CZ2002939A3 - Léčivo pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest a pneumonie indukované chřipkou - Google Patents

Description

Předložený vynález se týká použití inhibitoru CSBP/p38, popřípadě ve spojení s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest, jakož i pro výrobu léčiva pro léčení pneumonie indukované chřipkou.

Dosavadní stav techniky

Lidský rhinovirus (HRV), nejčastější příčina rýmy, je se zvyšující se měrou spojován se závažnějšími komplikacemi, včetně exacerbací asthmatu, chronické bronchitidy, COPD, otitis media a sinusitidy (Gern a kol., Clin. Micro. Reviews, 12(1) , 9 až 18 (1999); Pitkaranta a Hayden, Annals of Medicine, 30(6). 529 až 537 (1998); Seemungal a kol., ATS abstrakt Rhinoviruses are associated with exacerbation's of COPD (1998)). V současnosti publikované studie na dospělých a dospívajících, za použití PCR k nápomoci detekce viru, ukázaly, že až do 50 až 80 % exacerbací asthmatu je spojeno s virovou infekcí horních dýchacích cest, a že rhinovirus je nejběžnějším virem (Atmar a kol., Archives of Internal Medicine, 158(22) . 2453 až 2459 (1998); Johnston, S.L., British Medical Journal, 310, 1225 až 1229 (1995)). HRV infikuje nosní epiteliální buňky; současné důkazy naznačují, že virus může také infikovat bronchiální epitel. Prodromální symptomy rýmy jsou zřejmé do 24 hodin po infekci, vrcholí druhého až pátého dne a vymizí během 7 až 14 dní; ale mohou

- la být u některých jedinců protrahovány. U symptomů se má za to, že spíše pocházejí z reakce hostitele vůči infekci, než z akutního cytotoxického účinku, protože zřetelně infikována je pouze malá část buněk horních dýchacích cest, přičemž je zde pouze minimální poškození epiteliálních buněk (Winthe a • · · · · · ·· «Φ • · · · · • · · • · · » • · · • · · · 4 « « kol., JAMA, 256, 1763 až 1767 (1986)). U normální jedinců infikovaných rhinoviry se nacházejí zvýšené intranasální hladiny kininů, IL-1, IL-8, IL-6, IL-11 a neutrofilů.

V některých současných studiích byla ukázána korelace mezi koncentrací IL-8 v nosních sekretech a místními hladinami myeloperoxidázy se symptomy závažnosti (Grieff a kol., Eur. Respir. J., 13, 41 až 47 (1999); Teren, a kol., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 155, 1362 až 1366 (1997), Turner a kol., Clin. Infect. Dis., 26, 840 až 846 (1998)). Intranasální koncentrace IL-1 a IL-6 byly se symptomy závažnosti korelovány stejně tak (Proud a kol., J. Infect. Dis., 169, 1007 až 1013 (1994); Zhu a kol., J. Clin. Invest., 97, 421 až 430 (1996)). Experimentální rhinovirová infekce také vede k usnadnění bezprostředních alergických reakcí a alergických reakcí pozdní fáze a ke zvýšené infiltraci dolních dýchacích cest T lymfocyty a eosinofily. U atopiků a astmatiků tyto účinky přetrvávají až 2 měsíce po infekci (Gern a Busse, Am. J. Respir. Crit. Care Ned., 152, S40 až S45 (1995)). U linií lidských bronchiálních epiteliálních buněk bylo ukázáno, že v odpověď na rhinovirovou infekci produkují IL-1, IL-6, IL-8, IL-11 a GM-CSF (Subauste a kol.,· J. Clin. Invest., 96, 549 až 557 (1995); Gern a kol., viz výše, (1999)). Časná tvorba cytokinů epiteliálními buňkami infikovanými rhinoviry může tedy být odpovědná za spuštění atrakce neutrofilů, T buněk a aktivovaných eosinofilů do horních a dolních dýchacích cest.

Kromě IL-1, LL-6, a IL-8 se rovněž tvoří v odpověď na infekci jinými viry dýchacích cest (virus chřipky, virus syncycia dýchacích cest), které mohou způsobit rýmu a související komplikace.

♦ · · · 99 ♦© ·· ··« ···· 9 9 9 9 ········ 9 · 9 9 9

9 9 9 9 9 « · · ··» · ·· ♦* ·». ····

Interakce s biochemickými procesy epíteliálních buněk, které jsou důsledkem jejich virové infekce, představuje schůdný nový terapeutický cíl prostřednictvím inhibitoru CSBP/p38. Tento vynález se týká nového použití uvedeného inhibitoru pro výrobu léčiva pro léčení tohoto terapeutického cíle.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je použití inhibitoru CSBP/p38 pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest zapříčiněné lidským rhinovirem (HRV), dalšími enteroviry, koronavirem, virem chřipky, virem parainfluenzy, virem syncycia dýchacích cest nebo adenovirem.

Předmětem tohoto vynálezu také je použití svrchu uvedeného inhibitoru CSBP/p38 s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest.

Předmětem tohoto vynálezu také je použití inhibitoru CSBP/p38, popřípadě s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčení pneumonie indukované chřipkou.

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1 ukazuje tvorbu cytokinů buňkami BEAS-2B • · ···· · · 4 * • · · · · ···« • 4 ····· ·· 4

9 9 · « · « • · · · 4 « · ·*«··« infikovanými rhinovirem. Supernatanty kultury se zachytí 72 hodin po infikování buněk BEAS-2B rhinovirem-39 (MOI 1). Neinfikované buňky slouží jako kontrola. Koncentrace proteinu v supernatantech se stanoví pomocí ELISA (R&D Systems). Výsledky představují střední hodnoty koncentrací získané ze 6 experimentů.

Obr. 2 ukazuje inhibici cytokinů pomocí CSAIDs (protizánětlivých léčiv potlačujících cytokiny): kultury buněk BEAS-2B infikovaných rhinovirem-39 se kultivují za přítomnosti různých koncentrací léčiva. Hladiny cytokinů v supernatantu se stanoví 72 hodin po infekci za použití komerčně dostupných kitů ELISA. Výsledky se vyjádří jako % inhibice z infikovaných neošetřených kultur. Koncentrace cytokinů v infikovaných kontrolních kulturách jsou 4902 pg/ml IL-6, 4520 pg/ml IL-8 a 28 pg/ml GM-CSF.

Obr. 3 ukazuje fosforylaci tyrosinu p38 kinázy při rhinovirové infekci. Buňky BEAS-2B se inkubují s rhinovirem-39 po různě dlouhé časové úseky, jak je ukázáno. Buněčné lyzáty se rozdělí na 10% SDS-polyakrylamidovém gelu, přenesou se na nitrocelulózovou membránu a pomocí specifických protilátek se sledují na obsah fosforylované kinázy p38 (A) nebo celkové kinázy p38 (B). Množství kinázy p38 se kvantifikují zobrazovacím analyzátorem a jsou předloženy jako objemy vztažené k densitometrickým skanům.

Obr. 4 ukazuje fosforylaci tyrosinu kinázy p38 při rhinovirové infekci. Buňky BEAS-2B se inkubují s různými dávkami (MOI) rhinoviru-39 po dobu 30 minut. Buněčné lyzáty se rozdělí na 10% SDS-polyakrylamidovém gelu, přenesou na nitrocelulózovou membránu a pomocí specifických protilátek se sledují na obsah fosforylované • · · φ kinázy ρ38 nebo celkové kinázy p38. Množství kinázy p38 se kvantifikují zobrazovacím analyzátorem a jsou předloženy jako relativní množství celkové nebo fosforylované kinázy p38 ve srovnání s kontrolními buňkami inkubuvanými s médiem samotným (násobné zvýšení).

Obr. 5 ukazuje účinek sloučeniny VI, 1-(1,3-dihydroxyprop-2-yl)-4-(4-fluorfenyl)-5-(2-fenoxypyrimidin-4-yl)imidazolu, na zlepšení plicních funkcí se zvyšujícími se dávkami. Myši BALB/c se 3 až 8 dní po infekci vystaví působení subletální dávky viru chřipky A. Za použití celotělové plethysmografie se stanoví plicní resistence.

Obr. 6 ukazuje účinek sloučeniny V, l-(4-pipěridinyl)-4-(4-fluorfenyl)-5-(2-methoxy-4-pyrimidinyl)imidazolu, a sloučeniny VI na prevenci ztráty hmotnosti u zvířat v chřipkovém modelu in vivo.

Obr. 7 ukazuje účinnost sloučenin V a VI na zlepšení hladin kyslíku v arteriální krvi (% SpO2) při léčení. SpO₂ se stanoví za použití denní pulsní oximetrie.

Detailní popis vynálezu

IL-1, TNF a další cytokiny ovlivňují širokou škálu buněk a tkání, přičemž tyto cytokiny, stejně jako další cytokiny odvozené z leukocytů, jsou důležitými a rozhodujícími mediátory zánětu široké škály chorob a chorobných stavů. Inhibice těchto citokinů je přínosná pro zvládání, snižování nebo zmírňování těchto chorobných stavů.

99 99

9 · 9 9 9 9

99 9 9 9

9 · · · · ·

9 · · · '9 •9 «· 999 9 kinázy p38 nebo celkové kinázy p38. Množství kinázy p38 se kvantifikují zobrazovacím analyzátorem a jsou předloženy jako relativní množství celkové nebo fosforylované kinázy p38 ve srovnání s kontrolními buňkami inkubovanými s médiem samotným (násobné zvýšení).

Obr. 5 ukazuje účinek sloučeniny VI, 1-(1,3-dihydroxyprop-2-yl)-4-(4-fluorfenyl)-5-(2-fenoxypyrimidin-4-yl)imidazolu, na zlepšení plicních funkcí se zvyšujícími se dávkami. Myši BALB/c se 3 až 8 dní po infekci vystaví působení subletální dávky viru chřipky A. Za použití celotělové plethysmografie se stanoví plicní resistence.

Obr. 6 ukazuje účinek sloučeniny V, l-(4-piperidinyl)-4-(4-fluorfenyl)-5-(2-methoxy-4-pyrimidinyl) -imidazolu, a sloučeniny VI na prevenci ztráty hmotnosti u zvířat v chřipkovém modelu in vivo.

Obr. 7 ukazuje účinnost sloučenin V a VI na zlepšení hladin kyslíku v arteriální krvi (% SpO₂) při léčení. SpO₂ se stanoví za použití denní pulsní oximetrie.

Detailní popis vynálezu

IL-1, TNF a další cytokiny ovlivňují širokou škálu buněk a tkání, přičemž tyto cytokiny, stejně jako další cytokiny odvozené z leukocytů, jsou důležitými a rozhodujícími mediátory zánětu široké škály chorob a chorobných stavů. Inhibice těchto citokinů je přínosná pro zvládání, snižování nebo zmírňování těchto chorobných stavů.

Obzvláště je předložený vynález zaměřen na použití výše zmíněného inhibitoru pro výrobu léčiva pro léčení virové »* ► « • 9 ► 9 · • 9 · *··· · 9

9· 99 ř * * ’ b · <

» · 9

I 9 9

9991 infekce u člověka, která je způsobena lidským rhinovirem (HRV), dalšími enteroviry, koronavirem, virem chřipky, virem parainfluenzy, virem syncycia dýchacích cest nebo adenovirem. Obzvláště se tento vynález týká použití výše zmíněného inhibitoru pro výrobu léčiva pro léčení virových infekcí dýchacích cest, které exacerbují astma (indukované takovými infekcemi), chronickou bronchitidu, chronickou obstrukční plicní chorobu, otitis media a sinusitidu. Zatímco může být známo, že inhibice IL-8 nebo jiných cytokinů může být přínosná pro léčení rhinoviru, má se za to, že použití inhibitoru kinázy p38 pro výrobu léčiva pro léčení infekcí HRV nebo jinými viry dýchacích cest způsobujících rýmu je nové.

Je třeba zdůraznit, že virové infekce dýchacích cest léčené léčivem vyrobeným za použití výše zmíněného inhibitoru mohou rovněž být doprovázeny sekundární bakteriální infekcí, jako je otitis media, sinusitida nebo pneumonie.

Při použití výše zmíněného inhibitoru pro výrobu léčiva může léčení zahrnovat profylaxi skupin citlivých k takovým infekcím. Může rovněž zahrnovat snižování symptomů stavu pacienta, zlepšování symptomů stavu pacienta, snižování závažnosti stavu pacienta, snižování incidence stavu pacienta nebo jakoukoli jinou změnu stavu pacienta, která zlepší terapeutický výsledek.

Způsob založený na předloženém vynálezu nachází použití inhibitoru kinázy CSBP/p38 pro léčení, včetně profylaxe, rýmy nebo virových infekcí dýchacích cest způsobených infekcí lidským rhinovirem (HRV), infekcí dalšími enteroviry, koronavirem, virem chřipky, virem parainfluenzy, virem syncycia dýchacích cest nebo adenovirem u lidí, (kteří

4· 44 ·· 44

4 4 · 4 44 4

4 4« 4 4 · • 44 444 4 4

4 4 4 * 4 4 *4 44 «444 • 4 4 • 4 4

4444 9 • 4 «4 4 4 to potřebují. Způsob spočívá v podávání uvedenému člověku účinného množství inhibitoru CBSP/p38.

Předložený vynález dále umožňuje způsob léčení, včetně profylaxe, pneumonie navozené chřipkou u lidí, kteří to potřebují, kterýžto způsob zahrnuje podávání uvedenému člověku účinného množství inhibitoru CBSP/p38.

Způsob založený na předloženém vynálezu také nachází použití inhibitoru kinázy CSBP/p38 pro léčení, včetně profylaxe, zánětu spojeného s virovou infekcí lidským rhinovirem (HRV), infekcí dalšími enteroviry, koronavirem, virem chřipky, virem parainfluenzy, virem syncycia dýchacích cest nebo adenovirem.

Mechanismus účinku inhibice cytokinů protizánětlivým léčivem potlačujícím cytokin (CSAID) se považuje za rozdílný ve srovnání s inhibici tvorby IL-8 indukované virem v epiteliálních buňkách dýchacích cest. Ve rhinovirovém systému je tvorba IL-8 a inhibice syntézy IL-8 prostřednictvím protizánětlivého léčiva potlačujícího cytokin nezávislá na tvorbě IL-1 a TNF, zatímco publikované studie se zaměřovaly na tvorbu IL-8 indukovanou IL-1 a TNF.

Je třeba zdůraznit, že zde předložená léčba není zaměřena na eliminaci nebo léčení virového organismu samotného, ale je zaměřena na léčení virové infekce dýchacích cest, která exacerbuje jiné choroby nebo symptomy choroby, jako je astma (indukované takovými infekcemi), chronická bronchitida, chronická obstrukční plicní choroba, otitis media a sinusitida.

» · «« ·♦ »· 99 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 99 9 9 9 • ····«» 99 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9

999 9 99 ·9 ·· ····

- 8a Předložený vynález ukazuje, že inhibitory CSAID jsou užitečné při léčení symptomů spjatých s HRV, včetně exacerbací základních stavů, jako je mezi jinými astma, COPD, sinusitida a otitis media.

Výhodným virem ke zde předloženému léčení je lidská rhinovirová infekce (HRV) nebo virus syncicia dýchacích cest (RSV).

Jak již bylo uvedeno, způsob léčení, včetně profylaxe, pneumonie navozené chřipkou u lidí, kteří to potřebují, zahrnuje podávání uvedenému člověku účinného množství inhibitoru CBSP/p38. Pro toto použití je výhodně virem k léčení viru chřipky.

Použití inhibitoru kinázy CSBP/p38 podle tohoto vynálezu vede k léčivu umožňujícímu léčení, včetně profylaxe, zánětu spjatého s virovou infekcí lidským rhinovirem (HRV), dalšími enteroviry, koronavirem, virem chřipky, virem parainfluenzy, virem syncycia dýchacích cest nebo adenovirem. Výhodně je virovou infekcí HRV nebo RSV nebo virus chřipky nebo virus parainfluenzy.

• · · · *» · ··· · · ·« • * Φ · · » 0 • ···· © · β • 00 ♦ » · φ · • ♦ · · 0 · <· 0·· 0» 0·«·

W0 99/01131 a jejich representativní skupina je popsána dále. Rovněž výhodné jsou pro zde předložené použití sloučeniny popsané ve WO 99/61426 Scios, lne. a sloučeniny popsané ve WO 98/27098 obsahující sloučeninu známou jako VX-745; (rovněž známou jako 5-(2,6-dichlorfenyl)-2-(2,4-difluorfenylsulfanyl)-1,7,8a-triazanaftalen-6-on), sloučeninu RWJ-68354 firmy Johnson & Johnson popsanou ve WO 98/47899, sloučeninu RPR-200765A firmy RPR, sloučeninu ZM 336372 firmy Zeneca popsanou ve WO 99/15164 a sloučeninu SU 4984 firmy Sugen popsnou ve WO 98/50356. Přehled různých inhibitorů kinázy p38 je uveden v Boehm a kol., Exp. Opin. Ther. Patents, 10 (1), 25 až 37 (2000) .

Sloučeniny obecného vzorce (I) jsou představovány obecným vzorcem (I)

Rl r₄

N />

N (i) ve kterém

R_x je 4-pyridylový, pyrimidinylový, 4-pyrídazinylový, 1,2,4-triazin-5-ylový, chinolylový, isochinolinylový nebo chinazolin-4-ylový kruh, kterýžto kruh je substituován Y-Ra a případně dalším nezávislým substituentem zvoleným z alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, atomu halogenu, hydroxylu, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfinylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, skupiny CH₂ORi₂, aminoskupiny, aminoskupiny substituované 1- až 2-krát alkylovou skupinou s 1 • *· · • · · · 4 ♦ · ··* · • ♦ • · · · až 6 atomy uhlíku, N-heterocyklylový kruh, kterýžto kruh má 5 až 7 členů a případně obsahuje další heteroatom zvolený z atomu kyslíku nebo síry nebo skupiny NR_i5, skupiny N(Ri₀)C(O)R_b nebo skupiny NHR_a;

Y je atom kyslíku nebo síry;

R₄ je fenyl, 1-naftyl nebo 2-naftyl nebo heteroaryl, který je případně substituován 1 nebo 2 substituenty, z nichž každý je zvolen nezávisle, a který, pro 4-fenylový, 4-naft-l-ylový, 5-naft-2-ylový nebo 6-naft-2-ylový substituent, je atom halogenu, kyanoskupina, nitroskupina, skupina C(Z)NR₇Ri₇, skupina C(Z)ORi6, skupina (CRi_OR₂o) vCOR₁₂, skupina SR₅, skupina SOR5, skupina OR12, halogenem substituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, skupina ZC(Z)R_i2, skupina NR₁₀C(Z)Ri6 nebo skupina (CR10R20) vNRioíUo/ a která, pro další polohy substituce, je atom halogenu, kyanoskupina, skupina C(Z)NR₁₃R₁₄, skupina C(Z)OR₃, skupina (CR10R20) m”COR₃, skupina S(O)_mR₃, skupina 0R₃, halogenem substituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, skupina (CR10R20) mNRioC ( Z) R₃, skupina NR10S (O) _m'Rs, skupina NR₁₀S (O) _m>NR₇R₁₇, skupina ZC(Z)R₃ nebo skupina (CR₁oR2o)mNRi3Ri4z*

Z je atom kyslíku nebo síry;

n je celé číslo, které má hodnotu 1 až 10;

♦ · ♦ · • · * ♦ ♦ 0 • 9 * · « · · • · *·» 9··· » • · · » 9·»·

9 9 < * · · · · · » 0··· m je O nebo celé číslo 1 nebo 2;

m' je celé číslo, které má hodnotu 1 nebo 2, m je 0 nebo celé číslo, které má hodnotu 1 až 5;

v je 0 nebo celé číslo, které má hodnotu 1 nebo 2;

R₂ je skupina -C(H) (A) (R22) ;

A je případně substituovaný arylový, heterocyklylový nebo heteroarylový kruh nebo A je substituovaná alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku;

R₂₂ je případně substituovaná alkylová skupina s 1 až atomy uhlíku;

R_a je aryl, aralkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, heterocyklická skupina, heterocyklylalkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, heteroaryl, heteroarylalkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, kde každá z těchto částí může být případně substituována;

R_b je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až β atomy uhlíku, cykloalkylová skupina se 3 až 7 atomy uhlíku, aryl, aralkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, heteroaryl, heteroarylalkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, heterocyklyl nebo heterocyklylalkylová skupina s 1 až 4 atomy

♦ · ♦

uhlíku v alkylové části, kde každá z těchto částí může být případně substituována;

R₃ je heterocyklyl, heterocyklylalkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části nebo R₈;

R₅ je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkenylová skupina se 2 až 4 atomy uhlíku, alkynylová skupina se 2 až 4 atomy uhlíku nebo NR₇R₁₇, s tím, že část SR₅ není SNR7R17 a část SOR5 není SOH;

r₆ je atom vodíku, farmaceuticky přijatelný kation, alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylová skupina se 3 až 7 atomy uhlíku, aryl, aralkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, heteroaryl, heteroarylalkylové skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části, heterocyklyl, aroyl nebo alkanoylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku;

R₇ a R17 je každý nezávisle zvolen z atomu vodíku nebo alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku nebo R₇ a Ri? dohromady s atomem dusíku, na nějž jsou připojeny, tvoří heterocyklický kruh s 5 až 7 členy, kterýžto kruh případně obsahuje další heteroatom zvolený z atomu kyslíku nebo síry nebo NR15;

r₈ je alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku, halogenem substituovaná alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku, alkenylová skupina se 2 až 10 atomy uhlíku, alkynylová skupina se 2 až 10 • · · · « atomy uhlíku, cykloalkylová skupina se 3 až 7 atomy uhlíku, cykloalkenylová skupina s 5 až 7 atomy uhlíku, aryl, aralkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, heteroaryl, heteroarylalkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, skupina (CR_loR2o)nORn, skupina (CR10R20) _nS (O)_mRi8, skupina (CRi_OR₂o) _nNHS (O) ₂Ris , skupina (CR10R20) 11R13R14; kde aryl, aralkyl, heteroaryl nebo heteroarylalkyl může být případně substituován;

r₉ je atom vodíku, skupina C(Z)Rn nebo případně substituovaná alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku, skupina S(O)₂Ri8, případně substituovaný aryl nebo případně substituovaná aralkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části;

R10 a R20 je každý nezávisle zvolen z atomu vodíku, alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku;

R_n je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylová skupina se 3 až 7 atomy uhlíku, heterocyklyl, heterocyklylalkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, aryl, aralkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku, heteroaryl nebo heteroarylalkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku, kde každá z těchto částí může být případně substituována;

R₁₂ je atom vodíku nebo Rig;

R13 a R14 je každý nezávisle zvolen z atomu vodíku nebo případně substituované alkylové skupiny s 1 až 4 • · ft · · • ft* • ft ft* • * ♦ · • · ft • · ft • · * • ft ··· · atomy uhlíku, případně substituovaného arylu nebo případně substituovaného aralkylu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části nebo dohromady s atomem dusíku, na nějž jsou připojeny, tvoří heterocyklický kruh s 5 až 7 členy, kterýžto kruh případně obsahuje další heteroatom zvolený z atomu kyslíku, síry nebo NR₉;

Rl5 je Rio nebo C (Z)-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylové části;

R₁₆ je alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, halogenem substituovaná alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo cykloalkylová skupina se 3 až 7 atomy uhlíku;

R₁₈ je alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku, cykloalkylová skupina se 3 až 7 atomy uhlíku, heterocyklyl, aryl, aralkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, heterocyklyl, heterocyklylalkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části, heteroaryl nebo heteroarylalkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku v alkylové části;

nebo jde o jejich farmaceuticky přijatelnou sůl.

R₂ je substituovaný alkylový derivát. Má se za to, že první methylenový atom uhlíku v tomto řetězci je terciární atom uhlíku a že bude obsahovat vodíkovou část. Tato methylenová skupina bude mít 2 další substituenty, část R22 část A, -C(H) (A) (R22) · Jak A, tak R22 nemohou být nesubstituované alkylové části s 1 až 10 atomy uhlíku.

• * * · • · ♦ • · ·♦ ♦* • * 9 9

9 9

·· ··«· • 9 9 • 9 9 · · • 9

999 9 #

Ve výhodném ztělesnění R₂ je část -C(AAi) (A), kde AAi je část R₂₂ moiety, ale je specificky zbytkem postranního řetězce (R) aminokyseliny, jak je zde dále popsáno.

Vhodně A je případně substituovaná cykloalkylové skupina se 3 až 7 atomy uhlíku, arylový, heteroarylový nebo heterocyklický kruh nebo A je substituovaná alkylová část s 1 až 10 atomy uhlíku.

Když A je arylový, heteroarylový a heterocyklický kruh, může kruh být substituován nezávisle 1- nebo vícekrát, výhodně 1- až 3-krát, alkylovou skupinou s 1 až 10 atomy uhlíku; atomem halogenu; halogenem substituovanou alkylovou skupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, jako je skupina CF₃; skupinou (CR10R20) tORn/ skupinou (CRi_OR₂o) tKi3Ki4r obzvláště aminoskupinou nebo mono- nebo dialkylaminoskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku v každé alkylové části; skupinou (CR10R20) tS (O)_mRi8, kde m je 0, 1 nebo 2; skupinou SH; skupinou NRi₀C(Z)R₃ (jako je NHCO (alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku)) nebo skupinou NRioS(0)_mR₈ (jako je skupina NHSO₂(alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku)).

Vhodně t je 0 nebo celé číslo 1 až 4.

Když A je případně substituovaný cykíoalkyl, je definován dále u substituce R₂₂.

Když A je případně substituovaný heterocyklylový kruh, kruh je výhodně morfolinový, pyrrolidinylový, piperazinylový nebo piperidinylový kruh.

• 889 ·· 9 98 9 •8 88 • · · · · 9 « • ···· 8 8 8 * 8 · · 8 «88 888 8 ·· 8*8 »-* 8988

Když A je případně substituovaná arylová část, je jí výhodně fenylový kruh.

Když A je případně substituovaný heteroaryl kruh, je definován dále v části definic.

Když A je substituovaná alkylová část s 1 až 10 atomy uhlíku, může být alkylový řetězec přímý nebo rozvětvený. Řetězec je substituován nezávisle 1- nebo vícekrát, výhodně 1- až 3-krát atomem halogenu, jako je fluor, chlor, brom nebo jod; halogenem substituovanou alkylovou skupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, jako je skupina CF₃; cykloalkylovou skupinou se 3 až 7 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, jako je methoxyskupina nebo ethoxyskupina; hydroxyskupinou substituovanou alkoxyskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku; halogenem substituovanou alkoxyskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, jako je skupina OCF₂CF₂H; skupinou ORn; skupinou S(O)_mRi8 (kde m je 0, 1 nebo 2); skupinou NR₁₃Ri₄; skupinou C(Z)NRi₃Ri₄; skupinou S (O)_m<NRi₃Ri₄; skupinou NR₂₃C (Z) Rn ; skupinou NHS(O)₂Ri8/ skupinou C(Z)R_U; skupinou OC(Z)Rn; skupinou C(Z)ORn; skupinou C(Z)NRnOR₉; skupinou N (ORé) C (Z) NR13R14; skupinou N (OR₆) C (Z) Rn; skupinou C(=NOR₆)Rh; skupinou NR₂₃C (=NRi₉) NRi₃Ri₄; skupinou OC (Z) NR13R14; skupinou NR₂₃C (Z) NR13R14 nebo skupinou NR₂₃C (Z) OR10.

Výhodně A je cykloalkylová skupina se 3 až 7 atomy uhlíku nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, výhodněji alkylová skupina s 1 nebo 2 atomy uhlíku, tj . methylenová nebo ethylenová část, výhodněji methylenová část, která je substituována jednou z výše uvedených skupin.

• φ · · · ·

Výhodně když A je alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku, je substituována substituentem ORn, kde R_n je výhodně atom vodíku, aryl nebo aralkyl; skupina NR13R14;

skupina OC(Z)R_X1 nebo skupina C(Z)ORn.

Výhodněji A je substituován substituentem ORn, kde Rn je atom vodíku.

Vhodně R22 je alkylový řetězec s 1 až 10 atomy uhlíku, kterýžto řetězec může být přímý nebo rozvětvený a který může být případně substituován nezávisle, 1- nebo vícekrát, výhodně 1- až 3-krát, atomem halogenu, jako je fluor, chlor, brom nebo jod; halogenem substituovanou alkylovou skupinou s 1 až 10 atomy uhlíku; alkoxyskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, jako je methoxyskupina nebo ethoxyskupina; hydroxyskupinou substituovanou alkoxyskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku; halogenem substituovanou alkoxyskupinou s 1 až 10 atomy uhlíku, jako je skupina OCF₂CF₂H; skupinou ORn; skupinou S(O)_mRi₈; skupinou NR₁₃Ri₄; skupinou C(Z)NRi3Ri4; skupinou S (O) _m-NRi₃Ri4; skupinou NR₂₃C (Z) Rn; skupinou NHS(O)2Ris; skupinou C(Z)Rn; skupinou OC(Z)Rn; skupinou C(Z)ORn; skupinou CfZJNRnORg; skupinou N (0R₅) C (Z) NR13R14; skupinou N (ORé) C (Z) Rn; skupinou

C(=N0R₆)Rn; skupinou NR23C (=NRig) NRi₃R₁₄; skupinou

OC (Z) NR13R14; skupinou NR₂₃C (Z) NRi₃R!4 nebo skupinou

NR₂₃C (Z) OR10, případně substituovanou cykloalkylovou skupinou se 3 až 7 atomy uhlíku; případně substituovaným arylem, jako je fenyl; případně substituovaným heteroarylem nebo případně substituovaným heterocyklem. Případné substituenty na těchto cykloalkylových, arylových, heteroarylových a heterocyklických částech mají význam definovaný zde dále.

·* ··»· ·* ···* • · · · « » « » ♦ « ··· • · · · · • · · · · ·· ···

Podotýká se, že substituentové skupiny R₂2, které obsahují atom uhlíku jako první spojovací skupinu, tj . skupiny C(Z)OR_U; C (Z) NRnORg, C(Z)Rn, C(Z)NRi₃R₁₄ a C(=N0R6) Rn, mohou být jediným atomem uhlíku v alkylovém řetězci. Skupina R22 tudíž může například být karboxyskupinou, aldehydem nebo amidem, stejně jako být substituentem mimo methylenovou jednotku, jako je karbamoylmethyl nebo acetamidomethyl. Výhodně R22 je nesubstituovaná nebo substituovaná alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, jako je alkylenová skupina s 1 až 3 atomy uhlíku, jako je methyl, ethyl nebo isopropyl, nebo methylenová nebo ethylenová část substituovaná jednou z výše uvedených částí nebo jak je uvedeno výše těmi substituentovými skupinami, které obsahují atom uhlíku, může být substitutent první methylenové jednotky alkylového řetězce, jako je karboxyskupina, skupina C(O)ORn, skupina C(O)NRi₃Ri₄, nebo R22 je případně substituovaná arylová skupina, jako je a benzyl nebo fenethyl. Jinými slovy, R22 může být případně substituovaná alkylová skupina nebo R22 může být skupina C(Z)ORn, skupina C(Z)NRnOR₉, skupina C(Z)Rn, skupina C(Z)NRi₃Ri₄ nebo skupina C(=NOR₆)Rn.

Výhodně R₂2 je nesubstituovaná nebo substituovaná alkylová skupina, výhodněji alkylenový řetězec s 1 nebo 2 atomy uhlíku, jako je methylenová nebo ethylenová část, výhodněji methylen.

Výhodně je alkylový řetězec substituován substituentem ORu, kde Rn je výhodně atom vodíku, aryl nebo aralkyl; skupina S(O)_mRi₈, where m je 0 a R_i8 je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo případně substituovaný aryl, tj. benzylová nebo fenethylová část.

»· ·«·· benzyl, skupina CH₂OH nebo ·· ···· * « • ··· ·· ·#· »· ·· • · · « • · · • · · • · · ·· ··· ·

Výhodněji R22 je fenyl, skupina CH₂-O-aryl.

Výhodně 1 nebo oba Ά a R22 obsahují hydroxylové části, jako ve skupině alkyl-ORn s 1 až 6 atomy uhlíku, kde Rn je atom vodíku, tj . skupině CH2CH2OH.

Vhodně když AAi je zbytek vedlejšího řetězce aminokyseliny (R), je jím alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, která může být přímá nebo rozvětvená. To znamená skupinu R mimo základní řetězec aminokyselinu struktury R-C(H) (COOH) (NH₂) · Pojem zbytek R je například CH3 pro alanin, (CH₃)₂CH- pro valin, (CH₃) ₂CH-CH₂- pro leucin, fenyl-CH₂- pro fenylalanin, CH3-S-CH2-CH2- pro methionin, atd. Všechny obecně známé primární aminokyseliny jsou do těchto skupin zahrnuty, jako je alanin, arginin, asparagin, kyselina asparagová, cystein, glutamin, kyselina glutámová, glycin, histidin, isoleucin, leucin, lysin, methionin, fenylalanin, serin, threonin, tryptofan, tyrosin, valin, hydroxylysin, methylhistidin a další přirozeně se vyskytující aminokyseliny, které se nenacházejí v proteinech, jako je β-alanin, kyselina γ-aminomáselná, homocystein, homoserin, citrulin, ornithin, kanavanin, kyselina dženkolová a β-kyanalanin nebo další přirozeně se vyskytující aminokyseliny nepocházející od savců, výčet tím však není omezen.

Výhodně AAi je zbytkem fenylalaninu nebo alaninu.

Výhodně A je hydroxyskupinou substituovaná • 4 «999

<

9

9 9« 9

9« •9 9999 alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku a R₂2 je alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku nebo hydroxyskupinou substituovaná alkylová skupina s 1 až 10 atomy uhlíku.

Pro další definice se prosím obraťte na popisy ve WO 99/01131 nebo ve WO 99/01136, viz výše.

Výhodnou sloučeninou pro použití je l-(l,3-dihydroxyprop-2-yl)-4-(4-fluorfenyl)-5-(2-fenoxypyrimidin-4-yl)imidazol nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

Další vhodné sloučeniny pro použití zde předložené zahrnují trans-1-(4-hydroxycyklohexyl)-4-(4-fluorfenyl)-5-[(2-methoxy)pyrimidin-4-yl]imidazol; 1- (4-piperidinyl)-4-(4-fluorfenyl)-5-(2-methoxy-4-pyrimidinyl)imidazol nebo (4-fluorfenyl)-2-(4-methylsulfinylfenyl)-5-(4-pyridyl)imidazol, výčet tím však není omezen.

Způsoby použití a dávková množství jsou stejná jako způsoby použití a dávková množství popsaná v odkazech citovaných výše. Viz např. Adams a kol., US patent č.

756 499, vydaný 26. května 1998. K použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli v terapii, bude normálně formulována do farmaceutického prostředku podle standardní farmaceutické praxe.

Pro všechny způsoby zde popsané (nebo sloučeniny obecného vzorce (I) a další sloučeniny protizánětlivých léčiv potlačujících cytokiny (CSAIDs)) je vhodně denní orální dávkový režim od asi 0,1 do asi 80 mg/kg celkové tělesné hmotnosti, výhodně od asi 0,2 to 30 mg/kg, výhodněji od asi 0,5 mg do 15 mg. Denní parenterální dávkový režim od asi 0,1 do asi 80 mg/kg celkové tělesné

t » w « • · * • · « • · Λ ©1 • » « * •9 <»·· hmotnosti, výhodně od asi 0,2 do asi 30 mg/kg, a výhodněji od asi 0,5 mg do 15 mg/kg. Denní topický dávkový režim bude výhodně od 0,1 mg do 150 mg, podáváno 1- až 4-krát, výhodně 2- až 3-krát za den. Denní inhalační dávkový režim bude výhodně od asi 0,01 mg/kg do asi 1 mg/kg za den.

Nové použití sloučenin protizánětlivých léčiv potlačujících cytokiny (CSAIDs) zde předložené také může být využito v souvislosti s veterinárním léčením savců jiných, než je člověk, kteří potřebují inhibici CSBP/p38 nebo inhibici cytokinů nebo inhibici tvorby cytokinů k léčení chřipky, pneumonie a dalších komplikací spjatých s virovou infekcí.

Inhibitor CSBP/p38 se také může podat s druhým terapeutickým činidlem. Tímto druhým terapeutickým činidlem může být antivirové činidlo, jako je ribavirin, amantadin, rimantidin, Pleconaril, AG 7088 nebo BTA-188; může jím být také antivirové činidlo, jako je inhibitor chřipkové neuraminidázy, jako je zamanivar (Relenza), oseltamivir (Tamiflu) nebo RWJ-270201; může jím být antihistaminikum, jako je Benadryl®, chlorfeneramin a jeho soli, bromfeneramin nebo jeho soli a obecně přijímaná nesedativní antihistaminika, jako je loratadin (Claritin®) , deskarboethoxyloratadin (DCL), fexofenadin (Allegra®) a hydrochlorid cetirizinu (Zyrtec®) atd.; dekongestant, jako je fenylpropanolamin a jeho soli, pseudoefedrin nebo jeho soli; steroidy, jako je dexamethazon, prednizon nebo prednizolon, atd.; různá antibiotika, jako jsou chinolony, cefalosporiny, inhibitory β-laktamázy atd.; protizánětlivá činidla, jako jsou nesteroidní protizánětlivá léčiva, inhibitor COX-1 nebo COX-2, kyselina acetylosalicylová nebo indomethacin atd. Uznává se, že výše uvedená činidla se

4« ··4 ·

4« »4

4 4 · · 4 · · · • · 4 · · · 4 · · * f’ 4* 4«··

4444 4 «4 «·« «· 4444 mohou podávat v dávkových formách s bezprostředním uvolňováním nebo v dávkových formách s prodlouženým uvolňováním, buď dohromady s vhodnou sloučeninou protizánětlivých léčiv potlačujících cytokiny (CSAIDs) nebo odděleně. Prostředky mohou být podávány sekvenčně, v kombinaci s činidlem protizánětlivého léčiva potlačujícího cytokiny (CSAID) nebo současně. Cesta podání druhého činidla se také může lišit od cesty podání činidla protizánětlivého léčiva potlačujícího cytokiny (CSAID) a dávkovači schéma se tudíž podle toho bude lišit.

Výroba hydrochloridu cetirizinu a jeho dávkování je popsáno v US patentu č. 4 525 358; výroba fexofenadinu a jeho dávkování je popsáno US patentech čísel 4 524 129; 5 375 693; 5 578 610;

855 912; 5 932 247 a 6 037 353. Výroba loratadinu a DCL a jejich dávkování jsou popsány v US patentech čísel

282 233; 4 371 516; 4 659 716; 4 863 931; 5 314 697 a

595 997.

Dávkování zamanivaru je popsáno v US patentech čísel 4 627 432; 4 778 054; 4 811 731; 5 035 237;

360 817 a US 5 648 379. Dávkování oseltamiviru je popsáno v US patentech čísel 5 763 483; 5 866 601 a 5 952 375.

Inhibitor CSPB/p38 se může podávat systémově nebo nesystémově, jako je orálně, bukálně, topicky (intranasálně) nebo inhalačně (aerosolem) nebo jak topicky, tak inhalačně. Jak je uvedeno výše, může být druhé terapeutické činidlo podáno jakýmikoli vhodnými prostředky, včetně parenterálních, prostřednictvím čípku atd., kterýžto způsob podání není nezbytně stejnou cestou ani souča.sně.

Λ-5 ·· ···· ·· ···· ·· ·<

ZJ · · · · · · · ♦ * · ····· «· · • 9 · · · ···· £ • 8 8 8 · fi ♦ · »8 8 8 8 8 8 8 Λ 8 8 8 89 8 8

Jak je zde používáno, pojem „topicky bude zahrnovat nesystémové podání. To zahrnuje aplikaci sloučeniny externě na epidermis nebo do ústní dutiny a/nebo instilaci takové sloučeniny do ucha, oka a nosu.

Jak je zde používáno, pojem „systémové podání odkazuje na orální, intravenózní, intraperitoneální a intramuskulární podání, subkutanánní, intranasální, intrarektální nebo intravaginální.

Odborník v oboru zjistí, že optimální množství a rozmezí individuálních dávek inhibitoru CSBP/p38 se stanoví podle povahy a rozsahu léčeného stavu, formy, cesty a místa podání a jednotlivého léčeného pacienta a že taková optima mohou být stanovena obvyklými postupy. Odborník v oboru rovněž zjistí, že optimální průběh léčby, tj. počet dávek inhibitoru CSBP/p38 podaných za den po definovaný počet dní může odborník v oboru určit za použití obvyklých testů stanovení průběhu léčby.

Způsoby

Buněčné linie, rhinovirus sérotypu 39 a virus chřipky A/PR/8/34 se zakoupí u American Type Culture Collection (ATCC). Buňky BEAS-2B se kultivují podle instrukcí poskytnutých ATCC za použití BEGM (bronchial epithelial growth media - růstové médium pro bronchiální epitel) zakoupeného u Clonetics Corp. Buněčné kultury HELA použité k detekci a titraci viru se udržují v Eagleově minimálním esenciálním médiu obsahujícím 10 % fetálního telecího séra, 2 mM 1-glutaminu a 10 mM pufru HEPES (MEM).

9· ·4· 4 · · · · · · * · · · · · · · · Φ · · • · · ť 4 4·· ·<·· 4 · 4 ··· ·♦ ·«··

V těchto studiích se použije modifikace způsobu, který popsal Subauste a kol., viz výše, k in vitro infikaci lidských bronchiálních epiteliálních buněk rhinovirem.

Buňky BEAS-2B (2 xl0⁵/jamka) se kultivují v jamkách potažených kolagenem 24 hodin před infikováním rhinovirem.

K buněčným kulturám se přidá rhinovirus sérotypu 39 k jednohodinové inkubaci při teplotě 34 °C, po níž se inokulum nahradí čerstvým médiem a kultury se inkubují dalších 72 hodin při teplotě 34 °C. Supernatanty zachycené 72 hodin po infekci se stanovují na koncentraci cytokinového proteinu pomocí ELISA za použití komerčně dostupných kitů (R&D Systems). Výtěžek viru se také stanoví ze supernatantu kultury za použití mikrotitračního stanovení v kulturách buněk HELA (Subauste a kol., viz výše (1995)). V kulturách ošetřených inhibitory kinázy p38 se léčivo přidá 30 minut před infekcí. Zásobní roztoky sloučenin se připraví v DMSO (10 mM léčiva) a skladuji se při teplotě -20 °C.

K detekci kinázy p38 se kultury inkubují v bazálním médiu bez růstových faktorů a přísad ke snížení endogenních hladin aktivované kinázy p38. Buňky se zachytí v různých časových bodech po přidání rhinoviru. Detekce kinázy p38 fosforylované na tyrosinu imunoblotem se analyzuje komerčně dostupným křtem a provede se podle pokynů výrobce (PhosfoPlus p38 MAPK Antibody Kit: New England BioLabs lne.).

V některých experimentech se buňky BEAS-2B infikují virem chřipky (kmen A/PR/8/34) mí-sttr rhinovirem. Supernatant kultury se zachytí 48 a 72 hodin po infekci a testuje se pomocí ELISA na cytokin, jak je popsáno výše.

• · ···· · · ·· • 0 0 0 · 0 0 « · · • · 0 0 0 0 0 0 0 *

0 0 ·» «00? 0 • 0 «· 0 0 0 · « 0 · 9 0 « «0« 0 0 0 0 0 0

Buňky a virus

Virus chřipky A/PR/8/34 podtyp HlNl (VR-95 American Type Culture Collection, Rockville, MD) se pěstuje v allantoidní dutině 10 dní starých slepicích vajec. Po inkubaci při teplotě 37 °C a chlazení po dobu 2,5 hodin při teplotě 4 °C se allantoidní kapalina zachytí, shromáždí a odstředí (1,000 ref; 15 min; 4 °C) k odstranění buněk. Supernatant se alikvotuje a skladuje při teplotě -70 °C. Titr viru v matečné kultuře je 1,0 x 10¹⁰ infekční dávky tkáňové kultury/ml (TCID₅₀) .

Inokulační postup

Samice myší kmene Balb/cAnNcrlBr staré 4 až 6 týdnů se získají od Charles River, Raleigh, NC. Zvířata se infikují intranasálně. Myši se anestetizují intraperitoneální injekcí ketaminu (40 mg/kg; Fort Dodge Labs, Fort Dodge, la) a xylazinu (5 mg/kg; Miles, Shawnee Mission, Ks) a poté se inokulují 100 TCID PR8 zředěného v PBS ve 20 μΐ. Zvířata se denně sledují na výskyt známek infekce. Všechny zvířata jsou schválena SmithKline Beecham Pharmaceuticals Institutional Animal Care and Use Committee.

Titrace viru

V různých časech po infekci se zvířata usmrtí a asepticky se vyjmou plíce. Tkáně se homogenizují ve skleničkách obsahujících skleněné kuličky o velikosti 1 mikrometr (Biospec Products, Bartlesville, OK) a 1 ml Eaglesova minimálního esenciálního média. Buněčná drť se vyčeří odstředěním při 1000 ref po dobu 15 minut při •· ···· ·* *· • · · < · · · · · · • · ····© » · * • · · O » 0 © · ···· · ·· ♦·· 0© ···« teplotě 4 °C a supernatanty se sériově zředí na buňkách psích ledvin Madin-Darby (Madin-Darby canine kidney (MDCK)) . Po 5 dnech inkubace při teplotě 37 °C (5% CO2) se přidá 50 μΐ 0,5% kuřecích červených krvinek na jamku a aglutinace se odečte po 1 hodině při teplotě místnosti.

Titr viru se vyjádří jako 50% infekční dávka pro tkáňovou kulturu (TCID50) vypočtená logistickou regresí.

ELISA

Hladiny cytokinů se změří kvantitativní ELISA za použití komerčně dostupných kitů. Ušní vzorky se homogenizují za použití tkáňového mlýnku v PBS. Buněčná drť se vyčeří odstřeďováním při frekvenci otáček 14 000 za minutu po dobu 5 minut. Koncentrace a prahy cytokinů se stanoví podle popisu výrobce, IL-6, IFN-γ a KC (R&D Systems, Minneapolis, MN).

Stanovení myeloperoxidázy

Aktivita myeloperoxidázy (MPO) se stanoví kineticky podle popisu v Bradley a kol. (1982). Stručně řečeno, králičí rohovky se homogenizují v hexadecyltrimethylammoniumbromidu (HTAB) (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo), který se rozpustí v 0,5M pufru fosforečnanu draselného (J.T. Baker Scientific, Phillipsburg, NJ). Po homogenizaci se vzorky podrobí 3 cyklům zmrazení-roztánísonikace (Cole-Parmer 8853, Cole-Parmer, Vernon Hills, II). Suspenze se poté vyčeří odstřeďováním při 12 500 x g po dobu 15 minut při teplotě 4 °C. Enzymatická aktivita MPO se stanoví kolorimetrickou změnou absorbance během reakce dihydrochloridu O-dianisidinu (ODI) 0,175 mg/ml (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo) s 0,0002% peroxidem vodíku • · · ♦ (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo). Měření se provádějí za použití přístroje Beckman Du 640 Spectrofotometer (Fullerton, Ca) vybaveného zařízením pro řízení teploty. 50 μΐ materiálu určeného ke stanovení se přidá k 950 μΐ ODI a měří se změna absorbance při vlnové délce 460 nm po dobu 2 minut při teplotě 25 °C.

Celotělová plethysomografie

Myši infikované virem chřipky se umístí do boxu celotělového plethysmografu v vnitřním objemem přibližně 350 ml. Do boxu se aplikuje řízený průtok vzduchu 1 litr/min a na systému k získávání dat a k respirační analýze Buxco XA se měří a zaznamenávají změny průtoku (Buxco Electronics, Sharon, CT). Zvířata se nechají aklimatizovat na plethysmografový box po dobu 2 minut než se zaznamenají data průtoku vzduchu. Měření dýchacích cest se vypočítají jako Penh (prodloužená pauza). Penh byl ukázán jako index obstrukce dýchacích cest a koreluje se zvýšeným intrapleurálním tlakem. Algoritmus pro výpočet Penh je následující: Penh = [(exspirační čas/relaxační čas)-l) x (vrcholový exspirační průtok/vrcholový inspirační průtok), kde relaxační čas je čas potřebný k vydechnutí 70 % vdechnutého objemu.

Stanovení arteriálního nasycení kyslíkem

Ke stanovení denního arteriálního nasycení kyslíkem %SpC»2 se použije Noninův veterinární ruční pulsní oximetr 8500V s jazykovým senzorem (Nonin Medical, lne., Plymouth MN) podle popisu (Sidwell a kol., Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 36, 473 až 476 (1992)).

• ft ♦ · ft · · · « · » ft · ft • * • ft · ♦ · · ♦ •ft »

Výsledky

Inhibice tvorby cytokinu specifickými inhibitory kinázy p38 MAP

V souladu s publikovanými zprávami se IL-6, IL-8, a GM-CSF detekují 72 hodin po infekci buněk BEAS-2B rhinovirem-39 (multiplicita infekce; MOI 1,0) (obr. 1). Tvorba IL-6, IL-8 a GM-CSF není zprostředkována přes IL-1 nebo TNF vytvářené v odpověď na infekci rhinovirem, protože přidání neutralizačních protilátek proti IL-1 a TNF k infikovaným kulturám nesníží množství vytvořeného IL-6, IL-8 nebo GM-CSF (není ukázáno). Produktivní infekce buněk se potvrdí titrací infekčních supernatantů z buněk BEAS-2B na monovrstvách HELA. Během 72-hodinové kultivační periody se pozoruje nízká, ale konzistentní replikace viru, která vede ke zvýšení TCID50 1,22 ±0,3 logio oproti počátečnímu inokulu (n = 6 experimentů). Ke zjištění role transdukce signálu prostřednictvím kinázy p38 u tvorby cytokinu navozené rhinovirem u epiteliálních buněk se testují specifické inhibitory kinázy p38 SB203580, sloučenina II, sloučenina III a inaktivní analog, SKF106978, na jejich schopnost inhibovat tvorbu cytokinu u buněčných kultur BEAS-2B infikovaných rhinovirem. Sloučenina (4-fluorfenyl)-2-(4-methylsulfinylfenyl)-5-(4-pyridyl)imidazol je alternativně označována jako SB 203580 a lze ji nalézt v US patentu č. 5 656 644. Sloučenina trans-1-(4-hydroxycyklohexyl)-4-(4-fluorfenyl)-5-[(2-methoxy)pyrimidin-4-yl]imidazol, rovněž známá jako sloučenina II, může být nalezena ve WO 97/25048. Sloučenina 4-(4-fluorfenyl-5-[ (2-fenylamino)pyrimidin-4-yl]-1-(piperdin-4-yl)imidazol, rovněž známá jako sloučenina III, může být nalezena v US patentu č. 5 658 903. Sloučenina 2-(4-methylsulfinyL)-3-[429

Μ 0·· · 0* 0· « 0 0 · 0 · * t

0 0 0 · 0 · · * >

• · » · · 0 0·· 0 •00 ·> · 0 0 · * · · ♦ ·0·0

-(2-methylpyridyl]-6,7-dihydro[5H]pyrrolo[1,2-α]imidazol, je také známa jako SB 106978. Koncentrace IL-8, IL-6 a GM-CSF v supernatantech kultur infikovaných buněk ošetřených inhibitory jsou všechny nižší, než koncentrace v neošetřených infikovaných kulturách (obr. 2). IL-6 je nejcitlivějším na inhibici s významnou inhibici (40 %) pozorovanou u SB 203580 při koncentracích tak nízkých, jako je 30 nM . GM-CSF je nejméně citlivý vůči inhibici SB 203580, s hodnotou IC₅o přibližně 4 μΜ.

Další inhibitor kinázy p38, sloučenina II, je mírně mocnější při inhibici GM-CSF s hodnotou IC50 přibližně 1 μΜ. Sloučenina II je srovnatelná s SB 203580 při inhibici tvorby IL-6 a IL-8. Jak se na základě relativní potence těchto sloučenin při specifické vazbě na kinázu p38 (data jsou ukázána v legendě) očekává, inhibice cytokinu je nejvyšší u sloučeniny III s hodnotou IC₅₀ <10 nM pro IL-6, zatímco SKF106978 je při všech testovaných koncentracích inaktivní. Maximální dosažený účinek u jakéhokoli inhibitoru kinázy p38 vůči všem 3 cytokinům je 50% až 70% inhibice. Inhibice tvorby cytokinu protizánětlivými léčivy potlačujícími cytokin (CSADs) není v důsledku obecné buněčné toxicity taková, jak se stanoví pomocí standardních stanovení XTT (CC50 >40 μΜ pro všechny testované sloučeniny) (Roehm a kol., J. of Immunol.

Methods, 142, 257 až 265 (1991)).

Tyto sloučeniny také nevykazují přímou antivirovou aktivitu jak se stanoví za použití standardního antivirového stanovení na buňkách HELA (MIC₅₀ >10 μΜ pro všechny testované sloučeniny) (Andries a kol., Journal of Virology, 64(3), 1117 až 1123 (1990)) nebo přímým měřením

0 0 0 0 0 0

0 0 0 0 0 0 0 · *

0 »00 0 0 0 · 0 0 0 00 «00« •000 · ·* *·· ·» 00·0 výtěžku viru v kulturách BEAS-2B infikovaných RV (není ukázáno).

Aktivace kinázy p38 rhinovirovou infekcí

Přítomnost kinázy p38 fosforylované na tyrosinu se měří na imunoblotu v různých časech po přidání viru do kultur BEAS-2B. Rhinovirová infekce buněk BEAS-2B vede ke zvýšení fosforylované kinázy p38, které je závislé jak na dávce, tak na čase. Zvýšení fosforylované kinázy p38 je zřejmé 15 minut po expozici rhinoviru-39 (MOI 10), a zjevně vrcholí 30 minut po přidání viru a zůstává zvýšeno 60 minut po infekci (obr. 3). Kromě toho je rhinovirem indukovaná fosforylace tyrosinu kinázy p38 závislá na dávce (obr. 4). Když se buňky kultivují za nepřítomnosti viru, není zde žádné zvýšení fosforylace tyrosinu kinázy p38 v žádném testovaném časovém bodě. Celkové hladiny proteinu kinázy p38 jsou srovnatelné mezi všemi skupinami, což naznačuje, že virová infekce zapříčinila fosforylací kinázy p38 bez syntézy proteinu de novo (obr. 3 a 4).

Účinky na infekci virem chřipky in vitro

Expozice buněk BEAS-2B viru chřipky (A/PR/8/34; MOI 1,0) také vede k tvorbě IL-8 a IL-β, jak se změří 48 až 72 hodin po infekci, ačkoliv hladiny secernovaného proteinu jsou nižší než hladiny získané u rhinovirové infekce.

V souladu s pozorováními na buňkách infikovaných rhinovirem, ošetření buněk BEAS-2B infikovaných virem chřipky inhibitory kinázy p38, sloučeninou IV, l-(4-piperidinyl)-4-(4-fluorfenyl)-5-[(2-methylfenyl)amino)pyrimidin-4-yl)imidazol a sloučeninou II, 1-trans-(4-hydroxycyklohexyl)-4-(4-fluorfenyl)5-[(2-methoxy)pyrimidin-4-yl]imidazol, je také při inhibici tvorby IL-6 a IL-8 účinné.

· 4444

4 4 4 4

Účinky na infekci virem chřipky in vivo

Pět (5) nezávislých a opakovatelných studií ukázalo účinnost terapeutického dávkování sloučeniny V,

1-(4-piperidinyl)-4-(4-fluorfenyl)-5-(2-methoxy-4-pyrimidinyl)imidazolu, a sloučeniny VI, 1-(1,3-dihydroxyprop-2-yl)-4-(4-fluorfenyl)-5-[2-fenoxypyrimidin-4-yl]imidazolu, při zlepšování klinické choroby při myším chřipkovém modelu pneumonie. Myším kmene BALB/c se orálně b.i.d. podává ve dnech 3 až 8 po chřipce A/PR8 a monitorují se denně na ztrátu hmotnosti, plicní funkce a hladiny kyslíku v arteriální krvi %SpC>2. Antivirotikum Tamiflu se použije jako kontrola a vykazuje 47% zlepšení plicních funkcí (p <0,01 dny 5 až 12), 64% zlepšení %SpO₂ (p <0,01 dny 5 až 18) a prevenci ztráty hmotnosti vzhledem k placebu. Optimální dávka sloučeniny VI je 10 mg/kg, což vede k 39% zlepšení plicních funkcí (p <0,01 dny 5 až 12), 30% zlepšení %SpO₂ (p <0,01 dny 5 až 13, p <0,05 dny 14 až 15) a podobnému účinku na ztrátu hmotnosti jako léčení prostředkem Tamiflu. Účinnost se pozoruje při dávkách tak nízkých jako je 15 mg/kg: 27% zlepšení plicních funkcí (p <0,01 dny 6 až 9), 11,6% (p <0,01 dny 7 až 13). Při dávce 0,1 mg/kg pozorovali původci 19% zlepšení plicních funkcí (p <0,05 den 7 a 8), ale žádný účinek na %SpO₂ nebo ztrátu hmotnosti. Při dávce 10 mg/kg, sloučenina VI je stejně účinná jako sloučenina V při dávce 30 mg/kg. Vzorky se odebírají k vyhodnocení titru viru a cytokinů v plicních homogenátech. Pozoruje se nevýznamný trend k inhibici plicních cytokinů IL-6, KC, IFN-gamma a RANTES. Není zde žádný negativní účinek na titry plicních virů.

Φ »

Nepřítomnost negativního účinku na imunitu po sekundární infekci virem chřipky • · · · · ♦ * · · · • · · · φ t • Λ · « · · · • · » 9 · 9 * * 9 9 9 * • 9 * * 9 9 9 99 9 9

Ve dvou studiích byly myši ošetřené sloučeninou VI nebo sloučeninou V během akutní infekce chřipkou PR/8 (H1N1) chráněny před smrtícími účinky stejného viru, jak je ukázáno 100% přežitím a normálními plicními funkcemi. Všechna kontrolní primárně infikované zvířata uhynula 7. dne. Protizánětlivá léčiva potlačující cytokin tedy nemají žádný účinek na imunitu po homologním podnětu.

Všechny publikace včetně patentů a patentových přihlášek, výčet tím není omezen, citované v tomto popisu jsou zde zahrnuty formou odkazu jako kdyby každá jednotlivá publikace zde byla specificky a jednotlivě určena k zahrnutí formou odkazu jako kdyby zde byla uvedena ve své celistvosti.

Výše uvedený popis vynález zcela popisuje včetně jeho výhodných ztělesnění. Modifikace a zlepšení ztělesnění zde specificky popsaných spadají do rozsahu následujících patentových nároků. Bez dalšího zpracování se má za to, že odborník v oboru může za použití předcházejícího popisu využít předložený vynález v plném rozsahu. Příklady zde uvedené je tudíž nutno vykládat jako pouze ilustrativní nikoli jako omezení rozsahu předloženého vynálezu jakýmkoli způsobem. Ztělesnění tohoto vynálezu, k němuž se nárokuje výlučné vlastnictví nebo výsadní právo, jsou definovány následovně.

• · ♦

• ···· 9 · · 0 • 0 00 0 0 0 0

9 0

9 0

9 9

9000

Claims (25)

1. Použití inhibitoru CSBP/p38 pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest zapříčiněné lidským rhinovirem (HRV), dalšími enteroviry, koronavirem, virem chřipky, virem parainfluenzy, virem syncycia dýchacích cest nebo adenovirem.

2. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 1, pro výrobu léčiva pro léčení virové infekce dýchacích cest, která exacerbuje asthma.

3. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 1, pro výrobu léčiva pro léčení virové infekce dýchacích cest, která exacerbuje chronickou bronchitidu.

4. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 1, pro výrobu léčiva pro léčení virové infekce dýchacích cest, která exacerbuje chronickou obstrukční plicní chorobu.

5. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 1, pro výrobu léčiva pro léčení virové infekce dýchacích cest, která exacerbuje otitis media.

6. Použití léčiva pro exacerbuje inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 1, pro výrobu léčení virové infekce dýchacích cest, která sinusitidu.

7. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 1, pro výrobu léčiva pro léčení virové infekce dýchacích cest, která je spjata se sekundární bakteriální infekcí, jako je otitis media, sinusitida nebo pneumonie.

1191 1 1

1 1 1 1 ·· 99 • · · # • · · · « · · · • 11 1

111

8. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle kteréhokoli z nároků 1 až 7, s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest.

9. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 8, s druhým terapeutickým činidlem pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest, kde druhým terapeutickým činidlem je antivirové činidlo zvolené z ribavirinu, amantadinu, rimantidinu, prostředku Pleconaril, AG 7088 nebo BTA-188, anti-histaminika, dekongestantu, steroidu, antibiotika, protizánětlivého činidla zvoleného z nesteroidního protizánětlivého léčiva, inhibitoru COX-1 nebo COX-2, kyseliny acetylosalicylové nebo indomethacinu, inhibitoru chřipkové neuraminidázy zvoleného ze zamanivaru (Relenza), oseltamiviru (Tamiflu) nebo RWJ-270201.

10. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle kteréhokoli z nároků 1 až 7, s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest, kde druhé terapeutické činidlo je aplikovatelné orálně, topicky (intranasálně) nebo inhalačně (aerosolem) nebo jak topicky, tak inhalačně.

11. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 10, s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest, kde inhibitor CSBP/p38 je podáván s druhým terapeutickým činidlem.

12. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 11, s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest, kde inhibitor CSBP/p38 je podáván jinou cestou než druhé terapeutické činidlo.

• ·* ·· ·· 94 ♦ · · · · · ♦ · · • to ···· · · · ···· ·· ·· ··· · · • · · ··· ·· • ·· ·· ····«·

13. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 12, s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest, kde druhé terapeutické činidlo je antivirové činidlo zvolené z ribavirinu, amantadinu, rimantidinu, prostředku Pleconaril, AG 7088 nebo BTA-188, anti-histaminika, dekongestantu, steroidu, antibiotika, protizánětlivého činidla zvoleného z nesteroidního protizánětlivého léčiva, inhibitoru COX-1 nebo COX-2, kyseliny acetylosalicylové nebo indomethacinu, inhibitoru chřipkové neuraminidázy zvoleného ze zamanivaru (Relenza), oseltamiviru (Tamiflu) nebo RWJ-270201.

14. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 1, pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest zapříčiněné lidským rhinovirem (HRV), dalšími enteroviry, koronavirem, virem chřipky, virem parainfluenzy, virem syncycia dýchacích cest nebo adenovirem, kde inhibitor CSBP/p38 je zvolen ze sloučeniny popsané v US patentech čísel 5 716 972, 5 686 455, 5 656 644, 5 593 992, 5 593 991,

5 663 334, 5 670 527, 5 559 137, 5 658 903, 5 739 143,

5 756 499 a E 5 716 955; publikacích ¹ WIPO WO 98/25619 97/25048, WO 99/01452, WO 97/25047, WO 99/01131, WO 99/01130, WO 97/33883, WO 97/35856, WO 97/35855, WO 98/06715, WO 98/07425, WO 98/28292, WO 98/56377, WO 98/07966, WO 99/01136, WO 99/17776, WO 99/01131, WO 99/01130, WO 99/32121, WO 00/26209, WO 99/58502, WO 99/58523, WO 99/57101, WO 99/61426, WO 99/59960, WO 99/59959, WO 00/18738, WO 00/17175, WO 99/17204, WO 00/20402, WO 99/64400, WO 00/01688, WO 00/07980, WO 00/07991, WO 00/06563, WO 00/12074, WO 00/12497, WO 00/31072, WO 00/31063, WO 00/23072, WO 00/31065, WO 00/35911, WO 00/39116, WO 00/43384, WO 00/41698, WO

97/36587, WO 97/47618, WO 97/16442, WO 97/16441, WO

97/12876, WO 98/7966, WO 98/56377, WO 98/22109, WO 98/24782, • »· tt* tt* ·* • ···· ·*·· • tttttt ·· · « ··· · tt *-···· tt tt * • ·· »· ·· tttttttt

WO 98/24780, WO 98/22457, WO 98/52558, WO 98/52941, WO 98/52937, WO 98/52940, WO 98/56788, WO 98/27098, WO 99/00357, WO 98/47892, WO 98/47899, WO 99/03837, WO 99/01441, WO 99/01449, WO 99/03484, WO 95/09853, WO 99/15164, WO 98/50356, WO 95/09851, WO 95/09847, WO 95/09852, WO 92/12154, WO 94/19350, DE 19842833 nebo JP

2000 86657.

15. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 1 nebo 14, pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest zapříčiněné lidským rhinovirem (HRV), dalšími enteroviry, koronavirem, virem chřipky, virem parainfluenzy, virem syncycia dýchacích cest nebo adenovirem, kde sloučeninou je l-(l,3-dihydroxyprop-2-yl)-4-(4-fluorfenyl)-5-(2-fenoxypyrimidin-4-yl)imidazol nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

16. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 1 nebo 14, pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest zapříčiněné lidským rhinovirem (HRV), dalšími enteroviry, koronavirem, virem chřipky, virem parainfluenzy, virem syncycia dýchacích cest nebo adenovirem, kde sloučeninou je trans-1-(4-hydroxy-cyklohexyl)-4-(4-fluorfenyl )-5-[(2-methoxy)pyrimidin-4-yl]imidazol; 1-(4-piperidinyl)-4-(4-fluorfenyl)-5-(2-methoxy-4-pyrimidinyl)imidazol nebo (4-fluorfenyl)-2-(4-methylsulfinylfenyl)-5-(4-pyridyl)imidazol.

17. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 1 nebo 14, pro výrobu léčiva pro léčení rýmy nebo virové infekce dýchacích cest zapříčiněné lidským rhinovirem (HRV), dalšími *0 9· • 9 · 9 • 9 9« • β · 9 • · 9 9 * 99 • 9 9 9

9*9 • 9 9

9 9 9

9« 9999 enteroviry, koronavirem, virem chřipky, virem parainfluenzy, virem syncycia dýchacích cest nebo adenovirem, kde

Sloučeninou je VX-745, RWJ 67657, RWJ-68354, ZM-336372,

SU-4984 nebo RPR-200765A.

18. Použití inhibitoru CSBP/p38 pro výrobu léčiva pro léčení pneumonie indukované chřipkou.

19. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 18, s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčení pneumonie indukované chřipkou.

20. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 19, s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčení pneumonie indukované chřipkou, kde druhým terapeutickým činidlem je antivirové činidlo zvolené z ribavirinu, amantadinu, rimantidinu, prostředku Pleconaril, AG 7088 nebo BTA-188, anti-histaminika, dekongestantu, steroidu, antibiotika, protizánětlivého činidla zvoleného z nesteroidního protizánětlivého léčiva, inhibitoru COX-1 nebo COX-2, kyseliny acetylosalicylové nebo indomethacinu, inhibitoru chřipkové neuraminidázy zvoleného ze zamanivaru (Relenza), oseltamiviru (Tamiflu) nebo RWJ-270201.

21. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 18, s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčeni pneumonie indukované chřipkou, kde druhé terapeutické činidlo je aplikovatelné orálně, topicky (intranasálně) nebo inhalačně (aerosolem) nebo jak topicky, tak inhalačně.

22. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 21, s druhým terapeutickým činidlem, pro výrobu léčiva pro léčení pneumonie indukované chřipkou, kde inhibitor CSBP/p38 je © « «Μ ©.-0 ** ·» * · · · « 9 9 9· a · · · * »· · · -5 • ···· > · » · * « v < a • · * · · W 9 · · **· * ·» ··' *· 9*9· podáván jinou cestou než druhé terapeutické činidlo.

23. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle kteréhokoli z nároků 18 až 22, pro výrobu léčiva pro léčení pneumonie indukované chřipkou, kde inhibitor CSBP/p38 je zvolen ze sloučeniny popsané v US patentech čísel 5 716 972, 5 686 455, 5 656 644, 5 593 992, 5 593 991, 5 663 334, 5 670 527, 5 559 137,

5 658 903, 5 739 143, 5 756 499 a 5 716 955; publikacích WIPO

WO 98/25619, WO 97/25048, WO 99/01452, WO 97/25047, 99/01131, WO 99/01130, WO 97/33883, WO 97/35856, WO 97/35855, WO 98/06715, WO 98/07425, WO 98/28292, WO 98/56377, WO 98/07966, WO 99/01136, WO 99/17776, WO 99/01131, WO 99/01130, WO 99/32121, WO 00/26209, WO 99/58502, WO 99/58523, WO 99/57101, WO 99/61426, WO 99/59960, WO 99/59959, WO 00/18738, WO 00/17175, WO 99/17204, WO 00/20402, WO 99/64400, WO 00/01688, WO 00/07980, WO 00/07991, WO 00/06563, WO 00/12074, WO 00/12497, WO 00/31072, WO 00/31063, WO 00/23072, WO 00/31065, WO 00/35911, WO 00/39116, WO 00/43384, WO 00/41698, WO 97/36587, WO 97/47618, WO 97/16442, WO

97/16441, WO 97/12876, WO 98/7966, WO 98/56377, WO 98/22109, WO 98/24782, WO 98/24780, WO 98/22457, WO 98/52558, WO

98/52941, WO 98/52937, WO 98/52940, WO 98/56788, WO 98/27098, WO 99/00357, WO 98/47892, WO 98/47899, WO 99/03837, WO 99/01441, WO 99/01449, WO 99/03484, WO 95/09853, WO 99/15164, WO 98/50356, WO 95/09851, WO 95/09847, WO 95/09852, WO 92/12154, WO 94/19350, DE 19842833

nebo JP 2000 86657.

24. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 18, pro výrobu léčiva pro léčení pneumonie indukované chřipkou, kde sloučeninou je l-(l,3-dihydroxyprop-2-yl)-4-(4-fluorfenyl)~5-[2-fenoxypyrimidin-4-yl]imidazol nebo jeho farmaceuticky • · • 4 4· • · 4 4 přijatelná sůl.

25. Použití inhibitoru CSBP/p38 podle nároku 18, pro výrobu léčiva pro léčení pneumonie indukované chřipkou, kde sloučeninou je trans-1-(4-hydroxycyklohexyl)-4-(4-fluorfenyl) -5- [ (2-methoxy)pyrimidin-4-yl]imidazol; l-(4-piperidinyl)-4-(4-fluorfenyl)-5-(2-methoxy-4-pyrimidinyl)imidazol nebo (4-fluorfenyl)-2-(4-methylsulfinylfenyl)-5-(4-pyridyl)imidazol.