CZ2018121A3

CZ2018121A3 - Pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy pro terapeutické použití

Info

Publication number: CZ2018121A3
Application number: CZ2018-121A
Authority: CZ
Inventors: Lucia Veselovská; Michal Hocek; Marián HAJDÚCH; Petr Džubák
Original assignee: Ăšstav organickĂ© chemie a biochemie AV ÄŚR, v. v. i.; Univerzita PalackĂ©ho v Olomouci
Priority date: 2018-03-12
Filing date: 2018-03-12
Publication date: 2019-09-25
Also published as: EP3765475A1; US20210002321A1; US11299510B2; AU2019235042A1; CA3090343C; JP6973761B2; EP3765475B1; ES2898344T3; AU2019235042B2; WO2019174657A1; PL3765475T3; JP2021516687A; CA3090343A1; CZ308104B6

Abstract

Substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I, kde R je thiofen-3-yl, furan-2-yl, furan-3-yl, benzofuran-2-yl, methyl, amino, methylsulfanyl, methoxy-, nebo dimethylamino- skupina; nebo farmaceuticky přijatelné soli takových sloučenin, jejich optické isomery či směsi takových optických isomerů. Sloučeniny podle tohoto vynálezu vykazují silné cytostatické a cytotoxické účinky na buněčných liniích preferenčně nádorového původu a to u širokého spektra nemocí, zahrnujících nádory různého histogenetického původu.

Description

Vynález se týká nového typu látek s protinádorovou aktivitou a jejich terapeutického použití.

Dosavadní stav techniky

Přestože existují a jsou schváleny desítky antiproliferačních léčiv, léčba řady typů leukémií a nádorů má stále nízkou úspěšnost. Současná léčiva mají navíc často výrazné nežádoucí účinky. Proto je třeba vyvíjet další nové typy protinádorových látek pro terapeutické použití.

V nedávné době bylo námi objeveno, patentováno a publikováno několik tříd silných cytostatik, jedná se o 7-aryl a 7-hetaryl-substituované 7-deazaadenosinové nukleosidy (viz níže obecný vzorec A), (Bourderioux, A.; Nauš, P.; Hocek, M.: WO 2010121576; Bourderioux, A. a kol. J. Med. Chem. 2011, 54, 5498-5507), nebo o 6-hetaryl-7-deazapurinové ribonukleosidy nesoucí v poloze 7 vodík nebo fluor (viz níže obecný vzorec B) (Hocek, M.; Nauš, P.: WO 2009089804; Nauš, P. a kol. ./. Med. Chem. 2010, 53, 460-70). Uvedené látky vykazovaly nanomolámí cytostatický a cytotoxický efekt proti širokému spektru leukémii a solidních nádorů.

První z anelovaných deazapurinových ribonukleosidů které jsme připravili, jako například pyrimidoindolové ribonukleosidy, nebyly cytotoxické buď vůbec, nebo jen velmi málo (viz níže obecný vzorec C) (Tichý, M. a kol. Bioorg. Med. Chem. 2012, 20, 6123-6133; Tichý, M. a kol. Bioorg. Med. Chem. 2013, 27, 5362-5372). Proto byly připraveny 4-substituované heteropentadieno-pyrrolopyrimidinové ribonukleosidy, konkrétně thienopyrrolopyrimidinové (viz níže obecné vzorec E), (Hocek, M.; Tichý, M.; Džubák, P.; Hajduch, M.: WO 2018001383; Tichý, M. a kol., ./. Med. Chem. 2017, 60, 2411-2424), furopyrrolopyrimidinové a 5methylpyrrolo-pyrrolo-pyrimidinové ribonukleosidy (Hocek, M.; Smolen, S. B.; Tokarenko, A.; Džubák, P.; Hajduch, M.: PV 2016-465) substituované v poloze 4 (viz níže obecné vzorec D), které vykazují silné cytostatické a cytotoxické účinky na buněčných liniích preferenčně nádorového původu a to u širokého spektra nemocí, zahrnujících nádory různého histogenetického původu.

HO OH

R ’

R^:í “ H. hisfe. hwwtyl (O)

HÓ OH

ORRwwl RWooíM, asý R^K ® M CL hOššLWR

R^s ~ H CL (Á|

- 1 CZ 2018 - 121 A3

Podstata vynálezu

Tento vynález popisuje nové pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy substituované v poloze 4 obecného vzorce I, které vykazují cytostatické a cytotoxické účinky na buněčných liniích preferenčně nádorového původu a to u širokého spektra nemocí, zahrnujících nádory různého histogenetického původu.

Od všech předchozích typů 7-deazapurinových derivátů obecných vzorců A a B, od pyrimidoindolových ribonukleosidů obecného vzorce C a také od anelovaných heteropentadienopyrrolopyrimidinových ribonukleosidů obecného vzorce D a E se zásadně liší přítomností anelovaného šestičlenného pyridinového kruhu v polohách 7 a 8 deazapurinového skeletu. Předkládané pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy samotné jsou dosud nepopsané sloučeniny, které se nevyskytují v přírodě a ani nebyly nikdy syntetizovány, tudíž nebyla studována jejich biologická aktivita. Pyridinopyrrolopyrimidinové nukleosidy jsou zcela unikátním a novým typem nukleosidů s tricyklickou strukturou obsahující šestičlennou bázi, která je na rozdíl od všech 7-substituovaných 7-deazapurinových nukleosidů rigidní, což vede k jinému typu interakce s cílovým biologickým systémem a tedy k jinému mechanizmu účinku. Je třeba zmínit, že obdobné sloučeniny s šestičlenným aromatickým kruhem bez heteroatomu nevykázaly žádnou podobnou aktivitu.

Překvapivě bylo zjištěno, že cytostatické a cytotoxické účinky byly závislé na poloze 5 nebo 7, zatímco sloučeniny s dusíkovým atomem v poloze 6 nebo 8 biologickou aktivitu nevykazují. Naproti tomu drive testované furopyrrolopyrimidinové a thienopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy nebyly pripravitelné ve všech variantách, nebo nevykázaly zásadně rozdílnou aktivitu v závislosti na postavení heteroatomu.

Předmětem vynálezu jsou substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce

-2CZ 2018 - 121 A3

kde

X je dusíkový atom a současně Y je atom uhlíku, nebo X je atom uhlíku a současně Y je atom dusíku;

R je zvolen ze skupiny zahrnující

- C1-C5 alkyl, volitelně substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným z hydroxyskupiny, sulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny, C1-C5 sulfanylu, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkylaminoskupiny;

- C2-C6 alkenyl, volitelně substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným z hydroxyskupiny, sulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny, C1-C5 sulfanylu, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkylaminoskupiny;

- C6-C12 aryl, volitelně substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným z hydroxyskupiny, sulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny, C1-C5 sulfanylu, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkylaminoskupiny;

- C4-C12 heteroaryl, dále obsahující alespoň jeden heteroatom zvolený z O a S; volitelně substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným z hydroxyskupiny, sulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny, C1-C5 sulfanylu, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkyljaminoskupiny;

- aminoskupinu;

- C1-C5 alkylaminoskupinu;

- di(Cl-C5 alkyljaminoskupinu;

- C1-C5 alkoxyskupinu;

- C1-C5 alkylsulfanyl;

nebo farmaceuticky přijatelné soli takových sloučenin, jejich optické isomery či směsi takových optických isomerů, včetně racemické směsi.

Ve výhodném provedení je R zvolen ze skupiny, sestávající z C1-C5 alkylu, fenylu, naftylu, 2furylu, 3-furylu, 2-thienylu, 3-thienylu, benzofurylu, C1-C5 alkylsulfanylu, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkyljaminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny.

Ještě výhodněji je R zvolen ze skupiny, sestávající z thiofen-3-ylu, furan-2-ylu, furan-3-ylu, benzofuran-2-ylu, methylsulfanylu, methylu, methoxyskupiny, aminoskupiny, dimethylaminoskupiny.

Tak, jak jsou zde popsány a pokud není uvedeno jinak, mají jednotlivé substituenty následující významy:

- „alkyl“ je rovný nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec, obsahující počet uhlíků, uvedený v místě použití tohoto termínu;

- „alkenyl“ je rovný nebo rozvětvený uhlovodíkový řetězec obsahující jednu nebo více dvojných vazeb a obsahující počet uhlíků, uvedený v místě použití tohoto termínu;

-3 CZ 2018 - 121 A3

- „aryl“ je uhlovodíkový řetězec zahrnující nejméně jeden aromatický kruh a obsahující počet uhlíků, uvedený v místě použití tohoto termínu. Aryl také může obsahovat více než jeden aromatický kruh, potom mohou být tyto kruhy kondenzované nebo nekondenzované;

- „heteroaryl“ je uhlovodíková skupina obsahující alespoň jeden heteroatom a alespoň jeden aromatický kruh; přičemž počet uhlíků a počet a typ heteroatomu jsou uvedeny v místě použití tohoto termínu. Heteroaryl může rovněž obsahovat více než jeden aromatický kruh, potom mohou být tyto kruhy kondenzované nebo nekondenzované;

- „hydroxy“ označuje skupinu -OH;

- „sulfanyl“ označuje skupinu -SH;

- „amino“ označuje skupinu -NH2;

- „alkylamino“ je skupina, vytvořená substituováním jednoho nebo dvou vodíkových atomů aminoskupiny výše definovaným alkylem;

- „dialkylamino“ je skupina, vytvořená substituováním obou vodíkových atomů aminoskupiny dvěma výše definovanými alkyly, stejnými nebo rozdílnými;

- „alkoxy“ označuje skupinu -OR', kde R' odpovídá definici alkylu;

- „alkylsulfanyl“ označuje skupinu -SR', kde R' odpovídá definici alkylu.

Tak, jak je zde použit, zahrnuje výraz „farmaceuticky přijatelná sůl takové soli, které vykazují srovnatelnou biologickou účinnost a srovnatelné vlastnosti jako nárokované sloučeniny obecného vzorce I, jsou v rámci rozumného lékařského úsudku vhodné pro použití v kontaktu s tkáněmi lidí a nižších živočichů bez nežádoucí toxicity, podráždění, alergické reakce a podobně a vykazují přijatelný poměr prospěchu a rizika. V mnoha případech jsou sloučeniny podle předkládaného vynálezu schopné vytvářet kyselé a/nebo bazické soli na základě přítomnosti aminových a/nebo karboxylových skupin či skupin jim podobných (příkladem jsou fenol nebo hydroxamová kyselina). Farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli mohou být vytvářeny s anorganickými i organickými kyselinami. Anorganické kyseliny, od nichž mohou být soli odvozeny, zahrnují například kyselinu chlorovodíkovou, bromovodíkovou, sírovou, dusičnou, fosforečnou a podobně. Organické kyseliny, od nichž mohou být soli odvozeny, zahrnují například kyselinu octovou, propionovou, glykolovou, pyrohroznovou, šťavelovou, maleinovou, malonovou, jantarovou, filmařovou, vinnou, citrónovou, benzoovou, skořicovou, mandlovou, methansulfonovou, ethansulfonovou, p-toluensulfonovou, salicylovou a podobně. Farmaceuticky přijatelné bazické adiční soli mohou být vytvářeny s anorganickými i organickými bázemi. Anorganické baze, od nichž mohou být soli odvozeny, zahrnují například sodík, draslík, lithium, amonium, vápník, hořčík, železo, zinek, měď, mangan, hliník a podobně; zvláště upřednostňovány jsou amonné, draselné, sodné, vápenaté a hořečnaté soli. Organické baze, od nichž mohou být soli odvozeny, zahrnují například primární, sekundární a terciární aminy, substituované aminy včetně přírodně se vyskytujících substituovaných aminů, cyklické aminy, bazické iontově výměnné pryskyřice a podobně, konkrétními příklady jsou isopropylamin, trimethylamin, diethylamin, triethylamin, tripropylamin a ethanolamin. Farmaceuticky přijatelné soli podle předkládaného vynálezu mohou být syntetizovány z mateřské bazické nebo kyselé sloučeniny běžnými chemickými metodami. Obecně mohou být takové soli připraveny reakcí volných kyselých forem těchto sloučenin se stechiometrickým množstvím příslušné baze (jako jsou hydroxid sodný, vápenatý, horečnatý nebo draselný, uhličitan, hydrogenuhličitan a podobně), nebo reakcí volných bazických forem takových sloučenin se stechiometrickým množstvím vhodné kyseliny. Takové reakce se typicky provádějí v organickém rozpouštědle, ve vodě, nebo v jejich směsi. Pokud jsou použitelná, obecně se upřednostňují nevodná media, jako jsou ether, ethyl-acetát, ethanol, isopropanol nebo acetonitril. Seznam vhodných adičních solí lze nalézt např. v publikaci Remingtonů Pharmaceutical Sciences, 20. vydání, Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985), která je zde uvedena jako odkaz.

Ve výhodném provedení jsou předmětem vynálezu následující substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I:

4-(furan-3-yl)-9-(je-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin

-4CZ 2018 - 121 A3

4-(furan-2-yl)-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2\3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-(thiofen-3-yl)-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-(benzofuran-2-yl)-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-methyl-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-(dimethylamino)-9-(je-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-anůno-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-methoxy-9-(j8-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-(methylsulfanyl)-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin

4-(furan-3-yl)-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-(furan-2-yl)-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-(thiofen-3-yl)-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-(benzofuran-2-yl)-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-methyl-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-(dimethylamino)-9-(je-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-anůno-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-methoxy-9-(j8-D-ribofiiranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin

4-(methylsulfanyl)-9-(jřLD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin

Předmětem předkládaného vynálezu jsou dále substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I pro použití jako léčiva.

Předmětem předkládaného vynálezu jsou také substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I pro použití k inhibici patologické buněčné proliferace nádorového i nenádorového původu a/nebo k léčení nádorového nebo nenádorového onemocnění, spojeného s buněčnou hyperproliferací.

Předmětem vynálezu jsou i substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I pro použití k léčení nádorových onemocnění, zahrnujících např. nádory epiteliálního, mesenchymálního a neuroektodermálního původu.

Předmětem vynálezu jsou i substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I pro výrobu léčiva k léčení nádorových onemocnění, zahrnujících např. nádory epiteliálního, mesenchymálního a neuroektodermálního původu.

Předmětem vynálezu je rovněž farmaceutický prostředek obsahující terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I a případně také alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič, plnivo a/nebo ředidlo.

-5 CZ 2018 - 121 A3

Význakem vynálezu je použití zmíněného farmaceutického prostředku pro inhibici patologické buněčné proliferace nádorového i nenádorového původu, k léčbě nádorového nebo nenádorového onemocnění spojeného s buněčnou hyperproliferací.

Termín terapeuticky účinné množství, jak se zde používá, se týká takového množství sloučeniny nebo léčiva, které je účinné při léčení onemocnění nebo poruchy u člověka, popřípadě savce. V případě léčby rakoviny může terapeuticky účinné množství léčiva snížit počet rakovinných buněk; snížit velikost nádoru; inhibovat (tj. do určité míry zpomalit a s výhodou zastavit) infiltraci rakovinných buněk do periferních orgánů; inhibovat (tj. zpomalit do určité míry a s výhodou zastavit) tvorbu metastází nádoru, inhibovat, do určité míry, růst nádoru a/nebo zmírnit do určité míry jeden nebo více symptomů spojených s rakovinou. Vzhledem k tomu, léčivo může zabránit růstu a/nebo zabíjet existující rakovinné buňky, může být cytostatické a/nebo cytotoxické.

Výraz farmaceutický prostředek označuje formulaci sloučeniny a média obecně uznávanou v oboru pro dodání biologicky účinné látky savci, např. člověku. Takové médium zahrnuje všechny farmaceuticky přijatelné nosiče, ředidla nebo pomocné látky.

Výraz farmaceuticky přijatelný nosič, ředidlo nebo plnivo, jak se zde používá, zahrnuje bez omezení jakoukoliv pomocnou látku, nosič, kluznou látku, sladidlo, konzervant, barvivo, látku zvýrazňující chuť, povrchově aktivní činidlo, dispergační činidlo, suspendační činidlo, stabilizátor, izotonický prostředek, rozpouštědlo nebo emulgátor, které byly schválené pro použití u lidí nebo domácích zvířat.

Vynález dále zahrnuje sloučeniny vzorce I pro podání ve formě jediné účinné látky farmaceuticky přijatelného prostředku, který může být vyroben pomocí obvyklých postupů, známých v oboru, například tak, že se účinná látka naváže na farmaceuticky přijatelný, terapeuticky inertní organický a/nebo anorganický nosič či excipient nebo se s ním smíchá. Další možností je použití sloučeniny vzorce I jako druhé či další aktivní složky, mající synergický účinek s jinými účinnými látkami ve známých léčivech či podávání sloučenin vzorce I společně s takovými léčivy.

Sloučeniny vzorce I podle tohoto vynálezu lze rovněž používat ve formě prekurzoru (proléčiva) nebo v jiné vhodně upravené formě, která uvolňuje aktivní látku in vivo.

Detailní popis vynálezu

Číslování sloučenin

Dále je použito následující číslování uváděných sloučenin:

-6CZ 2018 - 121 A3

Syntetický postup

Klíčové výchozí benzoylované 4-chlorpyridopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy byly připraveny 5 krokovou syntézou, která vycházela z odpovídajících chlomitropyridinů 3 a 4. Syntéza zahrnuje klíčovou nukleofilní substituci atomu chloru ethyl kyanoacetátem (Finch, N.; Robinson, Μ. M.; Valerio, Μ. P. A Synthesis of 4-Azaoxindole ./. Org. Chem. 1972, 37, 51-53), takto připravené sloučeniny byly následně redukovány zinkem za současné cyklizace, poté následovala cyklizace s formamidem (Reader, J. C. a kol. J. Med. Chem. 2011, 54, 8328— 8342). Následující krok chlorace byl proveden dle podmínek dříve optimalizovaných v naší skupině (Naus, P. a kol. J. Med. Chem. 2014, 57, 1097-110). Takto připravené tricyklické nukleobáze byly následně převedeny Vorbríiggenovou glykosylací na benzoylované 4chlorpyridopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy 13 nebo 14 (Schéma 1).

3; X * N a ¥ « C 4: X c _a ·; »

SsX O

íAn' áS X « N 3 Y - C

A·'},. CA

Jí X

NC A b | ,í .......

S.A X ..> f « C § X C 8 > » N

AArA

$ Λ K N 3 Y » C W: X» C a V ® H

Ή 3· :: X <_s V ·: O ΊΧ: X» CA N

43: X ~ OY ~ O

U. X - € š Y * N

8S SA7^<:. sAi.Ast 75 A. β 7 ÍSAAvý X8':S;k, A<5)H. 75 Ά. A 8Š8 »· fesVíASX: KSSCiXX ϊ?β '^:C„ W h; ú: Á AA-AAaY;:. ShlíXd -δΠΈΑϋ:·. AXk :-A A ' s; XA.

Vi\ X <·' A v c'' C λ 'X ... ' ' x. \ x''.·' ' \ .3 'yK-tV'' ,μ _x

Schéma 1: Syntéza benzoylovaných 4-chlorpyridopyrrolopyrimidinových nukleosidů

-7 CZ 2018 - 121 A3

Cílové nukleosidy substituované v poloze 4 (Schéma 2 a 3) byly připraveny palladiem katalyzovanými reakcemi nebo nukleofilními substitucemi. 2-furylová skupina byla do polohy 4 zavedena Stilleho reakcí s 2-furyltributylstannanem, 3-fůrylová, 3-thienylová a 2-benzofurylová skupina Suzukiho reakcí s příslušnými boronovými kyselinami, methyl derivát byl připraven 5 palladiem katalyzovanou alkylací trimethylhliníkem a dimethylaminoderivát nukleofilní substitucí s dimethylaminem. Všechny tyto reakce poskytly 4-substituované deriváty benzoylované na cukerné části. Benzoylové chránící skupiny byly odstraněny methoxidem sodným v methanolu, tato reakce vedla k cílovým volným nukleosidům. Methoxy, amino a methylsulfanylové skupiny byly do molekuly zavedeny nukleofilními substitucemi; za podmínek ίο reakcí došlo zároveň k odstranění benzoylových skupin.

Schéma 2: Syntéza 4-substituovaných pyridopyrrolopyrimidinových nukleosidů 15,1

Tabulka 1: Syntéza 4-substituovaných pyridopyrrolopyrimidinových nukleosidů 15,1

Vstup	Podmínky	R	Chráněný nukleosid	Výtěžek [% hm.]	Volný nukleosid	Výtěžek [% hm.]
1	a	OMe	-	-	la	62
2	b	SMe	15b	52	1b	50
3	c	nh₂	-	-	1c	52
4	e	Me	15d	69	Id	87
5	d	NMe₂	15e	82	le	81
6	f	2-furyl	15f	90	If	75
7	g	3-furyl	15g	73	ig	78
8	g	3-tienyl	15h	70	Ih	70
9	h	2-benzofuryl	15i	56	li	69

-8CZ 2018 - 121 A3

> 1x H&šsM&k W > <š: l_;4<ites$K 120 '\< 04 hi ·$· v'

TKF. 1 ’ i> > O>.. 10 óy 4' '». ?0 ^: C> tO 0% fx

S^í^?< l£X> ^m&< 4 h; §: ^-waníSvO-Xyseta.. ^CQ^< ío^.^ 100 X;. >1&> h: WG4><

u>Y'00 -^sc.. 10 4

Schéma 3: Syntéza 4-substituovaných pyridopyrrolopyrimidinových nukleosidů 16, 2

Tabulka 2: Syntéza 4-substituovaných pyridopyrrolopyrimidinových nukleosidů 16, 2

Vstup	Podmínky	R	Chráněný nukleosid	Výtěžek [% hm.]	Volný nukleosid	Výtěžek [% hm.]
1	a	OMe	-	-	2a
2	b	SMe	-	-	2b
3	c	nh₂	-	-	2c
4	e	Me	16d	55	2d	63
5	d	NMe₂	16c	67	2e	91
6	f	2-furyl	16f	66	2f	71
7	g	3-furyl	16g	84	2g	90
8	g	3-tienyl	16h	57	2h	72
9	g	2 benzofuryl	16i	64	2i	79

Pokud testované látky vykázaly v in vitro cytotoxickém testu aktivitu), byla téměř vždy preferenční vůči širokému spektru nádorových linií různého histogenetického původu ίο (mesenchymální i epiteliální nádory), s významně menší aktivitou vůči liniím normálních lidských fibroblastů (BJ a MRC-5) a tudíž dobrým in vitro terapeutickým indexem.

Lepší terapeutický index, tedy nízká toxicita vůči nerakovinovým buněčným liniím, v porovnání s fůropyrrolopyrimidinovými, 5-methylpyrrolo-pyrrolo-pyrimidinovými a 15 thienopyrrolopyrimidinovými ribonukleosidy společně s odlišným mechanismem účinku favorizuje zde předkládané látky pro použití jako případná nová cytostatika.

-9CZ 2018 - 121 A3

Příklady uskutečnění vynálezu

Seznam použitých zkratek a symbolů:

ATR aq. bd bq bs t.t. bt btd BSA Bz C-18 d

metoda zeslabeného vnitřního odrazu vodný široký dublet široký kvartet široký singlet teplota tání široký triplet široký triplet dubletu bis(trimethylsilyl) acetamid benzoyl chemicky vázaná C-18 stacionární chromatografická fáze (reverzní fáze) dublet

dd ddd dm DME DCM DMSO dt El eq. EtOH ESI gem HPFC HPLC HR IR m m

dublet dubletu dublet dubletu dubletu dublet multipletů N, /V-di methy 1 formámid dichlormethan dimethylsulfoxid dublet triplet elektronová ionizace ekvivalent ethanol elektrosprejová ionizace geminální vysokoúčinná flash chromatografie vysokoúčinná kapalinová chromatografie vysoké rozlišení infračervená spektroskopie multiplet meta

Me MS v NMR o

methyl hmotnostní spektrometrie vlnočet jaderná magnetická rezonance ortho

P Ph PPh₃ q RP-HPFC s t.m. t td TMSOTf

para fenyl trifenylfosfin kvartet vysokoúčinná flash chromatografie s obrácenými fázemi singlet teplota místnosti triplet triplet dubletů trimethylsilyl trifluormethansulfonát

NMR spektra naměřena na spektrometrech Bruker AVANCE o pracovních frekvencích 400 MHz (¹ H při 400 MHz, ¹³C při 100,6 MHz), nebo 500 MHz (¹ H při 500 MHz, ¹³C při 125,7 MHz), nebo 600 MHz (¹ H při 600 MHz, ¹³C při 150,9 MHz). Hmotnostní spektra s vysokým rozlišením (HR MS) byla získána pomocí elektrosprejové ionizace (ESI), elektronové ionizace (El) nebo chemické ionizace za atmosférického tlaku (APCI). Separace vysokoúčinnou flash

- 10CZ 2018 - 121 A3 chromatografií (HPFC) na reverzní fázi byly provedeny na přístroji ISCO CombiFlash Rf, na kolonách Reverse Phase (Cl8) RediSep Rf column. Složení mobilní fáze pro HPFC a kolonovou chromatografií je uvedeno v objemových procentech. Čistota látek k biologickému testování byla ověřena pomocí HPLC a byla větší než 95 %.

Tabulka 3: Přehled sloučenin připravených v následujících příkladech

.....ŘSiS.....			SywmlÁký Mms
1	k	Ir & Άί	4 AfiiMrosyliM A pyfidigTjMJJpy!:;>by
		RSA·; sVSřblt Íýl'As/3...... *····<·—· S-í<: Q··!	pyrídssj J pyržmMsn
	k	' t .·> 7 TM M A_:K'A <	A 4lmsšo<· ríbofi
4	Id	»3 M- * A··.......- Ml M 3..J Μ M	MjsMhylAf^ pyridsspj ^!:4.Sjpyryísky2 3 M jpýrimífe
5	k	MM říM·. .'i;:·. A <·;<< ....... „ AI M ^:<J	. . ,'T
6	1ř	...... ² _::<i ^: i	yy-i V í43>F^mHX^ ~<Opy AnMfe
	k	^r < Mí·. f“\| A J ^-A!	pwdoP M / 4,5]pýrrólíH 2 3 A) pyr ig)iíd h

- 11 CZ 2018 - 121 A3

- 12CZ 2018 - 121 A3

Obecný postup pro Stilleho reakci (Postup A):

Benzoylovaný nukleosid 13 nebo 14, příslušný tributylstannan (1,5 ekv.) a PdCbíPPhyh (0,1 ekv.) byly rozpuštěny v DMF a reakční směs byla zahřívána na 100 °C po dobu 4-24 hodin. Po zreagování bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová směs byla přečištěna pomocí HPFC (petrolether/ethyl acetát 0 —> 100). Produkt byl získán jako narůžovělá pevná látka.

Příklad 1 (Z)-3-Ethoxy-3-hydroxy-2-(3-nitropyridin-2-yl)acrylonitril (5A) a ethyl 2-kyano-2-(3nitropyridin-2-yl)acetát (5B)

Sloučenina 5 byla připravena podle modifikovaných podmínek známých z literatury (Finch, N. a kol. J. Org. Chem. 1972, 37, 51-53). K roztoku terc>butanolátu draselného (4,4 g, 38,0 mmol) v terc-butyl alkoholu (40 ml) byl přidán ethyl kyanoacetát (4 ml, 37,8 mmol). K výsledné suspenzi byl přidán horký roztok 2-chlor-3-nitropyridinu 3 (3 g, 18,9 mmol) v terc-butanolu (40 ml) a směs byla dále zahřívána na 95 °C po dobu 6 hodin. Po ochlazení na teplotu místnosti bylo pH roztoku upraveno na hodnotu 1 pomocí 1M HC1 a směs byla extrahována ethyl acetátem. Organická vrstva byla vysušena NazSO4 a rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku. Surová reakční směs byla čištěna pomocí HPFC (petrolether/ethyl acetát 0 —> 60 %), byla získána směs tautomerů 5 A a B (3,8 g, 87 %) ve formě červených krystalů.

Ry=0,52 (S1O2; petrolether/ethyl acetát 3:1), Hlavní produkt 5A: II NMR (500,0 MHz, DMSO

- 13 CZ 2018 - 121 A3 d₆): 1,25 (t, 3H, J_vic = 7,1, CH3CH2O); 4,20 (q, 2H, J_vic = 7,1, CH3CH2O); 7,02 (dd, 1H, J₅,₄ = 7,8, j_5>6 = 6,1, H-5); 8,37 (dd, 1H, J₆,₅ = 6,1, J₆,4 = 1,6, H-6); 8,45 (dd, 1H, J₄,₅ = 7,8, J₄,₆ = 1,6, H-4); 14,47 (bs, 1H, OH); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO4): 14,56 (CH3CH2O); 60,34 (CH3CH2O); 61,20 (C-CN); 112,43 (CH-5); 116,48 (CN); 138,97 (CH-4); 140,19 (C-3); 142,24 (CH-6); 146,40 (C-2); 168,40 (OCOEt).

Vedlejší produkt 5B: II NMR (500,0 MHz, DMSO-ífc): 1,19 (t, 3H, J_vic = 7,1, CH3CH2O); 4,23 (q, 2H, J_vic = 7,1, CH3CH2O); 6,39 (bs, 1H, CHCN); 7,86 (bdd, 1H, J₅,₄ = 7,9, J₅,₆ = 4,2, H-5); 8,68 (bd, 1H, J₄,₅ = 7,9, H-4); 8,98 (dd, 1H, J₆,₅ = 4,2, H-6); 14,47 (bs, 1H, OH); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífc): 13,92 (CH3CH2O); 45,15 (CHCN); 66,34 (CH3CH2O); 114,79 (CN); 126,10 (CH-5); 134,70 (CH-4); 144,79 (C-2); 154,00 (CH-6); 163,78 (OCOEt); C-3 nenalezen. HR-ESIMS: nalezeno: 236,0672 (100, [M + H]⁺, vypočteno pro CioHio0₄N3⁺: 236,0671).

Příklad 2 (Z)-3-Ethoxy-3-hydroxy-2-(3-nitropyridin-4-yl)akrylonitril (6)

Sloučenina 6 byla připravena stejnou reakcí jako 5, z navážky 4-chlor-3-nitropyridinu 4 (500 mg, 3,15 mmol). Surová reakční směs byla čištěna pomocí HPFC (petrolether/ethyl acetát 0 —> 90 %) a byl získán produkt 6 (705 mg, 95 %) ve formě oranžové pěny.

Ry =0,21 (SiO₂; ethyl acetát); II NMR (500,0 MHz, DMSO-ífc): 1,18 (t, 3H, 7_vic = 7,1, CH3CH2O); 4,05 (q, 2H, 7_vic= 7,1, CH3CH2O); 7,60 (bm, 1H, H-5); 7,89 (dd, 1H, J₆,₅ = 7,1, J₆,₂ =

1.1, H-6); 8,69 (d, 1H, Λ.6 = 1,1, H-2); 13,31 (bs, 1H, OH); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífc): 14,65 (CH3CH2O); 59,60 (CH3CH2O); 70,30 (b-CN); 117,89 (CH-5); 119,41 (CN); 136,57 (CH6); 137,03 (C-3); 138,61 (CH-2); 145,58 (C-4); 165,14 (OCOEt); HR-ESI-

MS: nalezeno: 236,0664 (100, [M+H]⁺ vypočteno pro CioHio0₄N3⁺: 236,0665); HR-ESI-MS: nalezeno: 258,0484 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro CioHgO^Na⁴: 258,0485).

Příklad 3

Ethyl 2-amino-17/-pyrrolo|3,2-b|pyridin-3-l<arboxylát (7)

Sloučenina 7 byla připravena podle popsaného postupu (Reader, J. C. a kol. J. Med. Chem. 2011, 54, 8328-8342). Sloučenina 5 (4,3 g, 18,3 mmol) v AcOH (50 ml) byla pod argonem zahřívaná na 95 °C. Byl přidán práškový zinek (5,9 g, 91,5 mmol) a reakční směs byla dále zahřívána na 95 °C po dobu 75 min. Po ochlazení na teplotu místnosti byl nerozpuštěný materiál odfiltrován přes firitu a promyt AcOH. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a pH reakční směsi bylo upraveno pomocí NaHCOs na 7, přičemž vznikla světlehnědá sraženina, která po filtraci, promytí vodou a vysušení poskytla 7 (3,5 g, 94 %) jako nahnědlou pevnou látku.

Ry = 0,32 (SiO₂; ethyl acetát/MeOH 1:1); II NMR (500,0 MHz, DMSO-ífc,): 1,27 (t, 3H, J_vic =

7.1, CH3CH2O); 4,23 (q, 2H, J_vic = 7,1, CH3CH2O); 6,83 (dd, 1H, J_vic = 7,8, J₆.s = 4,9, H-6); 7,06 (bs, 2H, NH₂); 7,35 (dd, 1H, J₇,e = 7,8, J₇,₅ = 1,5, H-7); 8,07 (dd, 1H, J₅,₆ = 4,9, J5.7 = 1,5, H-5); 10,80 (bs, 1H, NH); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífc): 15,13 (CH3CH2O); 58,27 (CH3CH2O); 84,32 (C-3); 114,54 (CH-6); 115,43 (CH-7); 126,57 (C-7a); 141,62 (CH-5); 145,49 (C-3a); 155,79 (C-2); 165,62 (COOEt); HR-ESI-MS: nalezeno: 206,0924 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro CioHi20₂N3⁺ : 206,0924).

Příklad 4

Ethyl 2-ammo-1 H-pyrrolo[2,3-c]pyridin-3-karboxyIát (8)

Sloučenina 8 byla připravena stejnou reakcí jako 7, z navážky 6 (2,9 g, 12,3 mmol). Po odfiltrování hnědé tuhé látky byl získán produkt 8 (1.8 g, 73%).

- 14CZ 2018 - 121 A3

Ry = 0,26 (SiO₂; ethyl acetát/MeOH 1:1); II NMR(500,0 MHz, DMSO-ífc): 1,32 (t, 3H, ./_VIC = CH₃CH₂O); 4,23 (q, 2H, 7_vic = 7,1, CH₃CH₂O); 7,04 (s, 2H, NH₂); 7,42 (dd, 1H, 7₄,₅ = 5,2, J₄,₇ = 1,0, H-4); 8,03 (d, 1H, J₅,₄ = 5,2, H-5); 8,30 (t, 1H, J₄,₇ = = 1,0, H-7), 10,92 (bs, 1H, NH);

¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífc): 14,88 (CH3CH2O); 58,65 (CH3CH2O); 83,91 (C-3); 112,71 (CH-4); 130,44 (C-7a); 130,90 (CH-7); 132,78 (C-3a); 140,65 (CH-5); 155,01 (C-2); 165,67 (COOEt); HR-ESI-MS: nalezeno: 206,0922 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro CioHi20₂N₃ ⁺: 206,0924).

Příklad 5

3.9- Dihydro-4H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin-4-on (9)

Sloučenina 9 byla připravena podle popsaného postupu (Reader, J. C. a kol. ./. Med. Chem. 2011, 54, 8328-8342). Směs 7 (3,2 g, 15,6 mmol) a mravenčanu amonného (1,1 g, 17,5 mmol) byla zahřívána ve formamidu (25 ml, 624 mmol) na teplotu 170 °C po dobu 16 h. Po ochlazení na teplotu místnosti bylo pH reakční směsi upraveno na hodnotu 1 za pomoci 1 M HC1 a nerozpustný podíl byl ze suspenze odfiltrován. Hodnota pH filtrátu byla následně upravena na 7 pomocí nasyceného roztoku NaHCO₃. Výsledná sraženina byla odfiltrována, promyta vodou a vysušena, čímž byla získána sloučenina 9 (2,5 g, 86 %) ve formě hnědého prášku.

Ry= 0,67 (SiO₂; ethyl acetát/MeOH 1:1); II NMR (500,0 MHz, DMSO-ífc,): 7,31 (dd, 1H, J₇,₈ =

8.2, J₇,₆ = 4,7, H-7); 7,83 (dd, 1H, = 8,2, J₈,₆= 1,5, H-8); 8,18 (s, 1H, H-2); 8,47 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,7, 7₆,8= 1,5, H-6); 12,27, 12,39 (2 x bs, 2 x 1H, NH-3,9); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífc): 99,94 (C-4a); 119,07 (CH-8); 119,31 (CH-7); 129,26 (C-8a); 141,10 (C-4b); 144,11 (CH-6); 149,37 (CH-2); 155,30 (C-9a); 157,58 (C-4); HR-ESI-MS: nalezeno: 187,0612 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro C9II7ON/ : 187,0614).

Příklad 6

3.9- Dihydro-4H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin-4-on (10)

Sloučenina 10 byla připravena stejnou reakcí jako 9, z navážky 8 (2,1 g, 10,2 mmol). Po odfiltrování byla získána sloučenina 10 (1,5 g, 79%) ve formě hnědého prášku.

Ry = 0,69 (SiO₂; ethyl acetát /MeOH 1:1); II NMR (400,0 MHz, DMSO-ífc): 7,89 (d, 1H, J₅,₆ =

5.2, H-5); 8,26 (s, 1H, H-2); 8,38 (d, 1H, J₆,₅ = 5,2, H-6); 8,83 (s, 1H, H-8); 12,44, 12,58 (2 x s, 2 x 1H, NH-3,9); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífc): 99,62 (C-4a); 115,08 (CH-5); 127,64 (C-4b); 132,35 (C-8a); 134,39 (CH-8); 140,66 (CH-6); 150,19 (CH-2); 155,41 (C-9a); 158,54 (C-4); HRESI-MS: nalezeno: 187,0613 (100, [M + H]⁺, vypočteno pro C9II7ON/: 187,0614).

Příklad 7

4-Chlor-9H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (11)

POC1₃ (0,2 ml, 2,4 mmol) byl dodán do míchající se směsi 9 (80 mg, 0,4 mmol), benzyltriethylamonium chloridu (196 mg, 0,8 mmol) a W-dinicthylanilinLi (62 pL, 0,5 mmol) v MeCN (1 ml). Reakční směs byla míchána po dobu 1 h při teplotě 90 °C. Rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku, byla přidána studená voda a pH bylo upraveno na hodnotu 4-5 pomocí 35% vodného roztoku amoniaku. Reakční směs byla extrahována ethyl acetátem, organická vrstva byla vysušena Na₂SO₄ a rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku. K zůstatku byl přidán petrolether a míchán přes noc (na odstranění zbytku W-diinethylanilinu). Suspenze byla odfiltrována a promyta petroletherem, čímž byl získán produkt 11 (57 mg, 65 %) jako nažloutlá tuhá látka.

- 15 CZ 2018 - 121 A3

Ry = 0,42 (SiO₂; ethyl acetát); II NMR (500,0 MHz, DMSO-zfc): 7,61 (dd, 1H, J₇.₈ = 8,3, ,/₇.₆ = 4,7, H-7); 8,04 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,3, J₈,₆ = 1,4, H-8); 8,69 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,7, J₆,₈ = 1,4, H-6); 8,87 (s, 1H, H-2); 12,97 (s, 1H, NH); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 110,29 (C-4a); 120,08 (CH8); 122,97 (CH-7); 132,81 (C-8a); 136,88 (C-4b); 144,66 (CH-6); 152,13 (C-4); 155,49 (CH-2); 156,30 (C-9a); HR-ESI-MS: nalezeno: 205,0275 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro C9H6N4C1⁺: 205,0275).

Příklad 8

4-Chlor-9-pyrido [4’,3 ’:4,5]pyrrolo[2,3-d]pyrimidin (12)

Tricyklická báze 12 byla připravena stejnou reakcí jako 11, z navážky 10 (572 mg, 3,1 mmol). Po upravení pH pomocí 35% vodného roztoku amoniaku na hodnotu 4-5 bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna pomocí HPFC (CHCh/MeOH 0 —> 10 %). Byl získán produkt 12 (330 mg, 52 %) ve formě žluté tuhé látky.

Ry = 0,17 (SiO₂; ethyl acetát); II NMR (500,0 MHz, DMSO-zfc): 8,18 (dd, 1H, J₅,₆ = 5,3, J₅,₈ =

1,2, H-5); 8,60 (d, 1H, J₆,₅ = 5,3, H-6); 8,92 (s, 1H, H-2); 9,03 (d, 1H, J₈,₅ = 1.2, H-8); 13,15 (s, 1H, NH); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 110,17 (C-4a); 116,35 (CH-5); 123,62 (C-4b); 134,60 (CH-8); 135,44 (C-8a); 141,49 (CH-6); 153,93 (C-4); 156,44 (CH-2); 156,54 (C-9a); HRESI-MS: nalezeno: 205,0274 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro C9H6N4CF: 205,0275).

Příklad 9

4-Chlor-9-(2,3.5-tri-O-benzoyl-/FD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2’,3’:4,5lpyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (13)

K roztoku tricyklické báze 11 (234 mg, 1,1 mmol) v MeCN (20 ml) byl přidán BSA (281 μΐ, 1,1 mmol). Reakční směs byla zahřívána na 60 °C po dobu 30 minut, pak byly přidány TMSOTf (397 μΐ, 2,2 mmol) a l-O-acetyl-2,3,5-tri-O-benzoyl-/FD-ribofuranosa (1,1 g, 2,2 mmol) a směs byla dále zahřívána na 60 °C po dalších 16 hodin. Po ochlazení na teplotu místnosti byla směs extrahována dichlormethanem, organická vrstva byla promyta NaHCO₃ a poté vysušena Na₂SC>4 a rozpouštědla byla odpařena za sníženého tlaku. Surová reakční směs byla čištěna pomocí HPFC (petrolether/ethyl acetát 0 —> 45 %). Požadovaný nukleosid 13 (535 mg, 75 %) byl získán ve formě bílé stéblovité pěny.

Ry = 0,37 (SiO₂; petrolether/ethyl acetát 3:2); II NMR (400,0 MHz, DMSO-zfc): 4,73 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅-b,4· = 4,4, H-5’b); 4,87 (dd, 1H, J_gem = 12,3, Aa,4' = 3,2, H-5’a); 4,93 (ddd, 1H, J₄',₃' = 6,6, J₄’,s = 4,4, 3,2, H-4’); 6,37 (t, 1H, A',2· = A;₄· = 6,5, H-3 ); 6,55 (dd, 1H, Ay?· = 6,5, A.u = 4,6, H-2’); 7,06 (d, 1H, J_r,₂· = 4,6, H-1’); 7,43, 7,51 (2 x m, 6H, H-m-Bz); 7,58 (dd, 1H, J₇,₈ = 8,5, Ji,₆ = 4,7, H-7); 7,62, 7,67, 7,68 (3 x m, 3 x 1H, H-p-Bz); 7,83, 7,92, 7,99 (3 x m, 3 x 2H, H-oBz); 8,54 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,5, J₈,₆ = 1,3, H-8); 8,78 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,7, J₆,₈ = 1,3, H-6); 8,87 (s, 1H, H-2); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO- d6): 63,22 (CH2-5’); 70,29 (CH-3’); 72,63 (CH-2’); 79,03 (CH-4’); 86,26 (CH-F); 111,45 (C-4a); 119,92 (CH-8); 123,08 (CH-7); 128,64, 128,81 (C-z-Bz); 128,94, 128,98, 129,01 (CH-m-Bz); 129,36 (C-z-Bz); 129,37, 129,54, 129,66 (CH-o-Bz); 132,85 (C-8a); 133,83, 134,15 (CH-p-Bz); 136,92 (C-4b); 145,75 (CH-6); 152,71 (C-4); 155,31 (CH-2); 155,50 (C-9a); 164,81, 165,00, 165,57 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 649,1486 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro Q5HMO7N4CF: 649,1484); HR-ESI-MS: nalezeno: 671,1306 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro C35H₂5O₇N4ClNa⁺: 671,1304).

Příklad 10

4-Chlor-9-(2,3.5-tri-O-benzoyl-/FD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (14)

- 16CZ 2018 - 121 A3

Nukleosid 14 byl připraven stejnou reakcí jako nukleosid 13, z navážky tricyklické báze 12 (100 mg, 0,5 mmol). Surová reakční směs byla čištěna pomocí sloupcové chromatografie (cyklohexan/ethyl acetát 0 —> 50 %). Požadovaný nukleosid 14 (185 mg, 57 %) byl získán ve formě stéblovité pěny.

Ry = 0,63 (S1O2; petrolether/ethyl acetát 1:2); II NMR (500,0 MHz, DMSO-Jó): 4,74 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'_b,4 = 4,6, H-5'b); 4,85 (dd, 1H, J_gem = 12,3,1₅·_α,4· = 3,2, H-5'a); 4,94 (ddd, 1H, J₄,y = 6,5, J₄',₅' = 4,6, 3,2, H-4'); 6,35 (t, 1H, 1₃·,₂· = J₃’,4· = 6,5, H-3'); 6,58 (dd, 1H, 1₂·,₃· = 6,5, J₂',r = 4,6, H-2’); 7,13 (d, 1H, J_v,₂· = 4,6, Η-Γ); 7,40-7,44, 7,46-7,52 (2 x m, 6H, H-m-Bz); 7,62, 7,66, 7,68 (3 x m, 3 x 1H, H-p-Bz); 7,83-7,86, 7,89-7,92, 7,99-8,02 (3 x m, 3 x 2H, H-o-Bz); 8,27 (dd, 1H, J₅,6 = 5,2, J₅,8 = 0,9, H-5); 8,71 (d, 1H, J₆,₅ = 5,2, H-6); 8,92 (s, 1H, H-2); 9,53 (d, 1H, J₈,₅ = 0,9, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 63,25 (CH₂-5'); 70,33 (CH-3'); 72,61 (CH-2’); 79,17 (CH-4’); 86,41 (CH-Γ); 111,36 (C-4a); 116,34 (CH-5); 124,05 (C-4b); 128,62, 128,79 (C-z-Bz); 128,90, 128,97 (CH-m-Bz); 129,28 (C-z-Bz); 129,30, 129,51, 129,62 (CH-o-Bz); 133,75, 134,10 (CH-p-Bz); 134,25 (C-8a); 135,16 (CH-8); 142,91 (CH-6); 154,43 (C-4); 155,52 (C-9a); 156,24 (CH-2); 164,79, 165,96, 165,52 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 649,1486 (100, [M+H]⁺vypočteno pro C35H26O7N4CF: 649,1484).

Příklad 11

4-Methoxy-9-(je-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (la)

Do roztoku nukleosidu 13 (135 mg, 0,2 mmol) ve směsi MeOH (14 ml) a DMF (14 ml) byl přidán methoxid sodný (190 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 0,84 mmol). Reakční směs byla míchána přes noc při teplotě 90 °C, poté bylo rozpouštědlo odpařeno a surová reakční směs byla krystalizována ze směsi DMF/aceton. Požadovaný nukleosid la (41 mg, 65%) byl získán ve formě bílé tuhé látky.

Ry = 0,62 (SiO₂; CHCh/MeOH 5:1); [a]_D ²⁰ = -27,0 (c = 0,204 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-rfe): 3,68 (ddd, 1H, J_gem = 12,0, J₅'_b,oH = 5,4, J₅'_b,₄· = 3,6, H-5'a); 3,71 (ddd, 1H, J_gem = 12,0, J₅'_a,oH = 5,1, J₅'_a,₄' = 3,3, H-5'b); 3,99 (ddd, 1H, J₄',₅' = 3,6, 3,3, J₄',₃· = 2,5, H-4’); 4,19 (s, 3H, CH₃O); 4,20 (ddd, 1H, J_y,₂· = 5,4, /3:0/, = 4,7, Jy,₄· = 2,5, H-3’); 4,69 (ddd, 1H, J₂',r = 7,5, J₂',oh =

6,2, J₂',₃' = 5,4, H-2’); 5,24 (bd, 1H, J_0H,₃· = 4,7, OH-3’); 5,29 (bdd, 1H, Joh.s· = 5,4, 5,1, OH-5’); 5,31 (bd, 1H, J_0H,₂' = 6,2, OH-2’); 6,49 (d, 1H, Jr,₂' = 7,5, H-F); 7,48 (dd, 1H, J₇,₈ = 8,4, J₇,₆ = 4,7, H-7); 8,48 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,4, J₈,₆ = 1,4, H-8); 8,61 (dd, 1H, J₆,₇= 4,7, J₆,₈ = 1,4, H-6); 8,74 (s, 1H, H-2); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 54,38 (CH₃O); 61,80 (CH₂-5’); 70,37 (CH-3’); 71,18 (CH-2’); 85,85 (CH-4’); 86,98 (CH-Γ); 98,62 (C-4a); 120,52 (CH-8); 120,84 (CH-7); 130,61 (C-8a); 138,39 (C-4b); 144,55 (CH-6); 155,80 (CH-2); 157,10 (C-9a); 164,01 (C-4); HRESI-MS: nalezeno: 333,1194 (100, [M + H]⁺, vypočteno pro C15H17O5N4L 333,1193); HR-ESIMS: nalezeno: 355,1013 (100, [M + Na]⁺ vypočteno pro Cidli/F^Nah 355,1012).

Příklad 12

4-Mclhoxy-9-(//'-D-ribol'uranosyl)-9//-pyrido|4',3':4,5|pyrrolo|2,3-í/|pyriinidin (2a)

Do roztoku nukleosidu 14 (210 mg, 0,32 mmol) v methanolu (21 ml) byl přidán methoxid sodný (296 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 1,28 mmol). Reakční směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti, poté bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografií (C-18, voda/MeOH 0 —> 100 %). Požadovaný produkt 2a (42 mg, 42 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,57 (SiO₂; CHCh/MeOH 5:1); [a]_D ²⁰ = -54,9 (c = 0,122 v DMSO); II NMR (400,0 MHz, DMSO-rfe): 3,70 (ddd, 1H, J_gem = 12,0, J_yb,oH = 5,2, J_5b,,₄· = 3,4, H-5'b); 3,74 (ddd, 1H, J_gem = 12,0, J₅'_b,0H = 5,0, J₅'a,4· = 3,2, H-5'a); 4,02 (ddd, 1H, J₄',₅' = 3,4, 3,2, J₄',₃· = 2,6, H-4’); 4,23 (s, 3H, CH₃O); 4,23 (ddd, 1H, J_y,₂· = 5,7, J₃',_0H = 4,6, J_y,₄· = 2,6, H-3’); 4,73 (ddd, 1H, J₂',_r = 1,1, J₂',_0H =

- 17 CZ 2018 - 121 A3

6,5, J₂',3' = 5,7, H-2'); 5,26 (d, 1H, J_OH,₃· = 4,6, OH-3'); 5,29 (dd, 1H, J_OH,5· = 5,2, 5,0, OH-5'); 5,33 (bd, 1H, Joh.2· = 6,6, OH-2'); 6,51 (d, 1H, Jr,₂' = 7,6, H-Γ); 7,99 (dd, 1H, J₅,₆ = 5,2, J₅,₈= 1,1, H-5); 8,56 (d, 1H, J₆,₅ = 5,2, H-6); 8,80 (s, 1H, H-2); 9,43 (d, 1H, J₈,₅ = 1,1, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-í/ď): 54,73 (CH₃O); 61,73 (CH₂-5'); 70,29 (CH-3'); 71,49 (CH-2’); 85,96 (CH-4'); 86.99 (CH-Γ); 98,06 (C-4a); 116,26 (CH-5); 124,91 (C-4b); 132,87 (C-8a); 135,95 (CH8); 141,71 (CH-6); 156,88 (CH-2); 157,07 (C-9a); 165,02 (C-4); HR-ESI-MS: nalezeno: 333,1194 (100, [M+H]⁺ vypočteno pro CisHnOsNC: 333,1 193).

Přiklad 13

4-(Mcthylsullanyl)-9-(2,3,5-tri-O-bcnzoyl-/>-l)-ribolLiranosyl)-97/-pyrido|2’,3':4,5| pyrrolo[2,3í/]pyrimidin (15b)

Do roztoku nukleosidu 13 (350 mg, 0,54 mmol) v DMF (80 ml) byl jednorázově přidán thiomethoxid sodný (113 mg, 1,62 mmol). Reakční směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti, poté bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografií (petrolether/ethyl acetát 0 —> 80 %). Chráněný nukleosid 15b (186 mg, 52 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,77 (SiO₂; petrolether/ethyl acetát 1:1); II NMR (500,0 MHz, DMSO-zfc): 2,71 (s, 3H, SCH₃); 4,71 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'_b,₄· = 4,3, H-5’b); 4,83 (dd, 1H, J_gem = 12,3, Λν = 3,2, H-5'a); 4,89 (ddd, 1H, J₄-,₃· = 6,5, J₄’,₅· = 4,3, 3,2,H-4’); 6,36 (t, 1H, J₃.,₂.= J₃.₄.= 6,5, H-3); 6,58(dd, 1H, J₂._r3. = 6,5, J₂',_r = 4,7, H-2’); 7,00 (d, 1H, J_r,₂· = 4,7, H-Γ); 7,41 (m, 2H, H-m-Bz); 7,46 (dd, 1H, J₇,₈ = 8,4, J₇,₆ = 4,7, H-7); 7,48-7,52 (m, 4H, H-m-Bz); 7,61, 7,67, 7,68 (3 x m, 3 x 1H, H-p-Bz); 7,83,7,93, 8,00 (3 x m, 3 x 2H, H-o-Bz); 8,43 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,4, J₈,₆ = 1,4, H-8); 8,70 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,7, J₆,₈ = 1,4, H-6); 8,83 (s, 1H, H-2); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 11,79 (SCH3); 63,27 (CH2-5'); 70,38 (CH-3’); 72,47 (CH-2’); 78,86 (CH-4’); 86,06 (CH-Γ); 109,79 (C-4a); 119,12 (CH-8); 121,47 (CH-7); 128,60, 128,82 (C-z-Bz); 128,89, 128,93,128,96 (CH-m-Bz); 129,35 (CH-o-Bz); 129,38 (C-z-Bz); 129,48, 129,61 (CH-o-Bz); 131,60 (C-8a); 133,76, 134,09 (CH-p-Bz); 138,54 (C-4b); 145,04 (CH-6); 153,18 (C- 9a); 154,89 (CH-2); 164,20 (C-4); 164.76, 164,98, 165,56 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 661,1753 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro C36H₂9O?N4S⁺: 661,1751); HR-ESI-MS: nalezeno: 683,1571 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro C₃6H₂₈O₇N₄NaS⁺: 683,1570).

Příklad 14

4-(Mcthylsull'anyl)-9-(/>-D-ribol'uranosyl)-97/-pyrido|2',3':4,5|pyrrolo|2,3-í/|pyriinidin (1b)

Chráněný nukleosid 15b (180 mg, 0,3 mmol) byl rozpuštěn ve směsi MeOH (6 ml) a DMF (10 ml) a byl dodán methoxid sodný (14 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 0,06 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě 90 °C po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a produkt byl krystalizován z methanolu. Nukleosid 1b (79 mg, 76%) byl získán jako bílý prášek.

Ry = 0,62 (SiO₂; CHCl₃/MeOH 5:1); [a]_D ²⁰ = -26,7 (c = 0,135 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-rfe): 2,72 (s, 3H, SCH3); 3,69 (ddd, 1H, Jgem = 11,9, J5'b,oH = 5,3, J5'b,4' = 3,5, H-5'b); 3,73 (ddd, 1H, Jgem = 11,9, J5'a,oH= 5,1, J5'a,4'= 3,3, H-5'a); 4,00 (ddd, 1H, J4'5· = 3,5, 3,3, J4',3' = 2,7, H4’); 4,22 (ddd, 1H, J3',2'= 5,6, J3',oh = 4,6, J3',4· = 2,7, H-3’); 4,70 (ddd, 1H, J2',r = 7,5, J2',oh= 6,3, J2',3' = 5,6, H-2’); 5,21 (d, 1H, JOh,3'= 4,6, OH-3’); 5,25 (dd, 1H, J0H,5' = 5,3, 5,1, OH-5’); 5,29 (d, 1H,./ on,2· = 6,3, OH-2’); 6,49 (d, 1H, Jr,2· = 7,5, H-Γ); 7,52 (dd, 1H, J7,8 = 8,4, J7,6 = 4,7, H-7); 8,51 (dd, 1H, J8,7 = 8,4, J8,6 = 1,4, H-8); 8,69 (dd, 1H, J6,7 = 4,7, J6,8 = 1,4, H-6); 8,91 (s, 1H, H2); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 11,75 (SCH3); 61,74 (CH₂-5’); 70,31 (CH-3’); 71,18 (CH2’); 85,85 (CH-4’); 86,87 (CH-Γ); 109,29 (C-4a); 120,56 (CH-8); 121,26 (CH-7); 131,12 (C-8a); 138,78 (C-4b); 144.56 (CH-6); 153,75 (C-9a); 154,88 (CH-2); 163,76 (C-4); HR-ESI-MS: nalezeno: 349,0965 (100, [M+H]⁺vypočteno pro C15H17O4N4S⁴·: 349,0965).

- 18 CZ 2018 - 121 A3

Příklad 15

4-(Methylsulfanyl)-9-(je-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin (2b)

Do suspense nukleosidu 14 (221 mg, 0,34 mmol) v methanolu (55 ml) byl jednorázově přidán thiomethoxid sodný (36 mg, 0,51 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografií (IPO/McOII 0 —> 100%). Nukleosid 2b (56 mg, 47%) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,57 (SiO₂; CHCh/MeOH 5:1); [a]_D ²⁰ = -64,7 (c = 0,221 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-í/e): 2,82 (s, 3H, SCH3); 3,71 (ddd. 1H, Jgem = 11,9, J^.oh = 5,2, J5'b,4' = 3,5, H- 5’b); 3,74 (ddd, 1H, Jgem = 11,9, J5'a,oH - 5,2, J5'a,4'= 3,2, H-5'a); 4,03 (ddd, 1H, J4',5· = 3,5, 3,2, J4',3· = 2,7, H4’); 4,24 (ddd, 1H, J3’,2’= 5,7, J3'0H = 4,6, J3’,4· = 2,7, H-3 ); 4,72 (ddd, 1H, J2',r = 7,6, J2’Oh = 6,4, J2',3' = 5,7, H-2'); 5,23 (d, 1H, JOH,3· = 4,6, OH-3’); 5,26 (t, 1H, Joh.s· = 5,2, OH-5'); 5,29 (bd, 1H, Joh,2' = 6,4, OH-2'); 6,53 (d, 1H, Jr,2· = 7,6, Η-Γ); 8,05 (dd, 1H, J5,6 = 5,2, J5,8 = 1,1, H-5); 8,63 (d, 1H, J6,5 = 5,2, H-6); 8,96 (s, 1H, H-2); 9,49 (d, 1H, J8,5 = 1,1, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-rfe): 11,89 (SCH3); 61,65 (CH₂-5'); 70,21 (CH-3’); 71,42 (CH-2'); 85,98 (CH-4'); 86,85 (CH-Γ); 108,84 (C-4a); 116,31 (CH-5); 124,92 (C-4b); 132,93 (C-8a); 136,08 (CH-8); 141,86 (CH-6); 153,85 (C-9a); 155,72 (CH-2); 164,97 (C-4); HR-ESI- MS: nalezeno: 349,0965 (100, [M+H]⁺vypočteno pro Ci5Hi7C>4N4S⁺: 349,0965).

Příklad 16

4-Amino-9-(je-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (1c)

K roztoku nukleosidu 13 (300 mg, 0,46 mmol) ve vysušeném 1,4-dioxanu (2,2 ml) byl přidán 35% vodný roztok amoniaku (6,5 ml). Poté byla reakční směs zahřívána v tlakové zkumavce 24 hodin na teplotu 120 °C a po následném odpaření rozpouštědel byla surová reakční směs čištěna sloupcovou chromatografií (H₂O/MeOH 0 —> 100 %). Nukleosid 1c (77 mg, 53 %) byl získán ve formě tmavě žlutého prášku.

Ry= 0,13 (SiO₂; CHCh/MeOH 10:1); [a]_D ²⁰ = -20,7 (c = 0,140 v methanolu); II NMR (500,0 MHz, DMSO-t/e): 3,65 (ddd, 1H, J_gem = 12,0, J₅'b,oH = 6,4, J_5b>,4- = 3.5, H-5'b); 3.70 (ddd, 1H, J_gem= 12.0, J₅'a,0H = 4,8, J₅'a,₄· = 3,2, H-5'a); 4,02 (ddd, 1H, J₄',₅· = 3,5, 3,2, J₄',₃· = 2,9, H-4'); 4,19 (ddd, 1H, 75,2 = 5,2, J₃',₂· = 4,5, J₃',₄'= 2,9, H-3’); 4,72 (ddd, 1H, 7_2U = 7,5, J₂',_0H = 6,6, J₂',₃· = 5,2, H-2’); 5,20 (d, 1H, Joh,₃'= 4,5, OH-3’); 5,28 (bd, 1H, Joh,₂'= 6,6, OH-2’); 5,44 (dd, 1H, Joh,5' =

6,4, 4,8, OH-5’); 6,35 (d, 1H, J_v,₂· = 7,5, Η-Γ); 6,84 (bs, 1H, NH_aH_b); 7,40 (dd, 1H, J₇,₈ = 8,3, J₇,₆= 4,8, H-7); 7,98 (bs, 1H, NH_aH_b); 8,32 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,3, J₈,₆ = 1,3, H-8); 8,38 (s, 1H, H-2); 8,54 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,8, J₆,₈ = 1,3, H-6); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífc): 62,00 (CH₂-5'); 70,58 (CH-3’); 71,29 (CH-2’); 85,86 (CH-4’); 86,93 (CH-Γ); 94,99 (C-4a); 119,50 (CH-8); 119,55 (CH-7); 130,09 (C-8a); 140,38 (C-4b); 143,52 (CH-6); 155,81 (C-9a); 156,64 (CH-2); 158,26 (C-4); HR-ESI-MS: nalezeno: 318,1197 (100, [M+H]⁺ vypočteno pro C14H16O4N5³·: 318,1196); HR-ESI-MS: nalezeno: 340,1016 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro Ci4Hi5O4N5Na⁺: 340,1016).

Příklad 17

4-Amino-9-(je-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (2c)

Sloučenina 2c byla připravena stejným postupem jako 1c, z navážky chráněného nukleosidu 14 (300 mg, 0,46 mmol). Po odpaření rozpouštědla byl produkt vykrystalizován z methanolu. Nukleosid 2c (75 mg, 51%) byl získán ve formě bílého prášku.

- 19CZ 2018 - 121 A3

Ry = 0,35 (C-18; MeOH/H₂O 1:1); [a]_D ²⁰ = -58,8 (c = 0,265 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-rfe): 3,67 (ddd, 1H, J_gem = 11,9, J₅'b,oH = 5,9, J₅'b,4'= 3,5, H-5’b); 3,72 (ddd, 1H, J_gem =

11,9, J₅'a,0H = 4,8, J₅'a,4'= 3,1, H-5'a); 3,98 (ddd, 1H, J₄',₅' = 3,5, 3,1, J₄',₃· = 2,7, H-4’); 4,20 (ddd, 1H, J₃',₂' = 5,8, J₃',oh = 4,6, J₃',4' = 2,7, H-3’); 4,72 (ddd, 1H, h',r = 7,5, J₂',oh = 6,8, J₂',₃· = 5,7, H2'); 5,17 (d, 1H, Joh,₃’= 4,6, OH-3’); 5,22 (bd, 1H, J oh.₂’= 6,8, OH-2’); 5,37 (dd, 1H, J_0H,₅' = 5,9,4,8, OH-5'); 6,42 (d, 1H, Jr,₂'= 7,5, Η-Γ); 7,64 (bs, 2H, NH₂); 8,36 (dd, 1H, J₅,₆ = 5,3, J_s,₈=1,1, H-5); 8,38 (s, 1H, H-2); 8,45 (d, 1H, J_6rS = 5,3, H-6); 9,22 (d, 1H, J₈,_s = 1,1, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 61,85 (CH₂-5'); 70,33 (CH-3’); 71,25 (CH-2’); 85,76 (CH-4’); 86,85 (CH-Γ); 94,54 (C-4a); 115,40 (CH-5); 126.10 (C-4b); 132,28 (C-8a); 134,54 (CH-8); 140,91 (CH-6); 156,17 (C-9a); 156,91 (CH-2); 158,81 (C-4); HR-ESI-MS: nalezeno: 318,1197 (100, [M+H]⁺ vypočteno pro Ci4Hi6C>4N5⁺: 318,1196); HR-ESI-MS: nalezeno: 340,1016 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro (’ΜΙΜΕΝ^ΝαΓ 340,1016).

Příklad 18

4-Methyl-9-(2,3,5-tri-O-benzoyl-/?-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (15d) (Me)sAl (1,25 ml, 2 mokl·¹ v toluenu) a Pd(PPh₃)4 (97 mg, 0,08 mmol) byly přidány k roztoku nukleosidu 13 (542 mg, 0,84 mmol) v THF (25 ml); reakční směs byla poté míchána přes noc při 70 °C. Rozpouštědlo bylo následně odpařeno a surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografií (H₂O/MeOH 0 —> 100 %). Benzoylovaný nukleosid 15d (362 mg, 69 %) byl získán ve formě nažlouté pěny.

Ry = 0,58 (SiO₂; petrolether/ethyl acetát 1:3); II NMR (500,0 MHz, DMSO-á): 3,06 (s, 3H, CH₃); 4,70 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'b,4'= 4,3, H-5'b); 4,84 (dd, 1H, J_gem = 12,3, = 3,2, H-5'a);

4,90 (ddd, 1H, J₄',₃'= 6,6, J₄',₅' = 4,3, 3,2, H-4’); 6,37 (t, 1H, J₃',₂· = J₃',₄· = 6,6, H-3’); 6,60 (dd, 1H, J₂.₃. = 6,6, J₂',_r = 4,6, H-2’); 7,01 (d, 1H, J_r,₂· = 4,6, Η-Γ); 7,41 (m, 2H, H-m-Bz); 7,47-7,52 (m, 5H, H-7, H-m-Bz); 7,61, 7,67, 7,68 (3 x m, 3 x 1H, H-p-Bz); 7,83, 7,93, 8,00 (3 x m, 3 x 2H, Ho-Bz); 8,45 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,5, J₈,₆ = 1,4, H-8); 8,70 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,7, J₆,₈= 1,4, H-6); 8,87 (s, 1H, H-2); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 22,15 (CH3); 63,24 (CH2- 5’); 70,37 (CH-3’); 72,44 (CH-2’); 78,80 (CH-4’); 85,98 (CH-Γ); 111,78 (C-4a); 119,31 (CH- 8); 121,95 (CH-7); 128,63, 128,84 (C-z-Bz); 128,94, 128,97, 129,01 (CH-m-Bz); 129,40, 129,52, 129,66 (C-z-Bz, CH-o-Bz); 132,29 (C-8a); 133,80, 134,14 (CH-p-Bz); 139,17 (C-4b); 144,95 (CH-6); 154,70 (C-9a); 155,33 (CH-2); 162,34 (C-4); 164,81, 165,03, 165,59 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 629,2032 (100, [M+H]⁺ vypočteno pro CseH^ChNC: 629,2030); HR-ESI-MS: nalezeno: 651,1851 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro C36H₂8O?N4Na⁺: 651,1850).

Příklad 19

4-Methyl-9-(2,3,5-tri-O-benzoyl-/rD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo[2,3d]pyrimidin (16d)

Nukleosid 16d byl připraven stejným postupem jako 15d, z navážky chlorovaného intermediátu 14 (400 mg, 0,62 mmol). Po odpaření rozpouštědel byla surová reakční směs čištěna sloupcovou chromatografií (cyklohexan/ethyl acetát 0 —> 100 %). Chráněný nukleosid 16d (215 mg, 55 %) byl získán ve formě žlutého prášku.

Ry =0,18 (SiO₂; petrolether/ethyl acetát 1:2); II NMR (500,0 MHz, DMSO-zfc): 2,97 (s, 3H, CH₃); 4,73 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'_b,4' = 4,5, H-5'b); 4,83 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'_a,₄' = 3,2, H-5'a); 4,92 (ddd, 1H, J₄’,₃’= 6,5, J₄’,5’ = 4,5, 3,2, H-4’); 6,36 (t, 1H, }₃·₂·=}₃·₄· = 6,5, H-3’); 6,63 (dd, 1H, J₂.₃.= 6,5, J₂',r= 4,7, H-2’); 7,09 (d, 1H, Jr,₂'=4,l, Η-Γ); 7,41, 7,48, 7,50 (3 x m, 3 x 2H, H-znBz); 7,61, 7,66, 7,68 (3 x m, 3 x 1H, H-p-Bz); 7,83, 7,92, 8,01 (3 x m, 3 x 2H, H-o-Bz); 8,20 (dd, 1H, J₅,₆ = 5,2, J_s,₈ = 0,9, H-5); 8,64 (d, 1H, J₆,_s = 5,2, H-6); 8,90 (s, 1H, H-2); 9,45 (d, 1H, J₈,_s = 0,9, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 22,99 (CH₃); 63,29 (CH₂-5’) 70,40 (CH-3’); 72,42

-20CZ 2018 - 121 A3 (CH-2'); 78,89 (CH-4’); 86,12 (CH-Γ); 111,54 (C-4a); 117,15 (CH-5) 125,62 (C-4b); 128,62, 128,83 (C-z-Bz); 128,90, 128,91, 128,99 (CH-m-Bz); 129,34 (C-z-Bz) 129,36, 129,50, 129,64 (CH-o-Bz); 133,74 (CH-p-Bz); 134,04 (C-8a); 134,11 (CH-p-Bz) 134,52 (CH-8); 142,32 (CH-6); 154,65 (C-9a); 156,10 (CH-2); 163,40 (C-4); 164,80, 165,03, 165,58 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 629,2032 (100, [M+H]⁺ vypočteno pro C36H29O7N4⁴: 629,2030); HR-ESI-MS: nalezeno: 651,1850 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro Cv,Il2xO₇N₄Na⁺: 651,1850).

Příklad 20

4-Methyl-9-(/>-l)-ribolLiranosyl)-97/-pyrido|2',3':4,5|pyrrolo|2,3-í/|pyriinidin (Id)

K suspenzi nukleosidů 15d (340 mg, 0,54 mmol) ve směsi MeOH (12 ml) a DMF (10 ml) byl přidán methoxid sodný (37 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 0,16 mmol). Reakční směs byla zahřívána na teplotu 90 °C po dobu 16 hodin, poté bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a produkt byl krystalizován ze směsi MeOH:CHCl₃. Nukleosid Id (149 mg, 87 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,60 (SiO₂; CHCh/MeOH 5:1); [a]_D ²⁰ = -33,3 (c = 0,117 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-rfe): 3,08 (s, 3H, CH3); 3,69 (ddd, 1H, Jgem = 12,0, J^.oh = 5,5, J5-b,4· = 3,5, H-5’b); 3,73 (ddd, 1H, Jgem = 12,0, J^.oh = 5,2, J5'a,4'= 3,2, H-5'a); 4,01 (ddd, 1H, J4',5· = 3,5, J4',3· = 2,7, H-4’); 4,22 (ddd, 1H, J3',2'= 5,7, J3',0H = 4,5, Jy,4· = 2,7, H-3’); 4,72 (ddd, 1H, J2',r = 7,5, J2',oh = 6,3, J2',3· = 5,7, H-2’); 5,21 (d, 1H, J0H,3'= 4,5, OH-3’); 5,26 (dd, 1H, J0H,5' = 5,5, 5,2, OH-5’); 5,28 (bd, 1H, Joh,2' = 6,3, OH-2’); 6,52 (d, 1H, Jr,2' = 7,5, H-f); 7,55 (dd, 1H, J7,8 = 8,4, J7,6 = 4,7, H-7); 8,52 (dd, 1H, J8,7 = 8,4, J8,6 = 1,4, H-8); 8,69 (dd, 1H, J6,7 = 4,7, J6,8 = 1,4, H-6); 8,94 (s, 1H, H-2); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-rfe): 22,06 (CH3); 61,75 (CH₂-5’)_; 70,32 (CH-3’); 71,05 (CH-2’); 85,82 (CH-4’); 86,72 (CH-Γ); 111,25 (C-4a); 120,71 (CH-8); 121,69 (CH-7); 131,77 (C-8a); 139,41 (C4b); 144,43 (CH-6); 155,26 (C-9a); 155,27 (CH-2); 161,91 (C-4); HR-ESI-MS: nalezeno: 317,1244 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro C15H17O4N4⁴: 317,1244); HR-ESI-MS: nalezeno: 339,1064 (100, [M+Na]⁴, vypočteno pro CHIME^Na⁴: 339,1063).

Příklad 21

4-Methyl-9-(/M)-ribol'uranosyl)-97/-pyrido|4',3':4,5|pyrrolo|2,3-<7|pyriniidin (2d)

Do suspense nukleosidů 16d (218 mg, 0,35 mmol) v methanolu (7,7 ml) byl přidán methoxid sodný (24 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 0,11 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, poté bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna pomocí RP-HPFC (C-18, voda/MeOH 0 —> 100 %). Nukleosid 2d (69 mg, 63 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,20 (SiO₂; CHCh/MeOH 10:1); [a]_D ²⁰ = -49,5 (c = 0,196 vDMSO-zfc); II NMR (500,0 MHz, DMSO-z/e).· 2,99 (s, 3H, CH₃); 3,71, 3,74 (2 X ddd, 2 X 1H, J_gem = 11,9, J₅’,oh = 5,1, J₅’,₄· =

3,4, H-5’); 4,02 (td, 1H, J₄',₅· = 3,4, J₄',₃· = 2,7, H-4’); 4,24 (ddd, 1H, J₃',₂'= 5,8, J₃',oh = 4,2, J₃·,₄· = 2,7, H-3’); 4,73 (dt, 1H, ]₂·,ν = 7,5, J₂',₃· = J₂',oh = 5,8, H-2’); 5,24 (d, 1H, Joh.s· = 4,2, OH-3’); 5,26 (t, 1H, ./on,5' = 5,1, OH-5’); 5,29 (d, 1H, Joh,₂' = 5,8, OH-2’); 6,55 (d, 1H, J_r,₂' = 7,5, Η-Γ); 8,21 (dd, 1H, J₅,₆= 5,3, J₅,₈ = 1,1, H-5); 8,61 (d, 1H, J₆,₅ = 5,3, H-6); 8,98 (s, 1H, H-2); 9,48 (d, 1H, J₈,₅ = 1,1, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-rfe): 22,93 (CH₃); 61,67 (CH₂-5’); 70,20 (CH3’); 71,25 (CH-2’); 85,90 (CH-4’); 86,70 (CH-Γ); 110,94 (C-4a); 116,95 (CH-5); 125,75 (C-4b); 133,52 (C-8a); 136,04 (CH-8); 141,65 (CH-6); 155,27 (C-9a); 156,11 (CH-2); 162,92 (C-4); HRESI-MS: nalezeno: 317,1246 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro C15H17O4N4⁴: 317,1244); HR-ESIMS: nalezeno: 339,1063 (100, [M+Na]⁴ vypočteno pro Ci5HieO4N4Na⁴: 339,1063).

Příklad 22

-21 CZ 2018 - 121 A3

4-(Dimethylamino)-9-(2,3,5-tri-č?-benzoyl-_>e-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2',3':4,5] pyrrolo[2,3í/]pyrimidin (15e)

K roztoku nukleosidů 13 (593 mg, 0,91 mmol) ve směsi isopropanol (20 ml) a dichlormethan (7 ml) byl jednorázově přidán dimethylamin (1,36 ml, 2M v THF, 2,73 mmol). Reakční směs byla míchána přes noc při teplotě místnosti, poté bylo rozpouštědlo odpařeno a surová reakční směs byla čištěna sloupcovou chromatografií (petrolether/ethyl acetát 0 —> 50 %). Chráněný nukleosid 15e (495 mg, 82 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,68 (SiO₂; petrolether/ethyl acetát 3:2); II NMR (500,0 MHz, DMSO-Jó): 3,60 (bs, 6H, (CH₃)₂N); 4,70 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J_5M'= 4,4, H-5’b); 4,82 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'_a,4'= 3,2, H5'b); 4,87 (ddd, 1H, }₄·,₃·= 6,6, }₄·₅·= 4,4, 3,2, H-4’); 6,35 (t, 1H, 1₃·,₂· = J₃',₄' = 6,6, H-3 ); 6,55 (dd, 1H, J₂',₃'= 6,6, J₂',r= 4,7, H-2’); 6,97 (d, 1H, Jr,₂'= 4,7, H-l); 7,27 (dd, 1H, J₇,₈ = 8,3, J₇,₆ = 4,7, H-7); 7,42, 7,49, 7,51 (3 x m, 3 x 2H, H-m-Bz); 7,62, 7,68, 7,69 (3 x m, 3 x 1H, H-p-Bz); 7,84, 7,97, 7,99 (3 x m, 3 x 2H, H-o-Bz); 8,30 (dd, 1H, J₈,₇ = 8.4, J₈,₆ = 1,4, H-8); 8,39 (s, 1H, H-2); 8,55 (dd, 1H,/6,7 = 4,7,16,8 = 1,4, H-6); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 40,12 ((CH3)2N); 63,40 (CH2-5'); 70,46 (CH-3'); 72,37 (CH-2’); 78,62 (CH-4'); 85,91 (CH-F); 96,39 (C-4a); 118,16 (CH-8); 119,26 (CH-7); 128,66, 128,85 (C-z-Bz); 128,90, 128,97 (CH-m-Bz); 129,43 (Cz-Bz); 129,43, 129,49, 129,60 (CH-o-Bz); 130,08 (C-8a); 133,77, 134,08 (CH-p-Bz); 139,40 (C4b); 143,24 (CH-6); 154,87 (CH-2); 156,79 (C-9a); 158,76 (C-4); 164,80, 165,02, 165,62 (COBz); HR-ESI-MS: nalezeno: 658,2300 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro C37H₃₂O?N5⁺: 658,2296); HR-ESI-MS: nalezeno: 680,2118 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro C₃7H₃iO?N5Na⁺ : 680,2115).

Příklad 23

4-(Dimethylamino)-9-(2,3,5-tri-O-benzoyl-/FD-ribofuranosyl)-pyrido[4',3’:4,5]pyrrolo[2,3d]pyrimidin (16e)

Chráněný nukleosid 16e byl připraven podle stejného postupu jako 15e, z navážky intermediátu 14 (500 mg, 0,77 mmol). Po odpaření rozpouštědla byla surová reakční směs čištěna sloupcovou chromatografií (cyklohexan/ethyl acetát 0 —> 80 %). Chráněný nukleosid 16e (339 mg, 67 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,16 (SiO₂; petrolether/ethyl acetát 1:2); II NMR (500,0 MHz, DMSO-zfc): 3,33 (s, 3H, CH₃N, překrývá se se signálem H₂O); 4,72 (dd, 1H, J_gem = 12,3, Js'b,₄'= 4,7, H-5’b); 4,80 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'a,₄'= 3,2, H-5'a); 4,88 (ddd, 1H, J₄',₃· = 6,6, J₄',₅' = 4,7, 3,2, H-4’); 6,35 (t, 1H, /5,2 = J₃',₄'= 6,6, H-3’); 6,61 (dd, 1H, /2,5 = 6,6, J₂',_r= 4,7, H-2’); 7,04 (d, 1H, J_r,₂· = 4,7, H-l'); 7,41, 7,48, 7,49 (3 x m, 3 x 2H, H-zn-Bz); 7,61, 7,66, 7,67 (3 x m, 3 x 1H, H-p-Bz); 7,84 (m, 2H, H-oBz); 7,93 (dd, 1H, J₅,₆ = 5,5, J₅,s = 1,0, H-5); 7,95, 7,99 (2 x m, 2 x 2H, H-o-Bz); 8,43 (s, 1H, H2); 8,47 (d, 1H, J₆,₅ = 5,5, H-6); 9,30 (d, 1H, J₈,_s = 1,0, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 40,04 (CH3N); 63,44 (CH2-5’); 70,46 (CH-3’); 72,41 (CH-2’); 78,69 (CH-4’); 86,03 (CH-F); 96,26 (C-4a); 117,08 (CH-5); 126,15 (C-4b); 128,67, 128,83 (C-z-Bz); 128,88, 128,91, 128,95 (CH-znBz); 129,36 (C-z-Bz); 129,39, 129,49, 129,59 (CH-o-Bz); 132,75 (C-8a); 133,67 (CH-8); 133,70, 134,05 (CH-p-Bz); 141,59 (CH-6); 155,41 (CH-2); 156,71 (C-9a); 160,16 (C-4); 164,79, 164,99, 165,60 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 658,2298 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro C37H₃₂O?N5⁺: 658,2296); HR-ESI-MS: nalezeno: 680,2117 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro C₃7H₃iO?N5Na⁺: 680,2115).

Příklad 24

4-(I)iiiicthylaiiiino)-9-(/>-I)-ribol'uranosyl)-97/-pyrido|2',3':4,5|pyrrolo|2,3-í/|pyriinidin (le)

Do suspense nukleosidů 15e (320 mg, 0,49 mmol) v methanolu (12 ml) byl přidán methoxid sodný (34 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 0,15 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 16 hodin při teplotě místnosti, poté bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs

-22CZ 2018 - 121 A3 byla čištěna pomocí RP-HPFC (C-18, voda/MeOH 0 —> 100%). Nukleosid le (136 mg, 81 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,72 (SiO₂; CHCh/MeOH 5:1); [a]_D ²⁰ = +10,8 (c = 0,259 vDMSO-ífe); II NMR (500,0 MHz, DMSO-zfc): 3,62 (bs, 6H, (CH3)2N); 3,65-3,74 (m, 2H, H-5’); 3,98 (td, 1H, J4',5' = 3,3, 14·3· = 2,8, H-4’); 4,20 (dd, 1H, 13·,2· = 5,8, J3',4' = 2,8, H-3'); 4,71 (dd, 1H, J2’,r = 7,5, J2’,3· = 5,5, H2'); 5,22 (bs, 2H, OH-2',3'); 5,36 (bs, 1H, OH-5'); 6,50 (d, 1H, Jr,2'= 7,5, H-F); 7,37 (dd, 1H, J7,8 = 8,3, J7,6 = 4,7, H-7); 8,35 (dd, 1H, J8,7 = 8,3, J8,6 = 1,4, H-8); 8,41 (s, 1H, H-2); 8,54 (dd, 1H, J6,7 = 4,7, J6,8 = 1,4, H-6); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 40,13 ((CH3)₂N); (CH₂-5'); 70,34 (CH-3'); 70,94 (CH-2’); 85,66 (CH-4’); 86,86 (CH-F); 96,06 (C-4a); 119,11 (CH-7); 119,43 (CH8); 129,82 (C-8a); 139,44 (C-4b); 142,72 (CH-6); 154,66 (CH-2); 157,17 (C-9a); 158,86 (C-4); HR-ESI-MS: nalezeno: 346,1510 (100, [M+H]⁺vypočteno pro Ci6H2o04N5⁺: 346,1509); HR-ESIMS: nalezeno: 368,1329 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro Ci6Hi9O4N5Na⁺: 368,1329).

Příklad 25

4-(Dimethylamino)-9-(je-D-ribofuranosyl)-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (2e)

Nukleosid 2e byl připraven stejným postupem jako le, z navážky chráněného intermediátu 16e (292 mg, 0,44 mmol). Po odpaření rozpouštědla za sníženého tlaku byla surová reakční směs čištěna pomocí RP- HPFC (C-18, voda/MeOH 0 —> 100 %). Nukleosid 2e (140 mg, 91 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry= 0,14 (SiO₂; CHCh/MeOH 10:1); [a]_D ²⁰ = -13,8 (c = 0,246 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-ífc): 3,33 (s, 6H, CH₃N, překrývá se se signálem H₂O); 3,68,3,72 (2 x bddd, 2 x 1H, J_gem =

11,9, J₅’,oh = 5,1, J₅',₄' = 3,4, H-5’); 3,99 (td, 1H, J₄',₅· = 3,4, J₄',₃· = 2,8, H-4’); 4,22 (dd, 1H, J₃',₂· = 5,8, J₃’,₄· = 2,8, H-3’); 4,73 (dd, 1H, J₂’,r = 7,6, J₂',₃' = 5,8, H-2’); 5,21, 5,24 (2x bs, 2 x 1H, OH2’,3’); 5,32 (bt, 1H, Joh,5’= 5,1, OH-5’); 6,51 (d, 1H, Jr,₂'= 7,6, H-l’);7,92 (dd, 1H, J₅,₆ = 5,5, J₅,₈ = 1,0, H-5); 8,44 (d, 1H, J₆,₅ = 5.5, H-6); 8,47 (s, 1H, H-2); 9,28 (d. 1M, J₈,₅ = 1,0, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 39,96 (CH3N); 61,78 (CH2-5’); 70,21 (CH-3’); 71,20 (CH-2’); 85,74 (CH-4’); 86,88 (CH-F); 95,92 (C-4a); 116,92 (CH-5); 126,11 (C-4b); 132,40 (C-8a); 135,05 (CH8); 140,93 (CH-6); 155,33 (CH-2); 157,19 (C-9a); 160,32 (C-4); HR-ESI-MS: nalezeno: 346,1510 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro CieH2o0₄N5⁺; 346,1509); HR-ESI-MS: nalezeno: 368,1329 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro Ci6HigO₄N5Na⁺: 368,1329).

Přiklad 26

4-(Furan-2-yl)-9-(2,3,5-tri-O-benzoyl-/?-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2',3':4,5]pyrrolo[2,3í/]pyrimidin (15f)

Nukleosid 15f byl připraven podle obecného postupu A z chráněného nukleosidu 13 (400 mg, 0,62 mmol) a 2-(tributylstannyl)furanu (292 μΐ, 0,93 mmol). Požadovaný produkt 15f (378 mg, 90 %) byl získán ve formě narůžovělého prášku.

Ry = 0,32 (SiO₂; petrolether/ethyl acetát 2:1); II NMR (500,0 MHz, DMSO- zfc) 4,73 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'_b,₄' = 4,4, H-5'b); 4,86 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'_a,₄'= 3,2, H-5’b); 4,92 (ddd, 1H, J₄',₃· = 6,6, J₄',5' = 4,4, 3,2, H-4’); 6,40 (t, 1H, J_y,₂· = }₃·₄· = 6,6, H-3’); 6,58 (dd, 1H, 1₂·₃· = 6,6, Jr,₂’= 4,6, H-2’); 6,91 (dd, 2H, J₄,₃ = 3,6, J₄,₅ = 1,7, H-4-furyl); 7,08 (d, 1H, J_r,₂· = 4,6, H-F); 7,41, 7,49, 7,50 (3 x m, 3 x 2H, H-m-Bz); 7,56 (dd, 1H, J₇,₈ = 8,4, J_7fi = 4,7, H-7); 7,62, 7,66, 7,69 (3 x m, 3 x 1H, H-p-Bz); 7,83, 7,95, 8,00 (3 x m, 3 x 2H, H-o-Bz); 8,12 (dd, 1H, J₅,₄ = 1,7, J₅,₃ = 0.8, H-5furyl); 8,53 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,4, J₈,₆ = 1,4, H-8); 8,81 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,7, J₆,₈= 1,4, H-6); 9,00 (s, 1H, H-2); 9,41 (dd, 1H, J₃,₄ = 3,6, J₃,₅ = 0,8, H-3-furyl); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífc): 63,25 (CH₂-5’); 70,33 (CH-3’); 72,51 (CH-2’); 78,80 (CH-4’); 86,03 (CH-F); 106,95 (C-4a); 113,14 (CH-4-furyl); 119,36 (CH-8); 120,59 (CH-3-furyl); 122,23 (CH-7); 128,63, 128,83 (C-z-Bz); 128,88, 128,94, 128,97 (CH-m-Bz); 129,37 (CH-o-Bz); 129,39 (C-z-Bz); 129,48, 129,61 (CH-o

-23 CZ 2018 - 121 A3

Bz); 132,44 (C-8a); 133,75, 134,08 (CH-p-Bz); 137,68 (C-4b); 144,45 (CH-6); 147,06 (CH-5furyl); 148,91 (C-4); 150,38 (C-2-furyl); 155,31 (CH-2); 155,92 (C-9a); 164,80, 165,00, 165,58 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 681,1982 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro CsgHzgOsNC: 681,1979); HR-ESI-MS: nalezeno: 703,1800 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro C39H280sN4Na⁺: 703,1799).

Příklad 27

4-(Furan-2-yl)-9-(2,3,5-tri-O-benzoyl-3-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo[2,3í/]pyrimidin (16f)

Nukleosid 16f byl připraven podle obecného postupu A z chráněného nukleosidu 14 (400 mg, 0,62 mmol) a 2-(tributylstannyl)furanu (292 μΐ, 0,93 mmol). Požadovaný produkt 16f (274 mg, 66 %) byl získán ve formě narůžovělého prášku.

Ry = 0,41 (S1O2; petrolether/ethyl acetát 1:2); II NMR (500,0 MHz, DMSO-Jó): 4,75 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'_b,4' = 4,7, H-5'b); 4,85 (dd, 1H, J_gem = 12,3, Fv= 3,2, H-5'a); 4,93 (ddd, 1H, J₄',₃' = 6,6, J₄',5' = 4,7, 3,2, H-4’); 6,38 (t, 1H, 1₃·,₂· = Jy,₄· = 6,6, H-3'); 6,62 (dd, 1H, }₂·,₃·= 6,6, h’,i’= 4,6, H-2’); 6,93 (dd, 1H, J₄,₃ = 3,5, J₄,₅ = 1,7, H-4-furyl); 7,15 (d, 1H, J_r,₂· = 4,6, H-F); 7,41, 7,47, 7,51 (3 x m, 3 x 2H, H-m-Bz); 7,62, 7,63 (2 x m, 2 x 1H, H-p-Bz); 7,68 (dd, 1H, J₃,₄ = 3,5, J₃,₅ = 0,9, H-3-furyl); 7,69 (m, 1H, H-p-Bz); 7,84, 7,93, 8,01 (3 x m, 3 x 2H, H-o-Bz); 8,37 (dd, 1H, J₅,₄= 1,7, J5,3 = 0,9, H-5-furyl); 8,66 (d, 1H, J₆,₅ = 5,4, H-6); 8,80 (dd, 1H, J₅,₆ = 5,4, J₅,₈ = 1,0, H-

5) ; 9,00 (s, 1H, H-2); 9.48 (d, 1H, J₈,₅ = 1,0, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-rfe): 63,34 (CH₂-5'); 70,37 (CH-3'); 72,45 (CH-2’); 78,89 (CH-4’); 86,11 (CH-F); 106,75 (C-4a); 113,41 (CH-4-furyl); 116,28 (CH-3-furyl); 118,43 (CH-5); 125,05 (C-4b); 128,65, 128,82 (C-z-Bz); 128,87, 128,88, 128,96 (CH-m-Bz); 129,32 (C-z-Bz); 129,34, 129,49 129,61 (CH-o-Bz); 133,69, 134,07 (CH-p-Bz); 134,44 (C-8a); 134,61 (CH-8); 142,60 (CH-6); 147,70 (CH-5-furyl); 149,82 (C-4); 151,89 (C-2-furyl); 155,95 (CH-2); 156,31 (C-9a); 164,81, 164,99, 165,57 (CO-Bz); HRESI-MS: nalezeno: 681,1982 (100, [M+H]⁺vypočteno pro C39H29O8N4L 681,1979); HR-ESI-MS: nalezeno: 703,1800 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro C39H280sN4Na⁺: 703,1799).

Příklad 28

4-(Furan-2-yl)-9-(β-D-ribofuranosy 1)-97/-pyrido[2',3’:4,5]pyrrolo[2,3-d]pyrimidin (1 f)

Do roztoku nukleosidu 15f (300 mg, 0,44 mmol) v methanolu (14 ml) byl přidán methoxid sodný (30 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 0,13 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě 70 °C po dobu 16 hodin, pak bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna pomocí RP-HPFC (C-18, voda/MeOH 0 —> 100 %). Nukleosid íf (122 mg, 75 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry= 0,39 (SiO₂; CHCh/MeOH 10:1); [a]_D ²⁰ = -27,8 (c = 0,212 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-rfe): 3,72 (ddd, 1H, J_gem = 12,0, = 5,3, Jw = 3,5, H-5'b); 3,75 (ddd, 1H, J_gem =

12,0, J_S'_a,oH = 5,0, J_S'_a.₄'=3,l, H-5'b); 4,03 (ddd, 1H, J₄-,₅· = 3,5, 3,1 1₄·,₃· = 2,7, H-4’); 4,24 (ddd, 1H, J₃',₂' = 5,6, J₃',_0H = 4,5, J₃',₄' = 2,7, H-3’); 4,72 (ddd, 1H, J₂',_r = 7,5, J₂',_0H = 6,3, 1₂·,₃· = 5,6, H2’); 5,23 (d, 1H, Joh.₃'= 4,6, OH-3’); 5,28 (dd, 1H, Joh.5'= 5,3, 5,0, OH-5’); 5,31 (d, 1H, J_0H,₂· =6,3, OH-2’); 6,63 (d, 1H, J_v,₂· = 7,5, H-F); 6,91 (dd. 1H, J₄,₃ = 3,5, J₄,₅ = 1,7, H-4-furyl); 7,63 (dd, 1H, J₇,₈ = 8,4, J₇,₆ = 4,7, H-7); 8,11 (dd, 1H, J₅,₄ = 1,7, J₅,₃ = 0,8, H-5-furyl); 8,63 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,4, J₈,₆ = 1,4, H-8); 8,80 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,7, J₆,₈ = 1,4, H-6); 9,07 (s, 1H, H-2); 9,44 (dd, 1H, J₃,₄ = 3,5, J₃,₅ = 0,8, H-3-furyl); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífc): 61,71 (CH₂-5')_; 70,26 (CH-3’); 71,02 (CH-2’); 85,87 (CH-4’); 86,74 (CH-F); 106,48 (C- 4a); 113,07 (CH-4-furyl); 120,33 (CH-3-furyl); 120,90 (CH-8); 122,02 (CH-7); 131,95 (C-8a); 137,88 (C-4b); 143,98 (CH-

6) ; 146,86 (CH-5-furyl); 148,71 (C-4); 150,54 (C-2-furyl); 155,31 (CH-2); 156,51 (C-9a); HRESI-MS: nalezeno: 369,1194 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro CisHnOsNC: 369,1193); HR-ESI

-24CZ 2018 - 121 A3

MS: nalezeno: 391,1014 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro CisHi6O5N4Na⁺: 391,1012).

Příklad 29

4-(Furan-2-yl)-9-(je-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (2f)

Do roztoku nukleosidu 16f (230 mg, 0,34 mmol) ve směsi methanolu (9 ml) a DMF (4,5 ml) byl přidán methoxid sodný (22 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 0,10 mmol). Reakční směs byla míchána při 60 °C po dobu 16 hodin, poté bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna pomocí HPFC (CHCF/MeOH 0 —> 10%). Nukleosid 2f (88 mg, 71 %) byl získán ve formě růžového prášku.

Ry = 0,19 (SiO₂; CHCh/MeOH 10:1); [a]_D ²⁰ = - 43,3 (c = 0,247 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-í/e): 3,73 (ddd, 1H, J_gem = 11,9, J₅'a,oH= 5,1, J₅'_b,4'= 3,5, H-5’b); 3,76 (ddd, 1H, J_gem = 11,9, Js’a,0H= 5,1, J₅'a.4'=3,2, H-5'a); 4,04 (ddd, 1H, J₄’₅· = 3,5, 3,2, J₄’₃· = 2,8, H-4’); 4,26 (ddd, 1H, J₃',2'= 5,8, J₃',OH = 4,6, J₃',4' = 2,8, H-3’); 4,75 (ddd, 1H, h',r = 7,6, Jz.oh = 6,3, J₂',₃· = 5,8, H-2’); 5,24 (d, 1H, J_0H,₃'= 4,6, OH-3’); 5,27 (t, 1H, Joh,₅'= 5,1, OH-5'); 5,31 (d, 1H, Joh,2' = 6,3, OH-2’); 6,64 (d, 1H, Ji’,2’ = 7,6, H-F); 6,92 (dd, 1H, J₄,₃ = 3,5, J₄,₅ = 1,8, H-4-furyl); 7,67 (dd, 1H, J₃,₄ =

3.5, = 0,9, H-3-furyl); 8,36 (dd, 1H, J₅,₄ = 1,8, J₅,₃ = 0,9, H-5-furyl); 8,63 (d, 1H, J₆,₅ = 5,4, H6); 8,80 (dd, 1H, J_s,₆ = 5,4, J_s,₈ = 1,1, H-5); 9,07 (s, 1H, H-2); 9,52 (d, 1H, J₈,_s = 1,1, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-í/e): 61,62 (CH₂-5’); 70,12 (CH- 3’); 71,12 (CH-2’); 85,92 (CH-4'); 86,73 (CH-F); 106,25 (C-4a); 113,35 (CH-4-furyl); 116,01 (CH-3-furyl); 118,27 (CH-5); 125,16 (C-4b); 133,96 (C-8a); 136,21 (CH-8); 141,96 (CH-6); 147,49 (CH-5-furyl); 149,60 (C-4); 152,06 (C-2-furyl); 156,03 (CH-2); 156,95 (C-9a); HR- ESI-MS: nalezeno: 369,1194 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro CisHnOsNC: 369,1193); HR- ESI-MS: nalezeno: 391,1013 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro CisHi6O5N4Na⁺: 391,1012).

Příklad 30

4-(Furan-3-yl)-9-(2,3,5-tri-O-benzoyl-/FD-ribofuranosyl)-9.ř/-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3í/]pyrimidin (15g)

Chráněný nukleosid 13 (400 mg, 0,62 mmol), furan-3-boronová kyselina (105 mg, 0,93 mmol), K₂CO₃ (171 mg, 1,24 mmol) a Pd(PPh₃)4 (35 mg, 0,03 mmol) byly rozpuštěny v toluenu a reakční směs byla zahřívána pod argonovou atmosférou na 100 °C po dobu 24 hodin. Po zreagování byla reakční směs naředěná s nasyceným roztokem NaHCO₃ a extrahována s ethyl acetátem. Organické vrstvy byly sušeny pomocí Na₂SO4, rozpouštědlo bylo odpařeno a surový produkt byl přečištěn pomocí HPFC (SiO₂, petrolether/ethyl acetát 0 —> 100%). Chráněný nukleosid 15g (308 mg, 73%) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,74 (SiO₂; petrolether/ethyl acetát 2:1); II NMR (500,0 MHz, DMSO-í/e): 4,73 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅’b,4’= 4,4, H-5'b); 4,86 (dd, 1H, J_gem = 12,3, = 3,2, H-5'b); 4,92 (ddd, 1H, J₄’₃· =

6.6, J₄',5' = 4,4, 3,2, H-4’); 6,39 (t, 1H, J₃',₂· = J₃',4'= 6,6, H-3’); 6,60 (dd, 1H, J₂'₃· = 6,6, J₂',r = 4,7, H-2’); 7,08 (d, 1H, J_r,₂'= 4,7, H-F); 7,41, 7,49, 7,50 (3 x m,3 x 2H, H-m-Bz); 7,55 (dd, 1H, J₇,₈ =

8,4, J₇,₆ = 4,7, H-7); 7,61,7,66(2 x m, 2 x 1H, H-p-Bz); 7,67 (dd, 1H, J₄,₅ = 2,3, J42 = 0,8, H-4furyl); 7,68 (m, 1H, H-p-Bz); 7,83 (m, 2H, H-o-Bz); 7,94 (dd, 1H, J₅,₄ =2,3, J₅,₂ = 1,5, H-5furyl); 7,95, 8,00 (2 x m,2 x 2H, H-o-Bz); 8,53 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,4, J₈,₆ = 4,4, H-8); 8,80 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,7, J₆,₈ = 1,4. H-6); 9,01 (s, 1H, H-2); 10,01 (dd, 1H, J₂,₅ = 1,5, J₂,4 = 0,8, H-2-furyl); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-í/e): 63,30 (CH2-5’); 70,38 (CH-3’); 72,46 (CH-2’); 78,82 (CH-4’); 86,05 (CH-F); 108,97 (C-4a); 110,43 (CH-4-furyl); 119,43 (CH-8); 122,11 (CH-7); 125,30 (C-3furyl); 128,63, 128,83 (C-z-Bz); 128,89, 128,94, 128,97 (CH-zn-Bz); 129,37 (CH-o-Bz); 129,39 (C-z-Bz); 129,48, 129,62 (CH-o-Bz); 132,38 (C-8a); 133,76, 134,09 (CH-p-Bz); 138,07 (C-4b); 144,29 (CH-5-furyl); 144,45 (CH-6); 149,52 (CH-2-furyl); 152,83 (C-4); 155,45 (CH-2); 155,88 (C-9a); 164,81, 165,01, 165,59 (CO-Bz); HR- ESI-MS: nalezeno: 703,1802 (100, [M+Na]⁺vypočteno pro C39H₂80sNa⁺: 703,1799).

-25 CZ 2018 - 121 A3

Příklad 31

4-(Furan-3-yl)-9-(2,3,5-tri-č?-benzoyl-_>e-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo[2,3í/]pyriinidin (16g)

Chráněný nukleosid 14 (500 mg. 0,77 mmol), furan-3-boronová kyselina (259 mg, 2,31 mmol), K2CO3 (213 mg, 1,54 mmol) a Pd(PPhs)4 (46 mg, 0,04 mmol) byly rozpuštěny v toluenu a reakční směs byla zahřívána pod argonovou atmosférou na 100 °C po dobu 4 hodin. Po zreagování byla reakční směs naředěna nasyceným roztokem NaHCOs a extrahována ethyl acetátem. Organické vrsty byly sušeny pomocí Na₂S()4, rozpouštědlo bylo odpařeno a surový produkt byl přečištěn pomocí HPFC (SiO₂, petrolether/ethyl acetát 0 —> 100%). Chráněný nukleosid 16g (443 mg, 84%) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,48 (SiO₂; petrolether/ethyl acetát 1:2); II NMR (500,0 MHz, DMSO-(fc): 4,75 (dd, 1H J_gem= 12,3, J₅'_b,4' = 4,6, H-5'b); 4,85 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'_a,₄' = 3,2, H-5'a); 4,94 (ddd, 1H 1₄·,₃· = 6,5, j₄.₅. = 4,5, 3,2, H-4'); 6,39 (t, 1H, J₃',₂· = Jw = 6,5, H-3'); 6,65 (dd, 1H, /2,3 = 6,5 J₂',r= 4,7, H2’); 7,15 (d, 1H, J_v,₂· = 4,7, H-Γ); 7,17(dd, 1H, J₄,₅ = 1,9, J₄,₂ = 0,9, H-4-furyl); 7,42, 7,48, 7,51 (3 x m, 3 x 2H, H-m-Bz); 7,62, 7,65, 7,69 (3 x m, 3 x 1H, H-p-Bz); 7,85 7,94, 8,01 (3 x m, 3 x 2H, H-o-Bz); 8,02 (dd, 1H, J₅,₄ = 1,9, J₅,₂ = 1,5, H-5-furyl); 8,15 (dd, 1H, J₅,₆ - 5,4, J₅,₈ = 1,0, H-5); 8,59 (d, 1H, J₆,₅ = 5,4, H-6); 8,62 (dd, 1H, J₂,₅ = 1,5, J₂,₄ = 0,9 H-2-furyl); 9,03 (s, 1H, H-2); 9,49 (d, 1H, J₈,₅ = 1,0, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc) 63,32 (CH2-5'); 70.40 (CH-3'); 72,43 (CH-2'); 78,91 (CH-4'); 86,15 (CH-Γ); 109,84 (C-4a); 110,67 (CH-4-furyl); 116,47 (CH-5); 124,23 (C-3-furyl); 124,98 (C-4b); 128,63, 128,82 (C-z-Bz); 128,89, 128,91, 128,97 (CH-m-Bz); 129,34 (C-z-Bz); 129,36, 129,50, 129,63 (CH-o-Bz) 133,73, 134,09 (CH-p-Bz); 134,16 (C-8a); 134,76 (CH-8); 142,37 (CH-6); 145,01 (CH-5-furyl); 145,34 (CH-2-furyl); 155,16 (C-4); 155,69 (C-9a); 156,16 (CH-2); 164,82, 165,02, 165,58 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 681,1981 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro CsgH^OsNC: 681,1979); HR-ESI-MS: nalezeno: 703,1800 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro C39H280sN4Na⁺: 703,1799).

Příklad 32

4-(Furan-3-yl)-9-(je-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyrimidin (Ig)

Do směsi nukleosidů 15g (283 mg, 0,42 mmol) v methanolu (13 ml) byl přidán methoxid sodný (30 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 0,13 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 16 hodin při teplotě 70 °C. Rozpouštědlo bylo následně odpařeno za sníženého tlaku a čistý produkt byl vykrystalizován z methanolu. Nukleosid Ig (120 mg, 78 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry= 0,25 (SiO₂;ethyl acetát); [a]_D ²⁰ = -18,1 (c = 0,182 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSOd6): 3,68-3,78 (m, 2H, H-5’); 4,03 (td, 1H, J4-,5· = 3,5, J4',3· = 2,5, H-4’); 4,24 (dd, 1H, Jy,2'= 5,6, J3’,4’= 2,5, H-3’); 4,73 (dd, 1H, J2',r = 7,5, /2,3 = 5,6, H-2’); 5,20-5,34 (bm, 3H, OH-2’,3’,5’); 6,62 (d, 1H, Jr,2'= 7,5, H-Γ); 7,62 (dd, 1H, J7,8 = 8,4, J7,6 = 4,7, H-7); 7,68 (dd, 1H, J4,5 = 1,9, J4,i = 0,8, H-4-furyl); 7,94 (dd, 1H, J5,4 = 1,9, J5,2 = 1,6, H-5-furyl); 8,62 (dd, 1H, J8,7 = 8,4, J8,6 = 1,4, H-8); 8,80 (dd, 1H, J6,7 = 4,7, J6,8 = 1,4, H-6); 9,08 (s, 1H, H-2); 10,05 (dd, 1H, J2,5 = 1,6, J2,4 = 0,8, H-2-furyl); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 61,72 (CH2-5’); 70,28 (CH-3’); 71,02 (CH-2’); 85,86 (CH-4’); 86,79 (CH-Γ); 108,49 (C-4a); 110,49 (CH-4-furyl); 120,95 (CH-8); 121,91 (CH-

7); 125,42 (C-3-furyl); 131,91 (C-8a); 138,28 (C-4b); 143,98 (CH-6); 144,21 (CH-5-furyl); 149,40 (CH-2-furyl); 152,52 (C-4); 155,47 (CH-2); 156,48 (C-9a); HR-ESI-MS: nalezeno: 391,1013 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro CisHi6O5N4Na⁺: 391,1012).

Příklad 33

-26CZ 2018 - 121 A3

4-(Furan-3-yl)-9-(je-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin (2g)

Nukleosid 2g byl připraven stejným postupem jako íg, z navážky chráněného nukleosidu 16g (396 mg, 0,58 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 16 hodin, rozpouštědlo bylo následně odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna pomocí RP-HPFC (C-18, voda/MeOH 0 —> 60%). Nukleosid 2g (192 mg, 90%) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,20 (SiO₂; CHCh/MeOH 10:1); [a]_D ²⁰ = -31,9 (c = 0,254 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-í/e): 3,73, 3,76 (2 x ddd, 2 x 1H, J_gem = 11,9, J_S’_0H = 5,1, J₅’,₄· = 3,3, H-5 ); 4,04 (td, 1H, J₄',5' = 3,3, J₄’,3’ = 2,7, H-4’); 4,26 (ddd, 1H, Ί₃·,₂· = 5,8, J₃’,oh = 4,6, J₃’,₄· = 2,7, H-3’); 4,74 (dd, 1H, J₂',_v = Ί,Ί, J₂',_0H = 6,4, J₂',₃· = 5,8, H-2’); 5,25 (d, 1H, J_Oh,₃· = 4,6, OH-3’); 5,28 (t, 1H J_OH,5· = 5,1, OH-5’); 5,31 (d, 1H, Joh,₂'= 6,4, OH-2’); 6,62 (d, 1H, J_r,₂· = Ί,Ί, Η-Γ); 7,17 (dd, 1H, J₄,₅ =

1,9, J₄,₂ = 0,9, H-4-furyl); 8,03 (dd, 1H, J₅,₄ = 1,9, J₅,₂ = 1,5, H-5-furyl); 8,15 (dd, 1H, J₅,₆ = 5,4, J₅,₈ =1,1, H-5); 8,56 (d, 1H, J₆,₅ = 5,4, H-6); 8,61 (dd, 1H, J₂,₅ = 1,5, J₂,₄ = 0,9, H-2-furyl); 9,11 (s, 1H, H-2); 9,53 (d, 1H, J₈,_s = 1,0, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 61,64 (CH2-5’); 70,18 (CH-3’); 71,25 (CH-2’); 85,97 (CH-4’); 86,74 (CH-Γ); 109,30 (C-4a); 110,72 (CH-4-furyl); 116,31 (CH-5); 124,34 (C-3-furyl); 125,12 (C-4b); 133,65 (C-8a); 136,41 (CH-8); 141,74 (CH6); 144,97 (CH-5-furyl); 145,16 (CH-2-furyl); 154,84 (C-4); 156,25 (CH-2); 156,35 (C-9a); HRESI-MS: nalezeno: 369,1194 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro CisHnOsNC: 369,1193); HR-ESIMS: nalezeno: 391,1013 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro Ci8Hi6O5N4Na⁺: 391,1012).

Příklad 34

4-(Thiofen-3-yl)-9-(2,3,5-tri-O-benzoyl-/?-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2',3':4,5]pyrrolo(2,3í/]pyrimidin (15h)

Chráněný nukleosid 13 (150 mg, 0,23 mmol), thienyl-3-boronová kyselina (25 mg, 0,35 mmol), K₂CO₃ (64 mg, 0,46 mmol) a Pd(PPh₃)4 (13 mg, 0,01 mmol) byly rozpuštěny v toluenu a reakční směs byla zahřívána pod argonovou atmosférou na 100 °C po dobu 22 hodin. Po zreagování byla reakční směs naředena nasyceným roztokem NaHCO₃ a extrahována ethyl acetátem. Organické vrsty byly sušeny pomocí Na₂SO4, rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a surový produkt byl přečištěn pomocí HPFC (SiO₂, petrolether/ethyl acetát 0 —> 100%). Nukleosid 15h (443 mg, 84%) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,54 (SiO₂; petrolether/ethyl acetát 2:1); II NMR (500,0 MHz, DMSO-# 4,73 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'b,₄' = 4,4, H-5'b); 4,86 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'a,₄'= 3,2, H-5’b); 4,92 (ddd, 1H, J₄',₃· =

6,6, J₄',₅'= 4,4, 3,2, H-4’); 6,40 (t, 1H, Ί₃·,₂·= J₃',₄'= 6,6, H-3’); 6,60 (dd, 1H, J₂',₃'= 6,6, J₂',r= 4,7, H-2’); 7,09 (d, 1H, J_r,₂· = 4,7, H-F); 7,41, 7,49, 7,50 (3 x m, 3 x 2H, H-m-Bz); 7,55 (dd, 1H, J₇,₈ =

8,4, J₇,₆ = 4,7, H-7); 7,61, 7,65, 7,68 (3 x m, 3 x 1H, H-p-Bz); 7,74 (dd, 1H, J₅,₄ = 5,1, J₅,₂ = 3,0, H-5-thienyl); 7,83, 7,95, 8,00 (3 x m, 3 x 2H, H-o-Bz); 8,46 (dd, 1H, J₄,₅ = 5,1, J₄,₂ = 1,3, H-4thienyl); 8,53 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,4, J₈,₆ = 1,4, H-8); 8,78 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,7, J₆,₈ = 1,4, H-6); 9,02 (s, 1H, H-2); 10,20 (dd, 1H, J₂,₅ = 3,0, J₂,₄ = 1,3, H-2-thienyl); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífc): 63,32 (CH2-5’); 70,40 (CH-3’); 72,51 (CH-2’); 78,85 (CH-4’); 86,10 (CH-Γ); 109,06 (C-4a); 119,48 (CH-8); 122,40 (CH-7); 122,40 (CH-5-thienyl); 128,66, 128,86 (C-z-Bz); 128,94, 128,99, 129,02 (CH-m-Bz); 129,11 (CH-4-thienyl); 129,42 (C-z-Bz); 129,42, 129,53, 129,66 (CH-o-Bz); 132,39 (C-8a); 133,66 (CH-2-thienyl); 133,82, 134,15 (CH-p-Bz); 138,10 (C-4b); 139,76 (C-3thienyl); 144,25 (CH-6); 154,91 (C-4); 155,30 (CH-2); 156,30 (C-9a); 164,87, 165,07, 165,65 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 697,1752 (100, [M+H]⁺ vypočteno pro C39H₂9O₇N4S⁺: 697,1751); HR-ESI-MS: nalezeno: 719,1572 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro C₃₉H₂₈O₇N₄NaS⁺: 719,1570).

Příklad 35

-27 CZ 2018 - 121 A3

4-(Thiofen-3-yl)-9-(2,3,5-tri-č?-benzoyl-_>e-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo(2,3í/]pyrimidin (16h)

Chráněný nukleosid 14 (120 mg, 0,19 mmol), thienyl-3-boronová kyselina (41 mg, 0,57 mmol), K2CO3 (52 mg, 0,38 mmol) a Pd(PPh₃)₄ (12 mg, 0,01 mmol) byly rozpuštěny v toluenu (4 ml) a reakční směs byla zahřívána pod argonovou atmosférou na 100 °C po dobu 24 hodin. Po zreagování byla reakční směs naředěná nasyceným roztokem NaHCOs a extrahována ethyl acetátem. Organické vrsty byly sušeny pomocí Na₂SO₄, rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku a surový produkt byl přečištěn pomocí HPFC (SiO₂, petrolether/ethyl acetát 0 —> 100 %). Nukleosid 16h (73 mg, 57 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,51 (SiO₂; petrolether/ethyl acetát 1:2); II NMR (500,0 MHz, DMSO-Jó): 4,76 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'_b,4' = 4,6, H-5’b); 4,85 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅'_a,₄· = 3,2, H-5'a); 4,94 (ddd, 1H, J₄',₃· = 6,5, J₄',₅'= 4,6, 3,2, H-4'); 6,40 (t, 1H, J₃·,₂·= J₃',₄'= 6,5, H-3’); 6,66 (dd, 1H, J₂',_y= 6,5, J₂’,_r= \,Ί, H-2’); 7,16 (d, 1H, J_r,₂· = 4,7, H-Γ); 7,42, 7,48, 7,51 (3 x m, 3 x 2H, H-m-Bz); 7,62, 7,65, 7,69 (3 x m, 3 x 1H, H-p-Bz); 7,72 (dd, 1H, J₄₅ = 5,0, J₄,₂ = 1,3, H-4-thienyl); 7,85 (m, 2H, H-o-Bz); 7,88 (dd, 1H, J₅,₄ = 5,0, J₅,₂ = 2,9, H-5-thienyl); 7,95 (m, 2H, H-o-Bz); 8,00 - 8,03 (m, 3H, H-5, H-o-Bz); 8,41 (dd, 1H, J₂,₅ = 2,9, J₂,₄ = 1,3, H-2-thienyl); 8,56 (d, 1H, J₆,₅ = 5,3, H-6); 9,05 (s, 1H, H-2); 9,49 (d, 1H, J₈,₅ = 1,1, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-í/e): 63,33 (CH,-5’); 70,39 (CH-3’); 72,45 (CH-2’); 78,91 (CH-4’); 86,15 (CH-H); 109,87 (C-4a); 116,28 (CH-5); 125,11 (C4b); 127,98 (CH-5-thienyl); 128,17 (CH-4-thienyl); 128,64, 128,82 (C-z-Bz); 128,89, 128,92, 128,97 (CH-m-Bz); 129,34 (C-z-Bz); 129,37, 129,50, 129,63 (CH-o-Bz); 129,69 (CH-2-thienyl); 133,74, 134,10 (CH-p-Bz); 134,26 (C-8a); 134,81 (CH-8); 138,84 (C-3-thienyl); 142,27 (CH-6); 155,83 (C-9a); 156,18 (CH-2); 157,42 (C-4); 164,83, 165,02, 165,58 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 697,1753 (100, [M+H]⁺, vypočteno C39H2gO7N4S⁺: 697,1751); HR-ESI-MS: nalezeno: 719,1573 (100, [M+Na]⁺, vypočteno C39H28O₇N₄NaS⁺: 719,1570).

Příklad 36

4-Cfhiol'cn-3-yl)-9-(/M)-riboluranosyl)-97/-pyrido|2’,3’:4,5|pyrrolo|2,3-í/|pyriinidin (Ih)

Do roztoku nukleosidu 15h (160 mg, 0,23 mmol) v methanolu (7 ml) byl přidán methoxid sodný (16 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 0,07 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 16 hodin při teplotě 50 °C, poté bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna pomocí HPFC (SiO₂, CHCh/MeOH 0 —> 10%). Nukleosid íh (62 mg, 70 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,44 (SiO₂; ethyl acetát); [a]_D ²⁰ = -17,6 (c = 0,199 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-í/e): 3,72 (ddd, 1H, J_gem = 12,0, J₅'_a,_0H = 5,2, J₅'_b,₄' = 3,3,H-5’b); 3,75 (ddd, 1H, J_gem = 12,0, J₅'_a,_0H = 5,2, J₅'_a,₄' = 3,3, H-5'b); 4,03 (td, 1H, J₄',₅· = 3,3, J₄',₃· = 2,9, H-4’); 4,25 (ddd, 1H, J₃’,2' = 6,2, J₃',OH = 4,2, J₃',4' = 2,9, H-3’); 4,73 (dt, 1H, J₂',_r = 7,5, }₂·₃· = J₂',oh = 5,4, H-2’); 5,23 (d, 1H, Joh,₃' = 4,2, OH-3’); 5,28 (t, 1H, J_0H,₃' = 5,2, OH-5’); 5,31 (d, 1H, Joh,₂'= 5,4, OH-2’); 6,65 (d, 1H, Jr,₂' = 7,5, H-Γ); 7,64 (dd, 1H, J₇,₈ = 8,4, J₇,₆ = 4,7, H-7); 7,75 (dd, 1H, J₅,₄ = 5,1, J₅,₂ = 3,0, H-5-thienyl); 8,48 (dd, 1H, J₄,₅ =5,1, J₄,₂ = 1,2, H-4-thienyl); 8,64 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,4, J₈,₆ =

1,4, H-8); 8,78 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,7, J₆,₈ = 1,4, H-6); 9,10 (s, 1H, H-2); 10,25 (dd, 1H, J₂,₅ = 3,0, J₂,₄ = 1,2, H-2-thienyl); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-í/e): 61,71 (CH2-5’); 70,26 (CH-3’); 70,98 (CH-2’); 85,85 (CH-4’); 86,77 (CH-Γ); 108,52 (C-4a); 121,00 (CH-8); 122,14 (CH-7); 126,13 (CH-5-thienyl); 129,13 (CH-4-thienyl); 131,88 (C-8a); 133,39 (CH-2-thienyl); 138,26 (C-4b); 139,93 (C-3-thienyl); 143,71 (CH-6); 154,61 (C-4); 155,27 (CH-2); 156,87 (C-9a); HR-ESI-MS: nalezeno: 385,0966 (100, [M+H]⁺ vypočteno Ci8Hi₇O4N₄S⁺: 385,0965); HR-ESI-MS: nalezeno: 407,0786 (100, [M+Na]⁺, vypočteno Ci₈Hi₆O₄N₄NaS⁺: 407,0784).

Příklad 37

4-('fhiol'cn-3-yl)-9-(/>-D-ribol'uranosyl)-97/-pyrido|4',3':4,5|pyrrolo|2,3-í/|pyriinidin (2h)

-28 CZ 2018 - 121 A3

Nukleosid 2h byl připraven stejným postupem jako Ih, z navážky nukleosidu 16h (268 mg, 0,39 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 16 hodin při teplotě 60 °C, poté bylo rozpouštědlo odpařeno a surová reakční směs byla čištěna za pomoci HPFC (SiO₂, CHCh/MeOH 0 —> 10 %). Nukleosid 2h (106 mg, 72 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry = 0,20 (SiO₂; CHCh/MeOH 10:1); [a]f° = -32,5 (c = 0,283 v DMSO-zfc); II NMR (600,1 MHz, DMSO-í/ď): 3,73 (ddd, 1H, J_gem =11,9, J₅’a,oH = 5,1, J₅’b,4’ = 3,5, H-5’b); 3,76 (ddd, 1H, J_gem= 11,9, J₅'a,0H = 5,1, J₅'a,4' = 3,2, H-5'a); 4,05 (ddd, 1H, J₄',₅' = 3,5, 3,2, J₄',₃· = 2,7, H-4’); 4,26 (ddd, 1H, J₃',₂'= 5,8, J₃',_0H = 4,6, J₃'₄· = 2,7, H-3’); 4,76 (ddd, 1H, J₂',r = 7,6, J₂',_0H = 6,4, J₂',₃· = 5,8, H-2’); 5,25 (d, 1H, Joh,₃'= 4,6, OH-3’); 5,27 (t, 1H, Joh,5'= 5,1, OH-5’); 5,31 (d, 1H, Joh,₂' =

6,4, OH-2’); 6,64 (d, 1H, J_r,₂' = 7,6, H-F); 7,73 (dd, 1H, J₄,₅ = 5,0, J₄,₂ = 1,3, H-4-thienyl); 7,88 (dd, 1H, J₅,₄ = 5,0, Js,₂ = 2,9, H-5-thienyl); 8,01 (dd, 1H, J_s,₆ = 5,3, J_s,s = 1,1, H-5); 8,39 (dd, 1H, J₂,5 = 2,9, J₂,4 = 1,3, H-2-thienyl); 8,53 (d, 1H, J₆,_s = 5,3, H-6); 9,13 (s, 1H, H-2); 9,53 (d, 1H, J₈,_s= 1,1, H-8); ¹³C NMR (150,9 MHz, DMSO-zfc): 61,64 (CH₂-5’); 70,18 (CH-3’); 71,25 (CH-2’); 85,97 (CH-4’); 86,76 (CH-F); 109,30 (C-4a); 116,11 (CH-5); 125,24 (C-4b); 127,93 (CH-5thienyl); 128,19 (CH-4-thienyl); 129,40 (CH-2-thienyl); 133,74 (C-8a); 136,45 (CH-8); 139,02 (C-3-thienyl); 141,62 (CH-6); 156,24 (CH-2); 156,47 (C-9a); 157,15 (C-4); HR-ESI-MS: nalezeno: 385,0965 (100, [M+H]⁺, vypočteno C18H17O4N4S³·: 385,0965).

Přiklad 38

4-(Benzofuran-2-yl)-9-(2,3,5-tri-O-benzoyl-/?-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2'3':4,5] pyrrolo[2,3í/]pyrimidin (15i)

Chráněný nukleosid 13 (100 mg, 0,15 mmol), benzofuran-2-boronová kyselina (38 mg, 0,23 mmol), K₂CO₂ (43 mg, 0,3 mmol), Pd(PPh3)₂Cl₂ (11 mg, 0,01 mmol) a EhN (33 μΐ, 0,23 mmol) byly rozpuštěny v toluenu (4 ml) a reakční směs byla zahřívána pod argonovou atmosférou na 100 °C po dobu 24 hodin. Po zreagování bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna HPFC (SiO₂, petrolether/DCM/ethyl acetát 1:1:0 —> 1:1:2). Chráněný nukleosid 15i (63 mg, 56%) byl získán ve formě nažloutlého prášku.

Ry = 0,52 (SiO₂; petrolether/DCM/ethyl acetát 4:1:1); II NMR (500,0 MHz, DMSO-zfc): 4,74 (dd, 1H, J_gem = 12,3, J₅’b,4’= 4.4, H-5'b); 4,88 (dd, 1H, J_gem = 12,3, Λμ' = 3,2, H-5'b); 4,93 (ddd, 1H, J₄',₃· = 6,7, J₄',₅' = 4,4, 3,2, H-4’); 6,43 (t, 1H, J_y,₂'= J₃',₄· = 6,7, H-3’); 6,61 (dd, 1H, /2,3 = 6,7, J₂',r = 4,6, H-2’); 7,12 (d, 1H, J_v,₂· = 4,6, Η-Γ); 7,39 (ddd, 1H, J₅,₄ = 8.0, J₅,6 = 7,2, J₅,₇ =1,0, H-5benzofuryl); 7,42, 7,50, 7,51 (3 x m, 3 x 2H, H-m-Bz); 7,53 (ddd, 1H, J₆,₇ = 8,4, J_6>5 = 7,2, J₆,₄=1,3, H-6-benzofuryl); 7,60-7,71 (m, 4H, H-7, H-p-Bz); 7,80 (dq, 1H, J₇,₆= 8,4, J₇,₃ = J₇,₄ = J₇,₅ = 1,0, H-7-benzofuryl); 7,83 (m, 2H, H-o-Bz); 7,95-7,98 (m, 3H, H-4-benzofuryl, H-o-Bz); 8,01 (m, 2H, H-o-Bz); 8,58 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,5, J₈,₆ = 1,4, H-8); 8,90 (dd, 1H, J₆,₇ = 4,7, J₆,₈ = 1,4, H6); 9,11 (s, 1H, H-2); 9,91 (d, 1H, J₃,₇ = 1,0, H-3-benzofuryl); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífc): 63,23 (CH2-5’); 70,33 (CH-3’); 72,62 (CH-2’); 78,85 (CH-4’); 86,12 (CH-Γ); 108,57 (C-4a); 111,99 (CH-7-benzofuryl); 115,96 (CH-3-benzofuryl); 119,58 (CH-8); 122,64 (CH-7); 123,22 (CH-4-benzofuryl); 123,90 (CH-5-benzofuryl); 127,62 (CH- 6-benzofuryl); 128,24 (C-3abenzofuryl); 128,66, 128,83 (C-z-Bz); 128,89, 128,95, 128,97 (CH-zn-Bz); 129,38 (CH-o-Bz); 129,39 (C-z-Bz); 129,50, 129,62 (CH-o-Bz); 132,79 (C-8a); 133,76, 134,10 (CH-p-Bz); 137,43 (C-4b); 144,65 (CH-6); 149,21 (C-4); 151,93 (C-2-benzofuryl); 155,12 (C-7a-benzofuryl); 155,24 (CH-2); 155,89 (C-9a); 164,84, 165,02, 165,58 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 731,2139 (100, [M+H]⁺ vypočteno C43H3iO₈N₄ ⁺: 731,2136); HR-ESI-MS: nalezeno: 753,1958 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro C43H3o0₈N4Na⁺: 753,1955).

Příklad 39

4-(Benzofuran-2-yl)-9-(2,3,5-tri-O-benzoyl-/?-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4',3':4,5] pyrrolo|2.3í/]pyrimidin (16i)

-29CZ 2018 - 121 A3

Chráněný nukleosid 14 (400 mg, 0,62 mmol), benzofuran-2-boronová kyselina (301 mg, 1,86 mmol), K2CO3 (171 mg, 1,24 mmol) nad Pd(PPh₃)₄ (71 mg, 0,06 mmol) byly rozpuštěny v toluenu (16 ml) a reakční směs byla zahřívána pod argonovou atmosférou na 100 °C po dobu 18 hodin. Po zreagování bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna za pomocí HPFC (S1O2, cyklohexan/ethyl acetát 0 —> 100%). Chráněný nukleosid 16i (288 mg, 64 %) byl získán ve formě bílého prášku.

Ry =0,50 (S1O2; cyklohexan/ethyl acetát 1:1); II NMR (500,0 MHz, DMSO-Jó): 4,76 (dd, 1H, J_gem = 12,3, Js'b.4· = 4,7, H-5'b); 4,86 (dd, 1H, J_gem = 12,3,1₅·_α,4·= 3,2, H-5'a); 4,95 (ddd, 1H, J₄'₃· = 6,6, J₄’,₅’ = 4,7, 3,2, H-4’); 6,40 (t, 1H, J_y,₂· = J₃’,₄· = 6,6, H-3’); 6,64 (dd, 1H, J₂',_y = 6,6, J₂’,_r =

4,6, H-2’); 7,19 (d, 1H, J_r,₂· = 4,6, H-F); 7,40 - 7,53 (m, 7H, H-5-benzofuryl, H-m-Bz); 7,58 (ddd, 1H, Je,7 = 8,4, Je,5 = 7,2, Je,₄ = 1,3, H-6-benzofuryl); 7,62, 7,63, 7,69 (3 x m, 3x 1H, II-pBz); 7,85 (m, 2H, H-o-Bz); 7,90 (ddd, 1H, J₄,₅ = 7,8, J₄,e = 1,3, J₄,₇ = 1,0, H-4-benzofuryl); 7,94, 8,02 (2 x m, 2 x 2H, H-o-Bz); 8,07 (dq, 1H, J₇,₆ = 8,4, J₇,₃ = J₇,₄ - J₇,₅ = 1,0, H-7-benzofuryl); 8,11 (d, 1H, J₃,₇ = 1,0, H-3-benzofuryl); 8,75 (d, 1H, J₆,₅ = 5,4, H-6); 8,93 (dd, 1H, J₅,₆ = 5,4, J₅,₈= 1,0, H-5); 9,09 (s, 1H, H-2); 9,52 (d, 1H, J₈,₅ = 1,0, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-ífcj: 63,36 (CH2-5’); 70,40 (CH-3’); 72,50 (CH-2’); 78,95 (CH-4’); 86,18 (CH-Γ); 108,22 (C-4a); 111,80 (CH-3-benzofuryl); 112,36 (CH-7-benzofuryl); 118,85 (CH-5); 123,07 (CH-4benzofuryl); 124,48 (CH-5-benzofuryl); 124,91 (C-4b); 127,48 (CH-6-benzofuryl); 127,55 (C-3abenzofuryl); 128,67, 128,84 (C-z-Bz); 128,91, 128,92, 128,99 (CH-zn-Bz); 129,34 (C-z-Bz); 129,37, 129,52, 129,65 (CH-o-Ph); 133,73, 134,11, 134,12 (CH-p-Bz); 134,67 (C-8a); 134,76 (CH-8); 142,98 (CH-6); 150,07 (C-4); 153,32 (C-2-benzofuryl); 155,79 (C-7a-benzofuryl); 155,94 (CH-2); 156,43 (C-9a); 164,85, 165,03, 165,60 (CO-Bz); HR-ESI-MS: nalezeno: 731,2139 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro C43H₃iO₈N₄ ⁺: 731,2136).

Příklad 40

4-(Bcnzol'uran-2-yl)-9-(/M)-ribol'uranosyl)-9//-pyrido|2',3':4,5|pyrrolo|2,3-<7|pyriniidin (li)

Do roztoku nukleosidů 15i (180 mg, 0,25 mmol) v methanolu (8 ml) byl přidán methoxid sodný (17 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 0,08 mmol). Reakční směs byla míchána při teplotě 70 °C po dobu 16 hodin. Po zreagování bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a produkt byl krystalizován z methanolu. Nukleosid li (71 mg, 69%) byl získán ve formě nažloutlého prášku.

Ry = 0,48 (SiO₂; CHCh/MeOH 10:1); [a]_D ²⁰ = -27,7 (c = 0,271 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-rfe): 3,72 (ddd, 1H, J_gem = 11,9, J₅'_b,_0H = 5,2, J₅'_b,₄' = 3,6, H-5’b); 3,77 (ddd, 1H, J_gem =

11,9, J₅'_a,_0H = 5,2, J₅'_a,₄'= 3,2, H-5'b); 4,05 (ddd, 1H, J₄',₅· = 3,6, 3,2 J₄',₃· = 2,7, H-4’); 4,26 (ddd, 1H, J₃',₂' = 5,6, J₃',oh = 4,5, J₃',₄’ = 2,7, H-3’); 4,74 (ddd, 1H, J₂',_r = 7,5, J₂',oh = 6,2, J₂',₃'= 5,6, H2’); 5,25 (d, 1H, Joh,₃'= 4,5, OH-3’); 5,30 (t, 1H, J_0H,₃’= 5,2, 5,0, OH-5’); 5,33 (d, 1H, J_0H,₂’= 6,2, OH-2’); 6,68 (d, 1H, Jr,₂· = 7,5, Η-Γ); 7,39 (ddd, 1H, J₅,₄ = 8,0, J₅,e = 7,2, J₅,₇ =1,0, H-5benzofuryl); 7,53 (ddd, 1H, Je,₇ = 8,4, Je,5 = 7,2, Je,₄ =1,3, H-6-benzofuryl); 7,63 (dd, 1H, J₇,₈ =

8,4, J₇,₆ = 4,7, H-7); 7,80 (dq, 1H, J₇,₆ = 8,4, J₇,₃ = J₇,₄ = J₇,₅ = 1,0, H-7-benzofuryl); 7,96 (ddd, 1H, J₄,₅ = 8,0, J₄,₆ = 1,3, J₄,₇ = 1,0, H-4-benzofuryl); 8,69 (dd, 1H, J₈,₇ = 8,4, J₈,₆ = 1,4, H-8); 8,89 (dd, 1H, Je,7 = 4,7, J₆,₈ = 1,4, H-6); 9,19 (s, 1H, H-2); 9,94 (d, 1H, J₃,₇ = 1,0, H-3-benzofuryl); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-zfc): 61,71 (CH2-5’); 70,29 (CH- 3’); 71,10 (CH-2’); 85,95 (CH-4’); 86,82 (CH-Γ); 108,57 (C-4a); 111,98 (CH-7-benzofuryl); 115,73 (CH-3-benzofuryl); 121,20 (CH-8); 122,44 (CH-7); 123,18 (CH-4-benzofuryl); 123,89 (CH-5-benzofuryl); 127,53 (CH-6benzofuryl); 128,29 (C-3a-benzofuryl); 132,27 (C-8a); 137,65 (C-4b); 144,20 (CH-6); 148,97 (C4); 152,12 (C-2-benzofuryl); 155,09 (C-7a-benzofuryl); 155,29 (CH-2); 156,54 (C-9a); HR-ESIMS: nalezeno: 419,1350 (100, [M+H]⁺ vypočteno pro C22HigO5N4⁺: 419,1350); HR-ESI-MS: nalezeno: 441,1170 (100, [M+Na]⁺, vypočteno pro CVHixOxbLNa⁴: 441,1169).

Příklad 41

-30CZ 2018 - 121 A3

4-(Benzofuran-2-yl)-9-(ýFD-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4',3':4,5]pyrrolo[2,3-í/]pyriinidin (2i)

Do roztoku nukleosidů 16i (249 mg, 0,25 mmol) v methanolu (10 ml) byl přidán methoxid sodný (23 μΐ, 25 % hm. v methanolu, 0,10 mmol). Reakční směs byla míchána po dobu 16 hodin při teplotě 60 °C. Po zreagování bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku a surová reakční směs byla čištěna pomocí HPFC (SiO₂, CHCh/MeOH 0 —> 10 %). Nukleosid 2i (112 mg, 79 %) byl získán ve formě nažlutlého prášku.

Ry= 0,26 (SiO₂; CHCh/MeOH 10:1); [a]_D ²⁰ = -50,5 (c = 0,263 v DMSO); II NMR (500,0 MHz, DMSO-de): 3,75 (ddd, 1H, Jgem = 11,9, J5'b,oH = 5,0, J5'b.4' = 3,5, H-5'b); 3,78 (ddd, 1H, Jgem= 11,9, Js’a,0H = 5,0, J5'a,4'= 3,2, H-5'a); 4,06 (ddd. 1H, J4',5' = 3,5, 3,2, 14·,3· = 2,8, H-4’); 4,28 (ddd, 1H, J3',2'= 5,7, J3',OH = 4,7, J3',4'= 2,8, H-3’); 4,77 (ddd, 1H, J2',r = 7,6, J2',oh = 6,3, J2',3· = 5,7, H-2’); 5,26 (d, 1H, J0H,3’= 4,6, OH-3'); 5,29 (t, 1H, Joh.5'= 5,0, OH-5'); 5,33 (d, 1H, J0H,2’ = 6,3, OH-2’); 6,68 (d, 1H, Jr,2· = 7,6, H-l'); 7,44 (ddd, 1H, J5,4 = 7,8, h.e = 7,2, J5,7 = 1,0, H-5-benzofuryl); 7,58 (ddd, 1H, J6,7 = 8,4, J6,s = 7,2, J6,4 = 1,3, H-6-benzofuryl); 7,90 (ddd, 1H, J4,5 = 7,8, J4,6 = 1,3, J4,7 = 1,0, H-4-benzofuryl); 8,05 (dq, 1H, ./7/, = 8,4, J7,3 = .h,4 = J7,3 = 1,0, H-7-benzofuryl); 8,09 (d, 1H, J3,7 = 1,0, H-3-benzofuryl); 8,72 (d, 1H, J6,5 = 5,4, H-6); 8,93 (dd, 1H, J5,6 = 5,4, J5,8 = 1,1, H-5); 9,16 (s, 1H, H-2); 9,57 (d, 1H, J8,5 = 1,1, H-8); ¹³C NMR (125,7 MHz, DMSO-rfc): 61,61 (CH2-5'); 70,12 (CH-3’); 71,17 (CH-2’); 85,97 (CH-4’); 86,80 (CH-F); 107,70 (C-4a); 111,51 (CH-3-benzofuryl); 112,30 (CH-7-benzofuryl); 118,64 (CH-5); 123,00 (CH-4-benzofuryl); 124,43 (CH-5-benzofuryl); 125,00 (C-4b); 127,34 (CH-6-benzofuryl); 127,57 (C-3a-benzofuryl); 134,16 (C-8a); 136,38 (CH-8); 142,31 (CH-6); 149,79 (C-4); 153,49 (C-2-benzofuryl); 155,71 (C-7a-benzofuryl); 156,02 (CH-2); 157,07 (C-9a); HR-ESI-MS: nalezeno: 419,1350 (100, [M+H]⁺, vypočteno pro C^HigOsNC: 419,1350).

In vitro protinádorová aktivita

K hodnocení protinádorové účinnosti nově připravených látek v in vitro podmínkách jsme použili cytotoxického MTS (M. Tichý, a kol. Cancer Res. 1988, 48, 4827-4833) na buněčných liniích, derivovaných z normálních tkání i nádorů. Konkrétně testy zahrnovaly linie K562 (lidská myeloidní leukémie), K562-Tax (lidská myeloidní leukémie rezistentní na taxol a overexprimující protein mnohočetné lékové rezistence PgP), CEM (T-lymfoblastická leukémie), CEM-DNR-bulk (T-lymfoblastická leukémie rezistentní na doxorubicin, postrádající expresi cílového genu pro inhibitory topoizomerázy II alfa), linie A549 (lidský adenokarcinom plic), HCT116p53 wt (lidská rakovina tlustého střeva, wild-type), HCT116p53-/-(lidská rakovina tlustého střeva, mutant p53) a U20S (lidský kostní osteosarkom). Expresní charakteristiky, profily vnímavosti na klasická protinádorová léčiva i metodologie cytotoxického MTS testu byly opakovaně publikovány (např. Nosková viz výše, Šarek J. et al., ./, Med. Chení2003, 46, 54025415).

Tabulka 4. Cytotoxické aktivity připravených sloučenin

-31 CZ 2018 - 121 A3

Pokud testované látky vykázaly v in vitro cytotoxickém testu aktivitu (viz Tabulka 4), byla téměř vždy preferenční vůči širokému spektru nádorových linií různého histogenetického původu (mesenchymální i epiteliální nádory), s významně menší aktivitou vůči liniím normálních lidských fibroblastů (BJ a MRC-5) a tudíž dobrým in vitro terapeutickým indexem (15-2500). Cytotoxická aktivita vůči nádorovým buňkám nebyla závislá na statusu genu p53, jelikož podobné aktivity byly nalezeny jak u linií HCT116 (p53 wild type), tak u mutantní linie s deletovaným genem HCT116 (p53 -/-).

Průmyslová využitelnost

Látky uvedené v tomto patentu jsou použitelné jako léčiva nebo složky léčiv proti rakovině a leukémiím.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I

-32CZ 2018 - 121 A3

kde

X je atom dusíku a potom Y je atom uhlíku, nebo X je atom uhlíku a potom Y je atom dusíku;

R je zvolen ze skupiny zahrnující

- C1-C5 alkyl, volitelně substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným z hydroxyskupiny, sulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny, C1-C5 sulfanylu, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkyljaminoskupiny;

- C2-C6 alkenyl, volitelně substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným z hydroxyskupiny, sulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny, C1-C5 sulfanylu, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkyljaminoskupiny;

- C6-C12 aryl, volitelně substituovaný alespoň jedním substituentem vybraným z hydroxyskupiny, sulfanylu, aminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny, C1-C5 sulfanylu, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkyljaminoskupiny;

- aminoskupinu;

- C1-C5 alkylaminoskupinu;

- di(Cl-C5 alkyljaminoskupinu;

- C1-C5 alkoxyskupinu;

- C1-C5 alkylsulfanyl;

nebo farmaceuticky přijatelné soli takových sloučenin, jejich optické isomery či směsi takových optických isomerů, včetně racemických směsí.

2. Substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I podle nároku 1, kde R je zvolen ze skupiny, sestávající z C1-C5 alkylu, fenylu, naftylu, 2-furylu, 3-furylu, 2thienylu, 3-thienylu, benzofurylu, C1-C5 alkylsulfanylu, C1-C5 alkylaminoskupiny, di(Cl-C5 alkyljaminoskupiny, C1-C5 alkoxyskupiny.

3. Substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I podle nároku 1 nebo 2, kde R je zvolen ze skupiny, sestávající z thiofen-3-ylu, furan-2-ylu, furan-3- ylu, benzofuran-2-ylu, methylsulfanylu, methylu, methoxyskupiny, aminoskupiny, dimethylaminoskupiny.

4. Substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy obecného vzorce I podle nároku 1, kterými jsou:

4-methyl-9-(3-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-d]pyrimidin, 4-amino-9-(3-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[2’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-d]pyrimidin, 4-(benzofuran-2-yl)-9-(3-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-d]pyrimidin, 4-methyl-9-(3-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-d]pyrimidin, 4-amino-9-(3-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-d]pyrirnidin,

-33 CZ 2018 - 121 A3

4-methoxy-9-(3-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-d]pyrimidin, 4-(methylsulfanyl)-9-(3-D-ribofuranosyl)-9H-pyrido[4’,3’:4,5]pyrrolo[2,3-d]pyriinidin.

5. Substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy podle nároků 1 až 4 pro použití jako léčiva.

6. Substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy podle nároků 1 až 4 pro použití k inhibici patologické buněčné proliferace nádorového i nenádorového původu a/nebo k léčení nádorového nebo nenádorového onemocnění spojeného s buněčnou hyperproliferací.

7. Substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy podle nároků 1 až 4 pro použití k léčení nádorových onemocnění, zahrnujících nádory epiteliálního, mesenchymálního i neuroektodermálního původu.

8. Substituované pyridinopyrrolopyrimidinové ribonukleosidy podle nároků 1 až 4 pro výrobu léčiva k léčení nádorových onemocnění, zahrnujících nádory epiteliálního, mesenchymálního i neuroektodermálního původu.

9. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I podle nároků 1 až 4 a případně alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič, plnivo a/nebo ředidlo.

10. Farmaceutický prostředek podle nároku 9 pro použití k inhibici patologické buněčné proliferace nádorového i nenádorového původu a/nebo k léčení nádorového nebo nenádorového onemocnění spojeného s buněčnou hyperproliferací.