CZ20012712A3

CZ20012712A3 - Karbamátové deriváty diaryl-1,3,4-oxadiazolonu

Info

Publication number: CZ20012712A3
Application number: CZ20012712A
Authority: CZ
Inventors: Piyasena Hewawasam; Xi Chen; John E. Starrett Jr.
Original assignee: Bristol-Myers Squibb Company
Priority date: 1999-01-29
Filing date: 2000-01-20
Publication date: 2001-10-17
Also published as: PL349097A1; CN1336926A; WO2000044745A1; HUP0200089A3; JP2002535402A; TR200102070T2; AU771471B2; CN1133636C; CA2358964A1; BR0007255A; AU2970000A; NO20013715L; EP1150978A1; IL144540A0; ZA200104304B; US6162817A; ID29269A; NZ512077A; EP1150978A4; NO20013715D0

Description

Předkládaný vynález se týká nových karbamátových oxadiazolonových derivátů sloučeniny 1,3,4-oxadiazol-2(3H)-onu, která je modulátorem vysoce vodivých kalciem aktivovaných draselných kanálů (BK), které jsou užitečné pro ochranu nervových buněk před onemocněními vznikajícími v důsledku dysfunkce buněčné membránové polarizace vodivosti. Předkládaný vynález také poskytuje způsob léčby novými substituovanými oxadiazolonovými deriváty a jejich farmaceutickými deriváty.

Dosavadní stav techniky

Mozková mrtvice je v současnosti ve Spojených státech a v Evropě uznávaná jako třetí vedoucí příčina invalidity a úmrtí dospělých. V posledních deseti letech bylo sledováno několik terapeutických přístupů k minimalizaci mozkového poškození v důsledku mozkové mrtvice. Tyto přístupy zahrnovaly použití inhibitorů AMPA/kainátu, N-metyl-D-aspartátu (NMDA) a inhibitorů zpětného vychytávání adenosinu. Cílem předkládaného vynálezu je poskytnout nové sloučeniny, které by modulovaly draselné kanály, zejména vysoce vodivé kalciem aktivované draselné (BK) kanály, a které by byly užitečné pro snížení neuronálního poškození během ischemických stavů nebo epizody mozkové mrtvice. Draselné kanály hrají klíčovou roli v regulaci potenciálu buněčné membrány a v modulaci buněčné excitability. Draselné kanály jsou regulovány napětím, buněčným metabolismem, kalciovými ionty a procesy zprostředkovanými receptory (Cook NS. Trends in Pharmacol Sciences 9, 21-28 (1988), a Quast U a Cook NS. Trends in Pharmacol Sciences 10, 431-435 (1989). Kalciem aktivované draselné (K_a) kanály jsou odlišnou skupinou iontových kanálů, které ke své aktivitě jsou závislé na intracelulárních kalciových iotech. Aktivita K_Ca kanálů je regulována intracelulárním Ca²⁺, membránovým potenciálem a fosforylací. Na základě jejich vodivostí pro jeden kanál v symetrických K⁺ roztocích jsou K_Ca kanály rozdělovány do 3 podtříd: vysoce vodivé (BK) nad 150 pS; středně vodivé 50-150 pS; málo vodivé pod 50 pS. (pS znamená pikosiemens, jednotku elektrické vodivosti). Vysoce vodivé kalciem aktivované draselné (BK) kanály jsou přítomny v mnoha vzrušivých buňkách zahrnujících neurony, srdeční buňky a různé typy buněk hladkého svalstva (Singer JJ, a Walsh JV. Pflugers Archiv, 408, strany 98-111 (1987); Baró I a Escande D. Pflugers Archiv, 414 (Suppl. 1), strany S168-S170 (1989-); a Ahmed F et al., Br. J. Pharmacol. 83, strany 227-233 (1984).

Draselné ionty hrají dominantní membránového potenciálu u většiny transmembránového napětí blízkého K⁺okolo -90 mV. Bylo prokázáno buněčný draslíku Pharmacol vykazuj í stimulům.

Ca²⁺, omezují depolarizaci a vstup kalcia a mohou být účinné v blokování poškozujících stimulů. Proto hyperpolarizace prostřednictvím otevření BK kanálů ischemických podmínek vést k ochraně nervových buněk.

roli v kontrole klidového vzrušivých buněk a v udržení rovnovážnému potenciálu (E_k) , že otevření draselných kanálů posunuje membránový potenciál směrem k membránovému potenciálu (E_k), což vede k hyperpolarizaci buňky (Cook NS, Trends in Sciences 9, strany 21-28 (1988). Hyperpolarizované buňky nižší odpověď k potenciálně poškozujícím depolarizujícím BK kanály, které jsou regulovány napětím i intracelulárním omezují depolarizaci v blokování prostřednictvím obzvláště buněčná může za

Role draselných kanálů pro činnost hladkého svalstva močového měchýře je diskutována S Triveldim et Biochemical and Biophysical Research Communications, 2, strany 404-409. Byla zaznamenána celá řada přirozeně se vyskytujících sloučenin s aktivitou Avena pyron extrahovaný z Avena sativa - běžného použití techniky lipidové dvojvrstvy identifikován otevírající BK kanál (přihláška International Patent 93/08800, publikovaná 13. políček bylo zjištěno, aktivované draselné kanály laevis lidského časopise 213, č.

(Koh al. v (1995), syntetických a otevírající BK.

ovsa - byl za jako látka

Application WO testu zevních ovlivňuje Ca²⁺vláken Xenopus

DS et al. Neuroscience Lett 165, strany 167-170 (1994).

května, 1993). Za použití že flavonoid Phloretin myelinizovaných nervových

Patent června

US

1976

3971803 autorů S Rosenberger a K Schwarzenbach z 27. se týká sloučenin definovaných Vzorcem (i):

kde

R₂ je alkyl, cykloalkyl nebo aralkyl; R₂ je vodík nebo R_x;

(i)

R₃ je vodík nebo' Ci_₄ alkyl;

Y a Z jsou nezávisle O nebo S;

R₄ je buďto (1), pokud m=l, C_x.₈ alkylen, -C_xH_2x-q-C_yH_2y- (Q je Q nebo S, x a y jsou celá čísla, jejichž součet je 2 až 4), fenylen, difenylen, nebo naftalen, nebo skupina:

Ri _c>n--n-ch₂-^^-.oh ^Y“~^C=2 R₃ R2

Nebo (2), pokud m=2, alkylen, alkylen éter, alkylen thioéter, difenylen, nebo naftalen. Sloučeniny jsou antioxidanty pro organické polymery.

EPO 0-533276-A1 publikovaný 24. března 1993 uvádí sloučeniny definované Vzorcem (ii) :

kde jedno z P nebo Q je orto-substituovaná fenyl skupina a další je substituovaný benzyl. Sloučeniny definované Vzorcem (ii) jsou miticidy a insekticidy.

AE Wilder uvedl v časopise Arzneim Forsch (1967), 67, č. 17, strany

768-772 přípravu a studii sloučenin definovaných Vzorcem (iii):

Kde X je H nebo Cl a n je 1 nebo 2. Sloučeniny mají tuberkulostatické vlastnosti. Sloučeniny definované Vzorcem (iii) nezahrnují substituci para na hydroxylovou skupinu.

·» · · · ·

JL Romine et al. v přihlášce International Patent Application WO 98/04135, publikované 5. února 1998 popisuje sérii difenylových heterocyklů definovaných Vzorcem (iv):

(iv) kde Het je heterocyklická skupina vybraná mezi jiným z oxadiazolonu. Sloučeniny jsou užitečné jako modulátory vysoce vodivých kalciem aktivovaných draselných kanálů a je zde popsán výchozí materiál pro přípravu sloučenin předkládaného vynálezu, kde Het je 1,3,4oxadiazol-2(3H)-on, m=l a n=0, R^c je chloro, R^d je trifluorometyl a R^a = R^b = R^e je vodík.

Žádná z těchto referencí nepopisuje nebo nenaznačuje nové sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu

Popis vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje nové karbamátové deriváty 1,3,4oxadiazolonu mající obecný vzorec

kde R¹ a R² jsou definovány níže, nebo poskytuje jejich netoxické farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty. Předkládaný vynález také poskytuje farmaceutické preparáty obsahující řečené deriváty, a způsob léčby poruch citlivých na otevírání draselných kanálů, jako jsou například ischémie, mozková mrtvice, křeče, epilepsie, astma, syndrom dráždivého tračníku, migréna, traumatické poškození mozku, poranění míchy, sexuální dysfunkce a inkontinence moči.

Detailní popis vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje nové karbamátové deriváty 3-[(5chloro-2-hydroxyfenyl)metyl]-5-[4-(trifluorometyl)fenyl]-1,3,4 • · · · · · · · ·· • · · · · · · · · *· · ··· · · · · · ·· « · ··· ·· ··· ·· ··· · · · · ··· •·· · · ·· 9· · · ··· oxadiazol-2(3Η)-onu, který je účinnou látkou otevírající vysoce vodivé kalciem aktivované K⁺ kanály (BK kanál), a dále poskytuje nové deriváty mající obecný vzorec I

kde

R¹ je vodík, Ci-4 alkyl, -CR³R⁴CO₂H, -(CH₂)₂-NR⁵R⁶;

R² je vodík, Ci-4 alkyl, nebo R¹ a R² tvoří spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, heterocyklický kruh vybraný z piperazinu, Nmetyl piperazinu, piperidinu, thiomorfolinu a morfolinu;

R³ je vodík, nebo metyl;

R⁴ je vodík; nebo substituovaný nebo nesubstituovaný Ci_4 alkyl, v kterém je substituent vybrán ze skupiny obsahující hydroxy, amino, metylthio, karboxyl, karboxamid, guanidino, fenyl a hydroxyfenyl; a R⁵ a R⁶ jsou nezávisle vodík, Ci_4 alkyl, nebo R⁵ a R⁶ tvoří spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, heterocyklický kruh vybraný z piperazinu, N-metyl piperazinu, piperidinu, thiomorfolinu a morfolinu;

nebo jejich netoxická farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.

Předkládaný vynález také poskytuje způsob léčby poruch způsobených otevíráním vysoce vodivých kalciem aktivovaných K⁺ draselných kanálů (BK kanály) savců potřebujících tuto léčbu, kterýžto způsob zahrnuje podání řečenému savci účinného množství sloučeniny definované vzorcem I nebo její netoxické farmaceuticky přijatelné soli. Sloučeniny definované Vzorcem I jsou přednostně užitečné v léčbě ischémie, mozková mrtvice, epilepsie, křečí, astmatu, syndromu dráždivého tračníku, migrény, traumatického poškození mozku, poranění míchy, sexuální dysfunkce, inkontinence moči a dalších poruch citlivých na aktivaci BK kanálu.

Termín C1-4 alkyl, jak je používán zde a v patentových nárocích (ledaže je v textu specifikováno jinak) znamená alkylové skupiny s nevětveným nebo větveným řetězcem, jako jsou například metyl, etyl, propyl, izopropyl, butyl.

I

Termín netoxická farmaceuticky přijatelná sůl”, jak je používán zde a v patentových nárocích je zamýšlen, že zahrnuje netoxické soli kyselin a zásad, a soli zwitterionických sloučenin. Soli se zásadou jsou zamýšleny, že zahrnují anorganické metalické soli, jako jsou například sodík, draslík, kalcium a magnézium, amonná sůl, a soli netoxických aminů, jako jsou například trialkylaminy, pyridin, picolin, dibenzylamin, etanolamin, N-metylmorfolin a další aminy, které byly použity, aby vytvořily soli karboxylových kyselin. Vhodné soli kyselin jsou zamýšleny, že zahrnují soli anorganických kyselin, jako například kyseliny chlorovodíkové, bromovodíkové, jodovodíkové, sírové, fosforečné a podobně, a soli organických kyselin, jako jsou například kyselina mravenčí, octová, maleinová, citrónová, jantarová, askorbová, mléčná, fumarová a vinná, které byly použity ke vzniku solí bazických aminů.

Ledaže je specifikováno jinak, znamená termín ”aminokyselina”, jak používán zde, přirozeně se vyskytující aminokyselinu. Vhodné aminokyseliny jsou aminokyseliny popsané zde a další známé aminokyseliny, jako jsou například alanin, glycin, arginin, cystein, izoleucin, leucin, lysin, valin, methionin, fenylalanin, threonin a podobně. Mělo by být oceněno osobou znalou oboru, že sloučeniny definované Vzorcem I, kde R¹ je -CR³R⁴CO₂H a představuje reziduum přirozeně se vyskytující aminokyseliny, a může být za podmínek ín vivo aktivní jako prolék, t j. aminokyselinové reziduum, mohou být hydrolyzovány peptidázovými enzymy v hostiteli za vzniku mnohem aktivnější formy žádaného 1,3,4-oxadiazolinu. Také by mělo být oceněno osobou znalou oboru, že přirozeně se vyskytující aminokyseliny v L konfiguraci mohou být nahrazeny aminokyselinami nevyskytujícími se přirozeně, které jsou v D konfiguraci.

Farmaceuticky přijatelné soli, které jsou předmětem vynálezu jsou obecně soli, v kterých se protiiont nepodílí významně na toxicitě nebo farmaceutické aktivitě soli. V některých případech mají fyzikální vlastnosti, které je činí mnohem více žádoucí pro farmaceutické preparáty, kteréžto vlastnosti zahrnují například rozpustnost, chybění hygroskopity, stlačitelnost s ohledem na tvorbu tablet, a kompatibilitu s jinými složkami, s kterými může být substance použita pro farmaceutické účely. Soli jsou rutinně vytvořeny smíšením sloučeniny definované Vzorcem I s vybranou kyselinou, přednostně kontaktem v roztoku s nadbytkem běžně užívaných inertních rozpouštědel, jako je například voda, éter, dioxan, metylén chlorid, izopropanol, metanol, etanol, etylacetát a

I acetonitríl.' Mohou být také připraveny pomocí kovů, nebo reakcí s iontově výměnnou pryskyřicí za podmínek, v kterých je příslušný iont soli substance definované Vzorcem I nahrazen jiným iontem za podmínek, které umožňují separaci žádaných sloučenin, kteréžto podmínky zahrnují například precipitaci z roztoku nebo extrakci do rozpouštědla, nebo eluci z, nebo retenci na iontově výměnné pryskyřici.

Určité sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, včetně jejich farmaceuticky přijatelných solí, mohou existovat jako solvatované formy zahrnující hydratované formy, jako jsou například monohydrát, dihydrát, hemihydrát, trihydrát, tetrahydrát a podobně. Produkty mohou být přímými solváty, zatímco v jiných případech mohou produkty držet pouze nahodilý solvent, nebo mohou být směsí solvátu plus určitého množství nahodilého solventu. Mělo by být oceněno osobami znalými oboru, že solvatované formy jsou ekvivalentem nesolvatovaných forem a jsou zamýšleny jako zahrnuté do rozsahu předkládaného vynálezu.

Ve způsobu předkládaného vynálezu znamená termín terapeuticky účinné množství” celkové množství každé aktivní složky preparátu, které je dostatečné k dosažení významného prospěchu pro pacienta, tj. k uzdravení z akutního stavu charakterizovaného otevřením vysoce vodivých kalciem aktivovaných K⁺ kanálů, nebo zvýšením stupně uzdravení z takových stavů. Pokud se aplikuje jednotlivá aktivní složka, podávaná samostatně, týká se termín samotné složky. Pokud se aplikuje kombinace, týká se termín kombinovaných množství aktivních složek, které vedou k terapeutickému účinku, a to složek podávaných v kombinaci, sériově nebo souběžně. Termíny léčit, léčení, léčba”, jak je používán zde a v patentových nárocích znamená zabránění nebo zmírnění nemocí, tkáňového poškození a/nebo příznaků sdružených s-‘ dysfunkcí polarizace a vodivosti buněčných membrán.

V dalším aspektu poskytuje vynález ve vodě rozpustné proléky 3—[(5— chloro-2-hydroxyfenyl)metyl]-5-[4-(trifluorometylfenyl]-1,3, 4oxadiazol-2(3H)-onu, který je popsán v patentu WO 98/04135. Jak je zde používáno, znamená termín prolék derivát aktivního léku, který je po podání přeměněn zpět na aktivní látku. Konkrétněji se týká karbamátových derivátů sloučenin 1,3,4-oxadiazol-2(3H)-onu, které mohou být aktivními léky, a/nebo které jsou schopné podstoupit hydrolýzu esteru nebo naštěpení esteru a tak uvolnit aktivní volný lék. Fyziologicky hydrolyzovatelné skupiny slouží jako proléky tím, že jsou hydrolyzovány v těle za vzniku vlastního mateřského léku a • · · · · · F ·· • · · · ·· · · · ·· • · ···· · ·· • ♦ · ·· · · »· ·· · · » tedy ve vodě rozpustné proléky, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, jsou preferovány pro podání mateřského léku.

V ještě dalším aspektu poskytuje tento vynález způsob léčby nebo ochrany před poruchami, které jsou způsobeny otevřením vysoce vodivých kalciem aktivovaných K⁺ kanálů (BK kanálů) u savce potřebujícího tuto léčbu, kterýžto způsob zahrnuje podání řečenému savci účinného množství sloučeniny definované Vzorcem I nebo její netoxické farmaceuticky přijatelné soli, solvátu nebo hydrátu. Sloučeniny definované Vzorcem I jsou přednostně užitečné v léčbě ischémie, mozkové mrtvice, křečí, epilepsie, astmatu, syndromu dráždivého tračníku, migrény, traumatického poškození mozku, poškození míchy, močové inkontinence a sexuální dysfunkce u mužů (erektilní dysfunkce, například v důsledku diabetes mellitus, poranění míchy, radikální prostatektomie, psychogenní etiologie, nebo z jakékoli jiné příčiny) i u žen prostřednictvím zlepšení průtoku krve genitáliemi, obzvláště corpus cavernosum a jinými poruchami citlivými na aktivaci BK kanálů. Sloučeniny definované Vzorcem I jsou nejpřednostněji užitečné v léčbě cerebrální ischémie/mozkové mrtvice.

V ještě dalším aspektu poskytuje tento vynález farmaceutické preparáty zahrnující alespoň jednu sloučeninu definovanou vzorcem I v kombinaci s farmaceuticky adjuvantní látkou, nosičem nebo ředící látkou.

Sloučeniny definované Vzorcem I mohou být připraveny pomocí různých postupů, jako například pomocí postupů ilustrovaných zde v patentových nárocích, v reakčních schématech a jejich variantách, které budou zřejmé osobám znalým oboru. Různé prolékové sloučeniny definované vzorcem I mohou být s výhodou připraveny z aktivní lékové substance definované Vzorcem II, která je sama připravena obecným postupem popsaným v patentu WO 98/04135 a v Příkladu provedení vynálezu I, a mohou být použity jako výchozí materiál ve způsobech ilustrovaných v reakčních schématech 1 a 2.

Reakční schéma 1

Příprava

Vzorcem derivátů schématu aminokyselinových karbamátových Ia je ilustrována v reakčním

i.

definovaných

Sloučenina definovaná Vzorcem II je podrobena reakci s arylchloroformátem, jako je například p-nitrofenyl chloroformát v bezvodém organickém rozpouštědle, jako je například metylenchlorid, chloroform, nebo tetrahydrofuran v přítomnosti zásady, jako je například pyridin a trietylamin za vzniku karbonátu definovaného Vzorcem III, který je poté podroben reakci s požadovaným aminokyselinovým tertbutylesterem v přítomnosti zásady, jako je například trietylamin, za vzniku karbamátového meziproduktu definovaného Vzorcem IV.

Odstranění tert-butylové chránící skupiny je provedeno hydrolýzou pomocí kyseliny, a přednostně pomocí trifluorooctové kyseliny s požadovaným aminokyselinovým karbamátem definovaným Vzorcem Ia.

Reakční schéma 2

Pokud je požadováno připravit karbamátové deriváty definované Vzorcem Ib, je¹ karbonátový meziprodukt definovaný Vzorcem III s výhodou podroben reakci s požadovaným aminem, jak je ilustrováno v reakčním schématu 2. Požadovaný acyklický nebo heterocyklický amin definovaný Vzorcem NR*R² je přidán k roztoku metylen chloridu obsahujícího karbonátovou sloučeninu definovanou vzorcem III a je přidána zásada, jako je například trietylamin, ke vzniku karbamátových derivátů definovaných Vzorcem Ib. Produkt definovaný Vzorcem Ib je s výhodou izolován jako hydrochloridová sůl reakcí s bezvodým HC1 éterickým roztokem.

V přednostní formě vynálezu mají sloučeniny definované Vzorcem I vzorec Ia

la kde

R³ je vodík, nebo metyl;

R⁴ je vodík; nebo substituovaný nebo nesubstituovaný Ci_4 alkyl, v kterém je substituent vybrán ze skupiny obsahující hydroxy, amino, metylthio, karboxyl, karboxamid, guanidino, fenyl a hydroxyfenyl; nebo jejich netoxické farmaceuticky přijatelné soli nebo solváty. R³je přednostně vodík, a R⁴ je Ci_4 alkyl volitelně substituovaný hydroxy, amino, karboxylovou a karboxamidovou skupinou, nebo jejich netoxická farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.

V další přednostní formě vynálezu mají sloučeniny definované Vzorcem I vzorec Ib

kde

R¹ je - (CH2) 2~NR⁵R⁶; R² je vodík, R⁵ a R⁶ jsou nezávisle vodík, C1-4 alkyl, nebo R⁵ a R⁶ tvoří spolu s atomem dusíku, ke kterému jsou připojeny, heterocyklický kruh vybraný z piperazinu, N-metyl piperazinu, piperidinu, thiomorfolinu a morfolinu; nebo jejich netoxická farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát. Přednostně je R¹- (CHZ)2~NR⁵R⁶ a R⁵ a R⁶ jsou nezávisle vodík nebo C1-4 alkyl, nebo jejich netoxická farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.

V další formě zahrnuje vynález farmaceutické preparáty obsahující alespoň jednu sloučeninu definovanou Vzorcem I v kombinaci s farmaceuticky adjuvantní látkou, nosičem nebo látkou ředící.

V ještě další formě se vynález týká způsobu léčby nebo prevence poruch odpovídajících na otevírání draselných kanálů u savce potřebujícího tuto léčbu, kterýžto způsob zahrnuje podání řečenému savci terapeuticky účinného množství sloučeniny definované Vzorcem I, nebo jeho netoxické farmaceuticky přijatelné soli, solvátu nebo hydrátu.

V ještě další formě se vynález týká způsobu léčby se vynález týká způsobu léčby ischémie, křečí, astmatu, syndromu dráždivého tračníku, migrény, traumatického poškození mozku, poranění míchy, mužské a ženské sexuální dysfunkce, inkontinence moči a obzvláště mozkových příhod u savců potřebujících tuto léčbu, která zahrnuje podáni řečenému savci terapeuticky účinného množství sloučeniny definované Vzorcem I nebo jeho netoxické farmaceuticky přijatelné soli, solvátu nebo hydrátu.

* ♦* «« ·· ·· ♦ • · « « 9 > » · « «·« ♦»·♦ · ♦ ·

Biologická aktivita

Draselné (K⁺) kanály jsou strukturálně a funkčně odlišnými rodinami K⁺ selektivních kanálových proteinů, které jsou v buňce všudypřítomné, což ukazuje na jejich ústřední důležitost v regulaci celé řady klíčových buněčných funkcí (Rudy B, Neuroscience 25, strany 729-749 (1988). Zatímco tato třída je široce rozšířena, jsou BČ kanály diferenciálně distribuovány jako jednotliví členové této třídy nebo jako rodiny (Gehlert DR et al. Neuroscience 52, atr. 191205 (1993)). Aktivace K⁺ kanálů v buňkách a konkrétně v excitovatelných buňkách, jako jsou neurony a svalové buňky, vede k hyperpolarizaci buněčné membrány, nebo v případě depolarizovaných buněk k repolarizaci. Navíc k tomu, že fungují jako endogenní svorky membránového napětí, mohou K⁺ kanály odpovídat na důležité buněčné události, jako jsou například změny v intracelulární koncentraci ATP, nebo intracelulární koncentraci kalcia (Ca²⁺) . Ústřední úloha K⁺kanálů v regulaci četných buněčných funkcí z nich činí obzvláště důležité cíle pro terapeutický vývoj (Cook NS, Potassium channels: Structure, classification, function and therapeutic potential. Ellis Horwood, Chinchester (1990). Jedna třída K⁺ kanálů, vysoce vodivé Ca²⁺ aktivované K⁺ kanály (BK nebo BK kanály), je regulována transmembránovým napětím, intracelulárním Ca²⁺ a celou řadou dalších faktorů, jako jsou například stav fosforylace kanálového proteinu (Latorre R, et al. Ann Rev Physiol 51, str. 385-399 (1989). Vysoce a pro jeden kanál vodivé (obecně nad 150 pS), a s vysokým stupněm specifity pro K⁺, BK kanály ukazují, že malá množství kanálů mohou významně ovlivnit membránovou vodivost a buněčnou vzrušivost. Navíc zvýšení pravděpodobnosti otevření kanálu prostřednictvím zvýšení intracelulárního Ca²⁺ ukazuje na roli BK kanálů v modulaci Ca²⁺dependentních fenoménů, jako jsou například sekrece a svalová kontrakce (Asano M, et al. J Pharmacol Exp Ther 267, str. 1277-1285 (1993)).

Látky otevírající BK kanály vykonávají své buněčné účinky prostřednictvím zvýšení pravděpodobnosti zvýšení těchto kanálů (McFay MC et al., J Neurophysiol 71, str. 1873-1882 (1994) a Olesen SP, Exp Opin Invest Drugs 3, str. 1181-1888 (1994) . Toto zvýšení v otevírání jednotlivých BK kanálů vede kolektivně k hyperpolarizaci buněčných membrán, obzvláště depolarizovaných buněk, produkovaných významným zvýšením celobuněčné BK zprostředkované vodivosti.

Schopnost sloučeniny z Příkladu 1 otevírat BK kanály a zvyšovat celobuněčné zevní (K⁺) BK-zprostředkované proudy byla posuzována za podmínek uzavření napětí určením schopnosti kanálů zvýšit zevní • ·· ·· ·♦ *· * • · · · · ♦· ♦ * ♦· w « · « «··· 9 9·

9 · · · 9 9 9 9 9 99

999 99 ·· ·· ··♦·'· proud zprostředkovaný klonovaným savčím (mSlo nebo hSlo) BK heterologně exprimovaným v oocytech Xenopus (Butler A et al, Science, 261, str. 221-224 (1993) a Dworetzky SI et al, Mol Brain Res, 27 str. 189-193 (1994))). Dva použité BK konstrukty představují téměř strukturálně identické homologní proteiny a v našich testech bylo prokázáno, že jsou farmakologicky identické. K izolaci BK proudu od nativního (tvořícího pozadí, non-BK) proudu byl použit v supramaximální koncentraci (50 nM) specifický a účinný toxin iberiotoxin (IBTX) blokujicí BK kanály (Galvez A et al, J Biol Chem 265, str. 11083-11090 (1990). Relativní podíl proudu BK kanálů na celkovém zevním proudu byl určen odečtením proudu zůstávajícího v přítomnosti IBTX (non-BK proud) z proudových profilů získaných ve všech dalších experimentálních podmínkách (kontrola, lék a promytí). Bylo určeno, že v testované koncentraci profilovaná sloučenina neměla efekt na non-BK nativní proudy v oocytech. Bylo prokázáno, že sloučenina z Příkladu 1 zvyšuje v koncentraci luM BK proud v alespoň 5 oocytech na 126% kontrolních hodnot IBTX citlivého proudu. Záznamy byly provedeny za použití standardních technik dvouelektrodových svorek napětí (Stuhmer W et al, Methods in Enzymology, 207, strany

319-339 (1992)), protokoly svorkování napětí z depolarizačního kroku trvajícího 500-750 ms potenciálu -60 mV až do +140 mV v 20 mV krocích.

se sestávaly z udržovacího

Experimentální média (modifikovaný Barthův roztok se skládal z (v mM) : NaCl (88), NaHCO₃ (2,4), KC1 (1,0), HEPES (10, MgSO₄ (0,82), Ca(NO₃)₂ (0,33), CaCl₂ (0,41), pH 7,5.

Rychlé určení schopnosti proléku hydrolyzovat a uvolnit lék (sloučenina z Příkladu 1) je prováděno následovně. Zásobní roztok proléku o koncentraci 1 mg/ml je připraven v destilované vodě nebo v acetonitrilu nebo PEG-400. V tomto testu je používána plazma z čerstvě sbírané potkaní nebo lidské krve. K 1 ml plazmy při teplotě 37°C bylo přidáno 10 ul zásobního roztoku proléku a směs byla jemně promíchána. Okamžitě po promíchání bylo odstraněno 100 ul plazmy a k ní bylo přidáno 300 ul acetonitrilu (vzorek v čase 0) . Vzorky byly také získány v 30 minutách a okamžitě k nim byl přidán acetonitril k potlačení. Potlačené vzorky byly centrifugovány, aby byl získán čistý supernatant pro analýzu. Zásobní roztok, vzorky T=0 a T=30 byly analyzovány pomocí HPLC stanovení, které separovalo lék od proléku. Na základě ploch relativních vrcholů proléku a léku v těchto vzorcích jsou různé proléky charakterizovány jako látky rychle, mírně a pomalu uvolňující. V tomto modelu byla například sloučenina z Příkladu 2 rozpuštěna v PEG-400 v koncentraci 1 mg/ml a inkubována v koncentraci 10 ug/ml v čerstvé potkaní plazmě při • ·♦ ·· ♦ ·· *♦♦♦ < · ♦ ♦ » ··· »···»♦· ·»· • · · · · · · ♦·♦ ·· • t · « · · · » ·· • · · «· · · ·· ·· **· teplotě 37°C. Analýza roztoku 5 minut po inkubaci ukázala konverzi sloučeniny z Přikladu 2 na sloučeninu z Příkladu 1.

Abychom určili schopnost sloučenin předkládaného vynálezu snižovat ztrátu buněk způsobenou neuronální ischémií, je indukována standardní fokální cerebrální ischémie pomocí permanentní okluze levé střední cerebrální artérie (MCA) a společné karotické tepny (CCA) s jednohodinovou okluzí pravé CCA u potkanů kmene Wistar. Chirurgické zákroky jsou provedeny pomocí subtemporálního přístupu podle A Tamura et al. J Cereb Blood Flow Metab 1, str. 53-60 (1981) a jeho modifikací (K Osborne et al. J Neurol Neurosurg Psychiatry 50, str. 402-410 (1987) a S Menzies et al. Neurosurgery 31 str. 100107, (1992).

Sloučenina z Příkladu 1 byla hodnocena na modelu fokální mozkové mrtvice zahrnujícím permanentní okluzí levé MCA (MCAO) a CCA (CCAO) a dočasnou okluzí pravé CCA u potkanů kmene Wistar. Tento postup vedl ke vzniku spolehlivě velkého neokortikálního infarktu, který je měřen prostřednictvím vyloučením vitálního barviva v sériových řezech mozkem po 24 hodinách po MCAO. V předkládaném testu byly sloučeniny podávány za použití iv. nebo ip. způsobu podání dvě hodiny po okluzi. V tomto modelu snížila například sloučenina z Příkladu 1 významně velikost kortikálního infarktu o zhruba 18%, byla-li podána intravenózně (10 ug/kg) jako jeden bolus dvě hodiny po okluzi střední mozkové tepny ve srovnání s kontrolami léčenými vehikulem (vodou).

Výsledky výše uvedených in vitro a in vivo testů demonstrují, že nové sloučeniny 1,3,4-oxadiazol-2(3H)-onu, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, jsou užitečné v léčbě lidských poruch způsobených dysfunkcí polarizace buněčné membrány aO její vodivosti, a^; přednostně jsou indikovány pro léčbu ischémie, mozkové mrtvice, epilepsie, křečí, astmatu, syndromu dráždivého tračníku, migrény, traumatického poškození mozku, poranění míchy, sexuální dysfunkce, inkontinence moči a dalších poruch citlivých na aktivaci BK kanálů. Nejpřednostněji jsou sloučeniny definované Vzorcem I užitečné v léčbě mozkové ischémie/mozkové mrtvice.

Sloučeniny definované Vzorcem I nebo jejich farmaceutické preparáty jsou užitečné v léčbě, zmírnění nebo eliminaci poruch, v kterých hrají roli BK kanály. Takové poruchy zahrnují ischémii, mozkovou mrtvici, epilepsii, křeče, astma, syndrom dráždivého tračníku, migrénu, traumatické poškození mozku, poranění míchy, sexuální dysfunkce, ínkontinenci moči a otevírající draslíkové kanály.

další poruchy citlivé na látky

Pro terapeutické použití budou definované vzorcem I normálně podávány jako farmaceutiký preparát obsahující sloučeninu přijatelným adjuvantní konvenčních farmakologicky aktivní sloučeniny jako nezbytnou ve spojení nosičem, a a excipientní technik.

aktivní s pevným volitelně látkou složku alespoň jednu takovou nebo tekutým farmaceuticky s farmaceuticky přijatelnou za použití standardních a

Farmaceutické preparáty zahrnují vhodné dávkové formy pro perorální, parenterální (zahrnující subkutánní, intramuskulární, intradermální a intravenózní) bronchiální nebo nazální podání. Proto pokud je použit pevný nosič, může být preparát připraven ve formě tablet, umístěn do tvrdých želatinových kapslí v práškové nebo granulové formě, nebo ve formě pastilky či tabletky. Pevný nosič může obsahovat konvenční excipientní látky, jako jsou například vazebné látky, plnící látky, tabletové lubrikační látky, dezintegrační látky, zvlhčující látky a podobně. Tableta může být potažena filmem pomocí konvenčních technik. Pokud je použit tekutý nosič, může být preparát ve formě sirupu, emulze, měkké želatinové kapsle, sterilního vehikula pro injekce, vodné nebo nevodné tekuté suspenze, nebo může být suchým produktem pro rekonstituci s vodou nebo s jinými vhodnými vehikuly před použitím. Tekuté preparáty mohou obsahovat konvenční aditiva, jako jsou například suspendující látky, emulzifikující látky, zvlhčující látky, nevodná vehikula (zahrnující jedlé oleje), konzervační látky, stejně tak jako a/nebo dobarvující látky. Pro parenterální podání vehikulum normálně obsahuje sterilní vodu, alespoň z velké části, ačkoli solné roztoky, roztoky glukózy a podobně mohou být také využity. Mohou být také použity injekční suspenze a v tomto případě mohou být použity konvenční suspendující látky. K parenterálním dávkovým formám mohou být přidány konvenční konzervační látky, pufrující látky a podobně. Obzvláště užitečné je podání sloučeniny definované Vzorcem I v parenterálních preparátech. Farmaceutické preparáty jsou připraveny konvenčními technikami vhodnými pro požadovaný preparát obsahující vhodné množství aktivní složky, kterou je sloučenina definovaná Vzorcem I podle vynálezu. Viz například Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, 17. Vydání, 1985.

Dávkování sloučenin definovaných Vzorcem I k dosažení terapeutického účinku bude záviset nejen pouze na takových faktorech, jako jsou • 9 • 99 9*♦· ·· 9 9 9 9 99 • 99 9 9··

9 999 9999

9 9 9 9 ·9 • 99 99 99·· například věk, váha a pohlaví pacienta a způsob podání, ale také na stupni požadované aktivace draselných kanálů a účinnosti konkrétní použité sloučeniny pro konkrétní poruchu nebo onemocnění. Je také zamýšleno, že léčba a dávkování konkrétní sloučeniny může být podáno v jednotkové dávkové formě, a že jednotková dávková forma může být upravena osobou znalou oboru, aby odrážela relativní stupeň aktivity. Rozhodnutí o konkrétní použité dávce (kolikrát podávat za den) je na uvážení lékaře a může se lišit titrací dávky ke konkrétním okolnostem tohoto vynálezu, aby došlo k požadovanému terapeutickému účinku.

Vhodná dávka sloučeniny definované Vzorcem I nebo jejího farmaceutického preparátu pro savce včetně člověka, trpícího, nebo pravděpodobně trpícího jakýmkoli stavem popsaným zde, je množství aktivní složky od zhruba 0,1 ng/kg do 10 mg/kg tělesné váhy. Pro parenterální podání může být dávka v rozmezí 0,1 ng/kg až 1,0 mg/kg tělesné váhy pro intravenózní podání. Aktivní složka bude přednostně podávána buďto kontinuálně nebo ve stejných dávkách jedenkrát až čtyřikrát denně. Obvykle je však podávána malá dávka, která se postupně zvyšuje, až je určena optimální dávka pro léčeného pacienta.

Bude však rozuměno, že množství sloučeniny skutečně podané bude určeno lékařem ve světle relevantních okolností zahrnujících léčený stav, volbu sloučeniny, která má být podána, zvolený způsob podání, věk, váhu a odpověď jednotlivého pacienta, a závažnost příznaků pacienta.

Následující příklady jsou uvedeny pro ilustraci a nejsou zamýšleny jako omezující vynález jakýmkoli způsobem, protože existuje mnoho možných variant vynálezu, které jsou ve rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

V následujících příkladech jsou uvedeny všechny teploty ve stupních

Celsia. Body tání byly zaznamenány na Gallenkampově zařízení na měření kapilárního bodu tání, teploty jsou neupravované. Protonová magnetická rezonance ¹H NMR byla zaznamenána na zařízení Bruker AC

300. Všechna spektra chemické posuny jsou byla určena v uvedených rozpouštědlech zaznamenány v δ jednotkách ve směru od vnitřního standardu tetrametylsilanu konstanty jsou zaznamenány v Hertzech označeny následovně: s, singlet; d, (TMS) a interprotonové (Hz). Štěpící vzory jsou dublet; t, triplet; q, kvadruplet; m, multiplet; br, široký vrchol; dd, dublet dubletu; bd,

·· «« *· · ♦ « ♦ f · t ♦· « · ♦ · · ♦ · 9 ♦ ♦ W W · ·♦ • · · * »9· • 9 ♦♦ 9·♦♦· široký dublet; dt dublet tripletu; bs, široký singlet; dq, dublet kvartetu. Infračervená spektra (IR) za použití bromidu draselného (KBr) byla určena na spektrofotometru Perkin Elmer 781 od 4000 cm¹do 400 cm'¹ kalibrovaném na 1601 cm'¹ absorpci polystyrénového filmu a zaznamenané v recipročních centimetrech (cm'¹). Nízká rezoluční hmotová spektra (MS) a zjevná molekulová (MH⁺) nebo (M-H)' byly určeny na zařízení Finningen TSQ 7000. Vysoká rezoluční hmotová spektra byla určena na přístroji Kratos MS50 ve FAB módu za použití jodidu/glycerolu jako vnitřního standardu. Elementární analýza je zaznamenána jako váhové procento.

Následující příklady ilustrují postupy přípravy výchozích materiálů, meziproduktů a způsobů přípravy produktů podle tohoto vynálezu. Mělo by být také zřejmé osobám znalým oboru, že vhodná substituce jak materiálů, tak také způsobů zde uvedených povede ke vzniku příkladů ilustrovaných níže, které jsou zahrnuty do rozsahu vynálezu.

Příklad 1

3-[ (5-chloro-2-hydroxyfenyl)metyl-5-[4-(trifluorometyl)fenyl] 1,3,4oxadiazol-2(3H)-on

Krok A. 5-[4-(trifluorometyl)fenyl] 1,3, 4-oxadiazol-2(3H)-on

Hydrazid 4-(trifluorometyl)benzoové kyseliny (komerčně dostupné od společnosti Maybridge Chemicals (5 g, 24,5 mmol) byl odebrán do THF (250 ml)/trietylaminu (2,7 ml/ 26 mmol) pod N₂ a přidaného 1,1'karbonyl-diimidazolu (4,2 g, 26 mmol). Roztok byl promícháván po dobu 18 hodin při teplotě 24°C, zakoncentrován a reziduum bylo odebráno do etylacetátu, promyto roztokem 1N Hel, nasyceným roztokem NaHCO₃ a solným roztokem před svým vysušením (MgSO₄) . Zakoncentrování vedlo ke vzniku 5 g (89%) sloučeniny uvedené v titulku, z které byl vzorek rekrystalizován z dietyléteru/hexanu: bod tání 214-216°C. MS m/z: 231 (MH⁺) .

IR (KBr) 3280, 1778, 1608, 1420, 1318, 1170, 1114 cm'¹;

^XH NMR (DMSO-de) δ 7,87 (2H, d, J = 8,3 Hz), 7,96 (2H, d, J = 8,3

Hz), 12,77 (1H, br,s);

Analytický výpočet pro C9H₅F₃N₂O₂.064 H₂O: C, 46,74; H, 2,24; N, 12,11.

Nalezeno: C, 47,07; H, 2,10; N, 12,34.

• ·· ·· ·♦ ·♦ «· · · ♦ · · · · e · ··· ·♦·♦ * ·

Krok B. 3-[(5-chloro-2-metoxyfenyl)metyl-5-[4-(trifluoro metyl)fenyl] 1,3,4-oxadiazol-2(3H)-on

5-[4-(trifluorometyl)fenyl] 1,3,4-oxadiazol-2(3H)-on (11,75 g, 51 mmol) a 5-chloro-2-metoxybenzylbromid (N.Meanwell et al., Bioorg Med Chem Lett 6, str. 1641-1646 (1996))(12, 0 g, 51 mmol) 11,2 g (81 mmol) karbonátu draselného bylo přidáno k CH₃CN (300 ml)) pod dusíkem a byl přidán jodid draselný (0,2 g, 1,2 mmol). Roztok byl zahříván pod zpětným chlazením po dobu 16 hodin, ochlazen, nalit do vody (1500 ml) a intenzivně promíchán. Precipitát byl zfiltrován za vzniku pevné látky, která byla rekrystalizována z CH₃CN za vzniku 15,2 g (78%) sloučeniny uvedené v titulku.

bod tání 144-145°C. MS(ESI) m/z: 385 (MH⁺) .

IR (Kbr) 3440, 1782, 1492, 1324, 1248, 1168 cm’¹;

²Η NMR (300 Mhz, DMSO) δ 3,79 (3H, s), 4,91 (2H, s), 7,07 (1H, d, J=8,8 Hz), 7,35-7,38 (2H, m), 7,88 (2H, d, J=8,4 Hz), 7,96 (2H, d, J=8,2 Hz);

Analytický výpočet pro Ci₇Hi₂CIF₃N₂O₃.0.1 H₂O: C, 52,81; H, 3,19; N, 7,25.

Nalezeno: C, 53,03; H, 3,20; N, 7,31.

Krok C. 3-[(5-chloro-2-hydroxyfenyl)metyl-5-[4-(trifluoro metyl)fenyl] 1,3,4-oxadiazol-2(3H)-on

3-[(5-chloro-2-metoxyfenyl)metyl-5-[4-(trifluorometyl)fenyl] 1,3,4oxadiazol-2(3H)-on (15,2 g, 39,6 mmol) byl smíšen s pyridin hydrochloridem (19,7 g, 0,17 mol) a zahříván při teplotě 225°C po dobu 2 hodin. Horký roztok byl nalit do 800 ml 1N HC1 a směs byla promíchávána po dobu 10 minut. Pevná látka byla sbírána, promyta 1N HCl a vysušena při teplotě 80°C pod vakuem, což vedlo ke vzniku 13,1 g bělavé pevné látky. Rekrystalizace z acetonitrilu vedla ke vzniku

10,8 g sloučeniny uvedené v titulku ve formě chmýřovitých jehliček, bod tání 217-218°C. MS m/z: 371 (MH⁺) .

IR (KBr) 3554, 1762, 1500, 1324, 1068 cm’¹;

²H NMR (DMSO-d₆) δ 4,98 (2H, s) , 6,84 (1H, d, J-8,7 Hz), 7,20 (1H, dd, J=8,7 Hz, 2,6 Hz), 7,30 (1H, d, J = 2,5 Hz), 7,89 (2H, d, J=8,6 Hz), 7,97 (1H, d, J=8,6 Hz), 10,11 (1H, br.s);

Analytický výpočet pro Ci6H₁₀CIF₃N₂O₃.0.1 H₂O: C, 51,84; H, 2,72; N, 7,56.

• ···· ·♦ · · · ♦ ♦ · ·· • · · · ♦ ·· ·J • · · | · · · ·· ·«· ·< ·>·· *·

Nalezeno: C, 51,88; Η, 2,58; N, 7,57.

Obecný postup pro přípravu aminokyselinových karbamátů (Ia) z Příkladů 2-5

Roztok 3-[(5-chloro-2-hydroxyfenyl)metyl-5-[4-(trifluoro metyl)fenyl]-1,3,4-oxadiazol-2(3H)-onu (740 mg, 2 mmol), pnitrofenyl chloroformátu (407 mg, 2,02 mmol) a pyridinu (330 mg,

4,17 mmol) v bezvodém dichlormetanu (20 ml) byl promícháván při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Byly přidány odpovídající aminokyselinový tert-butylester (2 mmol) a bezvodý trietylamin (405 mg, 4 mmol) a výsledná reakční směs byla přes noc promíchávána při pokojové teplotě. Po odpaření bylo reziduum rozděleno mezi dietyléter a naředěný NaOH. Organická vrstva byla promyty vodou, naředěnou HC1 a solným roztokem a poté vysušena síranem hořečnatým. Hrubý produkt byl purifikován buďto rozetřením nebo rekrystalizací. Tert butyl ester byl přes promíchán v dichlormetanu (5 ml) s trifluorooctovou kyselinou (1 ml)) při pokojové teplotě. Po odpaření CH₂C1₂ a nadbytku TFA bylo reziduum rekrystalizováno z benzen-acetonu za vzniku čistého požadovaného produktu.

Příklad 2

N-[ [4-chloro-2-[[5-[4-trifluorometyl)fenyl]-2,3-dihydro-2-oxo

1,3,4-oxadiazol-3-yl]metyl]fenoxy]karbonyl] aspartová kyselina (Ia, R³=H. R⁴=CH₂CO₂H) bod tání 185-187°C (dec.); MS m/e 530 (MH⁺) .

^XH NMR (DMSO-dg) δ 62,62-2,83 (m,, 2H) , 4,38 (m, 1H) , 4,91 (s,2H), 7,22 (d, J=8,4 Hz, 1H) , 7,47 (dd, J=8,4, 2,7 Hz, 1H), 7,55 (d, J=2,7 Hz, 1H), 7,92 (d, J=8,7 Hz, 2H) , 8,02 (d, J=8,4 Hz, 2H) , 8,28 (d, J=8,4 Hz, 1H) .

Analytický výpočet pro C₂iH₁₅CIF3N3O₈: C, 47,61; H, 2,85; N, 7,93. Nalezeno: C, 47,04; H, 2,66; N, 7,75.

Příklad 3

N-[ [4-chloro-2-[[5-[4-trifluorometyl)fenyl]-2,3-dihydro-2-oxo

1,3,4-oxadiazol-3-yl]metyl]fenoxy]karbonyl]alanin (Ia, R³=H. R⁴=CH₃) bod tání 137-139°C; MS m/e 486 (MH⁺) .

^XH NMR (DMSO-d₆)’ δ 1,22 (d, J=7,2 Hz, 3H) , 4,01 (m, 1H) , 4,91 (m, 2H), 7,19 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,45 (dd, J=8,4, 2,7 Hz, 1H), 7,56 (d, ·· ·· ·· • · · 4» ♦ · » · · « · < e ·« · · • t ♦·

J=2,7 Hz, 1H), 7,92 (d, J=8,7 Hz, 2H) , 8,00 (d, J=8,4 Hz, 2H) , 8,26 (d, J=7,5 Hz, 1H).

Analytický výpočet pro C2₀H₁₅CIF3N₃O6: C, 49, 45; H, 3,11; N, 8,65. Nalezeno: C, 49,35; H, 3,18; N, 8,61.

Příklad 4

N- [ [4-chloro-2-[[5-[4-trifluorometyl)fenyl]-2,3-dihydro-2-oxo

1,3,4-oxadiazol-3-yl]metyl]fenoxy]karbonyl] glutamová kyselina (Ia, r3=H, R⁴=(CH₂)₂CO₂H) bod tání 110-112°C (dec); MS m/e 566 (M+H)⁺.

^XH NMR (DMSO-dg) δ 1, 84-2,04 (m, 2H), 4,02 (m, 1H), 4,92 (m, 2H) ,

7,20 (d, J=8,4 Hz, 1H), 7,45 (dd, J=8,4, 2,7 Hz, 1H) , 7,56 (d, J=2,7

Hz, 1H) , 7,91 (d, J=8,7 Hz, 2H) , 8,00 (d, J=8,4 Hz, 2H) , 8,26 (d,

J=7,8 Hz, 1H) .

Analytický výpočet pro C22H17CIF3N3O8: C, 48,59; H, 3,15; N, 7,73. Nalezeno: C, 47,78; H, 3,23; N, 7,60.

Příklad 5

N-[ [4-chloro-2-[[5-[4-trifluorometyl)fenyl]-2,3-dihydro-2-oxo

1,3,4-oxadiazol-3-yl]metyl]fenoxy]karbonyl] leucin (Ia, R³=H, R⁴=CH₂CH(CH₃)₂) bod táni 102-104°C (dec) ; MS m/e 528 (MH⁺) .

^XH NMR (CDCI3) δ 0,99 (m, 6H), 1,70 (m, 2H), 4,40 (m, 1H) , 4,90 (m, 2H), 6,08 (m, 1H), 7,35-7,44 (m, 3H), 7,71 (d, J=7,7 Hz, 2H), 7,92 (d, j=7,8 Hz, 2H).

Obecný postup pro přípravu karbamátových derivátů (lib) z Příkladů

6-9

Roztok 3-[(5-chloro-2-hydroxyfenyl)metyl]-5-[4-(trifluoro metyl)fenyl]-1,3,4-oxadiazol-2(3H)-onu (371 mg, 1 mmol), pnitrofenyl chloroformátu (202 mg, 1 mmol) a pyridinu (160 mg, 3,1 mmol) v bezvodém dichlormetanu (10 ml) byl promícháván při pokojové teplotě po dobu 3 hodin. Byl přidán odpovídající amin (1 mmol) v bezvodém dichlormetanu (3 ml) a výsledná reakční směs byla

·· ·9 ·· • · · · · · • · · » *· • · · · « · • · · ·· 9 9 ·· promíchávána při pokojové teplotě po dobu jedné hodiny před přidáním bezvodého trietylaminu (110 mg, 1,1 mmol). Směs byla promíchávána při pokojové teplotě po dobu jedné hodiny před naředěním dichlormetanem, promyta nasyceným bikarbonátem sodným a vodou, a poté vysušena síranem hořečnatým. Po odpaření bylo reziduum purifikováno buďto rozetřením nebo rekrystalizací. Produkt byl znovu rozpuštěn v dietyléteru/etyl acetátu poté byla přidána bezvodá HC1 v dietyléteru. Precipitovaná HC1 sůl byla sbírána filtrací.

Příklad 6

3-[ [5-chloro-2-[ [[2-(dimetylamino)etylamino]karbonyl]oxy]fenyl]metyl]-5-[4-(trifluorometyl)fenyl]-1,3,4-oxadiazol-2(3H)-on bod tání 158-159°C; MS m/e 485 (M+H⁺,ESI) .

NMR (DMSO-d₆) 6 2,80 (s, 3H) , 3,17 (s, 3H) , 3,39 (m, 2H) , 3,60(t,

J=6,9, 1H) , 3,90 (t, J=6,3 Hz, 1H), 4,92 (d, J=15,3 Hz, 2H) ,6,86 (d, J=8,7 Hz, 0,5H), 7,20 (dd, J=8,7, 2,7 Hz, 0,5H), 7,89-8,00(m,

4,5H), 8,13 (m, 0,5H) 9,93 (br, 0,5H), 10,15 (s,0,5H).

Analytický výpočet pro C21H20CIF3N4O4.HCI: C, 48,38; H, 4,06; N, 10,75. Nalezeno: C, 47,31; H, 4,05; N, 10,55.

Příklad 7

3-[ [5-chloro-2-[[ [[2-(dimetylamino)metyletyl]amino]karbonyl]oxy]fenyl]metyl]-5-[4-(trifluorometyl)fenyl]-1,3,4-oxadiazol-2(3H)-on bod tání 127-129°C; MS m/e 499 (M+H⁺,ESI) .

^XH NMR (DMSO-de) δ 2,78-2,83 (m, 6H) , 2,89-3,10 (2s, 3H) , 3,27-3,39 (m, 2H), 3,59-3,90 (m, 2H), 4,99 (2s, 2H), 7,31-7,41 (m, 1H), 7,62 (m, 1H), 7,92 (d, J=8,7 Hz, 2H), 7,98 (d, J=8,7 Hz, 2H), 10,25 (br, 1H) .

Analytický výpočet pro C₂2H22CIF₃N₄O4.HC1: C, 49,36; H, 4,33; N, 10,47. Nalezeno: C, 47,64; H, 4,85; N, 10,16.

Příklad 8

3-[ [5-chloro-2-[ [[4-metylpiperazin-l-yl]karbonyl]oxy]fenyl]metyl]-5-[4-(trifluorometyl)fenyl]-1,3,4-oxadiazol-2(3H)-on bod tání 170-172°C (dec.); MS m/e 497 (M+H⁺,ESI).

“Ή NMR (DMSO-de). δ 2,80 (s, 3H) , 3,05-3,70 (br m, 6H) , 4,06 (br, 1H) ,

4,98 (s, 2H) , 7,26 (d, J=8,7, 1H) , 7,50 (dd, J=8,7, 2,7 Hz, 1H),

7,65 (d, J=2,7 Hz, 1H) , 7,92 (d, J=8,7 Hz, 2H) , 7,98 (d, J=8,7 Hz,

2H), 10,92 (br, 1H).

Analytický výpočet pro C22H20CIF3N4O4.HC1: C, 49,55; H, 3,97; N, 10,51.

Nalezeno: C, 47,93; H, 4,18; N, 10,25.

Přiklad 9

3-[ [5-chloro-2-[ [ [2-morfolino)etylamino]karbonyl]oxy]fenyljmetyl]-5-[4-(trifluorometyl)fenyl]-1,3,4-oxadiazol-2(3H)-on bod táni 143-144°C; MS m/e 527 (M+H⁺,ESI).

^XH NMR (CDCI3) δ 2,54 (br, 6H) , 3,38 (br, 2H) , 3,78 (br, 4H) , 4,91 (s, 2H), 7,27-7,38 (m, 2H), 7,44 (d, J=2,4 Hz, 1H), 7,72 (d, J=8,4, 2H), 7,94 (d, J=8,4 Hz, 2H).

Analytický výpočet pro C23H22CIF3N4O5.HCI: C, 52,43; H, 4,21; N, 10,63. Nalezeno: C, 52,16; H, 4,25; N, 10,55.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

-CR³R⁴CO₂H, - (CH₂) 2-NR⁵R⁶;

nebo R¹ a R² tvoří spolu s atomem dusíku, ke heterocyklický kruh vybraný z piperazinu, Nthiomorfolinu a morfolinu;

R¹ je vodík, Ci-4 alkyl, R² je vodík, Ci-4 alkyl, kterému jsou připojeny, metyl piperazinu, piperidinu, R³ je vodík, nebo metyl;

R⁴ je vodík; nebo substituovaný nebo nesubstituovaný Ci_₄ alkyl, v kterém je substituent vybrán ze skupiny obsahující hydroxy, amino, metylthio, karboxyl, karboxamid, guanidino, fenyl a hydroxyfenyl; a R⁵ a R*⁵ jsou nezávisle vodík, alkyl, nebo R⁵ a R⁶ s atomem dusíku, ke vybraný z piperazinu, a morfolinu;

, 0χ_4 alkyl, nebo R a R tvoří spolu kterému jsou připojeny, heterocyklický kruh N-metyl piperazinu, piperidinu, thiomorfolinu nebo jejich netoxická farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.
2. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde R¹ je -CR³R⁴CO₂H, nebo její netoxická farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.
3. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde R³ je vodík a R⁴ je .substituovaný nebo nesubstituovaný Ci_₄ alkyl, v kterém je substituent vybrán ze skupiny obsahující hydroxy, amino, karboxyl a karboxamid, nebo její netoxická farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.
4. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde R¹ je - (CH₂) ₂NR⁵R⁶, nebo její netoxická farmaceuticky přijatelná.sůl nebo solvát.
5. Sloučenina podle patentového nároku 4, kde R⁵ a R⁶ jsou nezávisle vodík nebo metyl, nebo její netoxická farmaceuticky přijatelná sůl nebo solvát.
6. Sloučenina podle patentového nároku 1 vybraná ze skupiny tvořené těmito sloučeninami:

Z ·· ·· ·* í ·· ···· ··«· • · ···· ··· • ··· ·» ··· · · ·· ···· Λ · · ·· ·· 4· ·· ··«

N-[ [4-chlóro-2-[[5-[4-trifluorometyl)fenyl]-2,3-dihydro-2-oxo 1,3, 4-oxadiazol-3-yl]metyl]fenoxy]karbonyl] aspartová kyselina

N- [ [4-chloro-2-[[5-[4-trifluorometyl)fenyl]-2,3-dihydro-2-oxo

1.3.4- oxadiazol-3-yl]metyl]fenoxy]karbonyl]alanin

N-[ [4-chloro-2-[[5-[4-trifluorometyl)fenyl]-2,3-dihydro-2-oxo

1.3.4- oxadiazol-3-yl]metyl]fenoxy]karbonyl] glutamová kyselina

N- [ [4-chloro-2-[[5-[4-trifluorometyl)fenyl]-2,3-dihydro-2-oxo

1,3,4-oxadiazol-3-yl]metyl]fenoxy]karbonyl] leucin

3-[ [5-chloro-2-[ [[2-(dimetylamino)etylamino]karbonyl]oxy]fenyl]metyl]-5-[4-(trifluorometyl)fenyl]-1,3, 4-oxadiazol-2(3H)-on

3-[ [5-chloro-2-[[ [ [2-(dimetylamino)etyl]metyl amino]karbonyl]oxy]fenyl]metyl]-5-[4-(trifluorometyl)fenyl] -1,3, 4-oxadiazol-2(3H)-on

3-[ [5-chloro-2-[ [[4-metylpiperazin-l-yl]karbonyl]oxy]fenyl]metyl]-5-[4-(trifluorometyl)fenyl]-1,3, 4-oxadiazol-2(3H)-on a

3-[ [5-chloro-2-[ [[2-morfolino)etylamino]karbonyl]oxy]fenyl]metyl]-5-[4-(trifluorometyl)fenyl]-1,3, 4-oxadiazol-2(3H)-on.
7. Farmaceutický preparát pro léčbu poruch odpovídajících na látky otevírající vysoce vodivé kalciem aktivované draselné kanály, kterýžto preparát obsahuje terapeuticky účinné množství sloučeniny definované v patentovém nároku 1 ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředící látkou.
8. Způsob léčby poruch odpovídajících na látky otevírající vysoce Vodivé kalciem aktivované draselné kanály u savce potřebujícího tuto léčbu, kterýžto způsob zahrnuje podání řečenému savci terapeuticky účinného množství sloučeniny definované v patentovém nároku 1.
9. Způsob definovaný v patentovém nároku 8, kde řečenou poruchou je ischémie, mozková mrtvice, křeče, epilepsie, astma, syndrom dráždivého tračníku, migréna, traumatické poškození mozku, poranění míchy, sexuální dysfunkce a inkontinence moči.
10. Způsob definovaný v patentovém nároku 8, kde řečenou poruchou je mozková mrtvice.