CS274409B2 - Agent for simultaneous determination of thrombocytes and leucocytes number - Google Patents
Agent for simultaneous determination of thrombocytes and leucocytes number Download PDFInfo
- Publication number
- CS274409B2 CS274409B2 CS658184A CS658184A CS274409B2 CS 274409 B2 CS274409 B2 CS 274409B2 CS 658184 A CS658184 A CS 658184A CS 658184 A CS658184 A CS 658184A CS 274409 B2 CS274409 B2 CS 274409B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- platelet
- solution
- counting
- parts
- leukocyte
- Prior art date
Links
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 title description 45
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 33
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 claims description 5
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical class [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000001016 thiazine dye Substances 0.000 claims description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 18
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 14
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 14
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960001484 edetic acid Drugs 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 4
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 2-methylphenol;3-methylphenol;4-methylphenol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1.CC1=CC=CC(O)=C1.CC1=CC=CC=C1O QTWJRLJHJPIABL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N cocaine Chemical compound O([C@H]1C[C@@H]2CC[C@@H](N2C)[C@H]1C(=O)OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZPUCINDJVBIVPJ-LJISPDSOSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229930003836 cresol Natural products 0.000 description 2
- ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M crystal violet Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C+](C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N (7-aminophenothiazin-3-ylidene)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(=[NH2+])C=C2SC3=CC(N)=CC=C3N=C21 PVPBBTJXIKFICP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 2h-thiazine Chemical compound N1SC=CC=C1 AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 229960003920 cocaine Drugs 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 229960001235 gentian violet Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 1
- 238000012886 linear function Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M methylene blue Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 CXKWCBBOMKCUKX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229940053973 novocaine Drugs 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5094—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for blood cell populations
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/305—Fixative compositions
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Ecology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález se týká činidla k současnému stanovení počtu trombocytů a leukocytů. j
Předmětem vynálezu je činidlo obsahující aceton a formaldehyd nebo glutaraldehyd, minerální soli a barviva, které je vhodné k současnému stanovení počtu trombocytů a leukocytů z plné krve normální mikroskopickou cestou.
Oe známo, že stanovování počtu trombocytů a počtu leukocytů spadá do rozsahu standardních metod klinických laboratoří. Počítání trombocytů se může provádět různými metodami:
1. Elektronické počítání částic pomocí automatů vyvinutých pro počítání trombocytů. I když je metoda rychlá a jednoduchá, je nutno opatřit velmi drahé přístroje. Tato metoda není vždy vhodná k náhradě mikroskopického stanovování. Reprodukovatelnost tohoto postupu je rovněž horší než reprodukovatelnost mikroskopického počítání.
2. Počítání trombocytů pomocí mikroskopu s fázovým kontrastem za použití roztoku obsahujícího kokain nebo novokain nebo některého jiného roztoku pro počítání trombocytů. K provádění tohoto postupu je nepostradatelným mikroskop s fázovým kontrastem. Další podstatná nevýhoda spočívá v tom, že,metoda je pro personál provádějící pokusy únavná, namáhavá a škodlivá pro oči, zejména při vysokém počtu pokusů.
3. Stanovením počtu trombocytů metodou barvení. Tento postup je nejjednodušší a může se provádět pomocí mikroskopu. Podle dnes používaných metod se jako barvivo používá krystalová violet (genciánová violet; chemický název: hexamethyl-p-rosanilin-hydrochlorid).
Vůči těmto metodám se oprávněně namítá, že ve srovnání se stanovením pomocí fázového kontrastu zkreslují výsledky, protože ne všechny trombocyty se vybarví dobře viditelným způsobem.
V hematologické diagnostice představuje počítání leukocytů nejrozšířeněji používanou metodu. Pro tento účel je obecně vhodný Turkův roztok, který se popisuje v maďarském lékopisu (Ph. Hg. VI) a který se dobře uchovává, není však vhodný ke stanovení počtu trombocytů. To je značná nevýhoda, protože velmi často je nutné společné provádění obou těchto rozšířených laboratorních pokusů. Ke stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů z plné krve pomocí normálního světelného mikroskopu je potřebný roztok barviva, který
a) vyvolá úplnou hemolýzu erythrocytů bez snížení počtu trombocytů a počtu leukocytů;
b) fixuje jak trombocyty, tak i leukocyty a
c) obsahuje takové barvivo, které je na shora uvedené částice vázáno s vysokou afinitou a tímto způsobem je fixováno v normálním světle.
Roztok, který splňuje první dva ze shora uvedených požadavků, je sice znám (srov.
Scand. 0. Clin. Invest. 33, 121 (1974)), počítání trombocytů se však může provádět jen za použití mikroskopu s fázovým kontrastem.
Cílem vynálezu byla výroba roztoku barviva, jehož pomocí je možno provádět stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů z plné krve za použití normálního světelného mikroskopu a za odstranění shora uvedených nevýhod známých činidel.
Vynález spočívá na překvapivém poznatku, že kombinací hemolýzujícího a fixujícího roztoku s bázickým barvivém vysoké afinity se získá roztok činidla, který je vhodný pro společné stanovování počtu trombocytů a počtu leukocytů za použití normálního světelného mikroskopu. Shora uvedené podmínky mohou být splněny v tom případě, když hemolyzující a fixující roztok není s barvivém inkompatibilní, tzn. že nevytváří žádnou sraženinu.
Vzniku mikroskopických sraženin se má zamezit; takové sraženiny mohou mít totiž charakter trombocytů a tím mohou zkreslovat výsledek stanovení.
Dosud používané roztoky barviva typu kresolové violeti odpovídají shora uvedeným požadavkům jen částečně. Složky barviva kresolové violeti v roztoku, který je určen pro počítání, mají totiž slabě bázický charakter. Tím se trombocyty zbarvují jen velmi málo a leukocyty se nejeví jednoznačně.
Nyní bylo podle vynálezu zjištěno, že pro tento účel se výtečně hodí tzv. thiazinová
CS 274 409 B2 barviva. Barviva thiazinového typu se vyznačují přítomností dvou chromofořových skupin. Sloučeniny thiazinového typu již byly v lékařské praxi používány v různých oborech (například k barvení bakterií, v histochemii), avšak v odborné a patentové literatuře neexistu je žádný údaj o poznatku podle vynálezu. Nejdůležitějšími zástupci této skupiny sloučenin j toluidinová modř vzorce I
thionin vzorce II
(II)
Cl a methylenová modř vzorce
III (CH3)2» f
(III).
Cl
Předmětem předloženého vynálezu je činidlo k současnému stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů obvyklou mikroskopickou cestou, které se vyznačuje tím, že obsahuje 0,1 až 5 dílů hmotnostních acetonu, 0,05 až 2,0 dílu hmotnostního formaldehydu nebo/a glutaraldehydu, 0,001 až 0,1 dílu hmotnostního thiazinového barviva, výhodně toluidinové modři, 0,1 až 2,0 dílu hmotnostního minerální soli, výhodně chloridu sodného a do 100 dílů hmotnostních vody.
Podle výhodného provedení vynálezu se činidlo skládá z 0,1 až 5,0 dílu hmotnostního acetonu, 0,05 až 2,0 dílu hmotnostního formaldehydu, 0,001 až 0,1 dílu hmotnostního toluidi nové modři a 0,1 až 2 dílů hmotnostních chloridu sodného.
Zvláštní výhoda barviv používaných podle vynálezu spočívá v tom, že tato barviva mají velmi vysokou afinitu také vůči kyselým makromolekulám trombocytů a leukocytů, což má odpovídajícím způsobem za následek velmi intenzivní a markantní viditelnost.
Nejdůležitějši výhoda činidel podle vynálezu spočívá v tom, že citlivost činidel je podstatně vyšší ve srovnání se známými činidly. Tuto skutečnost lze prokázat následujícími
CS 274 409 82 pokusy.
Výsledky dosažené ze vzorků s neznámým počtem trombocytů a leukocytů se získají během dvaceti po sobě probíhajících stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů. Přesnost metody počítání buněk je uspokojující tehdy, jestliže standardní odchylka je menší než 10 %. Při počtu trombocytů 218,8 G/1 činí standardní odchylka (SO) - 5,0 a za použití těchto hodnot činí variační koeficient (jako standardní odchylka, vyjádřená v %) 2,28 (srov. obr. 1). Nutno ještě uvést, že hodnota G/1 znamená počet trombocytů a počet leukocytů udávaný v systému SI [G/1 = giga(počet buněk)/litr = počet buněk x 10J , viz srovnání s obr.
1.
Počítání trombocytů a leukocytů se provádí pomocí reagenčního roztoku podle příkladu 1 způsobem popsaným v příkladu 2. K měření se používá téhož roztoku žilní krve a jednotlivá měření se dvacetkrát opakují. Hodnoty počtu buněk získané při jednotlivých měřeních vyjádřené v jednotkách G/1 (G/1 = giga /10 / počet buněk/litr) byly vyneseny na obr. 1. Jak lze z tohoto obr. odečíst, kolísají naměřené hodnoty mezi 210 G/1 a 230 G/1; z těchto údajů vypočtená průměrná hodnota (x) činí 218,8 G/1. Standardní odchylka (SD) měření činí í 5,0; variační koeficient (CV) vyjádřený v % standardní odchylky Činí 2,28. Číselné údaje uvedené na ose pořadnic na obr. 1 znamenají hodnoty počtu buněk v G/1; na ose pořadnic jsou uvedeny odchylky, které odpovídají dvojnásobku hodnoty standardní odchylky (+2 SD, popř. -2 SD) a trojnásobku hodnoty standardní odchylky (+3 SD, popř. -3 SD).
Optimální chyba při počítání leukocytů činí při střední hodnotě 5,08 G/1, SD = -0,042, což odpovídá variačnímu koeficientu 0,8 %, viz srovnání s obr. 3.
Hodnoty získané při 20 paralelních měřeních počtu leukocytů jsou znázorněny na obr. 3. Interpretace symbolů x, SD, CV a číselných hodnot uvedených na ose pořadnic na obr. 3 je stejná jako v případě obr. 1.
Pro srovnání se v případě počítání trombocytů roztok činidla podle vynálezu porovnává
P s přípravkem známým na trhu pod obchodním názvem THROMBOFIX určeným pro počítání trombo·· R cytů a v případě počítání leukocytů se porovnává s Turkeho roztokem. THROMBOFIX je výrobkem firmy Gódecke, NSR a jeho chemické složení není známo. Pod tímto označením se však běžně vyskytuje na trhu. Srovnávací pokusy se provádějí za použití krve 41 pacientů, přičemž se paralelně stanovuje počet trombocytů a počet leukocytů.
Výsledky se uvádějí v Descartesově souřadnicovém systému, viz srovnání s obr. 2 a 4. Korelace mezi oběma metodami a standardní parametry (a,b) funkce y = ax + b, popisující korelace, se určují pomocí počítače (Hewlett-Packard HP-90).
Při počítání trombocytů je korelace (r) = 0,927; lineární funkční závislost mezi oběma metodami se může vyjádřit rovnicí y = 1,05 x - 0,94; y = výsledek získaný s roztokem určeným pro počítání trombocytů podle vynálezu; x = výsledek získaný za použití přípravku THR0MB0FIXR, viz obr. 2.
Je možno zjistit, že počet trombocytů získaný s roztokem činidla podle vynálezu, je asi o 5 % vyšší než počet trombocytů, který byl zjištěn ze stejného vzorku za použití přípravku THR0MB0FIXR.
Vzhledem k charakteru stanovení nepřichází naměření vyšších hodnot v úvahu. Získaný rozdíl je možno připsat na vrub skutečnosti, že složka barviva roztoku činidla podle vynálezu má ke kyselým skupinám makromolekul trombocytů podstatně vyšší afinitu a tím má obraz výraznější kontrasty a může se lépe postřehnout. Za použití roztoku činidla podle vynálezu je možno rovněž eliminovat nižší hodnoty, systematicky dosahované při používání známých roztoků barviv.
p
Nutno uvést, že při použití přípravku THROMBOFIX se i při práci s mikroskopem s fázovým kontrastem dosahuje podobně nižších výsledků oproti výsledkům skutečným.
Při počítání leukocytů vykazuje metoda podle vynálezu s Turkeho roztokem korelaci r = 0,959. Vztah lze vyjádřit lineární funkcí y = 0,97 x + 0,23. To ukazuje na skutečnost,
CS 274 409 B2 že mezi oběma postupy neexistuje statisticky významnější rozdíl.
Další podrobnosti výroby a použití roztoku činidla podle vynálezu jsou obsaženy v následujících příkladech. Uvedené příklady však rozsah vynálezu v žádném směru neomezují·
Účinnost činidla podle vynálezu je znázorněna pomocí výkresů, kde na obr. 1 číselné údaje uvedené na ose pořadnic znamenají údaje počtu buněk v G/1; na ose pořadnic se uvádějí odchylky, které odpovídají dvojnásobku hodnoty standardní odchylky (+2 SD, popř. -2 SD) a trojnásobku hodnoty standardní odchylky (+3 SD, popř. -3 SD), na obr. 2 na ose pořadnic se udává počet trombocytů (G/1) zjištěný pomocí roztoku k počítání podle vynálezu; na ose úseček se udává počet trombocytů (G/1) zjištěný pomocí známého srovnávacího přípravku THROMBOFIX^, obr. 3 znázorňuje hodnoty získané z 20 paralelních měření při počítání leukocytů, přičemž číselné údaje uvedené na ose pořadnic označují počet buněk v G/1; CV znamená variační koeficient, SD standardní odchylku a x označuje průměrnou hodnotu, na obr. 4 na ose pořadnic se udává počet leukocytů (G/1) zjištěný pomocí roztoku k počítání podle vynálezu; na ose úseček se udává počet leukocytů (G/1) zjištěný pomocí Tiirkeho roztoku.
Příklad 1
Roztok pro počítání
200 ml 0,9% roztoku chloridu sodného připraveného za použití destilované vody se smísí s 5 ml 35% formaldehydu a se 770 ml deionizované destilované vody. Po intenzivním promíchání se v roztoku rozpustí 100 mg toluidinové modři jako barviva. Získaný roztok se filtruje přes skleněný filtr G-4. Po přidání 25 ml acetonu musí zůstat roztok čirý a prostý částic.
Příklad 2
Stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů v žilní krvi upravené antikoagulačním prostředkem
Krev se účelně upraví ethylendiamintetraoctovou kyselinou jako antikoagulačním prostředkem, nebot v přítomnosti ethylendiamintetraoctové kyseliny nedochází ani k minimálnímu vylučování trombocytů.. Po odběru krve se pomocí ethylendiamintetraoctové kyseliny upraví koncentrace ethylendiamintetraoctové kyseliny předchozím prikapáním vodného základního roztoku dinatriumethylendiamintetraoctové kyseliny ve zkumavkách z plastické hmoty na 2 mg/ml. Srážení krve lze rovněž zamezit použitím 3,3% roztoku trinatriumcitrátu v destilované vodě. Při odběru krve v kanyle z plastické hmoty činí poměr 9 dílů krve ku 1 dílu citrátu.
Provádění postupu:
K 25 /Ji venozní krve upravené prostředkem zabraňujícím srážení se ve zkumavce z plastické hmoty přidá 475 yjl počítacího roztoku a směs se ponechá bez míchání v klidu 15 minut při teplotě místnosti. Počítání trombocytů a leukocytů se musí provést během 6 hodin. Před počítáním se roztok znovu promíchá, nakape se do Burkerovy komůrky a ve vlhké komůrce se nechá sedimentovat 10 minut.
a) Počítání trombocytů
Součet počtu trombocytů napočítaný v 10 obdélnících Burkerovy komůrky se násobí 2 (při použití ethylendiamintetraoctové kyseliny k zabránění srážení), popřípadě 2,2 (při použití citrátu k zabránění srážení). Počet trombocytů se získá v G/1.
b) Počítání leukocytů
Počet leukocytů, zjištěný ve čtyřech, třemi čarami vymezených čtvercích, se dělí 18 (nebo se násobí 0,055) v případě použití citrátu k zabránění srážení, popřípadě se dělí 20 (nebo násobí 0,05), v případě použiti ethylendiamintetraoctové kyseliny jako prostředku
CS 274 409 B2 k zamezení srážení. Počet leukocytů se získá v G/l.
Příklad 3
Stanovení počtu trombocytů a počtu leukocytů z kapilární krve
Dezinfikovaná špička prstu nebo pata se napíchne, první kapka krve se otře a potom se do pipety nasaje 25 /jl krve pomocí střičky z plastické hmoty (typ: například Finnpipette, Gilson nebo Eppendorf atd.). Toto množství krve se odměří do zkumavky z plastické hmoty, která obsahuje 25/jI roztoku ethylendiamintetraoctové kyseliny o koncentraci 2 mg/ml. Poté se dobře promísí s antikoagulačním prostředkem. Po přidání 450 /Jl počítacího roztoku a po důkladném protřepáni se roztok ponechá v klidu při teplotě místnosti alespoň 15 minut a po opětovném promíchání se nakape do Burkerovy komůrky a ve vlhké komůrce se ponechá 10 minut sedimentovat,
Počet trombocytů a počet leukocytů se určuje podobným způsobem jako v případě krve upravené prostředkem proti srážení. Při stanovení počtu trombocytů činí faktor, kterým se násobí, 2. Při počítání leukocytů se musí získaná hodnota dělit 20.
Příklad 4
Postupuje se jako v příkladu 1 s tím rozdílem, že se místo formaldehydu použije 80 g 25¾ glutaraldehydu.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUČinidlo k současnému stanovení počtu trombocytů a leukocytů normální mikroskopickou cestou za použití světelného mikroskopu, vyznačující se tím, že obsahuje 0,1 až 5 dílů hmot. acetonu, 0,05 až 2,0 dílu hmot. formaldehydu a/nebo glutaraldehydu, 0,001 až 0,1 dílu hmot. thiazinového barviva, například toluidinové modři, 0,1 až 2,0 dílu hmot. minerální soli, například chloridu sodného a do 100 dílů hmot. vody.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU833060A HU186309B (en) | 1983-09-02 | 1983-09-02 | Reagent for determining the thrombacyta and leucocyte number |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS658184A2 CS658184A2 (en) | 1990-09-12 |
| CS274409B2 true CS274409B2 (en) | 1991-04-11 |
Family
ID=10962336
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS658184A CS274409B2 (en) | 1983-09-02 | 1984-08-31 | Agent for simultaneous determination of thrombocytes and leucocytes number |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | AT390844B (cs) |
| BE (1) | BE900439A (cs) |
| CH (1) | CH665030A5 (cs) |
| CS (1) | CS274409B2 (cs) |
| DD (1) | DD232557A5 (cs) |
| DE (1) | DE3432351A1 (cs) |
| FI (1) | FI77938C (cs) |
| FR (1) | FR2551551B1 (cs) |
| HU (1) | HU186309B (cs) |
| IN (1) | IN162894B (cs) |
| LU (1) | LU85526A1 (cs) |
| NL (1) | NL8402670A (cs) |
| PL (1) | PL142043B1 (cs) |
| SE (1) | SE455235B (cs) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2685482B1 (fr) * | 1991-12-24 | 1994-07-29 | Melet Francois | Procede de numeration des hematies ou des thrombocytes et dispositif de mise en óoeuvre. |
| ES2634715T3 (es) * | 2011-12-30 | 2017-09-28 | Abbott Point Of Care, Inc | Método y aparato para la identificación automatizada de plaquetas en una muestra de sangre completa a partir de imágenes de microscopio |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3916205A (en) * | 1973-05-31 | 1975-10-28 | Block Engineering | Differential counting of leukocytes and other cells |
| CH613523A5 (en) * | 1975-06-27 | 1979-09-28 | Inst Nat Sante Rech Med | Method for displaying basophils |
| US4290769A (en) * | 1980-10-14 | 1981-09-22 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilized Romanowsky stain solution |
| US4392864A (en) * | 1982-02-01 | 1983-07-12 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilized Romanowsky stain solution |
-
1983
- 1983-09-02 HU HU833060A patent/HU186309B/hu not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-08-27 CH CH4076/84A patent/CH665030A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-28 BE BE1/11080A patent/BE900439A/fr not_active IP Right Cessation
- 1984-08-30 FR FR8413421A patent/FR2551551B1/fr not_active Expired
- 1984-08-31 AT AT0279984A patent/AT390844B/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 FI FI843429A patent/FI77938C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 SE SE8404355A patent/SE455235B/sv not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 NL NL8402670A patent/NL8402670A/nl not_active Application Discontinuation
- 1984-08-31 PL PL1984249427A patent/PL142043B1/pl unknown
- 1984-08-31 DD DD84266855A patent/DD232557A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-08-31 LU LU85526A patent/LU85526A1/fr unknown
- 1984-08-31 CS CS658184A patent/CS274409B2/cs unknown
- 1984-09-03 DE DE19843432351 patent/DE3432351A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-02-18 IN IN135/DEL/85A patent/IN162894B/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATA279984A (de) | 1989-12-15 |
| LU85526A1 (fr) | 1986-03-11 |
| FI843429A0 (fi) | 1984-08-31 |
| FR2551551A1 (fr) | 1985-03-08 |
| CS658184A2 (en) | 1990-09-12 |
| IN162894B (cs) | 1988-07-16 |
| PL249427A1 (en) | 1985-07-30 |
| FI77938C (fi) | 1989-05-10 |
| SE8404355L (sv) | 1985-03-03 |
| SE455235B (sv) | 1988-06-27 |
| FI843429L (fi) | 1985-03-03 |
| FR2551551B1 (fr) | 1987-04-24 |
| DE3432351A1 (de) | 1985-03-21 |
| HU186309B (en) | 1985-07-29 |
| DD232557A5 (de) | 1986-01-29 |
| AT390844B (de) | 1990-07-10 |
| PL142043B1 (en) | 1987-09-30 |
| FI77938B (fi) | 1989-01-31 |
| BE900439A (fr) | 1985-02-28 |
| SE8404355D0 (sv) | 1984-08-31 |
| NL8402670A (nl) | 1985-04-01 |
| CH665030A5 (de) | 1988-04-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR920010294B1 (ko) | 백혈구의 3개의 모 집단에 대한 혈액학 콘트롤 조성물 · 및 그 조제방법과 전혈액 조절체계에 있어서의 사용방법 | |
| CA1075608A (en) | Saccharide and formaldehyde containing lysable blood preservative composition | |
| US6664110B1 (en) | Erythroblast diagnostic flow-cytometry method and reagents | |
| US6509192B1 (en) | Quality control method | |
| CA2367780A1 (en) | Single channel, single dilution detection method | |
| JP3523883B2 (ja) | 血液検査の実施方法 | |
| JP2005233935A (ja) | 網状赤血球及び有核赤血球の血液学的対照品 | |
| WO1996034291A1 (en) | Quality control method of hematology instruments | |
| US5945340A (en) | Reticulocyte assay control | |
| JP3759512B2 (ja) | 脳脊髄液などの体液試料をアッセイするための自動法およびそのための試薬 | |
| Brittin et al. | Automated optical counting of blood platelets | |
| US6444471B1 (en) | Reticulocyte containing complete blood control | |
| Maxie et al. | A comparative study of the diseases in cattle caused by Theileria parva or T. Lawrencei: II. Hematology, clinical chemistry, coagulation studies and complement | |
| CS274409B2 (en) | Agent for simultaneous determination of thrombocytes and leucocytes number | |
| Connolly et al. | Potential sources of errors in cation-exchange chromatographic measurement of plasma taurine. | |
| Lewis et al. | Platelet counting‐development of a reference method and a reference preparation | |
| Solanki et al. | Spurious red blood cell parameters due to serum cold agglutinins: Observations on Ortho ELT-8® Cell Counter | |
| Kubiak et al. | The diagnostic pitfalls and challenges associated with basic hematological tests | |
| Davies et al. | Automated reticulocyte counting: evaluation of the Coulter® STKS Haematology Analyser reticulocyte counting function | |
| Stamminger et al. | Use of the XE-2100 in a Patient with Cold Auto-immune Hemolytic Anemia | |
| CN112639467A (zh) | 血小板模拟粒子及其制备方法以及含该模拟粒子的质控物或校准物 | |
| Årrsberg et al. | Evaluation of dipsticks for the assessment of microhaematuria | |
| CN118243911A (zh) | 一种尿液理学多参数复合质控物及制备方法 | |
| CN1254094A (zh) | 血液分析仪用溶血剂 | |
| Moore et al. | Correction For the Effects of Cold Agglutinins on Ortho ELT-8 Results |