CS395391A3 - Homogeneous human interleukin 2, process of its preparation and apharmaceutical composition based thereon - Google Patents
Homogeneous human interleukin 2, process of its preparation and apharmaceutical composition based thereon Download PDFInfo
- Publication number
- CS395391A3 CS395391A3 CS913953A CS395391A CS395391A3 CS 395391 A3 CS395391 A3 CS 395391A3 CS 913953 A CS913953 A CS 913953A CS 395391 A CS395391 A CS 395391A CS 395391 A3 CS395391 A3 CS 395391A3
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- human interleukin
- column
- activity
- human
- homogeneous
- Prior art date
Links
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 title claims abstract description 37
- 102000055277 human IL2 Human genes 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 26
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 17
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical group O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 10
- 125000006267 biphenyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 8
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 6
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 2
- 101100335894 Caenorhabditis elegans gly-8 gene Proteins 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 claims 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 abstract description 46
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 abstract description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 24
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 abstract description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 abstract description 3
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 abstract 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 15
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 9
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 9
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 8
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 239000004305 biphenyl Substances 0.000 description 4
- 235000010290 biphenyl Nutrition 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 4
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N phenylbenzene Natural products C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 ZUOUZKKEUPVFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 4
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 3
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 3
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 3
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 3
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N (1aR,1bS,4aR,7aS,7bS,8R,9R,9aS)-4a,7b,9,9a-tetrahydroxy-3-(hydroxymethyl)-1,1,6,8-tetramethyl-1,1a,1b,4,4a,7a,7b,8,9,9a-decahydro-5H-cyclopropa[3,4]benzo[1,2-e]azulen-5-one Chemical compound C1=C(CO)C[C@]2(O)C(=O)C(C)=C[C@H]2[C@@]2(O)[C@H](C)[C@@H](O)[C@@]3(O)C(C)(C)[C@H]3[C@@H]21 QGVLYPPODPLXMB-UBTYZVCOSA-N 0.000 description 2
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 241000699729 Muridae Species 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- IOUUIFSIQMVYKP-UHFFFAOYSA-N Tetradecyl acetate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCOC(C)=O IOUUIFSIQMVYKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 2
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N phorbol Natural products C[C@@H]1[C@@H](O)[C@]2(O)[C@H]([C@H]3C=C(CO)C[C@@]4(O)[C@H](C=C(C)C4=O)[C@@]13O)C2(C)C QGVLYPPODPLXMB-QXYKVGAMSA-N 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 1-[(4s,5s)-4-azido-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 0.000 description 1
- BPSNETAIJADFTO-UHFFFAOYSA-N 2-pyridinylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=N1 BPSNETAIJADFTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XQMVBICWFFHDNN-UHFFFAOYSA-N 5-amino-4-chloro-2-phenylpyridazin-3-one;(2-ethoxy-3,3-dimethyl-2h-1-benzofuran-5-yl) methanesulfonate Chemical compound O=C1C(Cl)=C(N)C=NN1C1=CC=CC=C1.C1=C(OS(C)(=O)=O)C=C2C(C)(C)C(OCC)OC2=C1 XQMVBICWFFHDNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 6-(4-aminophenyl)sulfonylpyridin-3-amine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=N1 XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100232904 Homo sapiens IL2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- -1 PMA Chemical compound 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N fluorescamine Chemical compound C12=CC=CC=C2C(=O)OC1(C1=O)OC=C1C1=CC=CC=C1 ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 1
- 239000002644 phorbol ester Substances 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 229940083575 sodium dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N sulfanilamide Chemical compound NC1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000539 two dimensional gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/55—IL-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/948—Microorganisms using viruses or cell lines
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/828—Cancer
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/14—Lymphokine; related peptides
- Y10S930/141—Interleukin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Λ'ίΤΖ'-ί/ ' Homogenní humánní interleukin 2, způsob jeho výroby a farmaceu-tický přípravek na jeho bázi
Oblast technikyI
Vynález se týká homogenního humánního interleukinu 2, způ-sobu jeho výroby a farmaceutického přípravku na jeho bázi.
Dosavadní stav techniky
Humánní interleukin 2 (IL-2) je rozpustný protein, kterýje schopen modulovat reaktivitu lymfocytŮ. V minulosti se vyrá-běl stimulací myších, krysích nebo humánních lymfocytových bu-něk mitogenem, jako je fytohemaglutinin (PHA) a konkanavalin. A(Con A); viz například Gillis a další, Nátuře 268, 154 (1977);.· J. Immunol. 120, 2 027 (1978); J. Xmmunol. 124, 1 954 (1980); J. Immunol. 125, 2 570 (1980). IL-2 získaný purifikací z myších, krysích a humánních nor- ¢, málních T-lymfocytů si zachovává různé- typy biologické aktivity,jako je 1. výrazné povzbuzení mitogenese thymocytů, 2. promocedlouhodobé "in vitro” proliferace pomocných nebo zabíječských(helper, killer) linií T-buněk specifických vůči antigenu a 3.indukce reaktivity cytotoxických T-lymfocytů (CTL) a plakotvor-né odpovědi buněk v kulturách slezinových buněk nahé myši. Sho-ra uvedené druhy biologické účinnosti IL-2 ukazují, že IL-2 jeužitečný při zvyšování imunologické odpovědi a při regeneraci .p buněčné a humorální imunity populací imunologicky deficientních t T-buněk (slezinové buňky nahé myši) na normální úroveň. Dále - tyto výsledky naznačují, že produkce IL-2 a odpověS na něj jsou důležitými parametry imunologických funkcí, které mohou být uži-tečné při klinické diagnóze aberantní imunity. Ze skutečnosti,že humánní IL-2 umožňuje "in vitro" proliferaci antigenspecific-kých humánních, myších a krysích zabíječských T-buněk, je zřejmádůležitost humánního IL-2 jako činidla pro další výzkum. 2 Několika autory byla sice popsána produkce humánního IL-2v médiích modifikovaných humánními, s.lezinovými nebo perifernímikrevními lymfocyty stimulovanými lektinem, za použití těchtozdrojů a technik se však dosáhne jen nízkých koncentrací IL-2. Při purifikaci IL-2 je proto nutno frakcionovat velké objemyupraveného média obsahujícího IL-2 a přesto se získá jen veliceniz_ká^ aktivita humánního IL-2. V důsledku^toho nejsou až dosuddostupná dostatečná množství koncentrovaného humánního IL-2 anipro experimenty "in vivo",. ani pro efektivní studie jeho výsled-né molekulární charakterizace. .
Gillis a Watson /J. Exp. Med., 152, 1 709 - 1 719 (1980)/popisují produkci humánního IL-2 indukcí' linie**maligních neoplas-tických buněk, jako je linie Jurkat - FHCRC T-buněčným mitogenem,jako je PHA, popřípadě v přítomnosti esteru forbolu, jako je-forbol myristoacetát (PMA). částečné purifikace IL-2 bylo dosa-ženo postupem zahrnujícím srážení síranem amonným a dialýzu,gelovou filtrační chromatografii (SEPHADEX G-100), ionexovouchromatografii (DEAE celulóza), isoelektrickou fokusaci v plo-chém loži a analytickou elektroforézu na polyakrylamidovém geluobsahujícím natriumdodecylsulfát (SDS - PAGE). Většina biologickéaktivity IL-2 byla elektroforeticky eluována z proteinového pásu(jednoho z devíti až Šestnácti separátních pásů pozorovanýchna gelu), Získaný produkt měl molekulovou hmotnost přibližně14 000 d (viz také Frank a další, J. Immunol. 127, 2 361 (1981)a Watson a další, Lymphokines 6, 95 (1982)) .
Mier a Gallo (J. Immunol. 128, 1122 (1982); Lymphokines6, 137 (1982)) referovali o purifikaci IL-2 z normálních lymfo-cytů a údajně získali "téměř homogenní materiál" za použití pre-parativní elektroforézy na SDS-gelu, jakožto posledního stupně,zařazeného po chromatografii na anexu a gelové filtraci. Jejichprodukt měl molekulovou hmotnost 13 000 podle SDS-PAGÉ a 20 000až 25 000 podle gelové filtrace a isoelektrický bod 6,8. Tatolátka byla velmi nestálá i při -70°C a pro zachování účinnostivyžadovala přídavek hovězího sérového albuminu (BSA) nebo poly-ethylenglykolu. 3
Stadler a Oppenheim (Lymphokines 6, 117 (1982)) popisujíIL-2 přečištěný z periferních krevních jednojaderných buněk,tonzilárních a slezinových buněk. Získaný produkt vykazuje popurifikaci sloupcovou chromatografií, gelovou filtrací a elektro-fokusací nábojovou heterogenitu. Byly zjištěny tři různě nabitédruhy ε hodnotami pí 6,5; 7,2 a 8,2. Tato heterogenita je při-pisována rozdílu ve stupni glykosylace.
Konečně, Robb a Smith (Mol. Immunol. 18, 1087 - 1094 (1981))izolovali TCGF (tj. IL-2) z buněčné linie T-leukemických buněkJURKAT. Tento produkt byl homogenní, pokud se týče náboje a veli-kosti molekul. Stejného výsledku údajně dosáhli také Robb a dal-ší (J. Exp. Med. 184, 1455 - 1474 (1981)·).
Podstata vynálezu Předmětem vynálezu je humánní interleukin 2, který se vyzna-čuje tím, ze je homogenní.
Nový. humánní interleukin 2 podle tohoto vynálezů je možnovyrobit kombinovaným postupem tak, že se 4 A. Roztok surového humánního interleukinu 2 vede sloupcempro vysokovýkonovou chrornátografi'i— na-reversní-fáz i~r~který-obsa—huje methylskupiny nebo oktylskupiny kovalentně vázané k silika-gelu, načež se humánní interleukin 2, který se na tomto sloupcizachytí, eluuje za podmínek HPLC tlumeným roztokem n-propanolu s koncentračním gradientem 0 až 60 % objemových a spojí se frakcevykazující aktivitu humánního interleukinu 2; načež se B. spojené frakce získané ve stupni A vedou sloupcem provysokovýkonovou chromatografií na reversní fázi, který obsahujedifenylskupiny kovalentně vázané k silikagelu, načež se humánníinterleukin 2, který se na tomto sloupci zachytíjěluuje za pod-mínek HPLC tlumeným roztokem n-propanolu s koncentračním gradi-entem 20 až 60 % objemových a spojí se frakce vykazující aktivi-tu humánního interleukinu 2; 4 a popřípadě se opakuje stupeň A a/nebo B. Předmětem vynálezu je také farmaceutický přípravek, kterýse vyznačuje tím, že jako účinnou látku obsahuje homogenní hu-mánní interleukin 2 a dále obsahuje farmaceuticky vhodné ředid-lo nebo nosič.
Vynález se týká humánního IL-2 získaného z indukovaných”" ' ~ humánních maligních buněk, který se purifikuje až do homogen-ního stavu za použití několika stupňů vysokovýkonové kapalino-vé chromatografie na reversní fázi. Postup použitý pro výrobuhomogenního IL-2 podle tohoto vynálezu se provádí tak, že sesurový preparát obsahující IL-2 vede přes sloupec pro HPLC sreversní fází, který obsahuje methylskupiny nebo oktylskupinyvážené k oxidu křemičitému, zachycený protein se eluuje n-pro- ’ panolovým gradientem v pufru, frakce, které jsou podle zkoušení ·* aktivní se spojí a vedou sloupcem pro HPLC s reversní fází, kte-rý obsahuje difenylskupiny vážené k oxidu křemičitému. V těch .případech, kdy má výchozí surový preparát poměrně nízký titr, s může být nutné opakovat jeden nebo více HPLC-stupňů, aby se pu-rifikace dovedla až do stavu homogenity. \
Surové preparáty IL-2 se snadno získají kultivací malig-ních humánních neoplastických buněk, jako jsou buňky humánníleukemie a lymphoma, postupem prováděným "in vitro" v médiuobsahujícím sérum, které je doplněno různými přísadami. Kulturase stimuluje mitogenem T-buněk, jako je PHA, za vzniku super-natantu obsahujícího IL-2. Po určité době, tj. přibližně po 24hodinách od inkubace se supernatant oddělí a purifikací zpracu-je na produkt o vyšší koncentraci IL-2. Pro zvýšení produkceIL-2 je také vhodné použít esteru forbolu, jako PMA, jako indukč-ního činidla, a to bud samotného nebo v kombinaci s mitogenemT-buněk, jako je PHA nebo Con A. Další podrobnosti jsou uvedenyv Gillis a další, J. Exp. Med. 152, 1709 (1980)). 5
Jako buněčné linie, kterých je možno použít pro produkcisurového.humánního IL-2, je možno uvést různé linie T a B-buněk,jakož i různé linie buněk T-lymphoma. Buněčné linie se získajíbud na základě spontánního výskytu, virové infekce nebo za použi-tí chemického karcinogenu. Přednostní buněčnou linii pro tentoúčel identifikovali Gillis a další jako buněčnou linii leukemic-kých humánních T-buněk Jurkat-FHCRC. Největší přednost se dávápoužití subklonu této linie s označením H33HJ-JAI. Způsobu podlevynálezu je také možno použít pro purifikaci IL-2 pocházejícíhoz periferních krevních lymfocytů.
Kultivační médium používané pro produkci surového humánníhoIL-2 ve spojení sé shora uvedenými buněčnými liniemi může býttvořeno obchodně dostupnými médii,, jako je Dulbeccem modifiko-vané Eaglovo médium, médium RPMI a Clickovo médium.: Z přísad,které je možno ke kultivačními médiu přidávat,. a€ již jednotlivěnebo v kombinaci, je možno uvést penicilín, streptomycin, gentamy-cin, čerstvý L-glutamin, pufr HEPES, hydrogenuhličitan sodný,fetální telecí sérum (FCS) nebo normální humánní sérum. Počáteč-ní hustota buněk, zvláště pokud se používá buněk Jurkat-FHCRC,by měla být řádově 5.105 az 1.107, nejvýhodněji asi Ι,.ΙΟθ buněkna mililitr.
Kultivace se provádí za těchto podmínek: teplota přibližně35 až 38°C, pH v rozmezí do 7,0 do 7,4, vlhká atmosféra obsahu^jící přibližně 5 až 10 % oxidu uhličitého ve vzduchu. Může sepoužívat koncentrace mitogenu PHA v rozmezí od 0,5 do 2,0 %,přednostně 1 % objemového.
Množství IL-2 produkovaného stimulací maligních humánníchbuněk rostlinným mitogenem se s časem mění. Špičkových hodnotIL-2 se dosáhne přibližně po -16 až 24 hodinách po stimulaci PHA.Stanovení IL-2, které se provádí za účelem monitorování produkcebuněčné kultury nebo monitorování purifikačního postupu se prová-dí tak, že se zjistí schopnost vzorku indukovat přoliferaci linieT-buněk. Proliferace T-buněk se stanovuje na základě měření 6 - inkorporace tritiovaného thymidinu. Jedna jednotka aktivity je definována jako počet yUl přítomných v jímce s kulturou T-buněk, který indukuje 50 % maximální inkorporace thymidinu. Specifické .· podrobnosti tohoto zkušebního postupu jsou uvedeny v J. Immunol. 120, 2 027 (1978), Gillis a další.
Vhodná výchozí látka pro HPLC purifikační stupně podle to-hoto' vynáíezu^še^Víská" ^sTáž^ímTčL^^^obsaženěfío^v supernlTtaňtu,- 'který byl získán odstředěním sklizených indukovaných buněk. Srá-žení se provádí síranem amonným až do stavu 85% nasycení. Přitomse suchý síran amonný postupně přidává za mírného míchání k super-natantu. Přidávání síranu amonného za účelem precipitace se prová-dí v průběhu dlouhé doby, například 12 hodin. To_dosažení stupně nasycenosti 85 % se v mírném míchání pokračuje ještě další,dobu jí za chladu. Vysrážený protein se peletizuje odstředěním a peletyse resuspendují ve sterilní redestilované vodě. . ’Γ 1 Při jednom alternativním postupu se resuspendovaný surovýIL-2 podrobí ionexové chromatografii. Jako vhodný sloupec pro . » tento účel je možno uvést pryskyřici CM Biogel A (výrobce LKB- . ·.$ -Producter, Bromma, Švédsko).. Přednostně se sloupec předběžně ošetří roztokem fetálniho telecího séra, aby se zablokovala ne-specifická vazebná místa v pryskyřici před aplikací vzorku obsa-hujícího IL-2. Eluce ze sloupce se provádí pufrovaným roztokemsoli s koncentračním gradientem. Vhodný gradient pro tento účelje 50 mM až 0,5 M NaCl v HEPES o hodnotě pH 5,5. Závěrečné promy-tí se provede 0,5M roztokem chloridu sodného v HEPES o pH 5,5,aby se zajistila eluce veškeré aktivity IL-2. *1
Spojené aktivní frakce získané ve shora uvedeném stupnij ionexové chromatografie představují přednostní výchozí látku pro HPLC postupy prováděné podle tohoto vynálezu. Pokud se zestupně srážení síranem amonným získá supernatant s dostatečněvysokým titrem, může se této látky alternativně přímo použítv prvním stupni HPLC podle vynálezu. V tomto případě však můžebýt pro získání v podstatě homogenního Il-2-produktu nutné opa-kovat jeden nebo oba HPLC stupně. 7 Při HPLC stupních postupu podle tohoto vynálezu se používásloupce silikagelu s reversní fází obsahujícího navázané methylo-vé, oktylové, nebo difenylové skupiny, který má velikost pórůpřednostně alespoň asi 15 nm. Vhodné sloupce pro HPLC na reversnífázi, kterých je možno použít při provádění způsobu podle vynále-zu, jsou běžně k dostání na trhu. Zvláště se k tomuto účelu hodířada sloupců Protesil (výrobce Whatmann Separations lne. Clifton,N.J., USA.
Tak například, Whatmann Protesil 300 Methyl je sloupec,obsahující trimethylsilylskupiny kovalentně vázané prostřednictvímvazeb křemík-kyslík-křemík k povrchu silikagelu s póry o průměru30 nm, přičemž z tohoto silikagelu byla vytříděna frakce o střed-ní velikosti částic 8yum. Podobně, Whatman Protesil Magnum 9 Octylje sloupec obsahující oktylskupiny kovalentně· vážené k silikagelus póry o průměru 15 nm. Whatman Protesil Diphenyl je sloupecobsahující difenylskupiny kovalentně vázané k povrchu silikagelus póry o průměru 30 nm. ' Eluce proteinů ze sloupců pro HPLC.se.může.provádět, o soběznámými způsoby v tomto oboru. Jako vhodný eluční postup proodstraňování vázaných proteinů ze sloupce obsahujícího kovalent-ně vázané methylové nebo oktylové skupiny, kterého se používáv prvním stupni HPLC při způsobu podle tohoto vynálezu, je možno uvést eluci ní"žkým-alkanolem ve slněsi~s~vodou_za_použití~gra—- dientu s postupně vzrůstající koncentrací tohoto alkoholu. Jakoalkoholu se přednostně používá n-propanolu. Přednostní gradientpro tento účel je gradient 0 až 60 % objemových alkoholu ve smě-si pyridin-kyselina octová o pH 4,0.
Podobných elučních podmínek se může použít i v případě elu-ce z difenylového sloupce použitého ve druhém stupni způsobupodle vynálezu -s tím rozdílem, že alkanolový gradient je 20 až60"% objemových. Eluovaný protein je možno účelně monitorovatpomocí detekčních systémů, které jsou v tomto oboru známy, na-příklad za použití automatizovaného fluorescenčního detekčníhosystému, který popsali Kenny a další v Methods Enzymol*78, 435(1981). 8
Po provedení HPLC stupňů při způsobu podle vynálezu, at,již se jedná o dva následné stupně nebo pokud se použije suro-viny s nízkým titrém, o sekvenci stupňů zahrnující jedno nebovíce opakování prvního a/nebo druhého stupně, se získá IL-2 purifikovaný do stavu homogenity, což se projevuje jediným sy-metrickým pikem bioaktivity. IL-2 se přitom získá v dobrém vý-těžku. Příprava homogenního IL-2 umožňuje poprvé stanovit amino-kyselinové složení jeho molekuly. Tato informace může vést kestanovení sekvence aminokyselin, jejíž známost je důležitá proklonování humánního genu IL-2 a následující produkci velkéhomnožství čistého rekombinantního IL-2 pró kliničké pokusy. Ko-nečným cílem je možnost širokého medicinálního nasazení tétolátky. Dostupnost homogenního IL-2 umožní provést přesné biolo-gické studie jeho účinnosti, jejichž výsledky nebudou ovlivněnykontaminací .IL-2 četnými lymfokiny, o nichž je známo, že vznika-jí jako vedlejší produkty při produkci IL-2 indukčním postupem. V dosavadním stavu techniky již sice byla popsána příprava vyso-ce čistých nebo téměř homogenních IL-2 preparátů, zkušenost všakukázala, že když se takový, materiál, vykazující údajně jediný páspři analytické elektroforéze SDS-PAGE, použije jako výchozílátka pro HPLC postup na methylovém nebo oktylovém sloupci, roz-štěpí se tento pás na velký počet proteinových píků, které ne-jsou spojeny s aktivitou IL-2. Na základě těchto pozorování sepředpokládá, že čistota takových známých přípravků není vyššínež 10 % a v některých případech může být dokonce nižší než 1 %. V tomto popisu a nárocích se pod výrazem "homogenní inter-leukin 2" rozumí humánní interleukin 2, který neobsahuje jinésloučeniny či proteiny, které aktivitu interleukinu 2 nevykazují.Přednostní postup pro přípravu humánního interleukinu 2 podlevynálezu spočívá v purifikaci za použití pracovních stupňů HPLC.Tím se získá preparát vykazující jediný symetrický pík aktivityIL-2. Tento preparát zároveň poskytuje jediný pás‘ nebo jedinouskrvrnu při analytické elektroforéze SDS-PAGE, nebo při dvouroz-měrné gelové elektroforéze. 9
Zkoušky s částečně purifikovanými IL-2 přípravky získanýmiz buněčné linie Jurkat-FHCRC ukázaly, že částečně purifikovanýlymfokin nezpůsobuje proliferaci čerstvých periferních krevníchlymfocytů, ale indukuje proliferaci v populacích T-lymfocytů,které byly předběžně stimulovány lektiny nebo specifickými anti-geny. Dále bylo zjištěno, Že zčásti purifikovaný humánní IL-2si zachovává schopnost proliferace nejen u humánních antigen-spe-cifických efektorových T-buněk, ale také antigen-specifickýchefektorových T-buněk hlodavců Muridae. Humánní IL-2 produkovanýbuněčnou linií Jurkat-FHCRC, přestože je purifikován pouze částečně, se stal užitečným činidlem pro použití při pěstování klonál-ních humánních T-buněk a T-buněk Muridae s různými antigenya různými specifickacemi efektorů a pro taková'použití se veskutečnosti stal. obchodním produktem. Homogenní IL-2 podle to-hoto vynálezu je samozřejmě možno používat podobným způsobem. * »·.’.·
Vynález se blíže popsán v následujícím příkladu provedení.Tento příklad má pouze ilustrativní charakter a rozsah vynálezuv žádném ohledu neomezuje. Příklady provedeni vynálezu -P-ř—í—k—1-a-d—-----
Produkce IL-2
Buňky H33HJ-JAI {ATCC č. CRL-81-63, vzorek uložen 26. srpna19 82) , což je klon rodičovské buněčné linie Jurkat-FHCRC, senechají růst v médiu RPMI 1 640, doplněném o 10 % fetálního tele-cího séra, 50 U/ml penicilinu, 50/Ug/ml streptomycinu, 50/Ug/mlgentamycinu a 300yug/ml čerstvého L-glutaminu, pří teplotě 37°Cve vlhké atmosféře obsahující 5 % oxidu uhličitého ve vzduchu.Když buněčná hmota dosáhne hustoty odpovídající nasycení {8 až10.105buněk/ml) provede se jejich sklizení. Buňky se odstředía resuspendují y čerstvém médiu RPMI 1 640, které neobsahuje 10 sérum, ale obsahuje 50 U/ml penicilinu, 50/Ug/ml streptomycinu,50/ug/ml gentamycinu a 300/ug/ml čerstvého L-glutaminu. Buňkyse resuspendují na koncentraci 2.10^ buněk/ml a stimulují sepřídavkem 1 % objemového PHA a 10 ng/ml forbol myristo-acetátu{PMA). Po 24 hodinách inkubace při 37°C ve vlhké atmosféře obsa-hújící 5 % oxidu uhličitého ve vzduchu, se indukované buňky sklidía odstředí. Zachycené supernatanty se považují za surovou vý- chozí látku.
Ke spojeným supernatantům ze 3 šarží buněčných kultur (č. 1až 3) o objemu 900, 900 a 1 050 ml, tedy o celkovém objemu2 850 ml, jejichž celková aktivita měřená podle stanovení, kte-ré popsali Gillis a další, J. Immunol. 120, 2 .{1978) , činí g 7,125.10 jednotek , se za mírného míchání postupně přidává su-chý síran amonný až do 85% nasycení. Srážení přidáváním síranuamonného se provádí po dobu 12 hodin. Když se dosáhne 85% nasy-cení roztoku, pokračuje se v míchání při 4°C dalších 24 hodin.Protein obsažený v supernatantu se peletizuje třicetiminutovýmodstředováním při 10 000 g. Supernatanty se dekantují a zahodí.Peleta se resuspenduje v redestilované sterilní vodě na celkovýobjem 40 ml. Vzniklý roztok obsahuje 205 000 U/ml IL-2 nebo cel- g kem 8,2.10 jednotek.
Provedou se též další pokusy, které jsou sumarizovány vtabulce I. - 11 -
Celkový ob-sah (akti-fivita)(U. 10 ) 11 13,107 Aktivita (U/ml) 200 000 i o . CD fH Objem re- suspenze (ml) 55 08 •>1 — > 0X0aí <e <-iη ω · CD X □u o — in (M xr K o LTJ ω * (N iH fí! -flj 4-> C -H — 00! o o Q) > i—In-«-t 6 0 -P 0.Λ! D M (0 ·*" U 1 VD <0 Objem su-pernatantu(ml) 1 200 250 1 200 700 Pokus č. v m t£> . r- 12
Ionexová chromatografie na sloupci CM Biogel A CM Biogel A se ekvilibruje v 0,05M NaCl-HEPES o pH 5,5. Na-plní se kolona (100 ml) a potom se na sloupec působí 100 ml0,005M NaCl-HEPES o pH 5,5, který obsahuje 10 % FCS. Tato operacese provádí proto, aby se zablokovala nespecifická vazebná místa,která by potom mohla vázat aktivitu humánního IL-2. Sérové pro-teiny, které se na sloupec navážou, se potom eluují 500 ml 0,5MNaCl-HEPES o pH 5,5.. . Potom se sloupec reekvilibruje pomocí1 000 ml 0,05M roztoku chloridu sodného.
Na CM sloupec se aplikují spojené resuspenze proteinu vy-sráženého síranem amonným z pokusů 1 až ‘5, popěných výše. Po-tom se sloupec promyje 200 ml 0,05M NaCl-HEPES o pH 5,5. Dálese na sloupec aplikuje 500 ml solného gradientu od 50mM do 0,5MNaCl-HEPES o pH 5,5. Po aplikaci gradientu se sloupec promyje200 ml 0,5M NaCl-HEPES o pH 5,5, aby se zajistilo, že všechenvázaný IL-2 byl ze sloupce skutečně eluován. Zachycují se 5mlfrakce. H každé 3. frakce se zkouší aktivita IL-2. Stanoví semaximální aktivita a aktivní frakce se spojí. Tak se získá cel-kem 36 ml eluátu o aktivitě 983 040 U/ml. Celková aktivita činí35,39.10^jednotek (U) . Při dalším pokusu na CM sloupci s resuspendovaným precipi-tátem získaným srážením síranem amonným (spojený produkt z poku-sů 6 a 7) se získají spojené frakce o celkovém objemu 215 mla aktivitě 80 000 U/ml a celkové aktivitě IL-2 17,2.10^U. 130 mltěchto spojených frakcí se smíchá s 36 ml spojených frakcí zprvního pokusu. Tak se získá 166 ml surového IL-2 o celkovém :í obsahu (aktivitě) 10,4.10^U. HPLC na reversní fázi na oktylovém sloupci Dávka A získaná shora uvedeným způsobem se celá přímo na- čerpá do kolony o rozměrech 9,4.250 mm obsahující Protesil Mag- num 9 Oktyl Column (Whatmann Separations lne., Clifton, N.J. 13 USA). Potom se sloupec promyje 50 ml roztoku kyseliny octové(0,9M) a pyridinu (0,2M), tedy tlumičem o pH 4,0. Eluce pro-teinů se provádí n-propanolovým gradientem od 0 do 60 % obje-mových v pufru obsahujícím kyselinu octovou v 0,9M koncentracia pyridin v 0,2M koncentraci, jehož pH « 4. Eluce se provádí8 hodin. Monitorování proteinu v eluátu vytékajícím z kolonyse provádí pomocí automatizovaného fluorescenčního detekčníhosystému za použití fluoreskaminu. Regeneruje se 7,13.10θ jedno-tek biologické aktivity (přibližně 70 %) . HPLC na reversní fáze na difenylovém sloupci
Frakce obsahující hlavní maxima aktivity, které byly získá-ny z oktylového sloupce, se spoji a zředí 1 : 1 (objemově) roz-.tokem kyseliny octové (0,9M) a pyridinu (0,2M) o pH 4,0 a čerpa-jí do kolony o rozměrech 4,6x250 mm obsahující náplň WhatmannProtesil Diphenyl. Proteiny se eluují n-propanolovým gradientem(20 až 60 % objemových) v pufru o pH 4,0, který je tvořen roz-tokem kyseliny octové (0,9M) a pyridinu (0,2M). Eluce se provádí 6,5 hodiny. Tímto postupem se získá.symetrický'pík, který jev souladu s aktivitou IL-2. Regenerace aktivity v tomto stupnije vyšší než 60 %. Skutečnost, že získaná látka je v podstatěhomogenní, se potvrdí analytickou elektroforézou SDS-PAGE a dvou-.r.ozměrnou_gelO-V-QU elektroforézou. Při první z těchto analytickýchmetod se získá jediný pás, a při druhá jediná skvrna. Takto zís-kaný homogenní humánní IL-2 vykazuje specifickou aktivitu přibliž 9 ně 1,4.10 U/mg a hodnotu pí 5,68.
Vzorky této látky se podrobí analýze, na aminokyseliny,která se provádí za použití fluoreskaminové detekce (viz Stein ,a další, Arch. Biochem. Biophys., 155, 203 (1973)). Polypeptidse hydrolyzuje 24 a 48 hodin při 104°C ve stále vroucí kyseliněchlorovodíkové obsahující Q',1 % thioglykolové kyseliny. Výsledkyjsou souhrnně uvedeny v následující tabulce II. 14 aminokyselin 24 hodin 24 hodin '48 hodin v IL-2Í_ 133 r- * 1 O en ΠΊ n..... —-)- 1 w (\ o co to ffl co Γ' T7 \D TT Γ» (0 P) |Ω V o tr F"[ fM e φ x F-f u
CO m O 00 ΤΓ tN iH m o. CM «Κ *. *» h. *» » i-t P* r- VD i o o m n o w TP rH ιΉ fH fH v o> ffi ιή *··***» w,y vv «Ο v r*· p» ''« ·> «*.; *!
CD to tsi Γ* PQ o ιΛ m ΙΛ ,«cr r- fM co Ό σ> r-l tň iň o o Λΰ ιη m r* σι fH m CO PD fH 1—1 w rH m o if> r*i t" in in r\i co r" co ot t"· r*· o η o Γ' -5T to *»*·*·* h. «,
Λ ’Τ 1Λ N V 0Ί <3>Γ~ ť*í í» r' 0. ti ti 3 0 >1 co m i—I -u Φ 3 tl Φ to to σ 0} X 0) I—I tl i—! i-d to 0 H 0) •H z* tl < “ IQ U ct □ < u > S M . fr« cu zz < 24-ti hodinová hydrolýza na separátním vzorku. 15
Sekvenováním se'dospěje k následující vnitřní částečné sek-venci aminokyselin:
Ile-Leu-Asn-Gly-Ile-Asn-Asn-Tyr-Lys-Asn-Pro-Lys-Leu-Thr
Tato sekvence je konzistentní s polohami .44 až 57 údajné sekvence »humánního IL-2, kterou navrhli Taniguchi a další (Nátuře 302, ' ř 305 - 310 (1983)) , kterýžto IL-2 byl získán z klonované cDNA.
Claims (5)
- f « — ·- 16 -*4* ~7λ3Γ«·0 V j Á-31Ví. >a vhp. PATENTOVÉ NÁROKY1. Humánní interleukin 2 v homogenní formě.
- 2. Humánní interleukin 2 podle’ nároku 1, se 9 .„.akti_vitotu.pr.ibližně_l,_4.1.0„ U/mq. . ; . i? s pec i f
- 3. Humánní interleukin 2 podle nároku 1 nebo nároku 2, jehož9 specifická aktivita je asi 1,4.10 U/mg, pí asi 5,68, který zahr-nuje sekvenci aminokyselin zahrnující následující aminokyseliny: Asp 12 Ala 7 Tyt 3 Thr 10 Cys 4-5 Phe 5 Ser 8 Val 6 His 4 Glu 16-17 Met 4 Lys 8 Pro 8-9 Ile 7 Arg 4 Gly 8 Leu 16.
- 4. Humánní interleukin 2 podle kteréhokoliv z nároku 1 až 3,připravitelný tak, že se A. Roztok surového humánního interleukinu 2 vede sloupcempro vysokovýkonovou chromatografii na reversní fázi, který obsa-huje methylskupiny nebo oktylskupiny kovalentne vázané k silika-gelu, načež se humánní interleukin 2, který se na tomto sloupcizachytí, eluuje za podmínek HPLC tlumeným roztokem n-propanolu s koncentračním gradientem 0 až 60 % objemových a spojí se frakcevykazující aktivitu humánního interleukinu 2; načež se B. spojené frakce získané ve stupni A vedou sloupcem provysokovýkonovou chromatografii na reversní fázi, který obsahujedifenylskupiny kovalentne vázané k silikagelu, načež se humánníinterleukin 2, který se na tomto sloupci zachytí, eluuje za pod-mínek HPLC tlumeným roztokem n-propanolu s koncentračním gradi-entem 20 až 60 % objemových a spojí se frakce vykazující aktivi-tu humánního interleukinu 2; 17 a popřípadě se opakuje stupeň A a/nebo B.
- 5. Farmaceutický přípravek, vyznačující se jj;t í m , ze kromě farmaceuticky vhodného ředidla nebo nosiče obsa-· */huje jako účinnou látku homogenní humánní interleukin 2 podle kte- 'rréhokoliv z nároků 1 až 4. . * MP-1314-91-HO 1,fc
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/418,927 US4490289A (en) | 1982-09-16 | 1982-09-16 | Homogeneous human interleukin 2 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS395391A3 true CS395391A3 (en) | 1992-09-16 |
Family
ID=23660116
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS913953A CS395391A3 (en) | 1982-09-16 | 1991-12-20 | Homogeneous human interleukin 2, process of its preparation and apharmaceutical composition based thereon |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4490289A (cs) |
| EP (1) | EP0106179B1 (cs) |
| JP (1) | JPS5970620A (cs) |
| AT (1) | ATE20073T1 (cs) |
| AU (1) | AU598251B2 (cs) |
| CA (1) | CA1239871A (cs) |
| CS (1) | CS395391A3 (cs) |
| DE (1) | DE3363781D1 (cs) |
| DK (1) | DK165412C (cs) |
| IE (1) | IE55920B1 (cs) |
| IL (1) | IL69731A (cs) |
| NZ (1) | NZ205593A (cs) |
| PH (1) | PH17834A (cs) |
| ZA (1) | ZA836830B (cs) |
Families Citing this family (51)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4738927A (en) * | 1982-03-31 | 1988-04-19 | Ajinomoto Co. Inc. | Gene coded for interleukin-2 polypeptide, recombinant DNA carrying the said gene, a living cell line possessing the recombinant DNA, and method for producing interleukin-2 using the said cell |
| US4925919A (en) * | 1984-04-25 | 1990-05-15 | Roland Mertelsmann | Purified interleukin 2 |
| US4778879A (en) * | 1982-04-20 | 1988-10-18 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Highly purified human interleukin 2 and method |
| US4950598A (en) * | 1982-09-22 | 1990-08-21 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Process for making T cell hybridomas |
| US4992271A (en) * | 1982-09-23 | 1991-02-12 | Cetus Corporation | Formulation for lipophilic IL-2 proteins |
| US4853332A (en) * | 1982-10-19 | 1989-08-01 | Cetus Corporation | Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of biologically active proteins |
| US5700913A (en) * | 1982-12-15 | 1997-12-23 | Ajinomoto Co., Inc. | Unglycosylated human interleukin-2 polypeptides |
| US4518584A (en) * | 1983-04-15 | 1985-05-21 | Cetus Corporation | Human recombinant interleukin-2 muteins |
| US4723000A (en) * | 1983-07-05 | 1988-02-02 | Biospectrum, Inc. | Human interferon gamma and interleukin-2 |
| WO1985000606A1 (en) * | 1983-07-19 | 1985-02-14 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Human il-2 and process for its preparation |
| US4675383A (en) * | 1983-11-15 | 1987-06-23 | The Salk Institute For Biological Studies | Purification of T-cell growth factor |
| JPS60115528A (ja) * | 1983-11-28 | 1985-06-22 | Takeda Chem Ind Ltd | ヒトインタ―ロイキン―２蛋白質を含有する抗腫瘍用または免疫機能低下疾患治療用組成物 |
| US4569790A (en) * | 1984-03-28 | 1986-02-11 | Cetus Corporation | Process for recovering microbially produced interleukin-2 and purified recombinant interleukin-2 compositions |
| US4604377A (en) * | 1984-03-28 | 1986-08-05 | Cetus Corporation | Pharmaceutical compositions of microbially produced interleukin-2 |
| DE3583880D1 (de) * | 1984-04-09 | 1991-10-02 | Takeda Chemical Industries Ltd | Stabile interleukin-2-zusammensetzung. |
| US4908433A (en) * | 1984-04-25 | 1990-03-13 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Uses of interleukin-2 |
| US4908434A (en) * | 1984-04-25 | 1990-03-13 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Process for preparing purified interleukin-2 |
| US4696915A (en) * | 1984-05-25 | 1987-09-29 | Hoffmann-La Roche Inc. | Parathymosin alpha |
| US4572798A (en) * | 1984-12-06 | 1986-02-25 | Cetus Corporation | Method for promoting disulfide bond formation in recombinant proteins |
| US4921667A (en) * | 1985-04-23 | 1990-05-01 | New York University | Method for augmenting immune response |
| US4690893A (en) * | 1985-05-03 | 1987-09-01 | Dnax Research Institute Of Molecular And Cellular Biology, Inc. | Hybridoma cell lines producing monoclonal antibodies which specifically bind to mouse interleukin-2 |
| CA1297003C (en) * | 1985-09-20 | 1992-03-10 | Jack H. Nunberg | Composition and method for treating animals |
| US4933433A (en) * | 1986-01-31 | 1990-06-12 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Recombinant interleukin-2 composition and process for making it |
| US4770781A (en) * | 1986-03-03 | 1988-09-13 | Merck & Co., Inc. | Purification of human interleukin-1 species |
| EP0302894B1 (en) * | 1986-04-28 | 1992-11-19 | Endotronics Inc. | Method of culturing leukocytes |
| US4832686A (en) * | 1986-06-24 | 1989-05-23 | Anderson Mark E | Method for administering interleukin-2 |
| DE3621828A1 (de) * | 1986-06-28 | 1988-01-14 | Biotest Pharma Gmbh | Stabilisierung eines fuer therapeutische zwecke, insbesondere beim menschen, bestimmten interleukin-2-praeparates sowie dieses praeparat enthaltende stabilisierte waessrige loesung oder feststoff |
| US4931543A (en) * | 1987-05-11 | 1990-06-05 | Cetus Corporation | Process for recovering microbially produced interleukin-2 |
| US5034513A (en) * | 1987-05-27 | 1991-07-23 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Avian interleukin-2 |
| US5417970A (en) * | 1988-10-21 | 1995-05-23 | Sanofi | Drugs containing a glycosylated interleukin-2 |
| JPH0266086U (cs) * | 1988-11-07 | 1990-05-18 | ||
| US5245016A (en) * | 1991-01-31 | 1993-09-14 | University Of Utah Research Foundation | Pseudomonas maltophilia immunoglobulin binding protein and methods for its use |
| FR2686899B1 (fr) | 1992-01-31 | 1995-09-01 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
| US6190901B1 (en) | 1995-10-17 | 2001-02-20 | Wayne State University | Chicken interleukin-15 and uses thereof |
| US6194207B1 (en) * | 1997-01-31 | 2001-02-27 | Hemosol Inc. | Methods for the selective expansion of lymphocytes by in vitro cultivation |
| JP2003530838A (ja) | 2000-04-12 | 2003-10-21 | ヒューマン ゲノム サイエンシズ インコーポレイテッド | アルブミン融合タンパク質 |
| ES2425738T3 (es) | 2001-12-21 | 2013-10-17 | Human Genome Sciences, Inc. | Proteínas de fusión de la albúmina |
| EP1549614A4 (en) * | 2002-10-03 | 2008-04-16 | Targegen Inc | VASCULATORY AGENTS AND METHODS FOR THEIR APPLICATION |
| US20050282814A1 (en) * | 2002-10-03 | 2005-12-22 | Targegen, Inc. | Vasculostatic agents and methods of use thereof |
| EP1594530A4 (en) | 2003-01-22 | 2006-10-11 | Human Genome Sciences Inc | HYBRID PROTEINS OF ALBUMIN |
| KR20070011458A (ko) | 2004-04-08 | 2007-01-24 | 탈자진 인코포레이티드 | 키나제의 벤조트리아진 억제제 |
| EP1799656A4 (en) | 2004-08-25 | 2009-09-02 | Targegen Inc | HETEROCYCLIC COMPOUNDS AND METHODS OF USE |
| WO2006133411A1 (en) * | 2005-06-08 | 2006-12-14 | Targegen, Inc. | Methods and compositions for the treatment of ocular disorders |
| US8133900B2 (en) * | 2005-11-01 | 2012-03-13 | Targegen, Inc. | Use of bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases |
| WO2007053452A1 (en) * | 2005-11-01 | 2007-05-10 | Targegen, Inc. | Bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases |
| US8604042B2 (en) * | 2005-11-01 | 2013-12-10 | Targegen, Inc. | Bi-aryl meta-pyrimidine inhibitors of kinases |
| US7691858B2 (en) * | 2006-04-25 | 2010-04-06 | Targegen, Inc. | Kinase inhibitors and methods of use thereof |
| WO2009152610A1 (en) * | 2008-06-20 | 2009-12-23 | The Royal Institution For The Advancement Of Learning/Mcgill University | Interleukin-2/soluble tgf-beta type ii receptor b conjugates and methods and uses thereof |
| WO2012060847A1 (en) | 2010-11-07 | 2012-05-10 | Targegen, Inc. | Compositions and methods for treating myelofibrosis |
| US9332999B2 (en) | 2012-08-13 | 2016-05-10 | Covidien Lp | Apparatus and methods for clot disruption and evacuation |
| US9332998B2 (en) | 2012-08-13 | 2016-05-10 | Covidien Lp | Apparatus and methods for clot disruption and evacuation |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4390623A (en) * | 1980-10-02 | 1983-06-28 | Hooper Trading Company | Serum-free and mitogen-free T-cell growth factor and process for making same |
| JPS58159420A (ja) * | 1982-03-18 | 1983-09-21 | Ajinomoto Co Inc | インタ−ロイキン２の精製法 |
| ATE37564T1 (de) * | 1982-04-20 | 1988-10-15 | Sloan Kettering Inst Cancer | Reinigung von interleukin-2. |
| US4778879A (en) * | 1982-04-20 | 1988-10-18 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Highly purified human interleukin 2 and method |
| US4925919A (en) * | 1984-04-25 | 1990-05-15 | Roland Mertelsmann | Purified interleukin 2 |
-
1982
- 1982-09-16 US US06/418,927 patent/US4490289A/en not_active Expired - Lifetime
-
1983
- 1983-09-14 ZA ZA836830A patent/ZA836830B/xx unknown
- 1983-09-14 NZ NZ205593A patent/NZ205593A/en unknown
- 1983-09-14 JP JP58168492A patent/JPS5970620A/ja active Granted
- 1983-09-14 CA CA000436704A patent/CA1239871A/en not_active Expired
- 1983-09-15 DK DK421383A patent/DK165412C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-09-15 IL IL69731A patent/IL69731A/xx not_active IP Right Cessation
- 1983-09-15 PH PH29546A patent/PH17834A/en unknown
- 1983-09-15 IE IE2168/83A patent/IE55920B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-09-16 AT AT83109202T patent/ATE20073T1/de not_active IP Right Cessation
- 1983-09-16 DE DE8383109202T patent/DE3363781D1/de not_active Expired
- 1983-09-16 EP EP83109202A patent/EP0106179B1/de not_active Expired
-
1987
- 1987-04-24 AU AU71970/87A patent/AU598251B2/en not_active Expired
-
1991
- 1991-12-20 CS CS913953A patent/CS395391A3/cs unknown
-
1995
- 1995-05-25 US US08/450,508 patent/US5597901A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE55920B1 (en) | 1991-02-27 |
| IL69731A (en) | 1988-01-31 |
| US4490289A (en) | 1984-12-25 |
| CA1239871A (en) | 1988-08-02 |
| DK165412B (da) | 1992-11-23 |
| JPS5970620A (ja) | 1984-04-21 |
| NZ205593A (en) | 1987-03-06 |
| DK165412C (da) | 1993-04-13 |
| ZA836830B (en) | 1984-05-30 |
| PH17834A (en) | 1985-01-07 |
| IL69731A0 (en) | 1983-12-30 |
| DE3363781D1 (en) | 1986-07-03 |
| AU7197087A (en) | 1987-08-13 |
| JPH0244480B2 (cs) | 1990-10-04 |
| US5597901A (en) | 1997-01-28 |
| AU598251B2 (en) | 1990-06-21 |
| IE832168L (en) | 1984-03-16 |
| AU559677B2 (en) | 1987-03-19 |
| EP0106179A1 (de) | 1984-04-25 |
| DK421383A (da) | 1984-03-17 |
| AU1916083A (en) | 1984-03-22 |
| EP0106179B1 (de) | 1986-05-28 |
| DK421383D0 (da) | 1983-09-15 |
| ATE20073T1 (de) | 1986-06-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS395391A3 (en) | Homogeneous human interleukin 2, process of its preparation and apharmaceutical composition based thereon | |
| Scala et al. | Accessory cell function of human B cells. I. Production of both interleukin 1-like activity and an interleukin 1 inhibitory factor by an EBV-transformed human B cell line. | |
| Robb et al. | Purification and partial sequence analysis of human T-cell growth factor. | |
| Liang et al. | Characterization of human interleukin 2 derived from Escherichia coli | |
| US5326558A (en) | Megakaryocytopoietic factor | |
| AU638430B2 (en) | Natural killer stimulatory factor | |
| AU674363B2 (en) | Cytotoxic lymphoctye maturation factor and monoclonal antibodies directed thereto | |
| Cameron et al. | Purification to homogeneity and amino acid sequence analysis of two anionic species of human interleukin 1. | |
| CN1032816A (zh) | 抗人白细胞介素-4的单克隆抗体及产生白细胞介素-4的杂交瘤 | |
| US5484887A (en) | Homogeneous interleukin 1 | |
| US4675383A (en) | Purification of T-cell growth factor | |
| JP2559035B2 (ja) | 細胞生長調節因子 | |
| EP0487613B1 (en) | A megakaryocytopoietic factor | |
| US5434247A (en) | Peptides for inducing monocyte cytotoxicity in diagnostics | |
| WO1987004466A1 (en) | Interleukin | |
| Robb et al. | T-cell growth factor: purification, interaction with a cellular receptor, and in vitro synthesis | |
| Hübner et al. | Chemical characterization of macrophage cytotoxicity factor, macrophage migration inhibitory factor, T-helper cell-replacing factor and colony-stimulating factor from culture supernatants of concanavalin A-stimulated murine spleen cells | |
| Stern et al. | Purification to homogeneity and amino acid sequence analysis of a receptor protein for interleukin 1 | |
| JP2601199B2 (ja) | ヒトインターロイキン−２蛋白質 | |
| BG61895B2 (bg) | Хомогенен човешки интерлевкин 2 | |
| EP0155319A1 (en) | Monoclonal anti-interleukin-2 antibody useful for immunopurification for interleukin-2 | |
| THOMPSON | MULTIPLE MOLECULAR FORMS OF RAT INTERLEUKIN II: PURIFICATION AND CHARACTERIZATION (GROWTH FACTORS, GLYCOPROTEINS) | |
| CAMERON | PURIFICATION TO HOMOGENEITY AND AMINO ACID SEQUENCE ANALYSIS OF TWO ANIONIC SPECIES OF HUMAN INTERLEUKIN 1 BY PATRICIA M. CAMERON,* GUADALUPE A. LIMJUCO,* JAYNE CHIN,* LESLIE SILBERSTEIN,* AND JOHN A. SCHMIDT | |
| WO1992013546A1 (en) | Mb-40 peptide that enhances the production of interleukin-1 and modulates age-associated immune response | |
| AU8446891A (en) | Lymphokine 154 |