CZ2194A3

CZ2194A3 - (all-e)-3,7-dimethyl-9-/3,5-dimethyl-2-(nonyloxy)phenyl /-2,4,6,8-nonatetraenic acid, process of its preparation and pharmaceutical preparations based thereon

Info

Publication number: CZ2194A3
Application number: CZ9421A
Authority: CZ
Inventors: Thomas I Doran; Michael Rosenberger; Stanley Seymour Shapiro
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1993-01-06
Filing date: 1994-01-05
Publication date: 1994-07-13
Also published as: NO940034L; FI940040A0; NO940034D0; IL108246A; EP0606614B1; NO180534C; HUT65945A; DE69309029D1; US5369126A; EP0606614A1; HU9400001D0; NO180534B; IL108246A0; FI940040A; CA2110336A1; JPH06234698A; GR3023582T3; TW247311B; PL301783A1; AU5243293A

Description

Oblast techniky

Vynález se týká (all-E)-3,7-dimethyl-9-[3,5-dimethyl-2-(nonyloxy)fenyl]-2,4,6,8-nonatetraenové kyseliny, způsobu její výroby a farmaceutických přípravků na její bázi.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je (all-E)-3,7-dimethyl-9-[3,5dimethyl-2-(nonyloxy)fenyl]-2,4,6,8-nonatetraenová kyselina vzorce I

a její farmaceuticky vhodné soli a farmaceuticky vhodné hydrolyzovatelné estery.

Předmětem vynálezu jsou dále také farmaceutické přípravky a způsoby použití sloučeniny vzorce I a jejích farmaceuticky vhodných solí a farmaceuticky vhodných hydrolyzovatelných esterů při výrobě farmaceutických přípravků, které slouží ke snížení sekrece seba (kožního mazu) a k prevenci nebo - léčbě poruch, které jsou s tvorbou kožního mazu spojeny, jako je akné. Je známo, že inhibice tvorby kožního mazu a/nebo jeho sekrece představuje účinný prostředek pro léčbu a/nebo prevenci poruch, jako je akné. Poruchy, které jsou spojeny se sekrecí kožního mazu zahrnují též takové dermatologické choroby, jako je seborrhea, včetně tvorby lupů, zvýšeného maštění pokožky a vlasů, milia a uhrovitosti.

Topické a orální podávání sloučeniny vzorce I a jejích farmaceuticky vhodných solí a farmaceuticky vhodných hydrolyzovatelných esterů je účinné při léčbě všech forem akné, ať již se jedná o formu zánětlivou nebo nezánětlivou.

Farmaceuticky vhodné soli zahrnují všechny soli, které jsou z chemického hlediska přípustné v tomto oboru, které je sloučenina vzorce I schopna tvořit a které lze podávat humánním pacientům ve formě farmaceuticky vhodných přípravků. Může se použít jakýchkoliv konvenčních farmaceuticky vhodných solí sloučenin vzorce I. Z konvenčních solí, kterých lze použít, je možno uvést soli s bázemi, jako jsou například soli alkalických kovů, jako soli sodné nebo draselné, soli kovů alkalických zemin, jako jsou soli vápenaté nebo horečnaté a amonné nebo alkylamoniové soli.

Sloučenina vzorce I podle vynálezu se může také podávat ve formě svých farmaceuticky vhodných hydrolyzovatelných esterů. Pod pojmem hydrolýzovatelný ester se v souvislosti s tímto vynálezem rozumí ester, který se hydrolyzuje za fyziologických podmínek na sloučeninu vzorce I. V přípravcích podle vynálezu a při způsobech podle vynálezu je možno používat jakýchkoliv farmaceuticky vhodných hydrolyzovatelných esterů sloučeniny vzorce I. Z takových esterů je možno uvést aromatické estery, jako je benzylester (OBzl) nebo benzylester substituovaný nižší alkylskupinou, halogenem, nitroskupinou, thioskupinou nebo substituovanou thioskupinou, například nižší alkylskupinou, terc.butylskupinou, cyklopentylskupinou, cyklohexylskupinou, cykloheptylskupinou a 9-fluorenylmethylskupinou.

Sloučenina vzorce I a její farmaceuticky vhodné soli a hydrolyzovatelné estery se mohou připravovat jakýmikoliv konvenčními způsoby, které jsou v tomto oboru známy. Předmětem vynálezu je také způsob výroby sloučeniny vzorce I, jejích farmaceuticky vhodných solí a hydrolyzovatelných esterů, jehož podstata spočívá v tom, že se sloučenina obecného vzorce II

(II) kde Ph představuje fenylskupinu a X” představuje anion, nechá reagovat za podmínek Wittigovy reakce se sloučeninou vzorce III

OHC

C(O)OAIkyl (III) a popřípadě se hydrolyticky rozštěpí alkylesterová skupina, za vzniku karboxylové kyseliny vzorce I.

Farmaceuticky vhodné hydrolyzovatelné estery sloučeniny vzorce I je možno připravovat konvenčními postupy ze sloučeniny vzorce I, například reakcí sloučeniny vzorce I s alkoholem.

Jak již bylo výše uvedeno, sloučenina vzorce I a její farmaceuticky vhodné soli a farmaceuticky vhodné hydrolyzovatelné estery [všechny tyto látky se kolektivně označují termínem účinná přísada podle vynálezu”], představují účinný prostředek pro snížení sekrece kožního mazu a lézí způsobených akné a jsou tedy užitečné při profylaxi nebo léčbě poruch, jako je akné. Přitom se účinná přísada podle vynálezu podává vhodnými způsoby ve formě farmaceuticky vhodných orálních nebo topických přípravků. Tyto farmaceutické přípravky podle vynálezu obsahují účinnou přísadu podle vynálezu ve formě směsi s mísitelným farmaceuticky vhodným nosičovým materiálem. Může se používat všech běžných nosičových materiálů. Nosičovým materiálem může být organický nebo anorganický nosičový materiál, který se hodí pro orální podávání. Jako vhodné nosiče je možno uvést vodu, želatinu, arabskou gumu, laktózu, škrob, stearan hořečnatý, mastek, rostlinné oleje, polyalkylenglykoly, vazelínu apod. Farmaceutické přípravky mohou dále obsahovat jiná farmaceuticky vhodná činidla. V souladu s obvyklou praxí výroby farmaceutických přípravků je možno přidávat přídavné přísady, jako jsou ochucovadla, konzervační látky, stabilizátory, emulgátory, tlumiče pH apod.

Farmaceutické přípravky je možno vyrábět v jakékoliv obvyklé formě, například a) v tuhé formě vhodné pro orální podávání, například ve formě tablet, kapslí, pilulí, prášků, granulátů apod.? a b) přípravků, které se hodí pro topické podávání, jako jsou roztoky, suspenze, masti, krémy, gely, mikronizované prášky, aerosoly apod. Farmaceutické přípravky je možno sterilizovat a/nebo mohou obsahovat pomocné přísady, jako jsou konzervační činidla, stabilizátory, smáčedla, emulgátory, soli pro změnu osmotického tlaku a/nebo tlumiče pH.

Mají-li se přípravky podle vynálezu podávat topicky na kůži, vyrábějí se přednostně ve formě mastí, tinktur, krémů, gelů, roztoků, lotionů, sprejů, suspenzí, šamponů, vlasových mýdel apod. Podle vynálezu se může použít jakéhokoliv konvenčního přípravku, kterého se používá pro aplikaci na skalp nebo kůži. Z přednostních způsobů aplikace přípravků podle vynálezu, obsahujících účinnou přísadu podle vynálezu, je možno uvést aplikaci účinné přísady podle vynálezu ve formě gelu, lotionu nebo krému. Farmaceutické přípravky pro topické podávání na kůži je možno vyrobit tak, že se výše uvedená účinná přísada podle vynálezu smíchá s netoxickými terapeuticky inertními pevnými nebo kapalnými nosiči, kterých se obvykle používá v takových přípravcích. Tyto přípravky by měly obsahovat přinejmenším asi 0,01 % hmotnostního účinné přísady podle vynálezu, vztaženo na celkovou hmotnost přípravku. Vzhledem k tomu, že účinná přísada podle vynálezu je poměrně netoxická a nedráždivá, může se jí používat v topických přípravcích v množství přesahujícím 0,2 %. Dává se přednost tomu, aby přípravky podle vynálezu obsahovaly účinnou přísadu podle vynálezu v množství v rozmezí od 0,01 do 0,2 % hmotnostního, vztaženo na celkovou hmotnost přípravku. Takové přípravky se také přednostně aplikují na kůži jednou nebo dvakrát denně. Tyto přípravky se mohou aplikovat podle potřeby pacienta. Účinná přísada podle tohoto vynálezu se také může aplikovat ve vodném roztoku nebo v alkoholickém roztoku, jako je například roztok v ethanolu.

Při výrobě topických přípravků, které byly popsány výše, se může používat přísad, jako jsou konzervační látky, zahušřovadla, parfémy apod., které jsou běžně známé v oboru výroby farmaceutických topických přípravků. Kromě toho se do topických přípravků, na bázi účinné přísady podle tohoto vynálezu, mohou také přidávat konvenční antioxidanty. Z konvenčních antioxidantů, kterých je možno používat v těchto přípravcích, je možno uvést N-methyl-a-tokoferolamin, tokoferoly, butylovaný hydroxyanisol, butylovaný hydroxytoluen, ethoxychin apod.

Při provádění tohoto vynálezu je možno používat konvenčních parfémů a lotionů, kterých se obvykle používá v topických přípravcích aplikovaných na vlasy. Topické přípravky podle vynálezu mohou kromě toho obsahovat konvenční emulgátory.

Farmaceutické přípravky typu mastí s obsahem účinné přísady podle tohoto vynálezu mohou mít podobu směsí polopevných ropných uhlovodíků s rozpouštědlovou disperzí účinné přísady podle vynálezu.

Farmaceutické přípravky typu krémů s obsahem účinné přísady podle vynálezu jsou přednostně tvořeny emulzemi vytvořenými z vodné fáze zvlhčovadla, stabilizátoru viskozity a vody a olejové fáze mastného alkoholu, polopevného ropného uhlovodíku a emulgátorů a fáze, obsahující účinnou přísadu podle vynálezu dispergovanou ve vodném stabilizačním roztoku pufru. K topickým přípravkům se mohou přidávat stabilizátory. Podle vynálezu se může používat jakýchkoliv obvyklých stabilizátorů. Složka alkoholu odvozeného od mastných kyselin (mastného alkoholu) v olejové fázi působí jako stabilizátor. Tyto mastné alkoholy se přednostně získávají redukcí nasycených mastných kyselin s dlouhým řetězcem obsahujícím přinejmenším asi 14 atomů uhlíku. Farmaceutické přípravky na bázi krémů s obsahem účinné přísady podle vynálezu se například mohou skládat z vodných emulzí mastného alkoholu, polopevného ropného uhlovodíku, 1,2-ethylenglykolu a emulgátorů.

Přednostní orální dávkovači formou jsou tablety a kapsle z tvrdé nebo měkké želatiny, methylcelulozy nebo jiného vhodného materiálu, který se snadno rozpouští v zažívacím traktu. Orální dávky účinné přísady podle vynálezu se budou měnit v závislosti na konkrétní potřebě jednotlivých pacientů, kterou zváží ošetřující lékař. Obecně přichází v úvahu denní dávka v rozmezí od asi 0,01 do asi 3 mg/kg tělesné hmotnosti a přednostně od asi 0,025 do asi 1,5 mg/kg tělesné hmotnosti pacienta. Tato dávka se může

Ί podávat podle jakéhokoliv dávkovacího režimu stanoveného lékařem na základě potřeb pacienta.

Podle tohoto vynálezu je také možné zapracovat účinnou přísadu podle tohoto vynálezu v jakémkoliv požadovaném množství do orální jednotkové dávkovači formy určené pro enterální podávání. Přednostně se však vyrábějí přípravky tohoto typu takovým způsobem, aby každá dávkovači forma obsahovala přibližně 1 až 50 mg účinné přísady podle vynálezu ve směsi s vhodnými terapeuticky inertními plnivy a ředidly. Obzvláštní přednost se dává přípravkům, které mají podobu měkých želatinových kapslí a tablet.

Účinné přísady podle tohoto vynálezu, která vykazuje výrazný potlačující účinek na sekreci kožního mazu a výrazný účinek proti akné, se tedy může podle vynálezu používat ve formě farmaceutických přípravků, zmíněných výše, pro snižování sekrece kožního mazu a pro léčbu akné.

Dávkování při léčbě je obvykle závislé na cestě podávání, věku, hmotnosti a závažnosti akné u ošetřovaného jednotlivce.

Vynález je blíže popsán v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Stupeň 1: Výroba 2-hydroxymethyl-4,6-dimethylfenolu (1)

Směs 24,4 g 2,4-dimethylfenolu, 2,44 g práškovitého uhličitanu sodného, 7,8 g paraformaldehydu a 7,8 ml iso8 propylakoholu se 5 hodin míchá při teplotě lázně 90 až 100 °C. Po ochlazení na teplotu místnosti se směs nalije do 200 ml IN roztoku hydroxidu sodného a směs se promyje 4x 50 ml (tj. celkem 200 ml) dichlormethanu (Fisher). Spojené promývací dichlormethanové louhy se reextrahují 20 ml vody. Spojené vodné vrstvy se okyselí 20 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové (Fisher) a extrahují 100 + 25 ml (celkem 125 ml) dichlormethanu. Spojené dichlormethanové extrakty se promyjí 50 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, vysuší síranem sodným a zkoncentrují do sucha při 50 °C za vysokého vakua. Získá se 22,0 g (72,4%) surové sloučeniny (1) ve formě hnědého oleje.

Stupeň 2: Výroba 2-(nonyloxy)-3,5-dimethylbenzenmethanolu (2)

22,0 g surové sloučeniny (1), 24,7 ml 1-bromnonanonu, 5,79 ml roztoku hydroxidu sodného a 100 ml isopropylalkoholu se přes noc vaří pod zpětným chladičem. Potom se ke směsi přidá 100 ml vody a 100 ml hexanu a hexanová vrstva se promyje 20 ml IN roztoku hydroxidu sodného. Spojené vodné vrstvy se extrahují 50 ml hexanu. Potom se spojené hexanové roztoky extrahují 100 ml + 2x 50 ml (celkem 200 ml) 95% methanolu. Spojené methanolové extrakty se zkoncentrují. Zbytek vody se odstraní azeotropicky za použití 100 ml toluenu. Zbytek se vysuší při 50 °C za vysokého vakua. Získá se 28,1 g surové sloučeniny (2) ve formě hnědého oleje.

Stupeň 3: Výroba 1-(chlormethyl)-3,5-dimethyl-2-(nonyloxy)benzenu (3)

Směs 28,1 g sloučeniny (2), 28 ml isopropylakoholu a 42 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové se mírně refluxuje přes noc. Potom se směs ochladí na teplotu místnosti a zředí 140 ml hexanu a 140 ml vody. Organická vrstva se znovu promyje 140 ml vody. Potom se organická vrstva promyje 4x 50 ml (celkem 200 ml) 90% vodného metharoztok se vysuší síranem sodným a teplotě místnosti za vysokého vakua do sucha. Získá se 27,6 g sloučeniny (3) ve formě nahnědlého oleje.

nolu. Hexanový zkoncentruje při

Stupeň 4: Výroba ethylesteru (all-E)-3,7-dimethyl-9-[3,5dimethyl-2-(nonyloxy) fenyl ]-2,4,6,8-nonatetraenové kyseliny (5)

27,6 g sloučeniny (3), 21,9 g trifenylfosfinu a 93 ml toluenu se vaří přes noc pod zpětným chladičem. Směs se ochladí lázní z ledové vody a potom se k ní v průběhu 15 minut přidá 74,4 ml 1,OM roztoku terč.butanolu nebo terc.butoxidu draselného (0,8 ekvivalentu) a výsledná tmavě červená suspenze se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Po ochlazení na -10 °C se přidá 15,5 g ethylesteru 7-formyl-3methylokta-2,4,6-trien-l-ové kyseliny (4) [který byl před použitím vysušen za vysokého vakua] za použití 15 ml toluenu, jako pomocného prostředku. Chladicí lázeň se odstraní a směs se 3 hodiny míchá při teplotě místnosti.

Reakční směs se promyje 2x 100 ml (celkem 200 ml) vody. Spojené vodné vrstvy se reextrahují 50 ml toluenu. Po vysušení síranem sodným se spojené toluenové roztoky zkoncentrují do sucha při teplotě nižší než 35 °C za vysokého vakua. Zbytek se znovu rozpustí ve směsi 200 ml hexanu, 200 ml methanolu a 20 ml vody. Methanolová vrstva se reextrahuje 2x 100 ml (celkem 200 ml) hexanu. Spojený hexanový roztok se zkoncentruje do sucha při teplotě pod 35 °C a za vysokého vakua. Získá se surová sloučenina (5) ve formě červeného oleje. Tento olej se rozpustí ve 100 ml ethanolu. Roztok se ochladí lázní z ledové vody a zaočkuje zárodečnými krystaly sloučeniny (5). Výsledná suspenze se přes noc uchovává v lednici. Vzniklá žlutá sraženina se odfiltruje a promyje 100 ml chladného 95% ethanolu. Produkt se vysuší při teplotě místnosti za vysokého vakua. Získá se

21,64 g sloučeniny (5) ve formě žluté pevné látky.

Stupeň 5: Výroba (all-E)-3,7-dimethyl-9-[3,5-dimethyl-2(nonyloxy)fenyl]-2,4,6,8-nonatetraenové kyseliny (1)

21,6 g sloučeniny (5), 216 ml ethanolu a 19,1 ml (191 mmol) ION roztoku hydroxidu sodného se vaří pod zpětným chladičem po dobu 20 minut. Potom se topné zařízení odstraní a reakční baňka se ponoří do vodní lázně, načež se do ní přidá, ještě za tepla, 19,1 ml kyseliny octové. Potom se směs ochladí na teplotu místnosti, přidají se zárodečné krystaly a směs se ochladí lázní z ledu a vody. Po 30 minutovém míchání směsi se výsledná žlutá suspenze uloží přes noc do lednice. Žlutá pevná látka se odfiltruje a promyje 100 ml chladného 90% vodného ethanolu. Produkt se vysuší za vysokého vakua, přičemž se získá 17,84 g surové sloučeniny (1) ve formě žluté pevné látky. Tato látka se suspenduje ve 357 ml ethanolu a ke vzniklé suspenzi se přidá 4,5 ml koncentrovaného roztoku hydroxidu amonného. Po rozpuštění se přidá 4,5 ml kyseliny octové. Výsledná suspenze se uloží přes noc do lednice. Žlutá pevná látka se odfiltruje, promyje 100 ml chladného 95% vodného ethanolu a vysuší při teplotě místnosti za vysokého vakua. Získá se

15,3 g sloučeniny (I) (o čistotě 98,2 % podle analýzy HPLC) ve formě žluté pevné látky. Tato látka se znovu suspenduje ve 306 ml ethanolu. K suspenzi se přidá 3,8 ml koncentrovaného hydroxidu amonného. Po rozpuštění se přidá

3,8 ml kyseliny octové. Výsledná suspenze se přes noc uloží do lednice. Žlutá pevná látka se odfiltruje, promyje 100 ml chladného 95% vodného ethanolu a vysuší při teplotě místnosti za vysokého vakua. Získá se 13,56 g sloučeniny (I) (o čistotě 98,9 % podle analýzy HPLC.

Je třeba zdůraznit, že retinoidy, zejména pak jejich roztoky, je třeba co nejvíce chránit před světlem.

Sloučenina podle vynálezu byla podrobena zkoušení, které je popsáno v příkladech 2 až 4 za použití několika modelů akné. Ve všech použitých dávkách byla netoxická.

Příklad 2

Zkoušení in vitro

Mazové buňky (sebocyty) byly izolovány z humánních mazvých žláz dospělého člověka, pocházejících z obličejové části kůže, odstraněné při kosmetickém chirurgickém zákroku. Tyto buňky byly kultivovány na vrstvě myších fibroblastů 3T3 (Rheinwald a Green, 1975). Tato metoda je založena na metodě podle Karaska (1986) a zahrnuje selektivní odstranění epidermálních keratinocytů elektrokeratomií, po níž následuje enzymatické a mechanické oddělení mazových buněk z mazových žláz (Doran a další, 1991).

Buňky byly kultivovány v Iscove-ho mediu obsahujícím 10 % fetálního telecího séra a 4 μg/ml dexamethasonu.

Buňky byly naneseny na medium bez zkoušené sloučeniny a teprve potom, po 24 až 48 hodinách, byla přidána zkoušená sloučenina v čerstvém mediu. Ke kulturám bylo přidáváno čerstvé medium s obsahem zkoušené sloučeniny každých 48 hodin. V den sklizně byly kultury opláchnuty 0,03% roztokem EDTA (kyselina ethylendiamintetraoctové) v

PBS, aby se odstranily pouze fibroblasty 3T3 a potom byla provedena inkubace ve směsi 0,05% trypsynu a 0,03% EDTA. Buňky byly převedeny do suspenze a podrobeny intenzivnímu míchání, aby vznikla suspenze jednotlivých buněk. Potom byly buňky spočítány v hemocytometru.

Se všemi použitými sloučeninami bylo při této zkoušce manipulováno takto. Byly vyrobeny zásobní roztoky o koncentraci 10”²M v dimethylsulfoxidu (DMSO). Tyto roztoky byly skladovány při -20 °C v temnu. Roztoků nebylo nikdy používáno po době skladování delší než jeden měsíc. Při experimentálním použití byly roztoky, které byly rozděleny na alikvotní díly, zahřátý na teplotu místnosti a přímo byly naředěny do úplného média na požadovanou koncentraci.

Sloučeniny byly zkoušeny na inhibici proliferace růstu mazových buněk in vitro v následujících koncentracích: ΙΟ’⁶, ΙΟ^-7, 10^-8 a 10^_9M. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce 1 a jsou vyjádřeny jako množství sloučeniny potřebné pro inhibici proliferace mazových buněk o 50 % (ED₅₀) v μΜ, ve srovnání s kontrolní kulturou, která byla ošetřena pouze ředidlem. Tyto výsledky ukazují, že sloučeniny podle vynálezu inhibují proliferaci humánních sebocytů.

Tabulka 1

Inhibice proliferace humánních sebocytů in vitro

Sloučenina ^EDso

13-cis-retinová kyselina sloučenina I

0,05

0,01

Příklad 3

Zkouška na mazové žláze v uchu křečka

Samci zlatého syrského křečka (Charles River) o hmotnosti od 150 do 160 g byli chováni po dobu 1 měsíce od dodání a před dávkováním účinných sloučenin. Křečkům byla podána požadovaná dávka bud 13-cis-retinové kyseliny nebo sloučeniny I v propylenglykolu, za účelem studia orálního dávkování. Jak sloučenina I, tak 13-cis-retinová kyselina byly uloženy při 4 °C a chráněni před světlem. Každý týden byly vyráběny čerstvé roztoky.

Křečkům bylo podáno 0,2 ml roztoku léčiva orální intubací. Dávkování bylo prováděno každý den po dobu pěti dnů, potom následovaly dva dny bez dávkování a dávkování bylo obnoveno znovu na dobu pět dnů. V tomto režimu bylo podáno celkem 20 dávek. Na začátku a na konci dávkování byli křečci zváženi.

Křečci byli usmrceni inhalací oxidu uhličitého a jejich uši byly odebrány pro histologické hodnocení. Jedno fixováno 10% pufrovaným roztokem formaldehydu, pro uložení v parafinu, rozříznuto a obarveno hematoxylinem a eosinem (H&E). Plocha mazových žláz na řezu ucha křečka byla vyšetřena obrazovou analýzou za použití systému Leitz TAS Plus.

ucho bylo zpracováno

Data jsou vyjádřena jako hodnoty procentického podílu průměrné plochy 30 až 40 mazových žláz, vztaženého na kontrolní řezy (získané z uší křečků, kteří byli ošetřeni pouze rozpouštědlem). Data jsou souhrnně uvedena v tabulce 2. Výsledky ukazují, že při orálním podávání sloučenina podle vynálezu snižuje velikost již dříve existujících mazových žláz v uchu křečka.

Tabulka 2

Účinek čtyřtýdenního orálního podávání sloučeniny I na velikost mazové žlázy v uchu křečka

Dávka (mg/kg)	Sloučenina I % pokles	13-cis-retinová kyselina % pokles
Pokus 1
0,5	-19	nést.
1,5	-27	nést.
5	-33	nést.
Pokus 2
0,5	-11 ns	-13
2,5	-18	-24
5	-24	-34
10	-33	-30

Pokus 3

a. vehikulum = propylenglykol

0,5	-19	nést
1,6	-27	nést
6	-33	nést
i. vehikulum	= Labrafil
0,6	-18	nést
1,6	-26	nést
5	-26	nést

c. vehikulum = Tween 80

0,5 -13 nést.

1,4 -13 nést. 6 -22 nést.

nést. = nestanoveno

Příklad 4

Zkouška na utrikulu myši Rhino

Samci a samice myši Rhino byli před zahájením pokusu zváženi. Pro topické studie byly zkoušené sloučeniny rozpuštěny ve 100% acetonu a v množství 100 μΐ aplikovány na hřbet myší 5x za týden, jednou denně, po dobu tří týdnů. Při orálních studiích byly zkoušené sloučeniny rozpuštěny ve 100% propylénglykolu a v množství 100 μΐ podávány orální intubací 5x za týden, jednou denně, po dobu tří týdnů. V době usmrcení, které bylo provedeno vdechnutím oxidu uhličitého, byla zaznamenána konečná tělesná hmotnost.

Z hřbetu zvířat byl seříznut proužek kůže, který byl zpracován histologickými postupy tak, aby se získala celá tkáňová sestava. Obrazovou analýzou za použití bud systému Leitz TAS Plus nebo systému Ultimage, připojeného k modifikovanému počítači MACINTOSH, byla změřena velikost utrikulu.

Data jsou vyjádřena jako procentická změna, ve srovnání s kontrolní tkání, získanou od zvířat ošetřených pouze rozpouštědlem. Výsledky ukazují, že při topickém nebo orálním podávání sloučenina podle vynálezu snižuje velikost utrikulů myši Rhino.

Tabulka 3

Účinek třítýdenního topického podávání sloučeniny I na velikost utrikulů myši Rhino

Dávka Sloučenina I 13-cis-retinová kyselina (% roztok) % pokles % pokles

Pokus 1

0,01 -10 -44

0,1 -42 -55

Pokus 2

0,001 -1 -27 0,01 -11 -58 0,1 -30 -61

Tabulka 4

Účinek třítýdenního orálního podávání sloučeniny I na velikost utrikulů myši Rhino

Dávka Sloučenina I 13-cis-retinová kyselina (mg/kg) % pokles % pokles

0,25	-23	-19
1,25	-23	-39
5	-28	-47

Následující příklady ilustrují farmaceutické přípravky obsahující sloučeninu vzorce I podle tohoto vynálezu.

Příklad 5

Orální roztoky

Přípravek 1

Přísada Obsah v 1 ml sloučenina I ethanolamin alkohol, bezvodý lecitin¹ glycerylmonooleát polyglykolizovaný olej meruňkových jader mg 15 mg

0,05 ml 50 mg

0,1 ml z

q.s. do 1,0 ml

Přípravek 2

Přísada

Obsah v 1 ml sloučenina I glycerylmonooleát 10% hydroxid sodný v alkoholu polyethylenglykol 400 mg 0,10 ml 0,05 ml

q.s. do

1,0 ml

Přísada

Přípravek 3

Obsah v 1 ml

sloučenina I	50 mg
butylovaný hydroxyanisol	1 mg
triglycerid o střední
délce řetězce q.s. do	1 ml

Přípravek 4

Přísada	Obsah	v
sloučenina I	50	mg
diethanolamin	15	mg
glycerin	100	mg
butylovaný hydroxyanisol	1	mg
polyethylenglykol 400 mg q.s. do	1	ml

Přípravek 5

Přísada

Obsah v 1 ml

sloučenina I	50 mg
butylovaný hydroxyanisol	1 mg
Labrafil 1944 CS² q.s. do	1 ml

Příklad 6

Kapsle

Přípravek 1

Přísada Obsah (mg/kapsle)

sloučenina I	10	40	80
sojový olej	100,4	200,8	401,6
čištěný včelí vosk	7,5	15	30
hydrogenováné sojové
vločky	7,5	15	30
hydrogenovaný rostlinný
olej	26,5	53	106
sodná sůl EDTA	0,5	1	2
butylovaný hydroxyanisol	0,1	0,2	0,4
	162,5	325,0	650,0

Výrobní postup:

Složka 2 se zahřeje přibližně na 70 °C a za míchání se v ní rozpustí složky 2, 3, 4, 5 a 6, až do vzniku homogenního roztoku. Roztok se ochladí na 30 °C. Přidá se sloučenina I a směs se promíchá. Vzniklou směsí se naplní měkké kapsle.

Přípravek 2

Přísada		Obsah (mg/kapsle)
sloučenina I	10	40	80
laktóza, bezvodá	50	95	190
kukuřičný škrob	50	40	80
askorbylpalmitát	2	5	10
mastek	10	20	40
	122	200	400

Výrobní postup:

Smíchají se složky 1, 2, 3, 4 a 5 a směs se prosyje sítem. Prosetá práškovitá směs se znovu 5 minut mísí a potom se jí naplní vhodné kapsle.

Příklad 7

Intravenosní roztoky

Přípravek 1

Přísada

Koncentrace (mg/ml) sloučenina I 10 alkohol, bezvodý 100 polyvinylpyrrolidon (15 kDa) 15 hydroxid sodný (2N) 100 propylenglykol 200 voda pro injekce q.s. do 1 ml

Přípravek 2

Přísada

Koncentrace (mg/ml) sloučenina I 10 benzylalkohol 50 polyoxyethylensorbitanmonooleát 80 ethanol 100 polyethylenglykol 400 300 fosfátový pufr (pH 7,5) q.s. do ml

2-z- fy

PATENTOVÉ < D > C3> OO =£ —< -<

<s>

ο3ς?γ

CD cn o

o cr*

O( ?

UO rc

Claims

1. (all-E)-3,7-dimethyl-9-[3,5-dimethyl-2-(nonyloxy)fenyl]-2,4,6,8-nonatetraenová kyselina vzorce I a její farmaceuticky vhodné soli a farmaceuticky vhodné hydrolyzovatelné estery.

2. Sloučenina podle nároku 1 pro použití jako léčivo.

3.

z n a č u j vzorce II

Způsob výroby sloučenin podle nároku 1, v y ící se tím, že se sloučenina obecného (II) kde Ph představuje fenylskupinu a X” představuje anion, nechá reagovat za podmínek Wittigovy reakce se sloučeninou vzorce III

OHC

C(O)OAlkyl (III) a popřípadě se hydrolyticky rozštěpí alkylesterová skupina, za vzniku karboxylové kyseliny vzorce I.

4. Farmaceutický přípravek, vyznačuj ící se tím, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1 a farmaceuticky vhodný nosič.

5. Použití sloučeniny podle nároku 1 při výrobě farmaceutických přípravků pro snižování sekrece kožního mazu nebo prevenci akné.

6. Použití podle nároku 5, kde farmaceutickým přípravkem je přípravek vhodný pro orální podávání.

7. Použití podle nároku 6, kde farmaceutický přípravek je v jednotkové dávkovači formě obsahující asi 1 až asi 50 mg účinné sloučeniny.

8. Použití podle nároku 5, kde farmaceutickým přípravkem je přípravek vhodný pro topické podávání.

9. Použití podle nároku 8, kde přípravek obsahuje asi 0,01 až asi 0,2 % hmotnostního účinné sloučeniny.