialidami. Charakteristickým morfologickým znakem kmene je tvorba sklerociím podobných buněk. Jedná se o silnostěnné kulovitě vejčité až nepravidelně oválné buňky, jejichž velikost značně kolísá v intervalu hodnot (3 až 6) x (4 až 6) pm.
-1CZ 287623 B6
Nový kmen Claviceps paspali CCM 8176 je uložen v České sbírce mikroorganismů Masarykovy university, ul. Tvrdého č. 14, Brno.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 ío Saprofytický kmen Claviceps paspali CCM 8176 byl vyšlechtěn z původní parazitické formy Claviceps paspali, izolované z trávy Paspalum sp. z oblasti severního pobřeží Portugalska. Z pozitivně otestovaných, chemicky 0,1% roztokem chloridu rtuťnatého sterilizovaných sklerocií, byla asepticky izolována aska a monoaskovým rozsevem byl získán základní biologický materiál pro mutační zákroky. Po pěti stabilizačních kultivacích na syntetickém agarem ztuženém médiu byly otestovány růstové a produkční vlastnosti jednotlivých izolátů na minimálním produkčním médiu, obsahující pouze zdroj uhlíku, dusíku a fosforu. Bylo vybráno 15 kmenů, které byly vystaveny mutagennímu působení NTG po dobu 60 minut. Životaschopní mutanti byli opět stabilizováni pěti pasážemi na agarem ztuženém syntetickém médiu a otestováni na produkční a růstové schopnosti. Z nich nejlepší mutanti, splňující výše uvedená 20 kritéria, byli vystaveni působení 0,2 % NTG po dobu 360 minut. Po následném rozsevu na agarem ztuženém minimálním médiu bylo procento přežívání 0,005. Touto kombinovanou selekční a mutační technikou byl vyšlechtěn vysokoprodukční kmen Claviceps paspali CCM 8176, který byl stabilizován na sporulačním médiu morfologicky a produkčně.
Příklad 2
Ze 16 dnů kultivované kultury kmene Claviceps paspali CCM 8176 na agarem ztuženém médiu MGPY o složení (g.l*1): maltóza 20, glukóza 20, pepton pro bakteriologii 5, kvasničný autolyzát 30 5, pH 5,8, se připraví sporová suspenze setřením do fyziologického roztoku. Touto suspenzí, jež obsahuje 2,5.10ď spor a hyfových fragmentů produkčního kmene v 1 ml fyziologického roztoku se zaočkují 250 ml Erlenmeyerovy baňky s inokulačním médiem o složeni (g.l*1): sacharóza 30, kukuřičný extrakt práškový 15, dihydrogenfosforečnan draselný 3,0, pitná voda, pH 5,2, vždy 5 ml setřené buněčné suspenze na 50 ml inokulačního média. Kultivace se provádí na rotační 35 třepačce po dobu 120 hodin při teplotě 24 °C, otáčkách 200 min.'1 a excentrické 5,5 cm. Takto připraveným inokulem se zaočkuje předem vysterilizované produkční médium o složení (g.l’1): sorbit 50, kyselina jantarová 30, síran amonný 20, chlorid sodný 10, kukuřičný extrakt práškový 10, dihydrogenfosforečnan draselný 2,0, síran hořečnatý heptahydrát 0,3, dusičnan vápenatý tetrahydrát 0,1, síran zinečnatý heptahydrát 0,01, síran železnatý heptahydrát 0,01, síran měďnatý 40 pentahydrát 0,005, síran manganatý pentahydrát 0,005, pitná voda, pH 5,2, vždy 25 ml inokula na
250 ml produkčního média v 1 000 ml Erlenmeyerově baňce. Kultivace se provádí na rotační třepačce při teplotě 24 °C, 200 otáčkách za min.*1, excentrické 5,5 cm. Po 17 dnech kultivace a následné separaci mycelia od produkčního média byla provedena analýza pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) spektra extracelulámě produkovaných alkaloidů.
Fermentační tekutina obsahovala 4 927mg.r’ celkových alkaloidů, z nichž bylo 2 702mg.l*1 kyseliny paspalové, 127 mg.l'1 kyseliny isopaspalové, 612 mg.T1 kyseliny lysergové a 433 mg.F 1 kyseliny isolysergové.
Příklad 3
Submerzním inokulem připraveným stejným způsobem jako v příkladu 1 se zaočkuje předem vysterilizované inokulační médium o složení (g.l*1): glukóza 30, kukuřičný extrakt práškový 10, dihydrogenfosforečnan draselný 2,0, síran hořečnatý heptahydrát 0,3, pitná voda, pH 5,2, vždy 55 10 ml inokula na 100 ml inokulačního média v 500 ml Erlenmeyerově baňce. Kultivace se
-2CZ 287623 B6 provádí na rotační třepačce po dobu 96 hodin při teplotě 24 °C, otáčkách 200 min1 a excentricitě 5,5 cm. Takto připraveným dvojstupňovým inokulem se zaočkují 2 000 ml Erlenmeyerovy baňky s předem vysterilizovaným produkčním médiem o složení (g.T1): sorbit 100, kyselina vinná 30, síran amonný 20, chlorid sodný 10, kukuřičný extrakt práškový 8,0, dihydrogenfosforečnan draselný 2,0, síran hořečnatý heptahydrát 0,3, síran zinečnatý heptahydrát 0,01, síran železnatý heptahydrát 0,01, pitná voda, pH 5,4, vždy 50 ml na 500 ml produkčního média. Kultivace se provádí na rotační třepačce při teplotě 24 °C, otáčkách 200 min'1 a excentricitě 5,5 cm. Po 15 dnech kultivace byla provedena separace mycelia od kultivačního média a stanoveno HPLC spektrum produkovaných alkaloidů. Fermentační tekutina obsahovala 7 927 mg.l'1 celkových alkaloidů, z toho 4257 mg.l'1 kyseliny paspalové, 849 mg.l1 kyseliny lysergové, 105 mg.l'1 kyseliny isolysergové a 146 mg.l'1 kyseliny isopaspalové.
Příklad 4
Submerzním inokulem připraveným analogickým způsobem jako v příkladu 1 se zaočkuje předem vysterilizované inokulační médium o složení (g.1*1): sorbit 40, kyselina jantarová 10, kukuřičný extrakt práškový 4,0, dihydrogenfosforečnan draselný 3,0, síran hořečnatý heptahydrát 0,3, pitná voda, pH 5,3, vždy 50 ml na 500 ml inokulačního média. Kultivace se provádí na rotační třepačce při teplotě 24 °C, otáčkách 200 min.'1, excentricitě 5,5 cm po dobu 96 hodin. Takto připraveným dvojstupňovým inokulem se zaočkuje 20 1 laboratorní fermentor s předem vysterilizovaným produkčním médiem o složení (g.l'1): sorbit 40, maltodextrin 40, kyselina citrónová 40, síran amonný 20, chlorid sodný 10, kukuřičný extrakt práškový 7,5, dihydrogenfosforečnan draselný 1,5, síran hořečnatý heptahydrát 0,3, pitná voda, pH 5,4, v množství 1 000 ml dvojstupňového inokula na 9 000 ml produkčního média. Kultivace probíhá při teplotě 25 °C, vzdušnění 0,5 vvm, přetlaku 20 kPa a otáčkách míchadla 2,5 s'1. Po 13 dnech trvání produkční fáze obsahovala fermentační tekutina 3 590 mg.1'1 celkových alkaloidů, z nichž bylo 1 563 mg.l'1 kyseliny paspalové, 173 mg.l'1 kyseliny lysergové, 240 mg.l'1 kyseliny isolysergové, 122 mg.l'1 kyseliny isopaspalové, stanoveno HPLC.
Příklad 5
Submerzním inokulem připraveným shodným postupem jako v příkladu 1 se zaočkuje předem vysterilizované inokulační médium ve 2 000 ml Erlenmeyerových baňkách o témže složení, vždy 50 ml inokula 500 ml čerstvě připraveného inokulačního média. Kultivace se provádí na rotační třepačce při teplotě 24 °C, otáčkách 200 min.'1, excentricitě 5,5 cm po dobu 96 hodin. Takto připraveným dvojstupňovým inokulem se zainokuluje ocelový fermentační tank, obsahující 90 1 předem vysterilizovaného produkčního média o složení (g.1*1): sorbit 80, kyselina citrónová 20, kyselina vinná 20, vinan amonný 20, chlorid sodný 10, kukuřičný extrakt práškový 5,0, dihydrogenfosforečnan amonný 2,0, síran hořečnatý 0,3, chlorid vápenatý hexahydrát 0,1, pitná voda, pH 5,2, množství 10 1 dvojstupňového inokula na 90 1 produkčního média. Kultivace probíhá při teplotě 23 °C, vzdušnění 0,4 vvm, přetlaku 40 kPa a otáčkách míchadla 1,7 s'1. Po 15 dnech produkční fáze obsahovala odseparovaná fermentační tekutina 1 486 mg.l'1 sumy alkaloidů, z toho 643 mg.l'1 kyseliny paspalové, 172 mg.l'1 kyseliny lysergové, 21 mg.l'1 kyseliny isolysergové, 36 mg.l'1 kyseliny isopaspalové, analyzováno HPLC.
Příklad 6
Dvojstupňovým submerzním inokulem připraveným obdobným způsobem jako v příkladu 2 se zaočkují 2 000 ml Erlenmeyerovy baňky s předem vysterilizovaným produkčním médiem o složení (g.1'1): sorbit 40, kyselina jantarová 20, kyselina citrónová 20, citronan amonný terciární 20, chlorid sodný 10, kukuřičný extrakt práškový 5,0, dihydrogenfosforečnan draselný 1,0, síran hořečnatý heptahydrát 0,3, D,L-tryptofan 0,01, pitná voda, pH 5,5, vždy 50 ml dvojstupňového
-3CZ 287623 B6 inokula na 450 ml produkčního média. Kultivace se provádí na rotační třepačce při teplotě 24 °C, otáčkách 200 min.'1 a excentricitě 5,5 cm. Po 8 dnech trvání produkční fáze byl proveden jednorázový přídavek sorbitu do produkčního média v množství 40 g.l'1. Po 13 dnech kultivace byla provedena separace mycelia od fermentační tekutiny a v produkčním médiu byla stanovena 5 metodou HPLC produkce alkaloidů. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce:
Závislost produkce spektra alkaloidů na jednorázovém přídavku C-zdroje (produkce jsou uvedeny v mg.l'1):
| TA | KP | KL | KIL | KIP | |
| Varianta 1 | 4001 | 2159 | 272 | 230 | 177 |
| Varianta 2 | 6284 | 3115 | 588 | 327 | 241 |
Legenda: TA - celková suma alkaloidů KP - kyselina paspalová KL - kyselina lysergová KIL - kyselina isolysergová
KIP - kyselina isopaspalová varianta 1 - původně připravené produkční médium varianta 2 - produkční médium s jednorázovým přídavkem C-zdroje
Průmyslová využitelnost
Postup podle vynálezu je určen pro průmyslovou výrobu kyseliny paspalové, která je důležitým prekurzorem výroby některých léčiv. Submerzní fermentace je běžnou průmyslovou výrobní metodou.
Claims (1)
1. Průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps paspali CCM 8176, využitelný pro výrobu námelových alkaloidů, zejména kyseliny paspalové, submerzním způsobem kultivace.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19942456A CZ287623B6 (cs) | 1994-10-06 | 1994-10-06 | Nový průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps paspali |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ19942456A CZ287623B6 (cs) | 1994-10-06 | 1994-10-06 | Nový průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps paspali |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ245694A3 CZ245694A3 (en) | 1996-04-17 |
| CZ287623B6 true CZ287623B6 (cs) | 2001-01-17 |
Family
ID=5464999
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19942456A CZ287623B6 (cs) | 1994-10-06 | 1994-10-06 | Nový průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps paspali |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ287623B6 (cs) |
-
1994
- 1994-10-06 CZ CZ19942456A patent/CZ287623B6/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ245694A3 (en) | 1996-04-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Brock | Studies on the nutrition of Morchella esculenta Fries | |
| US4173629A (en) | Antibiotic S 31794/F-1 | |
| KR20210118391A (ko) | 에르고티오네인을 생산하는 균주 및 이의 선별 방법 | |
| EP1751272B1 (en) | Production of tacrolimus (fk-506) using new streptomyces species | |
| CN112501029A (zh) | 松蕈及其用于生产麦角硫因的方法 | |
| CA2085522A1 (en) | Microbial process for the production of trans-4-hydroxy-l-proline | |
| CN116218690B (zh) | 一种产布雷非德菌素a的拟粗壮弯孢霉及其发酵方法 | |
| Elisashvili et al. | Extracellular polysaccharide production by culinary-medicinal Shiitake mushroom Lentinus edodes (Berk.) Singer and Pleurotus (Fr.) P. Karst. species depending on carbon and nitrogen source | |
| CZ287623B6 (cs) | Nový průmyslový produkční kmen mikroorganismu Claviceps paspali | |
| US7939081B2 (en) | Method for producing cercosporamide | |
| US3038840A (en) | Process for the production of alkaloid derivatives of lysergic acid | |
| US4369252A (en) | Fermentation process for the preparation of ergot alkaloids, primarily ergocornine and β-ergocryptine | |
| CN113337432A (zh) | 一种产吡咯喹啉醌的食甲基菌及其应用 | |
| CN1125183C (zh) | 抗肿瘤抗生素力达霉素的制备新方法 | |
| US4968610A (en) | Process for the preparation of chanoclavine | |
| PL103996B1 (pl) | Sposob wytwarzania nowej mieszaniny antybiotycznej a-30912 | |
| KR20000049023A (ko) | Ｆｒ900482 및 유사 화합물의 신규한 제조방법 | |
| Compaore et al. | Enhancement of antibacterial compounds production by Aspergillus flavus and Penicillium citrinum isolated from locals foods in Bobo Dioulasso and Ouahigouya, Burkina Faso | |
| CZ282334B6 (cs) | Vysokoprodukční kmen mikroorganismu penicillium chrysogenum CCM 8196 | |
| CZ282335B6 (cs) | Vysokoprodukční kmen mikroorganismu Penicillium chrysogenum CCM 8197 | |
| KR790001711B1 (ko) | 생리활성물질 a f 2562의 제조법 | |
| CA2008628C (en) | Substance uct-1003 and process for producing the same | |
| EP0007341B1 (en) | Octahydro-10,10-dimethyl-6,8b-ethano-8bh-cyclopenta (de)(2)benzopyran-1,4-dione and its preparation | |
| CS248719B2 (en) | Production method of the clavine alcaloids | |
| US4939089A (en) | Process for the preparation of festuclavine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20081006 |