CN102573886A

CN102573886A - 用抗病毒剂治疗哮喘的方法

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Publication number: CN102573886A
Application number: CN201080041606XA
Authority: CN
Inventors: R·H·罗伯斯
Original assignee: Mutual Pharmaceutical Co Inc
Current assignee: Mutual Pharmaceutical Co Inc
Priority date: 2009-09-17
Filing date: 2010-09-17
Publication date: 2012-07-11
Also published as: EP2477642A4; US20110229437A1; EP2477642A1; WO2011035128A1

Abstract

本发明提供了一种通过向患者施用治疗有效量的抗病毒剂而治疗哮喘的方法。该抗病毒剂可以是神经氨酸酶抑制剂、病毒融合抑制剂、蛋白酶抑制剂、DNA聚合酶抑制剂、信号转导抑制剂、核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)或干扰素。该抗病毒剂可通过以下途径施用于患者：吸入、经鼻、静脉内、口服、皮下、肌肉内或经皮。例如，该抗病毒剂可以配制为用于作为气雾剂递送至患者。

Description

用抗病毒剂治疗哮喘的方法

相关申请的交叉引用

本申请根据35U.S.C.§119(e)要求于2009年9月17日提交的美国临时申请61/243,449的优先权。

发明领域

本发明涉及一种包含抗病毒剂的药物组合物和使用该药物组合物治疗哮喘的方法。

发明背景

哮喘是一种慢性肺病，其主要特征是支气管收缩、气道炎症和产生过多粘液，所有这些特征都会导致气道阻塞。哮喘症状包括呼吸急促(呼吸困难)、喘鸣、胸闷和咳嗽，这些症状可威胁生命或甚至致死(The MerckManual，556-568(第17版，1999))。哮喘患者的气道对多种刺激物的敏感性也会提高，比如变应原、化学刺激物、大气污染物、呼吸道感染、冷空气和体育运动。因此，哮喘更进一步的特征为高反应性支气管平滑肌的收缩导致的额外气道狭窄的急性发作。

哮喘的根本原因还不甚了解。在大多数患者中，哮喘发作由两个阶段组成。在速发期，由于支气管平滑肌的痉挛而导致发生支气管收缩。速发期涉及的细胞包括释放组胺的肥大细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和血小板。免疫系统细胞分泌的其他因子包括白三烯、前列腺素和血小板激活因子，这些因子可能与哮喘的病理学相关。迟发期由被激活的、释放细胞因子的T细胞和嗜酸性粒细胞所释放的炎性介质诱导，并且表现出血管舒张、水肿、粘液分泌和支气管痉挛。

目前还没有治愈哮喘的方法。为抑制哮喘症状及预防发作，在药理学上通过两种类型的治疗来控制哮喘：通过使用抗炎剂和长效支气管扩张剂的长期控制，和通过使用短效支气管扩张剂对急性加重的短期控制。支气管扩张剂通过松弛支气管平滑肌逆转支气管收缩。支气管扩张剂包括β₂肾上腺素受体激动剂、黄嘌呤(例如茶碱)和毒蕈碱受体拮抗剂(例如异丙托溴铵)。短效β₂-激动剂，例如沙丁胺醇和特布他林，对即时的症状缓解起重要作用，而长效β₂-激动剂，如沙美特罗和福莫特罗，在哮喘的长期控制和重度哮喘的治疗中有效。

在哮喘的两个阶段中，抗炎剂都能减轻或预防炎症，这些抗炎剂包括皮质类固醇类(例如倍氯米松和布地奈德)、白三烯拮抗剂类和组胺H1受体拮抗剂。

可用于治疗哮喘的大多数药物只对数量有限的患者有效。此外，最常开具的抗炎剂-皮质类固醇类-可能具有相当大的副作用，包括口咽念珠菌病、发声困难、骨质疏松症、情感障碍、食欲增强和糖尿病患者血糖失控(美国专利7,553,487)。β₂-激动剂已与肺功能退化和死亡风险升高相关联。另外，β₂-激动剂的使用通常伴随心血管效应，比如脉搏率、血压和心电图结果的改变。在极少的情况下，使用β₂-激动剂可以产生超敏反应，如荨麻疹、血管性水肿、皮疹和口咽部水肿。与根据需要进行治疗相比，使用支气管扩张剂异丙托溴铵或非诺特罗持续治疗哮喘患者导致肺功能更快的衰退，表明这些药物不适于维持治疗。β₂-肾上腺素能激动剂的最常见的即时不良反应是震颤。高剂量的β₂-肾上腺素能激动剂可导致血钾降低、节律障碍和动脉氧张力降低(美国专利7,405,207)。

仍然需要开发一种在减少不良副作用的同时能有效治疗哮喘的药物组合物。

我们意外地发现，抗病毒剂能够在不与抗炎剂或支气管扩张剂共同施用的情况下减轻哮喘症状。或者，当与抗炎剂或支气管扩张剂联合施用时，抗病毒剂可允许降低共施用抗炎剂或支气管扩张剂的所需剂量。

发明概述

本发明的目的是提供一种治疗患者的哮喘的方法，包括向患者施用治疗有效量的抗病毒剂。所述抗病毒剂可通过以下途径施用于患者：吸入、经鼻、静脉内、口服、皮下、肌肉内或经皮。例如，该抗病毒剂可以配制为作为气雾剂递送至患者。

所述抗病毒剂的施用减轻哮喘症状。在施用所述抗病毒剂后约30分钟至约14天内、约两小时至约12天内、约1天至约11天内或约两天至约10天内，1秒钟用力呼气量(FEV₁)或最大呼气流速(PEFR)可以有至少约10％的提高、20％的提高或30％的提高。

所述抗病毒剂可以是神经氨酸酶抑制剂、病毒融合抑制剂、蛋白酶抑制剂、DNA聚合酶抑制剂、信号转导抑制剂、核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)或干扰素。

本发明进一步提供一种用于治疗患者的哮喘的药物组合物，其包含治疗有效量的抗病毒剂。所述药物组合物可被配制为用于作为气雾剂将所述抗病毒剂递送至患者。所述药物组合物可通过吸入、经鼻、静脉内、口服、皮下、肌肉内或经皮施用。

本发明还提供了一种制品，其包含用于治疗哮喘的抗病毒剂药物制剂和指示所述药物制剂应当吸入或吞咽或注射或以其他方式施用于哮喘患者的印刷材料。

发明详述

本发明提供了一种包含至少一种抗病毒剂的药物组合物和使用该药物组合物治疗哮喘的方法。

本发明提供了一种治疗患者的哮喘的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的抗病毒剂。本发明还提供了一种用于治疗患者的哮喘的药物组合物，其包含治疗有效量的抗病毒剂。所述抗病毒剂以治疗有效量施用于哮喘患者。实际施用的抗病毒剂的量可由医师或其他得到许可的医疗保健专业人员根据相关情况确定，相关情况包括待治疗的病症、施用途径、实际施用的药物及其相对活性、个体患者的年龄、体重和反应，以及患者症状的严重性。施用的抗病毒剂的适宜剂量可在约0.1μg/天至约2g/天、约1μg/天至约1g/天、约5μg/天至约500mg/天、约10μg/天至约300mg/天或约1mg/天至约200mg/天之间。

所述抗病毒剂可以周期性的剂量施用，比如每天多剂、每天一剂、每周多次或每周一次。所述抗病毒剂也可根据患者需要施用。治疗方案可能需要在一段持续时间内施用药物，例如数周或几个月；治疗方案可能需要施用药物多年，并且如为了缓解哮喘症状所需要的，可能需要1次或多次重复。所述抗病毒剂可通过吸入、经鼻、静脉内、口服、皮下、肌肉内或经皮施用于患者。

抗病毒剂在不与其他治疗剂如抗炎剂或支气管扩张剂联合施用的情况下能缓解哮喘症状。或者，该抗病毒剂可以与一种或多种治疗剂如抗炎剂和β₂-肾上腺素能受体激动剂联合施用。

所述抗病毒剂可以是抑制传染性病毒进入细胞或抑制传染性病毒在细胞内复制的任何药剂。病毒感染过程中有几个阶段可被抗病毒剂阻断或抑制。这些阶段包括病毒附着到宿主细胞(例如通过适当的免疫球蛋白或结合肽抑制)、病毒的脱壳(例如通过金刚烷胺抑制)、病毒mRNA的合成或翻译(例如通过干扰素抑制)、病毒RNA或DNA的复制(例如通过核苷类似物抑制)、新病毒蛋白的成熟(例如通过蛋白酶抑制剂抑制)和病毒的出芽和释放(例如通过神经氨酸酶抑制剂抑制)。

尽管抗病毒剂属于一大类化合物或药剂，本发明的范围不局限于受抗病毒剂影响的任何特定生理机制。例如，抗病毒剂可通过确定的抗病毒机制、免疫系统的介导、炎症机制或任何其他能使抗病毒剂缓解哮喘症状的适宜生理机制来缓解哮喘症状。

有用的抗病毒剂包括但不限于神经氨酸酶抑制剂、病毒融合抑制剂、蛋白酶抑制剂、DNA聚合酶抑制剂、信号转导抑制剂、逆转录酶抑制剂(例如核苷类逆转录酶抑制剂和非核苷逆转录酶抑制剂)、干扰素、核苷类似物、整合酶抑制剂、胸苷激酶抑制剂、病毒糖或糖蛋白合成抑制剂、病毒结构蛋白合成抑制剂、病毒附着和吸附抑制剂、病毒进入抑制剂(例如CCR5抑制剂/拮抗剂)及其功能类似物。Saxena等人，Future Virology，4(3)：209-215(2009)。

神经氨酸酶抑制剂可包括奥司他韦、扎那米韦和帕拉米韦(peramivir)。病毒融合抑制剂可包括环孢菌素、马拉维若(maraviroc)、恩夫韦肽(enfuviritide)和二十二醇。蛋白酶抑制剂可包括沙奎那韦、茚地那韦、安普那韦(amprenavir)、奈非那韦、利托那韦、替拉那韦(tipranavir)、阿扎那韦(atazanavir)、地瑞那韦(darunavir)、扎那米韦和奥司他韦。DNA聚合酶抑制剂可包括碘苷、阿糖腺苷、膦酰乙酸、三氟尿苷、阿昔洛韦、膦甲酸(foscarnet)、更昔洛韦、喷昔洛韦、西多福韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦和缬更昔洛韦。信号转导抑制剂包括白藜芦醇和利巴韦林。核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)可包括齐多夫定(ZDV，AZT)、拉米夫定(3TC)、司他夫定(d4T)、扎西他滨(ddC)、地达诺新(2′，3′-双脱氧肌苷，ddI)、阿巴卡韦(ABC)、乙米韦林(emirivine)(FTC)、泰诺福韦(TDF)、地拉韦啶(delaviradine)(DLV)、恩夫韦地(fuzeon)(T-20)、茚地那韦(IDV)、洛匹那韦(lopinavir)(LPV)、阿扎那韦、双汰芝(combivir)(ZDV/3TC)、克力芝(kaletra)(RTV/LPV)、阿德福韦二匹伏酯(adefovirdipivoxil)和三协唯(trizivir)(ZDV/3TC/ABC)。非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)可包括奈韦拉平、地拉韦啶、UC-781(均二苯硫脲(thiocarboxanilide))、吡啶酮、TIBO、胡桐素A(calanolide A)、卡拉韦林(capravirine)和依法韦仑。病毒进入抑制剂可包括恩夫韦地(T-20)、NB-2、NB-64、T-649、T-1249、SCH-C、SCH-D、PRO 140、TAK 779、TAK-220、RANTES类似物、AK602、UK-427,857、抗相关受体的单克隆抗体、蓝藻抗病毒蛋白(cyanovirin)-N、环糊精、角叉菜胶、硫酸化或磺化的聚合物、扁桃酸缩聚物、AMD-3100和它们的功能类似物。

抗病毒剂也包括在免疫球蛋白疗法中用于预防病毒感染的免疫球蛋白(抗体)。免疫球蛋白疗法通过结合细胞外病毒粒子并阻止其附着于和进入易受病毒感染的细胞而起作用。通常有两种类型的免疫球蛋白疗法：正常免疫球蛋白疗法和超免疫球蛋白疗法。正常免疫球蛋白疗法使用由正常供血者的混合血清制备的抗体。该混合产品包含针对众多人类病毒的低滴度抗体。超免疫球蛋白疗法使用由具有针对特定病毒的高滴度特异性抗体的个体的血清制备的抗体。超免疫球蛋白的例子包括带状疱疹免疫球蛋白、人狂犬病免疫球蛋白、乙型肝炎免疫球蛋白和RSV免疫球蛋白。

抗病毒剂也可包括但不限于以下种类：醋孟南(acemannan)、阿洛夫定、阿韦舒托、阿拉诺丁、阿立酮、甲磺酸阿替韦啶(atevirdine mesylate)、阿夫立定、卡波韦(carbovir)、西潘茶碱、克来夫定(clevadine)、佳息患(crixivan)、阿糖胞苷、地昔洛韦、双脱氧肌苷、双脱氧胞苷、二噁沙利、依度尿苷、恩夫韦肽、恩替卡韦、恩韦拉登、恩韦肟、泛昔洛韦、法莫汀、非西他滨、非阿尿苷、氟尿苷、磷利酯、膦乙酸、更昔洛韦、凯托沙(kethoxal)、左旋韦林(levovirin)、洛布卡韦、洛匹那韦(lopinovir)、美莫汀、甲吲噻腙、吗啉双胍、吡罗达韦、普来可那立(pleconaril)、鬼臼毒素、金刚烷乙胺、sequanavir、索金刚胺、索立夫定、司他霉素、维司托隆(statolon)、替洛隆、曲金刚胺、伐昔洛韦、韦拉米啶(viramidine)、韦罗肟、珍那佐酸(xenazoic acid)、扎西他滨、赛瑞特、净韦肟、吡啶、α-甲基-1-金刚烷甲胺、羟基-乙氧基甲基鸟嘌呤、金刚烷胺、5-碘-2′-脱氧尿苷、三氟胸苷、腺嘌呤阿拉伯糖苷、2′，3′-双脱氧核苷比如2′，3′-双脱氧胞苷、2′，3′-双脱氧腺苷、2′，3′-双脱氧肌苷、2′，3′-双脱氢胸苷、复方新诺明(co-trimoxazole)、9-[2-(R)-[[二[[(异丙氧基-羰基)氧基]-甲氧基]膦基]甲氧基]丙基]腺嘌呤、(R)-9-[2-(膦酰基甲氧基)丙基]腺嘌呤、泰诺福韦酯、TAT抑制剂如7-氯-5-(2-吡咯基)-3H-1，4-苯并二氮杂

-2(H)-酮，或包含一个或多个非甲基化CpG序列的核酸，基本上如例如美国专利6,194,388中所公开的。

病毒的呼吸道感染对所有年龄组人群的气道功能和哮喘都具有重大影响。在婴儿期，呼吸道病毒，如呼吸道合胞病毒(RSV)，引起喘鸣的发作，此种喘鸣可能是复发性的，但大多是短暂的。此外，早期病毒感染可能会影响免疫系统的发育并改变以后发生变态反应和哮喘的风险。对于已患哮喘的儿童和成人，感冒病毒如鼻病毒导致的呼吸道病毒感染通常会引发哮喘加重。Folkerts等人，Virus-induced AirwayHyperresponsiveness and Asthma，Am.J.Respir.Crit.Care Med.157：1708-1720(1998)，美国专利公开20080118516。此外，在哮喘加剧的儿童的呼吸道分泌物中经常检出传染物，比如鼻病毒、RSV、人偏肺病毒(hMPV)、流感病毒、腺病毒、副流感病毒和冠状病毒。Murray等人，Study of modifiable risk factors for asthma exacerbations：virus infectionand allergen exposure increase the risk of asthma hospital admissions inchildren.Thorax 61(5)：376(2006)。与健康受试者相比，哮喘患者的支气管上皮细胞的干扰素-β产生严重受损。Wark等人，Asthmatic bronchialepithelial cells have a deficient innate immune response to infection withrhinovirus.Journal of Experimental Medicine，201(6)：937-947(2005)。

抗病毒剂能够在不与其他治疗剂如抗炎药或支气管扩张剂共同施用的情况下减轻哮喘症状。或者，所述抗病毒剂可以与一种或多种诸如抗炎剂(例如皮质类固醇和非甾体抗炎药(NSAID)、β₂肾上腺素能受体激动剂、抗生素、抗胆碱能药和抗组胺药)的治疗剂联合施用。本发明的药物组合物可以既包含抗病毒剂，又包含共施用的治疗剂。所述抗病毒剂和共施用的治疗剂也可以被处于不同的药物组合物中。

此处使用的术语“治疗有效量”旨在包括有效治疗或预防哮喘或治疗宿主的哮喘症状的至少一种本发明抗病毒剂的量或含有所述抗病毒剂的药物组合的量。此处使用的术语“疗法”或“治疗”指缓解哮喘症状，阻止或减轻哮喘的持续进展。抗病毒剂治疗有效的一个指标是一秒钟用力呼气量(FEV₁)的提高。其他指标可包括FEV₁/用力肺活量(FVC)比和最大呼气流速(PEFR)的提高，以及气道阻力降低或气道高反应性降低。以下更全面地描述肺功能的量度。

抗病毒剂与其他治疗剂如抗炎剂或支气管扩张剂的共施用可允许施用较低剂量的抗炎剂或支气管扩张剂。例如，施用抗病毒剂使得能够在控制哮喘加重时使用较低剂量的短效β₂-激动剂，和/或在哮喘的长期治疗中使用较低剂量的长效β₂-激动剂或皮质类固醇。化合物的组合优选地是协同的组合。如果药物联合用药时的药物效果比药物作为单药单独施用的累加效果要大，则发生协同作用。一般来说，协同效应在化合物处于亚最佳浓度时最清楚地得到证明。与单个成分相比，协同作用可以表现在较低的细胞毒性、升高的活性或联用的一些其他有益效果方面。

为了将抗病毒剂直接递送至呼吸道，可用抗病毒剂制备用于通过吸入施用的药物制剂。可吸入剂的典型递送系统包括雾化吸入器、干粉吸入器(DPI)和定量吸入器(MDI)。

雾化装置产生高速空气流，其使液体形式的治疗剂以薄雾形式喷射，该薄雾进入到患者的呼吸道中。治疗剂被配制成液体形式，例如溶液或可吸入大小的微粒的悬浮液。在一个实施方案中，微粒是微粉化的。所述术语“微粉化”定义为含有约90％或更多的直径小于约10μm的微粒。适宜的雾化装置市面有售，例如由PARI GmbH(Starnberg，德国)销售的。其他雾化装置包括Respimat(Boehringer Ingelheim)和在例如美国专利7,568,480、6,123,068和WO 97/12687中公开的那些装置。本发明的抗病毒剂可以被配制成以水性溶液或液体悬浮液用于雾化装置中。

所述抗病毒剂可包封在脂质体或微胶囊中以经吸入递送。脂质体是由脂质双层膜和水性内部构成的囊泡。所述脂质膜可由磷脂制成，磷脂的例子包括磷脂酰胆碱如卵磷脂和溶血卵磷脂、酸性磷脂如磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油及神经鞘氨糖脂如磷脂酰乙醇胺和鞘磷脂。或者，可以加入胆固醇。微胶囊是由包覆材料包覆的颗粒。例如，包覆材料可由成膜聚合物、疏水性增塑剂、表面活化剂或/和含氮润滑聚合物的混合物组成。美国专利6,313,176和7,563,768。

DPI装置通常将治疗剂以自由流动的粉末形式施用，所述粉末可以在吸气过程中被散布在患者的气流中。使用外部能量源的DPI装置也可以用在本发明中。为了获得自由流动的粉末，治疗剂可与合适的赋形剂(例如乳糖)一起配制。例如，干粉制剂可例如通过将具有约1μm至100μm之间的微粒大小的干乳糖与抗病毒剂的微粉化微粒组合并干混合而制成。或者，抗病毒剂可不加赋形剂而配制。制剂被装载入干粉分配器中或者吸入盒或胶囊中以用干粉递送装置使用。市售的DPI装置的例子包括Diskhaler(GlaxoSmithKline，Research Triangle Park，N.C.)(参见，例如，美国专利5,035,237)、Diskus(GlaxoSmithKline)(参见，例如，美国专利6,378,519)、Turbuhaler(AstraZeneca，Wilmington，Del.)(参见，例如，美国专利4,524,769)和Rotahaler(GlaxoSmithKline)(参见，例如，美国专利4,353,365)。适宜的DPI装置的更多例子在美国专利5,415,162、5,239,993、5,715,810和其中的参考文献中有描述。

MDI装置通常利用压缩的抛射气体释放定量的治疗剂。用于MDI施用的制剂包括活性成分在液化的抛射剂中的溶液或悬浮液。抛射剂的例子包括氢氟烷化合物(HFA)，如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134a)和1，1，1，2，3，3，3-七氟正丙烷(HFA 227)，和氯氟烃，如CCl₃F。用于MDI施用的HFA制剂的附加成分包括共溶剂如乙醇、戊烷和水，和表面活性剂如三油酸山梨坦、油酸、卵磷脂和甘油(参见，例如美国专利5,225,183、EP 0717987和WO 92/22286)。该制剂被装入构成MDI装置的一部分的气溶胶罐。专为与HFA抛射剂一起使用而开发的MDI装置的例子在美国专利6,006,745和6,143,227中提供。关于制备可吸入微粒的过程以及适于吸入给药的制剂和装置的例子参见美国专利6,268,533、5,983,956、5,874,063和6,221,398，以及WO 99/53901、WO 00/61108、WO 99/55319和WO 00/30614。

在适合气雾剂施用的情况中，抗病毒剂可使用标准程序配制以作为气雾剂递送。此处使用的术语“气雾剂”指微细固体颗粒或液体溶液小滴在气体中的悬浮体，它能够被吸入呼吸道中。具体地，气雾剂包括本发明抗病毒剂的小滴的气体承载悬浮体，正如可以在MDI或雾化器中或在弥雾机中产生的那样。气雾剂也包括本发明的抗病毒剂悬浮于空气或其他载气中的干粉组合物，其可通过吸入装置递送。Ganderton & Jones，Drug Delivery to the Respiratory Tract，Ellis Horwood(1987)。Gonda(1990)Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 6：273-313。Raeburn等人，(1992)Pharmacol.Toxicol.Methods 27：143-159。

本发明的药物组合物可经本领域公知的任何方法施用，包括但不限于经口、经鼻、皮下、肌肉内、静脉内、经皮、经直肠、舌下、经粘膜、经眼、经脊椎、鞘内、关节内、动脉内、蛛网膜下、经支气管和经淋巴施用，以及用于全身递送活性成分的其他剂型。该组合物可局部递送。

为了制备这些药物剂型，需根据常规药物混合技术将一种或多种抗病毒剂与药物载体混合。根据需要施用的制剂形式，载体可以采用多种形式。

例如，当制备口服剂型的组合物时，可采用任何常见制药介质。因此，对于液体口服制剂，比如悬浮液、酏剂和溶液，适宜的载体和添加剂包括水、二醇类、油类、醇类、调味剂、防腐剂、着色剂等等。对于固体口服制剂，比如粉剂、胶囊和片剂，适宜的载体和添加剂包括淀粉、糖类、稀释剂、粒化剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等等。若需要，可采用标准技术将片剂包以糖衣或肠溶包衣。

对于肠胃外制剂，载体通常包括无菌水，虽然也可以包括其他成分，例如，助溶或用于防腐的成分。也可制备可注射溶液，在此情况可以使用合适的稳定剂。

在一些应用中，使用“载体化”形式的活性剂可能是有利的，例如通过将活性剂包封在脂质体或其他封装介质中，或者例如通过共价键合、螯合或结合配位将活性剂固定于合适的生物分子上，例如选自蛋白质、脂蛋白、糖蛋白和多糖的生物分子。

本发明使用适于口服给药的制剂的治疗方法可以作为离散单元的形式存在，如胶囊、扁囊剂、片剂(包括口服溶解片剂)、锭剂或其他舌下施用形式，其各自含有预定量的作为粉末或颗粒的活性成分。任选地，可采用在水性液体或非水性液体中的悬浮液，如糖浆剂、酏剂、乳剂或顿服剂。

片剂可以通过压制或模塑或湿法制粒来制备，任选地使用一种或多种辅助成分。压制片剂可通过在合适的机器中使用自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性成分进行压制而制备，该活性成分任选地与粘合剂、崩解剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或脱模剂(discharging agent)混合。由粉末状活性化合物与合适载体的混合物构成的模塑片剂可以通过在合适的机器中模制而制备。

糖浆剂可通过将活性化合物添加至糖(如蔗糖)的浓缩水性溶液中而制备，也可以向该糖溶液中添加任何辅助成分。这样的辅助成分可包括调味剂、合适的防腐剂、阻止糖结晶的试剂和提高其他任何成分溶解度的试剂如多元醇，例如甘油或山梨醇。

适于肠胃外给药的制剂通常包含活性化合物的无菌水性制剂，该制剂通常与接受者的血液等渗(例如生理盐水溶液)。这样的制剂可包括悬浮剂、增稠剂和脂质体或其他旨在将化合物靶向至血液成分或一个或多个器官的微粒系统。该制剂可以表现为单位剂量或多剂量形式。

肠胃外施用可包括全身递送或直接递送至CNS的任何合适的形式。施用可以是静脉内、动脉内、鞘内、肌肉内、皮下、肌肉内、腹内(例如腹膜内)施用等，并且可以通过输注泵(外部或可植入的)或其他任何适于预期给药形式的合适的装置来实现。

经鼻和其他粘膜喷雾制剂(例如可吸入形式)可包括活性化合物与防腐剂和等渗剂的纯化水性溶液。优选地将此类制剂调节至与鼻粘膜或其他粘膜相容的pH和等渗状态。或者，它们可以是悬浮在气体载体中的细分固体粉末的形式。这类制剂可以经由任何合适的装置或方法递送，例如使用雾化器、喷雾器、计量吸入器等。

用于直肠给药的制剂可以表现为具有诸如可可脂、氢化油脂或氢化脂肪羧酸的合适载体的栓剂。

经皮制剂可以通过将活性剂引入诸如纤维素介质(如甲基纤维素或羟乙基纤维素)的触变性或凝胶状载体中而制备，之后将得到的制剂包装入适合固定以与佩戴者皮肤接触的透皮装置中。如果组合物是凝胶的形式，可将该组合物擦拭于患者的体膜上，例如肩部或上臂和/或上身的皮肤，优选完好、清洁且干燥的皮肤上，并在其上保持足以使抗病毒剂递送至患者的血浆液中的一段时间。凝胶形式的本发明组合物可以包含在试管、药囊或计量泵中。这种试管或药囊可含有一个单位剂量的组合物。计量泵能够分配一个计量剂量的组合物。

本发明的制剂可进一步包括一种或多种辅助成分，所述辅助成分选自稀释剂、缓冲剂、调味剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、防腐剂(包括抗氧化剂)等等。

本发明的制剂可具有即释、持续释放、延迟释放或任何其他本领域技术人员公知的释放特性。

用于本发明抗病毒剂的半固体局部给药的剂型包括软膏剂、糊剂、乳膏、洗剂和凝胶剂。所述剂型可以用粘膜粘性聚合物配制，以使活性成分在皮肤施用区域持续释放。活性化合物可以在无菌条件下与药学上可接受的载体和与任何可能需要的防腐剂、缓冲剂或抛射剂混合。这样的局部制剂可通过将感兴趣的化合物与在局部液体、乳膏和凝胶制剂中常用的常规药用稀释剂和载体混合而制备。

例如，软膏和乳膏可由水性或油性基质添加合适的增稠剂和/或胶凝剂而配制。这样的基质可包括水和/或油，包括但不限于液体石蜡或植物油(包括但不限于花生油或蓖麻油)。可以根据基质的性质而使用的增稠剂包括软石蜡、硬脂酸铝、十八醇十六醇混合物、丙二醇、聚乙二醇、羊毛脂、氢化羊毛脂、蜂蜡等等。

洗剂可用水性或油性基质配制，且通常还包括以下一种或多种物质：稳定剂、乳化剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、香料等等。软膏剂、糊剂、乳膏和凝胶也可含有赋形剂，包括但不限于动物和植物脂肪、油类、蜡类、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅氧烷、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌，或它们的混合物。

取决于激素(hormone)，合适的赋形剂包括矿脂、羊毛脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠，羟丙基纤维素、海藻酸钠、卡波姆、甘油、二醇类、油类、甘油、苯甲酸盐、对羟苯甲酸酯和表面活性剂。对本领域技术人员显而易见的是，特定化合物的溶解度部分地决定所述化合物应怎样配制。水性凝胶制剂适于水溶性化合物。当化合物在活性所需的浓度下不溶于水时，乳膏或软膏制剂通常是优选的。在这种情况下，可能需要油相、水/有机相和表面活性剂来制备所述制剂。因此，可以基于溶解度和赋形剂-活性成分相互作用的信息设计剂型并可以选择赋形剂来配制原型制剂。

局部药物组合物也可包含一种或多种防腐剂或抑菌剂，例如羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、氯甲酚、苯扎氯铵等等。局部药物组合物也可包含其他活性成分，包括但不限于抗微生物剂特别是抗生素、麻醉剂、镇痛剂和止痒剂。

如果需要局部组合物或涉及到施用于粘膜表面如鼻或直肠上皮的组合物，本发明的组合物可包含增强剂，即能提高抗病毒剂穿过体膜的通过速率的化合物。He等人，Mechanistic Study of Chemical Skin PermeationEnhancers with Different Polar and Lipophilic Groups.Pharmaceutical Sciences 93(6)：1415-1430(2004)。

在另一个实施方案中，本发明的药物组合物为鼻内喷剂形式。该鼻内喷剂可包含抗病毒剂、液体载体和合适的表面活性剂。实施本发明时可使用任何合适的表面活性剂或表面活性剂混合物，包括如阴离子型、阳离子型和非离子型表面活性剂。

所述组合物可包含能增溶构成本发明组合物的一种或多种成分的载体。基本上，作为本发明组合物的合适媒介的任何合适的载体或载体混合物都可用于实施本发明。优选的载体的特征在于至少一种以下性质：对目标膜具有低刺激性或无刺激性；列于国家处方集或美国药典中；能提高抗病毒剂跨膜渗透的能力；以及能在组合物中执行另外的功能，例如也作为软化剂、湿润剂、增塑剂、润滑剂和/或蛋白质稳定剂起作用。所述载体以有效地作为本发明组合物的合适媒介的浓度存在于所述组合物中。出于指导目的，据认为大部分应用涉及使用含量占总组合物的约40％(w/w)至约98％(w/w)的载体；其他范围包括50％(w/w)至约80％(w/w)。

除了根据本发明该实施方案的颗粒外，剂型也可包括助流剂、润滑剂、粘合剂、甜味剂、调味剂和着色成分。可使用任何常规甜味剂或调味成分。同样可使用甜味剂、调味成分或者甜味剂和调味成分的组合。

可使用的粘合剂的例子包括阿拉伯树胶、黄蓍胶、明胶、淀粉、纤维素材料如甲基纤维素和羧甲基纤维素钠、海藻酸及其盐、镁、硅酸铝、聚乙二醇、瓜尔胶、多糖酸、膨润土、糖类、转化糖等等。可使用含量占总组合物的最高60％(w/w)或约10％(w/w)至约40％(w/w)的粘合剂。

着色剂可包括二氧化钛和适用于食物的染料如被称为F，D，&C.染料的那些染料和天然着色剂如葡萄皮提取物、甜菜红粉、β-胡萝卜素、胭脂红、洋红、姜黄、辣椒红等。使用的着色剂的量可以为总组合物的约0.1％(w/w)至约3.5％(w/w)。

加入组合物中的调味料可选自合成调味油和调味香料和/或天然油，植物、叶、花、果实等的提取物及其组合。这些可包括肉桂油、冬青油、薄荷油、丁香油、月桂油、茴香油、桉树油、百里香油、雪松叶油、肉豆蔻油、鼠尾草油、苦杏仁油和桂皮油。同样可用作调味料的有香草、柑橘油(包括柠檬、橙子、葡萄、酸橙和葡萄柚)，和水果香精，包括苹果、梨、桃、草莓、覆盆子、樱桃、李子、菠萝、杏等。已发现特别有用的调味料包括市售的橙、葡萄、樱桃和泡泡糖香料及其混合物。调味剂的量可取决于许多因素，包括想要达到的感官效果。调味料的存在量可以占总组合物的约0.05％(w/w)至约3％(w/w)。

本发明的组合物可包含能防止所述组合物的成分氧化、微生物生长或污染的防腐剂。基本上任何合适的防腐剂或防腐剂混合物都可用于实施本发明。优选的防腐剂包括：食物添加剂的抗微生物剂，例如季铵盐、山梨酸、醋酸和苯甲酸或其盐；和抗氧化剂，例如维生素C、维生素E、丁羟茴香醚(BHA)和丁羟甲苯(BHT)。优选的抗微生物防腐剂的例子包括苯扎氯铵和氯化十六烷基吡啶。防腐剂以有效抑制微生物生长、组合物成分氧化或组合物污染的浓度存在于组合物中。有效百分比的范围为总组合物的约0.0001％(w/w)至约1.0％(w/w)或0.005％(w/w)至约0.1％(w/w)。

使用增稠剂的组合物可能需要中和以达到组合物需要的增稠效果。例如，作为酸性分子的卡波姆需要中和，优选达到pH 3至9，以达到其最大粘性。基本上任何合适的中和剂或中和剂混合物都可使用。优选的中和剂的特征在于至少一种以下性质：pKa大于大约9，特别优选的是pKa大于大约9.5；和列于药典中(compendial)，即经政府机构批准用于药物制剂。具有以上两种性质的中和剂的例子包括三乙醇胺、氨丁三醇(tromethamine)、缓血酸胺(tris amino)、三乙胺、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、氢氧化钠、氢氧化铵和氢氧化钾。用于本应用中的特定中和剂的选择应考虑所使用的增稠剂或溶剂。Noveon出版物TRS-237。组合物的pH的范围可以为约3至约9，约4至约8或约5至约7。

本发明的组合物可以包含本领域公认量的本领域公认的其他成分。例如，可以加入改变流变学、触觉、滑度、稳定性、湿润性、香味和从业人员可能认为需要的其他希望的物理性质的材料。另外，可以加入缓冲剂以将组合物维持在特定pH。

在应用单位剂量的情况中，可以根据待治疗的病症和施用频率向患者施用一个或多个这样的单位剂量。这些单位剂量的数目可以根据例如是否已经达到希望的临床效果来按照需要提高或降低。

本发明的组合物可以利用常规手段配制，例如，通过将成分混合并搅拌。可以使用常规设备。

本发明提供一种制品，其含有具有至少一种抗病毒剂的药物制剂，和指示该药物制剂用于治疗、预防或改善一种或多种哮喘症状的印刷材料。在一个实施方案中，印刷材料指示该药物制剂应当由哮喘患者吸入。该制品可以含有包装材料。药物包装材料的例子包括但不限于泡罩包装、瓶、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、注射器、药瓶和任何适用于所选择的制剂及预期施用模式和治疗模式的包装材料。关于药物包装材料的其他例子，参见，例如，美国专利5,323,907、5,052,558和5,033,252。在本文的一个实施方式中，组合物用喷雾器包装，以用于向受试者直接施用该组合物。

哮喘中的气流限制主要是由于支气管收缩，但是气道水肿、血管充血和渗出物的腔内堵塞也可以引起哮喘症状。这导致一秒钟用力呼气量(FEV₁)、FEV₁/用力肺活量(FVC)比和最大呼气流速(PEFR)下降，以及气道阻力增大。外周气道的过早关闭导致肺充气过度(空气滞留)和残气量增大，特别是在急性加重期间。在更严重的哮喘中，通气减少和肺血流增加导致通气和灌注的失配，以及支气管充血。哮喘可以伴有低氧血。由于通气增加，动脉Pa_CO2倾向于较低。气道高反应性(AHR)也是哮喘特征性的生理异常，是指对多种吸入触发物的过度支气管收缩反应，这些触发物对正常气道没有影响。第245-248章，Harrison′s Principles of Internal Medicine，第17版，McGraw-Hill Companies，Inc.2008。

因此，在哮喘控制中监测肺功能是必需的。本发明进一步包括一种在用抗病毒剂治疗之前、期间和之后评估哮喘患者的肺状况的方法。可以进行肺功能测试以获得至少一种肺功能值。肺功能值与相应的预定肺功能值进行比较。可以比较哮喘患者在抗病毒治疗之前、期间和之后的肺功能值。

肺功能测试可以测定(1)通气功能，(2)肺循环，或(3)气体交换。第245-248章，Harrison′s Principles of Internal Medicine，第17版，McGraw-Hill Companies，Inc.2008。

通气功能的测量包括对特定情况下肺中所含的气体量和气体可以从肺中排出的速率进行定量。通常用于呼吸系统诊断的两种肺容量测量是(1)全肺容量(TLC)；和(2)残气量(RV)。从TLC到RV从肺中呼出的气体量是肺活量(VC)。常用的气流临床测量通过受试者吸气至TLC然后用力呼气至RV的过程来获得。三个测量值通常由相对于时间的用力呼气量的记录，即肺量图获得：(1)一秒钟用力呼气量(FEV)或FEV₁，(2)用力肺活量(FVC)，和(3)介于VC的25-75％之间的用力呼气流速(FEF)，或FEF25-75％，也被称为最大呼气中期流速(MMFR)。通气功能测试也可以测量最大呼气流速(PEFR)、气道阻力(AR)和用力呼气中期流量。PEFR可以通过最大流量计来测量。

在静态条件下测定肺容量和在动态条件下测定FEF而对通气功能进行测量。VC、补呼气量(ERV)和吸气量(IC)通过使患者向肺活量计呼气及吸气来测量，肺活量计是一种能够测量呼出或吸入气体量同时将气体量对时间作图的装置。通常使用两种技术来测量其他体积，如RV、FRC和TLC：氦稀释法和身体体积描记法。在氦稀释法中，受试者反复向具有已知体积的含痕量氦气的气体的容器内呼气并吸气。氦气被原先存在于肺内的气体稀释，并且非常少量被吸入肺循环中。从已知的容器容积和初始和最终氦气浓度，可以计算肺内存在的气体量。如果存在缓慢流通的空隙如肺大疱，则氦稀释法可能低估肺内的气体量。在这种情况下，肺容量可以用身体体积描记仪更精确地测量，身体体积描记仪是患者坐于其中同时对着闭合的接口喘气的密闭的盒子。因为没有气流进入或流出体积描记仪，喘气过程中胸部的压力变化导致肺内气体的压缩和稀薄化，同时导致体积描记仪内气体的稀薄化和压缩。通过测量体积描记仪内和接口处的压力变化，可以使用博伊尔定律计算胸腔中的气体量。肺容量和在用力呼气过程中进行的测量通过比较测量值与给定患者年龄、身高、性别和种族而预期的值来进行解释。第245-248章，Harrison′s Principles of Internal Medicine，第17版，McGraw-Hill Companies，Inc.2008。

在一些肺功能测试中，以呼吸具有不同密度的气体混合物的患者进行试验。这些气体的例子包括空气、氦气、氧气、氮气、一氧化碳、二氧化碳和惰性气体。

可以测量气体交换以评估肺功能。最常用的气体交换测量是动脉血中的O₂和CO₂的分压，即分别为Pa_O2和Pa_CO2。这些分压不直接测量血液中O₂和CO₂的量，而是测量血液中该气体的驱动压力。

最常见地，P_O2是用来评估哮喘对动脉血氧合的影响的测量值。通过血氧测定法对动脉血中O₂饱和度的直接测量在选择的临床条件下也是重要的。在估计氧合时一种有用的计算是肺泡-动脉O₂差(PA_O2-Pa_O2)，通常被称为肺泡-动脉O₂梯度(或A-a梯度)。该计算考虑以下事实：可以预期肺泡P_O2、因而动脉P_O2根据由动脉P_CO2反映出的肺泡通气量水平而变化。当患者高通气并且具有低动脉血和肺泡气体P_CO2时，肺泡和动脉P_O2将升高；相反，通气不足和高P_CO2伴随着肺泡和动脉P_O2的降低。动脉P_O2的这些变化与肺泡-毛细血管水平处O₂转移异常无关并且仅反映肺泡P_O2对肺泡通气水平的依赖性。

为了确定肺泡-动脉O₂差，必须首先计算肺泡P_O2(PA_O2)。最常用于该目的的方程，即肺泡气体方程的简化形式，为：

PA_O2＝FI_O2×(P_B-P_H2O)-PA_CO2/R

其中FI_O2＝吸入O₂的浓度分数(当呼吸室内空气时为0.21)；P_B＝大气压(在海平面为约760mmHg)；P_H2O＝水蒸气压力(当空气在37℃下完全饱和时为47mmHg)；并且R＝呼吸商(CO₂产生与O₂消耗的比例，通常假定为0.8)。对于在海平面呼吸空气的患者，如果将前面的值代入该方程，则该方程变为：

PA_O2＝150-1.25×Pa_CO2

肺泡-动脉O₂差然后可以通过从计算的PA_O2中减去测量的Pa_O2进行计算。CO₂消除的充分性通过动脉血中的CO₂分压即Pa_CO2进行测量。

脉搏血氧测定法是一种用于评估氧合的替代方法。使用通常夹在患者手指上的探针，脉搏血氧计基于搏动的皮肤动脉血中的血红蛋白对两个波长光的吸收的测量计算氧饱和度(而不是Pa_O2)。由于氧合的和非氧合的血红蛋白对两个波长光的吸收有差别，可以计算并即时显示被氧饱和的血红蛋白的百分比，即Sa_O2。

升高的AHR通常通过乙酰甲胆碱或组胺激发和计算使FEV₁降低20％的诱发浓度(PC₂₀)来测量。这在临床实践中极少使用，但是可以用于慢性咳嗽的区别诊断以及在正常肺机能测试的条件下的诊断有疑问时使用。如果存在显著的EIA史，有时也进行运动测试以证明运动后的支气管收缩。也可以进行变应原激发。

成像技术如胸部X射线照相术、计算机断层扫描(CT)和磁共振成像(MRI)可以用来评估抗病毒剂治疗哮喘的有效性。

肺功能测试也包括激发和运动测试、呼吸肌强度的测量和光纤气道检查。

本发明抗病毒剂的施用改善了哮喘症状。在本发明的某些实施方案中，在施用病毒剂后约30分钟至大约14天内、约2小时至约12天内、约1天至约11天内或约2天至约10天内，FEV₁或PEFR有至少约10％的提高、约20％的提高或约30％的提高。在施用病毒剂后约30分钟至约14天内、约2小时至约12天内、约1天至约11天内或约2天至约10天内，FVC、FEV₁/FVC比、FEF_25-75％(或MMFR)或用力呼气中期流量可能有至少约10％的提高、约20％的提高或约30％的提高。在施用病毒剂后约30分钟至约14天内、约2小时至约12天内、约1天至约11天内或约2天至约10天内，气道阻力(AR)或气道高反应性可以有至少约10％的降低、约20％的降低或约30％的降低。在一些实施方案中，FEV₁或PEFR的提高可以是约30分钟至约14天内、约2小时至约12天内、约1天至约11天内或约2天至约10天内大约10％至大约4倍，大约20％至大约3倍或大约30％至大约2倍。

用于研究粘液性质的方法包括流变学(例如，使用磁性微流变仪)；通过测量粘液滴与表面之间的接触角来表征附着表面和粘性系统之间吸引力的粘着性。纤毛对粘液的转运可以通过直接测量即原位粘液清除进行研究。证明肺上皮离子转运系统活性的跨上皮电位差可以使用合适的微电极进行测量。定量形态学方法可以用来表征上皮表面状况。美国专利7,531,500。

健康相关生活质量(QoL)的评估是临床实践中哮喘控制的一个重要方面。哮喘相关的QoL可以通过问卷调查来评估，包括但不限于St.George呼吸问卷(SGRQ)、哮喘生活质量问卷(AQLQ)、具有哮喘生活问卷(LWAQ)、哮喘控制问卷(ACQ)、小型哮喘生活质量问卷(MiniAQLQ)、呼吸疾病生活质量问卷(QOLRIQ)、了解、态度和自我效验哮喘问卷(KASE-AQ)、哮喘症状应用指数(ASUI)、伯明翰亚拉巴马大学(UAB)功能缺陷量表、哮喘认知控制问卷(PCAQ)、哮喘简表或Rhinasthma。AAAAI生活质量资源(AAAAI Quality of Life Resources)。Asthma-Adult/General，[在线]，[2009年7月29日检出]。检自互联网<URL：http://www.aaaai.org/professionals/quality of life/asthma adult.stm>

本发明的药物组合物可以用来治疗其他呼吸系统疾病，如气道炎症、变态反应、呼吸阻碍、囊性纤维化(CF)、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏性鼻炎(AR)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、肺动脉高压、肺部炎症、支气管炎、气道阻塞或支气管收缩。

将要治疗的患者可以是灵长类动物，例如人，或表现出哮喘症状的任何其他动物。尽管本发明的方法特别适合于人类患者的治疗，但是应当理解本发明也适用于兽医实施。

下列实施例用于说明，而不是限制所请求保护的本发明。

实施例1

一名具有哮喘史的成年男性已联用吸入的类固醇和β₂-激动剂多年，具有混合的结果。他曾经使用

每天吸入两次，或

每天喷四次。

是一种含有丙酸氟替卡松(一种皮质类固醇)和昔萘酸沙美特罗(一种长效β₂-肾上腺素能受体激动剂)的联合制剂。

含有通过单一吸入器递送的两种活性成分：布地奈德-一种皮质类固醇，和福莫特罗-一种长效β₂-激动剂。他的峰值流量最佳时为600-650升/分钟，但是在加重期间将退化到大约250-350升/分钟的水平，并且在没有发作时通常降到低于550升/分钟。多年来，他需要偶尔口服泼尼松(一种皮质类固醇)治疗。运动耐量为中度到较差。

他表现出流感样的症状，并且开始口服达菲

75mg，每天两次，共5天。在12小时内，他开始感到好转并且肌痛减轻；在1.5天内体温从39℃降至38℃；在1.5天内疲劳缓解。令人惊奇的是，他的哮喘症状也得到减轻。他的呼吸比每天服用60mg泼尼松时要更好。完成5天的达菲

疗程后一周，由于哮喘症状几乎消失，他停止使用类固醇/β₂-激动剂吸入剂。使用达菲

5周后，他仍然不需要任何类固醇/β₂-激动剂吸入，并且他的峰值流量为625-650升/分钟。患者报告缓解水平类似于他在每天服用60mg泼尼松时的哮喘缓解水平。然而，哮喘症状还没有完全消失，因为运动仍然引起一些轻度的呼吸局促。他继续使用

，因为该药对他没有副作用，并且在使用达菲

之前他曾经使用

多年。含有孟鲁司特——一种用于哮喘维持治疗及缓解季节性变态反应症状的白三烯受体拮抗剂(LTRA)。

实施例2磷酸奥司他韦(达菲

)在未良好控制哮喘的患者中的随机、双盲、安慰剂对照的评估

当前的哮喘指南强调对哮喘的控制。控制的一个方面是由症状水平、急救药使用、夜间觉醒和影响正常活动所指示的当前负担。不满足特定目标的患者被认为具有“未良好控制的哮喘”。指南进一步推荐用来实现控制的治疗步骤。对于许多患者来说，这些治疗措施足以实现哮喘控制，但是对于至少30％的患者来说，甚至持续一年的最佳剂量的吸入皮质类固醇和长效β-激动剂也不能在GOAL研究中达到控制(Bateman等人，Can guideline defined asthma control be achieved？The Gaining OptimalAsthma Control study.Am J Respir Crit Care Med 2004；170：836-44)。因此，需要确定用于治疗哮喘的其它治疗选项。

奥司他韦是一种被批准用于预防和治疗所有流感病毒株感染的神经氨酸酶抑制剂。A.Moscona.The neuraminidase inhibitors for influenza.N.Engl.J.Med.2005；353：1363-73。因此，它对流感病毒是特异性的，而没有列出其他作用。该探索性研究的目的是研究奥司他韦对具有使用吸入皮质类固醇无法充分控制的哮喘的患者的可能有益效应。

研究设计：

这是一个单中心研究，招募了21名18-65岁的受试者，他们已经确诊为患有哮喘，当前通过使用低至中剂量的吸入皮质类固醇进行治疗并且没有达到如NHLBI哮喘诊断和控制指南(2007)所定义的哮喘控制。在满足入组标准后，受试者以2∶1的比例(14/7)随机分组以接受推荐的和经批准的5天磷酸奥司他韦或匹配的安慰剂的疗程。在随机化之前、第一剂量之后、2周后和4周后进行评估。主要结果是两组之间哮喘控制问卷评分变化的差异。

受试者：

受试者是18-65岁的男性或女性，具有至少两年的持续哮喘史，在最近12个月内具有证明的可逆性，并且至少一个月的稳定吸入皮质类固醇给药。

初始入选标准包括：男性或女性，18-65岁；经医生诊断的至少两年的常年哮喘史；采用充分避孕措施的具有生殖能力的女性(男性不需要避孕措施，因为奥司他韦是一种经FDA批准的产品)；身体检查、胸部X-射线检查或实验室研究未见使参与患者处于危险中或干扰研究结果解释的异常；吸入皮质类固醇(丙酸氟替卡松88-440微克/天或等效量)，之前4周没有剂量变化；最近6个月没有吸烟并且不超过10包-年的总量；以及FEV₁介于预测值的50％与80％之间，在筛选时或在之前12个月内过去吸入沙丁胺醇至少有12％的改善。

用于随机化的额外入选标准是哮喘控制问卷(ACQ)得分等于或大于1.5。

排除标准包括：需要系统使用皮质类固醇的哮喘加重，筛选2个月内有看急诊或入院治疗；除儿童期(12岁前)外有哮喘插管史；可能干扰研究结果解释的COPD或任何肺病史；体重指数等于或大于30；未经治疗的阻塞性睡眠呼吸暂停史；可能使受试者在参与研究时处于危险中或可能干扰研究结果解释的任何未经控制的全身性疾病；筛选前4周内有呼吸道感染史；筛选前30天内使用过实验药物；筛选3个月内进行奥马珠单抗治疗；已知丙型肝炎或HIV检验阳性；经常的药物或酒精滥用；和参与过程中有计划的选择性外科手术。

访问和程序：

筛选访问(按照需要，1+1a和1b)：

1.浏览并签署经IRB批准的患者知情同意表格；检查入选和排除标准。

2.获得筛选实验室完全性研究：CBC、生物化学检验、尿分析和ECG。

3.进行沙丁胺醇可逆性(4喷)的肺量测定。

4.如果之前一年内没有进行胸部x-射线检查，则进行胸部x-射线检查。

如果受试者满足入选标准中列出的药物治疗和肺量测定标准，将对他们进行哮喘控制问卷调查以评估前7天的症状。如果他们满足得分≥1.5的额外入选标准，则在一周内安排他们返回进行随机化访问。

进一步的筛选访问：

1.服用不允许的药物(长效β-激动剂、白三烯途径改善剂、茶碱)的受试者将停止这些用药，并在2周返回以完成覆盖前7天的ACQ。

2.ACQ得分低于1.5的受试者经其同意可以将其吸入皮质类固醇剂量降低50％(对于ACQ得分为0-0.75者，和对于ACQ得分为1.0-1.25者降低25％)。在4周内安排他们返回以完成覆盖前7天的ACQ。在该4周期间，指导他们监测症状、β-激动剂使用和峰值流量，并且根据他们在皮质类固醇减量之前的水平给他们每个人提供预警水平，该水平将导致与临床研究中心的联系。

3.在访问1a或1b时满足ACQ标准的任何受试者将安排在7天内进行随机化访问。

随机化前的访问：

一旦受试者获得随机化资格(满足所有入选标准，包括ACQ得分等于或大于1.5)，就指导他们入组并开始每天两次的峰值流量监测和记录症状和短效β-激动剂使用。下面的研究将在随机化(访问1c)之前安排和进行：

1.甘露醇吸入激发(如果到研究开始时已经得到FDA的批准，则将使用甘露醇)。

2.呼出的一氧化氮。

3.血清ECP。

4.哮喘生活质量调查。

随机化访问：

1.检查入选和排除标准，包括实验室研究和胸部x-射线检查，如果进行的话。

2.检查PEF、症状和β-激动剂使用日记的完整性。

3.观察不良事件。

4.完成覆盖前7天的ACQ。

5.基线肺量测定。

6.基线生命体征。

7.对于具有生育能力的女性，快速妊娠试验。

8.施用盲试的研究药物(21名受试者以2∶1的比例随机分组以接受每天两次奥司他韦75mg或每天两次匹配的安慰剂，共5天)。

9.在上午6:00点给药后，他们在1、2、3、6、9和12小时后重复进行肺量测定，在第12小时进行第二次给药。

10.第二次给药后，他们离开单位，提供8粒盲试研究药物胶囊，并要求每天两次以约12小时的间隔服用一粒胶囊，继续每天两次记录症状、峰值流量、不良事件和β-激动剂使用，并在2周后返回临床研究单位。如果在下4周期间，任何受试者出现符合呼吸道感染的症状(咽喉痛、发热、鼻液溢过多)，则对他们进行快速流感筛查试验，且如果为阳性，则其中止该研究。

2周访问：

受试者在随机化后2周的大约上午7:00点返回，进行以下活动：

1.检查日记中的症状、不良事件、β-激动剂使用和峰值流量结果。

2.覆盖前7天的ACQ。

3.肺量测定。

4.呼出的一氧化氮。

5.血清ECP。

4周访问：

受试者在大约上午7:00点返回进行下列活动：

1.检查日记中的症状、不良事件、β-激动剂和峰值流量结果。

2.覆盖前一周的ACQ。

3.肺量测定

4.呼出的一氧化氮

5.血清ECP

6.AQLQ

7.甘露醇吸入激发

表1列出了用于安排的访问的各种活动/研究。

表1

注意：()表示活动如所示进行。

统计分析：

通过协方差分析(ANCOVA)或其他适当的统计方法分析数据，以比较积极治疗组内相对于基线和两组之间的变化。主要结果是从基线(随机化)到第4周的ACQ得分变化。其他结果是：第一次给药后FEV₁的急性变化，2周和4周时的FEV₁变化，4周中每一周的峰值呼气流量的平均变化，2周和4周时呼出的一氧化氮和血清嗜酸性粒细胞阳离子蛋白水平的变化，从基线到4周的哮喘生活质量问卷的变化，4周时间内每周平均的症状和β-激动剂使用的变化，以及4周时间内甘露醇或乙酰甲胆碱PC20的变化。

研究方法：

甘露醇激发

甘露醇试验按照标准实验室方案使用商购的甘露醇检测试剂盒(称为Aridol^TM或Osmohale^TM Pharmaxis Ltd，AUS)进行。Brannan等人，Thesafety and efficacy of inhaled dry powder mannitol as a bronchialprovocation test for airway hyperresponsiveness：a phase 3 comparison studywith hypertonic(4.5％)saline.Respiratory Research 2005，6(144)：144。Anderson等人，Comparison of mannitol and methacholine to predictexercise-induced bronchoconstriction and a clinical diagnosis of asthma，Respiratory Research 2009，10：4。

各个甘露醇剂量(0、5、10、20、40、80、160、160、160mg)后60秒测量FEV₁。要求受试者在从装置进行控制的深吸气之前完全呼气，并保持其呼吸5秒，然后在除去鼻夹之前经口呼出。吸入0mg胶囊后60秒，重复测量FEV₁两次。取这些值的最高值作为基线FEV₁，并用来计算指示响应于甘露醇激发的至少15％下降的目标FEV₁值。表示的试验结果是PD₁₅。

对于各个剂量步骤重复上面对于0mg胶囊概述的程序，直到FEV₁达到至少15％的降低(或相连剂量之间至少10％的降低)或者已经施用了635mg的累积剂量。

呼出的一氧化氮

气道炎性和上皮细胞表达被称为一氧化氮合酶(NOS)的酶。这些酶产生气体一氧化氮(NO)，一氧化氮扩散到气道腔内。因为肺病过程具有不同程度的炎症并因此具有不同量的含NOS的细胞，气道腔内的NO水平也将不同。因此，测量逐渐增加的FE_NO作为气道炎症的指标。FE_NO随呼出气流而变化。利用该系统，必须保持恒定的呼出气流以实现可重复的测量。Silkoff等人，Marked flow dependence of exhaled nitric oxide using anew technique to exclude nasal nitric oxide.Am J Resp Crit Care Med.155(1)：260-267，1997年1月。Recommendations for Standardized Proceduresfor the Online and Offline Measurement of Exhaled Lower RespiratoryNitric Oxide and Nasal Nitric Oxide in Adults and Children.Am J Resp Crit Care Med.Vol 160：2104-2117，1999。

临床研究领域将遵循FE_NO的ATS标准，或者如果它不同于ATS标准，则确保满足方案特异性的标准。

一氧化氮系统、过滤器和NO校准气体从Aerocrine，Inc.获得。每14天和/或在系统提请校准时进行校准。

在测试前，受试者在FE_NO测定前至少60分钟应当避免进行运动和其他肺功能测试。受试者在测试前应当漱口，并且在测试前30分钟应当避免食用或饮用任何东西(例如咖啡因、绿色蔬菜)。

一氧化氮系统按照日常使用手册使用。

实施例3

12名哮喘患者用适当剂量，例如，处方信息(PI)剂量的磷酸奥司他韦(达菲)治疗。患者可以随机分配入几个组：高剂量组将每天两次接受奥司他韦150mg或根据年龄、体重和肾功能调整的等效剂量5-10天；中等剂量组将每天两次接受奥司他韦110mg或根据年龄、体重和肾功能调整的等效剂量5-10天；标准剂量组将每天两次接受奥司他韦75mg或根据年龄、体重和肾功能调整的等效剂量5-10天。http://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00298233。

肺功能测试在施用前和施用达菲

后的不同时间点进行，以测量例如，FEV₁、FEV₁/FVC比、PEFR、气道阻力和气道高反应性。哮喘特定生活质量得分使用适当的问卷(如发明详述和实施例4中更全面地描述的)进行研究。该研究也包括安慰剂对照组，尽管不是双盲的。患者数可以增加，并且患者的选择可以根据其哮喘疾病水平和当前的疾病控制水平来确定。这些患者都不表现病毒综合征的症状，如发热、肌痛、咳嗽、全身症状等。

无论抗病毒剂的共施用是否可以允许使用较低的抗炎剂剂量，本研究或未来研究中也考虑长效β₂-激动剂或短效β₂-激动剂。

实施例4抗病毒剂对哮喘患者支气管上皮细胞的影响

与来自健康个体的细胞相比，哮喘患者支气管上皮细胞中某些基因的表达水平上调或下调。例如，氯离子通道，钙激活的家族成员1(CLCA1)、骨膜蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制蛋白B2和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在哮喘中上调。Woodruff等人，Proceedings of the National Academy of Sciences USA，104(40)：15858-158(2007)。Vachier等人，Am.J.Respir.Crit.Care Med.，158，3：963-970(1998)。

为了探索哮喘中的上皮细胞功能障碍和抗病毒剂的疗效，在施用抗病毒剂之前和之后的几个时间点利用支气管镜检从哮喘或健康受试者收集支气管上皮细胞。特别地，进行双盲随机化对照试验，其中向哮喘或健康受试者每天两次施用磷酸奥司他韦98.5mg(等同于奥司他韦75mg)或安慰剂。或者，每天一次向受试者施用大约75mg奥司他韦。支气管镜检在基线处进行，并且在开始研究后1周、2周、3周和4周重复。总mRNA和蛋白质从支气管上皮细胞制备。mRNA水平使用RT-PCR或cDNA微阵列进行研究；蛋白质水平通过ELISA、免疫组织化学、Western印迹法或蛋白质微阵列进行研究。对用达菲

或安慰剂治疗之前、期间和之后来自哮喘受试者支气管上皮细胞中的mRNA(或蛋白质)水平进行比较。

对于基因表达微阵列分析，使用NuGen Ovation RNA扩增系统扩增25ng总上皮RNA。然后，2.75μg单链cDNA与Affymetrix(Santa Clara，CA)U133+2.0阵列(编码38,500个基因的＞54,000个探针组)杂交。阵列图像使用Affymetrix GeneChip表达分析软件进行分析。Bioconductor用于质量控制(affyPLM算法)、预处理(RMA计算)、聚类分析和线性建模。

或者，原代支气管上皮细胞由按照标准指南通过光纤支气管镜检从正常或哮喘受试者获得的支气管刷检物(brushings)(＞95％的上皮细胞)生长而来。Hurd，等人，Workshop summary and guidelines：investigative use ofbronchoscopy.J. Allergy Clin.Immunol.88：808-814(1991)。原代培养物通过将新刷下的支气管上皮细胞接种到补充激素的含有50U/ml青霉素和50μg/ml链霉素的支气管上皮生长培养基(Clonetics)中而建立。Wark，等人，Asthmatic bronchial epithelial cells have a deficient innate immuneresponse to infection with rhinovirus.Journal of Experimental Medicine，201(6)：937-947(2005)。培养的支气管上皮细胞用不同剂量的磷酸奥司他韦处理。mRNA或蛋白质水平在磷酸奥司他韦处理后的不同时间点进行研究。

实施例5定期安排的和按需的抗病毒剂施用在哮喘患者中的效果

将患者随机分入两个治疗组之一，并治疗16周。治疗组A定期服用达菲

(每天两次磷酸奥司他韦98.5mg(等同于奥司他韦75mg)，或者每天一次大约75mg奥司他韦)加按需服用达菲

。治疗组B定期服用安慰剂(每天两次)+按需服用达菲

。患者记录每天服用达菲

的时间和剂量。指导患者在日记中记录每天两次使用Mini-Wright峰值气流计(ClementClarke，Columbus，Ohio)获得的PEFR，并每天一次记录哮喘症状。患者于记录晨时PEFR后在早晨第一次服用胶囊，并且在记录晚间PEFR后睡觉。

尽管患者接受盲试治疗，但是通过患者记录的PEFR和症状、服药前后FEV₁的变化、使FEV₁降低20％所需的乙酰甲胆碱浓度(PC20)、哮喘加重和治疗失效来每天监测哮喘状态。

门诊访问将每两到三周安排一次。在所有门诊访问前至少8小时，患者停止服用研究药物。在门诊访问期间，为了确定肺量测量对药物的反应(Collins Eagle 2肺活量计，Quincy，Mass.)，测量施用研究药物前和施用30分钟后FEV₁的差异并记录为改善百分比。为了测量对于乙酰甲胆碱的PC₂₀，使用喷雾器(646型，DeVilbiss Health Care，Somerset，Pa.)和校准的剂量计(S&M Instruments，Dovestown，Pa.)生成乙酰甲胆碱气溶胶。乙酰甲胆碱的PC₂₀按照标准程序测定(Tashkin等人，Am.Rev.Respir.Pis.145：301，1992)。在各次门诊访问期间监测哮喘加重。患者将被询问其哮喘控制，且所有哮喘加重都将进行记录。

在门诊访问期间，使用哮喘生活质量问卷(AQLQ)和具有哮喘生活问卷(LWAQ)记录哮喘特定的生活质量得分。Juniper等人，Development of a Questicvnaire for Use in Clinical-Trials.Thorax 47：76-83，1992。Hyland等人，A Scale for Assessing Quality-of-Life in Adult Asthma Sufferers.Journal of Psychosomatic Research 1991；35(1)：99-110。

在该研究中也可以监测FEV₁/用力肺活量(FVC)比、气道阻力、气道高反应性(AHR)。Harrison′s Principles of Internal Medicine，第17版，McGraw-Hill Companies，Inc.2008。

在随机化的16周治疗期结束时，所有患者都转换到使用安慰剂的单盲治疗，持续4周的停药期。在此时间内，患者根据需要继续使用达菲

美国专利6,156,503。

实施例6运动诱发的哮喘的治疗

开始本研究前4-28天，对具有运动诱发哮喘史和至少一年轻度稳定哮喘(FEV₁≥70％的预测正常值)史的18和45岁的男性患者(他们只需要短效β₂-激动剂进行常规哮喘控制)进行筛选程序。在28天的前随机化阶段中进行一次筛选和一次基线运动激发试验。筛选后，分别向15名患者每天两次施用磷酸奥司他韦98.5mg(等同于奥司他韦75mg)或者每天一次施用约75mg奥司他韦，持续29天。15名患者接受安慰剂29天。

通过轻度哮喘患者中运动激发试验后FEV₁下降百分比的改善(即降低)来检验达菲的效力。主要功效变量是第29天时的最大运动后百分比下降指数(％FI)，且将如下计算：

药效学研究包括第1、15和29天的呼出一氧化氮的静息AM在线测量值的绝对变化；第1和29天的全血中体外LPS刺激的TNF-α水平测量；和第1和29天的炎性介质的全血基因表达(mRNA)分析。

对于药代动力学研究，将测量浓度-时间曲线下面积(AUC)、最大浓度(Cmax)、终末消除半衰期(T_1/2)、到达最大浓度的时间(Tmax)、表观清除率(CL/F)、分布体积(V_d)和相对积累速率(RA)。

安全性研究包括观察不良事件；临床实验室评价，例如尿分析、化学、血液学检查，包括绝对白细胞计数和抗核抗体；身体检查结果；生命体征测量；12-导联心电图记录和特应性皮炎的整体评估(对于筛选时具有特应性皮炎的患者)。美国专利7,276,529。

实施例7使用屋尘螨提取物(HDM)诱发哮喘的鼠模型的实验

6-8周龄的正常BALB/c小鼠鼻内暴露于25μg商业上制备的纯化HDM提取物或盐水(对照小鼠)，每周5天，持续最多10周(Johnson等人，2004)。在该段时间内，HDM-暴露的动物将表现出完整的疾病进程，从轻度哮喘到重度哮喘，从第5周开始具有气道高反应性。为了评估哮喘进展，进行数项试验，包括支气管肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞计数和血清细胞因子测量，如Evans等人，(2003)J Appl Physiol 94：245-52中所述的。进行细胞计数和差异染色，并且在暴露于HDM后以2周间隔检测IL-4、IL-13、IL-5和TNF-α的细胞因子水平。血清中的总IgE和HDM-特异性IgE水平使用抗原捕获ELISA进行测定。呼吸功能通过使用乙酰甲胆碱剂量-应答方法测量气道阻力和肺顺应性而进行评估。Glaab等人，(2005)Respir Res 6：139-48。对乙酰甲胆碱激发的气道高反应性是一个良好表征的呼吸功能量度，特别是气道阻力的评估。

气道形态测量用于使用标准方法评估支气管壁的厚度。Kuhn等人，(2000)Am J Respir Cell Mol Biol 22：289-295。测量支气管腔直径、上皮厚度和支气管壁厚度。

在通过上述程序形成哮喘的动物中的蛋白质表达与未治疗的对照动物进行比较。在基线处(HDM暴露前)、1周、3周、5周、7周和10周后从测试动物和对照动物获得肺和气管样品。动物用过量二氧化碳及随后的颈椎脱位法处死，随后立即进行组织采样。

对组织样品进行用来分析基因表达的免疫组织化学(IHC)分析，如Mason等人，(2004)Endocrinology 145(2)：976-982所述。来自各部位的组织的两个部分在-80℃冷冻，用于制备mRNA和组织蛋白质裂解物制剂。如下所述，新鲜气管样品用来制备培养的气道平滑肌细胞(ASM)。HDMASM的组织学分析利用标准方案使用苏木精和曙红、三色(trichrome)和天狼星红进行，并且检查HDM刺激小鼠的哮喘发展过程中气管和肺的总体组织学变化，并在基线(HDM暴露前)和1周、3周、5周和7周后之间进行比较。

与对照小鼠相比，在哮喘小鼠气道的平滑肌细胞中CCN5大大减少。为了研究抗病毒剂对治疗哮喘的效果，在向哮喘小鼠施用抗病毒剂之前、期间和之后分析CCN5的表达水平。在哮喘小鼠中上调或下调的其他蛋白质的表达水平也可以利用所述方法进行分析。

通过正常和HDM ASM的IHC进行的CCN5蛋白分析利用肺和气管的各冷冻和石蜡切片及CCN5抗体进行。检验正常肺和气管中的CCN5表达模式，并与在基线(HDM暴露前)和1周、3周、5周和7周后获得的组织进行比较。用DAB-过氧化物酶对载玻片进行CCN5表达的染色。平滑肌细胞中缺乏CCN5表达可因此与疾病状态因果相关。

使用上述方法在暴露于HDM提取物的小鼠中分析气道对施用的达菲

的反应。从施用达菲

开始监测动物10周。呼吸功能测试基于如上所述对静脉内乙酰甲胆碱的气道剂量反应曲线的测量。这些测试在第一次施用达菲

后每两周进行一次。如上所述进行气道形态测量以确定支气管壁的厚度。以两周的间隔，分离气管和肺样品并通过组织学方法及通过IHC分析其CCN5、CCN2、平滑肌α-肌动蛋白和基质金属蛋白酶的表达和抑制剂MMP-9、MMP-8、MMP-2、MMP-12、MT1-MMP和TIMP 1和2。

分离气管和支气管样品用于制备培养的鼠ASM，以用于以下所述的实施例中，用于在哮喘的所有阶段进行ASM分析。切下气管和支气管样品，并将其立即转移到冰冷的缓冲液中。使用标准方法分离并培养ASM。Deshpande等人，(2005)Am J Resp Cell Molec Biol 32：149-156。平滑肌表型通过使用针对平滑肌特异性α-肌动蛋白和平滑肌肌球蛋白重链的抗体的IHC染色进行证实。

在从上述各个不同HDM时间点获得的ASMC中，对ASM进行测试以检测CCN5蛋白和mRNA水平。蛋白质水平通过Western印迹法进行分析。mRNA水平也通过Q-PCR进行分析。从ASM细胞制备的cDNA通过用于基因表达谱分析的微阵列进行分析。

为了测试抗病毒剂是否具有在体内调节ASM功能的作用以及是否可有效治疗哮喘，对HDM暴露的小鼠施用达菲，并且分析ASM过度增生和气道重塑(AWR)的预防和抑止。

从开始HDM暴露后3周(哮喘第1阶段发作后)到HDM后5周(ASM过度增殖发作后)，给小鼠施用达菲

。分析下组动物：(1)在整个5周测试期内暴露于鼻内HDM并且在第3-5周暴露于达菲的四只动物；(2)在全部5周暴露于HDM并且在第3-5周暴露于安慰剂的四只动物；(3)仅在全部5周暴露于HDM的两只对照动物；和(4)只在第3-5周暴露于安慰剂的两只对照动物。对上述1-3组的动物施用HDM，每周5天，并且在第3-5周期间施用达菲

两次(第1、2和4组)。

在5周HDM暴露期结束时，测试动物的呼吸功能以估计静脉内施用乙酰甲胆碱(MCh)后的气道剂量应答。气道功能测试后，通过开胸术处死动物以检查气道组织学。分离并固定气管和肺样品，通过常规组织学方法和通过免疫组织化学分析石蜡切片的CCN5表达。分析气道功能测试和气道形态学的盲试结果。美国专利公开20080207489。

实施例8使用卵清蛋白诱发的哮喘的鼠模型的实验

在卵清蛋白(OVA)诱发哮喘的鼠模型中研究达菲

的活性。该研究中评估对OVA致敏的小鼠中的气道高反应性(AHR)、向BAL和组织中的细胞浸润、血浆总IgE水平、全肺细胞因子水平和杯状细胞增生的影响。

雄性BALB/c小鼠通过皮下、腹膜内、鼻内和气管内途径对卵清蛋白(OVA)致敏。向动物给予载体(0.5％羧甲基纤维素(CMC)/0.25％Tween80；口服)、布地奈德(10mg/kg；口服)或达菲

(1、10或25mg/kg；每日一次；口服)，之后用OVA气管内激发，直到研究结束。

对乙酰甲胆碱(MCh，3mg/kg；静脉内注射)的气道高反应性(AHR)、支气管肺泡灌洗液总白细胞和分类计数、总血浆IgE、全肺嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)、RANTES和IL-4蛋白水平及杯状细胞增生在第二次气管内OVA激发后24、48和72小时进行评估。血浆中总IgE的时程通过ELISA进行测量。RANTES、IL-4和嗜酸性粒细胞趋化因子通过全肺匀浆的ELISA进行测量。PAS(过碘酸希夫)染色用来检测气道内杯状细胞产生的粘液物质。使用PAS染色试剂盒(Polysciences，PA)按照厂商说明书对5μM切片进行PAS染色。每个切片计数20个气道，并将PAS阳性气道表示为计数的气道总数的％。美国专利7,276,529。

实施例9抗病毒剂对用乙酰甲胆碱在狗中诱发的急性实验性哮喘的效果

在一个哮喘动物模型中，可以通过由狗吸入乙酰甲胆碱实验诱发支气管痉挛。

为了完成这些试验，用30mg/kg戊巴比妥钠静脉内注射麻醉体重为19-22kg的健康杂种犬，并插入气管内导管。在开始时，用Harvard通气机保持通气，该通气机也用来递送乙酰甲胆碱，使用或不使用雾化的达菲

溶液。随后，在给药之前和之后对动物连续通气。插入动脉静脉和肺动脉(Swan-Ganz)，并用来获得血样，监测血管压力和使用热稀释法测量心输出量。用DR-8多通道记录仪持续地监测动脉末端肺压力、心电图。使用辐射计ABL-4(Copenhagen)测量动脉血、血红蛋白、pH、PO₂、PCO₂和钾。

在完成手术准备后，使狗血液动力学稳定30分钟。获得几个动脉血样，并调节通气，以使得动脉血气体和pH在生理范围内。

支气管激发程序需要90秒施用雾化的0.5％盐酸乙酰甲胆碱(Sigma)。在治疗动物过程中，通过Harvard呼吸机和微喷雾器施用雾化的达菲

3分钟。另外，5只狗在施用甲基胆碱之后(而不是之前)用达菲处理。

在完成药物吸入后5、15和30分钟进行血液气体测量。支气管激发(bronchoprovocation)或者单独使用乙酰甲胆碱进行(n＝7)，或者在用达菲

预处理后用乙酰甲胆碱进行(n＝7)。

用双尾student非配对t-检验比较用达菲治疗的狗和对照狗的差别，概率水平低于5％将被认为是显著的。美国专利5,858,985。

本发明的范围不受本文以上具体显示和描述的内容所限制。本领域技术人员应当认识到，所述的材料、配置、构造和尺寸的实例有合适的替代选择。本发明说明书中引用和讨论了大量参考文献，包括专利和各种出版物。这些参考文献的引用和讨论只是用来澄清本发明的说明，而不是承认任何参考文献是本文所述发明的现有技术。本说明书中引用和讨论的所有参考文献均通过引用全文并入本文。本文所述内容的变型、修改和其他实现都是本领域普通技术人员能够想到的，而不背离本发明的精神和范围。尽管已经显示和描述了本发明的某些实施方式，但是本领域技术人员将会明白可以在不背离本发明的精神和范围的情况下进行改变和修改。本说明书以上所述的内容只是作为说明，而不是作为限制。

Claims

1.一种治疗患者的哮喘的方法，包括向患者施用治疗有效量的抗病毒剂。

2.权利要求1的方法，其中所述抗病毒剂通过吸入、经鼻、静脉内、口服、皮下、肌肉内或经皮途径施用于患者。

3.权利要求1的方法，其中所述抗病毒剂被配制为用于作为气雾剂递送至患者。

4.权利要求1的方法，其中在施用抗病毒剂后约30分钟至约14天内一秒钟用力呼气量(FEV₁)有至少约10％的提高。

5.权利要求4的方法，其中在施用抗病毒剂后约2小时至约12天内FEV₁有至少约10％的提高。

6.权利要求5的方法，其中在施用抗病毒剂后约1天至约11天内FEV₁有至少约10％的提高。

7.权利要求6的方法，其中在施用抗病毒剂后约2天至约10天内FEV₁有至少约10％的提高。

8.权利要求4的方法，其中在施用抗病毒剂后约30分钟至约14天内FEV₁有至少约20％的提高。

9.权利要求8的方法，其中在施用抗病毒剂后约2小时至约12天内FEV₁有至少约20％的提高。

10.权利要求9的方法，其中在施用抗病毒剂后约1天至约11天内FEV₁有至少约20％的提高。

11.权利要求10的方法，其中在施用抗病毒剂后约2天至约10天内FEV₁有至少约20％的提高。

12.权利要求8的方法，其中在施用抗病毒剂后约30分钟至约14天内FEV₁有至少约30％的提高。

13.权利要求12的方法，其中在施用抗病毒剂后约2小时至约12天内FEV₁有至少约30％的提高。

14.权利要求13的方法，其中在施用抗病毒剂后约1天至约11天内FEV₁有至少约30％的提高。

15.权利要求14的方法，其中在施用抗病毒剂后约2天至约10天内FEV₁有至少约30％的提高。

16.权利要求1的方法，其中在施用抗病毒剂后约30分钟至约14天内最大呼气流速有至少约10％的提高。

17.权利要求16的方法，其中在施用抗病毒剂后约2小时至约12天内最大呼气流速有至少约10％的提高。

18.权利要求17的方法，其中在施用抗病毒剂后约1天至约11天内最大呼气流速有至少约10％的提高。

19.权利要求18的方法，其中在施用抗病毒剂后约2天至约10天内最大呼气流速有至少约10％的提高。

20.权利要求16的方法，其中在施用抗病毒剂后约30分钟至约14天内最大呼气流速有至少约20％的提高。

21.权利要求20的方法，其中在施用抗病毒剂后约2小时至约12天内最大呼气流速有至少约20％的提高。

22.权利要求21的方法，其中在施用抗病毒剂后约1天至约11天内最大呼气流速有至少约20％的提高。

23.权利要求22的方法，其中在施用抗病毒剂后约2天至约10天内最大呼气流速有至少约20％的提高。

24.权利要求16的方法，其中在施用抗病毒剂后约30分钟至约14天内最大呼气流速有至少约30％的提高。

25.权利要求24的方法，其中在施用抗病毒剂后约2小时至约12天内最大呼气流速有至少约30％的提高。

26.权利要求25的方法，其中在施用抗病毒剂后约1天至约11天内最大呼气流速有至少约30％的提高。

27.权利要求26的方法，其中在施用抗病毒剂后约2天至约12天内最大呼气流速有至少约30％的提高。

28.权利要求1的方法，其中所述抗病毒剂是神经氨酸酶抑制剂。

29.权利要求28的方法，其中所述神经氨酸酶抑制剂选自奥司他韦、扎那米韦和帕拉米韦。

30.权利要求1的方法，其中所述抗病毒剂是病毒融合抑制剂。

31.权利要求1的方法，其中所述抗病毒剂是蛋白酶抑制剂。

32.权利要求1的方法，其中所述抗病毒剂是DNA聚合酶抑制剂。

33.权利要求1的方法，其中所述抗病毒剂是信号转导抑制剂。

34.权利要求1的方法，其中所述抗病毒剂是核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)。

35.权利要求1的方法，其中所述抗病毒剂是非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)。

36.权利要求1的方法，其中所述抗病毒剂是干扰素。

37.一种用于治疗患者的哮喘的药物组合物，其包含治疗有效量的抗病毒剂。

38.权利要求37的药物组合物，其被配制为用于作为气雾剂将抗病毒剂递送至患者。

39.权利要求37的药物组合物，其中该药物组合物通过吸入、经鼻、静脉内、口服、皮下、肌肉内或经皮途径施用。

40.权利要求37的药物组合物，其中所述抗病毒剂选自神经氨酸酶抑制剂、病毒融合抑制剂、蛋白酶抑制剂、DNA聚合酶抑制剂、信号转导抑制剂、逆转录酶抑制剂和干扰素。

41.一种制品，其包括用于治疗哮喘的抗病毒剂的药物制剂和指示该药物制剂应由哮喘患者吸入的印刷材料。

42.权利要求41的制品，其中所述抗病毒剂选自神经氨酸酶抑制剂、病毒融合抑制剂、蛋白酶抑制剂、DNA聚合酶抑制剂、信号转导抑制剂、逆转录酶抑制剂和干扰素。