CZ279654B6 - Způsob výroby cyklosporinu A - Google Patents

Abstract

Řešení se týká způsobu výrobu cyklosporinu A v orthorhombické (P2.sub.1.n.2.sub.1.n.2.sub.1.n.) krystalické formě s krystalovou mřížkou, v níž rozměr a je roven 12,5 Angstr"omu, rozměr b je roven 22,9 Angstr"omu, rozměr c je roven 28,4 Angstr"omu, a objem na asymetrickou jednotku je roven 2027 Angstr"om.sup.3.n., které spočívá v tom, že se cyklosporin A rozpustí v prostředí tvořeném rozpouštědlem, obsahujícím polymerní ether s molekulovou hmotností alespoň 200, za teploty alespoň 40 .sup.o.n. C na roztok obsahující od 5 do 60 % hmotnostních cyklosporinu A, vztaženo na celkovou hmotnost roztoku, cyklosporin A se krystaluje z tohoto rozpouštědla za vzniku orthorhombické krystalické formy vymezené výše a získaný výsledný produkt se z prostředí isoluje. Takto získanou účinnou látku je možno použít ve všech aplikacích pro použití cyklosporinu A, zejména však také pro místní podání na kůži, do oka a pro nitrokloubní podání. ŕ

Description

Vynález se týká způsobu výroby cyklosporinu A v orthorhombické (P2₁2₁2₁) krystalické formě s krystalovou mřížkou, v níž rozměr a je roven 12,5 Á, rozměr b je roven 22,9 Á, rozměre je a o roven 28,4 A a objem na asymetrickou jednotku je roven 2027 A .

Sloučenina, která je označována jako cyklosporin A, je také známa pod názvem ciclosporin.

Dosavadní stav techniky

Cyklosporin A je známý metabolit z hub, který má široké farmaceutické použití. Jde o cyklický poly-N-methylovaný endekapeptid vzorce —MeBmt-aAbu-Sar-MeLeu-Val-MeLeu-Ala- (D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal—

2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 ve kterém

-MeBmt- znamená N-methyl-(4R)-4-but-2E-en-l-yl-4-methyl-(L)threonylový zbytek.

Cyklosporin A a způsoby jeho výroby již byly popsány například v US patentovém spisu č. 4 117 118. Primární oblast klinických výzkumu této látky byla při potlačování imunologické odpovědi organismu, zvláště v případech, kdy bylo zapotřebí předběžně ošetřit příjemce transplantovaných orgánů, například srdce, plic, jak srdce, tak plic, jater, ledvin, slinivky břišní, kostní dřeně, kůže a rohovky, zvláště v případě transplantace allogenních orgánů. V této oblasti bylo možno dosáhnout při použití shora uvedené látky značných úspěchů, takže cyklosporin A (Ciclosporin) je nyní široce klinicky užíván a je běžně dodáván pod obchodní značkou Sandimmun^R nebo Sandimmune , například ve formě koncentrátu pro použití v infuzích, ve formě roztoku pro perorální podání nebo ve formě roztoku, uloženého do želatinových kapslí, poslední dvě lékové formy byly popsány v US patentovém spisu č. 4 388 307.

Současně byly vyvíjeny snahy zjistit další možnosti použití uvedené látky u dalších onemocnění autoimunologické povahy a u zánětlivých stavů, zejména těch, při jejichž původu hraje určitou úlohu autoimunologická složka, jako jsou záněty kloubů, například rheumatidní arthritis, arthritis chronica progressiva a arthritis deformans, další rheumatidní onemocněni, v těchto případech byla podána celá řada zpráv o výsledcích, které byly získány in vitro, na zvířeti i při klinických pokusech. Specifická autoimunologická onemocnění, při .nichž je vhodná léčba cyklosporinem A zahrnují například autoimunologické hematólogické poruchy jako hemalytickou aněmii, aplastickou anemii, čistou

-1A erythrocytární anemii a idioatickou trombocytopenii, systemický lupus erythematosus, polychondritis, scleroderma, Wegeneroca granulomatosis, dermatomyositiš, chronická aktivní hepatitis, myasthenia grdvis, lupenka, Steven-Jonsonův syndrom, idiopathická sprue, autoimunoiogická zánětlivá onemocnění tlustého střeva včetně například ulcerativní colitis a Crohnóvy choroby, pemphigus, endokrinní opthalmopathie, Gravesova nemoc, sarcoidosis, roztroušená skleróza, primární biliární cirhosa, primární diabetes mladistvých (diabetes mellitus typ I), Bechcetova nemoc, uveitis anterior a posterior, jarní záněty spojivek, keratoconjuctivits sicca, intersticiální fibrosa plic, psoriatická arthritis a glomerulonephritis (s nebo bez nefrotického syndromu, například včetně idiopathického nefrotického syndromu nebo nefropathie s minimálními změnami).

Další obory výzkumů zahrnovaly potenciální možnost podání uvedené látky proti parasitům, zejména proti prvokům, výzkumy se týkaly zejména použití při malárii, coccidiomykosa a schistosomiáza, jakož i pokusů zvrátit odolnost nádorů proti chémotherapeutickým látkám, například cytostatikům, byla zkoumána také možnost využití této látky k podpoře růstu vlasů, například při léčbě alopecia.

V pevném stavu existuje cyklosporin A jako amorfní nebo jako krystalická forma. Pokud jde o krystalickou formu, může jít o tetragonální nebo o orthorhombickou modifikaci.

Tetragonalní modifikace (P4j), která se také uvádí jako Cy-A/X-I je popsána spolu se způsobem své výroby například v rakouském patentovém spisu č. 353 961. Tato modifikace má mřížo o ku a = b = 13,8 A, c = 41,2 A, objem na asymetrickou jednotku je

974 A , teplota tam je přibližné 140 áz 150 C, tato modifikace obsahuje přibližně dvě molekuly vody v jedné molekule cyklosporinu A.

První orthorhombickou modifikaci (^2^2^2-^) je možno získat překrystalováním z diisopropyletheru, jak je uvedeno v publikaci Total synthesis - change in molecular structure - biological effect : Ciclosporin as example, R.Wenger v Sandorama

1984/III. Tato zvláštní modifikace zahrnuje solvát s diisopropyletherem v poměru přibližně 1:2 s krystalovou mřížkou a = 12,R A, b = 22,9 A, c = 28,4 A, objem na asymetrickou jednotO o .

ku = 2 027 A , teplota tání je přibližně 150 °C. Orthorhombicke krystaly solvátu je možno získat překrystalováním z přesycených roztoků v příslušném prostředí v delším časovém období. Orthorhombické modifikace solvátu cyklosporinu A s diisopropyletherem, připravený Wengerem byly získány přidáním koncentrovaného roztoku cyklosporinu A v methylenchloridu, v němž je látka snadno rozpustná, k diisopropyletheru, v němž je sloučenina poměrně méně rozpustná s následným odpařením methylenchloridu. Krystalizace ze zbývajícího diisopropyletheru potom může probíhat po dobu přibližně 7 dnů při teplotě místnosti. Ořthorhombické krystalické formy s obsahem uvedených sulfátů se obvykle uvádějí pod označením CY-A/X-II.

-2CZ 279654 Β6

Nyní byly identifikovány další orthorhombické modifikace (P2₁2₁2₁), které jsou charakterizovány tím, že v podstatě téměř chybí složka jakéhokoliv rozpouštědla, to znamená, že tyto modifikace sestávají v podstatě pouze z volného cyklosporinu A.

Rozměry krystalové mřížky pro modifikace orthorhombického typu, které jsou prosté rozpouštědla a nemají formu solvátů jsou t> o o a = 12,7 A, b = 15,7 A_r c = 36,3 objem na asymetrickou jednotku je 1 804 A . Teplota taní je přibližně 180 až 190 °C až 195 °C, například závisí také na stupni čistoty a na zdroji, z něhož byly krystalky získány, jak bude dále uvedeno v příkladech 1 a 2, v nichž jsou popsány specifické postupy, umožňující získat tuto modifikaci. Cyklosporin A bez rozpouštědla v nesolvatované formě orthorhombických krystalů se také uvádí pod označením CY-A/X-III. Další charakteristiky, například difrakce v rtg záření pro formu CY-A/X-III jsou dále uvedeny v tabulce III a na obr. IV spolu s odpovídajícími údaji pro svrchu uvedené formy CY-A/X-I a CY-A/X-II.

Přes podstatný pokrok, kterého bylo možno dosáhnout při použití cyklosporinu A a přes velké využití v lékařství, zejména při transplantaci orgánů, není využití uvedené látky ještě bez problémů. Potíže se vyskytují zvláště při výrobě galenických forem, které by dovolovaly pohodlné a plně uspokojivé podávání v případě některých specifických onemocnění nebo stavů, u nichž se cyklosporin A prokázal jako účinné léčivo.

Vzniklé obtíže jsou způsobeny částečně fyzikálními vlastnostmi uvedené látky, například poměrně omezená rozpustností nebo kompatibilitou s běžně užívanými farmaceutickými nosiči nebo prostředími. Tyto obtíže jsou spojeny také s povahou některých chorobných stavů, u nichž je cyklosporin A prvním a hlavním léčebným prostředkem, u nichž dochází k nežádoucím vedlejším účinkům při perorálním podání. Například při léčbě lupenky by bylo nejvýhodnější podávat účinnou látku perorálně. Lupenka je široce rozšířené onemocnění, které nepříznivě ovlivňuje i psychický stav nemocného, přičemž v současné době neexistuje obecně užívaná účinná léčba. Bylo by tedy žádoucí podobnou léčbu navrhnout. Je zřejmé, že cyklosporin A by mohl splnit tyto požadavky, avšak prozatím není možno zajistit účinné perorální podáváni v tomto případě. Podobné poměry existují například při léčbě některých očních onemocnění, jako je uveitis posterior a keratoconjunctivitis sicca.

Pro podávání cyklosporinu A byly až dosud navrženy různé systémy včetně galenických forem pro místní, kožní nebo oční podání, a to zejména pro použití v očním lékařství, při léčbě lupenky nebo jiných dermakologických onemocnění a stavů, jako je například atopická dermatitis a alopecia a pro léčbu uveitis. Při použití těchto systémů avšak až dosud nebylo dosaženo žádoucího zlepšení nebo nebylo jejich použití plně uspokojivé.

Ve zprávách o pokusech léčit lupenku podáním známých perorálních roztoků přímo povrchově na psoriatické afekce se uvádí, že nebylo dosaženo žádného úspěchu nebo bylo dosaženo pouze minimálního úspěchu a v případě atopické dermatitidy bylo použití

-3CZ 279654 B6 silně omezeno. Obdobný stav je možno popsat také v případě očního použití, kde bylo užití této látky pokládáno za žádoucí při prevenci například odmítnutí transplantátu rohovky nebo při léčbě některých onemocnění předního očního segmentu, avšak prozatím nebyly podány zprávy o žádném prostředku pro toto místní použití, který by umožňoval snadnou, bezpečnou nebo účinnou léčbu uvedených onemocnění nebo stavů, pokud zasahují hlouběji do oka, například v případě uveitis včetně uveitis posterior.

Srovnatelné obtíže se vyskytly také při vývoji dalších systémů pro podání uvedené účinné látky, například v případě nitrokloubních injekcí pro místní léčbu arthritických onemocnění, například tak, jak byly uvedeny shora nebo v případě, že účinná látka měla být podávána přímo do chorobných ložisek, jako je tomu v případě těžkých poškození kůže lupenkou nebo i v případě různých systémů pro perorální podání, například těch, u nichž mělo být dosaženo modifikované biologické dostupnosti nebo modifikovaného uvolňování účinné látky.

Pokusy zpracovat cyklosporin A lékovou formou byly až dosud prováděny při Využití uvedené sloučeniny v roztoku, méně často při použití amorfní formy Cy-A/X-I, krystalické formy byly identifikovány převážně například pro účely registrace účinné látky. Přes velké úsilí, které bylo vynaloženo na hledání nových nebo zlepšených alternativ, byly až dosud podávány v případě perorálních roztoků a infuzních koncentrátů pouze zprávy o široce užívaných systémech.

Nyní bylo neočekávaně zjištěno, že využití orthorhombi.cké krystalické formy, například formy Čy-A/X-II a zejména Cy-A/X-III poskytuje zvláštní výhodu při přípravě galenických lékových forem různého typu s obsahem cyklosporinu A.

Zvláště bylo zjištěno, že uvedené krystalické modifikace je možno použít k přípravě galenických lékových forem, které obsahují cyklosporin A ve stálé, jemně částicové formě a/nebo mají zvýšenou stálost nebo zvláštní vlastnosti při uvolňování účinné látky. Tímto zjištěním se otevírá cesta pro výrobu nových a zlepšených systémů pro podávání této účinné látky, například s prodlouženým nebo zpožděným uvolňováním a/nebo s vlastnostmi, které jsou vhodné pro léčbu onemocnění nebo stavů, které až dosud nebylo možno tímto způsobem léčit nebo pro něž je léčba běžnými prostředky s obsahem cyklosporinu A méně vhodná. Bylo zvláště prokázáno, že při použití uvedených krystalických modifikací je možno získat galenické formy, vhodné pro místní nebo dermální podání nebo pro místní podání v očním lékařství k léčbě onemocnění kůže nebo oka, například tak, jak byly tyto choroby shora uvedeny, zejména jde o léčbu lupenky, atopické dermatitidy, kontaktní dermatitidy, oční příznaky Behchetovy nemoci, uveitidy a keratoconjuctivity sicca. Použití krystalických modifikací také umožňuje přípravu injekčních forem se zpožděním nebo prodloužením uvolňování, toto použití je zvláště vhodné například při léčbě onemocnění nebo stavů, u nichž by časté podávání snižovalo využitelnost lékové formy, například při léčbě kloubních zánětů nebo jiných kloubních onemocnění, při nichž je zapotřebí vstřikovat léčiva přímo do kloubu nebo při léčbě lupenky a podobných onemocnění kůže, při nichž se účinná látka vstřikuje přímo do poškozených oblastí kůže.

-4CZ 279654 B6

Pro všechna tato použití bylo prokázáno, že orthorhombické krystalické formy, zejména forma CY-A/X-III jsou daleko vhodnější než další dostupné formy, zejména amorfní forma nebo forma CY-A/X-I, například zejména pokud jde o fyzikálně-chemické vlastnosti, zejména stálost, rychlost a průběh uvolňování z krystalické mřížky a možnost zpracování na galenické lékové formy. Forma CY-A/X-III je nová a výhodná orthorhombická krystalická forma pro léčebné použiti. Způsobem podle vynálezu je možno získat

A CY-A/X-III, tj. cyklosporin A v nesolvatované orthorhombické krystalické formě, zvláště

Ί

A CY-A/X-III s krystalickou mřížkou a dalšími shora uvedenými fyzikálními vlastnostmi a/nebo

A CY-A/X-III s difrakčnimi vlastnostmi v rtg-záření tak, že odpovídají vlastnostem, uvedeným v tabulce III nebo na výkrese IV.

Vynález se také týká

B způsobu výroby formy CY-A/X-III, který spočívá v tom, že se nechá krystalizovat cyklosporin A z prostředí, které formu CY-A/X-III obsahuje s následnou izolací uvedené formy.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je způsob výroby cyklosporinu A v orthorhombické ^2^2^2-^) krystalické formě s krystalovou mřížkou, v níž rozměr a je roven 12,5 A, rozměr b je roven 22,9 o o

A, rozměr c je roven 28,4 A a objem na asymetrickou jednotku je roven 2 027 A , který spočívá v tom, že se cyklosporin A rozpustí v rozpouštěcím prostředí, tvořeném polymerním etherem s molekulovou hmotností alespoň 200, za teploty alespoň 40 °C na roztok obsahující od 5 do 60 % hmot, cyklosporinu A, vztaženo na celkovou hmotnost roztoku a cyklosporin A se krystaluje z tohoto rozpouštědla za vzniku orthorhombické krystalické formy vymezené shora.

Při výhodném provedení tohoto vynálezu rozpouštěcí prostředí obsahuje polyethylenglykol nebo polypropylenglykol.

Při zvláště výhodném provedení rozpouštěcí prostředí obsahuje glycerolpolyethylenglykolester, ester polyoxyethylensorbitanu, polyoxyethylenester nebo produkt trarts-esterifikace přírodních triglyceridů z olejů a polyalkylenpolyolů.

Dále, se uvádí podrobnější popis vynálezu v širších souvislostech.

Prostředím, vhodným pro použití při provádění způsobu podle vynálezu, zvláště prostředím, vhodným k rozpouštění cyklosporinu A je zejména prostředí, které obsahuje rozpouštědla s vyšší molekulovou hmotností, například s molekulovou hmotností vyšší než 200. Zvláště vhodným prostředím je prostředí s obsahem vysokomolekulárních etherů, zvláště polymerních etherů, například polyalkyletherů, jako polyethylenglykolů a pólypropylenglykolů. Pří-5CZ 279654 B6 kladem polymerních etherů, kterých je možno použít, jsou polyethylenglykol a polypropylenglykol, například s molekulovou hmotností vyšší než 200. Estery glycerolu a polyethylenglykolu, například glycerolpolyethylenglykolricinoleáty a glyrolpolyethylenglykoloxystearáty, tak, jak se dodávají například pod obchodním názvem Cremophor EL a Cremophor RH, tyto látky byly popsány v publikaci Fiedler, Lexikon der Hilfstoffe, 2. vydání, sv. 1, str. 257 a 258, dále je možno použít estery polyoxyethylensorbitanu, které se dodávají například pod obchodním názvem Tween (Fiedler, tamtéž, sv. 2, str. 972 až 975), dále estery polyoxyethylenu, například polyoxyethylenu s kyselinou stearovou, dodávané například pod obchodním názvem Myrj (Fiedler, sv. 2, str. 636) a produkty trans-esterifikace přírodních triglyceridů z olejů a polyalkylenpolyolů, včetně transesterifikačních produktů kukuřičného oleje, jádrového oleje, mandlového oleje, podzemnicového oleje, olivového oleje, palmového oleje nebo směsi těchto olejů s polyethylenglykoly, zejména s polyethylenglykoly s molekulovou hmotností 200 až 800, které jsou dodávány například pod obchodním názvem Labrafil (Fiedler, str. 539). Zvláště vhodná jsou prostředí, které obsahují polyethylenglykoly s molekulovou hmotností 200 až 600, s výhodou 300 až 400.

Prostředí, které obsahuje formu CY-A/X-III může obsahovat jednu nebo větší počet složek i navíc ke shora uvedeným složkám, například je možno použít také alkoholy s nízkou molekulovou hmotností a/nebo vody jako prostředí, které modifikuje vztah mezi rozpouštědly a účinnou látkou a napomáhá krystalizaci. Zvláště vhodné je prostředí pro použití jako nosné prostředí pro formu CY-A/X-III je prostředí, které obsahuje 0,5 objemových dílů ethanolu, 8,0 objemových dílů polyethylenglykolu (300) a 1,0 objemového dílu vody.

Způsob podle vynálezu spočívá v tom, že se nejprve rozpustí cyklosporin A například v amorfní nebo tetragonální formě ve zvoleném prostředí při vyšší teplotě. Teplota při rozpouštění bude záviset na zvoleném prostředí, avšak obvykle bude vyšší než 40, zvláště vyšší než 50 °C. v případě prostředí na bázi polyethylenglykolu se bude teplota rozpouštění pohybovat obvykle nad 70 °C, například v rozmezí 75 až 130 °C. Získaný roztok bude obsahovat Více než 5 %, s výhodou více než 10 %, například 40 až 60 %, s výhodou 20 % hmot, cyklosporinu A, vztaženo na hmotnost celého roztoku. Potom se zahájí krystalizace cyklosporinu A za současného chlazení, Obvykle se poměrně delší období, například 10 až 35 minut nebo více v závislosti na požadovaném růstu krystalů.

V případě potřeby je možno zahájit krystalizaci například působením ultrazvuku nebo použitím očkovacího materiálu. V případě, že se použité prostředí skládá z ethanolu, polyethylenglykolu a vody tak, jak bylo shora popsáno, bylo zjištěno, že tvorbu krystalů je možno snadno zahájit v teplotním rozmezí 60 až 90, například 65 až 85 °C působením ultrazvuku při přibližně 20 000 cyklů/sek. Jak bude dále uvedeno v příkladu 2, je možno kontinuálním působením ultrazvuku v průběhu krystalizace získat mikrokrystalky s velmi malou a poměrně velmi stálou velikostí.

Rychlost růstu krystalů a jejich rozměr bude samozřejmě záviset na zvoleném prostředí a na podmínkách, při nichž krystalizace probíhá, například na tom, zda se použije nebo nepoužije

-6CZ 279654 B6 ultrazvuku a s jakou frekvencí. Při použití pro přípravu galenických forem tak, jak bude dále popsáno, se užívá výsledná forma CY-A/X-III s výhodou ve formě velmi jemných částic, například se středním průměrem nižší než 200 μη, například 0,5 až 200 μιη. V případě, že původně získané krystalky mají větší průměr, je možno získat materiál s požadovanou velikostí částic běžnými postupy, . například mletím, drcením, práškováním, mikronizací nebo jinou fragmentací na požadovaný rozměr. Takto získané prostředky s obsahem menších částic mohou být vhodné pro některé účely, například v lékových formách pro místní podání pro použití na kůži, avšak v mnoha případech není mletí, drcení nebo podobné zpracování výhodné. Nevýhoda spočívá v tom, že výsledný materiál má poměrně široké rozmezí distribuce velikosti . částic a částice jsou poměrně ostré v důsledku rozdrcení krystalků. Mimoto toto drcení většinou rozlišuje fyzikální vlastnosti přírodního povrchu krystalů a mimoto je nákladné při zachování sterilních podmínek, například při výrobě galenických lékových forem, které jsou určeny pro nitrokloubní podání. Ze shora uvedených důvodů se obvykle dává přednost provádění způsobu podle vynálezu tak, aby byly získány krystalky, například mikrokrystalky, které již mají požadované konečné rozměry částic. Například při použití prostředků pro nitrokloubní nebo parenterální podání je výhodné použít formu CY-A/X-III v nerozdrceném mikrokrystalickém stavu, tj. mikrokrystalky, které nebyly podrobeny drcení, mletí, mikronizací ani žádnému dalšímu postupu pro zmenšení částic.

Aby bylo možno získat mikrokrystalky formy CY-A/X-III, které je možno použít přímo v nerozdrceném stavu shora uvedeným způsobem, provádí se způsob podle vynálezu s výhodou za míchání, například v rozmezí 200 až 300 až například 700 otáček za minutu v průběhu krystalizace a zvláště za působení ultrazvuku, například v rozmezí 10 000 až 30 000 cyklů/sek., obvykle 20 000 cyklů/sek.

Změnami prostředí pro tvorbu formy CY-A/X-III a úpravou rychlosti chlazení a rychlosti míchání v průběhu překrystalování známým způsobem a tak, jak bude uvedeno v jednotlivých příkladech je možno získat mikrokrystalickou formu CY-A/X-III s různým středním průměrem částic, například ve shora uvedeném rozmezí nebo tak, jak bude dále uvedeno v souvislosti s různými lékovými formami.

Jak již bylo uvedeno, je obvykle zapotřebí provádět krystalizaci způsobem podle vynálezu za sterilních podmínek. Čištění takto získané formy CY-A/X-III je možno provádět běžným způsobem, například proplachování směsi polyethylenglykolu (300) a vody, například v hmot, poměru 3 až 4 : 1 s následným promytím teplou vodou, jak bude dále podrobněji uvedeno v příkladech. Takto získaná forma CY-A/X-III bude obvykle prostá nebo v podstatě prostá cyklosporinu A v jakékoliv jiné formě, s výhodou v čisté nebo v podstatě čisté formě. Při proplachování shora uvedeným způsobem se současně brání tvorbě amorfního cyklosporinu A.

Způsobem podle vynálezu je tedy možno získat shora uvedené formy cyklosporinu A a mimoto ještě následující forma :

A³ CY-A/X-III podle shora uvedených bodů A až A², tento materiál je prostý nebo v podstatě prostý jakékoliv jiné formy, například amorfní formy, formy CY-A/X-I nebo CY-A/X-II,

A⁴ CY-A/X-III podle shora uvedených bodů A až A³ v čisté nebo v podstatě čisté formě,

A⁵ CY-A/X-III podle shora uvedených bodů A až A⁴ ve formě jemných částic, například se svrchu uvedenými rozměry nebo tak, jak budou díle uvedeny například v souvislosti s výrobou galenických forem s obsahem CY-A/X-III,

A⁶ CY-A/X-III podle shora uvedených bodů A až A⁵, sestávající převážně nebo úplně nebo v podstatě úplně z nerozdrceného krystalického materiálu, například CY-A/X-III podle bodu A^, rv němž jsou částice tvořeny převážně, úplně nebo v podstatě úplně z nerózdrcených mikrokrystalků a

A⁷ CY-A/X-III podle shora uvedených bodů A až A⁶ ve sterilním nebo v podstatě sterilním stavu, například vhodném pro farmaceutické použití, zvláště vhodné pro parenterální použití, například pro injekční, například nitrokloubní podání.

Takto získané mikrokrystalky je možno zpracovat na

C farmaceutický prostředek, který obsahuje

a) cyklosporin A v orthorhombické krystalické formě jako účinnou složku, spolu s

b) ředidlem nebo nosičem, přijatelným z farmaceutického hlediska.

Cyklosporin A může být ve farmaceutickém prostředku obsažen v jakékoliv vhodné orthorhombické formě, například ve formě CY-A/X-IIInebo ve formě CY-A/X-II. Použití formy CY-A/X-II je však obecně méně výhodné vzhledem k fyzikálně-chemickým vlastnostem této formy, která je méně vhodná pro toto použití jak z hlediska zpracovatelnosti na farmaceutické produkty, tak z hlediska snášenlivosti. Nejvýhodnější formou je forma CY-A/X-III, například podle kteréhokoliv z bodů A až A tak, jak byly svrchu uvedeny.

Přestože je cyklosporin A ve farmaceutickém prostředku přítomen v pevné (krystalické) formě, může mít farmaceutický prostředek sám o sobě jakoukoliv příslušnou formu. Může tedy jít o pevné formy, například kapsle, tablety, dražé, prášky a granuláty, polotuhé formy, jako mazání, gely, krémy a pasty a o kapalné formy, například obsahující účinnou látku ve formě jemných částic; například mikronizovaných částic nebo mikročástic ve formě suspenze nebo disperze v kapalném farmaceutickém ředidle nebo nosiči, v němž může být účinná látka udržena ve zvolené krystalické formě.

Farmaceutické prostředky s obsahem cyklosporinu A ve shora uvedené formě zahrnují systémy, které obsahují účinnou látku v jediné fázi, například krémy, gely, mazání a podobně nebo

-8CZ 279654 B6 jednoduché kapsle nebo ampule, například z tvrdé nebo měkké želatiny nebo ampule pro uchovávání injekčních roztoků nebo formy, které obsahují účinnou látku ve větším počtu fází. Jde tedy jak o farmaceutické prostředky s obsahem účinné látky v jedné fázi spolu s jednou nebo větším počtem fází, které účinnou látku neobsahují, jako jsou povlaky, nosiče, fáze, zajištující zpožděné uvolňování nebo fáze obsahující jinou účinnou látku nebo pomocné materiály. Může tedy například jít o povlékané tablety, jejichž jádrem je cyklosporin A v orthorhombické krystalické formě, jádro je obklopeno například povlakem bez účinné látky a podobně, může také jít o povlečené tablety, které mohou obsahovat účinnou látku v jádru nebo povlaku, dále může jít o granuláty, které obsahují první fázi granulátu, tvořenou účinnou látkou v orthorhombické krystalické formě a druhou fázi granulátu, která účinnou látku neobsahuje, může také jít o kapsle, rozdělené na dva nebo větší počet prostorů, například vnitřními stěnami, přičemž jeden z těchto prostorů obsahuje účinnou látku v orthorhombické formě a další prostory účinnou látku neobsahují. Další modifikace jsou zřejmé každému odborníkovi.

Cyklosporin A je v prostředcích a obsahem této účinné látky přítomen převážně nebo s výhodou výlučně nebo alespoň v podstatě výlučně ve formě orthorhombických krystalů, například ve formě CY-A/X-III.

Farmaceutické prostředky obvykle obsahují alespoň jednu fázi nebo oddíl s obsahem cyklosporin A v orthorhombické krystalické formě, například ve formě CY-A/X-III, přičemž krystalická forma je v této fázi nebo v tomto oddílu rovnoměrně rozptýlena. Těmito systémy mohou být například homogenní krémy, mazání, gely a podobně a také kapalné systémy, v nichž je krystalický cyklosporin A homogenně rozptýlen nebo může být snadno homogenně rozptýlen, například ručním mícháním.

Tyto farmaceutické prostředky zahrnují například formy, vhodné pro místní podání, například na kůži nebo do oka nebo pro pařenterální podání, například ve formě infuze nebo injekcí včetně podkožních nebo nitrosvalových injekcí, zejména však nitrokloubních injekcí a injekcí přímo do chorobného ložiska, zahrnuty jsou také enterální formy, například čípky, pesary a perorální formy. Tyto formy jsou však obvykle méně výhodné.

Cyklosporin A nacházející se ve výhodné formě orthorhombických krystalů, například ve formě CY-A/X-III je ve farmaceutických prostředcích obsažen ve formě jemných částic, například v mikronisované formě, ve formě mikročástic, nebo ve formě nerozdrcených malých mikrokrystalků tak, jak bylo popsáno shora. Příslušná velikost částic bude záviset na jejich povaze, na použití a na způsobu podání. Obvykle se však střední průměr částic bude pohybovat v rozmezí 0,5 až 200 μιη. Speciální rozmezí, týkající se například forem pro perorální, místní nebo injekční podání budou dále uvedena.

Prostředky pro místní podání, například pro podání na kůži nebo do oka například při léčbě lupenky nebo atopických dermatóz nebo očních onemocnění, při nichž je nutno dosáhnout potlačení imunologické odpovědi, jako jsou uveitis, conjuctivitis, včetně keratoconjuctivitis sicca nebo vernalis nebo rohovkové transplantáty.

-9CZ 279654 B6

Gely, krémy, mazání a jiné prostředky pro místní nebo kožní podání je možno připravit známým způsobem a také běžným způsobem podávat. Je například možno postupovat tak, že se smísí cyklosporin A ve formě orthorhombických krystalů s příslušným základem, například gelem s obsahem vody, jako gelem na bázi etherů celulózy ve vodě za současného přidání smáčedel, zahušťovadel a podobně včetně například aerosilů.

Cyklosporin A je v těchto lékových formách obvykle přítomen ve formě jemných částic, například se středním průměrem 0,5 až 200 μιη. Výhodné rozmezí středního průměru částic je nižší než 60 až 80, s. výhodou nižší než 40, zejména nižší než 30 a nejvýhodněji nižší než 20 μιη. S výhodou je rozmezí středního průměru částic úzké a distribuce průměru částic co nejužší. S výhodou mají všechny částice střední průměr nižší než 60 až 80 μιη.

Prostředky pro místní podání do oka mohou sestávat například ze suspenze nebo disperze, zahuštěné vhodným způsobem, například do formy viskožních očních kapek, krémů nebo gelů pro oční podání. V tomto případě má střední průměr částic krystalické účinné látky být nižší než 25 μιη. Střední průměr částic v případě očních kapek tedy může být přibližně 0,1, s výhodou 0,5 přibližně 20, s výhodou až 10 μη.

Obsah hydrofilních a lipofilních složek nosného systému pro použití při podání na kůži nebo do oka se může měnit například v závislosti na místě podání, zejména v oblasti kůže, na níž má být prostředek nanesen.

Prostředky pro místní, zejména kožní podání obsahují obvyklé nosné prostředí, v němž je účinná složka jen málo rozpustná. Rozpustnost účinné látky, například ve formě CY-A/X-III v těchto prostředcích je nižší než 10 %, s výhodou nižší než 1 % hmot. Ještě výhodněji je rozpustnost nižší než 0,1 a nejvýhodněji nižší než 0,001 % hmot.

Vhodná nosná prostředí zahrnují hydrofilní, s vodou mísitelné nosiče a také nosiče hydrofobní povahy.

Hydrofilní, s vodou mísitelné složky jsou s výhodou poměrně málo těkavé. příkladem vhodných složek tohoto typu mohou být například kapalné polyalkylenglykoly, propylenglykol, glycerol a ethylenglycerol. Vhodnými polyalkylenglykoly jsou například kapalné polyethylénglykoly, například se střední molekulovou hmotností až 600, s výhodou 250 až 450 a zvláště 300.

Prostředek s obsahem cyklosporinu A, například pro místní podání může tedy obsahovat následující složky :

C¹ á) Cyklosporin A v orthorhombické, s výhodou nesolvatisované krystalické formě, například ve formě CY-A/X-III, napři7 klad tak, jak byl definován shora v odstavcích A az A .

b) hydrofilní, s vodou mísitelný nosič, například některý ze svrchu popsaných nosičů a

c) vodu, vhodnou pro farmaceutické použití.

Množství složky a) se může pohybovat v rozmezí 0,1 až 30, s výhodu 0,5 nebo 1,0 až 20 %, například 1,0, 2,0, 5,0 nebo

10,0 % hmot, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku. Složky b) a c) jsou s výhodou obsaženy v poměru 1 : 0 až 1 : 20 hmot. dílů. Tyto složky jsou s výhodou přítomny v poměru 1 : 0,5 až 1 : 5, například 1 : 1 až 1 : 3, zvláště 1 : 1,5 až 1 : 2,5 hmot. dílů.

Prostředky tohoto typu s výhodou obsahují ještě

d) smáčedlo.

Vhodnou složkou d) mohou být například následující sloučeniny:

Ί # ' z d Transesterifikační produkty přírodních triglyceridu a polyalkylenpolyolů z rostlinných olejů. Tyto produkty transesterifikace jsou v oboru známy a je možno je získat například způsobem, který byl popsán v US patentovém spisu č. 3 288 824. Tyto produkty zahrnují transesterifikační produkty různých přírodních, například nehydrogenovaných rostlinných olejů, jako jsou kukuřičný olej, jádrový olej, mandlový olej, podzemnicový olej, olivový olej a palmový olej a směsi těchto produktů s polyethylenglykoly, zejména s polyethylenglykoly se střední molekulovou hmotností v rozmezí 200 až 800. Výhodné jsou produkty, získané transesterifikací svou molárních podílů přírodního rostlinného oleje, zejména triglyceridů tohoto oleje s jedním molárním podílem polyethylenglykolu, například se střední molekulovou hmostností 200 až 800. Různé typy transesterifikačních produktů této skupiny jsou známé a běžně se dodávají pod obchodním názvem Labrafil, byly popsány v publikaci Fiedler, Lexikon der Hilfstoffe, druhé opravené a rozšířené vydání, 1981, sv. 2, str. 539. Zvláště vhodné pro použití jsou následující produkty :

Labrafil M 1944 CS, transesterifikační produkt jádrového oleje a polyethylenglykolu s kyselinovým číslem přibližně 2, saponifikačním číslem 145 až 175 a jodovým číslem 60 až 90 a Labrafil M 2130 CS, transesterifikační produkt glyceridu s 12 až 18 atomy uhlíku a polyethylenglykolu s teplotou tání 35 až 40 C, s kyselinovým číslem nižším než 2, saponifikačním číslem 185 až 200 a jodovým číslem nižším než 3.

d Reakční produkt přírodního nebo hydrogenovaného ricinového oleje a ethylenoxidu.

Tyto produkty je možno získat známým způsobem, například reakcí přírodního nebo hydrogenovaného ricinového oleje s ethylenoxidem, například v molárním poměru 1 : 35 až 1 : 60, za případného odstranění polyethylenglykolové složky z produktu například způsobem, který byl popsán v DAS č. 1 182 388 a 1 518 819. Zvláště vhodné jsou látky, dodávané pod obchodním názvem Cremophor. Zvláště vhodné jsou zejména výrobky Cremophor RH 40 se saponifikačním číslem 50 až 60, kyselinovým číslem nižším než 1, jodovým číslem nižším než 1, obsahem vody (Fischer) nižším než 2 % a n_D ⁶⁰ přibližně 1,453 až 1,4578 a HLB přibližně 14 až 16, dále Cremofor RH60 se saponifikačním číslem 40 až 50, kyselinovým

-11CZ 279654 B6 číslem nižším než 1, jodovým číslem nižším než 1, obsahem vody (Fischer) 4,5 až 5,5 % a n_D ²⁵ přibližně 1,453 až 1,57 a HLB přibližně 15 až 17 a Cremophor EL s molekulovou hmotností (osmometrie ve formě par) přibližně 1630, saponifikačním číslem 65 až 71, kyselinovým číslem přibližně 2, jodovým číslem přibližně 28 až 32 a n_D ²⁵ přibližně 1,471. Pro toto použití jsou vhodná také různá smáčedla, dodávaná pod obchodním názvem Nikkol, například Nikkol HCO-60, jde o reakční produkt hydrogenovaného ricinového oleje a ethylenoxidu s následujícími vlastnostmi : kyselinové číslo 0,3, saponifikační číslo 47,4, hydróxyskupina 42,5 pH 5% roztoku 4,6, barva APHA =40, teplota tání 36,0 °C, teplota tuhnutí

32,4 °C, obsah vody (%, KF) = 0,03.

d³ Estery polyoxyethylensorbitanu s alifatickými kyselinami nebo polysorbáty například běžně známého typu, dodávaného například pod obchodními značkami Ťween nebo Armotan tak, jak byly.popsány v publikaci Fiedler, 2, str. 745 až 756 a 972 až 975, včetně následujících produktů obchodní značky Tween :

[polyoxyethylen(20)sorbitanmonolaurát], [polyoxyethylen(20)sorbitahmonopalmitát], [polyoxyethylen(20)sorbitanmonostearát] [polyoxyethylen(20)sorbitantristearát], [polyoxyethylen(20)sorbitanmonooleát], [polyoxyethylen(20)sorbitantrioleát], [polyoxyethylen(4)sorbitanmonolaurát],

Γpolyoxyethvleni4)sorbitanmonostearát], [polyoxyethylen(5)sorbitanmonooleát].

d⁴ Estery polyoxyethylenu s alifatickými kyselinami, například estery polyoxyethylenu s kyselinou stearovou tak, jak jsou známé a běžně dodávané pod obchodním názvem Myrj (Fiedler, 2, str. 636), stejně jako estery polyoxyethylenu s alifatickými kyselinami, známé a dodávané pod obchodním názvem Cetiol HE (Fiedler 1, str. 228) a ethery polyoxyethylenu s alifatickými alkoholy, například stearylether, oleylether nebo cetylether polyoxyethylenu, známé a dodávané pod obchodním názvem Brij (Fiedler χ, 184 až 186 ) , například Brij 78 a 96 a Cetomacrogel 1000 (Fiedler, 1, 229).

d^ Kopolymery polyoxyethylenu a polyoxýpropylenu, například typu, běžně známého a dodávaného pod obchodními názvy PlUronic a Emkalyx (Fiedler 2., str. 720 až 722).

d⁶ Estery sorbitanu s alifatickými kyselinami, například běžně známého a dodávaného typu pod obchodním názvem Spán, jde například o monolaurylestery, monopalmitylestery, monostearylestery, tristearylestery, monooleylestery a trioleylestery sorbitanu (Fiedler X, str. 850 až 851).

d⁷ Parciální glyceridy, například produkty, které obsahují monoglyceridové a/nebo diglyceridové složky, například smáčedla na bázi směsi monoglyCeridů, diglyceridů, triglyceridů a volného glycerolu, stejně jako například glycerolmonostearáty a glycerolmonooleáty. Příklady těchto látek mohou

-12λ

CZ 279654 Β6 být například známé a obchodně běžně dodávané prostředky s názvem Imwitor (Fiedler, 1, 491), například Imwitor 191 a Imwitor 780 a Softigen (Fiedler, 2, 833), například Softigen 701.

d⁸ Smáčedla a emulgátory iontového typu jako laurylsíran sodný nebo cetostearyl síran sodný. Složky d) jsou v případě své přítomnosti obsažena v množství až 30 %, s výhodou nejvýše 15 % celkové hmotnosti prostředku. Výhodné rozmezí je například 0,5 až 10 %, například 1 % hmot, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Prostředky.tohoto typu mohou obsahovat ještě

e) zahušťovadlo.

Vhodnými složkami e) mohou být například následující látky :

e¹ polymethylakrylátorové pryskyřice tak, jak jsou běžně známé a dodávané pod obchodním názvem Eudispert (Giedler, 1, 371 až 372) .

e² Deriváty celulózy, například ethylcelulóza, propylcelulóza, methylcelulóza, hydroxycelulóza, propylmethylcelulóza a karboxymethylcelulóza.

e³ Polyvinylové pryskyřice, například včetně polyvinylalkoholu a polyvinylpyrrolidonu, stejně jako další polymerní materiály včetně želatiny, alginátů, pektinů, tragacanthové pryže, arabské gumy, xantanové pryže a polyakrylových kyselin tak, jak jsou běžně známy a dodávají se pod obchodním názvem Carbopol /Fiedler, 1, 206 až 207).

e⁴ Další materiály, například silikagel, bentonit a křemičitan hořečnato-hlinitý.

Složky e) jsou v případě své přítomnosti obsaženy v množství až 20 %, s výhodou až 10 %, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku. Tyto složky jsou s výhodou obsaženy v množství 0,5 až 15 %, například 1,0 až 3,0 % hmot, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Mimoto mohou tyto prostředky také obsahovat antimikrobiální látky, například methylparaben, propylparaben, benzalconiumchlorid nebo benzylalkohol, například v množství 0,06 až 0,5 % nebo v případě benzylalkoholu až 2,0 %, například 0,1 % nebo v případě benzylalkoholu přibližně 1,0 % hmot., vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Dalšími nosnými prostředky mohou být hydrofobní materiály, například takové, které splňují požadavky na rozpustnost účinné složky tak, jak byly shora uvedeny. Další vhodné prostředky s obsahem účinné látky, například určené pro místní podání mohou tedy sestávat z následujících složek:

C^za) Cyklosporin A v orthorhombické, s výhodou nesolvatované formě, například krystalické formě typu CY-A/X-III, například tak, jak byly tyto formy definovány v odstavcích A až A⁷ shora a

f) hydrofobní nosič, například některý se shora uvedených nosičů.

Množství složky a) se bude pohybovat v určitém vztahu, uvedené v prostředku C¹. Vhodnými složkami f) jsou například naftové deriváty, jako minerální oleje, tuky a gelovité látky, například vaselina (minerální tuk nebo gelovitý derivát z nafty), kapalná vaselina (bílý minerální olej nebo kapalný parafin) nebo jakýkoliv jiný ze -známých produktů, běžně dodávaných pod obchodním názvem Vhseline (Fiedler, 2, 986), jakož i neiontové deriváty lanolinu tak, jak se dodávají pod obchodním názvem Amerchol, například Amerchol CAB [Fiedler, 1, 119 až 120].

Další vhodné složky f) jsou například přírodní nebo nasycené rostlinné oleje a tuky, jako frakcionovaný kokosový olej, běžně dodávaný pod obchodním názvem Miglyol, například Miglyol 812 (Fiedler, 2, 616), dále podzemnicový olej a nasycený podzemnicový olej, dále estery alifatických alkoholů s přímým nebo rozvětveným řetězcem s alifatickými kysélinami, například stearylalkohol, cetylpamitát a 2-oktyldodekanol, které jsou obchodně dodávány pod názvem Eutanol G (Fiedler, 1, 375).

Tyto prostředky mohou ještě obsahovat jednu nebo větší počet složek d) a e), stejně jako jednu nebo větší počet antimikrobiálních látek, například tak, jak byly shora popsány.

Zvláště mohou tyto prostředky obsahovat jednu nebo větší počet složek d), obvykle v množství nejvýše 30 %, s výhodou nejvýše 20 %, zvláště 1 až 15 % hmot. , vztaženo na celkovou hmotnost prostředku.

Prostředky s hydrofobním základem typu C² s obsahem emulgační složky d) je také možno připravit ve formě krémů nebo emulzi dalším přidáním vody. Získané krémy nebo emulze mohou být bud’ typu olej ve vodě, nebo voda v oleji. Množství případné Vody v těchto prostředcích se může měnit v rozmezí 5 až 80 %, vztaženo na celkovou hmotnost prostředku, s výhodou 20 až 70 % hmot.

Množství složky e) a antimikrobiálního činidla je v případě , Ί přítomnosti těchto složek stejne jako v prostředcích C .

Množství formy pro místní podání, která se bude nanášet na určité místo, bude samozřejmě záviset na koncentraci účinné látky, na povaze onemocnění a na požadovaném účinku a v případě podání na kůži také na velikosti postižené oblasti. V případě prostředků pro kožní podání, například v případě léčby lupenky nebo atopických dermatóz, bude obvyklé množství schopné zajistit dostatečnou dávku účinné látky v rozmezí 0,1 až 5mg/cm², například 0,5 mg/cm², přičemž prostředek se bude podávat dvakrát denně. V případě podání do oka.je možno používat s výhodou prostředku s obsahem 0,1 až 10 %, například 1,0 až 2,0 % hmot, účinné látky, přičemž prostředek se bude používat jako oční kapky jeden- až třikrát denně.

-14CZ 279654 B6

Injekční formy, například pro podkožní, nitrosvalové nebo jiné parenterální podání, zejména nitrokloubní podání, například při zánětech kloubů, jako jsou rheumatoidní arthritis nebo pro podání do poškozených míst, například při lupence.

Disperze, suspenze, emulze a podobné prostředky, vhodné pro injekční podání je možno připravit obvyklým způsobem, je například možno postupovat tak, že se účinná látka ve formě jemných orthorhombických krystalů disperguje, uvede do suspenze nebo se jinak rozptýlí ve vhodném kapalném nosném prostředí, za současného podání příslušných emulgačních činidel, smáčedel, stabilizátorů, vlóčkovacích činidel a podobně. Velikost částic účinné látky v těchto prostředcích je s výhodou nižší než 100, ještě výhodněji nižší než 50 a nej výhodněji nižší než 20 μια. Střední průměr částic se má pohybovat od velikosti 0,1 až 0,5 až do 20, 50 nebo 100 μτη.

V případě, že injekční formy jsou určeny například pro podkožní nebo nitrosvalové podání, například k dosažení depotniho účinku, je možno užít také částic s větším středním průměrem. V případě, že jsou tyto formy určeny pro podání do poškozených orgánů, zejména do kloubů, je žádoucí použít jemnější částice. Pro toto použití je vhodný střední průměr částic účinné látky, například v rozmezí od 0,1 až 0,5 do 20 μπι, tedy například v rozmezí 5 až 15 μη.

Aby bylo možno dosáhnout stálosti částic účinné látky v injekčních formách, například aby bylo možno zabránit zvýšení rozměrů větších krystalických částic na úkor krystalických částic menšího rozměru a aby bylo možno udržet co nej stejnoměrnější velikost částic. Vhodné odchylky mezi maximální a minimální velikostí částic by neměly převyšovat 50, s výhodou 20 μχη.

Přestože požadovanou velikost částic je možno zajistit jejich příslušným zmenšením, například mikronizací, je však obvykle k zábraně přítomnosti rozdrcených částic a k zábraně změn na krystalickém povrchu, například k udržení smáčivosti a ke snadnému dosažení požadavků sterility výhodnější použít nerozdrcených mikrokrystalků, tj. krystalků jejichž přirozená velikost odpovídá požadavkům na jejich rozměr, jak bylo uvedeno shora.

Injekční prostředky tedy s výhodou obsahují

C³ a) Cyklosporin A ve formě jemných částic, s výhodou ve formě orthorhombických nesolvatizovaných krystalků, například ve formě CY-A/X-III, například jak byly definovány v odstav7 6 7 cích A až A , zejména A° a A , tyto částice jsou rozptýleny a je možné je rozptýlit v

b) nosiči pro injekční podání.

Vhodným nosným prostředím je například voda pro farmaceutické účely.

Mimoto mohou prostředky, definované v odstavci C obsahovat ještě

-15CZ 279654 B6

g) smáčedlo, dispergační činidlo, emulgační činidlo a/nebo vločkovací činidlo, které napomáhá k udržení rozptýlených částic ve fázi nosiče.

Vhodnými smáčedly g) mohou být například estery polyoxyethylensorbitanu s alifatickými kyselinami nebo polysorbáty tak, jak byly uvedeny v odstavci d³ shora, například Tween 80 nebo Polysorbáte 80 (Fiedler, 2, str. 746). Vhodným vločkovacím činidlem g) je například ethyleňdiamintetraacetát a jeho soli, například vápenatá nebo sodná sůl, stejně jako další ekvivalentní chelatační činidla a peptisační činidla, například kyselina jantarová nebo citrónová.

Aby bylo možno udržet rozdělení velikosti částic, je možno včlenit do prostředku také stabilizační činidlo. Vhodným stabilizačním činidlem je například želatina nebo modifikovaná želatina, stejně jako některé deriváty plasmy, které se běžně dodávají pod obchodní značkou Gelafundin a Haemaccél nebo typy želatiny, rozpustné ve studené vodě, zejména vysoce čištěné hydrolyzáty kolagenu.

Prostředky typu C³ mohou také obsahovat jedno nebo větší počet antimikrobiálních činidel tak, jak byly shora popsány, stejně jako shora uvedená peptisační činidla, například kyselinu šůavelovou nebo citrónovou.

Poměr složek a) : b) v prostředcích typu C³ se obvyklé pohybuje v rozmezí 1 : 10 až 1 : 1 000, s výhodou 1 : 50 až 1 : 200, například 1 : 100 hmot. dílů.

Aby nedošlo k porušení stálosti použít smáčedla ve složce g) , s výhodou 1 % i, že činidla 5 hmot, dílům. V případě má být : 30, s v V případě, s

v malých výhodou zapotkoncentracích, částic, je jen hmot., vztaženo na hmotnost se použije vločkovací činidlo, má být ke složce a) v rozmezí 1 : 3 až , že se použije stasložky a) ke stabilizačnímu 1 : 10 až 1 : 30, například užije peptizační činidlo, je 1 až řebí například 0,1 až 2,0 složky a). V případě poměř - vločkovacího 1 : 8, například 1 bilizační činidlo, činidlu 1 : 5 až 1 1 : 20 hmot, dílům.

vhodný poměr peptizačního činidel ke složce a) v rozmezí 1 1 : 10, například 1 : 15 hmot, dílům.

poměr výhodou . že se

Množství cyklosporinu v jednotce dávky, určené pro injekční podání se bude měnit v závislosti na onemocnění, v místě podání a požadovaném účinku, například na tom, zda je požadován depotní účinek nebo poměrně rychlé uvolňování do okolní tkáně. Jednotlivá dávka se bude pohybovat v rozmezí 10 až 500 mg, s výhodou 20 až 100 mg.

Je zřejmé, že je možno použít také složitějšího systému, například injekční stříkačky se dvěma oddíly, v níž je účinná látka v částicové formě s dalšími složkami, například stabilizátorem nebo antimikrobiální látkou uložena v prvním oddíle a nosné prostředí je uloženo ve druhém oddíle, přičemž složky z obou oddílů sé misi například tak, že se uvede do chodu píst. Stříkačky tohoto typu jsou dlouho známé a jejich použiti spadá také do oboru vynálezu.

-16CZ 279654 B6

Perorální formy, například pro léčbu autoimunních chorob a podobných stavů, například pro prevenci odmítnutí transplantátů.

Přestože, jak již bylo uvedeno, jsou perorální formy méně výhodné, jejich použití také spadá do oboru vynálezu.

Perorální formy je možno připravit při použití příslušných nosičů nebo nosných prostředí tak , jak je to v oboru běžné. Kapalné nebo polotuhé lékové formy pro perorální podání mohou obsahovat účinnou látku v orthorhombické krystalické formě, například ve. formě CY-A/X-III, spolu s ředidlem nebo nosičem, přijatelným' z farmaceutického hlediska, v němž je krystalická forma sama o sobě nerozpustná. Tyto nosiče nebo tato ředidla zahrnují například transesterifikační produkty triglyceridů z přírodních rostlinných olejů s polylakylenpolyoly tak, jak byly _z Ί popsaný v odstavci d například prostředky typu Labrafil a reakční produkty přírodního nebo hydrogenovaného ricinového oleje a ethylenoxidu tak, jak byly popsány v odstavci d², zvláště produkty kapalné, jako Cremophor, zvláště Cremophor EL.

Účinná látka je s výhodou obsažena ve formě jemných částic, například se středním průměrem 0,5 až 200, zvláště 0,5 až 30, s výhodou méně než 20, například 0,5 až 10 μη.

Pro snadnost podání se uvedené prostředky obvykle plní do kapsli z měkké nebo z tvrdé želatiny.

Lékové formy pro peronální podání obvykle obsahují v jednotlivé dávce 25 až 75 až 200, například 50 nebo 100 mg účinné látky. Podávají se 1 až čtyřikrát denně k dosažení dostatečné hladiny plasmy stejným způsobem jako v případě běžných dosud známých prostředků.

. Složky, které byly uvedeny jako možné složky farmaceutických prostředků je možno užívat podle obvyklých pravidel, to znamená, že například pro perorální podání se užijí složky, vhodné pro toto podání a pro místní podání, například na kůži nebo do oka se užijí složky, které jsou v tomto případě dobře snášeny.

Je zřejmé, že obdobným způsobem je možno navrhnout a vyrobit ještě další galenické formy pro totéž nebo jiné podání.

Praktické provedení způsobu podle vynálezu bude osvětleno v následujících příkladech.

Příklad 1

Příprava CY-A/X-III ·

a) 100 g cyklosporinu A v amorfní formě se za míchání rozpustí ve 400 g polyethylenglykolu 300 při teplotě 50 °C. Produkt se začíná vyvíjet krátce po úplném rozpuštění. Roztok se nechá stát 24 až 48 hodin při teplotě přibližně 35 až 40 °C k dovršení krystalizace a potom se zředí 1 000 ml vody za energické-17CZ 279654 B6 ho míchání. Získaná sraženina se oddělí filtrací, promyje se vodou k odstranění zbývajícího polyethylenglykolu a potom se suší, čímž se získá v podstatě čistý CY-A/X-III s teplotou tání 195 °C, částice mají velikost v rozmezí 100 až 200 μιη.

Analogicky je možno připravit CY-A/X-III také tak, že se užije místo polyethylenglykolu 300 materiálu, které jsou uvedeny v následující tabulce.

Rozpouštědlo teplota tání získaného

CY-A/X-III (°C)

b)	polyethylenglykol 300/ Cremophoré RH 40	z
	(objemový poměr 1:1)	—
c)	Cremophore EL	190
d)	Solutol HS 15	188
e)	Gelucire 44/14	180
f)	Myrj 52	184
g)	Tween 80	186
h)	Cremophor RH 40	190

V každém případě se pohyboval střední průměr částic v rozmezí 50 až 200 μη. Stanovená struktura mřížky odpovídala shora uvedenému popisu. Difrakce v rtg-záření bude uvedena dále v tabulce..III a obr. IV.

Příklad 2

Příprava CY-A/X-III g cyklósporinu A ve formě CY-A/X-I se rozpustí v 60 ml ethanolu a kondenzuje sena 1/6 původního objemu destilací za sníženého tlaku při teplotě vyšší než 60 C. Potom se pomalu přidá 160 ml polyethylenglykolu 300 a 20 ml vody při teplotě 50 až 85 C za současného míchání při 300 ot/min. Potom se směs zpracovává ultrazvukovým vibračním zařízením při 20 000 cyklů za sekundu. Při teplotě 65 až 75 °C se v průběhu 3 až 5 minut počnou tvořit krystalky. Získaná disperze se potom postupně chladí v průběhu 10 až 20 minut na teplotu 40 °C za stálého působení ultrazvuku a míchání při 700 ot/min. Získaná hustá pastovitá směs se zfiltruje, promyje se směsí polyethylenglykolu 300 a vody v objemovém poměru 3 : 1, potom se promyje vodou, teplou 30 °C, potom se suší ve vysokém vakuu při teplotě 50 °C, čímž se získá čistý CY-A/X-III s teplotou tání 192 °C. Velikost částic je v rozmezí 3 až 15 μη, krystalová mřížka odpovídá shora uvedenému

-1.8CZ 279654 B6 popisu, difrakce v rtg-záření je uvedena v následující tabulce III a na obr, IV.

Opakované pokusy prokázaly, že rozměry krystalků jsou ovlivněny spíše teplotou a rychlostí růstu krystalů než celkovou dobou zpracování. Například v případě, že se krystalky počnou tvořit při teplotě 70 °C a krystalizace pokračuje při téže teplotě, byl získán krystalický materiál s velikostí částic přibližně 50 μπι.

Příklad 3

Příprava galenických forem pro perorální podání

3.1 Prostředky I pro plnění do želatinových kapslí

Suspenze s obsahem 20 % hmot. CY-A/X-III, získaná způsobem podle příkladu 1 v Gelucire 44/14 se mele při zvýšené teplotě v koloidním mlýnu tak dlouho, až střední průměr částic účinné látky je v rozmezí 0,5 až 10 μπι. Potom se podíly této suspenze o hmotnosti 250 mg plní do kapslí velikosti 2 z tvrdé želatiny, z nichž pak každá obsahuje 50 mg účinné látky ve formě CY-A/X-III.

3.2 Prostředek II pro plnění do želatinových kapslí

Cy-A/X-III, získaný způsobem podle příkladu 1 se mele v koloidním mlýnu tak dlouho, až střední průměr částic látky je v rozmezí 0,5 až 20 μπι. Podíly po 50 mg se potom důkladně promísí s 200 g prostředku Cremophore EL a plní se do kapslí velikosti 2 z tvrdé želatiny, z nichž potom každá obsahuje 50 mg účinné látky ve formě CY-A/X-III.

Příklad 4

Příklad galenických forem pro místní podání

4.1 Prostředek I ve formě gelu

CY-A/X-III, získaný způsobem podle příkladu 1 se mikronizuje v mlýnu se vzduchovým paprskem. Mikronizovaný produkt s maximální velikostí částic 60 až 70 μπι a se střední velikostí částic 2 až 10 μπι se mísí běžným způsobem s dalšími složkami, uvedenými v následující tabulce za vzniku vodného gelu, který obsahuje 10 % hmot, účinné látky ve formě CY-A/X-III a je vhodný pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

-19CZ 279654 B6 složka % hmot.

a)	cyklosporin (mikronizovaný CY-A/X-III)	10,0
b)	polyakrylová kyselina (Carbopol 934P)	0,5
c)	5% roztok hydroxidu sodného	3,0
d)	methylparaben	0,07
e)	propylparaben	0,03
f)	voda (pro farmaceutické použití)	do 100,0

4.2 Prostředek II ve formě gelu
sl	ožka I	% hmot. prostředek A prostředek B
a)	Cyklosporin (mikronizovaný CY-A/X-III)	10,0 1,0
b)	polyethylenglykol 300	30,0 30,0
c)	Labrafil M 2130 CS	1,0 1,0
d)	Carbopol 934 P	1,0 1,0
e)	5% hydroxid sodný	6,0 6,0
f)	methylparaben	0,07 0,07
g)	propylparaben	0,03 0,03
h)	voda (pro farmaceutické použití)	51,9 60,9
		100,0 % 100,0 %
c) ,	Účinná látka se připraví stejně f) a g) se rozpustí ve složce b)	jako v odstavci 4.1. Složky za zahřátí a získaná směs se

zchladí na teplotu místnosti, potom se získaný roztok disperguje ve vodě. Potom se přidá složka.d) a směs se homogenizuje za vzniku disperze. Potom se přidá účinná látka a směs se znovu homogenizuje. Potom se přidá složka e) k neutralizaci směsi za míchání a výsledný gel se plní do tub.pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

-20CZ 279654 B6

4.3 Mazání složka % hmot, prostředek A prostředek B

a) Cyklosporin (mikronizovaný
CY-A/X-III)	1,0	10,0
b) Amerchol CAB	2,0	2,0
c) kapalný parafin	42,0	37,5
d) bílá vaselina	55,0	50,5

100,0 % 100,0 %

Účinná látka se připraví jako v odstavci 4.1. Složky b), c) a d) se společně roztaví a promísí a potom se přidá účinná látka při teplotě přibližně 30 °C, potom se výsledná směs homogenízuje, Získané mazání se zchladí a plní do stlačitelných tub pro místní podáním například pro léčbu lupenky.

4.4 Příprava krému složka % hmot.

a)	cyklosporin (mikronizovaný CY-A/X-III)	1,0
b)	polysorbát 60	5,0
c)	cetylstearylalkohol	10,0
d)	glycerol 85%	10,0
e)	bílá vaselina	24,0
f)	methylparaben	0,07
g)	propylparaben	0,03
h)	voda (pro farmaceutické účely)	49,0
		100,0 %

Účinná látka se připraví stejně jako v odstavci 4.1, smísí se se složkami b) až h) analogickým způsobem jako v odstavci 4.3 a potom se plní do stlačitelných tub pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

-21CZ 279654 B6

4.5 Příprava mazání

Suspenze s obsahem 20 % hmot. CY-A/X-III, získaného způsobem podle příkladu 1 v polyethylenglykolu 300 se mele za vlhka tak dlouho, až se střední průměr částic účinné látky pohybuje v rozmezí 2 až 10 μιη. Potom se 10 g získaného produktu smísí obvyklým způsobem s 50 g polyethylenglykolu 300 a 40 g roztaveného polyethylenglykolu 1500 za vzniku tekuté pasty s obsahem 10 % účinné látky ve formě CY-A/X-III, která je vhodná pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

4.6 Příprava gelu složka % hmot.

a) cyklosporin (mikronizovaný

CY-A/X-III)1,0

b) Labrafil M 1944 CS1,0

c) polyethylenglykol 30030,0

d) benzylalkohol1,0

e) hydroxypropylmethylcelulóza (Methocel E4M)2,5

f) voda (pro farmaceutické použití)64,5

100,0 %

Účinná složka se připraví jako v odstavci 4.1. Složky b), c) a d) se smísí,.přidá se složka f) a směs se promísí, ve výsledné směsi se potom homogenizací uvede do suspenze účinná látka. Potom se přidá pomalu za míchání složka e) až do dovršení tvorby gelu. Vzniklý gel se potom plní do stlačitelných tub pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

4.7 Příprava gelu složka % hmot.

a) cyklosporin (mikronizovaný
	CY-A/X-III)	5,0
b)	polyethylenglykol 300	30,0
c)	glycerylmonostearát	5,0
d)	methylparaben	0,07

-22složka % hmot.

e)	propylparaben	0,03
f)	Carbopol 934 P	1,0
g)	5% hydroxid sodný	6,0
h)	voda (pro farmaceutické použití)	52,9

100,0 %

Složka a) se připraví stejným způsobem jako v odstavci 4.1. Složky c), d) a e) se rozpustí za zahřívání ve složce b). Teplá směs se potom disperguje homogenizací ve složce h) a směs se zchladí na teplotu místnosti. Přidá se účinná látka a složka

f) a výsledná směs se opět homogenizuje, potom se přidá složka

d), čímž dojde ke tvorbě gelu. Získaný gel se plní do stlačitelných tub pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

4.8 Příprava krému (voda v oleji) složka % hmot.

a) cyklosporin (mikronizovaný
CY-A/X-III)	2,0
b) Amerchol CAB	5,0
c) Miglyol 812	10,0
d) bílá vaselina	53,0
e) voda (pro farmaceutické použití)	30,0

100,0 %

Účinná složka se připraví stejně jako v odstavci 4.1 a potom se disperguje spolu se složkou b) ve složce e) za současného zahřívání a homogenizace. Složky c) ad) se společně roztaví, smísí a směs se přidá za intenzivní homogenizace ke shora připravené disperzi a výsledná směs se zchladí za vzniku bílého krému, který se plní do stlačitelných tub pro místní podání, například pro léčbu lupenky.

-23CZ 279654 B6

4.9 Příprava gelovitého krému

Opakují se postupy, uvedené v příkladech 4.1 až 4.8 s tím rozdílem, že se jako účinná složka užije krystalický produkt, získaný způsobem podle příkladu 2.

Příklad 5

5.1 Injekční formy, například pro parenterální použití

Suspenze CY-A/X-III se připraví za sterilních podmínek běžným způsobem při použití následujících složek:

složka množství (mg)

a)	cyklosporin (CY-A/X-III)	20,0
b)	polysůrbát 80	4,0
c)	sodná sůl karboxymethylcelulózy	5,0
d)	chlorid sodný	9,0
e)	benzylalkohol	9,0
f)	voda pro injekční podání	do 1,0 ml

Uvolňování účinné složky ze získaného prostředku závisí na středním průměru částic složky a). To znamená, že v případě, že je požadován dlouhodobější účinek, je možno zvolit produkt typu CY-A/X-III s velkým středním průměrem částic, například 100 až 200 μιη tak, jak je možno jej získat přímo způsobem podle příkladu 1. V případě, že se požaduje kratší účinek, je možno použít účinnou látku s poměrně menším středním průměrem částic, například po mikronizaci nebo mletí produktu z příkladu 1 na velikost částic například v rozmezí 0,5 až 10 μιη. Získaná suspenze se potom plní do injekčních ampulí a je určena pro parenterální podání nebo přímo do poškozené tkáně například při léčbě lupenky, například je možno dosáhnout i děpotního účinku.

Ve zvláště výhodném provedení se k výrobě injekčního roztoku užije účinná látka ve formě CY-A/X-III, připravená způsobem podle příkladu 2 s velikostí částic 5 až 15 μπι, sloučeninu je nutno připravit za sterilních podmínek.

5.2 Injekční formy například pro nitrokloubní podání

Injekční formy, vhodné pro nitrokloubní podání je možno připravit při použití následujících složek:

-24množství (mg) složka

Prostředek A

a) cyklosporin (CY-A/X-III)

b) sodná sůl karboxymethylcelulózy

c) sodná sůl EDTA

d) voda pro injekční podání

Prostředek B

a) cyklosporin (CY-A/X-III)

b) polysorbát 80

c) kyselina citrónová

d) voda pro injekční podání

10,0

10,0

2,0 do 1,0 ml

10,0

0,1

2,0 do 1,0 ml

Prostředky se vyrábějí běžným způsobem za sterilních podmínek. Účinná látka sestává z nerozdrcených mikrokrystalků, které byly získány za sterilních podmínek způsobem podle příkladu 2 a jejichž velikost se pohybuje v rozmezí 3 až 15 μιη. Získané prostředky se plní za sterilních podmínek do ampulí pro injekční podání, například nitrokloubní podání při rheumatoidní arthritidě.

Výhodné vlastnosti prostředků, získaných způsobem podle vynálezu je možno prokázat při pokusu na zvířeti i při klinických pokusech. Použitelnost těchto prostředků pro podání na kůži, například při léčbě lupenky nebo různých dermatóz je možno prokázat při následujících pokusech.

Alergická kontaktní dermatitis na morčeti (test DTH)

Morčecí samci kmene Hartley o hmotnosti 400 až 500 g se sensitizují aplikací 50 μΐ 2% roztoku dinitrofluorbenzenu (DNFB) ve směsi acetonu a olivového oleje v objemovém poměru 1 : 1 na vnitřní stranu pravého ucha. Po sedmi dnech se zvířatům znovu podá 20 μΐ 0,5% roztoku dinitrofluorbenzenu ve směsi acetonu a olivového oleje v poměru 4 : 1 na označené oblasti vyholeného levého a pravého boku. Toto druhé podání vyvolá alergický zánět, který se pak projeví červenáním a infiltrací (otokem) kůže. Potom se nanese na uvedené oblasti zkoumaná látka v množství 200 až 250 mg, obvykle na pravý bok. Na levý bok se nanese základ bez účinné látky (placebo) jako kontrola. Nanesení na oba boky se provede pětkrát v intervalu 20 minut, 8 hodin, 24 hodin, 32 hodin a 48 hodin po podání dráždicí látky. Před každým podáním se kontroluje otok kůže, tato hodnota se znovu kontroluje 8 hodin po posledním podání tak, že se kůže vytáhne do řasy a tloušťka řasy se změří. Stupeň zrudnutí se hodnotí vizuálně podle stupnice 0 až 4. Účinnost uvedených prostředků proti vzniku zánětu se stanoví ve srovnání s druhým bokem, ošetřeným pouze základem.

-25CZ 279654 B6

Výsledky získané při shora uvedených pokusech při použití prostředků podle příkladů 4.1 a 4.5, avšak s obsahem 0,1 hmot, účinné látky ve formě CY-A/X-III ve srovnání s placebem a s místně podaným 0,1% roztokem cyklosporinu jsou uvedeny na obr. I, II a III. Koncentrace 0,1% CY-A/X-III se užívá při tomto pokusu vzhledem k vysoké citlivosti zvířete. Prostředky se připravují analogicky jako v příkladech 4.1 a 4.5 s tím rozdílem, že se množství účinné látky v těchto prostředcích sníží na 0,1 g a místo účinné látky se přidá navíc 9,9 g vody V příkladu 4.1 a polyethylenglykolových složek v příkladu 4.5.

Na každém výkresu je na ose úseček uveden čas v hodinách a na ose souřadnic je uvedena tloušťka kůže v mm. Na obr. I jsou uvedeny výsledky při použití 0,1 % hmot, cyklosporinu A pro běžné použití ve formě běžně dodávaného perorálního roztoku ve srovnání s placebem. Pro perorální roztok je možno prokázat malé, avšak statisticky nevýznamné snížení reakce. Na obr. II a III jsou uvedeny výsledky při použití 0,1 % hmot, cyklosporinu v prostředcích podle příkladů 4.1 a 4.5 při srovnání s placebem. V obou případech došlo k podstatnému snížení otoku kůže při prvním podání a kontinuálně v průběhu celé léčby ve srovnání s placebem až do ukončení pokusu.

Použitelnost shora získaných farmaceutických prostředků je možno prokázat také v klinických pokusech, například následujícím způsobem:

Klinický pokus: léčba lupenky místním podáním

Pokus se provádí dvojitou slepou zkouškou na náhodném výběru nemocných a při použiti placeba. Každý z nemocných obdrží účinnou složku a placebo, tvořené pouze nosným prostředím na dvě symetrická poškozená místa. Tato místa se volí tak, aby jedno z nich bylo vpravo a druhé vlevo.

Nemocní se seskupí do skupiny 12 až 24 při věku 18 až 70 let, použít je možno muže nebo ženy po menopauze, chirurgicky sterilované nebo používající perorální antikoncepční prostředky, s negativním testem na případné těhotenství.

Všichni nemocní musí splnit dvě podmínky: a) podepsaný souhlas a b) klinicky definovanou, stálou, chronickou lupenku s kožními projevy. Nemocný musí mít alespoň dvě mírně nebo těžce poškozená symetrická místa na obou stranách těla o ploše 4 až 25 cm² při závažnosti poškození větší než 5 při použití škály 0 až 9. Toto hodnocení je složeno z jednotlivých hodnocení 0 (nejméně závažné) až 3 (nejzávažnější) pro následující parametry: zčeřvetloušťka kůže. Poškození na u téhož nemocného srovnatelné, to poškození se nesmí od sebe lišit zvýšení poškozeného místa a stranách těla musí být závažnost obou %.

nání, obou znamená,, že o více než 20

Z pokusů byly vylučováni rií:

nemocní podle následujících krité-

a) jakákoliv léčba, která by mohla nějakým způsobem ovlivnit průběh pokusu,

b) systematická léčba lupenky v posledních dvou měsících (PUVA, methotrexat, steroidy, retionidy, cyklosporin),

c) Specifická místní léčení s výjimkou indeferentních látek, například bílé vaseliny nebo salicylové kyseliny v množství nejvýše 10 % v průběhu dvou týdnů před pokusem, toto léčení však může být prováděno na poškozených místech, na nichž nebude prováděn pokus,

d) nemocní, u nichž se lupenka sama lepší bez léčby nebo se lepší po předchozí léčbě bez dalšího zásahu,

e) známá přecitlivělost na kteroukoliv složku aplikovaných farmaceutických prostředků,

f) nespolupracující nemocní, kteří patrně nebudou správně provádět léčbu nebo kteří nechtějí nebo nemohou pravidelně docházet na kontroly,

g) léčba jinou zkoumanou látkou v průběhu jednoho měsíce před pokusem,

h) těžké současné onemocnění, zvláště porušená funkce ledvin s kreatidinem v séru nad 130 ^mol/litr,

i) zvýšený krevní tlak s diasterickou hodnotou 95 mm Hg po 5 minutách sezení, nemocný se správně léčeným vyšším tlakem mohou se pokusu zúčastnit,

j) rakovinné bujení i v anamnese, včetně rakoviny kůže

k) akutní bakteriální, virové nebo plísnové onemocnění kůže,

l) v těhotenství a kojení,

m) . alkoholici i v anamnéze, narkomani, psychotici a lidé s emo- ciálními nebo intelektuálními problémy,

n) nemocní, kteří potřebují současnou léčbu jinými látkami, potlačujícími imunologickou odpověd’, chemoterapeutickými látkami, sloučeninami s nefrotoxicitou, například áminoglykosidy nebo látkami, které působí interakci s cyklosporinem, jako jsou ketoconazol, erythromycin, fenytoin, fenobarbiton, rifambicin, TNH, carbamazepin, valproát sodný,

o) nemocní s abnormálním bazálním metabolismem, odlišujícím se o více jak 15 % od normální hodnoty,

p) nemocní s odchylkami při běžném vyšetření.

K pokusu je možno užít jakékoliv prostředky z příkladů 4.1 až 4-9, například 1% prostředek B z příkladu 4.2 nebo 10% prostředek B z příkladu 4.3.

Každý nemocný obdrží pár tub s obsahem 20 g materiálu a s dvojitou nálepkou. Nálepka je modrá pro podání na pravou stranu a červená pro levou stranu. Dále obsahuje nálepka údaj o straně, na níž má být materiál nanesen, tj. vlevo nebo vpravo,

-27CZ 279654 B6 kód pokusu, jméno toho, kdo pokus provede, číslo nemocného a datum počátku pokusu. Nálepka, kterou je možno z tuby sejmout, se potom připevní na zprávu o průběhu pokusu.

Materiál z tub se nanáší dvakrát denně, ráno a večer, množství závisí na velikosti poškozeného místa, denní dávka má být 0,2 až 2,0 mg cyklosporinu A/cm², tj. při jedné sérii pokusů, přibližně 0,5 mg/cm². Placebo se nanáší ve stejném množství. Žádná z látek se nenanáší na povrch větší než 25 cm² a týdně se nenanese více než 1 g účinné látky. Při každé kontrole se tuby zváží a stanoví se nanesená denní dávka. Nemocní se mohou krátce před nanesením vykoupat. Nanášení se provádí v rukavicích pro jedno použití, aby nedošlo k přenesení účinné látky do místa, kam se má nanést pouze placebo a obráceně. Před nanesením masti a omytím mají uplynout alespoň 3 hodiny. První nanesení se provádí pod dohledem a nemocný dostane psané instrukce. Léčba trvá 4 týdny. V případě, že dojde k úplnému vymizení afekce, před uplynutím této doby, léčba se přesto provádí až do čtvrtého týdne. Nemocní se kontrolují před začátkem pokusu (týden —1), na začátku pokusu (týden 0) a potom ještě po jednom, dvou, třech a čtyřech týdnech.

Hodnocení provádí pracovník, který se pokusu neúčastní při použití následující číselné škály 0 až 3 (hodnocení LPSI-local psoriasis severity index).

zčervenání vyvýšení tloušťka kůže = žádné

- minimální, sotva znatelný, světle růžová = mírné zčervenání , dobře odlišitelné = silné, hluboce až jasně červené zabarvení = žádné = minimální, špatně zjistitelné vyvýšení — mírné, dobře definované, počínající odlupování = silné, odlupování kompaktních úseků = žádné = minimální vyvýšení, sotva rozeznatelné = mírné, avšak dobře odlišitelné ^{3 =} vyjádřené silné ztluštění

Součet těchto hodnot tedy může být 0 až 9. Aby byl nemocný vzat do pokusu, musí být alespoň dva znaky v obou zvolených místech mírné až silné, celkové hodnocení tedy musí být vyšší než 5.

Při zařazeni do pokusu a při každé kontrole se měří také velikost poškozeného místa, pro zařazení musí mít velikost 4 až 25 cm². V této oblasti se potom hodnotí tři shora uvedené znaky. Pigmentace v oblasti poškození se nehodnotí.

Poškozená místa se fotografují v týdnu -1 a v týdnu 4. Pořizují se tři fotografie.. Jedná z nich ukazuje současně obě místa a druhé dvě každá jedno z těchto míst.

-28CZ 279654 B6

Svěděni se vyhodnocuje podle údajů nemocného podle následující stupnice:

= žádné = minimální, občas nutí ke škrábání = mírné, často nutí ke škrábání = nesnesitelné, velmi často nutí ke škrábání a může i rušit noční spánek

Na konci pokusu se provádí celkové hodnocení odpovědi na léčbu podle následujících hledisek:

- vyléčeno =100% odpověď na léčbu,

- podstatné zlepšení = alespoň 66% snížení LPSI a/nebo alespoň 66% zmenšení poškozeného místa

- mírné zlepšení, 65% až 33% snížení LPSI nebo 65% až 33% zmenšení poškozeného místa

- malé zlepšení = méně než 32% snížení LPSI a/nebo méně než 32% zmenšení poškozené plochy

- zhoršení = exacerbace onemocnění.

Za léčebný úspěch se pokládá poškozené místo, které je vyléčeno nebo v němž je možno prokázat podstatné zlepšení.

Lékař i nemocní také uvádějí svůj názor na výhodnost léčby pravé nebo levé strany podle následujícího hlediska:

- levá strana je zřetelně lepší

- levá strana je o něco lepší

- není zjistitelný rozdíl

- pravá strana je o něco lepší

- pravá strana je zřetelně lepší.

Pokud jde o účinnost na konci léčby, srovnávají se hodnocení LPSI a plocha poškozených míst Wilcoxonovým párovým testem pro léčené afekce a pro afekce, na něž bylo naneseno placebo po 4 týdnech léčby, hodnotí se významnost změn po této době.

Všechna další srovnávání v jiných pracovních obdobích nebo pro jiné parametry se považuje pouze za popis vývoje pokusu.

Při provádění shora uvedeného pokusu bylo možno pozorovat, že u jednotlivých nemocných došlo k podstatnému zlepšení míst, poškozených lupenkou, pokud jde o LPSI na místech, na něž byly naneseny prostředky s obsahem účinné látky. Bylo možno pozorovat také subjektivní zlepšení svědění na místech, léčených cyklosporinem A ve srovnání s místy, na něž bylo naneseno placebo.

Positivní výsledky byly získány také při pokusech s nemocnými s kontaktní dermatitidou, kde byla hodnocena alespoň tři z následujících hodnot :

- svědění

- typická morfologie a distribuce :

flexurální lichenifikace nebo linearita u dospělých, účast tváře a extesorových partií u dětí,

- chronická nebo relapsující dermatitis,

- osobní nebo rodinná anamnéza atopických projevů, jako je asthma, alergická rýma, atopická dermatitis.

Hodnotí se také alespoň tři vedlejší znaky z této skupiny: xerosisi, ichthyosis/palmární hyperlinearita/keratosis pilařis, okamžitá reaktivita typu I při kožní reakci, zvýšené IgE v seru, nízký věk při výskytu onemocnění, tj. nižší než pět let, sklon ke kožním infekcím, zvláště Staph. aureuš a Herpes simplex, porušení buněčně zprostředkované imunity, sklon ke specifické dermatitidě na rukou a nohou, ekzém na prsních bradavkách, cheilitis, opakující se zánět spojivek, anomálie infraorbitálního uspořádání Dennie-Morgan, keratoconus, cataracta subcapsularis anterior, ztmavnutí orbity, bledost tváře nebo její zčervenání, pityriasis alba, řasy na přední straně krku, časté pocení, tvorba potniček, nesnášenlivost rozpouštědel, zejména tukových, nesnášenlivost různých druhů potravin, snadné ovlivnění faktory z okolí a emočními faktory, bílý dermografismus, zejména zpožděný. Doba pokusu jsou 3 týdny, škálou 0 až 3 se vyhodnocují následující parametry: svědění, zčervenání, mokvání, olupování a lichenifikace.

Prostředky pro místní podání tak, jak byly popsány v příkladech 4.1 až 4.9 s obsahem 1 až 10 % účinné látky, například prostředek z příkladu 4.7 s obsahem 5,0 % účinné látky jsou účinné také při alergické kontaktní dermatitidě i při vypadávání vlasů.

Prostředky s obsahem účinné látky, získané způsobem podle vynálezu je tedy možno užit také

D. K léčbě cyklosporinem u nemocných, kteří tuto léčbu vyžadují, léčení se provádí podáním účinného množství účinné látky ve formě orthorhombických krystalů, zvláště v nesolvatysované formě, například ve formě CY-A/X-III tak, jak byla definována „ ~ 7 v odstavcích A az A , zejmena

D¹ k léčbě, při níž dochází k potlačení imunologického systému a k protizánětlivé léčbě u nemocných, kteří tuto léčbu vyžaduji, léčení se provádí tak, že se podá účinné množství cyklosporinu A v orthorhombické krystalické formě, která není ve formě solvátu, například ve formě CY-A/X-III tak, jak bylo definováno v odstavcích A až A⁷.

Účely, k nimž je možno podat uvedenou látku, jsou například prevence odmítnuti transplantátu, léčba autoimunologických a rheumatických onemocněni, léčba jakýchkoliv dalších onemocnění nebo stavů, při nichž dochází k příliš vysoké odpovědi imunologického systému, například může jít o zvrat odolnosti nádoru proti léčbě nebo o léčbu alopecie. Jde zejména ó onemocnění kůže nebo oka jako je lupenka, atopická nebo kontaktní dermatitis, transplantáty rohovky, zánět spojivek a uveitis, v tomto případě jde o místní podání, při rheumatoidni arthritidě nebo při jiných kloubních onemocněních padá v úvahu také nitrokloubní podání.

K uvedenému účelu se tedy podává:

E. cyklosporin A vnesolvatované formě orthorhombických krystalů, například ve formě CY-A/X-III tak, jak byla definována v odstavcích A až A , pro použiti ve farmacii například pri léčbě různých onemocnění, zejména k potlačení imunologické odpovědi a zánětu, a

-30CZ 279654 B6

F. cyklosporin A ve formě orthorhombických krystalů, například ve formě CY-A/X-III tak, jak byl definován v odstavcích A až A⁷.

Aby bylo možno usnadnit identifikaci cysklosporinu A v uvedené formě, zejména CY-A/X-III, budou dále uváděny údaje o difrakci působením rtg-paprsků pro formu CY-A/X-III a také pro obě formy CY-A/X-I a CY-A/X-II v následujících tabulkách I až III. Na obr. IV je znázorněna difrakce ve formě diagramu. Tento diagram byl získán při použití kamery (Guinier-DeWolf II) a při použití záření CuKa, lambda = 1,542 Á.

Tabulka I

Difrakce rtg záření pro CY-A/X-I

čára č.	d (Á)	intenzita
1	13,0	vs
2	11,4	vs
3	10,3	vs
4	9,7	vs
5	9,4	vs .
6	8,25	vs
7	7,1	s
8	6,1	M
9	5,85	s
10	5,6	s
11	5,25	vs
12	4,81	s
13	4,58	s
14	4,25	M
15	4,0	M
16	3,67	M
17	3,45	M

Tabulka II

Difrakce záření pro CY-A/X-II

čára č.	d (X)	intenzita
1	17,9	S
2	11,4	VS
3	11,0	s
4	10,6	M
5	10,2	S
.6	8,9	M
7	8,7	M
8	8,1	M
9	7,2	VS
10	6,3	M

-31CZ 279654 B6 intenzita čára č.

d (Á)

11	5,95	M
12	5,7	M
13	5,35	M
14	5,1	S
15	4,85	S
16	4,8	M
17	4,55	M
18	4,4	M

Tabulka III

Difrakce rtg-záření pro CY-A/X-III

čára č.	d (A)	intenzita
1	12,0	M
2	10,4	vs
3	9,6	s
4	8,7	s
5	7,9	M
6	7,7	S
7	6,7	M
8	6,0	M
9	5,83	S
10	5,3	M
11	5,2	M '
12	4,92	S
13	4,88	S
14	4,58	M
15	4,48	M
16	4,0	M
17	3,59	M
18	3,38	M

Claims (3)

1. Způsob výroby cyklosporinu A v orthorhombické (P2₁2₁2₁) krystalické formě s krystalovou mřížkou, v níž rozměr a je roven

0 _M ' 9 9

12,5 A, rozměr b je roven 22,9 A, rozměr c je roven 28,4 A a objem na asymetrickou jednotku je roven 2027 Á³ , vyznačující s e-' . t í m, že se cyklosporin A rozpustí v rozpouštěcím prostředí, tvořeném polymerním etherem s molekulovou hmotností alespoň 200, za teploty alespoň 40 “C na roztok obsahující od 5 do 60 % hmot, cyklosporinu A, vztaženo na celkovou hmotnost roztoku a cyklosporin A se krystaluje z tohoto rozpouštědla za vzniku orthorhombické krystalické formy vymezené shora.

2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že rozpouštěcí prostředí obsahuje polyethylenglykol nebo polypropylenglykol.

3. Způsob podle nároku 1,vyznačující se tím, že rozpouštěcí prostředí obsahuje glycerolpolyethylenglykolester, ester polyoxyethylensorbitanu, polyoxyethylenester nebo produkt trans-esterifikace přírodních triglyceridů z olejů a polyalkylenpolyolů.