CZ2002591A3 - Pevný produkt, prostředek, vodný roztok a zaváděcí systém - Google Patents
Pevný produkt, prostředek, vodný roztok a zaváděcí systém Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2002591A3 CZ2002591A3 CZ2002591A CZ2002591A CZ2002591A3 CZ 2002591 A3 CZ2002591 A3 CZ 2002591A3 CZ 2002591 A CZ2002591 A CZ 2002591A CZ 2002591 A CZ2002591 A CZ 2002591A CZ 2002591 A3 CZ2002591 A3 CZ 2002591A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- mas
- solution
- less
- aqueous solution
- dimethyl
- Prior art date
Links
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 title claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 8
- 239000012265 solid product Substances 0.000 title claims description 5
- -1 preparation Substances 0.000 title description 2
- LFQXEZVYNCBVDO-PBJLWWPKSA-N 4,4-dimethyl-5alpha-cholesta-8,14,24-trien-3beta-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@@H](CCC=C(C)C)C)CC=C21 LFQXEZVYNCBVDO-PBJLWWPKSA-N 0.000 claims description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 26
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 25
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 7
- 239000006104 solid solution Substances 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 abstract description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 40
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 22
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 210000004508 polar body Anatomy 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- AWBZPJQUWZBRII-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Hydroxy-10r.13c-dimethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexyl)-(5tH)-Delta8.14-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(C)CCCC(C)C)CC=C21 AWBZPJQUWZBRII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- AWBZPJQUWZBRII-CXDHQSPESA-N 5alpha-cholesta-8,14-dien-3beta-ol Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C[C@@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCCC(C)C)CC=C21 AWBZPJQUWZBRII-CXDHQSPESA-N 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical group N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 108010006578 follitropin alfa Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940057854 gonal f Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000000786 liquid-assisted grinding Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical group 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Pevný produkt, prostředek, vodný roztok a zaváděcí systém.
Oblast techniky
Popisuje se pevný produkt, který se může použít ve spojení s oplodněním in vitro.
Dosavadní stav techniky
Našlo se několik látek aktivujících meiózu (označených MAS). V případě, že se MAS udržuje v kultivačném médiu, které obsahuje oocyty, oocyty se stávají náchylné k dělení. Avšak hlavní problém s použitím MAS je, že vykazují velmi nízkou rozpustnost.
Podstata vynálezu
Předmětnou věcí vynálezu je vývoj prostředku, který obsahuje MAS nebo jejich deriváty, které se mohou rozpustit ve vodném médiu bez dalších fyzikálních vlivů, jako je zahřívání, míchání nebo aplikace ultrazvuku.
Rozpustnost výhodného MAS, to je FF-MAS, ve vodě je velmi nízká, to znamená přibližně 20 pikogramů na mililitr (což odpovídá 2xl05 gg/ml), a v ethanolu je rozpustnost podstatně vyšší. To znamená přibližně 4 mg/ml. Na základě předchozího zkoumání nejvyšší rozpustnost FF-MAS ve směsi ethanolu a vody (1:2,5) je přibližně 0,4 mg/ml. Několik dalších MAS vykazuje přibližně stejnou rozpustnost ve vodě.
Překvapivě se zjistilo, že pevný prostředek obsahující MAS a určité doplňky vykazuje dobrou rozpustnost ve vodě. Doplňky jsou komponenty, které, když se přidají do MAS, poskytují prostředek, který se může použít při přípravě vodných roztoků obsahujících MAS. Příklady uvedených doplňků jsou ve vodě rozpustné proteiny, jako je sérový albumin, například lidský sérový albumin (zde označený jako HSA), může být
99 • 9 · • 9 9 9
9 9 • 9 9
99 »· o*·
9 9
9 9
9 9 9
9 9 >
9« 99
99
9 9 9
9 9
9 9
9 9
9*99 v rekombinantní formě, enzymy a fosferglycerider, jako je fosfatidylethanolamin, fosfatidylcholin, fosfatídylserin, fosfatidylnositol.
Prostředky podle vynálezu vykazují obsah vody pod 10 %, upřednostňuje se nižší než 5 %, více se upřednostňuje nižší než 1 % (hmotnostní).
Prostředky podle vynálezu vykazují obsah organického rozpouštědla nižší než 10 %, upřednostňuje se nižší než 5 %, více se upřednostňuje nižší než 1 % (hmotnostní).
Prostředky podle vynálezu vykazují obsah MAS nižší než 1 %, upřednostňuje se nižší než 0,1 %, více se upřednostňuje nižší než 0,05 % (hmotnostní).
Prostředky podle vynálezu vykazují obsah doplňků vyšší než 99 %, více se upřednostňuje vyšší než 99,9 %.
Výhodné prostředky podle vynálezu jsou takové, které se mohou ošetřit vodným médiem, které neobsahuje žádné nebo organické rozpouštědlo nebo nízkou koncentraci organického rozpouštědla, a výsledkem je roztok obsahující MAS. Přednostně tato vodná média obsahují méně než 1 %, přednostně méně než 0,5 %, výhodnější je méně než 0,1 % organického rozpouštědla (hmotnostní).
Dříve úsilí připravit prostředky splňující tento požadavek selhalo.
Termín MAS označuje sloučeniny, které zprostředkovaly meiózu oocytů. MAS jsou sloučeniny, které v testu popsaném v příkladu 1 dále v textu, vykazují procento zárodečných měchýřků (zde označených jako GVB) podstatně vyšší než kontrolní stanovení. Preferované MAS jsou takové, které vykazují procento GVB alespoň 50 %, upřednostňuje se alespoň 80 %. Příklady preferovaných MAS jsou 4,4-dimethyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3P~ol (označuje se jako FF-MAS), (4,4-dimethyl-5a-cholest-8,14,24-trien-3p-ol)-hemisukcinát, (5a-cholest-8,14-άίθη-3β-ο1, 5a-cholest-8,14-dien-3p-ol)-hemisukcinát, (20S)-cholest-5-en-3p,20-diol, N-(methionin)amid kyseliny 3β4« *4 • 4
4 4
4 4 • 4
4« • 4 · • 4« • 4 4
4 4
444* • 4
44
4
4
4
-hydroxy-4,4-dimethyl-5a-chola-8,14-dien-24-ové a cholest-5—en—16β—ol. Další příklady MAS se popisují v dokumentech WO 96/00 235, WO96/27 658, WO 97/00 884, WO 98/28 323, WO 98/54 965 a WO 98/55 498, více specificky v příkladu 1 vynálezu.
Jeden způsob přípravy prostředku podle vynálezu je smíchání roztoku MAS v organickém rozpouštědle, jako je ethanol s vodným roztokem doplňku a pak se čeká, až se rozpouštědlo odpaří. Odpaření je možné urychlit použitím kontinuálního toku vzduchu nad produktem, vakua nebo libovolné přijatelné metody odstranění rozpouštědla. Prodávaný produkt může být zaváděcí systém, který má jednu nebo více prohloubenin. Tyto prohloubeniny jsou mutačně označené prohloubeniny. Alespoň jedna z těchto prohloubenin obsahuje prostředek podle vynálezu. Vhodný způsob umístění pevného MAS je, že se do prohloubenin umístí roztok obsahující MAS a doplněk a pak se roztok odpaří. Pak se odpařený zbytek, to je prostředek podle vynálezu, umístí přímo do prohloubeniny v uvedeném zaváděcím systému.
Poněvadž látka podle vynálezu se může použít při ošetření oocytů, je důležité, že vynález nezahrnuje složky, které negativně ovlivňují oocyty.
Jeden způsob použití prostředku podle vynálezu je rozpustit ho ve vodném roztoku, jako je voda a pak, je-li to nutné, přidat jiné složky, které mohou mít pozitivní vliv na zrání oocytů.
Další způsob použití prostředku je rozpustit ho v médiu, které se v normálním případě používá pro zrání in vitro.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: Způsob stanovení, zda látka je MAS nebo ne Oocyty se získaly z nedospělých samic myší (C57BL/6JxDBA/2J Fl, Bomholtgaard, Dánsko), které mají hmotnost 13 až 16 gramů a udržují se při regulované teplotě to · (20 až 22 °C), na světle (světlo od 6 do 18 hodin) a při relativní vlhkosti (50 až 70 %). Myším se zavedla intraperitoneální injekce s 0,2 ml gonatropinu (Gonal-F,
Serono) obsahující 20 jednotek FSH a o 48 hodin později se zvířata usmrtila cervikální dislokací. Z těla se vyňaly vaječníky a oocyty se izolovaly do média Hx (popisuje se dále v textu) tak, že se pod mikroskopem manuálně porušily folikuly za použití jehel s hrotem 27. Kulovité oocyty vykazující neporušené zárodečné měchýřky (označený jako GV) se rozdělily na oocyty uzavřené ve vyklenutí (označené CEO) a holé oocyty (označené NO) a umístily se do α-minimálního esenciálního média (α-MEM bez ribonukleosidů, Gíbco BRL, kat. č. 22 561) doplněném 3 mg/ml bovinního sérového albuminu (BSA, Sigma kat. č.A-7030), 5 mg/ml lidského sérového albuminu (HSA, State Sérum Institute, Dánsko), 0,23 mM pyruvátem (Sigma, kat. č. S8636), 2 mM glutaminem (Flow, kat. č. 16-801), 100 jednotek penicilinu v jednom mililitru a 100 gg/ml streptopycinu (Flow, kat. č. 16-700). Toto médium se doplnilo 3 mM hypoxanthinem (Sigma, kat. č. H-9377) a označilo se médium Hx.
Oocyty se promyly třikrát v médiu Hx. Oocyty jednotné velikosti se rozdělily do skupin CEO a NO. CEO a NO se kultivovaly na destičkách, které obsahují 4 prohlubně (Nunclon, Dánsko), kde každá prohlubeň obsahovala 0,4 ml média Hx a látku v koncentraci 10 μΜ. Současně se 3 testovanými prohlubněmi (v prohlubni se nachází 35 až 45 oocytů a testovaná látka) se kultivovala jedna kontrolní prohlubeň (to je 35 až 45 oocytů kultivovaných ve shodném médiu bez přidání testované látky).
Oocyty se kultivovaly ve vlhké atmosféře 5 % CO2 na vzduchu po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C. Na konec kultivačního období se mikroskopem (Wildt. Leica MZ 12) určil počet oocytů s GV, GVB a s polárním tělískem (označuje se PB) . Procento GVB definované jako procento oocytů procházející fází GVB ku celkovému počtu oocytů v prohlubní se vypočítalo jako:
• · It ·· · · · · · · · · ···· ·· · · · · · • · ·· . ζ J ·. . ζ í .
Σ···*······· ·· ·· ·· ·· ·· ···· % GVB = ((počet GVB + počet PB)/celkový počet oocytů)xlOO.
Příklad 2: Způsob stanovení, zda lze látku použít jako doplněk v prostředcích podle vynálezu nebo ne
Doplněk pro látky FF-MAS se charakterizují: zlepšenou rozpustností FF-MAS v ethanolu/vodě (1:2,5 (obj em)) zaručují čirý roztok FF-MAS po rekonstituci látky v médiu aMEM když se testují oocyty získané z nezralých samic myší je zajištěno alespoň 50 %, přednostně 80 % GVB.
Příprava saturovaného ethanolového roztoku FF-MAS. Smíchá se vodní roztok doplňků v poměru 1:2,5. Vizuálně se určí, zda je v roztoku dostupný nadbytečný FF-MAS. Roztok se míchá po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Roztok se filtruje přes filtr s póry o velikosti 0,22 mikrometrů, aby se stanovil obsah FF-MAS použitím HPLC a vypočítala se rozpustnost. 350 mikrolitrů roztoku se přeneslo na destičku se čtyřmi prohlubněmi a prohlubně se odpařily do sucha při teplotě místnosti. Přidalo se 500 mikrolitrů média α-MEM (Gibcobal). Jestliže se po půl hodině získal čirý roztok, látka se testovala v přítomnosti oocytů získaných u nedospělých samic myší. Získané procento GVB je alespoň 50 %, upřednostňuje se 80 % (popisuje se v příkladu 1).
Příklad 3: Prostředek obsahující lidský sérový albumin (HSA)
V tomto příkladu se popisuje příprava třech produktů.
S odkazem na tabulku dále v textu zásobní roztok FF-MAS používaný při přípravě produktu 1, 2, a 3 obsahoval 50, 500 a 3 330 gg/ml FF-MAS. V případě každého produktu zásobní roztok HSA obsahoval 20 % HSA. Množství uvedených zásobních roztoků se uvádí v tabulce. Například při přípravě produktu 1 se smíchalo 400 μΐ zásobního roztoku FF-MAS s 1 000 μΐ zásobního roztoku HSA. Po smíchání těchto zásobních roztoků jsou roztoky • · ·· ·· 9 · · 9 « · · · * · 9 • · · · · · · čiré a objevilo se srážení. Po smíchání se množství uvedené v tabulce přeneslo na destičku se čtyřmi prohlubněmi (Nuclon, Dánsko). Například v případě produktu 1 se 350 μΐ směsi přeneslo na destičky a roztok se odpařil do sucha při teplotě místností. Po odpaření se některé produkty jeví na destičce jako opalescentní čirý film, jiné nejsou viditelné lidským okem. Nejvyšší koncentrace FF-MAS rozpuštěné v tomto příkladu je 0,95 mg/ml.
Před použitím se přidalo 500 μί média a-MEM (Gibcobal) a během půl hodiny při teplotě místnosti se získal čirý roztok FF-MAS a HSA.
destička se 4 prohlubněmi č. 1 | destička se 4 prohlubněmi č. 2 | destička se 4 prohlubněmi č. 3 | |
roztok FF-MAS v ethanolu, 50 pg/ml | 4 00 μΐ | ||
roztok FF-MAS v ethanolu, 500 gg/ml | 400 μΐ | ||
roztok FF-MAS v ethanolu, 3,33 mg/ml | 450 μΐ | ||
roztok HSA ve vodě, 20 % | 1 000 μΐ | 1 000 μΐ | 1 125 μΐ |
množství přenesené na destičku | 350 μΐ | 350 μΐ | 525 μΐ |
Poměr mezi FF- MAS a HSA | 1:10 000 | 1:1 000 | 1:150 |
forma roztoku před odpařením | čirý, bezbarvý roztok bez srážení |
• · · • · · · • 9l
Příklad 4: Prostředky obsahující lidský sérový albumin (HSA)
Analogicky jako v předešlém příkladu se připravily roztoky FF-MAS ve směsi voda/ethanol obsahující HSA v koncentracích uvedených dále v textu smícháním při teplotě místnosti. Po přípravě se tyto roztoky vyčeřily a nepozorovala se žádná sraženina. Roztoky se přenesly na destičky se 4 prohlubněmi (Nuclon, Dánsko). Nakonec se roztok odpařil do sucha při teplotě místnosti.
Před použitím se přidalo 500 pl média α-MEM (Gibcobal) a během půl hodiny při teplotě místnosti se získal čirý roztok FF-MAS a HSA.
Prostředky se testovaly na oocytech, které se získaly z nedospělých myší. Hodnoty GVB vyjádřené v procentech v případě jednotlivých prostředků se uvádějí v tabulce dále v textu.
destička se 4 prohlubněmi č. 1 | destička se 4 prohlubněmi č. 2 | destička se 4 prohlubněmi č. 3 | |
roztok FF-MAS v ethanolu, 5,22 pg/ml | 100 pl | ||
roztok FF-MAS v ethanolu, 2 6,1 pg/ml | 100 pl | ||
roztok FF-MAS v ethanolu, 261 mg/ml | 100 pl | ||
roztok HSA ve vodě, 20 % | 250 pl | 250 pl | 250 pl |
poměr mezi FF- MAS a HSA | 1:10 000 | 1:2 000 | 1:200 |
teoretické | 0,5 μg | 2,5 pg | 25 pg |
• ·
množství FF-MAS v prohlubni | |||
%GVB | 72 | 93 | 91 |
Příklad 5; Prostředek obsahující lidský sérový albumin (HSA)
Analogicky, jak se popisuje v předcházejícím příkladu, se připravily roztoky FF-MAS ve směsi voda/ethanol obsahující HSA v koncentracích uvedených dále v příkladu mícháním při teplotě místnosti. Po přípravě se roztok vyčeřil a nepozorovalo se žádné srážení. Roztoky se přenesly na destičku se čtyřmi prohlubněmi (Nuclon, Dánsko). Nakonec se roztoky odpařily do sucha při teplotě místnosti.
Před použitím se přidalo 500 μΐ média a-MEM (Gobcobal) a během půl hodiny se získal čirý roztok FF-MAS a HSA.
Koncentrace FF-MAS po rekonstituci se stanovila pomocí HPLC a výsledky jsou uvedeny dále v textu. Prostředky se testovaly na oocytech získaných z nedospělých samic myší. Hodnoty GVB vyjádřená v procentech v případě jednotlivých prostředků jsou uvedeny dále v textu.
destička se 4 prohlubně · mi č. 1 | destička se 4 prohlub - němi č. 2 | destička se 4 prohlub - němi č. 3 | destička se 4 prohlub- němi č. 4 | destič ka se 4 pro - hlubně- mi č. 5 | |
roztok FF-MAS v ethanolu, 26,1 μς/ιηΐ | 100 μΐ | ||||
roztok FF-MAS v ethanolu, 7,83 μ9/ιη1 | 100 μΐ | ||||
roztok FF-MAS v ethanolu, 5,22 mg/ml | 100 μΐ | ||||
roztok FF-MAS v ethanolu, 2,5 μς/ιηΐ | 100 μΐ | ||||
roztok FF-MAS | 100 |
• φ φ · φ φ φφ φφ
• Φ φ · ·· φφφφ
v ethanolu, 0,5 μς/ml | μΐ | ||||
roztok HSA ve vodě, 20 % | 250 μΐ | 250 μΐ | 250 μΐ | 250 μΐ | 250 μΐ |
poměr mezi FF-MAS a HSA | 1:100 000 | 1:20 000 | 1:10 000 | 1:6 667 | 1:2 000 |
teoretické množství FF- MAS v prohlubní | 0,05 μς | 0,25μς | 0,5μς | 0,75μρ | 2,5μρ |
procento GVB | 13 | 52 | 78 | 82 | 90 |
• · ··♦ ·
-5PI ·· ·· ·'·· · · · · · · ♦ · ···· · · · · · · in ······· · · · · ·
-L «········*·
Claims (9)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Pevný produkt, vyznačující se tím, že obsahuje 4,4-dimethyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3P~ol a lidský sérový albumin v rekombinantní formě.
- 2. Prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsah vody je nižší než 10 %, s výhodou nižší než 5 %, výhodnější je nižší než 1 % (hmotnostní).
- 3. Prostředek podle libovolného z předchozích nároků, vyznačující se tím, že obsah organického rozpouštědla je nižší než 10 %, s výhodou nižší než 5 %, výhodněji nižší než 1 % (hmotnostní).
- 4. Prostředek podle libovolného z předchozích nároků, vyznačující se tím, že obsah 4,4-dimethyl-5oc-cholesta-8, 14,24-trien-3p-ol je nižší než 50 %, s výhodou nižší než 20 %, výhodnější je nižší než 10%, nejvýhodnější je nižší než 5 % (hmotnostní).
- 5. Prostředek podle libovolného z předchozích nároků, vyznačující se tím, že se může použít při přípravě vodného roztoku s charakteristikami uvedenými v libovolném z následujících nároků.
- 6. Vodný roztok 4,4-dimethyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3p-olu, vyznačující se tím, že obsah 4,4-dimethyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3P~olu je nižší než 0,001 μς/ml, s výhodou alespoň 0,01 pg/ml, dokonce výhodněji alespoň 0,5 pg/ml.
- 7. Vodný roztok 4,4-dimethyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3p-olu podle předchozího nároku, vyznačuj ící se tím, že obsah 4,4-dimethyl-5a-cholesta-8,14,24-trien-3P~olu není vyšší než 0,1 g/ml, výhodněji není vyšší než 0,01 g/ml.
- 8. Vodný roztok 4 , 4-dimethyl-5oc-cholesta-8,14,24-trien-3p-olu podle libovolného ze dvou předchozích nároků, vyznačující se tím, že obsah organického rozpouštědla je nižší než 0,1 %, výhodněji nižší než 0,05 %, nejvýhodněji nižší než 0,01 %.
- 9. Zaváděcí systém, vyznačující se tím, že má prohloubeninu obsahující pevný produkt nebo roztok podle libovolného z předchozích nároků.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DKPA199901308 | 1999-09-16 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ2002591A3 true CZ2002591A3 (cs) | 2002-08-14 |
Family
ID=8103409
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ2002591A CZ2002591A3 (cs) | 1999-09-16 | 2000-09-11 | Pevný produkt, prostředek, vodný roztok a zaváděcí systém |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6844313B1 (cs) |
EP (1) | EP1216059B1 (cs) |
JP (1) | JP2003509365A (cs) |
KR (1) | KR100757909B1 (cs) |
CN (1) | CN1222319C (cs) |
AT (1) | ATE306942T1 (cs) |
AU (1) | AU781994B2 (cs) |
BR (1) | BR0014058A (cs) |
CA (1) | CA2382908A1 (cs) |
CZ (1) | CZ2002591A3 (cs) |
DE (1) | DE60023324T2 (cs) |
ES (1) | ES2252048T3 (cs) |
HU (1) | HUP0202630A3 (cs) |
IL (1) | IL148234A0 (cs) |
MX (1) | MXPA02002439A (cs) |
NO (1) | NO323694B1 (cs) |
PL (1) | PL202224B1 (cs) |
RU (1) | RU2263516C2 (cs) |
UA (1) | UA78183C2 (cs) |
WO (1) | WO2001019354A2 (cs) |
ZA (1) | ZA200201383B (cs) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002537801A (ja) * | 1999-02-26 | 2002-11-12 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 着床率を増大させる減数分裂活性化ステロール |
CN1222319C (zh) | 1999-09-16 | 2005-10-12 | 诺沃挪第克公司 | 用于体外受精的组合物 |
WO2001062258A2 (en) * | 2000-02-25 | 2001-08-30 | Schering Aktiengesellschaft | Improvement of implantation rate using ff-mas |
US6988613B2 (en) | 2001-02-06 | 2006-01-24 | Novo Nordisk A/S | Composition for IVF |
EP1245572A1 (en) | 2001-03-26 | 2002-10-02 | Schering Aktiengesellschaft | Aminosterol compounds, their use in the preparation of meiosis-regulating medicaments and method for their preparation |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4175074A (en) | 1976-08-23 | 1979-11-20 | Deshmukh Arvind D | Serum-soluble cholesterol compounds and method for their preparation |
US4751219A (en) | 1985-02-05 | 1988-06-14 | Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek | Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides |
AU4312489A (en) * | 1988-09-23 | 1990-04-18 | Cetus Corporation | Lipid microemulsions for culture media |
DE4221880A1 (de) | 1992-07-03 | 1994-01-05 | Alfatec Pharma Gmbh | Feste und flüssige Lösungen von schwer wasserlöslichen Arzneistoffen |
DE69329295T2 (de) * | 1992-12-02 | 2001-03-15 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Wachstumhormon enthaltende mikrosphaeren mit kontrollierter freisetzung |
US5716777A (en) * | 1994-06-23 | 1998-02-10 | Novo Nordisk A/S | Regulation of meiosis using sterols |
US6281015B1 (en) * | 1994-12-16 | 2001-08-28 | Children's Medical Center Corp. | Localized delivery of factors enhancing survival of transplanted cells |
JPH11501806A (ja) | 1995-03-06 | 1999-02-16 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 減数分裂の刺激 |
EP0857173B1 (en) | 1995-06-23 | 2003-11-19 | Novo Nordisk A/S | Meiosis regulating compounds |
GB9625175D0 (en) * | 1996-12-04 | 1997-01-22 | Medi Cult As | Serum-free cell culture media |
KR20000069616A (ko) * | 1996-12-20 | 2000-11-25 | 한센 핀 베네드, 안네 제헤르, 웨이콥 마리안느 | 감수분열 조절화합물 |
PL337188A1 (en) | 1997-06-04 | 2000-08-14 | Akzo Nobel Nv | Derivatives of 17beta - allyloxy (thio) alkyl - androstane for modulation of meiosis |
HUP9701554D0 (en) | 1997-09-18 | 1997-11-28 | Human Oltoanyagtermeloe Gyogys | Pharmaceutical composition containing plazma proteins |
KR20010043828A (ko) | 1998-05-26 | 2001-05-25 | 에바-마리아 시마-메이어, 얼설라 멜져, 마거, 하르트만 | cAMP-증강 화합물 단독 또는 감수분열-자극 화합물하나 이상과의 조합에 의한 불임 치료 방법 |
JP2002537801A (ja) * | 1999-02-26 | 2002-11-12 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 着床率を増大させる減数分裂活性化ステロール |
CN1222319C (zh) | 1999-09-16 | 2005-10-12 | 诺沃挪第克公司 | 用于体外受精的组合物 |
-
2000
- 2000-09-11 CN CNB008128820A patent/CN1222319C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-11 EP EP00958274A patent/EP1216059B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-11 WO PCT/DK2000/000500 patent/WO2001019354A2/en active IP Right Grant
- 2000-09-11 IL IL14823400A patent/IL148234A0/xx unknown
- 2000-09-11 ES ES00958274T patent/ES2252048T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-09-11 AU AU69850/00A patent/AU781994B2/en not_active Ceased
- 2000-09-11 CZ CZ2002591A patent/CZ2002591A3/cs unknown
- 2000-09-11 KR KR1020027003526A patent/KR100757909B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 DE DE60023324T patent/DE60023324T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-09-11 JP JP2001522989A patent/JP2003509365A/ja active Pending
- 2000-09-11 BR BR0014058-9A patent/BR0014058A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-09-11 PL PL353968A patent/PL202224B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 HU HU0202630A patent/HUP0202630A3/hu unknown
- 2000-09-11 MX MXPA02002439A patent/MXPA02002439A/es active IP Right Grant
- 2000-09-11 CA CA002382908A patent/CA2382908A1/en not_active Abandoned
- 2000-09-11 RU RU2002109794/15A patent/RU2263516C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-09-11 AT AT00958274T patent/ATE306942T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-09-14 US US09/661,696 patent/US6844313B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-11-09 UA UA2002032077A patent/UA78183C2/uk unknown
-
2002
- 2002-02-19 ZA ZA200201383A patent/ZA200201383B/en unknown
- 2002-03-15 NO NO20021309A patent/NO323694B1/no not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
NO20021309D0 (no) | 2002-03-15 |
AU781994B2 (en) | 2005-06-23 |
NO20021309L (no) | 2002-03-15 |
DE60023324D1 (de) | 2005-11-24 |
US6844313B1 (en) | 2005-01-18 |
PL353968A1 (en) | 2003-12-15 |
KR20020032593A (ko) | 2002-05-03 |
ATE306942T1 (de) | 2005-11-15 |
DE60023324T2 (de) | 2006-07-20 |
IL148234A0 (en) | 2002-09-12 |
JP2003509365A (ja) | 2003-03-11 |
KR100757909B1 (ko) | 2007-09-11 |
AU6985000A (en) | 2001-04-17 |
PL202224B1 (pl) | 2009-06-30 |
ES2252048T3 (es) | 2006-05-16 |
WO2001019354A2 (en) | 2001-03-22 |
CN1373675A (zh) | 2002-10-09 |
MXPA02002439A (es) | 2002-07-30 |
EP1216059A2 (en) | 2002-06-26 |
EP1216059B1 (en) | 2005-10-19 |
CN1222319C (zh) | 2005-10-12 |
RU2263516C2 (ru) | 2005-11-10 |
WO2001019354A3 (en) | 2001-06-14 |
HUP0202630A2 (hu) | 2002-12-28 |
BR0014058A (pt) | 2004-03-30 |
HUP0202630A3 (en) | 2004-06-28 |
NO323694B1 (no) | 2007-06-25 |
CA2382908A1 (en) | 2001-03-22 |
UA78183C2 (en) | 2007-03-15 |
ZA200201383B (en) | 2002-11-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Manjunath et al. | Role of seminal plasma phospholipid-binding proteins in sperm membrane lipid modification that occurs during capacitation | |
Therien et al. | Major proteins of bovine seminal plasma modulate sperm capacitation by high-density lipoprotein | |
Miele et al. | Uteroglobin: structure, molecular biology, and new perspectives on its function as a phospholipase A2 inhibitor | |
Takahashi et al. | Müllerian inhibiting substance as oocyte meiosis inhibitor | |
EP0509761A1 (en) | Transdermal composition containing selegiline | |
US20070078111A1 (en) | LPA2 receptor agonist inhibitors of CFTR | |
Bastida et al. | Influence of ovarian ornithine decarboxylase in folliculogenesis and luteinization | |
CZ2002591A3 (cs) | Pevný produkt, prostředek, vodný roztok a zaváděcí systém | |
Miele et al. | Inhibition of phospholipase A 2 by uteroglobin and antiflammin peptides | |
US20050282729A1 (en) | Crisp polypeptides as contraceptives and inhibitors of sperm capacitation | |
US6277813B1 (en) | Colostrum derived growth factor | |
Petr et al. | Cyclopiazonic acid, an inhibitor of calcium-dependent ATPases, induces exit from metaphase I arrest in growing pig oocytes | |
US6988613B2 (en) | Composition for IVF | |
Levy et al. | A gonadotropin-releasing hormone (GnRH) antagonist distinguishes three populations of GnRH analog-responsive cells in human and rat pituitary in vitro and produces an acute increase in intracellular Ca2+ concentration without inducing gonadotropin secretion | |
Botella et al. | Steroid regulation of Na+/K+-ATPase activity in the rat kidney: effect of a new 19-nor-progestagen | |
TWI281404B (en) | Composition for IVF | |
Yu et al. | Regulation of a uterine 250 kDa protein by estradiol and antiestrogens | |
ES2301627T3 (es) | Envase con bajo contenido de oxigeno que contiene ff-mas. | |
Smith et al. | Hexosamine in Bombyx mori silk | |
Dohi et al. | Post nephrectomy increase in serum ribonuclease activity after total hepatectomy or nitrogen mustard derivatives administration | |
JP2000143515A (ja) | 湿疹・皮膚炎群治療剤 | |
JP2004506006A (ja) | 輸送剤としてのステロイドホルモン |