CZ2014321A3 - Dioxocyklobutenylhydrazony a jejich protirakovinné účinky - Google Patents

Abstract

Předmětem vynálezu jsou dioxocyklobutenylhydrazony obecného vzorce I mající substituovanou 2-hydroxyarylovou nebo 2-N-heteroarylovou skupinu. Tyto látky mají cytostatický účinek a lze je použít k přípravě terapeutik pro léčbu leukémií a nádorových onemocnění.

Description

Dioxocyklobutenylhydrazony a jejich protirakovinné účinky

Oblast techniky

Vynález se týká dioxocyklobutenylhydrazonú jako nových cytostatik a jejich použití jako terapeutik pro léčbu leukémií a nádorových onemocnění.

Dosavadní stav techniky Léčba onkologických onemocnění pomocí cytostatik je i přes výrazné pokroky v posledních několika dekádách stále problematická a vykazuje řadu negativních vedlejších efektů. Vzrůstající rezistence rakovinných buněk vůči cytostatikům také přináší nemalé potíže. Z těchto důvodů je potřeba stále hledat a testovat nové látky s protirakovinným účinkem. Příkladem takových látek mohou být hydrazony.

Hydrazony vykazují v mnoha případech významnou cytostatickou (protirakovinnou) aktivitu a mohou tak být použity jako cytostatika pro léčbu onkologických onemocnění [Z. D. Liu, R. C. Hider: Design of iron chelators with therapeutic application Coord. Chem. Rev. 2002, 232,151-171; J. L. Buss, B. T. Greene, J. Turner, F. M. Torti, S. V. Torti: Iron Chelators in Cancer Chemotherapy Curr. Top. Med. Chem. 2004, 4, 1623-1635; D. S. Kalinowski, D. R. Richardson: The Evolution of Iron Chelators for the Treatment of Iron Overload Disease and Cancer Pharm. Rev. 2005, 57, 547-583; S. Rollas, §, G. Kij^ukgUzel: Biological Activities of Hydrazone Derivatives. Molecules 2007, 12, 1910-1939; H. Nick: Iron chelation, quo vadis? Curr. Opin. Chem. Biol. 2007, 11, 419-423; B. Narasimhan, P. Kumar, D. Sharma: Biological activities of hydrazide derivatives in the new millennium. Acta Pharm. Sci. 2010,52,169-180; P. Kumar, B. Narasimhan: Hydrazides/Hydrazones as Antimicrobial and Anticancer Agents in the New Millennium. Mini-Rev. Med. Chem. 2013, 13, 971-987; A. M. Merlot, D. S. Kalinowski, D. R. Richardson: Novel chelators for cancer treatment: where are we now? Antioxid. Redox Signál. 2013,18, 973-1006; R. Kaplánek, J. Rak, V. Král, J. Králová: Ftalazin-1-ylhydrazony a jejich použití k léčbě nádorových onemocnění. Patent, 2013, CZ 303748 B6; J. Rak, R. Kaplánek, V. Král, J. Králová, T. Štuková, P. Drašar: Konjugáty hydrazonů s kyselinou cholovou jako nová cytostatika. Patent, 2013, CZ 304112 B6j. Účinek hydrazonů jako cytostatik pro léčbu onkologických onemocnění je založen především na chelataci iontů biologicky významných kovů nutných pro růst, fungování a dělení rakovinných buněk. Dalším možným mechanismem účinku je inhibice řady enzymů . '1 * (např. ribonukleotid reduktázy, histon deacetyláz, acyl transferáz či topoisomeráz), produkce toxických kyslíkatých radikálů nebo interkalace ligandů či metalokomplexů do DNA [S. Sarel, C. Fizames, F. Lavelle, S. Avramovici-Grisaru: Domain-Structured N1,N2-Derivatized Hydrazines as Inhibitors of Ribonucleoside Diphosphate Reductase: Redox-Cycling Considerations. J. Med. Chem. 1999, 42, 242-248; D. R. Richardson: Iron chelators as therapeutic agents for the treatment of cancer Crit. Rev. Oncol. Hematol. 2002,42, 267-81; J. L. Buss, B. T. Greene, J. Turner, F. M. Torti, S. V. Torti: Iron Chelators in Cancer Chemotherapy Curr. Top. Med. Chem. 2004, 4, 1623-1635; Z. Kovacevic, D. S. Kalinowski, D. B. Lovejoy, Y. Yu, Y. Suryo-Rahmanto, P. C. Sharpe, P. V. Bernhardt D. R. Richardson: The Medicinal Chemistry of Novel Iron Chelators for the Treatment of Cancer. Curr. Top. Med. Chem. 2011, 11, 483-499; R. Narang, B. Narasimhan, S. Sharma: A Review on Biological Activities and Chemical Synthesis of Hydrazide Derivatives. Curr. Med. Chem. 2012,19, 569- * 612; V. A. Rao: Iron Chelators with Topoisomerase-lnhibitory Activity and Their Anticancer Applications. Antioxid. Redox Signál. 2013,18, 930-955; A. M. Merlot, D. S. Kalinowski, D. R. Richardson: Novel chelators for cancer treatment: where are we now? Antioxid. Redox Signál. 2013,18, 973-1006].

Vedle protirakovinné aktivity vykazuje řada hydrazonů výrazné antimikrobiální, antimykobakteriální, antivirální, fungicidní, protimalarické účinky či mohou sloužit jako terapeutika pro prevenci a léčbu neurodegenerativních onemocnění, jako Alzheimerovy či Parkinsonovy choroby [T. F. Tam, R. Leung-Toung, W. Li, Y. Wang, K. Karimian, M. Spinoet: Iron Chelator Research: Past, Present, and Future Curr. Med. Chem. 2003,10, 983-995; D. S. Kalinowski, D. R. Richardson: The Evolution of Iron Chelators for the Treatment of Iron Overload Disease and Cancer Pharm. Rev. 2005,57, 547-583; H. Zheng, L. M. Weiner, O. Bar-Am, S. Epsztejn, Z. I. Cabantchik, A. Warshawsky, Μ. B. H. Youdim, M. Fridkin: Design, synthesis, and evaluation of novel bifunctional iron-chelators as potential agents for neuroprotection in Alzheimer's, Parkinson's, and other neurodegenerative diseases. Bioorg. Med. Chem. 2005,13, 773-783; N. Birch, X. Wang, H. S. Chong: Iron chelators as therapeutic iron depletion agents. Expert Opin. Ther. Patents 2006, 16, 1533-1556; S. Rollas, $. G. KiiQiikgiizel: Biological Activities of Hydrazone Derivatives. Molecules 2007,12,1910-1939; E. D. Weinberg, J. Moon: Malaria and iron: history and review. Drug Metabol. Rev. 2009, 41, 644-662; B. Narasimhan, P. Kumar, D. Sharma: Biological activities of hydrazide derivatives in the new millennium. Acta Pharm. 5c/. 2010, 52, 169-180; X. Li, J. Jankovic, W. Le: Iron chelation and neuroprotection in neurodegenerative diseases. J. Neural. Transm. 2011,118, 473-477; G. Uppal, S. Bala, S. Kamboj, M. Saini: Therapeutic Review Exploring Antimicrobial Potential of Hydrazones as Promising Lead. Pharma Chem. 2011, 3, 250-268; P. Kumar, B. Narasimhan: Hydrazides/Hydrazones as Antimicrobial and Anticancer Agents in the New Millennium. Mini-Rev. Med. Chem. 2013, 13, 971-987; R. Leon, A. G. Garcia, J. Marco--Contelles: Recent Advances in the Multitarget-Directed Ligands Approach for theTreatment of Alzheimer's Disease. Med. Res. Rev. 2013,33,139-189].

Strukturně blízké dioxocyklobutenylhydraziny (deriváty cyklobut-3-en-l,2-dionů-3--hydrazinů) s arylaminovou substitucí byly publikovány a patentovány jako selektivní antagonisté CXCR2 chemokinových receptorů a mohou tak sloužit jako terapeutika pro léčbu zánětlivých onemocnění jako je artritida, astma, chronická obstrukční plicní nemoc, dále psoriázy, autoimunitní onemocnění či rakovina [S. Liu, Y. Liu, H. Wang, Y.L. Ding, H. Wu, J. Dong, A. Wong, S. H. Chen, G. Li, M. Chán, N. Sawyer, F. G. Gervais, M. Henault, S. Kargman, L. L. Bedard, Y. Han, R. Friesen, R. B. Lobell, D. M. Stout: Design, synthesis, and evaluation of novel 3-amino-4-hydrazine-cyclobut-3-ene-l,2-diones as potent and selective CXCR2 chemokine receptor antagonists. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2009,19, 5741-5745; S.W. Chen, H. Wu, J. Dong, S. Liu, Y. Niu: Novel hydrazino-cyclobut-3-ene-l,2-dione derivatives as CXCR2 antagonists. PCT Int. Appl. 2010, WO 2010091543 AI 20100819; U. Baettig, A. M. D'Souza, P. Hunt, N. J. Press, S. J. Watson: Cyclobutenylaminobenzenesulfonamides as CXCR2 receptor inhibitors and their preparation, pharmaceutical compositions and use in the treatment of CXCR2 receptor mediated diseases. U.S. Pat. Appl. Publ. 2010, US 201Q0029670 AI 20100204]; mohou působit jako inhibitory CHK1, CHK2 a SGK kináz a sloužit tak k léčbě rakoviny [W. Mederski, U. Emde, G. Barnickel, F. Zenke, H. Greiner, F. Stieber: Preparation of N-pyridinylphenyl-3-4-diaminocyclobut-3-ene-l,2-diones as CHK1, CHK2, and/or SGK kinase t inhibitors for treating cancer. PCT Int. Appl. 2007, WO 2007014607 AI 20070208] nebo mohou být použity jako terapeutika pro léčbu astmatu, hypertenze, srdečních chorob, nemocí gastrointestinálního, respiračního nebo močového traktu [S. Takeno, K. Komoda, M. Hayashi: Preparation of l,2-diaminocyclobutene-3,4-diones and their pharmaceutical use. Jpn. Kokai Tokkyo Koho 1994, JP 06092915 A 19940405],

Dioxocyklobutenylhydrazony mající substituovanou 2-hydroxyarylovou nebo 2-N-•heteroarylovou skupinu a jejich farmaceuticky využitelné soli a využití těchto látek k léčbě leukémií a nádorových onemocnění jsou předmětem tohoto patentu.

Podstata vynálezu Předmětem vynálezu jsou dioxocyklobutenylhydrazony obecného vzorce I mající substituovanou 2-hydroxyarylovou nebo 2-N-(hetero)arylovou skupinu. Předmětem vynálezu jsou dioxocyklobutenylhydrazony mající 2-hydroxyarylovou nebo 2-N--heteroarylovou skupinu obecného vzorce \r

kde Y je H nebo 2-pyridyl, \\ A je C-OKnebo N, R je alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atomy,

Rl, R2, R3 , R4 jsou H, OH, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atomy, allyl, fenyl, halogen, CH2OH, OR, CF3, CF2CF3, OCF3, OCOCH3, O-fenyl, CN, COOH, COOR, CONH2, CONHR, CONR2, CONHOH, CONHNH2, N02, SH, SR, SCN, NH2, NHR, NR2, NHCOCH3, NHCONH2, NHCSNH2, NHS02NH2, NHCOOřBu, B(OH)2, B(OCH3)2, S03H, S02NH2, S02N(CH3)2,

Rl, R2 nebo R2, R3 nebo R3 , R4 jsou CH=CH-CH=CH, tedy přikondenzované benzenové jádro. Látky obecného vzorce I mají cytostatické účinky a lze je použít pro přípravu léčiv k léčbě leukémií a nádorových onemocnění. Příprava dioxocyklobutenylhydrazonů obecného vzorce I, jejich stabilita v roztoku, komplexační a cytostatické vlastnosti jsou doloženy následujícími příklady, aniž by jimi byly jakkoliv omezeny. Příklady provedení přípravy nových sloučenin a měření ieiich vlastností. Příklad 1. Příprava 3-[2-(2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]-4-[(4- methoxyfenyl)amino]cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadající pod obecný vzorec I. 2-Hydroxybenzaldehyd (61 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4-- methoxyfenyl)amino]cyklobut-3-en-l,2-dion (70 mg; 0,3 mmol) byly smíšeny v baňce y s isopropanolem (25 ml). Reakční směs (suspenze) byla míchána při 80fC po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethyletheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethyletheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při <j . / 50jjC. Bylo získáno 90 mg (8¾%) pevné látky. XH NMR (DMSO-d6) 6: 3,74 (s, 3H); 6,91 (m, 4H); 7,26 (m, 1H); 7,38 (d, J = 8^7 Hz, 2H); 7,66 (m, 1H); 8,36 (s, 1H); 9.43 (bs, 1H); 10.32 (bs, 1H); 12,06 (bs, 1H) ppm. Příklad 2. Příprava 3-[2-(2-hydroxy-3-methoxybenzyliden)hydrazinyl]-4-[(4-~methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadající pod obecný vzorec I. 2-Hydroxy-3-methoxybenzaldehyd (76 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4- methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dion (117 mg; 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce v s ethanolem (20 ml). Reakční směs (suspenze) byla míchána při 70^C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethyletheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50jjc. Bylo získáno 103 mg (93%) pevné látky. *H NMR (DMSO-d6) δ: 3,74 (s, 3H); 3,82 (s, 3H); 6.82 (m, 1H); 6?94 (d, J = 9.0 Hz, 1H); 7;01 (d, J = 6,8 Hz, 1H); 7.27 (m, 1H); 7,38 (d, J = 9.0 Hz, 1H); 8,41 (s, 1H); 9,34 (bs, 1H); 9,61 (bs, 1H); 12,07 (bs, 1H) ppm. Příklad 3. Příprava 3-{2-[2-hydroxy-3-(prop-2-en-l-yl)benzyliden]hydrazinyl}-4-[(4-methoxyfenyl) amino]cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadající pod obecný vzorec I. 3-Allyl-2-hydroxybenzaldehyd (81 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4-methoxyfenyl)amino]cyklobut-3-en-l,2-dion (70 mg; 0,3 mmol) byly smíšeny v baňce s isopropanolem (25 ml). Reakční směs (suspenze) byla míchána při 80fC po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethyletheru (250 ml). Pevný produkt , 6- ’ . * r #·'.*» j 4 . , * » * byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethyletheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50fC. Bylo získáno 102 mg (90(¾) pevné látky. *H NMR (DMSO-d6) δ: 3?38 (d, J = 6,5 Hz, 2H); 3.74 (s, 3H); 5,05 (m, 2H); 5;98 (m, 1H); 6;89 (m, 1H); 6.96 (d, J = 9,0 Hz, 1H); 7.16 (d, J = 7,3 Hz, 1H); 7.34 (m, 3H); 8,31 (s, 1H); 9,76 (bs, 1H); 10.71 (bs, 1H); 11.37 (bs, 1H) ppm. Příklad 4. Příprava 3-[2-(5-brom-2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]-4-[(4- methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadající pod obecný vzorec I. 5-Brom-2-hydroxybenzaldehyd (101 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4- methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dion (70 mg; 0,3 mmol) byly smíšeny v baňce ) s isopropanolem (25 ml). Reakční směs (suspenze) byla míchána při 80?C po dobu 3 dní. Po i ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethyletheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethyletheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50^C. Bylo získáno 119 mg (95,%) pevné látky. *H NMR (DMSO-d6) δ: 3,74 (s, 3H); 6,88 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 6,94 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7.38 (m, • , < ' 3H); 7.82 (s, 1H); 8,31 (s, 1H); 9f54 (bs, 1H); 10.55 (bs, 1H); 11.14 (bs, 1H) ppm. Příklad 5. Příprava 3-[2-(5-terc-butyl-2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]-4-((4-~methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadající pod obecný vzorec I. 5-(terc-Butyl)-2-hydroxybenzaldehyd (90 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4-methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dion (117 mg; 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce j s ethanolem (45 ml). Reakční směs (suspenze) byla míchána při 70fC po dobu 2 dní. Po ochlazení byla část rozpouštědla odpařena na celkový objem přibližně 15 ml. Poté byla směs nalita do diethyletheru (150 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50fC. Bylo získáno 102 mg (86¾.) pevné látky. I i XH NMR (DMSO-d6) δ: 1,27 (s, 9H); 3.74 (s, 3H); 6,88 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 6.94 (d, J = 9,0 Hz, 2H); 7.31 (dd, J = 8.6, 2.5 Hz, 1H); 7,41 (d, J = 9.0 Hz, 2H); 7,60 (s, 1H); 8.34 (s, 1H); 9.45 (bs, l * ' * < i i f 1H); 10,17 (bs, 1H); 12/16 (bs, 1H) ppm. Příklad 6. Příprava 3-[2-(2-hydroxy-5-nitrobenzyliden)hydrazinyl]-4-[(4-methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadající pod obecný vzorec I. - 7 2-Hydroxy-5-nitrobenzaldehyd (84 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4-methoxyfenyl)amino]cyklobut-3-en-l,2-dion (70 mg; 0,3 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (45 ml). Reakční směs (suspenze) byla míchána při 70|C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla část rozpouštědla odpařena na celkový objem přibližně 15 ml. Poté byla směs nalita do diethylétheru (150 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 5C^C. Bylo získáno 4 111 mg {97f/o) pevné látky. \ *H NMR (DMSO-d6) δ: 3,71 (s, 3H); 6.92 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 7,09 (d, J = 9,1 Hz, 1H); 7,.39 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 8,14 (dd, J = 9,1, 2,9 Hz, 1H); 8,37 (s, 1H); 8,49 (s, 1H); 9,57 (bs, 1H); 11,80 (bs, 1H); 12,28 (bs, 1H) ppm. Příklad 7. Příprava methyl 4-hydroxy-3-[(2-{2-[(4-methoxyfenyl)amino]-3,4-dioxocyklobut-l-en-l-yl}hydrazinyliden)methyl]benzoátu, spadající pod obecný vzorec I.

Methyl 4-formyl-3-hydroxybenzoát (90 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4--methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dion (70 mg; 0,3 mmol) byly smíšeny v baňce s isopropanolem (25 ml). Reakční směs (suspenze) byla míchána při 80j^C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 5G^C. Bylo získáno 110 mg (93¾¾) pevné látky. XH NMR (DMSO-d6) 6: 3.73 (s, 3H); 3,83 (s, 3H); 6,95 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 7,03 (d, J = 8,6 Hz, 1H); 7,41 (d, J = 8.6 Hz, 2H); 7,85 (dd, J = 8?6, 2,0 Hz, 1H); 8?22 (s, 1H); 8,35 (s, 1H); 9,45 (bs, 1H); 11.22 (bs, 1H); 12,14 (bs, 1H) ppm. Příklad 8. Příprava 3-{2-[(2-hydroxynaftalen-l-yl)methyliden]hydrazinyl}-4-[(4--methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadající pod obecný vzorec I. 2-Hydroxynaftalen-l-karbaldehyd (86 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4-methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dion (117 mg; 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (45 ml). Reakční směs (suspenze) byla míchána při 70fC po dobu 2 dní. Po Λ ochlazení na laboratorní teplotu byla část rozpouštědla odpařena na celkový objem přibližně 15 ml. Poté byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50fC. Bylo získáno 105 mg (90%) pevné látky. - 8 - NMR (DMS0-d6) δ: 3.75 (s, 3H); 6.97 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 7.24 (d, J = 8.9 Hz, 1H); 7.36 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 7.,41 (d, J = 7.5 Hz, 1H); 7.55 (m, 1H); 7.89 (m, 2H); 8,42 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 9.03 (s, 1H); 9,66 (bs, 1H); 11.38 (bs, 1H); 11.94 (bs, 1H) ppm. Příklad 9. Příprava 3-(2-(3,5-dibrom-2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]-4-[(4- • methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadající pod obecný vzorec I. 3,5-dibrom-2-hydroxybenzaldehyd (140 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4-methoxyfenyl)amino] cyklobut-3-en-l,2-dion (70 mg; 0,3 mmol) byly smíšeny v baňce

J s isopropanolem (25 ml). Reakční směs (suspenze) byla míchána při 80?C po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 'J i 50fC. Bylo získáno 143 mg (96j%) pevné látky. řV Λ *H NMR (DMSO-d6) δ: 3,74 (s, 3H); 6,95 (d, J = 8.1 Hz, 2H); 7,31 (d, J = 8.1 Hz, 2H); 7,.80 (s, 2H); 8,28 (s, 1H); 9,.76 (bs, 1H); 11,12 (bs, 1H); 11.67 (bs, 1H) ppm. Příklad 10. Příprava 3-[(4-methoxyfenyl)amino]-4-[2-(pyrid()^-2- _ylmethyliden)hydrazinyl]cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadající pod obecný vzorec I. Pyridin-2-karbaldehyd (54 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4-methoxyfenyl)amino]cyklobut--3-en-l,2-dion (117 mg; 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (45 ml). Reakční směs (suspenze) byla míchána při 7(%C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla část rozpouštědla odpařena na celkový objem přibližně 15 ml. Poté byla směs nalita do diethylétheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 5(^C. Bylo získáno 85 mg (88%) pevné látky. XH NMR (DMSO-d6) δ: 3,73 (s, 3H); 6.94 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 7.39 (m, 3H); 7.83 (m, 1H); 8.02 ··"//* * * (m, 1H); 8.17 (s, 1H); 8;61 (d, J = 4.7 Hz, 1H); 9,49 (bs, 1H); 12,41 (bs, 1H) ppm. Příklad 11. Příprava 3-[2-(dipyridib-2-ylmethyliden)hydrazinyl]-4-[(4- methoxyfenyl)amino]cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadající pod obecný vzorec I. Di(pyridin-2-yl)keton (92 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4-methoxyfenyl)amino]cyklobut- -3-en-l,2-dion (117 mg; 0,5 mmol) byly smíšeny v baňce s ethanolem (45 ml). Reakční směs v (suspenze) byla míchána při 7Q°C po dobu 2 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla \ část rozpouštědla odpařena na celkový objem přibližně 15 ml. Poté byla směs nalita do diethyletheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou * í - / diethylétheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50fC. Bylo získáno 109 mg (91%) pevné látky. *H NMR (DMSO-d6) δ: 3,76 (s, 3H); 6,95 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 7.30 (m, 2H); 7,46 (m, 1H); 7.58 (m, 3H); 7.98 (m, 3H); 8.58 (d, J = 4.7 Hz, 1H); 8,65 (bs, 1H); 10,18 (bs, 1H) ppm. Příklad 12. Příprava 3-[(4-methoxyfenyl)amino]-4-[2-(chinolin-2- ylmethyliden)hydrazinyl]cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadající pod obecný vzorec I. Chinolin-2-karbaldehyd (79 mg; 0,5 mmol) a 3-hydrazinyl-4-[(4- methoxyfenyl)amino]cyklobut-3-en-l,2-dion (70 mg; 0,3 mmol) byly smíšeny v baňce s isopropanolem (25 ml). Reakční směs (suspenze) byla míchána při 80fC po dobu 3 dní. Po ochlazení na laboratorní teplotu byla směs nalita do diethyletheru (250 ml). Pevný produkt byl odfiltrován, na fritě promyt další várkou diethyletheru (3x 30 ml) a usušen za vakua při 50fC. Bylo získáno 105 mg (94^6) pevné látky. ' ' Λ *H NMR (DMSO-d6) δ: 3?73 (s, 3H); 6,95 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 7.38 (d, J = 8,9 Hz, 2H); 7^.63 (m, 1H); 7,79 (m, 1H); 8,01 (m, 3H); 8.34 (m, 2H); 9.61 (bs, 1H); 12,53 (bs, 1H) ppm. Příklad 13. Stabilita dioxocyklobutenylhydrazonů v roztoku.

Hydrazony mohou za určitých podmínek podléhat hydrolýze. Pro jejich případné využití ve veterinární či humánní medicíně je nezbytné, aby byly po určitou dobu stabilní ve vodě, pufrech či směsi vody s organickými rozpouštědly (zejména dimethylsulfoxidem, jež se u hůře rozpustných látek používá pro jejich převedení do roztoku a následnou aplikaci). jJ, Zředěné roztoky látek uvedených v příkladech 1*12 ve směsi dimethylsulfoxid/voda (1:1, v/v) jsou stabilní při fyziologickém pH = 7,4 po dobu nejméně 2 dny při laboratorní / 'j teplotě (* 20fC) a po dobu nejméně 7 dní při teplotě do 5fC (jejich UV-Vis spektra jsou po Λ * ·>ι této době nezměněná). Látky uvedené v příkladech 1*12 jsou stabilní v roztoku '/ deuterovaného dimethylsulfoxidu při laboratorní teplotě (= 2CTC) po dobu nejméně 21 dní (jejich XH NMR spektra jsou po celou dobu neměnná). Látky je tak možno po uvedené doby skladovat jako roztoky, ideálně jako roztoky v čistém dimethylsulfoxidu při nízké teplotě (tedy za podmínek, kdy nedochází k jejich hydrolýze či rozkladu). Příklad 14. Komplexační vlastnosti.

Jedním z předpokládaných mechanismů účinku tohoto typu látek je chelatace iontů biologicky významných kovů, které jsou i součástí metaloproteinů a metaloenzymů. UV/Vis titrace 3-[2-(2-hydroxybenzyliden)hydrazinyl]-4-[(4- methoxyfenyl)amino]cyklobut-3-en-l,2-dionu, spadajícího pod obecný vzorec I se železitými (Fe3+), kobaltnatými (Co2+) a měďnatými (Cu2+) ionty ukazují, že tento hydrazon tvoří s železitým a kobaltnatým iontem komplex 2:1, s měďnatým iontem komplex 1:1, které se však liší v konstantě stability. Titrace byly provedeny ve směsi dimethylsulfoxid-voda (1:1 v/v). Příklad 15. Protirakovinné vlastnosti.

Byly provedeny testy dioxocyklobutenylhydrazonů na sedmi rakovinných liniích CCRF--CEM (T-lymfoblastická leukémie), CEM-DNR (T-lymfoblastická leukémie, daunorubicin resistentní), K562 (myeloidní leukémie), K562-TAX (myeloidní leukémie, paclitaxel resistentní), HCT116 (lidský kolorektální karcinom), HCT116p53-/- (lidský kolorektální karcinom, p53-deficientní), A549 (lidský plicní adenokarcinom) a dvou zdravých liniích BJ (lidské fibroblasty) a MRC-5 (lidské plicní fibroblasty). V Tabulkách 1 a 2 jsou uvedeny příklady struktur a koncentrace «/ dioxocyklobutenylhydrazonů inhibující buněčnou viabilitu buněčných linií na 50jj6 uvedená jako IC50^M)±SD.

Testované látky vykazují hodnoty IC50 od 1,2 μΜ. Většina derivátů vykazují vyšší cytotoxicitu vůči leukemické buněčné linii CCRF-CEM (T-lymfoblastická leukémie) než vůči buněčné linii CEM-DNR (daunorubicin resistentní T-lymfoblastická leukémie). V případě myeloidní leukémie vykazuje většina testovaných látek vyšší cytotoxickou aktivitu vůči linii K562-TAX (paclitaxel resistentní myeloidní leukémie) než vůči linii K526. Většina derivátů vykazovala obdobnou inhibiční aktivitu vůči lidskému kolorektálnímu karcinomu (linie HTC116) a vůči jeho p53 deficitní variantě (linie HCT116p53-/-). Hodnoty IC50 pro linii A549 (lidský plicní adenokarcinom) se pohybovaly v rozmezí 2,5 až 87 μΜ. Připravené a testované látky vykazovaly pro zdravé buněčné linie v případě linie BJ (lidské fibroblasty) hodnoty IC50 v rozsahu 11,5 až více než 100 μΜ a v případě linie MRC-5 (lidské plicní fibroblasty) hodnoty IC50 v rozsahu 3,7 až více než 100 μΜ. V drtivé většině případů vykazovaly testované látky -11 i ' j i i t t δ , * * , ti i * í * vyšší cytotoxicitu (nižší hodnoty IC50) pro leukemické a rakovinné linie CCRF-CEM, K526, HTC116, HCT116p53-/- a A549 než pro zdravé linie BJ a MRC-5.

Ze strukturního pohledu jsou nejaktivnější deriváty mající 2-N-(hetero|arylovou skupinu, tedy deriváty znázorněné obecným vzorcem I, kde Y = H, A = IM, R1 = R2 = R3 = R4 = H a kde Y = 2-pyridyl, A = N, R1 = R2 = R3 = R4 = H. Relativně nejúčinné byly lipofilnější deriváty, kde Y = H, A = C-OH, Y = H, R1 = allyl, R2 = R3 = R4 = H a kde Y = H, A = C-OH, R1 = R2 = R4 = H, R3 = tBu.

Průmyslové využití

Vynález je využitelný ve farmaceutickém průmyslu, k přípravě nových léčiv a k léčbě leukémií a nádorových onemocnění.

Tabulka 1. Ι050(μΜ) pro vybrané dioxocyklobutenylhydrazony (linie CCRF-CEM, CEM-DNR, K562 a K562-TAX) coOč CMOČ

Q ts>+1 o ln O

OČ m I'' rv cn |v |V IV cn CD Γν LD X °0 oo_ rv cn O CM co cn cn in rv < rv oo" (N rH o' cn cn 00 cn rH 1- cn rH CM CM cn rH rH rH o' CM 1 ΓΜ +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 CO in IV ΓΜ co rH CM co 00 CM_ o m cn m cn 00 rv ID cn CM o rH o' cn cm" cn <rP cn lD CM rH rn' rv rv 00 cn cn 00 cn cn rv LO o IV ID 00 00 CM cn LD o 00 Γν co ΓνΓ |v CM <7> |V rv rvi rH rH cd rH od rH o o θ' CM cn rH cn rH o o LO oo" rH cn rH CO LO V +1 rv +1 (N +1 00 o' o tH +1 rH +1 rv CXJ co' cn +1 rH +1 o' o rH CN +1 +1 cn +1 cn cn in rH A 00 Λ 00 00 (N cn rH cn Γ4 rH rn CM cn rv m 00 00 co rH CM 00 cn CC m ΙΛ no' o cn rH cn rH CM O O CO rH co cn cn 00 rH rvi cn o" CM O O cn r*- cn rv o' Μ- 00 oo' 1 +1 +1 +1 o' +1 +1 +1 +1 o' o' +1 +1 Έ LU 04 lO cn m cn IV o rH co in LO cn <N LO o co o rH +1 CM <T> 00 00 u co' cn cn cn |v Γν cn cn 00 rv cn rv' |v LO <J? rH co' cn rH rv ΓΜ CO 00 IV cn co cn rH rH LO cd o o' |v cn in CM cd in oo' cn LT) cn 00 rH LD rv ΙΛ oo' (N rH rH rH rH rH rH rH rH rH 1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 rH +1 +1 cc CD o o 00 co rH LO o IV +1 CM u rH 00 cn 00 o rH o CM u iv LO <N rH cn cn IV oo' co cn cm" σι 00 (N oo oo 00 LD m 00 cn rH X u ro X II X X u II T u X II X ΓΜ O u cc II CO CO O Z o u II X X II cn cc X CC II "=3· cc II II cn II cn II cn II cn u II II X II cn cc cc cc cc II X oc cn cc II X o cc II CC II X X X X cn CM II cc II X li CM II II II II cc u ro CC CM "St . c cc m cc 1 cc ro cc cc cc cc CC X 00 II X u II X > II II II II II II cn II II CM CJ rvi ÍN rvi CM fN cn cc X cc o < cc cc cc cc CC cc II CM (Y u II II II II II II II II II CM II rH rH rH rH rH rH rH rH rH cc <N cc oc cc cc cc cc cc cc cc II rH CC cc X X X X X X X X ~~X rH > rH II II II II II II II II II Q_ >- >- >- > >- >- > >- >- X (N X • «, • v • K . », • v • s • <, • «, • v II II X X X X X X X X X O O o O O o O O O > >- > ó ύ u ύ ú ó u ύ CJ z Z z II II II II II II II II II II II II < < < < < < < < < < < <

Tabulka 2. Ι€50(μΜ) pro vybrané dioxocyklobutenylhydrazony (linie HCT116, HCT116p53-/-, A549; BJ a MRC-5) cocm CM o: Q LO+1 o i/l u

/ o cm : * • · * · 9 · m LO 00 Ln rv ΙΓ) o cn LO cn rH P* CM o m o o MRC-5 00 rH m' pi o' oo" LO un CO oo' rH ΓΜ m rH CM rH CM rH rH rH rH +1 rH +1 +1 +1 (N +1 ΓΜ +1 rH +1 CM +1 cn +1 D +1 m +1 D +1 o σι 00 lo D cn LO 00 D CM D CM on cn r·*' (N pi CO O) CO CN cT ni CO rH 00 <D Ln cn 00 P^ cn CO LO CM O o rH un rH σ> co D co m LO Pv in rH 00 o CM cn CO cn" rH pC rH Ol" CM o' +1 o o |N CM cn co" CM o_ o" co o rH ^p" čo +1 to +1 o +1 r- +1 00 +1 rH CO +1 D 00 +1 ^P o o rH +1 cn +1 CO +1 CM un o 00 p* LD σί P' Ln r-T m' σΓ o Ln cm" cn o' D cm" 00 rH cn 00 00 Γ0 LO rH 00 LO LO rH tn CM fM o LD O CM CM o co ID D Ρ» cn i cn CM ^P σ 00 σι lo' lo ^ř cn rH rH cm" cm" LO rH rH rH rH rH r-l rH (N rH rH rH LD +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 < Ln rv LO D rH CM 00 vo m rH rH LO «4· CM 00 cn IN <n rH *3- ^P ID LO* rH rH LD cm" lo' Ln cn o CM cm" LO rH cm rvi rH rH Pv CM CM 1^ CO 1 00 00 LD CO o r> 00 CO CM m UO CM cn 00 1 co rH <o CO CM 00 Ln tn D o in o in cn CM ní O •s oo' Q. CN rH rH rH <N rH rH rH o' LO +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 rH ΓΜ rp CM (N P^ r*» pv CO cn 00 lO o rH H u 1^ LD o CM o o Pv co rH cn r-' cm" oo" rH cn cn" CO <T> rH rH LO X 00 p- D σι pv 00 CO CM LO CM o *^P cn 00 P^ ΓΜ 00 Ln CO P^ rH <cp r> CM CM 1^· UD rH oo' CM" Ln CO cm" Ρ-Γ cm" rH UO CN rH ΓΜ CM CM (N CM rH CN rH o' rH +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 +1 u Ln un rH o LO o CM 00 cr> rH o> LO CM X o rH •vT cn CO pv m m rH 00 rH cn CN p-' 00 LD o' cn cn rH lo' ΙΛ m 00 LD P~ 00 00 X u m X II X X (_) II X u X II X (N o o CC II V- CQ 3 CO ON o u II X X II X CC II «ď CC II II ro II co II co II co u II II X cc II m cc cc cc cc <sp 1 L- ΐ cc co . «, cc II X tJ cc II II ΓΜ cc II X II X II X II X II co" cc CM cc II rí i = R4 II X u on CC ΓΜ CC ^p ^P ^P , ^ CT oc 1 cn cn cc CC CC cc X CO II CO CC X u II X ~ II II II II II II co II II cm CJ CM CM CM CM CM co cc X CC o < cc cc cc cc 0C cc II . = R2 u II II II II II II II II II CM II rH rH rH rH rH rH rH rH rH cc CM cc cc oc cc cc cc cc cc cc II r-l cc • . k, • ·» 1 «, . s . . s . ^ , ^ •k X X X X X X X X X rH > rH II II II II II II II II II o. > > > > > > > > > X CM X • «. • <s • s • *k • «, . s II II II X X X X X X X X X O O O o O O O O O > > > ó ύ ó ύ ó o i o u u ž Z z II II II II II II II II II II II II < < < < < < < < < < < <

Claims (3)

1. Patentové nároky 1. Dioxocyklobutenylhydrazony mající 2-hydroxyarylovou nebo 2-N-heteroarylovou skupinu obecného vzorce U

   kde Y je H nebo 2-pyridyl, | i it A je COK nebo N, R je alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atomy, Rl, R2, R3 , R4 jsou H, OH, alkyl s 1 až 6 uhlíkovými atomy, allyl, fenyl, halogen, CH2OH, OR, CF3, CF2CF3, OCF3, OCOCH3, O-fenyl, CN, COOH, COOR, CONH2, CONHR, CONR2, CONHOH, CONHNH2, N02, SH, SR, SCN, NH2, NHR, NR2, NHCOCH3/ NHCONH2/ NHCSNH2, NHS02NH2, NHCOOtBu, B(OH)2, B(OCH3)2, S03H, S02NH2, S02N(CH3)2, Rl, R2 nebo R2, R3 nebo R3 , R4 jsou CH=CH-CH=CH, tedy přikondenzované benzenové jádro.
2. 2. Použití látek obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva k léčbě leukémií.
3. 3. Použití látek obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu léčiva k léčbě nádorových onemocnění.