CZ2016511A3

CZ2016511A3 - Způsob výroby 2-(5-brom-4-(lcyklopropylnafta!en-4-yI)-4H-l,2,4-triazol3-ylthio) octové kyseliny (lesinurad)

Info

Publication number: CZ2016511A3
Application number: CZ2016-511A
Authority: CZ
Inventors: Jan Stach; Stanislav Rádl; Pavel Žvátora; Ondřej Píša; Kristýna Benediktová; Aleš Halama
Original assignee: Zentiva, K.S.
Priority date: 2016-08-24
Filing date: 2016-08-24
Publication date: 2018-03-07

Abstract

Nový a efektivní způsob výroby 2-(5-brom-4-(lcyklopropyl-naftalen-4-yl)-4//-l,2,4-triazol-3- ylthiojoctové kyseliny vzorce I známé pod generickým názvem lesinurad, který je založen na bromaci 2-(4-(1 -cyklopropylnaf’talen-4-yl)-4/Yl,2,4-triazol-3-ylthio)octové kyseliny vzorce 17, jejíž karboxylová funkce je chráněna trialkylsilyl skupinou. Při použití nového způsobu probíhá bromační reakce selektivně a s vysokou konverzí vstupní suroviny. Zavedení i deprotekce použité chránící skupiny probíhají velmi snadno, takže není třeba izolovat vznikající intermediáty vzorců 18 a 19, což snižuje počet manipulačních kroků. Izolace produktu z reakční směsi s výhodami využívá dobrých krystalizačních vlastností nově nalezených solí lesinuradu s isopropylaminem vzorce 21a guanidinem vzorce 22.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nového a efektivního způsobu výroby 2-(5-brom-4-(l-cyklopropylnaftalen-4_yl)-477'-l,2,4-triazol-3-ylthio)octové kyseliny vzorce 1, známé pod generickým názvem lesinurad.

N-N

Lesinurad je selektivním inhibitorem transportu kyseliny močové snižující hladinu kyseliny močové v krvi. Používá se v kombinaci s některým z léčiv působících jako inhibitory xanthinoxidasy u pacientů, u kterých se nedosáhne uspokojivého stavu léčbou pomocí samotných inhibitorů xanthinoxidasy.

Dosavadní stav techniky

Lesinurad vzorce 1 se podle základního patentu (W02009070740, EP2217577) připravuje v pěti krocích z výchozího naftylaminu vzorce 2. Reakcí naftylaminu vzorce 2 s thiofosgenem se v prvním kroku připraví příslušný isothiokyanát vzorce 3, jeho reakcí s aminoguanidinem se pak ve druhém kroku získá po chromatografické separaci thiol vzorce 4, avšak pouze s výtěžkem 49 % po 75 hodinách reakční doby. Alkylace thiolu vzorce 4 vhodným alkylhalogenacetátem vede ve třetím kroku k esteru vzorce 5, který se v dalším kroku převádí na ester lesinuradu vzorce 6 pomocí diazotační reakce probíhající v prostředí bromoformu za velmi specifických podmínek (kyselina dichloroctová v přítomnosti benzyltriethylamonium chloridu). Posledním krokem původní syntézy lesinuradu vzorce 1 je hydrolýza esteru vzorce 6, viz schéma 1.

Patent WO2012092395 popisuje alternativní převedení isothiokyanátu vzorce 3 na lesinurad vzorce 1. V prvním kroku reaguje isothiokyanát vzorce 3 s hydrazinem na arylthiosemikarbazid vzorce 7, který je v dalším kroku cyklizován pomocí dimethylkarbonátu na thiol vzorce 8, jehož reakcí s kyselinou chloroctovou se získá kyselina vzorce 9. Poté je karboxylová skupina chráněna ve formě vhodného esteru, následně je hydroxylová skupina substituována bromem pomocí POBr3 a na závěr se provádí hydrolýza, která poskytuje lesinurad vzorce 1, viz schéma 2. Postup není uveden v příkladech vynálezu, ale pouze ve schématu a nejsou uvedeny ani jeho výtěžky, ani jiné experimentální detaily.

xch₂coor

Schéma 1 • ·

cich₂cooh

N-N

(1)

1. PROTEKCE

2. BROMACE

3. DEPROTEKCE

Schéma 2

Patent W02014008295 popisuje další možnost převedení isothiokyanátu vzorce 3 na lesinurad (1). Intermediát vzorce 10 získaný reakcí sloučeniny vzorce 3 s formylhydrazinem je cyklizován pomocí uhličitanu draselného na thiol vzorce 11. Ester vzorce 12 získaný alkylací thiolu vzorce 11 vhodným alkylhalogenacetátem je potom bromací pomocí jV-bromsukcinimidu (NBS) převeden na ester lesinuradu vzorce 6, jehož hydrolýza poté poskytuje lesinurad (vzorec 1), viz schéma 3. K přípravě lesinuradu lze podle přihlášek patentů WO2014198241 a W02015054960 využít i některých jiných substrátů a alternativních způsobů bromace.

• · · • ·· • · · • ·· • ·· • · • · · ·

xch₂coor

N-N

(12)

Přihláška patentu WO2014198241 popisuje provedení bromační reakce na sloučeninách obecného vzorce 13. Tato reakce vede k derivátům lesinuradu obecného vzorce 14. Substituent R ve vzorcích 13 a 14 značí skupiny OR nebo NR R , přičemž R může být C1-C6 alkyl nebo fenyl, R³ a R⁴ mohou být nezávisle na sobě vodík, alkyly nebo cykloalkyly.

N-N

[Br]

N-N

Schéma 4

Přihláška patentu WO2015054960 popisuje modifikovanou bromaci sloučenin obecného vzorce 15 pomocí komplexu bromu v pyridinu. Jako vhodné rozpouštědlo byl použit • ·

acetonitril. Reakce vedla k produktům obecného vzorce 16, z nichž některé lze dle autorů použít pro přípravu lesinuradu, avšak experimentální detaily reakcí sloučeniny vzorce 16 směrem k lesinuradu nebyly blíže popsány. Substituent R ve vzorcích 15 a 16 např. značí skupiny -COCH₃, -CH₂CN, -CH₂Ph, -CH₂CH₂OH, -CH₂COOMe nebo -CH₂COOEt.

Vedle chemických syntéz mají značný technický i ekonomický význam pevné formy lesinuradu a jeho solí, zejména formy krystalické, které mohou sloužit buď jako vhodné farmaceutické formy, nebo mohou být využitelné pro izolaci lesinuradu z reakčních směsí a pro dosažení chemické čistoty.

Dosud bylo popsáno několik pevných forem lesinuradu, jeho solí s kovy nebo jeho kokrystalů s dalšími komponentami. Pevné formy volné kyseliny lesinuradu vzorce 1, včetně polymorfu a solvátů, jsou popsány v patentových přihláškách WO2012092395, WO2015075561 a WO2015095703.

N-N

(1-M)

N-N // 'V v

Pevné formy solí lesinuradu s kovy (1-M, M značí kov), jmenovitě kovy volenými z řady sodík, draslík, hořčík, vápník, zinek a hliník, jsou popsány v patentových přihláškách

WO2015075561, WO2011085009, US20100056464, US20100056465, W02009070740, CN104447589, CN103755651, W02012050589.

Pevné formy solí lesinuradu se silnými kyselinami (1-HA, HA značí kyselinu), jmenovitě kyselinami volenými z řady kyselina chlorovodíková, methansulfonová, ethansulfonová,

1,2-ethandisulfonová a 2-hydroxyethansulfonová jsou popsány v patentové přihlášce CN103755651.

Pevné formy solí lesinuradu s nejméně jednou další komponentou tvořící pevný stav (1-G, G značí komponentu, která je součástí pevné formy lesinuradu), zejména pak krystalické soli či kokrystaly s komponentami volenými z řady piperazin, /V-cyklohexylcyklohexanamin, D-glucitol, L-arginin, trichlormethan, 2-methyltetrahydrofuran a l,5-dihydro-477_pyrazolo[3,4-<7]pyrimidin-4-on, jsou popsány v patentových přihláškách WO2015075561,

CN104447589, CN103755651, W02012050589, W02009070740.

Předkládaný vynález představuje výhodný a průmyslově využitelný způsob provedení přípravy lesinuradu založený na novém a překvapivém způsobu provedení bromační reakce a na vysoce efektivní izolaci dosud nepopsaných krystalických solí lesinuradu.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká nového a efektivního způsobu výroby 2-(5-brom-4-(lcyklopropylnaftalen-4-yl)-47Ll,2,4-triazoi-3-ylthio)octové kyseliny vzorce 1 známé pod generickým názvem lesinurad. Nový způsob je založen na překvapivé bromaci 2-(4-(1- cyklopropylnaftalen-4-yl)-477-l,2,4-triazol-3-ylthio)octové kyseliny vzorce 17 chráněné trialkylsilylovou skupinou.

Přímá bromace karboxylové kyseliny vzorce 17 pomocí vhodného bromačního činidla, např. NBS nebo pomocí komplexu bromu s pyridinem, se ukázala jako neprůchozí v důsledku nestability karboxylové kyseliny při této reakci, kdy docházelo ke vzniku několika nežádoucích produktů, aniž by vznikal cílový lesinurad.

Klíčovým krokem nové syntetické cesty je překvapivá, efektivní a vysoce selektivní bromace nového meziproduktu vzorce 17, který je in šitu chráněn vhodnou ochrannou skupinou. Jako mimořádně vhodná ochranná skupina se ukázala trialkylsilylová skupina, která snadno nahrazuje vodík v karboxylové funkční skupině za vzniku dostatečně stabilního intermediátů vzorce 18, kde R¹, R², R³ značí libovolný alkyl, cykloalkyl nebo aryl, který je ve srovnání s intermediátem vzorce 17 odolný vůči nežádoucím reakcím. Při následné bromaci vzorce 18 vzniká intermediát vzorce 19, který je ovšem natolik labilní, že odštěpuje chránící skupinu již v průběhu zpracování reakční směsi po proběhlé bromaci, takže se velmi snadno a bez nutnosti dalšího syntetického kroku izoluje přímo lesinurad nebo jeho krystalická sůl, viz schéma 6.

3

R , R a R mohou být nezávisle na sobě alkyl, cykloalkyl nebo aryl, X značí vhodnou odstupující skupinu.

Podrobný popis vynálezu

Bromační reakce použitelné pro chemickou syntézu lesinuradu, při kterých byl bromem substituován vodík vázaný na 477-1,2,4-triazolovém cyklu, byly popsány na substrátech obecných vzorců 12 (R značí alkyl), 13 (R¹ značí skupiny OR² nebo NR³R⁴, přičemž R² může být alkyl C1-C6 nebo fenyl, R³ a R⁴ mohou být nezávisle na sobě vodík, alkyly nebo cykloalkyly) a 15 (kde substituent R např. značí skupiny volené z řady -COCH₃, -CH₂CN, -CH₂Ph, -CH₂CH₂OH, -CH₂COOMe nebo -CH₂COOEt).

N-N

(12)

V literárních zdrojích jsme však nenalezli zmínku o analogické bromační reakci 2-(4-(1-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4f/-l,2,4-triazol-3-ylthio)octové kyseliny vzorce 17, která je sloučeninám vzorců 12, 13 a 15 strukturně velmi podobná. Dokonce nebyla popsána ani chemická syntéza této kyseliny. Přitom úspěšné využití přímé bromace kyseliny vzorce 17 v syntéze lesinuradu nabízí výhodu úspory reakčního kroku. Předložený vynález byl motivován možností využití kyseliny vzorce 17, což dávalo šanci na zjednodušení stávající syntézy lesinuradu a získání výhody v podobě kratší a tedy i levnější syntetické cesty.

Nový způsob, který je předmětem vynálezu, může vycházet ze známého intermediátů syntézy lesinuradu vzorce 1, tj. l-cyklopropyl-4-isothiokyanatonaftalenu vzorce 3 nebo z komerčně dostupného thiolu vzorce 11, který se s výhodou alkyluje pomocí halogenoctové kyseliny na kyselinu vzorce 17, viz schéma 7.

Schéma 7 • * · · · · · • ······ ·· ·· • · · · · · ···· · ·· ·· ·

Patent W02014008295 (schéma 3) popisuje jednu z nej efektivnějších syntéz lesinuradu vzorce 1. Nevýhodou této syntézy je, že bromace vzhledem k nestabilitě bočního řetězce obsahujícího síru, probíhá pouze s alkylestery vzorce 12 a produkty tohoto kroku jsou obtížně krystalující alkylestery lesinuradu vzorce 6. Aby byla izolace alkylesterů vzorce 6 uskutečnitelná v rozumném výtěžku, je třeba poměrně složité zpracování reakční směsi, při kterém je potřeba odstranit i stopy nedoreagovaného A-bromsukcinimidu (NBS) a uvolněného sukcinimidu. Kromě problému s izolací alkylesterů lesinuradu vzorce 6 je třeba provést ještě jeden syntetický stupeň pro získání finálního produktu. V tomto případě se jedná o alkalickou hydrolýzu esteru s následným okyselením reakční směsi a izolaci uvolněného lesinuradu. Analogické obtíže mohou být spojeny i s alternativními bromacemi na podobných sloučeninách probíhající dle schémat 4 a 5, avšak izolace finálního lesinuradu nebyla v těchto případech experimentálně popsána.

Jak již bylo uvedeno výše, na počátku hledání nového procesu existovala šance eliminovat popsaný technický problém pomocí přímé bromace kyseliny vzorce 17. Výsledný proces by se tímto způsobem zkrátil o jeden krok a po proběhlé bromaci by bylo možné z reakční směsi izolovat lesinurad nebo jeho sůl. Avšak při pokusech o přímou bromaci volné kyseliny vzorce 17 lesinurad překvapivě vůbec nevznikal (viz schéma 8), naopak vznikala komplexní směs zejména tří majoritních látek a celé řady dalších minoritních nečistot. Tyto produkty jsou výsledkem konkurenčních reakcí (patrně oxidací), které probíhají rychleji než předpokládaná bromační reakce. Pomocí LC-MS analýzy reakční směsi byly navrženy struktury některých z těchto rozkladných produktů vzorců 20a-c, viz schéma 8.

Schéma 8

Nepříznivý výsledek v případě pokusů o přímou bromaci kyseliny vzorce 17 ukazoval na nutnost chránění karboxylové funkční skupiny pomocí vhodné ochranné skupiny. Efektivní řešení tohoto problému bylo nakonec dosaženo pomocí chránění kyseliny vzorce 17 ve formě trialkylsilylesteru meziproduktu vzorce 18, viz schéma 9. Třebaže jsou trialkylsilylestery chemicky velmi nestabilní sloučeniny, zejména při styku s vodou, tak při bromační reakci překvapivě sehrály zásadní roli při účinném chránění nestabilního postranního řetězce v molekule kyseliny vzorce 17.

OSiR¹R²R³

Výhodou námi nalezeného způsobuje také snadná příprava trialkylsilylesteru vzorce 18 in šitu, která spočívala v přídavku odpovídajícího množství silylačního činidla a báze k roztoku • · · · · · · • ······ ·· ·· • · · · · · ···· · ·· ·· * kyseliny vzorce 17 v bezvodém organickém rozpouštědle, s výhodou v bezvodém tetrahydrofuranu (THF), těsně před přídavkem bromačního činidla. Zvláště vhodným silylačním činidlem je komerčně dostupný MO-bis(trimethylsilyl)acetamid (BSA) a příbuzné látky, které nepotřebují k úspěšnému provedení chránící reakce přidání dodatečné báze.

BSA

Mezi další silylační činidla použitelná pro chránění kyseliny vzorce 17 patří zejména činidla volená z řady:

allyltrimethylsilan, N, O-bis(trimethylsilyl)acetamid, bis(trimethylsilyl)karbamát, AA^Lbis(trimethylsilyl)formamid, M-V-bis(trimethylsilyl)methylamin, bis(trimethylsilyl)sulfát, A,O-bis(trimethylsilyl)trifluoracetamid, A,A’-bis(trimethylsilyl)močovina, (ethylthio)trimethylsilan, ethytrimethylsilylacetát, hexamethyldisilan, hexamethyldisilazan, hexamethyldisiloxan, hexamethyldisilthian, (isopropenyloxy)trimethylsilan, methoxy-2methyl-1 -trimethylsiloxypropen, (methylthio)trimethylsilan, methyl-3 -trimethylsiloxy-2butenoát, A-methyl-A-trimethylsilylacetamid, methyltrimethylsilylacetát, A-methyl-Atrimethylsilylheptafluorbutyramid, A-methyl-N-trimethylsilyltrifluoracetamid, (fenylthiojtrimethylsilan, trimethylbromosilan, trimethylchlorsilan, trimethyljodsilan, 4trimethylsiloxy-3-penten-2-on, 7V-(trimethylsilyl)acetamid, TMS-acetamid, trimethylsilylacetát, trimethylsilylazid, trimethylsilylbenzensulfonát, trimethylsilylkyanid, N(trimethylsilyl)diethylamin, A-(trimethylsilyl)dimethylamin, trimethylsilyl-ΛζΑdimethylkarbamát, l-(trimethylsilyl)imidazol, trimethylsilylmethansulfonát, 4(trimethylsilyl)morfolin, 3-trimethylsilyl-2-oxazolídinon, trimethylsilylperfluoro-1 butansulfonát, TMS-nonaflát, trimethylsilyltrichloracetát, trimethylsilyltrifluoracetát, trimethylsilyltrifluormethansulfonát, 2-(trimethylsilyl)ethanol, 2-(trimethylsilyljethoxymethylchlorid.

Vlastní bromační reakci bylo možné zahájit bezprostředně po přídavku silylačního činidla k roztoku kyseliny vzorce 17. Zahájení bromační reakce spočívalo v přídavku vhodného «

• · · • · • · • · ·· · ·· ··· ...» · • · · · · · · • ······ ·· ·· • · 9 9·· ···· · ·· ·· · bromačního činidla k roztoku meziproduktu trialkylsilylesteru vzorce 18, viz schéma 10. S ohledem na komerční dostupnost a snadnou manipulaci byl jako vhodné bromační činidlo preferován V-bromsukcinimid (NBS). Avšak pro účely této reakce lze užít i řadu jiných bromačních činidel, např. pyridinium tribromid (např. generovaný in šitu při reakci bromu s pyridinem), benzyltrimethyl amonium tribromid, l,3-dibrom-5,5-dimethylhydantoin (DBDMH) nebo dibrombarbiturovou kyselinu.

o

OSiR¹R²R³

Bromační reakce kyseliny vzorce 17 s přispěním silylačních činidel probíhala selektivně, avšak bez přídavku silylačního činidla vznikala za jinak shodných podmínek komplexní směs, která neobsahovala cílový produkt. Vedle selektivity reakce je důležitým parametrem při bromaci intermediátu vzorce 18 doba reakce potřebná k dosažení optimální konverze výchozí látky, preferenčně konverze 99,9 % a vyšší. Technicky výhodným aspektem této bromační reakce je možnost jednoduchého řízení reakční rychlosti, resp. doby reakce potřebné pro maximální konverzi výchozí látky. Rychlost reakce zvyšuje zejména přebytek bromačního činidla, vyšší koncentrace reagujících komponent (tj. nižší zředění) a zvýšená teplota reakční směsi. S ohledem na dosažení maximální konverze v přijatelném čase byly jako technicky výhodné podmínky pro reakci v soustavě výchozí látka vzorce 17, rozpouštědlo (THF), silylační činidlo (BSA), bromační činidlo (NBS) a teplota reakční směsi nalezeny následující hodnoty: 1 ekvivalent látky vzorce 17, 7-16 ml THF na gram výchozí látky vzorce 17, 1,1 až 2,0 ekvivalenty BSA, 1,5 až 3,0 ekvivalenty NBS a teplota v rozmezí 25 až 60 °C.

Izolace produktu může být zahájena ihned po dosažení optimální konverze při bromační reakci. Součástí této izolace je odštěpení trialkylsilylové skupiny z intermediátu vzorce 19, viz schéma 11. Výhodou pro deprotekci trialkylsilylesteru vzorce 19 se ukázala jeho chemická nestabilita, zejména ve styku s vodou. Tato nestabilita je důvodem toho, že intermediát vzorce 19 odštěpuje chránící skupinu již v průběhu zpracování reakční směsi po proběhlé bromaci, takže se velmi snadno a bez nutnosti dalšího syntetického kroku izoluje přímo lesinurad nebo jeho krystalická sůl. K deprotekcím trialkylsilylové skupiny z intermediátů vzorců 18 a 19 dochází dokonce natolik snadno, že tyto sloučeniny nejsou vůbec pozorovány ani v HPLC chromatogramech reakčních směsí, kde jsou jak v průběhu silylace, tak v průběhu bromace zaznamenány pouze výchozí kyselina vzorce 17 a výsledný lesinurad vzorce 1.

(19)

Izolace finálního produktu může probíhat tak, že se vakuově oddestiluje rozpouštědlo použité pro bromační reakci, ke zbytku se přidá rozpouštědlo vhodné pro izolaci produktu. Následně se provedou propírky získaného roztoku vodou, kdy jednak dochází k deprotekci intermediátů vzorce 19, jednak se vymývají ve vodě rozpustné příměsi, jako jsou zbytky použitých činidel (NBS, BSA), sukcinimid (ten se při bromaci uvolňuje z NBS), látek vznikajících rozkladem použitých činidel a zbytků ve vodě rozpustných rozpouštědel (THF). Promytý roztok lesinuradu, zbavený ve vodě rozpustných nečistot, může být dále využit k izolaci pevného lesinuradu nebo s řadou výhod pro izolaci dobře krystalujících solí lesinuradu. Za tímto účelem byly nalezeny dvě nové, dobře krystalující soli lesinuradu a vyvinut proces jejich krystalizace. Jmenovitě se jedná o sůl lesinuradu s isopropylaminem vzorce 21 a o sůl lesinuradu s guanidinem vzorce 22. Výhodou provedení krystalizací solí lesinuradu je jednak jejich efektivita což má za následek vyšší výtěžek izolace ve srovnání s přímou izolací lesinuradu. Druhou výhodou je čistící efekt krystalizací, kdy dochází ke zvýšení chemické čistoty izolované krystalické soli, neboť ostatní nečistoty přednostně zůstávají rozpuštěny v použitém rozpouštědle.

• · • ·

Pevné formy odvozené od lesinuradu, zejména pak ty krystalické, mají mimořádný technický i ekonomický význam, neboť umožňují získat substanci použitelnou pro farmaceutické účely. Experimentálně bylo zjištěno, že krystalizační schopnost amoniových solí lesinuradu není obecnou vlastností všech amoniových solí. Ze zkoumaných dusíkatých bází se překvapivě podařilo docílit krystalizace pouze u dvou z nich, jmenovitě u soli s isopropylaminem a guanidinem. Zkoušeno přitom bylo použití baží (jmenovitě n-propylamin, dipropylamin, isopropylamin, benzylamin, cyklohexylamin, cyklopentylamin, tbutylamin, bazická aminokyselina lysin, guanidin, nikotinamid, glycin, tromethamin, meglumin). Cyklopentylamin poskytl amorfní sůl.

Nalezení dobře krystalizující pevné formy odvozené od lesinuradu je také spojeno s výhodou spočívající v odstranění chemických nečistot pocházejících z procesu přípravy. Tyto nečistoty se přednostně koncentrují v použitém rozpouštědle, zatímco se filtrací izoluje pevná forma lesinuradu. Těmito nečistotami mohou být jednak zbytky reagujících složek nebo použitých rozpouštědel, ale též nečistoty, které vznikají v důsledku nedostatečné selektivity chemických reakcí a chemickým rozkladem produktů či intermediátů.

Výhodnost krystalizace lesinuradu ve formě solí je znázorněná v tabulce 1:

Izolovaná forma lesinuradu	Čistota dle HPLC
Volná kyselina (1)	97%
Isopropylammoniová sůl (21)	99,7 %
Guanidiniová sůl (22 a)	99,6 %
Guanidiniová sůl (22 b)	99,7 %

Nejlepších výsledků, posuzováno z hlediska výtěžku a chemické čistoty, dosahoval proces přípravy soli lesinuradu s isopropylaminem vzorce 21 při krystalizacích z roztoků • · · · · · «··· · ·· ·· · v rozpouštědlech volených z řady aceton, 2-butanon, 4-methyl-2-pentanon, acetofenon a cyklohexanon, ethanol, ethylacetát, 2-propanol, tetrhaydrofuran, methanol, voda, acetonitril.

Tabulka 2: Screening aminů pro zisk krystalické amoniové soli lesinuradu

Amin	aceton
w-propylamin	roztok
Ao-propylamin	krystalický produkt
di-propylamin	roztok
ř-butylamin	roztok
benzylamin	roztok
lysin	suspenze*
nikotinamid	roztok
glycin	suspenze*
tromethamin	roztok
cyklopentylamin	amorfní pevná látka
meglumin	roztok

*nepřešlo přes roztok

Tabulka 3: Krystalizace soli vzorce 21 lesinuradu z různých rozpouštědel

Keton	Výtěžek krystalické soli [%]
Aceton	93,4
2-butanon	82,0
4-methyl-2-pentanon	84,6
acetofenon	91,6
cyklohexanon	85,1

Pro rozlišení jednotlivých pevných fází sloučeniny je možno použít řadu analytických metod určených pro zkoumání pevného stavu, zejména to jsou metody spektrální, například rentgenová prášková difrakce (XRPD), nebo metody termoanalytické, například diferenční skenovací kalorimetrie (DSC).

Krystalické soli lesinuradu s isopropylaminem vzorce 21 a s guanidinem vzorců 22a a 22b se vyznačují řadou důležitých technických parametrů, zejména to jsou parametry, které potvrzují krystalický stav a vysokou chemickou čistotu. Krystalická sůl vzorce 21 se vyznačuje charakteristickými reflexemi v XRPD: 7,0; 16,8; 21,0; 22,9 a 24,1 ± 0,2 2-theta. Další charakteristické reflexe v XRPD jsou 9,7; 10,8; 17,9; 22,2 a 26,8 ± 0,2° 2-theta, dále teplotou tání krystalické formy podle DSC v rozmezí 156 ± 5 °C a chemickou čistotou stanovenou pomocí HPLC 99.5 % a vyšší.

Krystalická sůl vzorce 22a se vyznačuje charakteristickými reflexemi v XRPD: 7,1; 13,8;

18,5 a 24,5°± 0,2°2-theta. Další charakteristické reflexe v XRPD jsou 8.6; 15.4 and 21.7^OO± 0,2 2-theta, dále teplotou tání krystalické formy podle DSC v rozmezí 157 ± 5 °C a chemickou čistotou stanovenou pomocí HPLC 99.5 % a vyšší.

Krystalická sůl vzorce 22b se vyznačuje charakteristickými reflexemi v XRPD: 12,5; 14,7; 19,9; 23,0 a 26,4°± 0,2 2-theta. Další charakteristické reflexe v XRPD jsou 10,9; 16,2; 24,7 a 27,° ± 0,2 2-theta, dále teplotou tání krystalické formy podle DSC v rozmezí 200 ± 5 °C a chemickou čistotou stanovenou pomocí HPLC 99.5 % a vyšší.

Novým vynálezem je efektivní způsob syntetické cesty vedoucí k lesinuradu vzorce 1, viz schéma 12, který zahrnuje následující kroky:

(a) alkylaci komerčně dostupného intermediátu vzorce 11 pomocí halogenoctové kyseliny za zisku kyseliny vzorce 17, preferenčně pomocí kyseliny bromoctové nebo chloroctové a báze volené z řady hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný, uhličitan sodný, uhličitan draselný, hydroxid sodný, hydroxid draselný, triethylamin, diisopropylethylamin nebo N-methylmorfolin v polárním aprotickém rozpouštědle voleném z řady dimethylformamid (DMF), Α,Α-dimethylacetamid, dimethylsulfoxid (DMSO), A-methylpyrolidon (NMP), tris(A,A-tetramethylen)triamid kyseliny fosforečné, acetonitril, methanol, ethanol, isopropylalkohol, voda nebo v libovolných směsích těchto rozpouštědel.

(b) ochranu karboxylové funkční skupiny v kyselině vzorce 17 silylací in šitu pomocí vhodného sililačního činidla XSiR¹R²R³, kde X značí odstupující skupinu a R¹, R², R³nezávisle na sobě alkyl, cykloalkyl nebo aryl, preferenčně pomocí silylačního činidla BSA, (c) selektivní bromaci intermediátu vzorce 18 pomocí vhodného bromačního činidla, zejména bromačního činidla voleného z řady pyridinium tribromid, benzyltrimethyl amonium tribromid, l,3-dibromo-5,5-dimethylhydantoin nebo dibrombarbiturová kyselina, preferenčně pomocí bromačního činidla NBS, s výhodou za teploty 40 až 60 °C, (d) deprotekci trialkylsilyl skupiny z intermediátu vzorce 19 pomocí propírky roztoku sloučeniny vzorce 19 vodou a (e) izolaci lesinuradu vzorce 1 nebo jeho krystalické soli, preferenčně soli lesinuradu s isopropylaminem vzorce 21 nebo guanidinem vzorce 22.

Výhodnost a průmyslovou využitelnost syntézy lesinuradu vzorce 1 provedené způsobem dle schématu 12 je možné doložit v následujících bodech:

• Výchozí kyselina vzorce 17 je snadno připravitelná v jednom kroku alkylací komerčně dostupného intermediátu vzorce 11.

• Použitá činidla a rozpouštědla jsou komerčně dobře dostupná a vhodná pro manipulaci ve výrobním měřítku (THF, BSA, NBS, isopropylamin, 4-methyl-2-pentanon).

• Chránící i deprotekční reakce probíhají velmi snadno, přičemž není nutná izolace intermediátů vzorců 18a a 19a obsahujících trialkylsilylskupinu.

• Selektivita a vysoká konverze při bromační reakci.

• Úspora manipulačních kroků ve srovnání s dříve popsanými procesy.

• Efektivní izolace krystalických solí lesinuradu vzorců 21 nebo 22, což je spojeno s dobrým výtěžkem i čistícím efektem izolace.

BSA THF

NBS

Schéma 12 • · ·

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1 XRPD záznam krystalické soli lesinuradu s isopropylaminem vzorce 21, připravené dle příkladu 10. Záznam znázorňuje závislost intenzity rozptýleného záření na difrakčním úhlu 2-theta.

Obr. 2 XRPD záznam krystalické soli lesinuradu s guanidinem vzorce 22a, připravené dle příkladu 13. Záznam znázorňuje závislost intenzity rozptýleného záření na difrakčním úhlu

2-theta.

Obr. 3 XRPD záznam krystalické soli lesinuradu s guanidinem vzorce 22b, připravené dle příkladu 14. Záznam znázorňuje závislost intenzity rozptýleného záření na difrakčním úhlu 2-theta.

Příklady provedení vynálezu

Předmět vynálezu blíže osvětlí následující příklady, které ovšem nemají žádný vliv na šíři vynálezu definovanou v nárocích.

PŘÍKLAD 1

7V-(4-cyklopropylnaftalen-l-yl)thiosemikabazid vzorce 7

l-Cyklopropyl-4-isothiokyanatonaftalen vzorce 3 (17,5 g) byl rozpuštěn v tetrahydrofuranu (5 ml). Po přidání roztoku hydrazin monohydrátu (8,8 g) v ethanolu (60 ml) byla směs 20 minut míchána při 25 °C a vyloučený produkt byl odsát a sušen. Bylo získáno 18 g (87,5 %) produktu, HPLC čistota 98,9 %.

PŘÍKLAD 2

4-(4-cyklopropylnaftalen-l-yl)-4//-l ,2,4-triazol-3-thiol vzorce 11

H₃C OMe N-CH

H₃Č OMe

N-N

K roztoku A-(4-cyklopropylnaftalen-l-yl)thiosemikabazidu vzorce 7 (21,5 g) v tetrahydrofuranu byl nejprve přidán dimethylformamid-dimethylacetal (20 g) a po 3 h míchání při 25 °C ethylacetát (80 ml) a solanka (50 ml). Vyloučený produkt byl odfiltrován a sušen. Získáno bylo 19,7 g látky (90 %), HPLC čistota 99,5 %. ³H NMR (DMSO-D6), δ (ppm): 1,70 (m, 2H), 1,10 (m, 2H), 2,45 (m, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,31 (d, 2H), 7,49 (t, 1H), 7,61 (t, 1H), 8.05 (s, 1H), 8,45 (d, 1H). ¹³C NMR (DMSO-D6), δ (ppm): 6,7, 12,9, 122,6, 124,2, 125,5, 125,9, 126,0, 130,1, 132,5, 133,4,139,0, 142,0, 167,5.

PŘÍKLAD 3

2-(4-(1-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4H-l,2,4-triazol-3-ylthio)octová kyselina vzorce 17

N-N

BrCH₂COOH

DMF NaHCO₃

K5,4 g 4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4/7-l,2,4-triazol-3-thiolu vzorce 11 bylo přidáno 20 ml DMF a 5 g NaHCC^. Suspenze byla míchána při 25 °C, přidáno 5 g kyseliny bromoctové a směs míchána 3 hodiny. Poté bylo přidáno 20 ml vody, 10 ml ethylacetátu, 30 ml 2M kyseliny chlorovodíkové a směs 30 minut míchána. Pak provedena filtrace vyloučeného produktu, promytí koláče vodou (2x20 ml), ethylacetátem (2x10 ml), etherem (2x10 ml) a sušení produktu ve vakuové sušárně. Získáno bylo 6,1 g látky (93 %) o čistotě

99,5 % (HPLC). *H NMR (DMSO-D6), δ (ppm): 0,88 (m, 2H), 1,14 (m, 2H), 2,55 (m, 1H), 4.01 (s, 2H), 7,21 (d, 1H), 7,41 (d, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,64 (t, 1H), 7,75 (t, 1H), 8,57 (d, 1H),

·. ···· .·· • · · · · *

8.89 (s, 1H), 12_;94 (bs, 1H). ^l3C NMR (DMS0-D6), δ (ppm): 7,0^7,3, 13,0, 122,1, 122,6,

125.0, 125,5, 127,2, 127,4, 127.8, 128,8, 133_;4, 142,3, 146.5,150,5, 169.3.

PŘÍKLAD 4

2-(4-( l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-477-l,2,4-triazol-3-ylthio)octová kyselina vzorce 17

EtOH H₂O NaCO₃ cich₂cooh

N-N

Kmíchané suspenzi 4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4H-l,2,4-triazol-3-thiolu vzorce 11 (2,7 g, 10 mmol) v ethanolu (25 ml) byl přidán roztok uhličitanu sodného (1,1 g) ve vodě (25 ml) a směs byla míchána 30 minut za laboratorní teploty. Poté byl během 15 minut přikapán roztok získaný rozpuštěním kyseliny chloroctové (1,13 g, 12,5 mmol) ve vodě (10 ml) zneutralizovaný uhličitanem sodným (1,35 g, 12,7 mmol). Vzniklá reakční směs byla míchána 4 hodiny za laboratorní teploty a poté při teplotě 50 °C. Po úplné konverzi výchozí látky vzorce 11 dle HPLC, byla reakční směs ochlazena a okyselena 10 % HC1. Nerozpustný podíl byl odsát, promyt vodou a sušen ve vakuové sušárně. Získáno bylo 3,1 g látky (95 %) o HPLC čistotě 97,3 %, která byla použita k následné reakci bez dalšího čištění.

PŘÍKLAD 5

N-N

BrCH₂COOH

CH₃CN

Et₃N

N-N

(17)

K 5,4 g 4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-427-l,2,4-triazol-3-thiolu vzorce 11 bylo přidáno 30 ml acetonitrilu, 5 ml triethylaminu a roztok kyseliny bromoctové (5 g) v acetonitrilu (20 ml). Směs míchána 4 hodiny při 50 °C. Poté bylo přidáno 40 ml vody, 10 ml 1M kyseliny chlorovodíkové a směs 30 minut míchána. Pak provedena filtrace vyloučeného produktu,

promytí koláče vodou (2x20 ml), diethyletherem (2x10 ml) a sušení produktu ve vakuové sušárně. Získáno bylo 5,7 g látky (87 %) o čistotě 98,1 % (HPLC).

PŘÍKLAD 6

2-(4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4/7-l,2,4-triazol-3-ylthio)octová kyselina vzorce 17

Ke 4 g vzorce 6a bylo přidáno 20 ml metanolu, 0,4 g hydroxidu lithného a směs míchána 60 minut při 45 °C. Pak byla směs ochlazena na 25 °C a okyselena přídavkem 2M kyseliny chlorovodíkové. Rozpouštědlo bylo vakuově odpařeno, ke zbytku přidán dichlormethan (25 ml) a suspenze míchána 10 minut při teplotě varu. Poté byla provedena filtrace, promytí koláče 10 ml dichlormethanu. Filtrační koláč byl smíchán s 50 ml vody, suspenze míchána při teplotě 65 °C, provedeno okyselení na pH 1 až 2 pomocí přídavku 2M kyseliny chlorovodíkové. Pak byla provedena filtrace, koláč promyt vodou (2x25 ml), ethylacetátem (2x15 ml), diethyletherem (2x25 ml) a vakuově sušen. Získáno bylo 3,4 g bílého prášku (89 %) o čistotě 99,2 % (HPLC).

PŘÍKLAD 7

2-(5-brom-4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4jř7-l,2,4-triazol-3-ylthio)octová kyselina vzorce 1

BSA THF

NBS

2-(4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-477-l,2,4-triazol-3-ylthio)octová kyselina vzorce 17 (1 g) byla rozmíchána v tetrahydrofuranu (10 ml), přidal se N, <7-Bis(trimethylsilyl)acetamid (1,9 g) a bromsukcinimid (0,8 g). Roztok se míchal při 25 °C 24 h, po přidání 0,3 g hydroxidu draselného ve vodě (10 ml) se roztok vytřepal toluenem (5 ml), vodná fáze se okyselila kyselinou octovou (0,4 g) a extrahovala ethylacetatem (10 ml), po odpaření a krystalizací z ethanolu se získalo 1,14 g (92 %) lesinuradu vzorce 1.

PŘÍKLAD 8

N-N N-N

(17) (1)

Obecný způsob: K 2-(4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4/7-l,2,4-triazol-3-ylthio)octové kyselině vzorce 17 se přidal tetrahydrofuran (THF) a 7V,O-bis(trimethylsilyl)acetamid (BSA). Směs byla míchána při 25 °C 5 až 10 minut a monitorována pomocí HPLC. Následně přidán bromsukcinimid (NBS), získaný roztok byl míchán, zahříván na zvolenou teplotu a průběh reakce (konverze výchozí látky) monitorován pomocí HPLC.

Optimalizační experimenty:

(a) Reakční podmínky: 15,5 ml THF na g výchozí látky, 2 ekvivalenty BSA, 2 ekvivalenty NBS, teplota 25 °C, konverze výchozí látky 30 minut po přídavku NBS byla přibližně 22 %, po 20 hodinách 85 %.

(b) (c) Reakční podmínky: 7,7 ml THF na g výchozí látky, 1,1 ekvivalentu BSA, 3 ekvivalenty NBS, teplota 40 °C, konverze výchozí látky 30 minut po přídavku NBS byla přibližně 100 %.

(d) Reakční podmínky: 7,7 ml THF na g výchozí látky, 1,25 ekvivalentu BSA, 1,5 ekvivalentu NBS, teplota 40 °C, konverze výchozí látky 30 minut po přídavku NBS byla přibližně 65 %, po 90 minutách přibližně 100 %.

(e) Reakční podmínky: 7,7 ml THF na g výchozí látky, 1,25 ekvivalentu BSA, 1,5 ekvivalentu NBS, teplota 50 °C, konverze výchozí látky 30 minut po přídavku NBS byla přibližně 91 %, po 90 minutách přibližně 100 %.

PŘÍKLAD 9

Bromace kyseliny vzorce 17 bez užití BSA, srovnávací experiment • ·

K 2-(4-( l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4J¥-l,2,4-triazol-3-ylthio)octové kyselině vzorce 17 se přidal tetrahydrofuran (7,7 ml THF na g výchozí látky). Směs byla míchána při 25 °C 5 až 10 minut a monitorována pomocí HPLC. Následně přidán bromsukcinimid (3 ekvivalenty), získaný roztok byl míchán, zahříván na zvolenou teplotu (40 °C) a průběh reakce (konverze výchozí látky) monitorován pomocí HPLC. Konverze výchozí látky 30 minut po přídavku NBS byla přibližně 99 %, avšak vznikala komplexní směs mnoha látek nikoliv lesinurad vzorce 1.

PŘÍKLAD 10

Isopropylamoniová sůl 2-(5-brom-4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4/7-l,2,4-triazol-3-ylthio)--octové kyseliny vzorce 21

N-N

(17)

N-N

(D

⁰ (CH₃)₂CHNH₂

4-methyl-2pentanon

(21)

K 2-(4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4H-l,2,4-triazoI-3-ylthio)octové kyselině vzorce 17 (3,25 g) se přidal tetrahydrofuran (25 ml) a yV,(9-Bis(trimethylsilyl)acetamid (3,1 ml, 1,25 ekvivalentu). Směs byla míchána při 25 °C 5 až 10 minut a monitorována pomocí HPLC. Následně přidán bromsukcinimid (2,67 g, 1,5 ekvivalentu), získaný roztok byl míchán, zahříván na zvolenou teplotu (50 °C) a průběh reakce (konverze výchozí látky) monitorován pomocí HPLC. Konverze výchozí látky vzorce 17 90 minut po přídavku NBS byla přibližně 100 %. K reakční směsi byl přidán 4-methyl-2-pentanon (100 ml), vakuově odpařen THF, získaný roztok promyt vodou (50 ml), roztokem 10 % thiosíranu sodného (25 ml), opět vodou (50 ml) a sušen nad síranem sodným. Následně provedena filtrace sušidla, přídavek isopropylaminu (2 ml) k filtrátu a míchání této směsi při 25 °C. Vyloučený produkt byl odfiltrován, promyt 4-methyl-2-pentanonem (20 ml) a vakuově sušen. Získáno bylo 3,96 g • ·

.........

soli (86 %) o čistotě 99,7 % (HPLC). *H NMR (DMS0-D6), δ (ppm): 0,88 (m, 2H), 1_?11 (d,

6H), 114 (m, 2H), 2.54 (m, 1H), 3.18 (m, 1H), 3.69 (m, 2H), 7,12 (d, 1H), 7.43 (d, 1H), 7,60 (d, 1H), 7.64 (t, 1H), 7_f73 (t, 1H), 8_f01 (bs, 3H), 8,57 (d, 1H). ¹³C NMR (DMSO-D6), δ (ppm): 7.2, 7,3, 13,0, 20.6, 42,6, 121,9, 122,8, 125,1, 126,8, 127,1, 127,2, 128,0, 128 8, 130,4,133,5,142.8,155.8,168.3.

í f I I I

PŘÍKLAD 11 (lesinurad sůl IPA/ screening krystalických amoniových solí)

V 10 ml acetonu rozpouštědla byl rozpuštěn lesinurad vzorce 1 (0,2 g), proveden přídavek aminu (1,1 ekvivalentu) a směs míchána při 25 °C. Vyloučený produkt byl odfiltrován, promyt použitým rozpouštědlem a vakuově sušen. Výsledky krystalizace pro zkoušené aminy: n-propylamin (produkt nekrystaluje), Ao-propylamin (produkt krystaluje, výtěžek 93,4 %), di-propylamin (produkt nekrystaluje), t-butylamin (produkt nekrystaluje), benzylamin (produkt nekrystaluje), cyklohexylamin (produkt nekrystaluje), lysin (suspenze - nepřešlo přes roztok).

PŘÍKLAD 12 (lesinurad sůl IPA - krystalizace z různých ketonů)

Isopropylamoniová sůl 2-(5-brom-4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4.ř/-l,2,4-triazol-3-ylthio)-octové kyseliny vzorce 21

V 10 ml organického rozpouštědla byl rozpuštěn lesinurad vzorce 1 (0,2 g), proveden přídavek isopropylaminu (1,1 ekvivalentu) a směs míchána při 25 °C. Vyloučený produkt byl odfiltrován, promyt použitým rozpouštědlem a vakuově sušen. Výtěžky krystalizace ve zkoušených rozpouštědlech: aceton (93,4 %), 2-butanon (82,0 %), 4-methyl-2-pentanon (84,6 %), acetofenon (91,6 %) a cyklohexanon (85,1 %).

PŘÍKLAD 13

Guanidiniová sůl 2-(5-brom-4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-477-l,2,4-triazol-3-ylthio)octové kyseliny vzorce 22a

Navážka lesinuradu 100 mg (0,2409 mmol) byla za intenzivního míchání při pokojové teplotě rozpuštěna v 7 ml acetonitrilu. K tomuto roztoku byl přidán roztok guanidinu, který vznikl rozpuštěním 23 mg (0,2528 mmol) guanidine karbonátu v 0,3 ml vody. Vzniklá suspenze byla ponechána míchat po dobu 48 hod. za pokojové teploty. Pevný podíl byl oddělen pomocí filtrace a promyt 5 ml acetonitrilu. Produkt byl sušen ve vakuové sušárně při tlaku 130 mBar a teplotě 40 °C po dobu 16 hod. RTG práškový záznam na obr. 2. Teplota tání podle DSC 157 °C. Stechiometrický pomě lesinurad:guanidin určený pomocí *H NMR spektroskopie odpovídá poměru (1:1). HPLC čistota 97,8 %. Výtěžek 86,35 mg (73,9 %).

PŘÍKLAD 14

Guanidiniová sůl 2-(5-brom-4-(l -cyklopropylnaftalen-4-yl)-477-l ,2,4-triazol-3-ylthio)octové kyseliny vzorce 22b

Navážka lesinuradu 110 mg (0,2650 mmol) byla za intenzivního míchání při pokojové teplotě rozpuštěna v 8 ml ethylacetátu. K tomuto roztoku byl za intenzivního míchání přidán roztok guanidinu, který vznikl rozpuštěním 25,1 mg (0,2692 mmol) guanidine karbonátu v 0,3 ml vody. Vzniklá suspenze byla ponechána míchat po dobu 48 hod. za pokojové teploty. Pevný podíl byl oddělen pomocí filtrace a promyt 5 ml ethylacetátu. Produkt byl sušen ve vakuové sušárně při tlaku 130 mBar a teplotě 40 °C po dobu 16 hod. RTG práškový záznam na obr. 3. Teplota tání podle DSC 200 °C. Stechiometrický pomě lesinurad:guanidin určený pomocí *H NMR spektroskopie (1:1). HPLC čistota 97,6 %. Výtěžek 102.68 mg (79,9 %).

ANALYTICKÉ METODY A DATA (A, B, C a D):

A Vysokoúčinná kapalinová chromatografíe (HPLC)

HPLC chromatogramy byly měřeny na přístroji EliteLachrom L-2450 firmy Hitachi. Použita byla kolona LichroCART 250-4 naplněná stacionární fází RP-18e (5 pm), při teplotě 25 °C. Jako dvousložková mobilní fáze byl použit acetonitril (A) a 0,02M roztok dihydrogenfosforečnanu draselného jehož pH bylo upraveno pomocí kyseliny fosforečné na hodnotu 2,7. Měření byla provedena v gradientovém modu s rychlostí toku mobilní fáze 1.0 ml/min. Složení fází na počátku bylo 40 % (A) a 60 % (B), poté byl poměr složek držen 1 minutu, pak změněno na 80 % (A) a 20 % (B) během 14 minut, poté byl poměr složek držen 15 minut, pak změněno na 40 % (A) a 60 % (B) během 3 minut, poté byl poměr složek držen 2 minuty (celkový čas analýzy byl 35 min.). Použita byla detekce při 290 nm. Pro přípravu analyzovaných vzorků byl jako rozpouštědlo použit acetonitril, injektováno bylo 10-20 pl připraveného roztoku.

• · · • · . . · · .:.. : ·· ··

B RTG prášková difrakce (XRPD)

Difraktogramy byly získány na práškovém difraktometru X'PERT PRO MPD PANalytical, použité záření CuKa (λ=1.542 A), excitační napětí: 45 kV, anodový proud: 40 mA, měřený rozsah: 2 - 40° 20, velikost kroku: 0,01° 20 při setrvání na reflexi 0,5 s, měření probíhalo na plochém vzorku o ploše/tloušťce 10/0,5 mm. Pro korekci primárního svazku byly užity 0,02 rad Sollerovy clonky, 10 mm maska a 1/4° fixní protirozptylová clonka. Ozářená plocha vzorkuje 10 mm, byly užity programovatelné divergenční clonky. Pro korekci sekundárního svazku byly užity 0,02 rad Sollerovy clonky a 5,0 mm protirozptylová clonka.

Krystalická forma lesinuradu s isopropylaminem vzorce 21 (připravená podle příkladu 10) je charakterizována reflexemi uvedenými v tabulce 4. Tabulka 4 zahrnuje reflexe, jejichž hodnota relativní intenzity je vyšší než 1 %. Charakteristické difrakční píky krystalické formy lesinuradu s isopropylaminem podle předloženého vynálezu s použitím záření CuKa jsou: 7,0; 16,8; 21,0; 22,9 a 24,1 ± 0,2 2-theta. Další difrakční píky s použitím záření CuKa jsou: 9,7; 10,8; 17,9; 22,2 a 26,8 ± 0,2° 2-theta. RTG práškový záznam je uveden na obrázku 1.

Tabulka 4

Poloha [°2Th.]	Mezirovinná vzdálenost [Á] [A]=0,lnm	Rel. intenzita [%]
7,00	12,619	57,4
9,66	9,146	50,8
10,29	8,592	26,1
10,76	8,217	49,9
11,97	7,388	11,3
13,26	6,671	5,7.
14,08	6,284	8,5
14,68	6,029	11,7
16,81	5,271	100,0
17,13	5,171	12,4
17,41	5,089	12,4

Poloha [°2Th.]	Mezirovinná vzdálenost [A] [Á]=0,lnm	Rel. intenzita [%]
17,89	4,954	32,1
19,49	4,551	8,3
20,47	4,336	6,6
20,97	4,234	50,6
22,18	4,005	30,6
22,90	3,881	63,8
23,10	3,848	25,0
24,10	3,690	63,9
25,02	3,557	15,9
25,63	3,473	20,7
26,14	3,406	10,6
26,75	3,329	31,7
27,35	3,258	7,6
27,88	3,198	10,5
28,43	3,137	6,2
28,87	3,090	14,1
30,12	2,965	4,5
30,77	2,903	5,1
31,62	2,827	5,2
32,74	2,734	4,5
33,98	2,636	5,7
34,37	2,607	5,6
35,01	2,561	8,0
35,36	2,536	6,7
35,99	2,493	6,8
37,23	2,414	7,2

Krystalická forma lesinuradu s guanidinem vzorce 22a (připravená podle příkladu 13) je charakterizována reflexemi uvedenými v tabulce 5. Tabulka 5 zahrnuje reflexe, jejichž • · hodnota relativní intenzity je vyšší než 1 %. Charakteristické difrakční píky krystalické formy lesinuradu s guanidinem podle předloženého vynálezu s použitím záření CuKa jsou: 7,1; 13,8;

18,5 a 24,5°± 0,2°2-theta. Další difrakční píky s použitím záření CuKa jsou: 8_f6; 15^4 and 21,7⁰¾ 0,2 2-theta. RTG práškový záznam je uveden na obrázku 2.

Tabulka 5

Poloha [°2Th.J	Mezirovinná vzdálenost [A] [Á]=0,lnm	Rel. intenzita [%]
4,85	18,224	12,6
6,88	12,836	18,0
7,12	12,398	27,5
7,92	11,151	15,3
8,62	10,245	28,7
9,08	9,735	10,5
9,89	8,936	10,5
10,91	8,102	10,8
11,20	7,894	9,8
11,39	7,763	9,8
13,79	6,417	100,0
14,55	6,082	10,7
15,36	5,764	29,5
16,31	5,430	16,9
17,20	5,152	5,6
18,55	4,781	25,8
19,43	4,566	22,5
19,89	4,460	17,7
20,49	4,331	6,4
21,53	4,124	10,5
22,37	3,970	9,6
23,61	3,766	17,4
24,48	3,633	86,7
25,78	3,453	11,4

Poloha [°2Th.J	Mezirovinná vzdálenost [Á] [Á]=0,lnm	Rel. intenzita [%]
27,41	3,251	8,1
28,11	3,171	7,1
28,56	3,123	7,9
29,41	3,035	5,2
30,81	2,900	7,5

Krystalická forma lesinuradu s guanidinem vzorce 22b (připravená podle příkladu 14) je charakterizována reflexemi uvedenými v tabulce 6. Tabulka 6 zahrnuje reflexe, jejichž hodnota relativní intenzity je vyšší než 1 %. Charakteristické difrakční píky krystalické formy lesinuradu s guanidinem podle předloženého vynálezu s použitím záření CuKa jsou: 12,5; 14,7; 19,9; 23,0 a 26,4°± 0,2 2-theta. Další difrakční píky s použitím záření CuKa jsou: 10,9; 16,2; 24,7 a 27,° ± 0,2 2-theta. RTG práškový záznam je uveden na obrázku 3.

Tabulka 6

Poloha [°2Th.]	Mezirovinná vzdálenost [A] [Á]=0,lnm	Rel. intenzita [%]
10,92	8,094	31,9
12,47	7,093	49,3
12,65	6,994	24,5
14,33	6,177	27,9
14,71	6,016	47,8
15,16	5,838	16,2
15,67	5,652	7,0
16,21	5,464	16,4
17,05	5,196	5,2
18,07	4,905	6,5
19,73	4,497	32,7

Poloha [°2Th.J	Mezirovinná vzdálenost [A] [Á]=0,lnm	Rel. intenzita [%]
19,91	4,457	41,9
21,06	4,216	11,2
21,82	4,070	8,8
22,97	3,869	100,0
23,51	3,780	10,7
24,03	3,700	13,8
24,74	3,596	35,1
26,02	3,422	11,1
26,39	3,375	44,6
27,56	3,234	34,1
28,32	3,149	8,9
29,15	3,061	20,8
29,33	3,043	15,9
29,72	3,004	6,9
30,67	2,913	5,1
31,39	2,847	17,5
32,01	2,794	20,1
32,94	2,717	17,5
33,79	2,650	21,2
35,68	2,514	8,8
36,34	2,470	6,1
36,85	2,437	5,4
38,77	2,321	5,3
39,03	2,306	6,7
39,45	2,282	5,7

C NMR

13

Ha C NMR spektra byla změřena na spektrometru Bruker Avance 500 s měřící frekvencí 500,131 MHz, resp. 125,762 MHz. Spektra byla měřena pro roztoky vDMSO-D6, *H • · ι i _t chemické posuny byly vztaženy na vnitřní standard TMS δ = 0 ppm, C chemické posuny byly vztaženy na středový signál DMSO-t/j (δ = 39^5 ppm).

D Diferenční skenovací kalorimetrie (DSC)

Záznamy pevných krystalických forem lesinuradu byly naměřeny na přístroji DSC Pyris 1 od firmy Perkin Elmer. Navážka vzorku do standardního Al kelímku byla mezi 2,5-3 mg a rychlost ohřevu 10 °C/min. Teplotní program, který byl použit, je složen z 1 stabilizační minuty na teplotě 0 °C a poté z ohřevu do 300 °C rychlostí ohřevu 10 °C/min. Jako nosný plyn byl použit 4.0 N₂ o průtoku 20 ml/min.

Claims

1. Způsob přípravy 2-(5-brom-4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-4H-l,2,4-triazol-3-ylthioj-octové kyseliny vzorce 1 nebo jejich solí známých pod generickým názvem lesinurad, vyznačující se tím, že sestává z následujících kroků:

(a) chránící reakce 2-(4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-47/-l,2,4-triazol-3-ylthio)-

- octové kyseliny vzorce 17 s vhodným silylačním činidlem, probíhající v přítomnosti organického rozpouštědla, poskytující meziprodukt vzorce 18, kde R¹, R², R³ značí nezávisle na sobě C1-C20 alkyl, C1-C20 alkenyl, C3-C10 cykloalkyl, C3-C10 cykloalkenyl nebo Cé-Cio aryl,

N-N (17)

OSiR¹R²R³ (b) bromace meziproduktu vzorce 18 pomocí vhodného bromačního činidla v organickém rozpouštědle za vzniku meziproduktu vzorce 19, kde R¹, R², R³ značí nezávisle na sobě C1-C20 alkyl, C1-C20 alkenyl, C3-C10 cykloalkyl, C3-C10 cykloalkenyl nebo Có-Cio aryl,

N-N (19) (c) deprotekce trialkylsilylové skupiny z meziproduktu vzorce 19, za vzniku lesinuradu vzorce 1 nebo jeho solí, a (d) izolace lesinuradu vzorce 1 nebo jeho krystalických solí, s výhodou soli lesinuradu s isopropylaminem vzorce 21 nebo guanidinem vzorce 22.

yCH₃

CH₃

NH

2. Způsob přípravy sloučeniny vzorce 1 podle nároku 1 vyznačující se tím, že silylační činidlo je zvolené z řady: allyltrimethylsilan, 7V,O-bis(trimethylsilyl)acetamid, bis(trimethylsilyl)karbamát, N, 7V-bis(trimethylsilyl)formamid, N,N-

- bis(trimethylsilyl)methylamin, bis(trimethylsilyl)sulfát, N,O-

- bis(trimethylsilyl)trifluoracetamid, N, N ’-bis(trimethylsilyl)močovina, (ethylthio)trimethylsilan, ethytrimethylsilylacetát, hexamethyldisilan, hexamethyldisilazan, hexamethyldisiloxan, hexamethyldisilthian, (isopropenyloxy)trimethylsilan, methoxy-2-methyl-1 -trimethylsiloxypropen, (methylthio)trimethylsilan, methyl-3 -trimethylsiloxy-2-butenoát, TŮ-methyl-TV-

-trimethylsilylacetamid, methyltrimethylsilylacetát, A-methyl-TVtrimethylsilylheptafluorbutyramid, iV-methyl-N-trimethylsilyltrifluoracetamid, (fenyl-thio)trimethylsilan, trimethylbromosilan, trimethylchlorsilan, trimethyljodsilan, 4-

- trimethylsiloxy-3 -penten-2-on, A-(trimethylsilyl)acetamid, TMS-acetamid, trimethylsilylacetát, trimethylsilylazid, trimethylsilylbenzensulfonát, trimethylsilylkyanid, 7V-(trimethylsilyl)diethylamin, A-(trimethylsilyl)dimethylamin, trimethylsilyl-A/A-dimethylkarbamát, 1 -(trimethylsilyl)imidazol, trimethylsilylmethansulfonát, 4-(trimethylsilyl)morfolin, 3-trimethylsilyl-2-

- oxazolidinon, trimethylsilylperfluoro-1 -butansulfonát, TMS-nonaflát, trimethylsilyltrichloracetát, trimethylsilyltrifluoracetát, trimethylsilyltrifluormethansulfonát, 2-(trimethylsilyl)ethanol, 2-(trimethyl-

- silyl)ethoxymethylchlorid.

3. Způsob přípravy sloučeniny vzorce 1 podle nároku 2 vyznačující se tím, že výhodným silylačním činidlem je A,(?-bis(trímethylsilyl)acetamid.

4. Způsob přípravy sloučeniny vzorce 1 podle nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že se jako meziprodukt použije trimethylsilylester vzorce 18a.

5. Způsob přípravy sloučeniny vzorce 1 podle nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že bromační činidlo je činidlo zvolené z řady 7V-bromsukcinimid, pyridinium tribromid, benzyltrimethylamonium tribromid, l,3-dibromo-5,5-dimethylhydantoinnebo dibrombarbiturová kyselina.

6. Způsob přípravy sloučeniny vzorce 1 podle nároků 5, vyznačující se tím, že výhodným bromačním činidlem je A-bromsukcinimid.

7. Způsob přípravy sloučeniny vzorce 1 podle nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že rozpouštědlo pro přípravu intermediátů vzorců 18, 18a a 19 je zvolené z řady acetonitril, dimethylformamid, dimethylsulfoxid, aceton, 2-butanon, 4-methyl-2-

-pentanon, acetofenon, cyklohexanon, methanol, ethanol, isopropylalkohol, ethylacetát, isopropylacetát, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, methylcyklopentylether, methyl-Abutylether, dichlormethan, cyklohexan, toluen.

8. Způsob přípravy sloučeniny vzorce 1 podle nároku 7, vyznačující se tím, že vhodným rozpouštědlem pro přípravu intermediátů vzorců 18,18a a 19 je tetrahydrofuran.

9. Způsob přípravy sloučeniny vzorce 1 podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se pro přípravu meziproduktů vzorců 18 a 18a použije 7 až 16 ml THF na gram výchozí látky vzorce 17 a vhodné silylační činidlo 1,1 až 2 ekvivalenty N, (9-bis(trimethylsilyl)acetamidu.

10. Způsob přípravy sloučeniny vzorce 1 podle kteréhokoli z předcházejících nároků vyznačující se tím, že se pro přípravu meziproduktu vzorce 19 použije vhodné rozpouštědlo tetrahydrofuran a vhodné bromační činidlo 1,5 až 3 ekvivalenty Nbromsukcinimidu, s výhodou za teploty 40 až 60 °C.

11. Způsob přípravy podle nároku 1 vyznačující se tím, že se výchozí látka 2-(4-(1-

- cyklopropylnaftalen-4-yl)-47Al,2,4-triazol-3-ylthio)octové kyseliny vzorce 17 připraví alkylací 4-(l-cyklopropylnaftalen-4-yl)-477-l,2,4-triazol-3-thiolu vzorce 11 pomocí halogenoctové kyseliny, s výhodou pomocí kyseliny bromoctové nebo chloroctové, a báze volené z řady hydrogenuhličitan sodný, hydrogenuhličitan draselný, uhličitan sodný, uhličitan draselný, hydroxid sodný, hydroxid draselný, triethylamin, diisopropylethylamin nebo N-methylmorfolin, v polárním rozpouštědle voleném z řady dimethylformamid, Λζ/V-dimethylacetamid, dimethylsulfoxid, Nmethylpyrolidon, tris(7V,jV-tetramethylene)triamid kyseliny fosforečné, acetonitril, methanol, ethanol, isopropylalkohol, voda nebo v libovolných směsích těchto rozpouštědel.

N-N

12. Způsob přípravy sloučeniny vzorce 1 podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že se deprotekce trialkylsilylové skupiny z intermediátu vzorce 19 provede přidáním vody do roztoku nebo extraktu sloučeniny vzorce 19 v organickém rozpouštědle dle nároku 7.

13. Způsob přípravy lesinuradu vzorce 1 podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že lesinurad vzorce 1 krystaluje z roztoků v organických rozpouštědlech získaných po deprotekci trialkylsilylové skupiny z intermediátu vzorce 19.

14. Způsob přípravy krystalické soli lesinuradu s isopropylaminem vzorce 21 podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že tato sůl krystaluje po přídavku isopropylaminu k roztoku vzorce 1 v organickém rozpouštědle, který byl získán po deprotekci trialkylsilylové skupiny z intermediátu vzorce 19.

15. Způsob přípravy krystalické soli lesinuradu s guanidinem vzorce 22 podle kteréhokoli z předcházejících nároků, vyznačující se tím, že tato sůl krystaluje po přídavku guanidinu k roztoku vzorce 1 v organickém rozpouštědle, který byl získán po deprotekci trialkylsilylové skupiny z intermediátu vzorce 19 .

16. Krystalická isopropylamoniová sůl lesinuradu vzorce 21, definována charakteristickými reflexemi v RTG práškovém záznamu měřeném za použití záření CuKa: 7,0; 16,8; 21,0; 22,9 a 24,1 ± 0,2 2-theta.

17. Krystalická isopropylammoniová sůl lesinuradu vzorce 21 podle nároku 16, definována teplotou tání krystalické formy podle DSC 156 ± 5 °C.

• . : :• —— ·: ::

.........

18. Krystalická guanidiniová sůl lesinuradu vzorce 22, definována charakteristickými reflexemi v RTG práškovém záznamu měřeném za použití záření CuKa: 7,1; 13,8;

18,5 a 24,5°± 0,2°2-theta.

19. Krystalická guanidiniová sůl lesinuradu vzorce 22 podle nároku 18, definována teplotou tání krystalické formy podle DSC 157 ± 5 °C.

20. Krystalická guanidiniová sůl lesinuradu vzorce 22, definována charakteristickými reflexemi v RTG práškovém záznamu měřeném za použití záření CuKa: 12,5; 14,7; 19,9; 23,0 a 26,4°± 0,2 2-theta.

21. Krystalická guanidiniová sůl lesinuradu vzorce 22 podle nároku 20, definována teplotou tání krystalické formy podle DSC 200 ± 5 °C.

22. Použití lesinuradu vzorce 1 nebo jeho solí vzorců 21 a 22 připravených způsobem podle kteréhokoli z nároků 1 až 21 pro přípravu léčiva snižujícího hladinu kyseliny močové v krvi.