CS272959B1 - Method of medium antigen preparation for poultry's mark's disease diagnostics by means of precipitation test - Google Patents
Method of medium antigen preparation for poultry's mark's disease diagnostics by means of precipitation test Download PDFInfo
- Publication number
- CS272959B1 CS272959B1 CS971286A CS971286A CS272959B1 CS 272959 B1 CS272959 B1 CS 272959B1 CS 971286 A CS971286 A CS 971286A CS 971286 A CS971286 A CS 971286A CS 272959 B1 CS272959 B1 CS 272959B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- medium
- antigen
- mark
- suspension
- disease
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 35
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 35
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 244000144977 poultry Species 0.000 title claims abstract description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 25
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 10
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims abstract 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 6
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 claims description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 claims 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 claims 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 claims 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 abstract description 5
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 abstract description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 abstract description 4
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 abstract 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 abstract 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 208000030289 Lymphoproliferative disease Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
I
CS 272 959 BI
Vynález sa týká sposobu přípravy médiového antigénu na diagnostiku Markovej choro-by hydiny precipitačným testom.
Markova choroba hydiny je virusové lymfoproliferatívne ochorenie kury domácej, cha-rakterizované výskytom nádorov vo viscerálnych orgánoch, svalovine, koži, 3alej lymfoid-nými infiltráciami v periférnych nervoch a vysokou mortalitou, ktorá niekedy dosahuje až50 najčastejšie 10 až 20 %.
Kultivačně médium a buňky z kultúr infikovaných vírusom Markovéj choroby obsahujúspecifické antigény označené A, B, C, dokázatel'né precipitačným testom v agarovom géli. V kultivačnom médiu je přítomný najma A antigén, ktorý sa používá na dokaž precipitač-ných protilátok proti virusu Markovej choroby v krvi, ako následok přítomnosti infekciev chove. Okrem toho sa A antigén tvoří aj v buňkách epítelu peřových folikulov kurčiatinfikovaných vírusom Markovej choroby. Na přípravu A antigénu pre diagnostické účely savyužívajú najčastejšie dva sposoby s použitím virulentného virusu Markovej choroby: 1. Antigén sa získává z kultivačného média buňkových kultúr infikovaných virulent-ným vírusom Markovej choroby. 2. Na přípravu antigénu sa používajú koncové časti peria alebo koža zvierat infiko-vaných virulentným vírusom Markovej choroby.
Uvedené postupy majú následovně nevýhody. Pri prvom sposobe přípravy virulentný vi-rus pasážovaním v buňkových kultúrach mění svoje vlastnosti tak, že postupné strácaschopností tvorby A antigénu. Při získávání antigénu z koze infikovaných zvierat - tietosú trvalým zdrojom nákazy šířením infekcie do prostredia - čo je nežiadúce z hfadiskatlmenia ophorenia v populácii kury domácej. Okrem toho, antigén připravený z kože obsa-huje mnoho nedefinovaných zložiek a vyžaduje Salši čistenie.
Podlá navrhovaného postupu médiový antigén sa připravuje v buňkových kultúrachz kuřácích alebo kačacích embryonálnych buniek infikovaných apatogénnym vírusom Marko-vej choroby označeným MDV-KOL-A, uloženým v zbierke výrobných kmeňov národného podnikuBioveta v Nitře pod číslom BN-MDV-06-1985. Uvedený virus bol izolovaný z chovu hydinybez zjevných klinických príznakov ochorenia, V buňkových kultúrach sa vel'mi dobré množíbez predchádzajúcej adaptácie. Tvorba antigénu do kultivačného média je stabilně aj popřekonaní 25 sériových pasáží. Sposob přípravy médiového antigénu na diagnostiku Marko-vej choroby hydiny je založený na tom, že kmen MDV-KOL-A virusu Markovej choroby, ktorýje neškodný pre kuru domácu, sa pomnožuje na primárných alebo sekundárných kultúrachkuřácích alebo kačacích embryonálnych buniek narastených na skle, plastickéj hmotě, kul-tivovaných štacionárnym sposobom alebo v otáčaných ffašiach, připadne na mikronosičoch.
Na kultiváciu buniek pre produkciu médiového antigénu sa použijú vhodné živné médiá obo-hatené o kultivačně sérum. Buňkové kultúry sa infikujú vírusom Markovej choroby, ktorýje viazaný na živé buňky. To znamená, že inokulum představuje suspenzia živých buniek,ktoré obsahujú pomnožený produkčný virus. Infikujú sa 24 až 48hodínové kultúry bunieknarastené na kultivačnom povrchu tak, že suspenzia infikovaných buniek sa přidá do ras-tového média. Rovnako je možné suspenziu infikovaných buniek pridať do suspenzie buniekv rastovom médiu a súčasne naliatí do kultivačnej nádoby. Virus sa pomnožuje v bunkovejkultúre a v jednovrstvé buniek vyvolává viditelné změny - rozpad buniek. Tieto změny akpostihnu viac ako polovicu buniek, kultivačně médium sa zleje a vyčíri nízkoobrátkovoucentrifugáciou. Antigén sa připraví vyzrážaním po přidaní krystalického síranu amonného do média pri chladničkovej teplote. Precipitát sa zahustí nízkoobrátkovou centrifugácioua následné dialyzuje proti fosforečnanmi tlmenému fyziologickému roztoku chloridu sodné-ho. Získaný antigén po dialýze sa upraví tak, aby výsledná koncentrácia dosiahla 25 ažlOOnásobok povodného objemu. Antigén sa skladuje pri teplotách nižších ako O °C krátko-dobo, ale je možné ho aj lyofilízovatí po rozplnení do ampuliek. Výhodou uvedeného postupu přípravy médiového antigénu je, že sa používá namiestovirulentného prirodzene apatogénny virus Markovej choroby, ktorý aj po sériovom pasážo- c CS 272 959 Bl 2 vání v buňkových kultúrach si zachovává schopností produkcie médiového antigénu. Ďalej,že na přípravu antigénu nie je potřebné používatí živé zvieratá infikované virulentnýmvírusom Markovej choroby, ktoré sú potom trvalým zdrojom infekcie pre spoluumiestnenévnímavé zvieratá, čo má význam najma z hřadiska tlmenia nákazy. Příprava antigénu z ko-ze a z koncových častí peria je sice nenáročná, ale jednoduchým postupom sa nedosiahnetaká čistota antigénu ako pri přípravě z buňkových kultúr.
Uvedené příklady predmet vynálezu nijako neobmedzujú, ani nevyčerpávajú: 1. Sposob kultivácie:
Suspenzia buniek, připravená pomocou proteolytických fermentov z lldňových kuřá-cích resp. 13dňových kačacích zárodkov v rastovom médiu s definovaným množstvom solí,aminokyselin a vitamínov s prídavkom 5 % hmot séra určeného pre tkanivové kultúry sakultivuje na skle, plastickej hmotě, štacionárnym sposobom alebo v otáčaných ftíašiach,připadne v suspenzii na mikronosičoch. 2. Sposob infekcie buňkových kultúr produkčným vírusom:
Inokulum představuje suspenzia živých buniek infikovaných produkčným vírusom, kto-ré sa přidávájú do kultivačněj nádoby s buňkami v pomere 1:3 až 1:6 (suspenzia buniekz jednej kultivačněj nádoby sa přidává do 3 až 6 nádob s buňkami). Buňkové kultúry při-pravené a pěstované podtía bodu 1 sa infikujú produkčným vírusom nasledovnými spSsobmi: a. Infekcia narastenej jednovrstvý buniek:
Do rastového média 24 až 48hodinovej kultúry buniek sa přidá inokulum a buňkové kultúrysa Sálej inkubujú bez výměny média pri teplote 38 °C počas 72 až 120 hodin. b. Buňková suspenzia v rastovom médiu s hustotou asi 10^.ml-·'- buniek sa zmieša s inokulom buniek infikovaných produkčným vírusom a súčasne vleje do kultivačnej nádo-by. Kultivácia sa robí pri 38 °C počas 72 až 120 hodin. 3. Zber média, ktoré obsahuje antigén: 24 připadne 48 hodin po infekcii je možné povodně rastové médium vyměnit za médiumrovnakého zloženia, ale so zníženým obsahom (0,5 až 1,0 % hmot.) kultivačného séra. Vi-rus sa pomnožuje v bunkovej kultúre tak, že dochádza počas 72 až 120 hodin k rozsiahle-mu rozpadu buniek a tým k uvďňovaniu A antigénu do média. Ak změny postihujú viac ako50 % jednovrstvý buniek, médium sa zleje a egalizuje zo všetkých kultivačných nádob. 4. Izolácia médiového antigénu:
Egalizované médium sa vyčíri nízkoobrátkovou centrifugáciou. Vyčírené médium sazleje a za stálého miešania sa přidává krystalický síran amonný v množstve 30 g na100 ml média. Miešanie pri laboratórnej teplote sa robí až do rozpustenia celého množ-stva síranu. Precipitácia antigénu z média potom Sálej pokračuje pri teplote 2 až 8 °Cpočas 24 až 72 hodin. Precipitát od média sa oddělí nízkoobrátkovou centrifugáciou adialýzou sa zbaví síranov. Dialýza proti fosforečnanmi tlmenému fyziologickému roztokuchloridu sodného sa robí tak, že precipitát sa nerozpúšťa, ale priamo vkládá do dia-lyzačnej hadice, čím sa dosiahne po dialýze dostatočná koncentrácia - 25 až lOOnásobokpóvodného objemu. Ďalšiu koncentráciu je možné dosiahnuť lyofilizáciou s tým, že lyofi-lizát sa rozpúšťa v menšom množstve destilovanej vody, ako bolo povodně množstvo anti-génu před lyofilizáciou.
Claims (5)
- CS 272 959 B1 PŘED MET VYNÁLEZU1. Sposob přípravy médiového antigénu na diagnostiku Markovej choroby hydiny precipitač-ným testom, vyznačujúci sa tým, že apatogénny virus Markovej choroby kmen MDV-KOL-Auložený ve zbierke výv. kmenů n. p. Bioveta Nitra pod č. BN-MDV-G6-1985, adaptovanýna buňkové kultúry sa pomnožuje na primárných alebo sekundárných buňkových kultúrachpřipravených z kuřácích alebo kačacích embryí v rastovom médiu s definovaným množ-stvom solí, aminokyselin a vitamínov obohatenom o bovinné sérum v množstve 0,5 až 10 % hmot, pri teplote 37 až 39 °C po dobu 72 až 120 hodin, médium s antigénom sazleje, vyčíri centrifugácíou a precipituje síranom amonným, dialyzuje a uchováváv tekutom alebo lyofilizovanom stave.
- 2. Sposob podl'a bodu 1, vyznačujúci sa tým, že na přípravu sa použijú buňky z 10 až li-ánových kuřácích alebo 12 až 13dňových kaSacích embryí, narastených na skle, plas-tickej hmotě, kultivovaných štacionárnym spSsobom alebo v otáčaných fiašiach případnév suspenzi! na mikronosičoch.
- 3. Sposob podía bodov 1 a 2, vyznačujúci sa tým, že do produkčných buňkových kultúr sainokuluje suspenzia živých buniek infikovaných produkčným virusovým kmeňom, ktorá sapřidává v pomere 1:3 až 1:6 do rastového média v kultivačnej nádobě s narastenýmibuňkami, alebo suspenzia neinfikovaných buniek v rastovom médiu s hustotou 400 000až 800 000 v jednom mililitri sa zmieša so suspenziou infikovaných buniek a vleje dokultivačnej nádoby.
- 4. Spísob pódia bodov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že za 24 až 48 hodin po infekci! sarastové médium vymění za médium rovnakého zloženia, ale so zníženým obsahom bovinné-ho séra na 0,5 až 1,0 % hmot.
- 5. Sposob půdia bodov 1 až 4, vyznačujúci sa tým, že médium s antigénom sa vyčíri nízko-obrátkovou centrifugácíou a za stálého miešania pri laboratórnej teplote sa přidávákrystalický síran amonný v množstve 30 g na 100 ml, po jeho rozpuštění precipitáciaantigénu pokračuje pri teplote 2 až 8 °C počas 24 až 72 hodin, precipitát od média sa oddělí nízkoobrátkovou centrifugácíou, dialyzuje proti fosforečnanmi tlmenému fy-ziologickému roztoku chloridu sodného; uchovává sa v zmrazenom alebo lyofilizovanomstave.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS971286A CS272959B1 (en) | 1986-12-22 | 1986-12-22 | Method of medium antigen preparation for poultry's mark's disease diagnostics by means of precipitation test |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS971286A CS272959B1 (en) | 1986-12-22 | 1986-12-22 | Method of medium antigen preparation for poultry's mark's disease diagnostics by means of precipitation test |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS971286A1 CS971286A1 (en) | 1990-07-12 |
| CS272959B1 true CS272959B1 (en) | 1991-02-12 |
Family
ID=5446185
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS971286A CS272959B1 (en) | 1986-12-22 | 1986-12-22 | Method of medium antigen preparation for poultry's mark's disease diagnostics by means of precipitation test |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS272959B1 (cs) |
-
1986
- 1986-12-22 CS CS971286A patent/CS272959B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS971286A1 (en) | 1990-07-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Huebner et al. | Specific complement-fixing viral antigens in hamster and guinea pig tumors induced by the Schmidt-Ruppin strain of avian sarcoma | |
| US4071618A (en) | Process for preparing virus disease live vaccines | |
| KR0156732B1 (ko) | 연속 셀 라인에서의 ibdv 생성 | |
| Eddy | Polyomavirus | |
| Waterson | Measles virus | |
| Guneratne et al. | Some observations on the isolation and cultivation of avian reoviruses | |
| Schechtman | Uptake and transfer of macromolecules by cells with special reference to growth and development | |
| CA1093995A (en) | Rapid propagation of sv3t3 cells for production of mif and taf | |
| Philipson et al. | Recovery of a cytopathogenic agent from patients with non-diphtheritic croup and from day-nursery children. I. Properties of the agent | |
| CA1092038A (en) | Diploid porcine embryonic cell strains, cultures produced therefrom and use of said cultures for production of vaccines | |
| EP0011864B1 (en) | Attenuated strain of feline infectious peritonitis virus, method for preparing it and vaccine comprising it | |
| Hafiz | Clostridium difficile and its toxins | |
| Calnek et al. | Some characteristics of cell-free preparations of Marek's disease virus | |
| Baldwin et al. | Tuberculosis, Bacteriology, Pathology and Laboratory Diagnosis: With Sections on Immunology, Epidemiology, Prophylaxis and Experimental Therapy | |
| CN110747176B (zh) | 一种提高猪流行性腹泻病毒毒价的培养方法 | |
| US4169761A (en) | Process for the cultivation of viruses | |
| US3585266A (en) | Live rabies virus vaccine and method for the production thereof | |
| Parry et al. | Evidence for a bovine origin of the polyomaviurs detected in foetal rhesus monkey kidney cells, FRhK-4 and-6 | |
| US3625833A (en) | Process for producing antiviral substance from staphylococcus organisms | |
| CS272959B1 (en) | Method of medium antigen preparation for poultry's mark's disease diagnostics by means of precipitation test | |
| US3470294A (en) | Vaccine for immunization of dogs and foxes against distemper,hepatitis contagiosa and leptospirosis and process for preparing it | |
| SU997599A3 (ru) | Способ получени гетеровакцины дл лечени синдрома трихомонада | |
| US3098011A (en) | Process of producing a vaccine against distemper | |
| US2513327A (en) | Treponema pallidum culture and products thereof | |
| JPS62500001A (ja) | 細胞増殖 |