CZ2010332A3 - Substitucní deriváty N6-benzyladenosin-5´-monofosfátu, zpusoby jejich prípravy, tyto deriváty pro použití jako léciva a terapeutický prípravek je obsahující - Google Patents

Substitucní deriváty N6-benzyladenosin-5´-monofosfátu, zpusoby jejich prípravy, tyto deriváty pro použití jako léciva a terapeutický prípravek je obsahující Download PDF

Info

Publication number
CZ2010332A3
CZ2010332A3 CZ20100332A CZ2010332A CZ2010332A3 CZ 2010332 A3 CZ2010332 A3 CZ 2010332A3 CZ 20100332 A CZ20100332 A CZ 20100332A CZ 2010332 A CZ2010332 A CZ 2010332A CZ 2010332 A3 CZ2010332 A3 CZ 2010332A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
monophosphate
riboside
purine
purine riboside
hydroxy
Prior art date
Application number
CZ20100332A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ303327B6 (cs
Inventor
Zatloukal@Marek
Doležal@Karel
Voller@Jirí
Spíchal@Lukáš
Strnad@Miroslav
Original Assignee
Univerzita Palackého v Olomouci
Bioapex, S.R.O.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita Palackého v Olomouci, Bioapex, S.R.O. filed Critical Univerzita Palackého v Olomouci
Priority to CZ20100332A priority Critical patent/CZ303327B6/cs
Priority to PCT/CZ2011/000044 priority patent/WO2011134444A2/en
Priority to US13/642,905 priority patent/US9073961B2/en
Priority to EP20110763831 priority patent/EP2563801B1/en
Publication of CZ2010332A3 publication Critical patent/CZ2010332A3/cs
Publication of CZ303327B6 publication Critical patent/CZ303327B6/cs
Priority to ZA2012/07173A priority patent/ZA201207173B/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/167—Purine radicals with ribosyl as the saccharide radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)

Abstract

Rešení se týká substitucních derivátu N.sup.6.n.-benzyladenosin-5´-monofosfátu obecného vzorce I, kde (R).sub.n.n. znamená 1 až 4 substituenty R (n je v rozmezí 1 až 4), pricemž R mohou být stejné nebo rozdílné, a R jsou vybrány ze skupiny zahrnující C.sub.1.n. až C.sub.8.n. alkyl, C.sub.1.n. až C.sub.8.n. alkoxy, amino, halogen, hydroxy, merkapto a nitro skupinu, a jejich farmaceuticky prijatelné soli. Rešení se dále týká zpusobu prípravy techto derivátu, jejich použití v medicíne a dalších biotechnologických aplikacích, a také terapeutického prípravku tyto deriváty obsahujícího.

Description

Oblast techniky
Vynález se týká nových substitučních derivátů N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu, které mají protinádorové, antimitotické a proapoptotické účinky pro živočišné buňky, včetně lidských. Vynález se dále týká způsobů přípravy těchto derivátů, těchto derivátů jako léčiva, terapeutického přípravku, který tyto deriváty obsahuje jako účinnou látku a použití těchto derivátů pro výrobu léčiv a ve farmaceutických biotechnologiích.
Dosavadní stav techniky
Cytokininy jsou důležitou třídou rostlinných hormonů, definovanou jejich schopností iniciovat buněčné dělení v rostlinných tkáňových kulturách za přítomnosti auxinu (Skoog et al., Science 148, 532-533, 1965). Cytokininy doposud identifikované v rostlinách jsou deriváty adeninů substituované v poloze N6 isoprenoidním nebo aromatickým postranním řetězcem. Nejčastěji se vyskytujícím cytokininem je ZraMí-zeatin (tZ). Hladiny ostatních isoprenoidních cytokininů - N6-isopentenyladeninu (iP), cA-zeatinu (cZ) a jeho derivátu s nasyceným postranním řetězcem dihydrozeatinu (DHZ) se liší mezidruhově. Zatímco isoprenoidní cytokininy jsou v rostlinách všudypřítomné, aromatické cytokininy reprezentované N6-benzyladeninem (BA) a jeho hydroxylo vánými deriváty topoliny byly doposud identifikovány pouze v úzké skupině rostlinných druhů (Horgan et al., Phytochemistry 14, 1005-1008, 1975; Strnad, Physiol. Plant. 101, 674-688, 1997; Strnad et al., Plant Physiol. 99, 74-80, 1992). Nej rozšířenějším z nich je pravděpodobně orř/zo-topolin ribosid, vyskytující se v topolových listech po rozednění v mikromolámích koncentracích (Hewett et al., Planta 114, 119-129, 1973). V obou skupinách cytokininů jsou známi zástupci, kteří existují jako volné báze, ribosidy, ribosid-5'-monofosfáty, 3-, 7-, 9- , O-glucosidy, a konjugáty s aminokyselinami.
V souvislosti s úlohou cytokininů v regulaci rostlinného růstu a diferenciaci byly tyto látky testovány také jako možná léčiva ve vztahu k řadě lidských onemocnění, způsobených disregulací buněčné proliferace a diferenciace. Schopnost cytokininových baží indukovat nebo • · podporovat diferenciaci lidských buněk byla demonstrována na keratinocytech (Berge et al., Ann. N. Y. Acad. Sci. 1067, 332-336, 2006) a několika leukemických buněčných lininích HL60 a K-562 (Ishii et al., Biochim. Biophys. Acta. 1643, 11-24, 2003). Zatímco volné báze indukují diferenciaci v poměrně vysokých koncentracích (25 až 100 μΜ), jejich ribosidy způsobují rychlý nástup apoptózy v mikromolárních koncentracích (Mlejnek, J.Cell Biochem. 83, 678-689, 2001), Smrti buněk HL-60 předchází degradace adenosin trifosfátu, aktivace kaspáz a depolarizace mitochondrií (Mlejnek, J.Cell Biochem. 83, 678-689, 2001; Ishii et al., Biochim. Biophys. Acta. 1643, 11-24, 2002). Intracelulární konverze ribosidů na jejich mono fosfáty je nezbytná pro jejich funkci (Mlejnek and Doležel, Toxicol. In Vitro 19, 985990, 2005). Inhibice kaspáz mění aktivitu N6-isopentenyladenosinu (iPR) v buňkách HL-60 na růstově-inhibiční a diferencující (Ishii et al., Biochim. Biophys. Acta. 1643, 11-24, 2002). Pro kinetin ribosid (KR) bylo nedávno ukázáno, že může být zajímavou účinnou látkou pro léčbu mnohočetného myelomu (Tiedemann et aL, J. Clin. Invest. 118, 1750-1764, 2008). V různých modelech mnohočetného myelomu KR indukuje rychlou supresi transkripce cyklinů Dl a D2 následovanou zablokováním buněčného cyklu a tumor-specifickou apoptózou (Tiedemann et al., J. Clin. Invest. 118, 1750-1764, 2008). Cytotoxický efekt iPR, KR a N6benzy laděno sinu (BAR) na lidské buněčné linie odvozené z pevných tumorů byl publikován v pracech Cabelo et al. (Int. J. Cancer 120, 2744-2748, 2008), Choi et al. (Cancer Lett. 261, 3745, 2008), Laezza et al. (Int. J. Cancer. 124, 1322-1329, 2009), Meisel et al. (FEBS Lett. 433, 265-268, 1998) a Spinola et al. (Int. J. Cancer 120, 2744-2748, 2007). V závislosti na buněčné linii a použitém cytokininu jeho aplikace způsobila buď blok buněčného cyklu (v G1 nebo G2/M fázi) nebo apoptózu. In vivo protinádorová aktivita iPR, KR a BAR byla také demonstrována v několika zvířecích a xenograftových modelech nádorového bujení (Choi et al., Cancer Lett. 261, 37-45, 2008; Laezza et al., FASEB J. 20, 412-418, 2006; Tiedemann et al., J. Clin. Invest. 118, 1750-1764, 2008). iPR a BAR také ukázaly perspektivní aktivitu na různé zhoubné nádory v klinickém zkoušení malého rozsahu (Mittelman et al., Ann. N. Y. Acad. Sci. 255, 225-234, 1975).
Mikromolární koncentrace cytokininových ribosidů i baží jsou také schopny indukovat buněčnou smrt se znaky apoptózy (aktivace kaspázám-podobných proteáz a fragmentace DNA) v rostlinných buněčných kulturách (Mlejnek and Procházka, Planta 215, 158-166, 2002). Buněčné smrti i v tomto případě předchází degradace adenosin trifosfátu a produkce reaktivních kyslíkových radikálů. Na rozdíl od jejich hormonální aktivity, která vyžaduje « * interakci s membránovým receptorem, intracelulámí konverze cytokininů na jejich monofosfáty je nezbytná pro jejich efekt cytotoxický. Cytotoxické koncentrace jsou vyšší než endogenní koncentrace cytokinů v rostlinných pletivech, ale stále v koncentračním rozsahu používaném v cytokininových biotestech (Carimi et al., Planta 216, 413-421, 2003; Mlejnek et al., Plant. Cell. Environ. 26, 1723-1735, 2003; Plant. Sci. 168, 389-395, 2005). Cytotoxická aktivita přirozeně se vyskytujících cytokininů, cytokininových ribosidů a jejich analog (Doležal et al., Bioorg. Med. Chem. 14, 875-884, 2006; Bioorg. Med. Chem. 15, 3737-3747, 2007) ve zvířecích a lidských experimentálních systémech byla opakovaně demonstrována.
Cílem předkládaného vynálezu je proto poskytnout nové protinádorové a proapoptotické dusíkaté heterocyklické sloučeniny na bázi na fenylu substituovaného N6-benzyladenosin-5'monofosfátu s vysokou selektivitou a terapeutickým indexem účinnosti, tj. sloučeniny, které jsou málo toxické a přitom vysoce účinné. Tyto deriváty mohou být základem pro vývoj nových generací léčiv s protinádorovými, antimitotickými a proapoptotickými i dalšími medicínsky významnými účinky.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou substituční deriváty N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I,
I * * * · » Φ 4 4« • ♦ ···· Φ φ* • · · · · 444444 4 φφ ♦ · · 4 4 φφ ·· ·· · Φ Φ Φ φ φ ve kterých (R)n znamená 1 až 4 substituenty R (n je v rozmezí 1 až 4), přičemž R mohou být stejné nebo rozdílné, a R jsou vybrány ze skupiny zahrnující Ci až Cg alkyl, Ci až Cg alkoxy, amino, halogen, hydroxy, merkapto a nitro skupinu, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Farmaceuticky přijatelné soli sloučenin obecného vzorce I zahrnují soli s alkalickými kovy, amoniakem či aminy, nebo adiční soli s kyselinami. S výhodou jsou farmaceuticky přijatelné soli sloučenin obecného vzorce I vybrány ze skupiny zahrnující sodné a amonné soli.
Výše uvedené generické skupiny mají významy uvedené v následuj ící legendě:
Ci až Cg alkyl znamená přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu obsahující 1 až 8 uhlíkových atomů, s výhodou vybranou ze skupiny zahrnující methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, pentyl, isopentyl, hexyl a isohexyl,
Ci až Cg alkoxy znamená skupinu -O-Ra, kde Ra je Ci až Cg alkyl nebo C3 až Cg cykloalkyl, amino znamená skupinu -NH2, halogen je vybrán ze skupiny zahrnující atomy fluoru, bromu, chloru a jodu, hydroxy znamená skupinu -OH, merkapto znamená skupinu -SH, nitro znamená skupinu -NO2.
S výhodou sloučeniny obecného vzorce I nesou jako jeden ze substituentů R hydroxyl v poloze 2 fenylu.
Předmětem vynálezu jsou dále substituční deriváty N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I pro použití jako léčiva.
Předmětem vynálezu jsou rovněž substituční deriváty N6-benzyladcnosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I pro použití jako inhibitory proteinkinas, s výhodou lidské kinasy EPHB2.
• ·
Předmětem vynálezu jsou rovněž substituční deriváty N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I pro použití pro inhibici buněčné proliferace a/nebo indukci apoptózy.
Předmětem vynálezu jsou dále substituční deriváty N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I pro použití jako léčiva pro léčbu onemocnění, která zahrnují buněčnou proliferaci, jakými jsou nádory, leukémie, restenóza, revmatická artritis, lupenka, diabetes I. typu, roztroušená skleróza, Alzheimerova choroba, parazitozy způsobené živočichy, houbami a/nebo prvoky, polycystické onemocnění ledvin, odmítnutí transplantátu (host versus grafit disease) a dna.
Předmětem vynálezu je také použití substitučních derivátů N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I pro výrobu léčiva pro léčbu onemocnění, která zahrnují buněčnou proliferaci, jakými jsou nádory, leukémie, restenóza, revmatická artritis, lupenka, diabetes I. typu, roztroušená skleróza, Alzheimerova choroba, parazitozy způsobené živočichy, houbami a/nebo prvoky, polycystické onemocnění ledvin, odmítnutí transplantátu (host versus graft disease) a dna.
Látky podle vynálezu inhibují katalytickou aktivitu proteinkinas prostřednictvím interakce těchto sloučenin s ATP-vazebným místem těchto enzymů. Takovéto sloučeniny jsou zejména žádoucí pro redukci nadměrného buněčného růstu, neboť umožňují inhibici kinasové aktivity bez ohledu na příčinu nadměrné kinasové aktivity vedoucí k hyperproliferaci. Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou tedy aktivní v situacích, ve kterých je mutovaná kinasa hyperaktivní, a situacích, ve kterých je kinasa přítomná ve zvýšených hladinách. Sloučeniny podle vynálezu mohou rovněž blokovat nadbytečnou kinasovou aktivitu v situacích, kdy další proteinový partner regulující danou kinasu je přítomen v nadbytečných hladinách, nebo je mutován či je jeho vazba ke kinase zvýšená. Konečně, sloučeniny podle tohoto vynálezu, které blokují kinasovou aktivitu prostřednictvím interakce s ATP vazebným místem enzymu, jsou rovněž vhodné pro inhibici kinasové aktivity v situacích, kdy přirozený proteinový inhibitor komplexů s kinasou je mutován.
• · ·
Studie probíhající s deriváty podle tohoto vynálezu prokázaly, kromě jiného, silný účinek na apoptózu v řadě nádorových buněčných linií. Bylo pozorováno, že apoptóza může být indukována ve fázi Gj nebo G2 a v souvislosti s poškozením DNA; některé buňky zastaví v G| fázi a poté je indukována p53-dependentní apoptotická dráha. V jiných situacích dochází k tomu, že buňky zastavují v G2/M přechodu jako reakce na poškození DNA a pak je pozorována aktivace p53-nezávislé apoptotické dráhy. Tato dráha je zejména významná v terapii nádorů, u kterých je pozorován nedostatek aktivního p53. Je proto důležitá i aplikace nových derivátů, které stimulují p53-nezávislou apoptózu v buňkách, které se zastavily v G2 fázi vlivem poškození DNA při použití léčiv jakými jsou mitoxantron nebo cis-platina. Inhibitory z tohoto vynálezu tak mohou zvýšit terapeutický potenciál současně používaných protinádorových látek.
Předmětem vynálezu jsou také substituční deriváty N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I pro použití jako léčiva pro potlačení imunostimulace, s výhodou pro léčbu arthritis nebo pro supresi odmítnutí transplantovaných orgánů.
Předmětem vynálezu jsou také použití substitučních derivátů N6-benzyladenosin-5'monofosfátu obecného vzorce I pro výrobu léčiva pro potlačení imunostimulace, s výhodou pro léčbu arthritis nebo pro supresi odmítnutí transplantovaných orgánů.
Předmětem vynálezu je rovněž použití substitučního derivátu N6-benzyladěnosin-5'monofosfátu obecného vzorce I v tkáňových kulturách k regulaci proliferace a morfogeneze buněk.
Předmětem vynálezu je rovněž použití sloučeniny obecného vzorce I při přípravě afinitních adsorpčních nosičů, mobilizovaných enzymů pro kontrolu výrobních procesů, reagencií pro imunodetekci, diagnostických vzorků, l4C, 3H, avidinem a biotinem značených sloučenin a oligonukleotidů.
Předmětem vynálezu je také použití sloučeniny obecného vzorce I pro in vitro klonování rostlinných i zvířecích, s výhodou savčích (s výjimkou člověka), zárodečných buněk a embryí, s výhodou oocytů.
♦ * ♦ · · · · · · ♦ · « · • · · · · · ♦··· * ··· · · « ···· ·· · · • · ♦ · ·* * * ···· ♦♦ *« · ·«· ··
Předmětem vynálezu je dále použití sloučeniny obecného vzorce I jako růstových regulátorů rostlin, mikroorganismů, kvasinek, hub a zvířat, s výhodou savců s výjimkou člověka.
Předmětem vynálezu jsou rovněž terapeutické přípravky, obsahující alespoň jeden substituční derivát N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I či farmaceuticky přijatelnou sůl takovéto sloučeniny a alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič. S výhodou se jedná o farmaceutické přípravky.
Výhodnými sloučeninami podle vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I vybrané ze skupiny zahrnující: 6-(2-fluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-fluorbenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(2-brombenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3brombenzylamínojpurin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-brombenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(2-jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2nitrobenzylamino)purine ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(4-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(5-nitro-2methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-methylbenzylamino)purin ribosid-5 monofosfát, 6-(3-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-methoxybenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(3-methoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4methoxybenzylaminojpurin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxybenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(3-hydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4hydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-ethoxybenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(3-ethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4ethoxybenzylaminojpurin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-ethylbenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(4-pentylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4pentyloxybenzylaminojpurin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-oktylbenzylamino)purin ribosid-5 monofosfát, 6-(2,5-diaminobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,5· • ·
6-(3,5-dibrom-4dibrombenzylamino)purin
ribosid-5 '-monofosfát, methoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3-dichlorbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(2,4-dichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,5dichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-dichlorbenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát,
6-(3,4-dichlorbenzy lamino)purin ribosid-5 '-monofosfát,
6-(3,5dichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,4,5-tetrafluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-chlor-3,6-difluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(5chlor-2-fluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3,4-trifluorbenzy lamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,5-trifluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4,5trifluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4,5-trifluorbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(2,3,6-trifluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-chlor-2,6difluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-chlor-6-fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-difluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4difluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4-difluorbenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(2,5-difluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,5difluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-chlor-6-fluor-3methylbenzylamino)purin purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(6-chlor-2-fluor-3methylbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3-difluor-4-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-difluor-3-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(3-chlor-2,6-difluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-f!uor-4-methyl benzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-fluor-3-methyíbenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(5-fluor-2-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-chlor-3,6difluorbenzy!amino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-chlor-4-fluorbenzylamino)purin ribosid-5-monofosfát, 6-(3,4-dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5-monofosfát, 6-(3,5dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3,4-dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4-dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,5dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5 -monofosfát, 6-(2,6-dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4-dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,5dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3-dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4-dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,5dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3-methoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6··
(2-hydroxy-4-methoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-5-
methoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-6-
methoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-hydroxy-2-
methoxy benzy lamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-hydroxy-4-
methoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-hydroxy-5-
methoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-hydroxy-6-
methoxy benzy 1 amino)pur i n ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-hydroxy-2-
methoxy benzy 1 amino)puri n ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-hydroxy-3-
methoxy benzy 1 amino)puri n ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-hydroxy-5-
methoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-hydroxy-6-
methoxy benzy 1 amino)puri n ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3,4-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3,5-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3,6-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4,5-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4,6-
dimethoxy benzy lamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-5,6-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-hydroxy-4,5-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-hydroxy-4,6-
dimethoxy benzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6- (3 -hy droxy-2,4-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3 -hydroxy-2,5-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-hydroxy-2,6-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-hydroxy-2,3-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-hydroxy-2,5-
dimethoxy benzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-hydroxy-2,6-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-hydroxy-3,5-
dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-hydroxy-3,6-
dimethoxy benzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3-dihydroxy-4-
methoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3-dihydroxy-5-
methoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3-dihydroxy-6-
methoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,4-dihydroxy-3-
methoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,4-dihydroxy-5-
methoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,4-dihydroxy-6-
• · · • · « φ · methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxy benzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxy benzy lami no)purin methoxy benzy lamino)purin methoxy benzy lamino)pur i n • · ♦ ♦Φ • · ·· • ·♦ · * ♦ • ·· · · • · * · < · · · · ribosíd-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 -monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát,
6-(2,5-dihydroxy-36-(2,5-dihydroxy-46-(2,5-dihydroxy-66-(2,6-dihydroxy-36-(2,6-dihydroxy-46-(2,6-dihydroxy-56-(3,4-dihydroxy-26-(3,4-dihydroxy-56-(3,4-dihydroxy-66-( 3,5 - dihy droxy-26-(3,5 -dihy dr oxy-46-(3,5-dihydroxy-6methoxy benzy lamino)pur in ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3,4-trimethoxybenzylamino)purin ribosid-5-monofosfát, 6-(2,4,5-trimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(2,4,6-trimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát,
6-(3,4,5trimethoxybenzylamino)purin trimethoxybenzylamino)purin trimethoxy benzy lamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát,
6-(2-hydroxy-3,4,5
6-(2-hydroxy-3,4,6
6-(2-hydroxy-4,5,6 trimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,4,6-trimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,4-trihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4,6trihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,4-trihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4,5-trihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(2,4,6-trihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3 chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-5-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2hydroxy-6-chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4-jodbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-5-jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-6jodbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3-brombenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4-brombenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2hydroxy-5-brombenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-6 brombenzylaminojpurin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3-fluorbenzylamino)purin « · ·« «* • t · ·· • · ·· « ··· ·· • · ·t *·*· 4 tv>
• · ♦ · i • «««· ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4-fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2hydroxy-5-fluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-6fluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(2-hydroxy-5-methylbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-6methylbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3-dihydroxy-4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3-dihydroxy-5-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6 (2,5-dihydroxy-4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-4chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-4-jodbenzyIamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3-chlorbenzylamino)purÍn ribosid-5-monofosfát, 6(2,6-dihydroxy-3-brombenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3jodbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3-fluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3,5-dichlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3,5-dibrombenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3,5dijodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3,5difluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4,5-dimethoxy-2-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4-dimethylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3dimethylbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,4-dimethylbenzylamino)purin ribosid-5-monofosfát, 6-(2,6-dimethylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6dimethyl-4-hydroxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3,5-dimethyl-4hydroxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-fluor-4-hydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-fluor-4-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4dinitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,5-dinitrobenzyIamino)purin ribosid-5 'monofosfát, 6-(2-methyl-5-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-methyl-4nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4-dijod-4-hydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-chlor-3,4-dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(4-chlor-3,5-dinitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-chlor-4 fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-chlor-4-fluorbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(2-chlor-6-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-chlor-2methylbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-chlor-4-methylbenzy lamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(5-chlor-2-methoxybenzy!amino)purin ribosid-5-monofosfát, 6-(2 chlor-4-fluorbenzylamino)purin ribosid-5 -monofosfát, 6-(2-chlor-5-nitrobenzylamino)purin • * ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-chlor-6-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4chlor-3-nitrobenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(5-chlor-2-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-brom-4-hydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(3,5-dibrom-4-hydroxybenzylamino)purin, 6-(3-brom-4-methoxybenzylamino)purin, 6-(4butoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-butoxybenzylamino)purin ribosid-5 monofosfát, 6-(4-/t-butyl/benzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-t-butyl-2,6dimethylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-aminobenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(3-aminobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4aminobenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-amino-3-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-amino-4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2amino-5-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-amino-6chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-amino-2-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-amino-4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3amino-5-chlorbenzylamÍno)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-amino-6chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-diamino-3-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-diamino-4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4amino-3-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-amino-5dichlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(5-amino-2-methylbenzylamino)purine ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-amino-3-nitrobenzylamino)purine ribosid-5'-monofosfát, 6-(4amino-3-nitrobenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,4,5-trichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4,5-trichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4,6trichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,4-trichlorbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(2,3,5-trichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,6trichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,5,6-trichlorbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát.
Výchozím materiálem pro přípravu sloučenin obecného vzorce I je 6-chlorpurin ribosid-5 monofosfát. Dalším výchozím materiálem pro přípravu sloučenin obecného vzorce I je 6bromopurin ribosid-5'-monofosfátu, oba výchozí materiály jsou známé z literatury a komerčně dostupné. Výchozím materiálem pro přípravu sloučenin obecného vzorce I je také 6-fluorpurin ribosid-5'-monofosfátu, který lze připravit z 6-chlorpurinu ribosid-5 monofosfátu reakcí s triethylaminem za vzniku kvarterní amoniové soli, která pak reakcí s • · « a tetrabutylamonium trifenydifluorosilikátem v dimethylformamidu může být převedena na 6fluorpurin ribosid-5'-mono fosfát (Gurvich et al., Nucleos. Nucleot. 18: 2327 (1999)).
Dalším výchozím materiálem pro přípravu sloučenin obecného vzorce I jsou substituované benzylaminy. Ty, které obsahují jednu nebo více hydroxylových skupin, nejsou komerčně dostupné a mohou být připraveny demethylací příslušných methoxyderivátů pomocí 48 % HBr v atmosféře N2.
Předmětem vynálezu je rovněž způsob přípravy substitučních derivátů N6-benzyladenosin-5'monofosfátu obecného vzorce I, ve kterém Ran mají výše uvedené významy a jehož podstata spočívá v tom, že se 6-halogenpurin ribosid-5 ’-monofosfát, kde halogen je vybrán ze skupiny zahrnující chlor, brom a fluor, nukleofílně substituuje benzylaminem substituovaným jedním až čtyřmi substituenty R, mající význam uvedený výše, stejnými nebo různými.
Terapeutické přípravky
Terapeutický přípravek obsahuje od 1 do 95 % aktivní látky, přičemž jednorázové dávky obsahují přednostně od 20 do 90 % aktivní látky a při způsobech aplikace, které nejsou jednorázové, obsahuje přednostně od 5 do 20 % aktivní látky. Jednotkové dávkové formy jsou např. potahované tablety, tablety, ampule, lahvičky, čípky nebo tobolky. Jiné formy aplikace jsou např. masti, krémy, pasty, pěny, tinktury, rtěnky, kapky, spreje, disperze atd. Příkladem jsou tobolky obsahující od 0,05 g do 1,0 g aktivní látky.
Farmaceutické přípravky podle předloženého vynálezu jsou připravovány známými způsoby, např. běžným mícháním, granulací, potahováním, rozpouštěcími nebo lyofilizačními procesy. Přednostně jsou používány roztoky aktivních látek a dále také suspenze nebo disperze, obzvláště izotonické vodné roztoky, suspenze nebo disperze, které mohou být připraveny před použitím, např. v případě lyofilizovaných preparátů obsahujících aktivní látku samotnou nebo s nosičem jako je mannitol. Terapeutické přípravky mohou být sterilizovány a/nebo obsahují excipienty, např. konzervační přípravky, stabilizátory, zvlhčovadla a/nebo emulgátory, rozpouštěcí činidla, soli pro regulaci osmotického tlaku a/nebo pufry. Jsou připravovány známým způsobem, např. běžným rozpouštěním nebo lyofilizací. Zmíněné roztoky nebo suspense mohou obsahovat látky zvyšující viskozitu, jako např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, dextran, polyvinylpyrrolidon nebo želatinu.
« *
Olejové suspense obsahují jako olejovou složku rostlinné, syntetické nebo semisyntetické oleje obvyklé pro injekční účely, například kapalné estery mastných kyselin, které obsahují jako kyselou složku mastnou kyselinu s dlouhým řetězcem majícím 8-22, s výhodou pak 1222 uhlíkových atomů, např. kyselinu laurovou, tridekanovou, myristovou, pentadekanovou, palmitovou, margarovou, stearovou, arachidonovou a behenovou, nebo odpovídající nenasycené kyseliny, např. kyselinu olejovou, alaidikovou, eurikovou, brasidovou a linoleovou, případně s přídavkem antioxidantů, např. vitaminu E, β-karotenu nebo 3,5-di-fór/butyl-4-hydroxytoluenu. Alkoholová složka těchto esterů mastných kyselin má do 6 uhlíkových atomů a je mono- nebo polyhydrická, např. mono-, di- nebo trihydrické alkoholy jako metanol, etanol, propanol, butanol nebo pentanol a jejich isomery, ale hlavně glykol a glycerol. Estery mastných kyselin jsou s výhodou např. ethyl oleát, isopropyl myristát, isopropyl palmitát, „Labrafil M 2375“ (polyoxyethylen glycerol trioleát, Gattefoseé, Paříž), „Labrafil M 1944 CS“ (nenasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou oleje z meruňkových jader a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž), „Labrasol“ (nasycené polyglykolované glyceridy připravené alkoholýzou TCM a složené z glyceridů a esterů polyethylen glykolu; Gattefoseé, Paříž) a/nebo „Miglyol 812“ (triglycerid nasycených mastných kyselin s délkou řetězce Cr až C12 od Hůls AG, Německo) a zvláště rostlinné oleje jako bavlníkový olej, mandlový olej, olivový olej, ricinový olej, sesamový olej, sójový olej a zejména olej z podzemnice olejně.
Příprava injekčního přípravku se provádí za sterilních podmínek obvyklým způsobem, např. plněním do ampulí nebo lahviček a uzavíráním obalů.
Farmaceutické přípravky pro orální použití se mohou získat smícháním aktivní látky s jedním nebo více tuhými nosiči, případnou granulací výsledné směsi, a pokud je to požadováno, zpracováním směsi nebo granulí do tablet nebo potahovaných tablet přídavkem dalších neutrálních látek.
Vhodné nosiče jsou obzvláště plnidla jako cukry, např. laktosa, sacharosa, mannitol nebo sorbitol, celulosové preparáty a/nebo fosforečnany vápníku, s výhodou fosforečnan vápenatý nebo hydrogenfosforečnan vápenatý, dále pojivá jako škroby, s výhodou kukuřičný, pšeničný, rýžový nebo bramborový škrob, methylcelulosa, hydroxypropylmethylcclulosa, sodná sůl karboxymethylcelulosy a/nebo polyvinylpyrrolidin, a/nebo popřípadě desintegrátory jako výše zmíněné škroby a dále karboxymethylový škrob, zesítěný polyvinylpyrrolidin, alginová kyselina a její soli, s výhodou alginát sodný. Další neutrální látky jsou regulátory toku a • · · · · · lubrikanty, s výhodou kyselina salicylová, talek, kyselina stearová a její soli jako stearát hořečnatý a/nebo vápenatý, polyethylen glykol nebo jeho deriváty.
Jádra potahovaných tablet mohou být potažena vhodnými potahy, které mohou být odolné vůči žaludeční šťávě, přičemž používané potahy jsou mezi jinými koncentrované roztoky cukrů, které mohou obsahovat arabskou gumu, talek, polyvinylpyrrolidin, polyethylen glykol a/nebo oxid titaničitý, dále potahovací roztoky ve vhodných organických rozpouštědlech nebo směsích rozpouštědel, či pro přípravu potahů odolných vůči žaludeční šťávě roztoky vhodných celulosových preparátů jako acetylcelulosaftalát nebo hydroxypropylmethylcelulosaftalát. Barviva nebo pigmenty jsou přimíchávány do tablet nebo potahovaných tablet např. pro identifikaci nebo charakterizaci různých dávek účinné složky.
Farmaceutické přípravky, které mohou být užívány orálně, jsou také tvrdé tobolky ze želatiny nebo měkké uzavřené tobolky ze želatiny a změkčovadla jako glycerol nebo sorbitol. Tvrdé tobolky mohou obsahovat aktivní látku ve formě granulí, smíchanou např. s plnidly jako je kukuřičný škrob, pojivý nebo lubrikanty jako talek nebo stearát hořečnatý, a se stabilizátory. V měkkých tobolkách je aktivní látka přednostně rozpuštěna nebo suspendována ve vhodných kapalných látkách neutrální povahy jako mazací tuk, parafínový olej nebo kapalný polyethylen glykol či estery mastných kyselin a ethylen nebo propylen glykolu, přičemž je také možno přidat stabilizátory a detergenty např. typu esterů polyethylen sorbitanových mastných kyselin. Další formy orálního podávání jsou např. sirupy připravované běžným způsobem, které obsahují aktivní složku např. v suspendované formě a v koncentraci okolo 5 až 20 %, přednostně okolo 10% nebo podobné koncentrace, která umožňuje vhodnou individuální dávku, např. když je měřeno 5 nebo 10 ml. Ostatní formy jsou např. práškové nebo kapalné koncentráty pro přípravu koktejlů, např. v mléce. Takovéto koncentráty mohou být také baleny v množství odpovídajícím jednotkové dávce.
Farmaceutické přípravky, které mohou být používány rektálně, jsou např. čípky, které obsahují kombinaci aktivní látky se základem. Vhodné základy jsou např. přírodní nebo syntetické triglyceridy, parafínové uhlovodíky, polyethylen glykoly nebo vyšší alkoholy. Přípravky vhodné pro parenterální podání jsou vodné roztoky aktivní složky ve formě rozpustné ve vodě, např. ve vodě rozpustná sůl nebo vodná injekční suspenze, která obsahuje látky zvyšující viskozitu, např. sodnou sůl karboxymethylcelulosy, sorbitol a/nebo dextran, a stabilizátory tam kde je to vhodné. Aktivní látka může být také přítomna ve formě lyofilizátu společně s excipienty kde je to vhodné a může být rozpuštěna před parenterální aplikací • · přidáním vhodných rozpouštědel. Roztoky, které jsou použity pro parenterální aplikaci, mohou být použity např. i pro infúzní roztoky. Preferovaná konzervovadla jsou s výhodou antioxidanty jako kyselina askorbová, nebo mikrobicidy kyselina sorbová či benzoová.
Tinktury a roztoky obvykle obsahují vodně-etanolickou bázi, ke které jsou přimíchána zvlhčovadla pro snížení odpařování jako jsou polyalkoholy, např. glycerol, glykoly a/nebo polyethylen glykol, dále promazávadla jako estery mastných kyselin a nižších polyethylen glykolů, tj. lipofilní látky rozpustné ve vodné směsi nahrazující tukové látky odstraněné z kůže etanolem, a pokud je to nutné, i ostatní excipienty a aditiva.
Látky mohou být podávány profylakticky nebo terapeuticky jako takové nebo ve formě terapeutických přípravků, přednostně v množství které je efektivní proti zmíněným nemocem, přičemž u teplokrevných živočichů, např. člověka, vyžadujícího takovéto ošetření, je látka používána zejména ve formě farmaceutického přípravku. Na tělesnou hmotnost okolo 70 kg je aplikována denní dávka látky okolo 0,1 až 5 g, s výhodou 0,5 až 2 g.
Seznam vyobrazení
Obr. 1 ukazuje inhibici růstu nádorových buněčných linií CEM (A) and HL60 (B) sloučeninami obecného vzorce I. Cytotoxicita byla stanovena pomocí testu Calcein AM. Aktivita je vyjádřena v procentech maximální activity (v nepřítomnosti inhibitoru). ZR: zeatin ribosid-5'-monofosfátu; sloučenina 21: or/fto-topolin ribosid-5'-monofosfátu; 2: 6-(3fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfátu; 5: 6-(3-chlorobenzylamino)purin ribosid-5'monofosfátu; 28: 6-(2-hydroxy-3-methoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfátu.
Obr. 2 ukazuje vliv sloučeininy 21 na fragmentaci DNA. Procento apoptotické sub G1 frakce. Nádorová linie CEM byla inkubována se sloučeninou 21 v koncentracích odpovídajících IC50 (tj. 1.3 μΜ ,·), trojnásobku IC50 (A) a pětinásobku IC50 (). K buňkám v kontrolním experimentu (o) bylo přidáno DMSO vehikulum.
Obr. 3 ukazuje indukce aktivity kaspazy 3 látkou 21 (10 μΜ).
Obr. 4 ukazuje vliv sloučeniny 21 na morfologii jader u buněk HL-60. a) Jádra buněk kultivovaných za standardních podmínek v médiu bez 21, b) jádra buněk kultivovaných v médiu s přídavkem 5 μΜ 21 po dobu 24 hodin
Obr. 5 ukazuje indukci p21WAF_l v buňkách MCF-7 po přídavku sloučeniny 28 v různých koncentracích.
• · « · · * • · · ·
Obr. 6 ukazuje indukci p21WAF' v buňkách MCF-7 v rozmezí 6-24 hodin po přídavku sloučeniny 28 v 1 μΜ koncentraci.
Příklady provedení vynálezu
Vynález je dále popsán v následujících příkladech, aniž by byl jimi jeho rozsah jakkoliv omezen.
Výchozí suroviny pro sloučeniny obecného vzorce I jsou dostupné z komerčních zdrojů (Sigma-Aldrich, Fluka, Olchemim, atd.). Body tání byly stanoveny na Kofflerově bloku a nebyly korigovány. Odpařování rozpouštědel bylo prováděno na rotační vakuové odparce při teplotách pod 80 °C. ’H NMR spektra (σ, ppm; J, Hz) byla měřena na přístroji Varian VXR400 (400 MHz) nebo na přístroji Varian Unity 300 (300 MHz). Všechna spektra byla změřena při 25 °C za použití tetramethylsilanu jako vnitřního standardu. ES+MS spektra m/z (rel. %, složení, odchylka) byla měřena na VG 7070E spektrometru (70 eV, 200 °C, přímý nástřik). Quad MS spektra byla měřena na přístroji Micromass ZMD detektoru s ionizací elektrosprayem. Měrek silikagel Kieselgel 60 (zrnitost 230-400) byl použit na sloupcovou chromatografíi. Všechny sloučeniny vykázaly uspokojivé elementární analýzy (t 0,4 %).
Příklad 1: Příprava sloučenin obecného vzorce I
Látky byly připraveny z 6-chlorpurin-9p-D-ribosidu-5’-ť?-monofosfátu, dihydrátu disodné soli, nukleofilní substitucí příslušným substituovaným benzylaminem v přítomnosti N,Ndiisopropyl-N-ethylaminu v methanolu. Reakce byla prováděna při 90 °C 12 hodin za atmosférického tlaku. Po vakuovém odpaření rozpouštědla byl surový produkt přečištěn pomocí flash chromatografie na reverzní fázi Cl8; mobilní fáze: 15 % methanol. Rekrystalizace z 2-propanolu jako disodná sůl. Čistota finálního produktu 95% (HPLC), výtěžek 60-70 %.
Tabulka 1: Látky připravené způsobem podle příkladu 1 (uvedené sloučeniny jsou disodné soli bezvodé) • ·
č. Substituent v poloze 6 purinu Elementární analýza vypočteno/nalezeno
%C %H %N ES-MS [M-H‘]
1 2-fluorbenzylamíno 40.9/40.8 3.4/3.4 14.0/13.9 454
2 3-fluorbenzylamino 40.9/50.0 3.4/3.4 14.0/14.1 454
3 4-fluorbenzylamino 40.9/40.9 3.4/3.3 14.0/14.0 454
4 2-chlorbenzylamino 39.6/39.8 3.3/3.2 13.6/13.5 470
5 3-chlorbenzy lamino 39.6/39.8 3.3/3.3 13.6/13.4 470
6 4-chlorbenzylamino 39.6/39.6 3.3/3.2 13.6/13.7 470
7 2-brombenzylamino 36.4/36.5 3.1/3.0 12.5/12.3 515
8 3 -brombenzy lamino 36.4/36.2 3.1/3.2 12.5/12.3 515
9 4-brombenzylamino 36.4/36.5 3.1/3.1 12.5/12.6 515
10 2-jodbenzy lamino 33.6/33.4 2.8/2.7 11.5/11.4 562
11 3 -j odbenzy lamino 33.6/33.5 2.8/2.8 11.5/11.3 562
12 2-methy lbenzy lamino 43.6/43.7 4.1/4.1 14.1/14.0 450
13 3-methylbenzy lamino 43.6/43.4 4.1/4.0 14.1/13.8 450
14 4-methy lbenzy lamino 43.6/43.8 4.1/4.2 14.1/14.0 450
15 2-methoxybenzy lamino 42.3/42.3 3.9/3.8 13.7/13.7 466
16 3 -methoxybenzy lami no 42.3/42.2 3.9/3.9 13.7/13.5 466
17 4-methoxy benzy 1 ami no 42.3/42.2 3.9/3.8 13.7/13.8 466
18 2-aminobenzylamino 41.1/41.0 3.9/3.9 16.9/16.7 451
19 3 -aminobenzy lamino 41.1/41.2 3.9/4.0 16.9/16.7 451
20 4-aminobenzylamino 41.1/41.1 3.9/3.9 16.9/17.1 451
21 2-hydroxybenzylamino 41.1/41.0 3.9/3.9 16.9/16.7 451
22 3-hydroxybenzylamino 41.1/41.2 3.9/4.0 16.9/16.7 451
23 4-hydroxybenzylamino 41.1/41.1 3.9/3.9 16.9/17.1 451
24 2,4-dichlorbenzy lamino 37.1/37.0 2.9/2.8 12.7/12.7 504
25 3,4-dichlorbenzy lamino 37.1/37.2 2.9/2.9 12.7/12.5 504
26 2,3-dihydroxy benzy lamino 39.8/39.9 3.5/3.5 13.6/13.5 468
27 3,5 -dihydroxy benzy lamino 39.8/39.8 3.5/3.4 13.6/13.3 468
• · · · ♦
28 2-hydroxy-3methoxybenzylamino 41.0/41.2 3.8/3.8 13.3/13.3 482
29 2-hydroxy-5- methoxybenzylamino 41.0/41.1 3.8/3.7 13.3/13.2 482
30 3-hydroxy-4methoxybenzylamino 41.0/41.0 3.8/3.9 13.3/13.1 482
31 2,3-dimethoxybenzylamino 42.1/42.0 4.1/4.0 12.9/12.8 496
32 2,4-dimethoxybenzylamino 42.1/42.1 4.1/4.0 12.9/12.9 496
33 3,4-dimethoxybenzylamino 42.1/42.0 4.1/4.1 12.9/12.7 496
34 3,5-di methoxy benzy lamino 42.1/42.1 4.1/4.0 12.9/12.8 496
35 4-hydroxy-3,5dimethoxybenzy lamino 40.9/40.8 4.0/4.1 12.6/12.4 512
36 2,4-difluorbenzylamino 39.5/39.8 3.1/3.2 13.5/13.2 472
37 3,5-difIuorbenzy lamino 39.5/39.4 3.1/3.1 13.5/13.3 472
38 2,3,4-trifluorbenzy lamino 38.1/38.3 2.8/2.8 13.1/12.9 490
39 2,4,5-trifluorbenzylamino 38.1/38.2 2.8/2.7 13.1/13.0 490
40 2,3,6-trifluorbenzylamino 38.1/38.1 2.8/2.8 13.1/12.8 490
41 3 -chl or-4-fluorbenzy 1 amino 38.3/38.4 3.0/3.0 13.1/12.9 488
42 2-hydroxy-3methylbenzy lamino 42.3/42.3 3.9/3.8 13.7/13.5 466
43 2-hydroxy-3-fluorbenzylamino 39.6/39.4 3.3/3.3 13.6/13.5 470
44 2-hy droxy- 3 -j odobenzy lamino 32.8/32.7 2.7/2.7 11.2/11.1 578
45 2-hydroxy-5- methoxybenzylamino 41.0/41.0 3.8/3.8 13.3/13.0 482
46 2-hydroxy-5methylbenzy lamino 42.3/42.4 3.9/3.9 13.7/13.9 466
47 2-hydroxy-5chlorbenzylamino 38.4/38.5 3.2/3.2 13.2/13.0 486
48 2-hydroxy-5-fluorbenzylamino 39.6/39.4 3.3/3.3 13.6/13.5 470
49 2-amino-5-fluorbenzy lamino 39.7/39.7 3.5/3.4 16.3/16.0 469
Příklad 2 mmol 6-fluorpurin ribosid-5'-monofosfátu byly rozpuštěny v 15 ml n-propanolu a bylo přidáno 3,15 mmol 2,3-dihydroxybenzylaminu hydrobromidu a 10 mmol triethylaminu. Roztok byl zahříván na 90 °C po dobu 6 hodin. Po ochlazení byl surový produkt odfiltrován, promyt vychlazeným (5°C) n-propanolem (2x5 ml) a purifikován pomocí RP Cl8 flash chromatografie; mobilní fáze: 15-20 % methanol. Rekrystalován z ethanolu. TLC: chloroform-metanol-amoniak (90:9:0,1). Výtěžek 65-70 %.
Tabulka 2: Látky připravené způsobem podle příkladu 2 (uvedené sloučeniny jsou disodné soli bezvodé)
č. Substituent v poloze 6 purinu Elementární analýza vypočteno/nalezeno
%C %H %N ES-MS [M-H‘]
26 2,3-dihydroxybenzylamino 39.8/39.6 3.5/3.5 13.6/13.5 468
27 3,5 -d ihydroxybenzy lamino 39.8/39.8 3.5/3.5 13.6/13.4 468
28 2-hydroxy-3methoxy benzy lamino 41.0/41.2 3.8/3.8 13.3/13.3 482
30 3-hydroxy-4methoxybenzy lamino 41.0/41.0 3.8/3.9 13.3/13.1 482
31 2,3-dimethoxybenzylamino 42.1/42.0 4.1/4.0 12.9/12.8 496
32 2,4-dimethoxybenzy lamino 42.1/42.1 4.1/4.0 12.9/12.9 496
33 3,4-dimethoxybenzy lamino 42.1/42.0 4.1/4.1 12.9/12.7 496
34 3,5-dimethoxybenzylamino 42.1/42.1 4.1/4.0 12.9/12.8 496
35 4-hydroxy-3,5dimethoxybenzylamino 40.9/40.8 4.0/4.1 12.6/12.4 512
Příklad 3: In vitro cytotoxická aktivita nových derivátů
Protože toxické látky negativně ovlivňují metabolické procesy buňky, řada standardních metod hodnocení cytotoxicity je založena na měření mctabolizace umělých substrátů. Vznikající produkt je potom kvantifikován pomocí spektrometrie. Tyto testy je snadné provádět v 96-jamkových destičkách. Sloučeniny, které jsou předmětem tohoto vynálezu, byly hodnoceny pomocí testu založeného na kvantifikaci metabolizace Calceinu AM v mikrotitračních destičkách. Tento test je využíván v programech pro screening léků a pro testy chemosensitivity. V živých buňkách je Calcein AM enzymaticky hydrolyzován a jeho kumulace se projeví jako zelená fluorescence.
V rutinním screeníngu byly použity následující lidské linie: CEM (T-lymfoblastická leukémie), HL-60 (promyelocytická leukémie), K-562 (erythroidní leukémie), MCF-7 (adenokarcinom prsu), HOS (osteosarkom) a G-361 (melanom). Dále byly použity lidské fibroblasty BJ. Buňky byly udržovány vNunc/Coming 80 cm2 plastikových lahvích a pěstovány v médiu pro buněčné kultury (DMEM obsahující 5g/l glukózy, 2mM glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný), sloučeniny byly připraveny podle postupu popsaného v této patentové přihlášce
Buněčné suspenze byly připraveny a naředěny podle typu buněk a podle očekávané konečné hustoty buněk (2500-30000 buněk na jamku na základě charakteristik buněčného růstu). Do jednotlivých jamek 96-jamkové mikrotitrační destičky se pipetovalo 80 μΐ buněčné suspenze. Inokuláty byly stabilizovány 24 hodinovou preinkubací při 37°C v atmosféře CO2. Jednotlivé koncetrace testovaných látek byly do jamek mikrotitračních destiček přidány v čase nula jako 20 μΐ alikvotní podíl. Obvykle se sloučeniny ředily do šesti koncentrací v trojnásobné ředící řadě. Při rutinním testování byla nejvyšší koncentrace v jamce 166,7 μΜ, změny této koncentrace závisí na dané látce. Všechny koncentrace byly testovány v triplikátu. Inkubace buněk s testovanými deriváty trvala 72 hodin při 37 °C, 100 % vlhkosti a v atmosféře CO2. Na konci inkubační periody byl k buňkám přidán roztok Calceinu AM (Molecular Probes) v PBS (finální koncentrace v médiu 1 pg / ml). Inkubace probíhala další 1 hodinu. Fluorescence (FD) byla měřena pomocí Labsystem FIA readeru Fluoroskan Ascent (Microsystems). Přežití nádorových buněk (The tumor cell survival-TCS) bylo spočítáno podle následujícího vztahu: GI50=(FDjamka s derivátem /FDkontrolní jamka ) x 100 %, * ·
Hodnota GI50, která odpovídá koncentraci látky, způsobující 50% redukci esterázové aktivity, byla vypočtena ze získaných dávkových křivek (Obr. 1).
Pro vyhodnocení protinádorové aktivity byla testována toxicita nových derivátů na panelech obsahujících buněčné linie rozdílného histogenetického a druhového původu (Tab. 3). Ukázalo se, že pro všechny testované nádorové linie bylo působení nových sloučenin, kdežto nemaligní buněčné linie, tzn. BJ fíbroblasty, byly vůči tomuto působení rezistentní. Účinné deriváty zabily nádorové buňky při koncentracích blízkých 0,1-50 μΜ.
Tabulka 3: Cytotoxicita N6-substituovaných derivátů adenosinu pro různé nádorové buňky
Použitá buněčná linie / Gl 50 (pmol/L)
HOS K-562 NICF7 BJ G-361 CEM HL60
adenosin >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 >166,7
zeatin ribosid >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 >166,7
Substituent v poloze 6 purinu
2-hydroxybenzylamino 2.5 4 10.5 43.2 13.5 1.3 0.48
3-hydroxybenzylamino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 51.9 23.7
4-hydroxybenzylamino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 39.7 9.5
2-methoxybenzylamino 21.2 11.2 >166,7 >166,7 >166,7 3.2 2.3
3-methoxybenzylamino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 7.6 4.9
2-chlorbenzylamino >166,7 64 >166,7 >166,7 14.5 1.6
3-chlorbenzylamino >166,7 30.4 >166,7 >166,7 1.6 0.75
4-chlorbenzylamino >166,7 16.1 >166,7 >166,7 6.5 5.3
2-fluorbenzylamino >166,7 33.2 >166,7 4.6 3.2
3-fluorbenzy lamino >166,7 7 16.6 >166,7 15.7 4 0.92
4-fluorbenzylamino 20 6.4 14 >166,7 1.5 0.86
2-rnethylbenzylamino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 14 3.3
3-rnethylbenzylamino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 19.1 6.4
2-brombenzylamino >166,7 10 >166,7 >166,7 12.3 6.6
3-brombenzylamíno >166,7 19.7 >166,7 >166,7 5 8
4-brombenzylamino >166,7 68.2 >166,7 >166,7 20.6 47.4
2,4-dimethoxybenzylamino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 39
2-chlor-4-fluorbenzylamino >166,7 11.7 >166,7 >166,7 20.9 9
3-chlor-4-fluorbenzylamino >166,7 4.1 >166,7 >166,7 3.4 3.5
2,3-dimethoxybenzylamino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 109
2,4-dichlorbenzy lamino >166,7 85.7 126.9 >166,7 86.7 96.3
2,4-difluorbenzy lamino >166,7 7.4 >166,7 >166,7 7.1 3.4
2,3,4-trifluorobenzylannino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 58.2 13
3,4-dichlorbenzylamino >166,7 6.5 88.8 >166,7 3 1.1
3,5-difluorobenzylamino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 24.5 9.1
3,5-dimethoxybenzylamino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 18.8
2,3,6-trifluorbenzylamino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 13
2-hydroxy-3-methoxybenzylamino 24,1 2,1 30,4 69,7 27,9 0,3 0,5
3-hydroxy-4-methoxybenzylamino >166,7 >166,7 >166,7 >166,7 79,3 68,9
2-hy d roxy-5-methoxy benzy lam i no 6,4 15,4 21 87,9 12.3 0.9 0.54
2-hydroxy-5-chlorbenzy lamino 10,6 15.7 18 63,4 12.5 0.6 0.47
2-hydroxy-5-fluorbenzylamino 9,1 13.4 16 58,7 10,7 0.5 0.53
Příklad 4: Indukce apoptózy nádorových buněk
Pro analýzu mechanizmu indukované cytotoxicity nových sloučenin je důležité odlišit apoptózu od druhé hlavní formy buněčné smrti, nekrózy. Zaprvé, na úrovni tkáně apoptóza produkuje malý nebo žádný zánět, protože okolní buňky, zvláště makrofágy, spíše než že jsou uvolněny do extracelulární tekutiny, pohltí jednotlivé části buňky. Naproti tomu při nekróze je buněčný obsah uvolněn do extracelulární tekutiny, což způsobuje zánět. Zadruhé, na buněčné úrovni vykazují apoptoické buňky smršťování a blebbing (puchýřkování) cytoplasmy, zachování struktury buněčných organel včetně mitochondrií, kondenzaci chromatinu, fragmentaci jádra a tvorbu apoptoických tělísek , ačkoli ne všechny jsou vidět u všech typů buněk. Zatřetí, na molekulární úrovni hraje významnou roli v indukci apoptózy řada biochemických procesů. Většina z nich však není dobře pochopena a mají za následek aktivaci proteáz a nukleáz, které nakonec ničí klíčové biologické makromolekuly - proteiny a DNA.
Hodnocení apoptózy pomocí měření aktivity kaspázy-3
Během apoptózy dochází k aktivaci kaspázové kaskády. Kaspáza-3 je efektorovou kaspázou hrající roli v indukci některých změn charakteristických pro apoptózu (kondenzace chromatinu, fragmentace DNA).
Nádorová linie CEM byla udržována v médiu pro buněčné kultury (DMEM obsahující 5g/l glukózy, 2mM glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný). 24 hodin před otravou byly buněčné suspenze zcentrifugovány, naředěny čerstvým médiem na koncentraci 500000 buněk na 1 ml a rozpipetovány po 50 pL do 96 jamkové desky. Po inkubaci s testovanou látkou po 12 a 24
·· · · · • · « · • · · · · ··· · · ♦ ·ν«· · • · * · · hodin byla aktivita kaspázy-3 vyhodnocena pomocí komerčního kitu (Apo-ONE, Promega) jehož principem je hydrolýza fluorogenního substrátu Z-DEVD-R110 (excitace 480/ emise 520). Specifita reakce byla ověřena v kontrolním experimentu, kde byl kromě oTRMP přítomen i inihibitor kaspázy-3 Ac-DEVD-CHO. Všechny experimenty byly provedena v triplikátu.
Z obr. 2 je zřejmé, že ortho-topolin ribosid-5'-monofbsfát (sloučenina 21) aktivuje kaspázu-3 a že míra aktivace je závislá na čase působení.
Příklad 5: Analýza apoptózy pomocí průtokové cytometrie (indukce fragmentace DNA).
Jedním z průvodních jevů apoptózy je fragmentace DNA. Tu je možné s výhodou detekovat pomocí průtokové cytometrie po obarvení jader propidium jodidem. Protože fragmentace vede ke ztrátě části jaderné DNA, apoptotické buňky mají nižší obsah DNA než buňky v G1 fázi buňečného cyklu a na histogramu jsou patrné jako tzv. sub G1 frakce.
Nádorová linie CEM byla udržována v médiu pro buněčné kultury (DMEM obsahující 5g/l glukózy, 2mM glutaminu, 100 U/ml penicilinu, 100 pg/ml streptomycinu, 10% fetálního telecího séra a hydrogenuhličitan sodný). 24 hodin před otravou byly buněčné suspenze zcentrifugovány, naředěny čerstvým médiem na koncentraci 100000 buněk na 1 ml a rozpipetovány po 10 ml do Petriho misek. Po inkubaci s látkou po daný časový úsek, byly buňky zcentrifugovány (4°C , 600 g), promyty PBS (4°C) a fixovaný 70% ethanolem při teplotě -20°C přes noc. Fragmenty DNA o nízké molekulové hmotnosti extrahovány citrátovým pufrem (11,36 g citrátu trisodného dihydrátu /1). Jádra byla obarvena roztokem propidium iodidu v PBS (10 pg/ml) obsahujícím RNasu A (60 IU na vzorek). Po 1 hodinové inkubaci byly vzorky analyzovány průtokovým cytometrem (excitace 488 nm, emise nad 620nm).
Jak je vidět z Obr. 3, indukce fragmentace DNA v nádorové linii CEM je závislá na koncentraci sloučeniny 21 a čase jejího působení. Účinek je patrný již po 12 hodinách.
Příklad 6: Detekce apoptózy na základě morfologie buněk
Kultivace buněk. Suspenze lidských leukemických buněk, linie HL-60 byla kultivována v médiu RPMI-1640 doplněném 10% telecím fetálním sérem a antibiotiky v atmosféře 5%
CO2 při 37DC. Počet buněk je stanoven pomocí hernocytometru. Buňky byly získány z ECACC.
Viabilita buněk. Buňky jsou barveny kombinací fluorescein diacetátu (FDA, 2pg/ml) a propidium jodidu (PI, 10 pg/ml) přímo v růstovém médiu. Rozlišování živých a mrtvých buněk se provádí pomocí fluorescenčního mikroskopu (Mlejnek and Kolman, Chem. Biol. Interact. 1999, 117: 219-239 ).
Morfologická analýza buněčných jader. Buňky jsou promyty v PBS a pak fixovány ve směsi methanol/kyselina octová (3:1) při -20°C po dobu 12 hodin. Fixované buňky jsou nakapány na podložní sklíčka a barveny Hoechst 33342 (2 pg/ml) v PBS/glycerol (v/v 70:30). Morfologie buněčných jader je pozorována pod fluorescenčním mikroskopem OlympusBXóO, (Mlejnek and Kuglík 2000, J. Cell. Biochem. 2000, 77: 6-17). Průkaz apoptotických buněk touto metodou je znázorněn na obr. 4.
Příklad 7: Indukce proteinu p2IWAF'*, přirozeného inhibitoru cyklin-dependentních kinas, působením sloučeniny 28 v buněčné linii karcinomu prsu MCF-7 - molekulární mechanismus účinku
Změny hladiny proteinu p21WAF'! v závislosti na koncentraci sloučeniny 28
Na buňky MCF-7 kultivované při 37°C v atmosféře s 5% CO2 v médiu D-MEM s přídavkem 10% fetálního telecího séra působily koncentrace 28 v rozmezí 0-100 μΜ. 28 byl do média přidáván ze lOOmM zásobního roztoku v DMSO. Po 12 hodinách byly buňky sklizeny seškrabáním do média, centrifugovány (lOOOrpm, 4°C, 5min), 2x promyty ledovým PBS a následně opět centrifugovány. Následovala lyže buněk lx CSB (nanášecí pufr pro SDSPAGE, tj. elektroforézu proteinů v polyakrylamidovém gelu za přítomnosti SDS). Proteiny v lyzátu byly separovány SDS-PAGE a přeneseny na nitrocelulózovou membránu. Membrána byla zablokována roztokem 5% odtučněného mléka + 0.1% Tween 20 v PBS. Hladina proteinů p21WAF_1 a aktin (jako kontrola nanášeného množství proteinu) byla sledována imunochemicky pomocí komerčně dostupných specifických monoklonálních protilátek AntiWAF1 (Ab-1, Calbiochem) a Anti-Actin (Cloně AC-40, Sigma-Aldrich). Pro detekci navázaných protilátek byla použita králičí sekundární protilátka značená pcroxidázou (RAMPx, DAKO) s následnou chemiluminiscencí (ECL, Amersham-Pharmacia). Účinné indukce ·· «<* * , **** · · · ··«« • ♦ · ···· · · f • ··· · · · ·««· · * ..· ·,.· · proteinu p21 WAF’] je v buňkách MCF-7 dosaženo působením koncentrací 28 v řádu jednotek pmol na litr kultivačního média (Obr. 5).
Změny hladiny proteinu p21tl Ar~l v závislosti na době inkubace se sloučeninou 28
Buňky MCF-7 byly inkubovány v přítomnosti 1 μΜ sloučeniny 28. V různých časových intervalech od podání 28 byly buňky sklizeny a lyžovány. Následná SDS-PAGE a imunodetekce umožnila stanovení změn hladiny proteinu p21WAF1 v závislosti na délce inkubace v přítomnosti 28. Kultivace buněk, jejich sklizeni, lyže a detekce proteinů p21WAF_I a aktin v lyzátech probíhala obdobně jako v bodě 1. K účinné indukci p21WAF_l v buňkách MCF-7 dochází v rozmezí 6-24 hodin po přídavku 28 v 1 μΜ koncentraci (Obr. 5).
Příklad 8: Imunosupresivní aktivita
Jedním z důležitých parametrů specifické buněčné imunity je čodezva lymfocytů na antigeny nebo polyklonální mitogeny. Většina normálních savčích periferních lymfocytů je v klidové fázi buněčného cyklu. Antigeny i nespecifické polyklonální mitogeny mají schopnost aktivovat lymfatické buňky, což je doprovázeno dramatickými změnami ve vnitrobuněčném metabolismu (mitochondriální aktivita, proteinová syntéza, syntéza nukleových kyselin, formování blastů a buněčná proliferace). Sloučeniny, které jsou schopné selektivně inhibovat proliferaci lymfocytů, jsou potenciálními imunosupresivy. Pro měření proliferační odpovědi lymfocytů bylo vyvinuto množství in vitro analýz. Nejběžněji používanou metodou je
Ί inkorporace H-thymidinu.
Během buněčné proliferace dochází nejprve k replikaci DNA, poté je buňka rozdělena na dvě dceřinné buňky. Tento úzký vztah mezi buněčným zdvojením a DNA syntézou poskytuje možnost pro vyhodnocení intenzity buněčné proliferace. Jestliže jsou značené DNA prekurzory přidány do buněčné kultury, dělící se buňky inkorporují značené nukleotidy do své DNA. Tyto testy obvykle vyžadují použití radioaktivně značených nukleotidů, konkrétně tritiovaný thymidin ( [ H]-TdR). Množství [ H]-TdR inkorporované do buněčné DNA je kvantifikováno pomocí scintilačního počítače.
Lidskou heparinizovanou periferní krev jsme získali od zdravých dobrovolníků punkcí z kubitální žíly. Krev byla naředěna v PBS (1:3) a mononukleární buňky byly odseparovány centrifugací ve Ficoll-Hypaque hustotním gradientu (Pharmacia, 1,077 g/ml) při 2200 g po dobu 30 minut. Při následující centrifugací byly lymfocyty promývány v PBS, poté • · · resuspendovány v buněčném kultivačním mediu (RPMI 1640, 2 mM glutamin, 100 U/ml penicilín, 100 pg/ml streptomycin, 10 % fetální telecí sérum a hydrogenuhličitan sodný).
Buňky byly naředěny na cílovou hustotu 1.100.000 buněk/ml a byly pipetovány (180 μΐ) do 96-ti jamkových mikrotitračních destiček. Testované látky byly přidány k buněčným suspenzím ve čtyřkovém ředění v 20 μΐ alikvotech/jamku v čase nula. Obvykle byly testované sloučeniny vyhodnocovány v šesti koncentracích s nejvyšší testovanou koncentrací 266.7 μΜ. Jednotlivé koncentrace derivátů byly testovány v dubletu. Lymfocyty ve všech jamkách s výjimkou nestimulovaných kontrol byly aktivovány přidáním 50 μΐ konkanavalinu A (25 pg/ml). Buněčné suspenze byly dále inkubovány 72 hodin při 37 °C a při 100 % vlhkosti v atmosféře 5 % CO2. Na konci inkubace byly buoky analyzovány pomocí [ H]-TdR:
Buňky byly inkubovány s 0,5 pCi (20 μΐ zásobního roztoku 500 pCi/ml) na jamku po dobu 6 hodin při 37 °C a 5 % CO2. V dalším kroku byl použit automatizovaný buněčný harvestor pro lýzu buněk ve vodě a adsorpci DNA na filtr ze skleněných vláken o velikosti mikrotitračního panelu. DNA s inkorporovaným [ H]-TdR je zadržena na filtru, přičemž neikorporovaný materiál filtrem prochází. Filtry byly usušeny při pokojové teplotě přes noc, uzavřeny v plastikových sáčcích s 10-12 ml scintilační tekutiny. Množství [3H]-TdR přítomné na každém filtru bylo stanoveno scintilačním počítači. Efektivní imunosupresivní dávka (ED) byla spočítána podle následujícího vzorce: ED = (CCPMjamka s test, derivátem ! průměrná CCPMkontoriní jamka) x 100 % Hodnota ED5Q, což je koncentrace látky inhibující proliferaci 50 % lymfocytů, byla spočítána z dávkových křivek.
Pro vyhodnocení imunosupresivní aktivity nových sloučenin byla analyzována jejich schopnost inhibovat polyklonálním mitogenem stimulovanou proliferaci normálních lidských lymfocytů (Tab. 4). Naše výsledky ukazují, že tyto sloučeniny mají minimální vliv na o inkorporaci H-thymidinu v klidových (nestimulovaných) lymfocytech, nicméně účinně inhibují proliferaci mitogenem aktivovaných lymfocytů. Efektivní imunosupresivní dávka nových derivátů za in vitro podmínek byla v rozmezí 10-40 μΜ.
Tabulka 4: Imunosupresivní aktivity nových sloučenin
SUBSTITUENT V POLOZE 6 PURINU Lidské lymFocyty ED50 (μΜ)
2-hy droxy benzy 1 amino 6,7
3-hydroxybenzy lamino 12,8
2-fluorbenzylamino 6,3
3-fluorbenzylamino 11,5
4-fluorbenzylamino 13,4
2-methylbenzy lamino 7,3
3 -methy lbenzy lamino 7,5
3,4-dihy droxybenzy lamino 9,4
2-hy droxy- 3 -chl orbenzy lamino 3,2
2-hy droxy-3 -methoxy benzy lamino 1,2
2-hydroxy-4-methoxybenzylamino 2,1
2-chlorbenzylamino 8,7
3-chlorbenzylamino 3,2
4-chlorbenzylamino 3,3
Příklad 9: Vliv nových látek na buněčné dělení rostlinných buněk
Cytokininová aktivita nově připravených derivátů byl testována v kalusovém biotestu za použití cytokinin-dependentního kalusu tabáku. Tento cytokinin-dependentní tabákový kalus Nicotiana tabacum L. cv. Wisconsins 38 byl udržován při 25 °C na modifikovaném mediu Murashige-Skoog obsahujícím na 1 litr: 4 pmol kys. nikotinové, 2,4 pmol pyridoxin hydrochloridu, 1,2 pmol thiaminu, 26,6 pmol glycinu, 1,37 pmol glutaminu, 1,8 pmol myoinositolu, 30 g sacharosy, 8 g agaru, 5,37 pmol α-naftyloctové kyseliny a 0,5 pmol 6benzylaminopurinu. Subkultivace probíhala každé 3 týdny. Čtrnáct dní před započetím biotestu byl kalus přenesen na médium bez 6-benzylaminopurinu. Cytokininová aktivita byla stanovena na základě nárůstu čerstvé hmoty kalusu po 4 týdnech kultivace. Pět replikátů bylo připraveno pro každou testovanou koncentraci a daný test byl opakován minimálně dvakrát. V každém experimentu byla použita jako kontrolní látka kinetin (K), který je znám velmi vysokou cytokininovou aktivitou. Testované cytokininy byly ropzuštěny v dimothylsulfoxidu (DMSO) a zásobní roztok doplněn vodou na ΙΟ’3 M. Tento zásobní roztok byl dále ředěn testovacím médiem v koncentračním rozsahu 10'8 až 10'4 M. Finální koncentrace DMSO • · v médiu nepřevýšila 0.2% a v této koncentraci neovlivňovala biologickou aktivitu testu. Stimulační aktivita byla vypočtena z růstových křivek závislosti čerstvé hmoty kalusu na koncentraci.
Ze získaných dat byla opět vypočítána maximální účinná koncentrace testované látky a její relativní účinnost v této koncentraci (Tab. 5). 10'6 M koncentrace K byla postulována jako 100% biologické aktivity.
Tabulka 5: Vliv nových substitučních derivátů N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu na růst cytokinin-dependentního tabákového kalusu Nicotiana tabacum L. cv. Wisconsins 38
Substituent N6 maximální účinná koncentrace (mol.l'1) účinnost (%) [ΙΟΛηοΙ.Γ1 K = 100%]
2-fluorobenzylamino 100±9
3-fluorobenzylamino 10'5 103±6
2-chlorobenzylamino 10'6 121±4
3 -chlorobenzy 1 amino 10’5 109±5
2-bromobenzylamino ^3 100±4
3 -bromobenzy lamino ΐθ3 102±l1
2-methylbenzylamino 108±4
2-methoxylbenzylamino fČĚ5 108±l
3 -methoxy 1 benzy lamino 10'6 102±l
3-chloro-4-fluorobenzylamino 10’6 107±4
2-chloro-4-fluorobenzylamino 10'5 108±4
3,5-difluorobenzy lamino 10‘6 105±3
2,4,5-trifluorobenzylamino 10’5 105±3
Příklad 10: Suché tobolky
5000 tobolek, každá obsahující jako aktivní složku 0,25 g jedné ze sloučenin obecného vzorce
I se připraví následujícím postupem:
Složení
Aktivní složka 1250 g
Talek 180 g
Pšeničný škrob 120 g
Magnesium stearát 80 g
Laktosa 20 g
Preparační postup: Rozetřené látky jsou protlačeny přes síto s velikostí ok 0,6 mm. Dávka 0,33 g směsi je přenesena do želatinové tobolky pomocí přístroje na plnění tobolek.
Příklady 11: Měkké tobolky
5000 měkkých želatinových tobolek, každá z nich obsahující jako aktivní složku 0,05 g jedné z látek sloučenin obecného vzorce I se připraví následujícím postupem:
Složení
Aktivní složka 250 g
Lauroglykol 2 litry
Preparační postup: Prášková aktivní látka je suspendována v Lauroglykolu® (propylenglykol laurát, Gattefoseé S. A., Saint Priest, Francie) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na velikost částic asi 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0.419 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.
Příklad 12: Měkké tobolky
5000 měkkých želatinových tobolek, každá z nich obsahující jako aktivní složku 0,05 g sloučeniny obecného vzorce I se připraví následujícím postupem:
Složení
Aktivní složka
250g
PEG 400 1 litr
Tween 80 1 litr
Preparační postup: Prášková aktivní složka je suspendována v PEG 400 (polyethylen glykol o Mr mezi 380 a 420, Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a Tween® 80 (polyoxyethylen sorbitan monolaurát, Atlas Chem. Ind., Inc., USA, dodává Sigma, Fluka, Aldrich, USA) a rozetřena ve vlhkém pulverizátoru na částice o velikosti 1 až 3 mm. Dávka o velikosti 0,43 g směsi je potom přenesena do měkkých želatinových tobolek pomocí přístroje na plnění tobolek.

Claims (15)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Substituční deriváty N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I,
    I kde (R)n znamená 1 až 4 substituenty R (n je v rozmezí 1 až 4), přičemž R mohou být stejné nebo rozdílné, a R jsou vybrány ze skupiny zahrnující Cj až Cg alkyl, Ci až Cg alkoxy, amino, halogen, hydroxy, merkapto a nitro skupinu, a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
  2. 2. Substituční deriváty N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1, vybrané ze skupiny zahrnující 6-(2-fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3fluorbenzylaminojpurin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-fluorbenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(2-brombenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3- brombenzylaminojpurin ribosid-5'-mono fosfát, 6-(4-brombenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(2-jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2chlorbenzylaminojpurin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2a v nitrobenzylamino)purine ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-nitrobenzylamino)purin ribosid-5 monofosfát, 6-(4-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(5-nitro-2methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-methylbenzylamino)purin ribosid-5 monofosfát, 6-(3-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4methylbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-methoxybenzylamino)purin ribosid-5 monofosfát, 6-(3-methoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4methoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxybenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(3-hydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4hydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-ethoxybenzylamino)purin ribosid-5 monofosfát, 6-(3-ethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4ethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-ethylbenzylamino)purin ribosid-5 monofosfát, 6-(4-pentylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4pentyloxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-oktylbenzylamino)purin ribosid-5 monofosfát, 6-(2,5-diaminobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,5dibrombenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,5-dibrom-4methoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3-dichlorbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(2,4-dichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,5dichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-dichlorbenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(3,4-dichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,5dichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,4,5-tetrafluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-chlor-3,6-difluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(5chlor-2-fluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3,4-trifluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,5-trifluorbenzyiamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4,5trifluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4,5-trifluorbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(2,3,6-trifluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-chlor-2,6difluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-chlor-6-fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-difluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4difluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4-difluorbenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(2,5-difluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,5difluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-chlor-6-fluor-3“ methylbenzylamino)purin purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(6-chlor-2-fluor-3methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3-difluor-4-methylbenzylamino)purin * « ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-difluor-3-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(3-chlor-2,6-difluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-fluor-4-methyl benzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-fluor-3-methylbenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(5-fluor-2-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-chlor-3,6diíluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-chlor-4-fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4-dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,5dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4-dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4-dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,5dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4-dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,5dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3-dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4-dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,5 dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3-methoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(2-hy droxy-4-methoxy benzy 1 am ino)puri n methoxy benzy lamino)purin methoxy benzy lamino )p uri n methoxy benzy lamino)purin methoxy benzy lamino)purin methoxy benzy lami no)puri n methoxy benzy lamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxy benzy lamino)puri n methoxy benzy lamino)pur i n dimethoxybenzylamino)purin dimethoxybenzylamino)purin dimethoxybenzylamino)purin dimethoxybenzylamino)purin dimethoxybenzylamino)purin dimethoxybenzylamino)purin dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 -monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5'-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát,
    6-(2-hydroxy-56-(2-hydroxy-66-(3-hydroxy-26-(3-hydroxy-46-(3-hydroxy-56-(3-hydroxy-66-(4-hydroxy-26-(4-hydroxy-36-(4-hydroxy-56-(4-hydroxy-66-(2-hydroxy-3,46-(2-hydroxy-3,56-(2-hydroxy-3,66-(2-hydroxy-4,56-(2-hydroxy-4,66-(2-hydroxy-5,66 -(3 -hy dr o xy-4,5 6-(3-hydroxy-4,6dimethoxy benzy 1 am ino)purin dimethoxy benzy 1 amino)purin di methoxy benzy 1 amino)purin d imethoxy benzy I amino)purin dimethoxybenzylamino)purin dimethoxy benzylamino)purin dimethoxybenzy lamino )purin dimethoxybenzylamino)purin dimethoxy benzy lamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxy benzy lamino)puri n methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxy benzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxy benzy lamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin methoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát,
    6-(3-hydroxy-2,46-(3-hydroxy-2,56-(3-hydroxy-2,66-(4-hydroxy-2,36-(4-hydroxy-2,56-(4-hydroxy-2,66-(4-hydroxy-3,56-(4-hydroxy-3,66-(2,3-dihydroxy-46-(2,3-dihydroxy-56- (2,3 -dihy droxy-66-(2,4-dihydroxy-36-(2,4 -dihydroxy- 5 6-(2,4-dihydroxy-66-(2,5-dihydroxy-36-(2,5 -dihy droxy-46-(2,5 -dihy droxy-66-(2,6-dihydroxy-36-(2,6-dihydroxy-46-(2,6-dihydroxy-56-(3,4-dihydroxy-26-( 3,4-dihy droxy- 5 6-(3,4-dihydroxy-66-(3,5-dihydroxy-26-(3,5-dihydroxy-46-(3,5-dihydroxy-6methoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,4-trimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4,5-trimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(2,4,6-trimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát,
    6-(3,4,5trimethoxy benzy lamino)puri n trimethoxybenzylamino)purin trimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát, ribosid-5 '-monofosfát,
    6-(2-hydroxy-3,4,5
    6-(2-hydroxy-3,4,6
    6-(2-hydroxy-4,5,6 ♦ B
    B « trimethoxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,4,6-trimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,4-trihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4,6trihydroxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3,4-trihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4,5-trihydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(2,4,6-trihydroxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-5-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2hydroxy-6-chlorbenzylamino)purin ribosid-5 -monofosfát, 6-(2-hydroxy-3jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4-jodbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-5-jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-6jodbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3-brombenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4-brombenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2hydroxy-5-brombenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-6brombenzylamino)purin ribosid-5 -monofosfát, 6-(2-hydroxy-3-fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4-fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2hydroxy-5-fluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-6fluorbenzy lamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-3 -methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-hydroxy-4-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(2-hydroxy-5-methy lbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-hydroxy-6methylbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,3-dihydroxy-4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3-dihydroxy-5-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(2,5-dihydroxy-4-chlorbenzyíamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-4chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-4-jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3-chlorbenzylamino)purin ribosid-5-monofosfát, 6(2,6-dihydroxy-3-brombenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3jodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3-fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3,5-dichlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3,5-dibrombenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3,5dijodbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-dihydroxy-3,5difluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4,5-dimethoxy-2-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4-dimethylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3dimethylbenzy lamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,4-dimethylbenzylamino)purin a*t« ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-dimethylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6dimethyl-4-hydroxybenzylamino)purin ribosid-5 -monofosfát, 6-(3,5-dimethyl-4hydroxybenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-fluor-4-hydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-fluor-4-methyIbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,4dinitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3,5-dinitrobenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(2-methyl-5-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-methyl-4nitrobenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3,4-dijod-4-hydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-chlor-3,4-dimethoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(4-chlor-3,5-dinitrobenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-chlor-4fluorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-chlor-4-fluorbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(2-chlor-6-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-chlor-2methylbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-chlor-4-methylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(5-chlor-2-methoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2chlor-4-fluorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-chlor-5-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-chlor-6-nitrobenzylamÍno)purin ribosid-5-monofosfát, 6-(4chlor-3-nitrobenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(5-chlor-2-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-brom-4-hydroxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6(3,5 -dibro m-4 -hy droxy benzy lamino)purin, 6-(3-brom-4 -methoxy benzy lamino )purin, 6- (4 butoxybenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4-butoxybenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(4-/t-butyl/benzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-t-buty 1-2,6dimethylbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-aminobenzylamino)purin ribosid-5'monofosfát, 6-(3-aminobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4aminobenzylamino)purín ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-amino-3-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2-amino-4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2amino-5-chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-amino-6chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-amino-2-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3-amino-4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(3amino-5-chlorbenzy lamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(3-amino-6chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2,6-diamino-3-chlorbenzy lamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,6-diamino-4-chlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(4amino-3-chlorbenzylamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(4-amino-5dichlorbenzy lamino)purin ribosid-5 '-monofosfát, 6-(5-amino-2-methylbenzylamino)purine ribosid-5 '-monofosfát, 6-(2-amino-3-nitrobenzylamino)purine ribosid-5'-monofosfát, 6-(4amino-3-nitrobenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát. 6-(2,4,5-trichlorbenzylamÍno)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4,5-trichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,4,6trichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,4-trichlorbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát, 6-(2,3,5-trichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,3,6trichlorbenzylamino)purin ribosid-5'-monofosfát, 6-(2,5,6-trichlorbenzylamino)purin ribosid5'-monofosfát.
  3. 3. Způsob přípravy substitučních derivátů N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačený tím, že se 6-halogenpurin ribosid-5'-monofosfát, kde halogen je vybrán ze skupiny zahrnující chlor, brom a fluor, nukleofilně substituuje benzylaminem substituovaným jedním až čtyřmi substituenty R, přičemž R má stejný význam jako v nároku 1, stejnými nebo různými.
  4. 4. Substituční deriváty N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1 pro použití jako léčiva.
  5. 5. Substituční deriváty N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1 pro použití jako inhibitory proteinkinas.
  6. 6. Substituční deriváty N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1 pro použití pro inhibici buněčné proliferace a/nebo indukci apoptózy.
  7. 7. Substituční deriváty N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1 pro použití jako léčiva pro léčbu onemocnění, která zahrnují buněčnou proliferaci, s výhodou onemocnění vybraných ze skupiny zahrnující nádory, leukémie, restenóza, revmatická artritis, lupenka, diabetes I. typu, roztroušená skleróza, Alzheimerova choroba, parazitozy způsobené živočichy, houbami a/nebo prvoky, polycystické onemocnění ledvin, odmítnutí transplantátu a dna.
  8. 8. Použití substitučních derivátů Nfi-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčbu onemocnění, která zahrnují buněčnou proliferaci, s výhodou onemocnění vybraných ze skupiny zahrnující nádory, leukémie, restenóza, revmatická artritis, lupenka, diabetes I. typu, roztroušená skleróza, Alzheimerova choroba, parazitozy způsobené živočichy, houbami a/nebo prvoky, polycystické onemocnění ledvin, odmítnutí transplantátu a dna.
  9. 9. Substituční deriváty N&-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1 pro použití jako léčiva pro potlačení imunostimulace, s výhodou pro léčbu arthritis nebo pro supresi odmítnutí transplantovaných orgánů.
  10. 10. Použití substitučních derivátů N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro potlačení imunostimulace, s výhodou pro léčbu arthritis nebo pro supresi odmítnutí transplantovaných orgánů.
  11. 11. Použití substitučního derivátu N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1 v tkáňových kulturách k regulaci proliferace a morfogeneze buněk.
  12. 12. Použití substitučního derivátu N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1 při přípravě afinitních adsorpčních nosičů, imobilizovaných enzymů pro kontrolu výrobních procesů, reagencií pro imunodetekci, diagnostických vzorků, 14C, 3H, avidinem a biotinem značených sloučenin a oligonukleotidů.
  13. 13. Použití substitučního derivátu N6-benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1 pro in vitro klonování rostlinných i zvířecích, s výhodou savčích (s výjimkou člověka), zárodečných buněk a embryí, s výhodou oocytů.
  14. 14. Použití substitučního derivátu N6-benzyladenosin-5'-monofbsfátu obecného vzorce I podle nároku 1 jako růstových regulátorů rostlin, mikroorganismů, kvasinek, hub a zvířat, s výhodou savců s výjimkou člověka.
  15. 15. Terapeutický přípravek, vyznačený tím, že obsahuje alespoň jeden substituční derivát N6benzyladenosin-5'-monofosfátu obecného vzorce I podle nároku 1 či farmaceuticky přijatelnou sůl takovéto sloučeniny a alespoň jeden farmaceuticky přijatelný nosič.
CZ20100332A 2010-04-29 2010-04-29 Substitucní deriváty N6-benzyladenosin-5´-monofosfátu, zpusoby jejich prípravy, tyto deriváty pro použití jako léciva a terapeutický prípravek je obsahující CZ303327B6 (cs)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ20100332A CZ303327B6 (cs) 2010-04-29 2010-04-29 Substitucní deriváty N6-benzyladenosin-5´-monofosfátu, zpusoby jejich prípravy, tyto deriváty pro použití jako léciva a terapeutický prípravek je obsahující
PCT/CZ2011/000044 WO2011134444A2 (en) 2010-04-29 2011-04-28 Substitution derivatives of n6-benzyladenosine-5´-monophosphate, methods of preparation thereof, use thereof as medicaments, and therapeutic preparation containing these compounds
US13/642,905 US9073961B2 (en) 2010-04-29 2011-04-28 Substitution derivatives of N6 -benzyladenosine-5′-monophosphate, methods of preparation thereof, use thereof as medicaments, and therapeutic preparations containing these compounds
EP20110763831 EP2563801B1 (en) 2010-04-29 2011-04-28 Substitution derivatives of n6-benzyladenosine-5´-monophosphate, methods of preparation thereof, use thereof as medicaments, and therapeutic preparation containing these compounds
ZA2012/07173A ZA201207173B (en) 2010-04-29 2012-09-25 Substitution derivatives of n6-benzyladenosine-5'-monophosphate,methods of preparation thereof,use thereof as medicaments,and therapeutic preparation containing these compounds

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ20100332A CZ303327B6 (cs) 2010-04-29 2010-04-29 Substitucní deriváty N6-benzyladenosin-5´-monofosfátu, zpusoby jejich prípravy, tyto deriváty pro použití jako léciva a terapeutický prípravek je obsahující

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2010332A3 true CZ2010332A3 (cs) 2011-11-09
CZ303327B6 CZ303327B6 (cs) 2012-08-01

Family

ID=44720455

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20100332A CZ303327B6 (cs) 2010-04-29 2010-04-29 Substitucní deriváty N6-benzyladenosin-5´-monofosfátu, zpusoby jejich prípravy, tyto deriváty pro použití jako léciva a terapeutický prípravek je obsahující

Country Status (5)

Country Link
US (1) US9073961B2 (cs)
EP (1) EP2563801B1 (cs)
CZ (1) CZ303327B6 (cs)
WO (1) WO2011134444A2 (cs)
ZA (1) ZA201207173B (cs)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2014028079A1 (en) * 2012-08-16 2014-02-20 Thomas Jefferson University Treatment of prostate cancer
CN108685936A (zh) * 2018-07-13 2018-10-23 大连理工大学 一类腺苷衍生物在人急性髓性白血病细胞中的应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CS238548B1 (cs) * 1984-03-28 1985-11-13 Miroslav Kaminek Regulátor růstu zemědělských plodin a zahradnických kultur
PT1411954E (pt) * 2000-10-18 2011-03-16 Pharmasset Inc Nucleosídeos modificados para o tratamento de infecções virais e proliferação celular anormal
CZ294538B6 (cs) * 2002-12-30 2005-01-12 Ústav Experimentální Botaniky Akademie Vědčeské Re Substituční deriváty N6-benzyladenosinu, způsob jejich přípravy, jejich použití pro přípravu léčiv, kosmetických přípravků a růstových regulátorů, farmaceutické přípravky, kosmetické přípravky a růstové regulátory tyto sloučeniny obsahující

Also Published As

Publication number Publication date
EP2563801A2 (en) 2013-03-06
WO2011134444A3 (en) 2011-12-22
ZA201207173B (en) 2013-05-29
WO2011134444A9 (en) 2012-02-16
WO2011134444A2 (en) 2011-11-03
US9073961B2 (en) 2015-07-07
CZ303327B6 (cs) 2012-08-01
EP2563801B1 (en) 2014-09-24
US20130040908A1 (en) 2013-02-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1575973B1 (en) Substitution derivatives of n sp 6 sp -benzyladenosine, methods of their preparation, their use for preparation of drugs, cosmetic preparations and growth regulators, pharmaceutical preparations, cosmetic preparations and growth regulators containing these compounds
JP5485172B2 (ja) 新規な細胞増殖抑制性７−デアザプリンヌクレオシド
AU2002363362B2 (en) Heterocyclic compound based on N6-substituted adenine, methods of their preparation, their use for preparation of drugs, cosmetic preparations and growth regulators, pharmaceutical preparations, cosmetic preparations and growth regulators containing these compounds
US20130310333A1 (en) Modulators of Histone Methyltransferase, and Methods of Use Thereof
AU2007348394B2 (en) Adenosine derivatives, method for the synthesis thereof, and the pharmaceutical compositions for the prevention and treatment of the inflammatory diseases containing the same as an active ingredient
WO2007135380A2 (en) Antiparasitic compounds and compositions
US10093675B2 (en) 6,8-disubstituted-9-(heterocyclyl)purines, compositions containing these derivatives and their use in cosmetic and medicinal applications
Pathak et al. 6-Oxo and 6-thio purine analogs as antimycobacterial agents
JP6215484B2 (ja) がん治療のための短鎖脂肪酸およびゼブラリンまたは１’−シアノ−シタラビンを含む相互プロドラッグ
CZ2009298A3 (cs) Substituované 6-benzylaminopurin ribosidy, jejich použití a farmaceutický prípravek tyto slouceniny obsahující
EP3160968B1 (en) Substituted chromene derivatives as selective dual inhibitors of pi3 delta and gamma protein kinases
CZ2010332A3 (cs) Substitucní deriváty N6-benzyladenosin-5´-monofosfátu, zpusoby jejich prípravy, tyto deriváty pro použití jako léciva a terapeutický prípravek je obsahující
US11643413B2 (en) 9-(2-oxacycloalkyl)-9H-purine-2,6-diamine derivatives and their use for the treatment of skin disorders
EP2755977B1 (en) 6,8-disubstituted purine compositions and their pharmaceutical and cosmetic use
HK1236947B (en) Substituted chromene derivatives as selective dual inhibitors of pi3 delta and gamma protein kinases
HK1236947A1 (en) Substituted chromene derivatives as selective dual inhibitors of pi3 delta and gamma protein kinases
OA18327A (en) Substituted chromene derivatives as selective dual inhibitors of Pi3 delta and gamma protein kinases

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20180429