CZ118393A3

CZ118393A3 - Hydroxamic acid derivatives, process of their preparation and medicaments based thereon

Info

Publication number: CZ118393A3
Application number: CZ931183A
Authority: CZ
Inventors: Michael John Broadhurst; Paul Anthony Brown; William Henry Johnson; Geoffrey Lawton
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1992-06-25
Filing date: 1993-06-07
Publication date: 1994-02-16
Also published as: FI932950A0; ES2112929T3; NZ247926A; ATE162514T1; NO932326L; JPH0687813A; FI932950A; HU9301773D0; CA2098166A1; DK0575844T3; CN1082027A; JP2594014B2; AU3993193A; DE69316456D1; EP0575844A2; CN1054599C; IS4041A; DE69316456T2; EP0575844B1; IL106059A0

Description

Oblast techniky

Vynález se týká derivátů hydroxamové kyseliny, způsobu jejich výroby a léčiv na jejich bázi.

Podstata vynálezu *

Předmětem vynálezu jsou . kyseliny obecného vzorce I deriváty hydroxamové

R¹

představuje alkylskupinu s 1 až 7 atomy uhlíku;

R² přestavuje atom vodíku, alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu obecného vzorce -(CH₂)_n-aryl nebo -(CH₂)_n-Het, kde n představuje číslo 1 až 4 a Het představuje pěti- nebo šestičlenný heterocyklický kruh, obsahující dusík, který je a) připojen prostřednictvím tohoto atomu dusíku, b) popřípadě obsahuje přídavný heteroatom nebo přídavné heteroatomy dusíku, kyslíku a/nebo síry v jiné poloze nebo polohách, než jsou sousední polohy vzhledem k vazebnému atomu dusíku, c) je substituován oxoskupinou na jednom nebo obou atomech uhlíku v sousedních polohách vzhledem k vazebnému atomu dusíku ad) je popřípadě kondenzován s benzenovým jádrem nebo popřípadě substituován na jednom nebo více jiných atomech uhlíku alkylskupinami s 1 až 6 atomy uhlíku nebo oxoskupinami a/nebo na kterémkoliv přídavném atomu dusíku nebo atomech dusíku alkylskupinami s 1 až 6 atomy uhlíku;

R^J představuje charakterizující skupinu přirozené nebo nepřirozené a-aminokyseliny, v níž jsou popřípadě všechny přítomné funkční skupiny chráněny, s tou podmínkou, že R³ nepředstavuje atom vodíku;

R⁴ představuje karboxyskupínu, alkoxykarbonylskupinu s až 6 atomy uhlíku v alkoxylovém zbytku, karbamoylskupinu nebo alkylkarbamoylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku;

R⁵ představuje charakterizující skupinu přirozené α-aminokyseliny, v níž jsou všechny funkční skupiny popřípadě chráněny; a

R⁶ představuje atom vodíku nebo každý ze symbolů

R⁴, R⁵ a R⁶ představuje atom vodíku nebo alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.

Sloučeniny obecného vzorce I vykazují cenné farmakologické vlastnosti. Zejména představují inhibitory matriční metaloproteinasy a může se jich používat při léčbě nebo prevenci degenerativních chorob kloubů, jako je rheumatoidní arthritis nebo osteoarthritis, nebo při léčbě invasivních nádorů, atherosclerosis nebo sclerosis multiplex.

Kromě sloučenin obecného vzorce I a jejich farmaceuticky vhodných solí, jako takových, jsou předmětem vynálezu také tyto sloučeniny pro použití jako terapeuticky účinné látky; způsob výroby těchto sloučenin a solí; meziprodukty užitečné při tomto způsobu; léčiva obsahující tyto sloučeniny nebo jejich soli; způsob výroby těchto léčiv; použití těchto sloučenin a jejich solí při potlačování a prevenci chorob nebo při zlepšování zdravotního stavu, zejména při potlačování nebo prevenci degenerativních chorob kloubů nebo při léčbě invasivních nádorů nebo atherosclerosis; a použití těchto sloučenin a jejich solí při výrobě léčiv, která slouží pro potlačování nebo prevenci degenerativních chorob kloubů nebo léčbu invasivních nádorů, atherosclerosis nebo sclerosis multiplex.

Alkylskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku nebo 1 až 7 atomy uhlíku, at již se vyskytují samotné nebo v kombinacích, například v alkoxyskupině, přednostně obsahují do 4 atomů uhlíku. Mohou mít přímý řetězec nebo rozvětvený řetězec a například se jedná o methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sek.butyl, terč.butyl apod. Jako příklad alkoxykarbonylových skupin s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylovém zbytku je možno uvést methoxykarbonyl, ethoxykarbonyl, n-propoxykarbonyl, isopropoxykarbonyl apod. Jako příklad alkylkarbamoylskupin s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku je například možno uvést methylkarbamoyl, ethylkarbamoyl, n-propylkarbamoyl, isopropylkarbamoyl apod. Arylovým zbytkem -(CH2)_n-arylskupiny může být fenyl nebo naftyl, který je popřípadě substituován, například halogenem, t.j. fluorem, chlorem, bromem nebo jodem, alkylskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, trifluormethylskupinou apod.

Charakterizující skupinou přírodní nebo nepřírodní α-aminokyseliny je skupina R v přírodní nebo nepřírodní a4 aminoskupině obecného vzorce H₂N-CH(R)-COOH. Jako příklady takových charakterizujících skupin, které jsou odvozeny od přírodních α-aminokyselin, je možno uvést následující skupiny, přičemž odpovídající přírodní α-aminokyselina je uvedena v závorkách vždy za názvem příslušné charakterizující skupiny: vodík (glycin), methyl (alanin), isopropyl (valin), isobutyl (leucin), benzyl (fenylalanin), p-hydroxybenzyl (tyrosin), hydroxymethyl (serin), merkaptomethyl (cystein), 1-hydroxyethyl (threonin), 2-methylthioethyl (methionin), karboxymethyl (kyselina asparagová),

2-karboxyethyl (kyselina glutamová) a 4-aminobutyl (lysin).

Jako příklady takových charakterizujících skupin, které jsou odvozeny od nepřirozených α-aminokyselin, je možno uvést následující skupiny, přičemž odpovídající nepřirozená α-aminokyselina je uvedena v závorkách vždy za názvem příslušné charakterizující skupiny: ethyl (a-amino-nmáselná kyselina), n-propyl (α-amino-n-pentanová kyselina), n-butyl (α-amino-n-hexanová kyselina), terč.butyl (a-aminoneohexanová kyselina), neopentyl (a-aminoneoheptanová kyselina, n-heptyl (α-amino-n-nonanová kyselina), cyklohexylmethyl (cyklohexylalanin), fenyl (α-aminofenyloctová kyselina), 2-fenylethyl (homofenylalanin), 1-naftyl (α-amino-l-naftyloctová kyselina), 2-naftyl (a-amino2-naftyloctová kyselina), fenethyl (a-amino-3-fenylmáselná kyselina), α-methylbenzyl (β-methylfenylalanin), α,α-dimethylbenzyl (β , β-dimethylfenylalanin) apod.

Všechny funkční (t.j. reaktivní) skupiny přítomné ve zbytcích R³ a R⁵ mohou být chráněny způsobem, který je o sobě známý v peptidové chemii. Tak například aminoskupina může být chráněna terc.butoxykarbonylskupinou, benzyloxykarbonylskupinou, formylskupinou,. tritylskupinou, trifluoracetylskupinou, 2-(bifenylyl)isopropoxykarbonylskupinou nebo isobornyloxykarbonylskupinou nebo ve formě ftalimidoskupiny Karboxylová skupina může být chráněna například vytvořením snadno štěpitelného esteru, jako je methyl-, ethyl-, terč. butyl- nebo benzylester apod. Hydroxyskupina může být chráněna vytvořením etheru, například methyl-, terč.butyl, benzyl- nebo tetrahydropyranyletheru nebo vytvořením esteru jako acetátu. Merkaptoskupina může být chráněna například terc.butylskupinou, benzylskupinou nebo podobnými skupinami.

Sloučeniny obecného vzorce I vytvářejí farmaceuticky vhodné soli s bázemi, jako s hydroxidy alkalických kovů (například hydroxidem sodným a hydroxidem draselným), hydroxidy kovů alkalických zemin (například hydroxidem vápenatým a hydroxidem hořečnatým), hydroxidem amonným apod Ty sloučeniny obecného vzorce I, které jsou bazické, vytvářejí farmaceuticky vhodné soli s kyselinami. Jako tyto soli přicházejí v úvahu nejen soli s anorganickými kyselinami, jako jsou halogenovodíkové kyseliny (například kyselina chlorovodíková a kyselina bromovodíková), kyselina sírová, kyselina dusičná, kyselina fosforečná atd., nýbrž i soli s organickými kyselinami, jako je kyselina octová, kyselina vinná, kyselina jantarová, kyselina fumarová, kyselina maleinová, kyselina jablečná, kyselina salicylová, kyselina citrónová, kyselina methansulfonová, kyselina p-toluensulfonová atd.

Sloučeniny obecného vzorce I obsahují přinejmenším dva asymetrické atomy uhlíku a v důsledku toho mohou existovat ve formě opticky aktivních enantiomerů, diasteroisomerů nebo racemátů. Do rozsahu tohoto vynálezu spadají všechny tyto formy.

Ve sloučeninách obecného vzorce I představuje R¹přednostně ethylskupinu, isopropylskupinu, n-butylskupinu nebo n-hexylskupinu, zejména ethylskupinu.

R² přednostně představuje atom vodíku, methylskupinu, skupinu obecného vzorce -(CH₂)_n-aryl, kde arylem je fenyl, nebo skupinu obecného vzorce -(CH₂)_n-Het, kde n má výše uvedený význam a Het představuje pěti- nebo šestičlenný heterocyklický kruh obsahující atom dusíku, který popřípadě obsahuje jako přídavné heteroatomy jeden nebo dva atomy dusíku, jeden atom dusíku a jeden atom kyslíku nebo jeden atom kyslíku. Het přednostně představuje skupinu vzorce a, b, c, d, e nebo f.

N(a)

-nf¹

(b)

(e)

V

symboly dohromady představují přídavnou vazbu nebo zbytek přikondenzovaného benzenového kruhu;

R⁹ představuje atom vodíku nebo alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

X představuje skupinu vzorce -C0-, -CH₂-, -CH(alkyl s až 6 atomy uhlíku)-, -C(alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku)₂“, -NH-, -N(alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku)nebo -O-; a

Y představuje skupinu vzorce -0-, -NH- nebo -N(alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku)-.

V obzvláště výhodném provedení představuje Het skupinu vzorce b, zejména ftalimidoskupinu, nebo c, zejména

3-methyl-2,5-dioxo-l-imidazolidinylskupinu.

Pokud se týče symbolu n, přednostně znamená číslo 1, pokud R² představuje skupinu obecného vzorce -(CH2)n-Het, nebo číslo 3, pokud R² představuje skupinu obecného vzorce -(CH2)_n-aryl.

O

R^J přednostně představuje methyl, isobutyl, terč. butyl, chráněný 4-aminobutyl, neopentyl, n-heptyl, cyklohexylmethyl, benzyl, α-methylbenzyl nebo a,a-dimethylbenzyl. Chráněnou 4-aminobutylskupinou je přednostně 4ftalimidobutylskupina.

Přednostně R⁴ představuje alkylkarbamoylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, zejména methylkarbamoyl nebo ethylkarbamoyl, R⁵ představuje isobutyl a R⁶ představuje atom vodíku nebo každý ze symbolů R⁴, R⁵ a R⁶ představuje atom vodíku nebo R⁴ a R⁵ představují atomy vodíku a R⁶ představuje terc.butylskupinu nebo každý ze symbolů R⁴, R⁵ a R⁶ představuje methylskupinu.

Sloučeninami obecného vzorce I, kterým se dává obzvláštní přednost jsou:

ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S)-heptyl8 sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo s))-nonylsukcinyl3-L-leucyl-L-leucinu;

ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S)-heptyl3 (S)-methylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu;

ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo

S) - (f talimidomethyl)sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu;

methylamid [ 4-(N-hydroxyamino)-2 (RS)-nonylsukcinyl ] L-terc.butylglycinu;

methylamid [ 4- (N-hydroxyamino) - 2 (RS) -heptylsukcinyl ] L-fenylalaninu;

methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S)-(ftalimidomethyl)sukcinyl]-L-terc.butylglycinu a ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S)-(3-fenylpropyl)sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu.

Jako příklady jiných zajímavých sloučenin obecného vzorce I, je možno uvést:

methylamid [ 4 - (N-hydroxyamino) - 2 (RS) -heptylsukcinyl ] L-leucinu;

neopentylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl ]-L-leucinu;

ethylamid [ 4- (N-hydroxyamino) -2 (RS) -heptylsukcinyl ] L-alanyl-L-leucinu;

ethylamid; [ 4 - (N-hydroxyamino) - 2 (RS) -heptylsukcinyl ] L-(N^ -ftaloyl)-lysyl-L-leucinu;

ethylamid [4 -(N-hydroxyamino)- 2(RS)-undecylsukcinyl]L-leucyl-L-leucinu;

ethylamid [4 -(N-hydroxyamino)- 2(RS)-heptylsukcinyl]L-fenyl-alanyl-L-leucinu;

ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl 3 L-nonalyl-L-leucinu;

terč.butylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl 3 -L-fenylalaninu;

methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl]-L-terc.butylglycinu ;

methylamid (4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl]-L-neopentylglycinu;

ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinylJL-homofenylalany1-L-leucinu;

methylamid [4 -(N-hydroxyamino)- 2(RS)-heptylsukcinyl]L-cyklohexylalaninu ;

methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2 (RS )-isooktylsukcinyl]-L-fenylalaninu;

methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptylsukcinyl]L-neopentylglycinu;

methylamid [4 -(N-hydroxyamino)- 2(R)-heptylsukcinyl](D nebo L)-β,β-dimethylfenylalaninu;

methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptylsukcinyl ] (D nebo L)-threo^-methylfenylalaninu;

methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptylsukcinyl ]DL-erythro^-methylf enylalaninu a ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S) [ (3-methyl-2,5-dioxo-l-imidazolidinyl )methyl]sukcinyl]-Lleucyl-L-leucinu.

Předmětem vynálezu je dále způsob výroby sloučenin obecného vzorce I, definovaných výše a jejich farmaceuticky vhodných solí, jehož podstata spočívá v tom, že se

a) katalyticky hydrogenuje sloučenina obecného vzorce II

(II) kde R¹, R², R³, R⁴, R⁵ a R⁶ mají význam uvedený výše a Bz představuje benzylskupinu nebo že se

b) kyselina obecného vzorce III

R⁵

J\^Re

CO-NH R⁴ (III) kde R¹, R², R³,

R⁴, R⁵ a R⁶ mají význam uvedený výše, nebo její aktivovaný ester, nechá reagovat se sloučeninou obecného vzorce IV

H₂N-OZ (IV) kde Z představuje atom vodíku nebo trialkylsilylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v každém z alkylovým zbytků nebo difenylalkylsilylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, a popřípadě se odštěpí jakákoliv difenylalkylsilylskupina s

I až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, která je přítomna v reakčním produktu a popřípadě se získaná sloučenina obecného vzorce I převede na svou farmaceuticky vhodnou sůl.

Katalytická hydrogenace sloučeniny obecného vzorce

II podle provedení a) způsobu podle vynálezu se může provádět o sobě známým způsobem, například v inertním organickém rozpouštědle, za použití vodíku v přítomnosti katalyzátoru na bázi vzácného kovu. Jako vhodná inertní organická rozpouštědla je například možno uvést alkanoly s 1 až 6 atomy uhlíku, jako je methanol, ethanol atd. Pokud se týče katalyzátoru, může se například jednat o katalyzátor na bázi platiny, palladia nebo rhodia, který může být nanesen na vhodném nosiči. Přednostním katalyzátorem je palladium na uhlíku. Teplota a tlak nejsou kritické, i když se s ohledem na snadnost provedení provádí katalytická hydrogenace přednostně při teplotě místnosti a za atmosferického tlaku.

Reakce kyseliny obecného vzorce III nebo jejího aktivovaného esteru obecného vzorce IV podle provedení b)

- způsobu podle vynálezu se může provádět o sobě známým způsobem. Když se například použije kyseliny, může se reakce účelně provádět v inertním organickém rozpouštědle, jako je dimethylformamid apod. za použití hydroxybenzotriazolu a za přítomnosti kondenzačního činidla, jako je hydrochlorid l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu, při teplotě v rozmezí od asi 0 °C do asi teploty místnosti. Pokud se používá aktivovaného esteru kyseliny obecného vzorce III, může se reakce účelně provádět v inertním organickém rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, při teplotě přibližně v rozmezí od 0 °C do teplotě místnosti. Přednostními sloučeninami obecného vzorce IV jsou sloučeniny, v nichž Z představuje atom vodíku, terc.butyldimethylsilylskupinu nebo terč.butyldifenylsilylskupinu. Pokud se používá sloučeniny obecného vzorce IV, kde Z představuje tri(alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku)sillylskupinu, tato skupina se odštěpí v průběhu reakce a zpracování reakční směsi a sloučenina obecného vzorce I se získá přímo. Na druhé straně, pokud se používá sloučeniny obecného vzorce IV, kde Z představuje diaryl(alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku)silylskupinu, tato skupina zůstane v reakčnim produktu a musí se následně odštěpit o sobě známým způsobem, například pomocí fluoridových iontů.

Sloučeniny obecného vzorce I je možno převádět na farmaceuticky vhodné soli reakcí s bázemi a bázické sloučeniny obecného vzorce I je možno převádět na farmaceuticky vhodné soli reakcí s kyselinami. Tyto reakce se mohou provádět konvenčními způsoby.

Sloučeniny obecného vzorce II a III, kterých se používá jako výchozích látek při způsobu podle vynálezu, jsou nové a také tvoří předmět tohoto vynálezu. Je možno je připravovat například tak, že se sloučenina obecného vzorce

kde R¹ a R² mají význam uvedený výše a R¹⁰ představuje chránící skupinu, kondenzuje se sloučeninou obecného vzorce VI

R³⁰ rSO

XO-NH (VI) kde R⁶ má význam uvedený výše a R³⁰, R⁴⁰ a R⁵⁰ mají významy uvedené výše pro R³, R⁴ a R$, přičemž jsou v nich však všechny přítomné funkční skupiny chráněny, načež se z vzniklého kondenzačního produktu obecného vzorce VII

R¹

R³⁰ R⁵⁰

Λ Λ ' CO-NH

R⁶

R⁴⁰ (VII) odštěpí chránící skupina R , za vzniku sloučeniny obecného vzorce lila

R¹

R⁵⁰

R⁶

R*³

R³⁰ ^CO-NH^ (lila) kde R^R², R⁶, R³⁰, R⁴⁰ a R⁵⁰ mají význam uvedený výše a

i) pokud se má získat sloučenina obecného vzorce II, kondenzuje se sloučenina obecného vzorce lila, popřípadě před nebo po odštěpení chránící skupiny nebo skupin přítomných ve zbytcích R³⁰, R⁴⁰ a R⁵⁰, s O-benzylhydroxylaminem nebo ii) pokud se má získat sloučenina obecného vzorce III, v níž funkční skupina nebo skupiny přítomné ve zbytcích R³⁰, R⁴⁰ a R⁵⁰ nejsou chráněny, odštěpí se chránící skupina nebo skupiny přítomné ve sloučenině obecného vzorce lila.

Symbol R¹⁰ v obecném vzorci V může představovat jakoukoliv obvyklou chránící skupinu karboxyskupiny, například methyl, ethyl, benzyl nebo přednostně terč.butyl.

Kondenzace sloučeniny obecného vzorce V se sloučeninou obecného vzorce VI se může provádět postupy, které jsou v peptidové chemii obvyklé, například metodou, při níž se používá halogenidu kyseliny, azidu kyseliny, anhydridu kyseliny, aktivovaného amidu, směsného anhydridu s kyselinou uhličitou nebo aktivovaného esteru.

Odštěpování chránící skupiny R¹⁰ z kondenzačního produktu obecného vzorce VII se může provádět o sobě známým způsobem, například hydrolýzou, nebo v případě terč.butylové chránící skupiny, působením bezvodé kyseliny trifluoroctové.

V závislosti na povaze chránící skupiny nebo skupin, přítomných ve zbytcích R³⁰, R⁴⁰ a R⁵⁰, může současně dojít k jejich odštěpení.

Reakce sloučeniny obecného vzorce lila s O-benzylhydroxylaminem, se může provádět obvyklým způsobem, například způsobem, popsaným výše v souvislosti s kondenzací sloučeniny obecného vzorce V se sloučeninou obecného vzorce VI.

Odštěpování chránících skupin, které jsou přítomny ve zbytcích R³⁰, R⁴⁰ a R⁵⁰, při výrobě výchozích látek obecného vzorce II a III, která je popsána výše, se může provádět způsoby, které jsou o sobě známé v chemii peptidů, například zmýdelňováním, působením bezvodé kyseliny trifluoroctové nebo hydrogenolýzou, podle toho, o jakou chránící skupinu se jedná.

Kyseliny obecného vzorce III je možno převádět na odpovídající aktivované (reaktivní) estery, které jsou také nové a tvoří předmět tohoto vynálezu, o sobě známým způsobem, například reakcí s N-hydroxysukcinimidem za přítomnosti dicyklohexylkarbodiimidu, za vzniku esteru N-hydroxysukcinimidu.

Sloučeniny obecného vzorce V a VI, citované výše, se mohou získat způsoby, popsanými v příkladech, uvedených dále nebo analogickými postupy, pokud se nejedná o již známé sloučeniny nebo analogy známých sloučenin.

Jak již bylo uvedeno výše, deriváty hydroxamové kyseliny podle tohoto vynálezu, jsou inhibitory matriční metaloproteinasy. Účinnost tohoto typu proti stromelysinu a želatinase, což jsou dva z těchto enzymů, je možno demonstrovat zkušebními postupy, které jsou popsány dále.

Stromelysin (zkouška B)

Prostromelysin se přečistí z kultivačního media - humánních fibroplastů prostromelysinovou protilátkovou afinitní chromatografií [Ganja-Smith Z., Nagase, Η.,

Woessner J. F. Jr., Biochem J. 1989, sv. 285 (1), str. 115 až 119]. Latentní proenzym se aktivuje inkubací s trypsinem (5 mg/ml) při 25 °C po dobu 2 hodin a po této době se trypsin inaktivuje za použití desetinásobného nadbytku sojového trypsinového inhibitoru. Inhibiční účinnost výše uvedených derivátů hydroxamové kyseliny se stanoví za použití ¹⁴C-acetylovaného b-kaseinového substrátu. K roztoku substrátu (4 mg/ml) ve 25mM tris HCI pufru o ,pH 7,5, obsahujícím chlorid vápenatý v lOmM koncentraci a 0,05 % látky Brij(^R) se přidá stromelysin tak, aby jeho koncentrace v roztoku byla 5nM. Získaný roztok se 20 hodin inkubuje při 37 °C. Štěpení substrátu enzymem se zakončí přídavkem 40% kyseliny trichloroctové a vysrážený nerozštěpený substrát se peletizuje 0,25hodinovým odstřeďováním při 10 000 g. Supernatant se odtáhne a ¹⁴C-radioaktivita se stanoví kapalinovou scintilační spektrometrií. Jako koncentrace IC₅₀se označuje koncentrace derivátu hydroxamové kyseliny při štěpení enzymem, která sníží rozštěpení substrátu na 50 % hodnoty, jíž lze dosáhnout za použití samotného enzymu.

Stromelysin (zkouška B)

Latentní proenzym (30 ^g/ml) se aktivuje inkubací s trypsinem (0,5 μg/ml) při 25 °C po dobu 30 minut a po této době se trypsin inaktivuje za použití dvacetinásobného nadbytku inhibitoru trypsinu. Inhibiční účinnost derivátů hydroxamové kyseliny se stanoví za použití substrátu s fluorescenčním peptidem (7-methoxykumarin-4-yl)acetylL-prolyl-L-leucyl-L-alanyl-L-nonalyl-[ 3-( 2,4-dinitrofenyl)L-2,3-diaminopropyl]-L-arginyl-L-argninin). K roztoku substrátu (4mM) se přidá stromelysin (finální koncentrace 35 ng/ml) a měnící se množství derivátu hydroxylaminu v 50mM Tris HC1 pufru o pH 7,5, který obsahuje chlorid sodný ve 200mM koncentraci, chlorid vápenatý v lOmM koncentraci,

0,05 % Brij 35 a 5 % methanolu. Vzniklý roztok se 16 hodin inkubuje při- 37 °C. Tvorba produktu se stanovuje spektrofluorometričky za použití excitační vlnové délky 325 nm a emisní vlnové délky 395 nm. Jako koncentrace IC₅₀ se označuje koncentrace derivátu hydroxylaminu při štěpení enzymem, která sníží rozštěpení substrátu na 50 % hodnoty, jíž lze dosáhnout za použití samotného enzymu.

Želatinasa (zkouška C)

Inhibiční účinnost derivátů hydroxylaminu in vitro proti želatinase B, získané z humánních neutrofilů, je možno demonstrovat následujícím zkušebním postupem.

Proželatinasa B se přečistí z humánních neutrofilů tak, že se nejprve neutrofily oddělí od lidské krve odstřelováním a dextranovou sedimentací. Oddělené neutrofily se rozbijí kombinovaným působením 0,05% roztoku Triton X-lOo(^R) a ultrazvuku. Rozdrcené buňky se oddělí odstřelováním při vysokých otáčkách. Proželatinasa B se přečistí ze supernatantu afinitní chromatografií na agarose s želatinou. Vázaný proenzym se eluuje z afinitní matrice promývacím roztokem, který obsahuje 10 % dimethylsulfoxidu v pufru. Analýza přečištěného materiálu ukazuje, že je přítomen jediný pás proteinu o molekulové hmotnosti 95 kDa (po vizualizaci SDS-PAGE). Želatinasa B se inkubuje přes noc při 37 °C s p-aminofenylmerkuriacetátem (koncentrace lmM). Inhibiční účinnost přítomného derivátu hydroxylaminu se stanoví za použití syntetického substrátu pro tento enzym N-acetyl-Pro-Gln-Gly-Leu-Leu-Gly-ethylester. Želatinasa se přidá k roztoku substrátu o koncentraci 0,25mM v 50mM boritanovém pufru (pH 7,5), v němž je přítomen chlorid .vápenatý v lmM koncentraci a derivát hydroxylaminu ve známé koncentraci. Výsledný roztok se 16 hodin inkubuje při 37 °C.

- Působení enzymu se zastaví přídavkem stejného objemu roztoku hydrogenuhličitanu sodného o koncentraci 20 g/1 v 50% vodném methanolu, obsahujícím pikrylsulfonovou kyselinu v množství 0,5 g/1. Získaný roztok se další hodinu inkubuje při 37 °C a potom se reakce ukončí a reakční směs stabilizuje okyselením IN kyselinou chlorovodíkovou. Při 335 nm se spektrofotometricky stanoví koncentrace vzniklého trinitrofenyl-LeuLeu-Gly-ethylesteru. Jako koncentrace IC_5Q se označuje koncentrace derivátu hydroxylaminu při štěpení enzymem, která sníží rozštěpení substrátu na 50 % hodnoty, jíž lze dosáhnout za použití samotného enzymu.

Výsledky, které byly získány při výše uvedených zkouškách za použití reprezentativních derivátů hydroxamové kyseliny, podle tohoto vynálezu, jsou souhrnně uvedeny v následující tabulce:

Tabulka

Sloučenina obecného vzorce I

Zkouška A

IC₅₀ (mol)

A

B

C

D

E

F

G

H

3,3x1ο^-8

2,6xl0^-8

Ι,ΐχίο^-8*

Ι,ΟχΙΟ^-8*

Zkouška B

IC₅₀(mol) l,25xl0⁸

9,3xl0^-9

2,3xl0^-9

5,9xl0^-10* l,8xl0^-8

2,2xl0^-8 l,2xl0^-9

6,6xl0^-10*

Zkouška C

1^50(mol)

3,2xl0^-7

5,0xl0^-8 l,5xl0^-9*

3,2XlO^-9*

9,0xl0^-10*

Symbol * označuje, že hodnota IC₅₀ byla omezena vzájemným vyčerpáním enzymu.

Sloučenina A: ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S))heptylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu;

Sloučenina B: ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S)nonylsukcinylJ-L-leucinu;

Sloučenina C: ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S)heptyl-3 (S) -methylsukcinyl ] -L-leucyl-L-leucinu;

Sloučenina D: ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl3(R nebo S)-(ftalimidomethyl)sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu; Sloučenina E: methylamid [4-(N-hyďroxyamino)-2(RS)-nonyl19 sukciny1]-L-terc.butylglycinu;

Sloučenina F: methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl]-L-fenylalaninu;

Sloučenina G; methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl3(R nebo S)-(ftalimidomethyl)sukcinyl]-L-terc.butylglycinu;

Sloučenina H: ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S)-(3-fenylpropyl)sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu.

Sloučenin obecného vzorce I a jejich farmaceuticky vhodných solí se může používat jako léčiv, například ve formě farmaceutických přípravků. Tyto farmaceutické přípravky se mohou podávat orálně, například ve formě tablet, potažených tablet, dražé, tvrdých a měkkých želatinových kapslí, roztoků, emulzí nebo suspenzí. Mohou se však také podávat rektálně, například ve formě čípků nebo parenterálně, například ve formě injekčních roztoků.

Při výrobě farmaceutických přípravků se mohou sloučeniny obecného vzorce I a jejich farmaceuticky vhodné soli zpracovávat s terapeuticky inertními anorganickými nebo organickými nosiči. Pro tablety, potažené tablety, dražé a tvrdé želatinové kapsle se jako těchto nosičů může například používat laktózy, kukuřičného škrobu nebo jeho derivátů, mastku, kyseliny stearové nebo jejích solí. Vhodnými nosiči pro měkké želatinové kapsle jsou například rostlinné oleje, vosky, tuky, polopevné a kapalné polyoly apod. V závislosti na povaze účinné přísady se však v případě měkkých želatinových kapslí obvykle nemusí používat žádných nosičů. Jako vhodné nosiče pro výrobu roztoků a sirupů je například možno uvést vodu, polyoly, sacharózu, invertní cukr, glukózu apod. Jako vhodné nosiče pro výrobu injekčních roztoků přicházejí v úvahu například voda, alkoholy, polyoly, glycerol, rostlinné oleje apod. Jako vhodné nosiče pro výrobu čípků je možno uvést přírodní a ztužené oleje, vosky, tuky, polokapalné polyoly apod.

Farmaceutické přípravky mohou také obsahovat konzervační látky, stabilizátory, smáčedla, emulgátory, sladidla, barvicí činidla, příchutě, soli pro přizpůsobení osmotického tlaku, tlumiče pH, povlakotvorná činidla nebo antioxidanty.

Předmětem tohoto vynálezu jsou,jak již bylo uvedeno výše, také léčiva obsahující sloučeninu obecného vzorce I nebo její farmaceuticky vhodnou sůl a terapeuticky vhodný nosič. Dále je předmětem vynálezu také způsob výroby těchto léčiv, jehož podstata spočívá v tom, že se sloučenina obecného vzorce I nebo její farmaceuticky vhodná sůl smíchá s terapeuticky inertním nosičem a vzniklá směs se převede na galenickou aplikační formu.

Jak již bylo uvedeno výše, sloučenin obecného vzorce I a jejich farmaceuticky vhodných solí se může používat při léčbě a prevenci chorob, zejména při léčbě a prevenci degenerativních onemocnění kloubů nebo při léčbě invasivních nádorů, atherosclerosis a sclerosis multiplex. Dávkování může kolísat v širokém rozmezí a vždy je třeba je samozřejmě přizpůsobit individuálním požadavkům každého jednotlivého případu. V případě podávání dospělým by měla být obvykle vhodná denní dávka v rozmezí od asi 5 do asi 30 mg, přednostně od asi 10 do asi 15 mg. Horní hranici tohoto rozmezí lze však překročit, pokud by se to mělo ukázat jako vhodné. Denní dávku je možno podávat najednou nebo ve formě několika dílčích dávek.

Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.

Struktura získaných produktů byla potvrzena NMR spektroskopií a hmotnostní spektroskopií. Eluční systémy, použité u chromatografie na tenké vrstvě mají následující složení:

Systém A: chloroform:methanol:kyselina octová:voda 120:15:3:2;

Systém B: chloroform:methanol:kyselina octová:voda 240:24:3:2;

Všechny teploty jsou udávány ve stupních C.

Příklady provedení vvnálezu

Příklad 1

0,10 g (0,17 mmol) ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(R nebo S)heptylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu (isomer 1) v 10 ml methanolu se hydrogenuje po dobu 1 hodiny za přítomnosti 0,05 g 5% palladia na uhlíku. Směs se přefiltruje, filtrát se odpaří a zbytek se promyje diethyleterem a za vakua vysuší. Získá se 0,083 g (98 %) ethylamidu [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S)heptylsukcinyl]-L-leucyl-Lleucinu ve formě hygroskopické bílé pevné látky;

Rf (systém A) 0,54; MS: (M+H)⁺ 485

Analýza pro ^C25^H48^N4°5*⁰'^6H2^O: vypočteno: C 60,60; ΗΙΟ,ΟΙ; N 11,31 nalezeno: C 60,62; H 9,75; N 11,39 %

Ethylamid [4-(N-benzyloxyamino)-2(R nebo S)heptylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu, kterého se použije jako výchozí látky, se připraví následujícím způsobem:

A) 25,95 g (0,15 mol) DL-a-aminononanové kyseliny se rozpustí v 900 ml kyseliny octové za zahřívání na 40 °C.

V průběhu 6 hodin se po částech přidá 20,7 g (0,3 mol) dusitanu sodného, přičemž zdroj tepla se odstaví po přidání přibližně jedné třetiny dusitanu sodného. Směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti a potom se odpaří. Ke zbytku se přidá voda a získaný olej se extrahuje diethyletherem (2x200 ml). Spojené etherové extrakty se vysuší bezvodým síranem sodným a odpaří. Získá se 31,9 g čirého hnědého oleje. Tento olej se rozpustí ve 150 ml methanolu, k roztoku se přidá roztok 18 g hydroxidu sodného ve 150 ml vody a směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti. Methanoi se odpaří, přidá se voda a roztok se okyselí 38 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Produkt se extrahuje diethyletherem (2 x 150 ml) a extrakty se vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Získaná pevná látka se překrystaluje ze 120 ml petroletheru s rozmezím teploty varu 60 až 80 °C. Získá se 20,58 g (79 %) 2(RS)-hydroxynonanové kyseliny o teplotě tání 67 až 69 °c.

B) 21,4 g (0,123 mol) 2(RS)-hydroxynonanové kyseliny se rozpustí ve 240 ml ethylacetátu. Ke vzniklému roztoku se přidá 17,3 ml (0,123 mol) triethylaminu a 14,8 ml (0,123 mol) benzylbromidu, načež se vzniklá směs 3 hodiny vaří pod zpětným chladičem. Potom se směs ochladí, přefiltruje, promyje 2M kyselinou chlorovodíkovou, vodou a 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Po odpaření rozpouštědla se získá 25,4 g (78 %) benzyl-2(RS)-hydroxynonanoátu ve formě oleje;

Rf(ethylacetát/hexan, 1:1) 0,68.

C) Roztok 24,3 g (92 mmol) benzyl-2(RS)-hydroxynonanoátu a 8,9 ml (110 mmol) pyridinu ve 150 ml suchého dichlormethanu se za míchání v průběhu 0,5 hodiny přidá k roztoku 18,6 ml (110 mmol) anhydridů trifluormethansul23 fonové kyseliny ve 200 ml suchého dichlormethanu při teplotě 0 °C. Směs se další 1 hodinu míchá při 0 °C a potom se k ní přidá 3,7 ml (46 mmol) pyridinu a roztok 7,7 ml (46 mmol) anhydridu trifluormethansulfonové kyseliny ve 100 ml suchého dichlormethanu. Směs se 1 hodinu míchá při 0 °C, promyje se vodou (2 x 100 ml), vysuší síranem hořečnatým a odpaří na olej. Po chromatografií na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu (1:9) jako elučního činidla, se získá

26,7 g (73 %) benzyl-2(RS)-trifluormethansulfonyloxynonanoátu; Rf (hexan/ethylacetát, 3:1) 0,66.

D) Roztok 26,5 g (67 mmol) benzyl-2(RS)-trifluormethansulf onyloxynonanoátu ve 100 ml suchého dichlormethanu se přikape k suspenzi 2,11 g (70 mmol) 80% natriumhydridu a 16,75 g (67 mmol) benzyl-terc.butylmalonátu ve 170 ml suchého dimethylformamidu při teplotě 0 °C. Směs se 2 hodiny míchá při 0 °C a 16 hodin při teplotě místnosti, zředí se dichlormethanem, postupně promyje vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří na olej (34,6 g, který obsahuje dibenzyl-3-terč.butoxykarbony1-2(RS)-heptylsukcinát; Rf (ethylacetát/hexan, 3:1) 0,49. Tento olej se rozpustí v 540 ml isopropylalkoholu a roztok se 2 hodiny hydrogenuje za přítomnosti 0,5 g 5% palladia na uhlíku. Směs se přefiltruje, filtrát se odpaří, ke zbytku se přidá toluen a směs se znovu odpaří, aby se odstraniliy stopy isopropylalkoholu. Zbytek (27,8 g) ve 400 ml toluenu a 9,1 ml (65 mmol) triethylaminu se refluxuje 2 hodiny a potom odpaří. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a roztok se promyje 0,5M kyselinou chlorovodíkovou (2 x 80 ml) a vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Získá se 17,55 g (96 %)

4-terc.butylhydrogen-2(RS)-heptylsukcinátu; Rf (ethylacetát 0,63; MS:(M+H)⁺ 273.

E) 1,5 g ethylaraidu (4 mmol) N-terč.butoxy24 karbonyl-L-leucyl-L-leucinu se rozpustí ve 20 ml 4M chlorovodíku v ethylacetátu, a roztok se 0,75 hodiny míchá při teplotě místnosti, odpaří se a zbytek se vysuší za vakua. Ke zbytku v 10 ml suchého dimethylformamidu se při 0 °C postupně přidá 0,51 ml (4 mmol) N-ethylmorfolinu, roztok

1,1 g (4 mmol) 4-terc.butylhydrogen-2(RS)-heptylsukcinátu v 5 ml dichlormethanu, 0,82 g (6 mmol) hydroxybenzotriazolu a 0,92 g (4,4 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu. Směs se 1 hodinu míchá při 0 °C potom 16 hodin při teplotě místnosti. Přidá se několik kapek 2-dimethylaminoethylaminu, suspenze se chladí 3 hodiny na 0 °C, přefiltruje se a filtrát se odpaří. Zbytek se vyjme do ethylacetátu, postupné promyje 5% roztokem kyseliny citrónové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Po chromatografií na silikagelu, při níž se jako elučniho činidla použije směsi ethylacetátu a hexanu (2:1) se získá 1,5 g (71 %) ethylamidu [ 4-terc.butoxy-2(RS)-heptylsukcinyl]-L-leucyl-Lleucinu ve formě bílé pevné látky; Rf (dichlormethan/ methanol, 19:1) 0,3; MS:(M+H)⁺ 526.

F) 0,8 g (1,5 mmol) ethylamidu [4-terc.butoxy2(RS)-heptylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu se rozpustí v 15 ml trifluoroctové kyseliny a vzniklý roztok se 2 hodiny míchá a potom odpaří. Zbytek se 3 x odpaří s toluenem a potom rozpustí v lo ml suchého dichlormethanu. Po ochlazení na 0 °C se k tomuto roztoku přidá 0,37 ml (4,5 mmol) pyridinu a 0,64 g (1,5 mmol) di(l-benzotriazolyl)karbonátu (70 %) a směs se 1 hodinu míchá při 0 °C. Dále se přidá 0,22 ml (1,8 mmol) O-benzylhydroxylaminu a směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a 16 hodin při teplotě místnosti. Výsledná suspenze se přefiltruje a oddělená pevná látka se postupně promyje dichlormethanem, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, 2M roztokem kyseliny chlorovodíkové a vodou a potom se za vakua vysuší. Po chromatografií na silikagelu, při níž se jako elučního činidla použije směsi methanolu a dichlormethanu (1:19) se získá 0,21 g (24 %) ethylamidu [4-(Nbenzyloxyamino)-2(R nebo S)-heptylsukcinyl]-L-leucyl-Lleucinu (isomer 1); Rf (methanol/dichlormethan, 1:19) 0,21; MS:(M+H)⁺ 575; HPLC (ODS reversní fáze, eluce směsí 60 % acetonitrilu v triethylamoniumfosfátovém pufru o pH 2,5) Rt

6,4 minuty.

Dichlormethanový filtrát se postupné promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 2M kyselinou chlorovodíkovou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Po chromatografii na silikagelu, při níž se jako elučního činidla použije směsi methanol/dichlormethan (1:40), se získá 0,42 g (49 %) ethylamidu [4-(N- benzyloxyamino)-2(R nebo S)-heptylsukcinyl]-Lleucyl-L-leucinu ve formě směsi isomerů. Rf (methanol/ dichlormethan, 1:19) 0,20; MS:(M+H)⁺ 575; HPLC (ODS reversní fáze, eluce 60% acetonitrilem v triethylamoniumfosfátovém pufru o pH 2,5) Rt 6,4 a 11,3 min; poměr isomeru 1 k isomeru 2: 1:3,7.

Analýza pro ^C32^H54^N4°5 (574,81):

vypočteno: C 66,87; H 9,47; N 9,75 % nalezeno: C 66,51; H 9,41; N 9,68 %

Příklad 2

0,5 g (1,12 mmol) methylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2 (RS)-heptylsukcinyl ]-L-leucinu v 10 ml methanolu se 2 hodiny hydrogenuje za přítomnosti 0,01 g 5% palladia na uhlíku. Směs se přefiltruje a filtrát se odpaří. Zbytek se za vakua vysuší a tak se získá 0,36 g (90 %) methylamidu [ 4-(N-hydroxyamino)-2 (RS)-heptylsukcinyl j-L-leucinu ve formě bílého prášku; Rf (methanol/dichlormethan, 1:19), 0,47 a

0,39; MS;(M+H)⁺ 358.

Analýza pro ^ci8^H35^N3°4 (357,50); vypočteno: C 60,48; H 9,87; N 11,75 nalezeno C 60,71; H 9,93; N 11,34

Výchozí látka se připraví následujícím způsobem:

A) 1,08 g methylamidu benzyloxykarbonyl-L-leucinu ve 20 ml methanolu s obsahem 3,7 ml 1M kyseliny chlorovodíkové se 2 hodiny hydrogenuje za přítomnosti 0,05 g 5% palladia na uhlíku. Směs se přefiltruje, filtrát se odpaří a zbytek se znovu odpaří s toluenem a potom za vakua vysuší. Potom se zbytek vyjme do 10 ml dímethylformamidu, směs se ochladí na 0 °c a neutralizuje přídavkem 0,5 ml (3,9 mmol) N-ethylmorfolinu. Přidá se roztok 1,01 g (3,7 mmol)

4-terc.butylhydrogen-2(RS)-heptylsukcinátu ve 20 ml dímethylformamidu a potom 0,6 g (4,4 mmol) hydroxybenzotriazolu a 0,84 g (4,08 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu.

Směs se 1 hodinu míchá při 0 °C potom 16 hodin při teplotě místnosti a potom se odpaří. Zbytek se vyjme do dichlormethanu, roztok se přefiltruje a postupně promyje dvěma dávkami 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného, vodou, 0,5M kyselinou chlorovodíkovou a vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří na olej. Po chromatografii na silikagelu, při níž se jako elučního činidla použije směsi methanolu a dichlormethanu (3:97) se získá 0,99 g (67 %) methylamidu [terč. butoxy-2(RS)-heptylsukcinyl]-L-leucinu ve formě oleje; Rf (ethylacetát) 0,47 a 0,55; MS:(M+H)⁺ 399.

B) 0,96 g (2,4 mmol) methylamidu [terč.butoxy2(RS)-heptylsukcinyl]-L-leucinu se rozpustí ve 20 mol triflurooctové kyseliny, směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti a potom odpaří. Zbytek se 3 x odpaří s toluenem, potom rozpustí v 10 ml dímethylformamidu a roztok se ochladí na O °C. Tento roztok se neutralizuje přídavkem 0,61 ml (4,8 mmol) N-ethymorfolinu. Přidá se 0,39 g (2,89 mmol) hydroxybenzotriazolu a 0,57 g (2,97 mmol) hydrochloridu 1-ethyl3“(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu a roztok se míchá 1 hodinu při 0 °C. Potom se přidá roztok 0,35 g (2,8 mmol) O-benzylhydroxylaminu v 5 ml dichlormethanu a směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a potom přes noc při teplotě místnosti, načež se odpaří. Získaný olej se rozdělí mezi 5% roztok hydrogenuhličitanu sodného a dichlormethan. Organická vrstva se postupně promyje vodou, 2M kyselinou chlorovodíkovou a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří na pevnou látku. Po chromatografií na silikagelu, při níž se jako elučního činidla použije směsi methanolu a hexanu (1:9), se získá 0,56 g (52 %) methylamidu [4-(N)-benzyloxyamino)-2(RS)-heptylsukciny1]-Lleucinu ve formě bílé pevné látky. Rf (ethylacetát) 0,24 a 0,36; MS:(M+H)⁺ 448.

Příklad 3

Podobným způsobem, jako podle prvního odstavce příkladu 2, se z neopentylamidu [4-(N-benzyloxyamino)2(RS)-heptylsukcinyl]-L-leucinu získá neopentylamid [4-(Nhydroxyamino)-2 (RS)-heptylsukcinyl]-L-leucinu ve formě pěny; Rf (methanol/dichlormethan, 1:9) 0,52. MS: (M+H)⁺ 414.

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

Z neopentylamidu N-terc.butoxykarbonyl-L-leucinu se podobnými způsoby, jako v příkladu 1 E) až F), získá neopentyl amid [ 4- (N-benzyloxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl]-L-leucinu ve formě bílé pěny; Rf (methanol/dichlormethan, 1:19) 0,59;

MS: (M+H)⁺ 504.

Příklad 4

Podobným způsobem jako podle prvního odstavce příkladu 2, se z ethylamidu (4-(N-benzyloxyamino)-2-(RS)heptylsukcinyl]-L-alanyl-L-leucinu získá ethylamid [4(N-hydroxyamino)-2-(RS) -heptylsukcinyl ] -L-alanyl-L-leucinu ve formě bílé pevné látky; MS: (M+H)⁺ 443.

Analýza pro ^C22^H42^N4°5 (442,60) vypočteno: C 59,70; H 9,57; N 12,66 nalezeno: C 59,95; H 9,59; N 12,25 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím 2púsobem:

Z ethylamidu N-benzyloxykarbonyl-L-alanyl-L-leucinu se podobnými způsoby, jako v příkladu 2A) až B) získá ethylamid [ 4-(N-benzyloxyamino)-2-(RS)-heptylsukcinyl ]-L-alanyl-L leucinu ve formě sklovité pevné látky; Rf: methanol/dichlormethan, 1:19) 0,25 a 0,41; MS: (M+H)⁺ 533.

Příklad 5

Podobným způsobem jako podle prvního odstavce příkladu 2 se z ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)heptylsukcinylj-L-ÍN⁵-ftaloyl) lysyl-L-leucinu získá ethylamid (4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl]-L-(N^&ftaloyl)lysyl-L-leucinu ve formě bílé pevné látky; Rf (methanol/dichlormethan, 1:19) 0,30; MS: (M+H)⁺ 630.

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

oí £

Z ethylamidu N -benzyloxykarbonyl-N -ftaloyl)lysylL-leucinu se podobnými způsoby, jako v příkladu 2A) až B) získá ethylamid [4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl]29 a

L-(N -ftaloyl)lysyl-L-leucinu, ve formě pěny; Rf (methanol/ dichlormethan, 1:19) 0,41 a 0,50; MS: (M+H)⁺ 720.

Příklad 6

0,2 g (0,33 mmol) ethylamidu [4-(N-benzyloxy~ amino)-2(R nebo S)-nonylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu (isomer 1) ve 20 ml methanolu se 80 minut hydrogenuje za přítomnosti 0,07 g 5% palladia na uhlíku. Směs se přefiltruje, filtrát se odpaří a zbytek se za vakua vysuší. Získá se 0,166 g (98 % ethylamidu (4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S )-nonylsukcinyl ] L-leucyl-L-leucinu ve formě bílé pevné látky; Rf (systém B) 0,35; MS: (M+H)⁺ 513.

Analýza pro ^C27^H52^N4°5 (⁵¹²/74) vypočteno: C 63,25; H 10,22; N 10,93 % nalezeno: C 62,83; H 10,14; N 10,74 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

A) 6,25 ml (25 mmol) dibenzylmalonátu se rozpustí ve 25 ml suchého dimethylformamidu pod atmosférou dusíku a k roztoku se přidá v průběhu 10 minut 0,75 g 80% natriumhydridu. Směs se 0,5 hodiny míchá, ochladí na 0 °C a přidá se k ní roztok 4,75 ml (25 mmol) 1-bromnonanu v 10 ml suchého dimethylformamidu. V míchání při 0 °C se pokračuje po dobu 1 hodiny a potom se směs nechá 64 hodiny stát při teplotě místnosti. Roztok se odpaří a zbytek se rozpustí v diethyletheru. Organická fáze se promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Po chromatografii na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsi ethylacetát/hexan (1:5) se získá 5,85 g (56 %) dibenzylnonylmalonátu ve formě oleje; Rf (ethylacetát/hexan, 1:3) 0,58.

B) K 5,85 g (14 mmol) dibenzylnonylmalonátu se přidá 0,43 g (14 mmol) 80% natriumhydridu a 2,33 ml (14 mmol) terč.butylbromacetátu způsobem popsaným v odstavci A.

Po chromatografii na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetát/hexan (1:19) se získá 6,24 g (83 %) benzyl-4-terč.butylhydrogen-(2-nonyl-2-benzyloxykarbonyl)sukcinátu ve formě oleje; Rf (ethylacetát/hexan, 1:19) 0,74.

C) Benzyl-4-terc.butylhydrogen-(2-nonyl-2-benzyloxykarbonyl)sukcinát z odstavce B) se rozpustí v 80 ml isopropylalkoholu a 1 hodinu hydrogenuje za přítomnosti 0,2 g 5% palladia na uhlíku. Suspenze se přefiltruje, filtrát se odpaří, přidá se 100 ml toluenu a směs se 3 hodiny vaří pod zpětným chladičem. Po odpaření se získá 3,5 g (97 %) 4-terc. butylhydrogen-2(RS)-nonylsukcinátu ve formě oleje; Rf (systém A) 0,73.

D) 1,5 g (4,0 mmol) ethylamidu terc.butoxykarbonyl-L-leucyl-L-leucinu se rozpustí ve 20 ml 4M kyseliny chlorovodíkové v ethylacetátu, roztok se míchá 0,5 hodiny při teplotě místnosti a potom se odpaří. Zbytek se promyje diethyletherem a za vakua vysuší. Pevná látka se vyjme do 10 ml suchého dimethylformamidu, ke směsi se přidá 0,6 ml (4,7 mmol) N-ethylmorfolinu, 1,2 g (4,0 mmol) 4-terc.butylhydrogen-2(RS)-nonylsukcinátu, 0,66 g (4,9 mmol) hydroxybenzotriazolu a 0,78 g (4,0 mmol) hydrochloridu l-ethyl-3-(3dimethylaminopropyDkarbodiimidu. Směs se 1 hodinu míchá při 0 °C, nechá se 16 hodin stát při teplotě místnosti a potom se odpaří. Zbytek se vyjme do ethylacetátu, roztok se postupně promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, 5% roztokem kyseliny citrónové ve vodě, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného a potom se odpaří na pevný zbytek. Po chromatografii na silikagelu za použití elučního· činidla tvořeného ethylacetátem se získá 1,9 g (86 %) ethylamidu [4-terc.butoxy31 (RS)-nonylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu ve formě bílé pevné látky; Rf (ethylacetát) 0,60; MS: (M+H)⁺ 554.

E) 0,95 g (1,7 mmol) ethylamidu [4-terc.butoxy2(RS)-nonylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu se rozpustí v 15 ml trifluoroctové kyseliny a roztok se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti a potom se odpaří. Zbytek se odpaří s toluenem, rozpustí v dichlormethanu a roztok se promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Zbytek se vyjme do 10 ml dimethylformamidu při -15 °C a ke vzniklé směsi se přidá 0,22 ml (1,7 mmol) N-ethylmorfolinu a 0,22 ml (1,7 mmol) isobutylchlorformiátu. Po 10 minutách při -15 °C se přidá 0,42 ml (3,4 mmol) O-benzylhydroxylaminu a směs se 1 hodinu míchá při 0 °C a potom nechá 16 hodin stát při teplotě místnosti. Směs se zředí vodou, pevná látka se odfiltruje a postupně promyje 5% roztokem kyseliny citrónové, vodou a 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a za vakua vysuší. Po chromatografií zbytku na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsí methanol/dichlormethan (3:97) se získá 0,55 g (54 %) ethylamidu [4-(Nbenzyloxyamino)-2(RS)-nonylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu ve formě bílé pevné látky; Rf (methanol/dichlormethan, 1:19) 0,47; MS: (M+H)⁺ 603; HPLC (ODS reversní fáze, eluce 70% acetonitrilem v trimethylamoniumfosfátovém pufru o pH 2,5)

Rt 4,7 a 7,7 minuty.

Isoměry se od sebe oddělí následujícím způsobem:

1,0 g (1,66 mmol) směsi se rozpustí v 10 ml horkého dichlormethanu a roztok se nechá stát při teplotě místnosti 2 hodiny a potom při 4 °C 16 hodin. Pevná látka se odfiltruje, promyje dichlormethanem a za vakua vysuší. Získá se 0,41 g (41 %) ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(R nebo S)-nonylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu (isomer 1) ve formě pevné látky; Rf (systém B) 0,46; HPLC, Rt 4,6 minuty.

Matečné louhy se odpaří a tak se 2Íská 0,47 g ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(R nebo S)-nonylsukcinyl)L-leucyl-L-leucinu (isomer 2) ve formě pevné látky; Rf (systém

B) 0,52; HPLC, Rt 7,5 minuty.

Příklad 7

Podobným způsobem, jako podle prvního odstavce příkladu 6, se z methylamidu (4-(N-benzyloxyamino)2 (RS)-nonylsukcinyl]-L-terc. butylglycinu získá methylamid , [ 4- (N-hydroxyamino) -2 (RS)-nonylsukcinyl ]-L-terc.butylglycinu ve formě bílé pěny; Rf (systém A) 0,58 a 0,64; MS: (M+H) ⁺

386.

Analýza pro C₂0^H39^N3°4 °'^{4 CH}3^0Hvypočteno: C 61,51; H 10,27; N 10,55 nalezeno: C 61,50; H 10,13; N 10,27 %

Výchozí materiál se připraví následujícím způsobem:

Způsobem popsaným v příkladu 6 (D-E) ale za použití methylamidu L-terc.butylglycinu místo deprotektovaného ethylamidu terc.butoxykarbonyl-L-leucyl-L-leucinu se získá methylamid [ 4- (N-benzyloxyamino) -2 (RS) -nonylsukcinyl 3 -Lterc.butylglycinu ve formě pěny. Rf (methanol/dichlormethan 1:19) 0,27 a 0,34; MS (El): M⁺ 475.

Příklad 8

Způsobem popsaným v prvním odstavci příkladu 6 se z ethylamidu [ 4- (N-benzyloxyamino) -2 (RS) -undecylsukcinyl ] -Lleucyl-L-leucinu připraví ethylamid (4-(N-hydroxyamino)-2(RS)undecylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu ve formě pěny. Rf (systém A) 0,62 a 0,66. MS: (M+H)⁺ 541.

Výchozí materiál se připraví následovně:

Způsobem popsaným v příkladě 6 (A-E), ale za použití 1-bromundekanu místo 1-bromnonanu, se získá ethylamid [4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)-undecylsukinyl]-Lleucyl-L-leucinu ve formě gelu. Rf (methanol/dichlormethan, 1:9) 0,70; MS: (M+H)⁺ 631

Příklad 9

0,3 g (0,536 mmol) ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(R nebo S)-heptyl-3(S)-methylsukcinyl]-L-leucyl-Lleucinu (diastereoisomer 1) v 50 ml methanolu se hydrogenuje

1,5 hodiny za přítomnosti 0,1 g 5% palladia na uhlí. Směs se přefiltruje, filtrát se odpaří a zbytek se rozetře s diethyletherem. Získá se 0,23 g ethylamidu [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S)-heptyl-3(S)-methylsukcinyl]-L-leucyl-Lleucinu (diastereoisomer 1) ve formě bílé pevné látky. MS: (M+H)⁺ 499.

Analýza pro ^26^Η50^Ν4°5·°»^4Η2° vypočteno: C 61,72; H 10,12; N 11,08 nalezeno: C 61,92; H 10,05; N 10,85 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

A) 2,0 g (0,11 mol) benzylesteru L-mléčné kyseliny a 10,8 ml (0,13 mol) pyridinu ve 220 ml dichlormethanu se v průběhu 0,5 hodiny přidá k roztoku anhydridů trifluormethansulfonové kyseliny ve 250 ml dichlormethanu při 0 °C. Po další 0,5 hodině se roztok 2 x promyje vždy 250 ml vody a 250 ml nasyceného roztoku chloridu sodného a potom vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Potom se roztok v průběhu 0,5 hodiny přidá k roztoku diterc.butylnatriummalonátu (0,11 mol) (připraveného z 22,8 g diterc.butylmalonátu a 3,48 g 80% natriumhydridu v oleji) ve 250 ml dimethylformamidu při 0 °C. Směs se nechá přes noc ohřát na teplotu místnosti a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rozdělí mezi 200 ml ethylacetátu a 200 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanů sodného. Organická vrstva se promyje vodou (2 x 200 ml), vysuší bezvodým síranem hořečnatým a odpaří na žlutý olej.

Po flash chromatografii na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného 10% ethylacetátem v hexanu se získá 35,4 g (88 %) l-benzyl-4-terc.butyl-3(RS)-terc.butoxykarbonyl-2(S)methylsukcinátu ve formě bezbarvého oleje; Rf (30% ethylacetát v hexanu) 0,63.

B) 952 mg 80% natriumhydridu se přidá k míchanému roztoku 10 g l-benzyl-4-terc.butyl-3(RS)-terč.butoxykarbonyl-2 (s)-methylsukcinátu ve 100 ml suchého dimethylformamidu. Roztok se míchá 2 hodiny při .teplotě místnosti a potom se k němu přidá 6,23 ml 1-bromheptanu. Směs se 4 hodiny zahřívá na 60 °C a potom se přes noc míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Roztok se postupné promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanů sodného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného a potom vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odpaří. Po flash chromatografii zbytku na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného 5% ethylacetátem v hexanu se získá 6,83 g benzyl-3,3(RS)diterc.butoxykarbonyl-2(S)-methyldekanoátu ve formě bezbarvého oleje; Rf (10% ethylacetát v hexanu) 0,5.

C) 6,8 g benzyl-3,3(RS)-diterc.butoxykarbonyl2(S)-methyldekanoátu ve 20 ml kyseliny trifluoroctová se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se znovu odpaří s toluenem (2 x 25 ml), za vzniku oranžového oleje. Olej se znovu rozpustí ve 100 ml toluenu, k roztoku se přidá 3,64 ml N-ethylmorfolinu a reakční směs se 1 hodinu vaří pod zpětným chladičem. Roztok se postupně promyje 2M kyselinou chlorovodíkovou, vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší bezvodým síranem hořečnatým a odpaří na hnědý olej. Po přečištění zbytku flash chromatograf ií na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného 2% methanolem v dichlormethanu se získá 3,02 g 1-benzyl3(RS)-karboxy-2(S)-methyldekanoátu ve formě žlutého oleje?

Rf (5% methanol v dichlormethanu) 0,47 a 0,52; MS; (M+H)⁺321.

D) Podobným způsobem, jako podle příkladu 1, odstavec D až F) se z 1,5 g l-benzyl-3(RS)-karboxy-2(S)methyldekanoátu získá 0,315 g ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(R nebo S)-heptyl-3(S)-methylsukcinyl]-L-leucylL-leucinu (diastereoisomer 1) ve formě špinavě bílé pevné látky.

Příklad 10

0,25 g ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(R)-heptyl 3(R nebo S)-ftalimidomethyl)sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu (diastereoisomer 1) v 100 ml dimethylf ormamidu se hydrogenuje za přítomnosti 100 mg 10% palladia na uhlíku po dobu 24 hodin. Katalyzátor se odfiltruje a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rozetře se diethyletherem a tak se získá 0,17 g ethylamidu [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S) -ftalimidomethyl) sukcinyl ] -L-leucyl-L-leucinu (diastereoisomer 1) ve formě šedého prášku; Rf (10% methanol v dichlormethanu) 0,5; MS: (M+H)⁺ 644.

Analýza pro ^C34^H53^N5°7 °'^8H2° vypočteno: C 62,04; H 8,36; N 10,64 nalezeno: C 61,99; H 8,04; N 10,60 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem;

A) Podobným způsobem, jako podle příkladu 1, odstavce A až D) se z 20 g D-a-aminononanové kyseliny získá

10,28 g dibenzyl-3(RS)-terc.butoxykarbonyl-2(R)-heptylsukcinátu ve formě světležlutého oleje; Rf (10% ethylacetát v hexanu) 0,32.

Β) K 8,2 g dibenzyl-3(RS)-terc.butoxykarbonyl2(R)-heptylsukcinátu ve 100 ml suchého dimethylfořmamidu se přidá 0,49 g 80% disperze natriumhydridu. Po 2 hodinách se směs ochladí na 0 °C a po částech se k ní přidá 4,18 g N-brommethylftalimidu. Směs se další 1 hodinu míchá při 0 °C a potom přes noc při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a 5% roztok hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného a potom vysuší bezvodným síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odpaří. Po přečištění zbytku flash chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného 20% ethylacetátem v hexanu se získá 6,42 g dibenzyl-3(RS)-terc.butoxykarbony 1- 2 (R) -hepty 1-3 (RS) - (f talimidomethyl) sukcinátu.

C) 3,5 g dibenzyl-3(RS)-terc.butoxykarbonyl-2(R)-heptyl-3(RS)-(ftalimidomethyl)sukcinátu v 50 ml ethanolu se hydrogenuje za přítomnosti 0,35 g 5% palladia na uhlíku. Katalyzátor se odfiltruje a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se rozpustí v 50 ml toluenu, ke vzniklému roztoku se přidá 0,58 ml N-ethylmorfolinu a směs se 2 hodiny vaří pod zpětným chladičem. Roztok se postupně promyje 2M kyselinou chlorovodíkovou, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného a potom vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Po přečištění zbytku flash chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného 4% methanolem v dichlormethanu se získá 1,54 g 4-terc.butylhydrogen-2(R)-heptyl-3(RS)-(ftal37 imidomethyl)sukcinátu ve formě oleje; Rf (5% methanol v dichlormethanu) 0,3.

D) Podobným způsobem, jako v příkladu 1, odstavci E až F) se z 0,6 g 4-terc.butylhydrogen-2(R)-heptyl-3(RS) (ftalimidomethyl)sukcinátu získá 0,27 g ethylamidu [4-(Nbenzyloxyamino)-2(R)-heptyl-3-(R nebo S)-(ftalimidomethyl)sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu (diastereoisomer 1) ve formě bílé pevné látky; MS: (M+H)⁺ 734.

Analýza pro C₄₁H₅₉N₅O₇.0,6H₂O vypočteno: C 66,12; H 8,15; N 9,4 nalezeno: C 66,08; H 8,08; N 9,53 %.

Příklad 11

Podobným způsobem, jako podle prvního odstavce příkladu 2 se z ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)heptylsukcinyl]-L-f enylalanyl-L-leucinu získá ethylamid [ 4- (N-hydroxyamino) -2 (RS) -heptylsukcinyl ] -L-fenylalanylL-leucinu ve formě bílé pevné látky; Rf (methanol/dichlormethan, 1:19) 0,28 a 0,43; MS: (M+H)⁺ 519.

Analýza pro ^C28^H46^N4°5 ·θ/^3Η2° vypočteno: C 64,17; H 8,96; N 10,69 nalezeno: C 64,07; H 8,77; N 10,64 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

Z ethylamidu N-terc.butyloxykarbonyl-L-fenylalanyl-L-leucinu se podobnými způsoby jako podle příkladu 1

E) až F) získá ethylamid [4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)heptylsukcinyl ]-L-fenylalanyl-L-leucinu., ve formě bílé pevné látky; Rf (methanol/dichlormethan, 1:19) 0,64; MS: (M+H)⁺ 609.

Příklad 12

Podobným způsobem, jako podle prvního odstavce příkladu 2 se z ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)heptylsukcinyl]-L-nonalyl-L-leucinu získá ethylamid C 4 — (N-hydroxyamino) -2 (RS) -heptylsukcinyl ] -L-nonalyl-Lleucinu ve formě bílé pevné látky; MS: (M+H)⁺ 527.

Analýza pro ^C28^H54^N4°5 (526,76) vypočteno: C 63,84; H 10,33; N 10,64 nalezeno: C 63,64; H 10,39; N 10,63 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

Z ethylamidu N-terc.butoxykarbonyl-L-nonalyl-Lleucinu se podobnými způsoby, jako podle příkladu IE) až F) získá ethylamid [4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl]L-nonalyl-L-leucinu ve formě bílé pevné látky; Rf (methanol/ dichlormethan, 1:19) 0,55 a 0,62; MS: (M+H)⁺ 617.

Příklad 13

Podobným způsobem, jako podle prvního odstavce příkladu 2, se z terč.butylamidu [4-(N-benzyloxyamino)2(RS)-heptylsukcinyl]-L-fenylalaninu získá terc.butylamid [ 4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl]-L-fenylalaninu ve formě hygroskopické pěny; Rf (methanol/ chloroform 1:19) 0,31; MS (M+H)⁺ 434.

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

Z terč.butylamidu N-terc.butoxykarbonyl-L-fenylalaninu se podobnými způsoby jako podle příkladu 1 E) až F) získá terc.butylamid (4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)-heptyl39 sukcinyl]-L-fenylalaninu ve formě bílé pevné látky; Rf (ethylacetát) 0,75; MS: (M+H)⁺ 524.

Příklad 14

Podobným způsobem, jako podle prvního odstavce příkladu 2, se z methylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)~ heptylsukcinyl]-L-fenylalaninu získá methylamid [4-(Nhydroxyamino)-2 (RS)-heptylsukcinyl ]-L-fenylalaninu ve formě bílé pevné látky; Rf (methanol/dichlormethan, 1:19) 0,16 a ^J 0,21; MS: (M+H)⁺ 392.

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

Z methylamidu N-terc.butoxykarbony1-L-feny1alaninu se podobnými způsoby, jaké jsou popsány v příkladu IE) až F) získá methylamid [4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)heptylsukcinyl]-L-fenylalaninu, ve formě bílé pevné látky.

Rf (methanol/dichlormethan, 1:19) 0,29 a 0,36.

Analýza pro C₂₈H₃₉N₃O₄ (481,64) vypočteno: C 69,83; H 8,16; N 8,72 nalezeno: C 69,56; H 8,05; N 9,00 %

Příklad 15

Podobným způsobem, jako je způsob popsaný v prvním odstavci příkladu 2 se z methylamidu (4-(N-benzyloxyamino)2(RS)-heptylsukcinyl]-L-terc.butylglycinu připraví methylamid [ 4 - (N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl]-L-terc.butylglycinu ve formě pěny. Rf (methanol/dichlormethan 1:19) 0,23 a 0,29; MS: (M+H)⁺ 358.

Analýza pro ^cig^H35N₃O₄.0,3 CH₃OH.

vypočteno: C 59,87; H 9,94; N 11,45 nalezeno: C 59,80; H 9,76; N 11,44 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

Podobným způsobem, jako je způsob popsaný v příkladu 1 E) až F), ale za použití výchozího methylamidu L-terc.butylglycinu místo deprotektovaného methylamidu benzyloxykarbonyl-L-leucinu, se získá methylamid [4-(Nbenzyloxyamino) -2 (RS) -heptylsukcinyl ]-L-terc.butylglycinu ve formě bílé pěny. Rf(methanol/chloroform 1:19) 0,29 a 0,36; MS: (M+H)⁺ 448.

Příklad 16

Podobným způsobem, jako je způsob popsaný v prvním odstavci příkladu 2, se z methylamidu [4-(N-benzyloxyamino)2 (RS)-heptylsukcinyl]-L-neopentylglycinu získá methylamid [ 4 - (N-hydroxyamino) - 2 (RS) -heptylsukcinyl ] -L-neopentylglycinu ve formé bílé pevné látky; MS: (M+H)⁺ 372.

Analýza pro C₁₃H₃₇N₃O₄ (371,52) vypočteno: C 61,43; H 10,04; N 11,31 nalezeno: C 61,04; H 09,93; N 11,13 %

Výchozí látka se připraví následujícím způsobem:

Z methylamidu n-terc.butoxykarbonyl-L-neopentylglycinu se podobnými způsoby, jako jsou způsoby popsané v příkladu 1 E) až F) získá methylamid [4-(N-benzyloxyamino)2(RS)-heptylsukcinyl]-L-neopentylglycinu ve formě bílé pěny. Rf (methanol/chloroform 1:19) 0,47 a 0,55; MS: (M+H)⁺ 462.

Analýza pro ^C26^H43^N3°4 (⁴⁶¹/65) vypočteno: C 67,65; H 9,39; N 9,10 nalezeno: C 67,57; H 9,12; N 9,02 %

Příklad 17

Podobným způsobem, jako je způsob popsaný v prvním odstavci příkladu 2, se z ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)~ 2 (RS )-heptylsukcinyl]-L-homofenylalanyl-L-leucinu získá [ 4 - (N-hydroxyamino) - 2 (RS) -hepty lsukcinyl ] -L-homof enylalany 1

- L-leucin ve formě bílého hygroskopického granulárního prášku; MS: (M+H)⁺ 533.

Analýza pro C_2gH₄₈N₄O₅.0,4H₂0 vypočteno: C 64,51; H 9,11; N 10,38 nalezeno: C 64,59; H 8,94; N 10,14 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

Z ethylamidu N-benzyloxykarbonyl-L-homofenylalanyl L-leucinu se podobnými způsoby, jako jsou způsoby popsané v příkladu 2 A) až B) získá ethylamid [4-(N-benzyloxyamino)2 (RS)-heptylsukcinyl] -L-homofenylalanyl-L-leucinu ve formě pevné látky; Rf (methanol(chloroform 1:19) 0,55, MS: (M+H)⁺623 .

Analýza pro C₃₆H₅₄N₄O₅ (622,85) vypočteno: C 69,42; H 8,74; N 9,00 nalezeno: C 69,02; H 8,85; N 8,87 %

Příklad 18

Podobným způsobem, jako způsob popsaný v prvním odstavci příkladu 2, se z methylamidu [4-(N-benzyloxyamino)2 (RS)-heptylsukcinyl]-L-cyklohexylalaninu získá methylamid [ 4 - (N-hydroxyamino) - 2 (RS) -heptylsukcinyl ] -L-cyklohexylalaninu ve formě bílé pevné látky; MS: (M+H)⁺ 398.

Analýza pro C₂₁H₃₉N₃O₄ (397,56).

vypočteno: C 63,45; H 09,89; N 10,57 nalezeno: C 63,24; H 10,04; N 10,33 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

Z methylamidu N-terc.butoxykarbonyl-L-cyklohexylalaninu se podobnými způsoby, jako jsou způsoby popsané v příkladu 1 E) až F) získá methylamid [4-(N-benzyloxyamino)2(RS)-heptylsukcinyl]-L-cyklohexylalaninu; Rf (methanol/ dichlormethan 1:9) 0,30 a 0,37; MS: (M+H)⁺ 488.

Příklad 19

0,6 g (1,14 mmol) ethylamidu (4-terc.butoxy-2(RS)heptylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu [připraveného podle příkladu 1 E)] se rozpustí v 10 ml trif luoroctové kyseliny a vzniklý roztok se 3 hodiny míchá a potom odpaří. Zbytek se 4x odpaří s toluenem a potom rozpustí ve 200 ml dichlormethanu, obsahujícího 5 ml methanolu. Roztok se 2 x promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Zbytek se rozpustí v 1 ml dimethylformamidu a 10 ml 1,2-dimethoxyethanu při 0 °C. Ke vzniklému roztoku se přidá 0,135 g (1,17 mmol) N-hydroxysukcinimidu a 0,243 g (1,17 mmol) dicyklohexylkarbodiimidu, směs se 1 hodinu míchá při 0 °C a 16 hodin při 4 °C a potom se přefiltruje a odpaří. Získá se surový ester N-hydroxysukcinimidu ve formě lepivé pevné látky. Tento ester se suspenduje v 5 ml tetrahydrofuranu, k suspenzi se přidá roztok vyrobený z 0,178 g (2,56 mmol) hydrochloridu hydroxylaminu a 0,094 (2,35 mmol) hydroxidu sodného v 5 ml vody a směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti, přefiltruje a odpaří. Výsledná pryskyřice se promyje vodou dekantací a potom se vysuší odpařením toluenu. Po chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného 1% a potom 2%, 3% a nakonec 5% methanolem v dichlormethanu a odpaření, se získá ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S)-heptylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu ' (isoměry 1 a 2) ve formě bílých pevných látek.

Rf (methanol/dichlormethan, 1:12,5) 0,34 (isomer 2) a 0,26 (isomer 1).

Isomer 1 se promyje dichlormethanem a ethylacetátem a potom vysuší. Získá se 0,083 g (15 %) ethylamidu [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S)-heptylsukcinyl ]-L-leucylL-leucinu (isomer 1), který je identický s produktem připraveným v příkladu 1. Rf (systém A) 0,54; MS: (M+H) ⁺

485.

Analýza pro ^C25^H48^N4°5’⁰'^2H2° vypočteno: C 61,50; H 9,99; N 11,47 nalezeno: C 61,41; H 10,09, N 11,48 %.

Příklad 20

0,30 g (0,6 mmol) methylamidu [4-(N-benzyloxyamino) 2(RS)-isooktylsukcinyl]-L-fenylalaninu ve 200 ml methanolu se 3 hodiny hydrogenuje za přítomnosti 0,1 g 10% palladia na uhlíku. Směs se přefiltruje a filtrát se odpaří. Získá se 0,20 g (81 %) methylamidu [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)isooktylsukcinyl]-L-fenylalaninu ve formě bílé pevné látky;

MS: (M+H)⁺ 406.

Analýza pro ^C22^H35^N3°4 (⁴⁰⁵/⁵⁴) vypočteno: C 65,16; H 8,70; N 10,36 nalezeno: C 65,04; H 8,75, N 10,20 %

Methylamid [4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)-isooktylsukcinyl]-L-fenylalaninu, kterého se používá jako výchozí látky, se vyrobí následujícím způsobem:

A) Roztok 13,03 g (60 mmol) diethylacetamidomalonátu v 50 ml suchého dimethylformamidu se v průběhu 0,5 hodiny přidá k suspenzi 2,16 g (72 mmol) 80% natriumhydridu v 50 ml suchého dimethylformaidu při 0 °c pod atmosférou dusíku. Směs se 3 hodiny míchá při teplotě místnosti, přidá se k ní roztok 15,05 g (78 mmol) l-brom-6-methylheptanu v 50 ml suchého dimethylformamidu a vzniklá směs se 64 hodin míchá. Potom se směs odpaří na olej a tento olej se 2x extrahuje ethylacetátem. Spojené extrakty se promyjí vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Zbytek se 4 hodiny refluxuje v 6M kyselině chlorovodíkové (180 ml), potom se směs ochladí a voskovítá pevná látka se odfiltruje. Surový produkt se rozpustí ve 120 ml 50% vodného ethanolu, roztok se přefiltruje, přidá se k němu 7 ml pyridinu a směs se ochladí v ledové lázni. Získá se 6,49 g (57 %) DL-isooktylglycinu ve formě jemného špinavě bílého prášku.

B) 6,45 g (34,5 mmol) DL-isooktylglycinu se suspenduje ve 200 ml kyseliny octové při teplotě místnosti.

K suspenzi se v průběhu 3 hodin po částech přidá 4,8 g (69 mmol) dusitanu sodného. Čirý roztok se 16 hodin míchá při teplotě místnosti, potom se odpaří a ke zbytku se přidá voda a diethylether. Směs se přefiltruje a etherový roztok se vysuší síranem hořečnatým a odpaří na olej. Regenerovaná a vysušená výchozí látka (1,76 g) se recirkuluje do výše uvedeného postupu, za vzniku oleje rozpustného v etheru. Spojený produkt (7,43 g) se rozpustí v 16 ml methanolu, přidá se k němu 3,9 g hydroxidu sodného v 33 ml vody a směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti. Methanol se odpaří, ke zbytku se přidá voda a vzniklý roztok se extrahuje diethyletherem a okyselí koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou. Produkt se extrahuje diethyletherem a extrakt se odpaří. Získá se 5,88 g (91 %) 2(RS)-hydroxyisooktanová kyselina ve formě čirého oleje, který ztuhne v průběhu stání.

C) 5,84 g (31,3 mmol) 2(RS)-hydroxyisooktanové kyseliny se rozpustí v 60 ml ethylacetátu. K roztoku se přidá 4,4 ml (31,3 mmol) triethylaminu a 3,8 ml (31,3 mmol) benzylbromidu a směs se 3 hodiny vaří pod zpětným chladičem. Potom se směs ochladí, přefiltruje a postupně promyje 2M kyselinou chlorovodíkovou, vodou a 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Po vysušení síranem hořečnatým se směs chromatografuje na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu (3:7). Získá se 5,55 g (64 %) benzyl-2(RS)-hydroxyisooktanoátu ve formě oleje; Rf (ethylacetát/hexan, 1:1) 0,50.

D) Roztok 5,45 g (19,6 mmol) benzyl-2(RS)hydroxyisooktanoátu a 1,91 ml (23,5 mmol) pyridinu v 35 ml suchého dichlormethanu se za míchání v průběhu 0,5 hodiny přidá k roztoku 4 ml (23,5 mmol) anhydridu trifluormethansulfonové kyseliny ve 40 ml suchého dichlormethanu při 0 °C. Směs se 1 hodinu míchá při 0 °C a potom 1 hodinu při teplotě místnosti. Roztok se 2 x promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Získá se 7,32 g (95 %) benzyl-2(RS)trifluormethansulfonyloxyisooktanoátu; Rf (ethylacetát/ hexan, 1:4) 0,73.

E) Roztok 7,31 g (18,55 mmol) benzyl-2(RS)46 trifluormethansulfonyloxyisooktanoátu ve 30 ml suchého dichlormethanu se v průběhu 1 hodiny přikape k suspenzi 0,58 g (19,5 mmol) 80% natriumhydridu a 4,64 g (18,55 mmol) benzylterc.butylmalonátu v 50 ml suchého dimethylformamidu při teplotě 0 °C. Směs se 6 hodin míchá při teplotě místnosti, potom se nechá 16 hodin stát při teplotě místnosti a nakonec se odpaří na olej. Po chromatografii zbytku na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetátu a hexanu (1:4) se získá 6,08 g (64 %) dibenzyl-3-(RS)-terč.butoxykarbonyl-2(RS)-isooktylsukcinátu ve formě světlého jantarového oleje; Rf (ethylacetát/ hexan, 1:3) 0,49.

F) 6,02 g (11,8 mmol) triesteru z odstavce E) v 90 ml isopropylalkoholu se 16 hodin hydrogenuje za přítomnosti 0,2 g 10% palladia na uhlíku. Směs se přefiltruje, filtrát se odpaří, ke zbytku se přidá toluen a směs se znovu odpaří, by se odstranily stopy isopropylalkoholu. Zbytek v 75 ml toluenu a 1,65 ml (11,8 mmol) triethylaminu se 2 hodiny vaří pod zpětným chladičem. Směs se odpaří a zbytek se rozpustí v ethylacetátu. Roztok se promyje 0,5M kyselinou chlorovodíkovou a vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Získá se 3,23 g (96 %) 4-terc.butylhydrogen-2(RS)-isooktylsukcinátu ve formě oleje.

G) 1,25 g (4,5 mmol) methylamidu N-terc.butoxykarbonyl-L-fenylalaninu se rozpustí v 15 ml 4M chlorovodíku v ethylacetátu a vzniklá směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti a potom odpaří a za vakua vysuší. Zbytek v 10 ml suchého dimethylf ormamidu se ochladí na 0 °C a ke smési se přidá 0,6 ml (4,7 mmol) N-ethylmorfolinu, roztok 0,86 g (3 mmol) 4-terc.butylhydrogen-2(RS)isooktylsukcinátu v 15 ml dichlormethanu, 0,49 g (3,6 mmol) hydroxybenzotriazolu a 0,72 g (3,75 mmol) hydrochloridu. l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu. Směs se 1 hodinu míchá při 0 °C, nechá se stát 16 hodin při 4 °C a potom se odpaří. Zbytek v dichlormethanu se postupné promyje 5¾ roztokem kyseliny citrónové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Po chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného ethylacetátem se získá

1,17 g (87 %) methylamidu [4-terc.butoxy-2(RS)-isooktylsukcinyl]-L-fenylalaninu ve formě oleje, který v průběhu stání ztuhne; Rf (ethylacetát/hexan, 1:1) 0,34 a 0,44

H) 1,02 g (2,28 mmol) methylamidu [4-terc.

- butoxy-2(RS)-isooktylsukcinyl]-L-fenylalaninu se rozpustí v ml trifluoroctové kyseliny a vzniklý roztok se 1,5 hodiny míchá a potom odpaří. Zbytek se 3 x odpaří s toluenem a potom se rozpustí v chloroformu. Vzniklý roztok se promyje 2 x vodou, vysuší a odpaří. Získaná pevná látka se rozpustí v 15 ml dimethylformamidu, roztok se ochladí na 0 °C a přidá se k němu 0,6 ml (4,6 mmol) N-ethylmorfolinu, 0,37 g (2,7 mmol) hydroxybenzotriazolu, 0,54 g (2,8 mmol) hydrochloridu l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu a 0,42 g (3,4 mmol) O-benzylhydroxylaminu. Směs se 1 hodinu míchá při 0 °c a potom 16 hodin při teplotě místnosti, potom se odpaří a ke zbytku se přidá voda. Vyloučená pevná látka se postupně promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, 5% roztokem kyseliny citrónové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou a potom se za vakua vysuší. Získaná pevná látka se rozpustí ve směsi methanolu a chloroformu (1:1) a po přidání diethyletheru k tomuto roztoku se získá 0,71 g (63 %) methylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(RS)~ isooktylsukcinyl]-L-fenylalaninu ve formě bílé pevné látky; MS: (M+H)⁺ 496.

Analýza pro ^C29^H41^N3°4.0,2CH₃OH vypočteno: C 69,85; H 8,39; N 8,37 nalezeno: C 69,81; H 8,34; N 8,40 %

Příklad 21

1,0 g (2,17 itunol) methylamidu [4-(N-benzyloxyamino) -2 (R) -heptylsukcinyl ]-L-neopentylglycinu v 50 ml methanolu se 1,5 hodiny hydrogenuje za přítomnosti 0,33 g 5% palladia na uhlíku. Směs se přefiltruje a filtrát se odpaří. Získá se 0,8 g (99 %) methylamidu [4-(N-hydroxyamino)-2(R)heptylsukcinyl]-L-neopentylglycinu ve formě bílé pevné látky; MS: (M+H)⁺ 372.

Analýza pro ^9^37^0^. (371,52) vypočteno: C 61,43; H 10,04; N 11,31 nalezeno: C 61,21; H 10,17; N 11,35 %

Methylamid (4-(N-benzyloxyamino)-2(R)-heptylsukcinyl ]-L-neopentylglycinu, kterého bylo použito jako výchozí látky, se připraví následujícím způsobem:

A) 5,6 g (22,8 mmol) terc.butoxykarbonyl-Lneopentylglycinu se rozpustí v 50 ml dichlormethanu při 0 °C. K roztoku se přidá 1,85 ml (22,8 mmol) pyridinu a 9,67 g (22,8 mmol) 70% di-(1-benzotriazolyl)karbonátu a směs se 1 hodinu míchá při 0 °C. Přidá se 3,94 ml (45,6 mmol) 40% vodného roztoku methylaminu a smés se míchá 1 hodinu při o °C a 16 hodin při teplotě místnosti. Získaný roztok se postupné promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanů sodného, vodou, 2M roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanů sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Překrystalováním z ethylacetátu se získá 5,26 g (89 %) methylamidu terc.butoxykarbonyl-L-neopentylglycinu ve formě bílé pevné látky; Rf (ethylacetát) 0,47.

B) 4,84 g (18,8 mmol) methylamidu terc.butoxykarbonyl-L-neopentylglycinu se míchá s 50 ml 4M chlorovodíku v ethylacetátu po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti a potom se směs odpaří. Přidá se ethylacetát, roztok se odpaří a zbytek se za vakua vysuší. Získaný hydrochlorid aminu se rozpustí v 15 ml suchého dimethylformamidu při 0 °C, roztok se neutralizuje přídavkem 3,58 ml (28,2 mmol) N-ethylmorfolinu a přidá k ochlazenému (0 °C roztoku 4,25 g (15,6 mmol)

4-terc.butylhydrogen-2(R)-heptylsukcinátu, (připravenému podobným způsobem, jako je způsob popsaný v příkladu 1 A) až D) z výchozí D-a-aminononanové kyseliny), 2,87 g (18,8 mmol hydrátu hydroxybenzotriazolu a 3,74 g (19,5 mmol) hydrochloridu l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu v 50 ml suchého dichlormethanu při 0 °C. Směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a 16 hodin při teplotě místnosti a potom se odpaří na olej . Zbytek v ethylacetátu se promyje 5% roztokem kyseliny citrónové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří na olej. Po chromatografií na silikagelu za použití elučního činidla tvořeného směsí ethylacetát/hexan (1:1) se získá 5,13 g (80 % methylamidu [4-terc.butoxy-2(R)-heptylsukcinyl]-L-neopentylglycinu ve formě oleje; Rf (ethylacetát/hexan, 1:1) 0,49; MS:(M+H)⁺413.

C) 5,1 g (12,4 mmol) methylamidu [4-terc.butoxy2(R)-heptylsukcinyl]-L-neopentylglycinu se rozpustí v 50 ml trifluoroctové kyseliny a vzniklý roztok se 2,5 hodiny míchá a potom odpaří. Zbytek se 2 x odpaří s toluenem a potom rozpustí v dichlormethanu. Roztok se 3 x promyje vodou a potom nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Na zbytek ve 25 ml suchého dichlormethanu se při 0 °C působí 3,2 ml (25 mmol) N-ethylmorfolinu,

2,28 g (14,9 mmol) hydrátu hydroxybenzotriazolu a 3,0 g (15,6 mmol) hydrochloridu l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) karbodiimidu. Vzniklý roztok se 1 hodinu míchá při 0°C, potom se k němu přidá 3,05 g (24,-8 mmol) O-benzylhydroxylaminu. Směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a 16 hodin při teplotě místnosti a potom se odpaří. Přidá se voda a získaná pevná látka se postupně promyje 2M kyselinou chlorovodíkovou, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a hexanem a nakonec se za vakua vysuší. Získaná pevná látka se zahřívá s diethyletherem a potom se ke směsi přidá hexan a směs se ochladí. Získá se 5,2 g (91 %) methylámidu (4 - (N-benzyloxyamino) - 2 (R) -heptylsukcinyl ] -L-neopentylglycinu ve formě hygroskopického gelu, který se za vakua vysuší. MS: (M+H)⁺ 462.

Analýza pro ^C26^H43^N3°4-°'^6H2° vypočteno: C 66,10; H 9,43; N 8,89 nalezeno: C 66,13; H 9,39; N 8,74 %

Příklad 22

0,09 g (0,177 mmol) methylámidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(R)-heptylsukcinyl]-(D nebo Ι)-β,β-dimethylfenylalaninu (isomer 1) v 10 ml methanolu se hydrogenuje po dobu

1,5 hodiny za přítomnosti 30 mg 5% palladia na uhlíku. Směs se přefiltruje a filtrát se odpaří. Zbytek se za vakua vysuší a tak se získá 0,075 g (100 %) methylámidu [4-(Nhydroxyamino)-2(R)-heptylsukcinyl]-(D nebo D-β, β-dimethylfenylalaninu ve formě bílé pěny. MS: (M+H)⁺ 420.

Analýza pro ^C23^H37^N3°4’°'⁴H2° vypočteno: C 64,73; H 8,93; N 9,85 nalezeno: C 64,81; H 8,77; N 10,14 %

Methylamid [4-(N-benzyloxyamino)-2(R)-heptylsukcinyl]-(D nebo D-β , β-dimethylf enylalaninu (isomer 1), kterého se používá jako výchozí látky, se vyrobí následujícím způsobem:

A) 2,3 g (11,9 mmol) DL-β,β-dimethylfenylalaninu se rozpustí v 9 ml vody obsahující 0,48 g (12 mmol) hydroxidu sodného za míchání při teplotě 0. °C. Ke vzniklému roztoku se v průběhu 0,3 hodiny přikape 6,0 ml 4M roztoku hydroxidu sodného a 3,4 ml (23,8 mmol) benzylchlorformiátu. Směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a 16 hodin při teplotě místnosti. Roztok se extrahuje diethyletherem, okyselí na pH 2 koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou a produkt se extrahuje do ethylacetátu. Vzniklý organický roztok se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Získá se 3,86 g (99 %) N-benzyloxy- karbonyl-DL-β,β-dimethylfenylalaninu ve formě oleje; Rf (systém A) 0,54; MS: (M+H)⁺ 328.

B) 3,8 g (11,6 mmol) N-benzyloxykarbonyl-DL-β,βdimethylfenylalaninu se převede na 2,45 g (62 %) methylamidu N-benzyloxykarbonyl-DL-β,β-dimethylfenylalaninu způsobem popsaným v příkladu 21A); Rf (ethylacetát) 0,61;

MS: (M+H)⁺ 341.

C) 2,4 g (7,06 mmol) methylamidu N-benzyloxykarbonyl-DL-β,β-dimethylfenylalaninu se suspenduje ve 30 ml methanolu a 3,5 ml 2M kyseliny chlorovodíkové a vzniklá suspenze se 2 hodiny hydrogenuje za přítomnosti 0,24 g 5% palladia na uhlíku. Směs se přefiltruje a filtrát se odpaří. Zbytek se 3 x odpaří s toluenem a potom za vakua vysuší. Získá se 1,75 g hydrochloridu methylamidu-DL-β,β-dimethylfenylalaninu, který obsahuje stopy toluenu; Rf (systém A) 0,31; MS: (M+H)⁺ 207.

D) 0,485 g (2,0 mmol) hydrochloridu methylamiduDL-β , β-dimethylfenylalaninu se rozpustí ve 2 ml suchého dimethylformamidu a roztok se ochladí na 0 °C. Přidá se 0,35 ml (2,8 mmol) N-ethylmorfolinu, 0,544 g (2 mmol) 4-terc. butylhydrogen-2(R)-heptylsukcinátu a 0,46 g (2,4 mmol) i

hydrochloridu l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu a vzniklá směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a 64 hodin při 4 °C. Ke vzniklé suspenzi se přidá voda a bílá pevná látka se odfiltruje, postupné promyje 2M roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou a vysuší za sníženého tlaku. Získá se 0,72 g (78 %) methylamidu [4-terc.butoxy-2(R)-heptylsukcinyl]DL-β, β-dimethylf enylalaninu; Rf (ethylacetát) 0,56 a 0,61;

MS; (M+H)⁺ 461.

E) 0,71 g (1,54 mmol) methylamidu [4-terc.butoxy- 2 (R)-heptylsukcinyl l-DL-β, β-dimethylf enylalaninu se rozpustí v 7 ml trifluořoctové kyseliny a vzniklý roztok se 2,5 hodiny míchá a potom se odpaří. Vzniklý zbytek se 2 x odpaří s toluenem a potom se rozpustí ve 30 ml dichlormethanu.

Roztok se promyje vodou, vysuší síranem hořečnatým a odpaří.

Zbytek se rozpustí v 5 ml dimethylf ormamidu a k roztoku se přidá při 0 °c 0,31 g (2,02 mmol) hydrátu hydroxybenzotriazolu a 0,37 g (1,93 mmol) hydrochloridu l-ethyl-3-(3dimethylaminopropyl )karbodiimidu a vzniklý roztok se 1 hodinu míchá při 0 °C. Potom se k němu přidá 0,38 g (3,08 mmol) O-benzylhydroxylaminu a směs se míchá 1 hodinu při 0 °C a 16 hodin při teplotě místnosti, načež se odpaří. Zbytek se vyjme do ethylacetátu a promyje postupně 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, 2M kyselinou chlorovodíkovou, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného j a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší síranem hořečnatým a odpaří. Zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a hexanu (2:1), ethylacetátu a hexanu (3:1) a nakonec samotného ethylacetátu, jako elučního činidla. Získá se methylamid [4-(N-benzyloxyamino)2(R)-heptylsukcinyl]-(D nebo L)—β , β-dimethylfenylalaninu ve formě dvou isomerů.

Isomer 1 (0,18 g, 23 %): Rf (ethylacetát/hexan, 2:1) 0,32;

MS: (M+H)⁺ 510;

Isomer 2 (0,27 g, 34 %): Rf (ethylacetát/hexan, 2:1) 0,22; MS: (M+H)⁺ 510.

Příklad 23

0,09 g (0,18 mmol) methylamidu [4-(N-benzyloxyamino-2(R)-heptylsukcinyl]-(D nebo L)-threo-p-methylfenylalaninu (isomer 1) v 10 ml methanolu se hydrogenuje po dobu 4 hodin za přítomnosti 0,03 g 5% palladia na uhlí. Směs se přefiltruje, filtrát se odpaří a zbytek se za vakua vysuší. Získá se 0,072 g (98 %) methylamidu [4-(N-hydroxyamino). 2(R)-heptylsukcinyl]-(D nebo L)-threo-p-methylfenylalaninu ve formě hygroskopické pěny. MS: (M+H)⁺ 406.

Analýza pro ^C22^H35^N3°4’θ'^15H2° vypočteno: C 64,73; H 8,72; N 10,29 nalezeno: C 64,69; H 8,93; N 10,09 %

Methylamid [4-(N-benzyloxyamino)-2(R)-heptylsukcinyl]-(D nebo L)-threo-p-methylfenylalaninu (isomer 1), použitý jako výchozí látka, se připraví z N-benzyloxykarbonyl-DL-threo-β-methy lfenylalaninu způsobem popsaným v příkladu 22 A) až E). Isomery se oddělí chromatografií na silikagelu, při níž se jako elučního činidla použije nejprve 1% methanolu v dichlormethanu, potom 2% methanolu v dichlormethanu a nakonec 3% methanolu v dichlormethanu.

Isomer 1, Rf (methanol/dichlormethan, 1:19) 0,51;

MS: (M+H)⁺ 496;

Isomer 2, Rf (methanol/dichlormethan, 1:19) 0,41;

MS: (M+H)⁺ 496;

Příklad 24

Podobným způsobem, jako je způsob popsaný v prvním odstavci příkladu 22 se z methylamidu [4-(N-benzyloxyamino)2 (R) -heptylsukcinyl ] -DL-erythro-p-methylfenylalaninu připraví methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptylsukcinyl]DL-erythro-fl-methylfenylalaninu ve formě bílé hygroskopické pěny: Rf (systém B) 0,22 a 0,29; MS: (M+H)⁺ 406.

Analýza pro ^C22^H35^N3°4 *⁰'^3ÍI2° * vypočteno: C 64,30; H 8,73; N 10,23 nalezeno: C 64,29; H 8,64; N 10,09 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

Postupuje se způsobem popsaným v příkladu 22 B) až E) , s tím rozdílem, že se jako výchozí látky použije Nbenzyloxykarbonyl-DL-erythro-p-methylfenylalaninu. Získá se methylamid- [ 4 - (N-benzyloxyamino) - 2 (R) -heptylsukcinyl ] -DLerythro-p-methylfenylalaninu ve formě bílé pevné látky.

Rf (methano1/dichlormethan, 7:93) 0,40 a 0,45;

MS: (M+H)⁺ 496.

Příklad25 !

0,12 g methylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(R)heptyl-3(R nebo S)-(ftalimidomethyl)sukcinyl]-L-terc. butylglycinu (diastereoisomer 1), připraveného podobným způsobem jako je způsob popsaný v příkladu 10 A) až D), v 10 ml methanolu se hydrogenuje za přítomnosti 50 mg 10% - | palladia na uhlíku po dobu 16 hodin. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se odpaří, přičemž se získá želatinovitá pevná látka. Po přečištění na silikagelu za použití 5% methanolu v dichlormethanu jako elučního činidla se získá 0,06 g methylamidu [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S)-(ftalimidomethyl)sukcinyl]-L-terc. butylglycinu (diastereoisomer 1) ve formě bílé pevné látky; Rf (10 % methanol v dichlormethanu) 0,36; MS: (M+H)⁺ 603.

Příklad 26

0,17 g ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(R)heptyl-3(R nebo S)-(3-fenylpropyl)sukcinyl]-L-leucyl-Lleucinu (diastereoisomer 1) v 10 ml methanolu se hydrogenuje po dobu 3 hodin za přítomnosti 55 mg palladia na uhlíku, katalyzátor se odfiltruje a filtrát se odpaří. Získá se 0,13 g ethylamidu (4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R . nebo S)-(3-fenylpropyl)sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu (diastereoisomer 1) ve formě bílé pevné látky;

Rf (10% methanol v dichlormethanu) 0,36; MS: (M+H)⁺ 603.

Analýza pro ^3₄Η₅₈Ν₄Ο₅ (602,83) vypočteno: C 67,74; H 9,70; N 9,30 nalezeno: C 68,00; H 9,93; N 9,20 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

Postupuje se podobným způsobem, jako je způsob popsaný v příkladu 10 B) až D), za použití 2,0 g dibenzyl3 (RS)-terč.butoxykarbonyl-2(R)-heptylsukcinátu a 0,84 g cinnamylbromidu jako výchozích látek. Získá se 0,17 g ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S)-(3fenylpropyl)sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu (diastereoisomer 1) ve formě špinavě bílé pevné látky;

Rf (5% methanol v dichlormethanu) 0,47; MS: (M+H)⁺ 693.

Příklad 27

0,25 g ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino)-2(R)-heptyl 3(R nebo S)-[(3-methyl-2,5-dioxo-l-imidazolidinyl)methyl ] 56 sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu (diastereoisomer 1) ve 25 ml methanolu se hydrogenuje po dobu 6 hodin za přítomnosti 100 mg 5% palladia na uhlíku. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se odpaří. Získá se 0,16 g ethylamidu [4-(N-hydroxy amino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S)-[(3-methyl-2,5-dioxo-l-imidazolidinyl)methyl]sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu (diastereoisomer 1) v formě bílé pevné látky;

Rf (10% methanol v dichlormethanu) 0,25, MS: (M+H)⁺ 611.

Analýza pro ^C30^H54^N6°7-°'^6H2° vypočteno: C 57,91; H 8,95; N 13,51 nalezeno: C 58,17; H 8,99; N 13,23 %

Výchozí látka se vyrobí následujícím způsobem:

Podobným způsobem, jako je způsob popsaný v příkladu 10 B) až D) se z 2,0 g dibenzyl-3(RS)-terc. butoxykarbonyl-2(R)-heptylsukcinátu a 0,88 g 3-brommethyl1-methyIhydantoinu získá 0,28 g ethylamidu [4-(N-benzyloxyamino) -2 (R)-heptyl-3(R nebo S)-[(3-methyl-2,5-dioxo-l-imidazolidinyl)methyl]sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu (diastereoisomer 1); Rf (10% methanol v dichlormethanu) 0,7;

MS: (M+H)⁺ 701.

Následující příklady ilustrují farmaceutické přípravky, které obsahují deriváty hydroxamové kyseliny podle tohoto Vynálezu.

Příklad A

Konvenčním způsobem se vyrobí tablety, které obsahují následující složky:

složka pro tabletu

derivát hydroxamové kyseliny laktóza kukuřičný škrob mastek stearan hořečnatý	10,0 125,0 75,0 4,0 1,0	mg mg mg mg mg
celková hmotnost	215,0	mg

Příklad B

Konvenčním způsobem se vyrobí kapsle, které obsahují následující složky:

složka pro kapsli

derivát hydroxamové kyseliny	10,0	mg
laktóza	165,0	mg
kukuřičný škrob	20,0	mg
mastek	5,0	mg

celková hmotnost náplně kapsle

200,0 mg

44X^3

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY kde

R¹ představuje alkylskupinu s 1 až 7 atomy uhlíku;

R² přestavuje atom vodíku, alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu obecného vzorce -(CH₂)_n-aryl nebo -(CH₂)_n-Het, kde n představuje číslo 1 až 4 a Het představuje pěti- nebo šestičlenný heterocyklický kruh, obsahující dusík, který je a) připojen prostřednictvím tohoto atomu dusíku, b) popřípadě obsahuje přídavný heteroatom nebo přídavné heteroatomy dusíku, kyslíku a/nebo síry v jiné poloze nebo polohách, než jsou sousední polohy vzhledem k vazebnému atomu dusíku, c) je substituován oxoskupinou na jednom nebo obou atomech uhlíku v sousedních polohách vzhledem k vazebnému atomu dusíku a d) je popřípadě kondenzován s benzenovým jádrem nebo popřípadě substituován na jednom nebo více jiných atomech uhlíku alkylskupinami s 1 až 6 atomy uhlíku nebo oxoskupinami a/nebo na kterémkoliv přídavném atomu dusíku nebo atomech dusíku alkylskupinami s 1 až 6 atomy uhlíku;

R³ představuje charakterizující skupinu přirozené nebo nepřirozené α-aminokysel-iny, v níž jsou popřípadě všechny přítomné funkční skupiny chráněny, s tou podmínkou, že R³ nepředstavuje atom vodíku;

R⁴ představuje karboxyskupinu, alkoxykarbonylskupinu s až 6 atomy uhlíku v alkoxylovém zbytku, karbamoy lskupinu nebo alkylkarbamoylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku;

R⁵ představuje charakterizující skupinu přirozené α-aminokyseliny, v níž jsou všechny funkční skupiny popřípadě chráněny; a ' R⁶ představuje atom vodíku nebo každý ze symbolů

R⁴, R⁵ a R⁶ představuje atom vodíku nebo alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

a jejich farmaceuticky vhodné soli.
2. Deriváty podle nároku 1, kde R² představuje atom vodíku, alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu obecného vzorce -(CH₂)_n“Het a R⁶ představuje atom vodíku.
3. Deriváty podle nároku 1 nebo 2, kde R¹představuje ethylskupinu, isopropylskupinu, n-butylskupinu nebo n-hexylskupinu.
4. Deriváty podle nároku 3, kde R¹ představuje ethylskupinu.
5. Deriváty podle některého z nároků 1 až 4, kde R² představuje atom vodíku, methylskupinu, skupinu obecného vzorce -(CH₂)_n-aryl, kde aryl představuje fenylskupinu, nebo skupinu obecného vzorce -(CH₂)_n-Het, kde Het představuje pětičlenný nebo šestičlenný heterocyklický zbytek obsahující dusík, který popřípadě obsahuje jako přídavný heteroatom nebo heteroatomy 1 nebo 2 atomy dusíku, 1 atom dusíku a 1 atom kyslíku nebo l atom kyslíku.
6. Deriváty podle nároku 5, kde Het představuje skupinu vzorce a, b, c, d , e nebo f (a) (e) symboly dohromady představují přídavnou vazbu nebo zbytek přikondenzovaného benzenového kruhu;

představuje atom vodíku nebo alkylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

představuje skupinu vzorce -C0-, -CH₂-, -CH(alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku)-, -C(alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku)₂-, -NH-, -N(alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku)nebo -O-; a představuje skupinu vzorce -0-, -NH- nebo -N(alkyl s 1 až 6 atomy uhlíku)-.
7. Deriváty podle nároku 6, kde Het představuje skupinu vzorce b nebo c.
8. Deriváty podle nároku 7, kde Het představuje ftalimidoskupinu nebo 3-methyl-2,5-dioxo-l-imidazolidinylskupinu.
9. Deriváty podle některého z nároků 1 až 8, kde n představuje číslo l, pokud R¹ představuje skupinu obecného ' vzorce -(CH₂)_n-Het, nebo číslo 3, pokud R¹ představuje skupinu obecného vzorce -(CH₂)_n-aryl.
10. Deriváty podle některého z nároků 1 až 9, kde R³představuje methyl-, isobutyl-, terč.butyl-, chráněnou 4aminobutyl-, neopentyl-, η-heptyl-, cyklohexylmethyl-, benzyl-, α-methylbenzyl- nebo a,a-dimethylbenzylskupinu.
11. Deriváty podle nároku 10, kde chráněnou 4-aminobutylskupinou je 4-ftalimidobutylskupina.
12. Deriváty podle některého z nároků 1 až 11, kde R⁴ představuje alkylkarbamoylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, R⁵ představuje isobutylskupinu a R⁶představuje atom vodíku.
13. Deriváty podle nároku 12, kde R⁴ představuje methylkarbamoylskupinu nebo ethylkarbamoylskupinu.
14. Deriváty podle některého z nároků 1 až 11, kde každý ze symbolů R⁴, R⁵ a R⁶ představuje atom vodíku nebo R⁴a R⁵ představují atomy vodíku a R⁶ představuje terč.buty1skupinu nebo každý ze symbolů R⁴,.R⁵ a R⁶ představuje methylskupinu.
15. Ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S)-heptylsukcinyl ]-L-leucyl-L-leucinu.
16. Ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S))-nonylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu.
17. Ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R nebo S)-heptyl3(s)-methylsukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu.
18. Ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S) - (f talimidomethyl) sukcinyl ] -L-leucyl-L-leucinu.
19. Methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2 (RS)-nonylsukcinyl ]L-terc.butylglycinu.
20. Methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl ]-L-fenylalaninu.
21. Methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S)-(ftalimidomethyl)sukcinyl]-L-terc.butylglycinu.
22. Ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S)-(3-fenylpropyl)sukcinyl]-L-leucyl-L-leucinu.
23. Derivát podle nároku 2, zvolený ze souboru zahrnujícího:

methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl]L-leucinu;

neopentylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl ] -L-leucinu;

ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl ] L-alanyl-L-leucinu;

ethylamid; [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukcinyl ] L- (N^ -ftaloyl)-lysyl-L-leucinu;

ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-undecylsukcinyl]· L-leucyl-L-leucinu a ethylamid [ 4 - (N-hydroxyamino)- 2(RS)-heptylsukcinyl]L-fenyl-alanyl-L-leucinu.
24. Derivát podle nároku 1, zvolený ze souboru zahrnujícího:

ethylamid [4 -(N-hydroxyamino)- 2(RS)-heptylsukcinyl]L-nonalyl-L-leucinu;

terč. butylamid [ 4-(N-hydroxyamino) -2 (RS) -heptylsukcinyl ] -L-fenylalaninu;

methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(RS)-heptylsukciny 1]-L-terc.butylglycinu;

methylamid [ 4 -(N-hydroxyamino)- 2(RS)-heptylsukcinyl ]-L-neopentylglycinu;

ethylamid [4 -(N-hydroxyamino)- 2(RS)-heptylsukcinyl]L-homofenylalanyl-L-leucinu;

methylamid [ 4-(N-hydroxyamino) -2 (RS) -heptylsukcinyl ] L-cyklohexylalaninu;

methylamid [4-(N-hydroxyamino)- 2(RS)-isooktylsukcinyl]-L-fenylalaninu;

methylamid [ 4- (N-hydroxyamino) -2 (R) -heptylsukcinyl ] L-neopentylglycinu;

methylamid (4- (N-hydroxyamino) - 2 (R) -heptylsukcinyl ] (D nebo D-β , β-dimethylf enylalaninu;

methylamid [ 4-(N-hydroxyamino)-2 (R)-heptylsukcinyl](D nebo L)-threo-3~methylfenylalaninu;

methylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptylsukcinyl ]DL-erythro-p-methylfenylalaninu a ethylamid [4-(N-hydroxyamino)-2(R)-heptyl-3(R nebo S) [ ( 3-methyl-2,5-dioxo-l-imidazolidinyl)methyllsukcinyl]-Lleucyl-L-leucinu.
25. Sloučeniny obecného v.zorce II (II) kde R¹, R², R³, R⁴, R⁵ a R⁶ mají význam uvedený v nároku 1 a Bz představuje benzylskupinu.
26. Sloučeniny obecného vzorce III (III) kde R¹, R², R³, R⁴, R⁵ a R⁶jejich aktivované estery.

mají význam uvedený v nároku 1 a
27. Deriváty podle některého z nároků 1 až 24 pro použití jako terapeuticky účinné látky.
28. Deriváty podle některého z nároků 1 až 24 pro použití při potlačováni nebo prevenci degenerativních chorob kloubů nebo při léčbě invasivních nádorů, atherosclerosis nebo sclerosis multiplex.
29. Způsob výroby derivátů podle některého z nároků 1 až 24, vyznačující se tím, že se

a) katalyticky hydrogenuje sloučenina obecného vzorce II (II)

R¹ kde R¹, R², R³, R⁴, R⁵ a R⁶ mají význam uvedený výše a Bz představuje benzylskupinu nebo že se

b) kyselina obecného vzorce III

R¹

R² kde R¹, R², R³, R⁴, R⁵ a R^s maj i význam uvedený výše, nebo její aktivovaný ester, nechá reagovat se sloučeninou obecného vzorce IV

H₂N-OZ (IV) kde Z představuje atom vodíku nebo trialkylsilylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v každém z alkylovým zbytků nebo difenylalkylsilylskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, a popřípadě se odštěpí jakákoliv difenylalkylsilylskupina s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylovém zbytku, která je přítomna v reakčním produktu a popřípadě se získaná sloučenina obecného vzorce I převede na svou farmaceuticky vhodnou sůl.
30. Léčivo, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu podle některého z nároků 1 až 24 a terapeuticky inertní nosič.
31. Léčivo pro potlačování nebo prevenci degenerativních chorob kloubů nebo pro léčbu invasivních nádorů, atherosclerosis nebo sclerosis multiplex, vyznačuj ící se tím, že obsahuje sloučeninu podle některého z nároků 1 až 24 a terapeuticky inertní nosič.
32. Použití derivátů některého z nároků 1 až 24 pro ' výrobu léčiv pro potlačování nebo prevenci degenerativních chorob kloubů nebo pro léčbu invasivních nádorů, atherosclerosis nebo sclerosis multiplex.

MP-906-93-HO

Vzorec pro anotaci (I)