CZ20031695A3

CZ20031695A3 - Pharmaceutical compositions which inhibit vascular proliferation and method of use thereof

Info

Publication number: CZ20031695A3
Application number: CZ20031695A
Authority: CZ
Inventors: Culler Michael Dewitt; Romano Danesi; Guido Bocci; Mario Deltacca
Original assignee: Société De Conseils De Recherches Et D'application
Priority date: 2001-01-12
Filing date: 2002-01-14
Publication date: 2004-03-17
Also published as: WO2002064160A8; AU2002243552B2; AU2002243552C1; US20040082517A1; CN1531441A; CA2433785A1; IL156506A0; WO2002064160A2; JP4099065B2; CA2433785C; HUP0302732A2; RU2288739C2; KR20030068585A; NZ526676A; NO20033117L; NO20033117D0; US7084117B2; RU2003124748A; PL361879A1; EP1409007A2

Description

Farmaceutické prostředky, které inhibují vaskulární proliferaci a způsob jejich použití

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká použití terapeuticky účinného množství agonisty receptoru somatostatinu typu-1 pro přípravu léčiva pro léčení vaskulární proliferace.

Dosavadní stav techniky

Angiogenese, vývoj nových kapilár z dříve existujících krevních cév, je kritickým procesem při pprogresi pevných neoplazmů a při mnoha jiných patologických stavech jako je diabetická retinopatie a revmatická artritida (Folkman J., Nátuře Medicine, JL, 27 až 31 (1995)). Různé strategie pro cílené ovlivnění vaskulárního vývoje jsou rozsáhle studovány a dostupnost spolehlivých in vitro modelových systémů při modelování systémů při výzkumu angiogenese je rozhodující pokud jde o studii specifických inhibitorů (Jain R. K. a kol., Nátuře Medicine, J3, 1203 až 1208 (1997)).

Nyní je obecně uznáváno, že schopnost nádoru vyvolat proliferaci nových krevních cév ze svého hostitele má hluboký účinek na růst rakoviny a metastázu. Proces nádorové angiogenese je zprostředkován saldem pozitivních a negativních regulátorů růstu míkrocév a vývoj nových krevních cév může být rozdělen do tří různých po sobě následujících kroků: 1) buněčně zprostředkovaná, proteolytická degradace základní mebrány; 2) migrace a proliferace endotheliání buňky mimo cévu do okolní mimobuněčné základní hmoty; 3) organizace buněk do • · · · • · trubici podobných struktur (Folkman J., Nátuře Medicine, 1_, 27 až 31 (1995)).

Somatostatin (somatotropinem uvolněný inhibujici faktor nebo SRIF) obsahuje jak 14 isoforem aminokyseliny (somatpstatin-14) tak 28 isoforem aminokyseliny (somatostatin-28). Viz Wilson J. & Foster D., Williams Textbook of Endocrinology, 510 (7. vydáni, 1985). Tato sloučenina je inhibitorem sekrece růstového hormonu a byla prvně izolována z hypotalamu. Brazeau a kol., Science, 179, 77 (1973). Přírodní samostatin má velmi krátkou dobu trváni účinku in vivo jelikož je rychle deaktivován endo- a exopeptidázou. Mnoho nových analogů (např. peptidových a nepeptidových sloučenin) bylo připraveno pro zvětšeni doby trváni účinku, biologické aktivity a selektivity (např. pokud jde o určitý receptor samostatinu) tohoto hormonu. Takové analogy samostatinu budou zde nazývány „agonisty samostatinu.

Byly izolovány různé receptory samostatinu (SSTRs), např. SSTR-1, SSTR-2, SSTR-3, SSTR-4 a SSTR-5. Tudíž agonistou samostatinu může být agonista SSTR-1 a/nebo agonista SSTR-2 a/nebo agonista SSTR-3 a/nebo agonista SSTR-4 a/nebo agonista SSTR-5.

Antiangiogenické působení analogů samostatinu bylo dříve demonstrováno na některých in vitro a in vivo experimentálních modelech (Danesi R. a kol., Clinical Cancer Research, 3, 265 až 272 (1997); Woltering E. A. a kol., Investigational New Drug, 15, 77 až 86 (1997)). K tomu navíc dlouhodobé oktreotidové léčení bylo schopné snížit progresi neovaskularizace spojené s těžkou proliferativní retinopatií u diabetických pacientů (Mallet a kol., 1982).

• ·

• · • · · • · • · · · · · ·

Určení, který podtyp nebo podtypy somatostatinu jsou zapojeny do antiangiogenické vlastnosti somatostinu by umožnilo vývoj léčebných prostředků s maximální účinností a minimálními vedlejšími účinky. Avšak předchozí studie v této oblasti měly za výsledek odporující sí a/nebo nepřesvědčivá zjištění pokud jde o úlohu, kterou každý z těchto pěti podtypů receptorů somatostatinu může hrát vzhledem k antiangiogennímu působení somatostatinu.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález se týká prostředků obsahujících agonistu receptorů somatostatinu typu-1, které jsou užitečné pokud jde o inhibici vaskulární proliferace u pacienta. Přítomný vynález se týká použití těchto prostředků pro léčení vaskulární proliferace, např. angiogenese a restenózy u pacienta (např. savce jako je člověk), který takové léčení potřebuje. Tento způsob zahrnuje použití terapeuticky účinného množství agonisty receptorů somatostatinu typu-1 (SSTR-1) (např. selektivního agonisty somatostatinu typu-1) pro léčení vaskulární proliferace pacienta.

Předkládaný vynález se rovněž týká inhibice proliferace hladkého svalu, proliferace endoteliální buňky a rašení nových krevních cév u pacienta, jehož stav vyžaduje takovou inhibici.

Příklady klinických indikací, které mohou být léčeny pomocí předkládaného vynálezu zahrnují, ale nejsou na ně omezeny, nemoci autoimunitního systému (např. artritidu, •0 000· • 0 • 0 · · ⁴ • · 0 0 ⁴ • 0000 · · · · sklerodermii korneálního hypertrofické proliferaci angioplastií atd.), rakovinové nádory, neovaskularizaci štěpu, diabetickou retinopatii, hemangiomii, jizvy a psoriázu, stejně jako vaskulární spojenou s chirurgickými postupy, např.

a arteriovenózními (AV) zkraty.

Dalšími příklady stavů nemocí, které mohou být přístupné léčení předmětným terapeutickým prostředkem podle tohoto vynálezu jsou, pokud se týká pokožky: bradavice, granulomy, Kaposiův sarkom, alergický edém a podobné; pokud se týká dělohy a vaječníků: endometrióza, dysfunkční děložní krvácení, folikulární cysty a podobné; pokud se týká oka: retrolentální fibroplazie, choroidální a jiné nitrooční poruchy, makulární degenerace, stařecká makulární degenerace a podobné.

Dalšími příklady stavů nemocí, které mohou být přístupné léčení předmětným terapeutickým prostředkem a způsobem podle tohoto vynálezu jsou popsány v Folkman J., Seminars in Medicíně of the Beth Israel Hospital, Boston, sv. 333, čís. 26, str. 1757 až 1763.

Skutečně jak je dobře známo v oboru, seznam známých nemocí a stavů, pro které činidlo schopné inhibice angiogenese, proliferace hladkého svalu, proliferace endoteliální buňky a/nebo rašení nových krevních cév je do určité míry důležité, zahrnuje, bez omezení: pevné nádory, metastázu nádoru, nezhoubné nádory, například akustické neuromy, neurofibromy a trachomy, leukémii, pyogenní granulom, myokardiálni angiogenesi, neovaskularizaci plaku, aterosklerózu, koronární kolaterály, cerebrální kolaterály, arteriovenózní malformace, ischemickou angiogenesi končetiny, okulární a korneální angiogenické stavy, například odmítnutí korneálního štěpu, ·· · · · ·

Osler-Weberův syndrom, rubeosis, neovaskulární glaukom, retrolentální fibroplazii a diabetickou retinopatii, diabetickou neovaskularizaci, hojení zranění, fraktury, vaskulogenesi, hematopoézu, ovulaci, menstruaci, placentaci, neínoc z kočičího škrábnutí (Rochele minalia quintosa) , vředy (peptický, způsobený Helicobacter pylori), psoriázu (včetně např. telangiektasie psoriasis), revmatickou artritidu, Crohnovu nemoc, střevní srůsty, zjizvení (tj. tvorba tkáně s vysokou hustptou obsahující buňky a pojivovou tkáň), hypertrofické jizvy (tj . keloidy), telangiektasii; hemofilické klouby; angiofibromii; a granulaci zranění. Tyto nemoci a stavy jsou podrobně diskutovány v literatuře, například jako v následujících US patentech a mezinárodních patentových publikacích: 6 323 228, 6 294 532, 6 288 228, 6 288 024,

6	284	726, 6	280	739,	6	265	407,	6	265	403/	6	258	812,
6	255	355, 6	255	353,	6	251	867,	6	242	481,	6	235	756,
6	235	741, 6	228	879,	6	228	871,	6	225	340,	6	214	800,
6	201	104, 6	177	401,	6	174	861,	6	150	407,	6	150	362,
6	117	862, 6	114	355,	6	090	794,	6	086	865,	6	071	948,
6	057	290, 6	057	122,	6	028	061,	6	025	353,	6	025	331,
6	024	688, 6	017	949,	5	997	868,	5	994	388,	5	994	292,
5	990	280, 5	985	878,	5	985	330,	5	981	484,	5	972	922,
5	972	896, 5	948	403,	5	932	611,	5	902	790,	5	874	081,
5	847	002, 5	843	925,	5	837	680,	5	807	731,	5	801	146,
5	766	591, 5	753	230,	5	744	492,	5	733	876,	5	721	226,
5	712	291, 5	698	586,	5	696	147,	5	677	181,	5	646	136,
5	629	340, 5	629	327,	5	610	166,	5	593	990,	5	574	026,
5	567	417, 5	563 130	f	5 512 550,	5 506 208,	WO	02/02609

02/02593, WO 02/00877, WO 02/00690, WO 02/00017, WO 01/93806,

WO 01/85796, WO 01/81579, WO 01/81311, WO 01/79157, WO

01/74299, WO 01/72699, WO 01/72297, WO 01/66127, WO 01/62799, WO 01/62725, WO 01/59100, WO 01/58899_z WO 01/51048, WO

01/46110, WO 01/45751, WO 01/35977, WO 01/34195, WO 01/29085, • 4 4444 44 44 44 4444

444 4444 4# 4

4444 4 444 4 4 4

WO 01/28577, WO 01/25433, WO 01/23375, WO 01/21831, WO

01/19987, WO 01/19868, WO 01/12809, WO 01/12226, WO 01/12210, WO 01/10859, WO 01/09113, WO 01/07057, WO 01/04157, WO

01/03720, WO 01/00201, WO 00/75124, WO 00/73445, WO 00/73340, WO 00/59532, WO 00/54770, WO 00/54762, WO 00/53757, WO

00/53753, WO 00/53752, WO 00/52158, WO 00/48591, WO 00/47212, WO 00/47193, WO 00/43393, WO 00/40597, WO 00/35407, WO

00/32221, WO 00/32180, WO 00/30628, WO 00/27866, WO 00/27415, WO 00/27340, WO 00/24415, WO 00/21561, WO 00/20577, WO

00/20026, WO 00/19995, WO 00/15792, WO 00/12089, WO 00/10507, WO 00/10506, WO 00/09657, WO 00/09495, WO 00/05356, WO

00/02902, WO 00/02871, WO 00/02585, WO 00/01383, WO 99/62549, WO 99/61590, WO 99/61432, WO 99/60984, WO 99/58139, WO

99/48495, WO 99/45909, WO 99/37776, WO 99/31088, WO 99/26622, WO 99/26480, WO 99/23105, WO 99/22760, WO 99/16755, WO

99/16465, WO 99/14234, WO 99/10349, WO 99/09982, WO 99/04806, WO 99/04803, WO 98/58929, WO 98/58919, WO 98/54093, WO

98/51326, WO 98/41205, WO 98/36760, WO 98/35958, WO 98/31688, WO 98/19712, WO 98/19649, WO 98/17796, WO 98/13071, WO

98/12226, WO 98/05323, WO 98/05293, WO 97/45137, WO 97/41824, WO 97/35567, WO 97/32583, WO 97/30085 a WO 97/26258. Obsah každého z předchozích patentů a patentových publikací je zde zahrnut formou odkazu ve své úplnosti.

Definice „agonista receptoru somatostatinu typu-1 a „selektivní agonista receptoru somatostatinu typu-1 jsou poskytnuty níže. Terapeuticky účinné množství závisí na stavu, který má být léčen, zvoleném způsobu podávání a specifické aktivitě použité sloučeniny a s konečnou platností bude stanoveno ošetřujícím lékařem nebo veterinářem (např. mezi 5 g/den a 5 mg/den). V jednom ztělesnění je agonista somatostatinu podáván pacientovi dokud stav, který má být • · · ·· · « · léčen nepomine.

podáván po celý život pacienta.

Agonista somatostatinu může být injektován parenterálně, např. nitrožilně do krevního řečiště pacienta, který má být léčen. Avšak bude bez zaváhání oceněno odborníkem v oboru, že způsob podávání, jako je nitrožilní, podkožní, nitrosvalový, intraperitoneální, enterálně, transdermálně, transmukózně, polymerní kompozicí s prodlouženým uvolňováním (např. mikročástice nebo implantát z polymeru na bázi kyseliny mléčné nebo kopolymeru kyseliny mléčné a kyseliny glykolové), přebytkové, nasální, orální atd. se stavem a aktivitou a biologickou somatostatinu, který má být použit.

bude lišit s léčeným dostupností agonisty

Agonista somatostatinu může také být poskytován jako povlak nebo jako implantovaného do složka povlaku na těla. Například somatostatinu v nebo na vaskulárním štěpu je užitečná pokud jde o léčení restenózy, které je často spojeno s implantací štěpu.

povrchu zařízení zásoba agonisty

Agonista SSTR-1 může být podáván systemicky a/nebo lokálně nebo popicky podle potřeby. Pokud jde o prevenci srůstů, agonista SSTR-1 bude aplikován povrchově v době chirurgického zákroku, výhodně ve formulaci s řízeným uvolňováním a/nebo za použití bariérové technologie.

Zatímco je možné, pokud jde o agonistu somatostatinu, aby byl podáván jako čistá nebo v podstatě čistá sloučenina, může také být podáván jako farmaceutická formulace nebo přípravek. Formulace, které mají být použity v rámci předkládaného vynálezu, jak pro lidi tak zvířata, obsahují kterýkoliv ·· ···· ·· ····

8·· · ···· · · · · ·· ··· ·· ·· ·· ·· z agonistů somatostatinu, které budou popsány níže, společně s jeho jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči a popřípadě dalšími terapeutickými složkami.

Nosič musí být „přijatelný v tom smyslu, že je kompatibilní s aktivní složkou(kami) formulace (např. schopný stabilizace peptidů) a nikoliv škodlivý pro pacienta, který má být léčen. Je žádoucí, aby formulace neobsahovala oxidační činidla nebo jiné látky, s kterými peptidy, jak je známo, jsou neslučitelné. Například agonisté somatostatinu v cyklizované formě (např. vnitřní disulfidová vazba cysteinu) mohou být oxidovány; tudíž přítomnost redukčních činidel jako excipientů může vést k otevření disulfidového můstku cysteinu. Na druhé straně, vysoce oxidační podmínky mohou vést k tvorbě sulfoxidu cysteinu a k oxidaci tryptofanu. V důsledku toho je důležité pečlivě vybrat excipient. Hodnota pH je dalším klíčovým faktorem a může být nezbytné pufrovat produkt za mírně kyselých podmínek (pH od 5 do 6).

Formulace mohou být výhodně podávány ve formě jednotkových dávek a mohou být připraveny jakýmkoliv způsobem dobře známým v oboru farmacie. Všechny způsoby zahrnují krok přivedení aktivní složky(ek) do spojení s nosičem, který tvoří jednu nebo více doplňkových složek.

Obecně formulace pro tablety nebo prášky jsou připraveny pomocí stejnoměrného a důkladného promísení aktivní složky s jemně rozmělněným pevným nosičem a poté, jestliže je to potřeba, jako v případě tablet, tvarováním produktu do požadovaného tvaru a velikosti.

Formulace vhodné pro parenterální (např. nitrožilní) podávání, na druhé straně, výhodně obsahují sterilní vodné

9999 ·♦ 9 99 9 ·

9 99

9 9 9 9 9 9

9 99 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 99 99 99 9 9 99 roztoky aktivní složky(žek). Výhodně jsou tyto roztoky isotonické s krví pacienta, který má být léčen. Takové formulace mohou být výhodně připraveny rozpouštěním aktivní složky(žek) ve vodě, pro vznik vodného roztoku, a učiněním uvedeného roztoku sterilním. Formulace může být podávána v jednotkových nebo vícedávkových kontejnerech, například, zatavených ampulích nebo lékovkách.

Formulace vhodné pro parenterální podávání s prodlouženým uvolňováním (např. biologicky degradovatelné polymerní formulace jako jsou polyestery obsahující zbytky mléčné nebo glykolové kyseliny) jsou také v oboru dobře známé viz US patent čís. 3 773 919 a 4 767 628 a patentová publikace (PCT Phblication) č. WO 94/15587.

Způsoby a formulace pro léčení a/nebo povlékání chirurgických štěpů, ve kterých uvedený povlak může obsahovat farmaceuticky aktivní sloučeninu, jsou v oboru také dobře známé viz US patenty 6 214 115, 6 090 901 a 6 083 257 a mezinárodní patentová publikace č. WO 01/01957 a WO 00/02599.

Somatostatin nebo agonista somatostatinu může být také podáván s jinou sloučeninou schopnou sníženit v krvi hladiny triglyceridů, cholesterolu nebo glycerolu, jako jsou fibráty (např. bezafibrát, gemfibrozil a klofibrát), inhibitory HMG-COA reduktázy (např. pravastin, simvastatin a fluorastatin, Atorvastatin a Lovastatin), žlučovou kyselinu vážící pryskyřice (např. cholestyramin a colestipol) , sloučeniny nikotinové kyseliny (např. nikotinová kyselina a niceritrol), a rybí oleje. Viz Workshop Treatment of Hyperlipidemia 1996-2 (Lakemedelsverket, Uppsala, Švédsko, 1996).

φφ φφφφ φφ φφ φφ φφφφ φφφ φφφφ φφ · • ΦΦΦΦ φφφφ φφ · φ φ φφφ φφ φφφ φ · • Φ φ φφφφ φφφφ • ΦΦΦΦ φφ φφ φφ ··

Jiné základní vlastnosti a výhody tohoto vynálezu, budou zřejmé z následujícího popisu výhodných ztělesnění a z patentových nároků.

Dále následuje podrobný popis vynálezu.

Věří se, že odborník v oboru může, na základě zde uvedeného popisu, využít předkládaný vynález v jeho nejplnějším rozsahu. Následující specifická ztělesnění jsou proto konstruovány jako pouze ilustrativní a neomezují zbytek vynálezu jakýmkoliv způsobem buď jak buď.

Pokud není uvedeno jinak, všechny technické a vědecké výrazy zde použité mají stejný význam jak jsou běžně chápány odbprníkem v oboru, do kterého tento vynález patří. Také všechny publikace, patentové přihlášky, patenty a jiné citace zde uvedené jsou zahrnuty formou odkazů.

To Co je míněno agonistou receptoru somatostatinu typu-1 (tj. agonistou SSTR-1) je sloučenina, která (1) má vysokou vazebnou afinitu (např. Ki menší než 1000 nM nebo výhodně menší než 100 nM nebo menší než 10 nM) pro SSTR-1 (např. jak je stanoveno pomocí zkoušky vázání receptoru popsané níže) a (2) snižuje rychlost nebo rozsah vaskulární proliferace (např. jak je ukázáno pomocí biologické zkoušky popsané níže).

To co je míněno selektivním agonistou receptoru somatostatinu typu-1 je agonista samostatinu, který (1) vyšší vazebnou afinitu (tj. Ki) pro SSTR-1 než pro buď SSTR-2, SSTR-3, SSTR-4 nebo SSTR-5 (např. jak je stanoveno pomocí zkoušky vázání receptoru popsané níže) a (2) snižuje rychlost nebo rozsah vaskulární proliferace (např. jak je ukázáno pomocí biologické zkoušky popsané níže).

·· ···· • Β ··Β< • · • ΒΒΒ ·· ·· • Β · · Β Β « • · ·· Β Β · • · · Β Β Β Β Β · · ·· ΒΒΒ ΒΒ ·<► ·· ··

V jednom ztělesnění selektivní agonista receptoru somatostatinu typu-1 je také agonistou SSTR-1.

Příklady agonistů somatostatinu jsou příklady pokryté vzorcem nebo příklady specificky citované v publikacích

uvedených níže, z nichž	všechny	jsou zde	zahrnuty ve formě
odkazu.
Van Binst G. a kol.,	Peptide	Research,	5, 8 (1992);
Horvath A. a kol.,	výtah „	Conformations of Somatostatin

Analogs Having Antitumor Activity, 22. Evropské sympozium o peptidech, 13. až 19. září, 1992, Interlaken, Švýcarsko;

Curtis a kol., Am. J. Physiol., Heart. Circ. Physiol, 278, 1815 (2000);

Nicolaou a kol., Design and synthesis of peptidomimetic employing β-D-glucose for scaffóldlng in Peptides, vydavatelé Rivier a Marshall, ESCOM (1990);

Papageorgiou a kol., „Design, synthesis and binding affinity of non peptide mimic of somatostatin, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, svazek 2, 135 až 140 (1992) a

Hirschmann R. a kol., „De novo design and synthesis of somatostatin non peptide peptidomimetics utilizing beta-D-glucose as novel scaffolding, J. Am. Chem. Soc., sv. 115, 12550 až 12568 (1993).

Mezinárodní (PCT) přihláška č. WO 91/09056 (1991);

Evropská patentová přihláška č. 0 363 589 A2 (1990);

Evropská patentová přihláška č. P5 164 EU (vynálezce: G.

Keři);

φφ »· φφφφ

ΦΦ Φ«·Φ • φ φφφφ

US	patent č.	6 262	22 9;
US	patent č.	6 197	963	r
US	patent č.	6 159	941	f
US	patent č.	6 127	343	r
US	patent č.	6 083	960	/
US	patent č.	6 020	349	r
US	patent č.	5 552	534	r
US	patent č.	5 817	879	r
US	patent č.	5 811	512	r
US	patent č.	4 904	642	(1990)
US	patent c.	4 871	717	(1989)
US	patent č.	4 853	371	(1989)
US	patent č.	4 725	577	(1988)
US	patent č.	4 684	620	(1987)
US	patent č.	4 650	787	(1987)
US	patent č.	4 603	120	(1986)
US	patent č.	4 585	755	(1986)
Evropská patentová	přihláška
US	patent č.	4 522	813	(1985)
US	patent č.	4 486	415	(1984)
US	patent č.	4 485	101	(1984)
US	patent č.	4 435	385	(1984)
US	patent č.	4 395	403	(1983)
US	patent č.	4 369	179	(1983)
US	patent č.	4 360	516	(1982)
US	patent č.	4 358	439	(1982)
US	patent č.	4 328	214	(1982)
US	patent č.	4 316	890	(1982)
US	patent č.	4 310	518	(1982)
US	patent č.	4 291	022	(1981)
US	patent č.	4 238	481	(1980)
US	patent č.	4 235	886	(1980)
US	patent č.	4 224	199	(1980)

Ο 203 031 Α2 (1986);

♦ « φφ ·· • · • 4 «««« * φ φ ·4· •4 · · · · « · • 4 44« «« ··

US	patent č. 4	211	693	(1980);
US	patent č. 4	190	648	(1980)	t
US	patent č. 4	146	612	(1979)	i
US	patent č. 4	133	782	(1979)	r
US	patent č. 5	506	339	(1996)	r
US	patent č. 4	261	885	(1981)	f
US	patent č. 4	728	638	(1988)	/
US	patent č. 4	282	143	(1981)	t
US	patent č. 4	215	039	(1980)	r
US	patent č. 4	209	426	(1980)	r
US	patent č. 4	190	575	(1980)	r
Evropský patent	č.	0 389 180	(1990);
Evropská patentová	přihláška	č. 0 505	680	(1982)
Evropská patentová	přihláška	č. 0 083	305	(1982)
Evropská patentová	přihláška	č. 0 030	920	(1980)
PCT	přihláška č	. WO	88/05052	(1988);
PCT	přihláška č	. WO	90/12811	(1990);
PCT	přihláška č	. WO	97/01579	(1997);
PCT	přihláška č	. WO	91/18016	(1991);
PCT	přihláška č	. WO	00/75186	(2000);

Anglická přihláška (UK) č. GB 2 095 261 (1981); a

Francouzská přihláška č. FR 2 522 655 (1983).

Příklady selektivních agonistů somatostatinu SSTR-1 zahrnují, ale nejsou na ně omezeny, následující analogy somatostatinů, které jsou popsány ve výše citovaných odkazech:

H-Cys-Phe-Phe-D-Třp-Lys-Thr-Phe-Cys-NH2;

H-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH2;

H-Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys-NH2;

H-Cýs-Phe-Tyr-D-Trp~Lys-Thr-Phe-Cys-NH2;

H-Cys-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys-NH2;

Λ· ΦΦΦΦ »4 ·* φφ «**«

ΦΦΦ · Φ · φ Φ φ « • · ··· ΦΦΦΦ · Φ φ ·· Φ«ΦΦΦΦΦΦΦ φ • Φ · ΦΦΦΦ ΦΦΦΦ • Φ ΦΦ* ΦΦ «Φ ΦΦ ΦΦ

HO(CH₂)₂-N

N-(CH₂)-CO-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH₂

Caeg-c(D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-D-Cys)-Thr(Bzl)-Tyr-NH₂, ve kterém strukturní vzorec pro „Caeg je

N

Je třeba si povšimnout, že pro všechny agonisty somatostatinu popsané zde, každý zbytek aminokyseliny představuje strukturu podle -NH-C(R)H-CO-, ve které R je postranní řetězec (např. CH3 pro Ala). Čáry mezi zbytky aminokyselin představují peptidové vazby, které spojují aminokyseliny. Také tam kde je zbytek aminokyseliny opticky aktivní je to konfigurace L-formy, která je myšlena, pokud není D-forma výslovně označena. Disulfidová vazba (např. disulfidový můstek) existuje mezi dvěmi volnými thioly ze zbytků Cys; avšak není zobrazena.

Dále následuje syntéza agonistů somatostatinu.

Způsoby syntetizování agonistů somatostatinu jsou dobře zdokumentovány a jsou v rámci schopnosti odborníka v oboru. Například syntéza H-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NHž, uvedeného výše, může být provedena podle protokolu vyloženého v příkladu 1 z evropské patentové přihlášky 0 395 417 Al. Syntéza agonistů somatostatinu se substituovaným N-zakončením ·

» « • · • · · · může být provedena, například podle protokolu vyloženého ve WO 88/02756, evropské patentové přihlášce č. 0 329 295 a PCT publikaci č. WO 94/04752.

Příklady provedení vynálezu

Zkoušky vázání receptoru somatostatinu

Lidské cDNA klony SSTR-1, SSTR-2, SSTR-3, SSTR-3, SSTR-4 a SSTR-5 jsou popsány (SSTR-1 a SSTR-2 v Yamada Y. a kol., Proč. Nati. Acad. Sci., USA, 89, 251 až 255 (1992); SSTR-3 v Yamada a kol., Mol. Endocrinol., _6, 2136 až 2142 (1993); a SSTR-4 a SSTR-5 v Yamada a kol., Biochem. Biophys. Res. Commun., 195, 844 až 852 (1993)) a jsou také dostupné ze „Sbírky amerických typových kultur (American Type Culture Collection) (ATCC, Rockville, MD) (ATCC čís. 79044 (SSTR-1), 79046 (SSTR-2) a 79048 (SSTR-3)). Na základě map restrikční endonukleázy, celá kódovací oblast každého cĎNA SSTR se může excizovat štěpením vhodnou restrikční endonukleázou (Maniatis T. a kol., Molecular Cloning - A Laboratory Manual, CSHL, 1982) . Restrikční endonukleázy jsou dostupné z laboratoří New England Biolabs (Beverly, MA) . Tento cDNA fragment se vloží do savčího vektoru exprese, pCMV (Russell D. á kol., J. Biol. Chen)., 264, 8222 až 8229 (1989)), za využití standardních technik molekulární biologie (viz např. Maniatis T. a kol., Molecular Cloning - A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982) pro přípravu plasmidu experse, lidský pCMV SSTR-1 přes lidský pCMV SSTR-5. Jiné savčí vektory exprese obsahují pcDNA 1/Amp (invitrogen, Sandlesy, CA) . Plasmidy exprese se zavedou do vhodného bakteriálního hostitele, E. coli HB 101 (Stratagene, La Jolla, CA) a DNA plasmidy, pro transfekci se připraví na gradientech chloridu česného.

• · · · · · • · · · • ·

Buňky CH0-K1 (vaječníkové, čínský křeček) se získají z ATCC (ATCC č. CCL 61) . Buňky se pěstují a udržují v prostředí Ham's F 12 media (Gibco BRL, Grand Island, NY) doplněném 10% fetálním hovězím sérem za standardních podmínek pro tkáňové kultury. Pokud jde o transfekci, buňky se naočkují v hustotě 1 χ 10⁶ na 60cm plotnu (Baxter Scientific Products, McGraw Park, IL.) . Transfekce zprostředkovávaná DNA se provádí za použití kalcium fosfátového způsobu koprecipitace (Ausubel F. M. a kol., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, 1987). Jako selektivní značkovač je obsažen plasmid pRSV-neo (ATCC, ATCC č. 37198) v koncentraci 1 : 10 plasmidu exprese. Linie klonálních buněk CHO-K1, které stabilně obsahují zděděnou transfektovanou DNA se vyberou pro pěstování v prostředí Ham's F 12 media obsahujícím 10% fetální hovězí sérum a 0,5 mg/ml G418 (Sigma). Buňky se kruhově klonují a expandují ve stejném prostředí pro analýzu.

Exprese lidského SSTR-1 přes receptory SSTR-5 v buňkách CHO-K1 se zjišťuje analýzou Northern blot celkové z buněk připravené RNA (Sambrook J. E. a kol., Molecular Cloning - A Laboratory Manula, 2. vydání, Cold Spring Harbor Laboratory, NY, 1989) a vázání reoeptoru, přičemž se používá (¹²⁵JTyr¹¹)somatostatin-14 jako ligand. Linie transfektovaných buněk expresujících receptory lidského SSTR se klonově expandují v kultuře a využívají se v následujícím protokolu vázání SSTR.

Surové membrány se připraví homogenizací transfektovaných buněk v 20 ml ledově studené 50 mM tris-kyseliny chlorovodíkové s homogenizerem POLYTRON (nastavení 6, 15 sekund). Přidá se pufer pro dosažení konečného objemu 40 ml a homogenát se odstřeďuje v zařízení Sorval SS-34 rotor při 39 000 g po 10 minut při 0 až 4 °C. Výsledná kapalina nad sedlinou se dekantuje a odstraní. Pelety se opětovně homogenízují v ledově • · · · · · • · ···· ·· · · • · · ···· ·· · • · ··· · · ·· · · · • · · · · · · · · · · · • · · ···« ···· • · · · · ·· · · * · · · studenétn pufru, zředí se a odstřeďují se jako v předchozím případě. Konečné pelety se opětovně suspendují v 10 mM tris-kyselině chlorovodíkové a uchovávají se na ledu pro zkoušku vázání receptorů.

Alikvotní podíly z přípravy membrány se inkubují po 30 minut při 30 °C s 0,05 nM (¹²⁵J-Tyr¹¹) somatostatinu-14 (74 χ 10⁹Bq/mmol (2000 Ci/mmol); Amersham Corp., Arlington Heights, IL) v 50 mM HEPES (pH 7,4) obsahujícím zkušebního agonistu somatostatinu v různých koncentracích (např. od 10~ⁿ do 10^-6) , 10 mg/ml albuminu z hovězího séra (frakce V) (Sigma Chemicals Co,, St. Louis, MO) , chlorid hořečnatý (5 mM) , Trasylol (200 tisíc mezinárodních jednotek/ml (KIU/ml)), bacitracin (0,02 mg/ml) a fenylmethylsulfonylfluorid (0,02 mg/ml). Konečný objem zkoušky je 0,3 ml. Inkubace se ukončí pomocí rychlé filtrace přes GF/C filtry (předem nasáknuté v 0,3% polyethyleniminu po 30 min) za použití Brandelovy filtrace s rozvodem. Každá trubka rozvodu a filtr se potom promyjí třikrát 5ml podíly ledově studeného pufru. Specifické vázání je definováno jako celkový vázaný (¹²⁵J-Tyr^u) -somatostatin-14 minus ten, který je vázaný za přítomnosti 1000 nM. Hodnoty Ki pro agonisty somatostatinu jsou kalkulovány za použití následujícího vzorce: Ki = IC50/(1+(LC/LEC) ) , kde IC50 je koncentrace zkušebního agonisty somatostatinu potřebná pro inhibici 50 % specifického vázání radioaktivního ligandu (¹²⁵JTyr¹¹) somatostatin-14, LC je koncentrace radioaktivního ligandu (0,05 nM) a LEC je rovnovážná disociační konstanta radioaktivního ligandu (0,16 nM).

Inhibice proliferace a tvorby kapilárních trubic

Pro zkoumání antiproliferativních účinků, na endotheliální buňky a inhibice proliferace a tvorby kapilárních trubic * · · ·«·· · · · · • · ··· ·· ·« ·· ·· z endotheliálních buněk, způsobovaných analogy somatostatinu, jsou provozovány dva různé lidské in vitro modely. Tyto modely umožňují studovat účinky analogů somatostatinu na dvojrozměrnou vrstvu endotheliální buňky a na trojrozměrný růst endotheliální buňky v mimobuněčné základní hmotě, které napodobují vývoj kapilár in vivo. Mimoto tyto zkoušky umožňují velmi dlouhou dobu působení (72 hodin a 28 dní respektive) na lidské tkáně, podobající se možnému chronickému klinickému přístupu k antiangiogenické terapii.

Látky a způsoby

Látky

Rekombinantní lidský epidermální růstový faktor (EGF) a rekombinantní lidský vaskulárně endotheliální růstový faktor (VEGF) jsou z PeproTechEC LTD (Londýn, UK). EGF a VEGF v souladu s informacemi ze záznamového listu se rekonstituují v sterilní destilované vodě v koncentraci 100 pg/ml.

Prostředí pro buněčnou kulturu medium 199 a prostředí medium 199 bez fenolové červeně se zakoupí od společnosti Gibco BRL (Paisley, UK). Želatina typu A ze suplementů vepřové kůže a všechňy ostatní chemikálie, které nejsou uvedeny v tomto oddíle se získají od Sigma Chemical CO. (St. Louis, MO, USA). Plastické hmoty pro buněčnou kulturu dodává společnost Costar (Cambridge, MA, USA) .

Somatostatin-14, BIM-23014C, BIM-23120C, BIM-23190C, BIM-23197C, BIM-23206C, BIM-23268C, BIM-23745C a BIM-23926C (každý od společnosti Biomeasure Incorporated, Milford, MA, USA) se rozpouští v zásobním roztoku z 0,01N kyseliny octové

• ······ · φφφ « φ φφ · · · • · β φ · φφφ φ φ φ φ φ φ φ φφφφ φφφ φφ φφ φφ φ φ obsahujícím 0,1 % tukuprostého albuminu z hovězího séra (BSA) a skladuje se při -80 °C.

Relativní afinity dříve uvedených sloučenin pokud jde o různé receptory somatostatinu a mohou se souhrnně uvést následovně:

Sloučenina	SSTR-1	SSTR-2	SSTR-3	SSTR-4	SSTR-5
Somatostatin-14	velmi	velmi	velmi	velmi	velmi
	vysoká	vysoká	vysoká	vysoká	vysoká
BIM-23014C	velmi nízká	velmi vysoká	nízká	velmi nízká	vysoká
BIM-23120C	velmi nízká	velmi vysoká	velmi nízká	velmi nízká	nízká
BIM-23190C	velmi nízká	velmi vysoká	nízká	velmi nízká	vysoká
BIM-23197C	velmi nízká	velmi vysoká	mírně vysoká	velmi nízká	vysoká
BIM-23206C	velmi nízká	nízká	velmi nízká	velmi nízká	velmi vysoká
BIM-23268C	vysoká	mírně vysoká	vysoká	mírně vysoká	velmi vysoká
BIM-23745C	mírná	velmi nízká	velmi nízká	velmi nízká	velmi nízká
BIM-23926C	velmi	velmi	velmi	velmi	velmi
	vysoká	nízká	nízká	nízká	nízká

SU5416, 3~((2,4-dimethylpyrrol-5-yl)methylidenyl)-2-indolinon původci obdrželi jako dárek od společnosti Sugen lne. (San Francisco, CA, USA).

Linie imortalizované lidské mikrovaskulární endotheliální buňky HMEC-1 charakterizovaná v práci od Ades a kol., (Journal • · · * · » • 99 9 • · 9 9 9 9 of Investigative Dermatology, 99, 683 až 690 (1992)) se přechovává v prostředí Medium 199, doplněném 10% teplem deaktivovaným fetálním hovězím sérem (FBS), penicilinem (50 mezinárodních jednotek/ml) a hydrocortisonem (100 pg/ml). Buňky se pěstují běžným způsobem v 75cm² želatinou potažených baňkách pro tkáňové kultury a uchovávají se ve zvlhčené atmosféře z 5 % CO2 při 37 °C. Buňky se získávají pomocí roztoku ze směsi 0,25 % trypsin - 0,03 % EDTA, když jsou v dlouhodobé fázi růstu a uchovávají se za výše popsaných podmínek kultivace pro všechny zkoušky.

Zkouška cytotoxicity

In vitro zkouška sensitivity na chemické látky se provádí na jednobuněčných suspenzích z buněk HEMC-1 (5 x 10³buněk/jamku) plotnovaných v 96-jamkových želatinou potažených sterilních plastových plotnách, které se nechají přilnout přes noc. Protokol o zpracování (obr. 1) se vytvoří tak, že po 24 hodinách se jako pozitivní kontrolní činidlo nebo vehikulum přidá 10 až 10 M somatostatin-14, analogy somatostatinu, SU5416 1Q~⁶M + VEGF 10 ng/ml a plotny se inkubují po 72 hodin (pro více podrobností viz obraz 1) . Zpracování je rozvrženo tak, že každý peptid je představován pomocí nejméně devíti jamek. Na konci pokusu se buňky promyjí fosfátem pufrovaným fyziologickým roztokem (PBS), seberou se pomocí směsi tripsin/EDTA a čítají se pomocí hemocytometru. Výsledky se vyjadřují jako procento proliferace buněk proti kontrolnímu vzorku a představují průměr ze tří pokusů ± statistická chyba opakovaných třikrát.

In vitro kultury lidských placentálních cév

0· ···· ·· «· «· ···· • · « ···· · · · • · · · · · · · · · · · • · ·«······· · • · · ···· · · · β ·· ··· ·· ·· ·· ··

Použití experimentálního modelu z lidských placentálních explantátů, podrobně popsaný níže, obdržel autorizaci od Výboru pro etiku universitní nemocnice v Pise (Ethics Commitee of Pisa University Hospital) (Protokol č. 005567).

Následuje se experimentální postup, který popsal Brown a kol., (Laboratory Investigation, 75, 539 až 555 (1996)) a modifikuje se na předkládanou studii. Bezprostředně po spontánním porodu se placenta odebere za sterilních podmínek a povrchové krevní cévy, přibližně od 1 do 1,5 mm v průměru a od 1 do 5 cm délky, se vyříznou. Cévní explantáty se umístí do fosfátem pufrovaného fyziologického roztoku (PBS) obsahujícího 2,5 mg/ml amfotericinu B a 50 pg/ml gentamycinu a rozřežou se na přibližně lmm fragmenty. Kultivace se provádí ve 24-jamkových kultivačních plotnách; 0,5 ml na jpmku roztoku fíbrinogenu, do každé jamky se přidá 3 mg/ml prostředí Medium 199 bez fenolové červeně a následuje rychlé přidání 15 μΐ trombinu (50 NIH U/ml v 0,15M NaCl). Po vytvoření sraženiny se do středu jamek rychle vloží cévní explantáty a překryjí 0,5 ml na jamku roztoku fíbrinogenu s přídavkem dalších 15 μΐ trombinu pro suspendování všech z explantátů ve stejné úrovni mezi těmito dvěmi koagulacemi. Po vytvoření gelu se na jamku přidá 1 ml prostředí Medium 199 bez fenolové červeně doplhěné 10% teplem deaktivovaným FBS, 0,1% ε-aminokaprovou kyselinou, L-glutaminem (2 mmol) a antibiotiky (streptomycin 50 pg/ml, penicilín 50 mezinárodních jednotek/ml a amfotericin B 2,5 mg/ml) . Cévy se kultivují a zpracovávají každé dva dny s 10~¹⁰až 10 M somatostatinem-14, analogy somatostatinu a SU5416 10⁶M nebo vehikulem při 37 °C v atmosféře 95 % vzduchu/5 % oxidu uhličitého ve zvlhčeném prostředí po 28 dní (obr. 2) .

Cévní explantáty se 28. den fotografují s fázovým kontrastem mikroskopem Leitz MD IL (společnost Leica, Heerbrugg,

Švýcarsko) a podrobí se obrazové analýze.

·· ··«· • · ···· · · · · • · · · · ♦ • · · ·· · » · · • · · · · · • · ··· ·· ♦ ·

Obrazová analýza

Pro předkládanou studii se používá postup obrazové analýzy, který popsal Bocci a Pharmacology, 43, 205 až 212 fotografie, které se získají kol., (Cancer Chemotherapy (1999)). Stručně řečeno, ze zkoušky placentálních fragmentů se digitalizují v síti 512 x 512 pixelu, za použití barevné videokamery TK-1280E (JVC, Tokio, mikropočítačového procesoru. Digitalizované vizualizují na barevném displeji s vysokou

Pro interaktivní zpracování, kvantifikaci obrazů a se provozuje softwarový balíček pro analýzu

Japonsko) a obrazy se rozlišovací schopností sběr dat skutečného barevného obrazu KS 300 v.1.2. (Kontron Elektronic GmbH, Eching, Německo). Geometrické kalibrace se nastavují pomocí vzorku o známých rozměrech a provádí se analýza stupně zešednutí pro měření hustoty zčernání obrazu, která je v rozmezí od 0 až 255, kde 0 je čerhá (přítomnost vaskulárních výhonků) a 255 je bílá (absence vaskulárních výhonků) . Ve fibrinové kultuře explantátů placentálních cév se měří střední úroveň šedi oblasti rašení a index rašení (SI) se stanovuje jako:

Index rašení ( (oblast rašení/střední úroveň šedi oblasti rašení)/průměr explantátů) x 100.

Výsledky se vyjadřují jako procento indexu statistická chyba proti kontrolnímu vzorku.

rasem

Dále následují výsledky

Zkouška cytotoxicity ·· ···· ·· 0 ♦ · 0 0 · ·· ··· «000 00 0 0 000« 0 0 · 0 0 0 0

Všechny výsledky jsou zobrazeny v tabulce I. Všechny analogy somatostatinu při těchto studiích koncentrací vykazují antiproliferativní účinek na imortalizované lidské mikrovaskulární endotheliální buňky HMEC-1 s maximálním účinkem při 10 ⁷ až 10~⁹M koncentraci. Pozitivní kontrolní vzorek z SU5416 10^_6M a specifického inhibitoru receptorů VEGF má za výsledek růstový blok buňky o hodnotě 56,2 %.

In vitro kultury z lidských placentálních cév

Rašení explantátů ve fibrinové základní hmotě se charakterizuje pomocí četných mikrocév kolem placentálního fragmentu. Vaskulární buňky se organizují radiálně pro vytvoření mikrocév, které prodělávají neustálou přestavbu (obr. 3). Maximální růst trojdimenzionální mikrocévní sítě se projevuje během třetího až čtvrtého týdne a dosahuje horní úrovně 27 dní po explantaci. Histologicky se ve fibrinovém gelu pozoruje jemná struktura endoteliálních buněk (obr. 5), která je imunologicky reaktivní pokud jde O Willebrandův faktor (obr. 4) . Ve většině z těchto případů mikrocévy vykazují počáteční průsvit, v jiných případech průsvit chyběl a pozorovali se pouze endoteliální buňky (obr. 5).

Mikroskopický obraz placentálních explantátů v první den kultivace je zobrazen na obr. 6A (tyčka, 2 mm); objevení se nárůstu endoteliálních buněk z placentálních kultivovaných cévních fragmentů se pozoruje přibližně 6. den kultivace (Si 0, 055 ± 0, 004 (mm/střední šedá) x 100; obr. 6 D) .

Experimentální údaje o účinku analogů somatostatinu na kapilární rašení jsou shrnuty v tabulce II. Kultury zpracované s analogy SMS a SU5416 jsou zobrazeny na obrazech 7 až 18, kde se zobrazuje maximální účinek. BIM-23926C a BIM-23745C ·· frfrfrfr • fr ···· • ·

99· vykazují silné inhibiční vlastnosti při dlouhodobém působení, které mají za výsledek, po řadě, Si v hodnotách 17,18 ± 11,8 % při 10⁷M koncentraci a 42,84 ± 5,6 % při 10‘⁸M koncentraci ve srovnání k nezpracovanému kontrolnímu vzorku. SU5416, pozitivní kontrolní vzorek má výsledný Si 32,92 ± 9,7 % při 1Q~⁶M koncentraci.

Dále následují jiná ztělesnění.

Předchozí popis je omezen na specifická ztělesnění tohoto vynálezu. Je však zřejmé, že k tomuto vynálezu mohou být provedeny variace a modifikace se zachováním některých nebo všech výhod tohoto vynálezu. Taková ztělesnění jsou také zahrnuta do rámce následujících patentových návrhů.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Použití terapeuticky účinného množství agonisty receptoru somatostatinu typu-1 pro přípravu léčiva pro léčení vaskulární proliferace.
2. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že agonista receptoru somatostatinu typu-1 má Ki menší než 5 nM, pokud jde o receptor somatostatinu typu-1.
3. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že agonista receptoru somatostatinu typu-1 je selektivním agonístou receptoru somatostatinu typu-1.
4. Použití podle nároku 3, vyznačující se tím, že selektivní agonista receptoru somatostatinu typu-1 má Ký pro receptor somatostatinu typu-1 takovou velikost, která je alespoň 10-krát menší než je Ki pro každý z receptorů somatostatinu typu-2, typu-3, typu-4 a typu-5.
5. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že agonistou receptoru somatostatinu typu-1 je:

H-Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys-NH₂;

H-D-Phe-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NH₂;

H-Cys-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Ser-Phe-Cys-NH₂;

H-Cys-Phe-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys-NH₂;

H-Cys-Phe-Tyr(I)-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Cys-NH₂;

/

N’(CH3.)-CO'D-Phe-Phe’Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-NK_z ·· ····

Caeg-c(D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-D-Cys)-Thr(Bzl)-Tyr-NH₂;

nebo

3-((2,4-dimethylpyrrol-5-yl)methylidenyl)-2-indolinon;

nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.
6. Použití podle nároku 5, vyznačující se tím, že agonistou receptoru somatostatinu typu-1 je terapeuticky účinné množství sloučeniny podle vzorce:

Caeg-c(D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-D-Cys)-Thr(Bzl)-Tyr-NH₂;

nebo její farmaceuticky přijatelné soli.
7. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená vaskulární proliferace zahrnuje angiogenesi, restenózu, proliferaci endoteliální buňky, proliferaci hladkého svalu nebo rašení nových krevních cév.
8. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená vaskulární proliferace je součástí nemocí nebo stavů, zahrnujících nemoci autoimunitního systému, artritidu, sklerodermii, rakovinové nádory, neovaskularizaci korneálního štěpu, diabetickou retinopatii, hemangiomii, hypertrofické jizvy nebo psoríázu.
9. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená vaskulární proliferace je provázející nebo spojená s angioplastií nebo arteriovenózními (AV) zkraty,
10. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená vaskulární proliferace je součástí nemocí nebo stavů, zahrnujících bradavice, granulomy, Kaposiův sarkom nebo alergický edém.

• ·
11. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená vaskulámí proliferace je součástí nemocí nebo stavů, zahrnujících endometriózu, dysfunkční děložní krvácení nebo folikulární cysty.
12. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená vaskulámí proliferace je součástí nemocí nebo stavů, zahrnujících retrolentální fibroplazii, choroidopatii, makulární degeneraci nebo stařeckou makulární degeneraci.
13. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená vaskulámí proliferace je součástí nemocí nebo stavů, zahrnujících pevný nádor, metastázu nádoru, nezhoubný nádor, akustické neuromy, neurofibromy, trachomy, leukémii, pyogenní granulom, myokardiální angiogenesi, neovaskularizaci plaků, aterosklerózu, koronární kolaterály, cerebrální kolaterály, arteriovenózní malformace, ischemickou angiogenesi končetiny, odmítnutí korneálního štěpu, Osler-Weberův syndrom, rubeosis, neovaskulární glaukom, retrolentální fibroplazii, diabetickou retinopatii, diabetickou neovaskularizaci, frakturu, vaskulogenesi, hematopoézu, ovulaci, menstruaci, placentaci, nemoc z kočičího škrábnutí (Rochele minalia quintosa), peptický vřed, vřed spojený s Helicobacter pylori, psoriázu, telangiektasii psoriasis, revmatickou artritidu, Crohnovu nemoc, střevní srůsty, zjizvení, hypertofické jizvy, telangiektasii; hemofilické klouby; angiofibromii nebo granulaci poranění.
14. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený agonista receptoru somatostatinu typu-1 je uspořádán na nebo ve vaskulárním štěpu.

• · *
15.

Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený agonista receptoru somatostatinu typu-1 je složkou formulace s pomalým uvolňováním.
16. Použití podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený agonista receptoru somatostatinu typu-1 je složkou polymerní kompozice.