CS270119B1 - Method of immunoglobulines insulation from plasmatic materials - Google Patents

Description

CS 270 119 Bl 1

Vynález sa týká spdsobu Izoláole imunoglobulínov z materlálov vznlkajúcich pri spra-covaní ludskej plazmy a to tým spósobom, Se za vhodných podmienok pH a koncentrácie bielko-vín pomocou bentonitu sa vyprecipitujú vysokomolekulárne balastné blelkoviny a imunoglobu-líny s častou dalších plazmatlckých bielkovin ostávajú v roztoku. Roztok obsahujúci v pre-vážnej miere lmunoglobulíny sa potom purifikuje pomocou chloroformu a koncentruje bežne po-užívanými technologickými postupami.

Pri frakcionácii a epraeovaní ludskej plazmy sú izolovaná plazmatická bielkovinnámateriály obsahujúce lmunoglobulíny. V súčasnom období tieto sú oddělované a dalej puriíiko-vané nízkochladovou etanolovou frakcionáciou (Cohn E.J.JStrong b.E., Hughes W.L., Mulford D.J.;Ashworth J., Melin M., Taylor H.L.i J. Amer. Cherii. Soc., 68, 459, 1946; Hořejší J.; Cas. lék.českých, 39, 1067, 1953; Nitschmann H., Kistler P., Lergie W. i Helv. Chim. Acta, 37, 866, 1954). Nevýhodou týchto technologických postupov je vysoká spotřeba energií, práca za staže-ných podmienok v chladenýcb priestoroch,rozptyl izolovanej blelkoviny do dalších frakcli akonečne aj znížená kvalita hotového přípravku.

Frakcionácia rivanolom (HořejSÍ J., Smetana R.i Chem. listy, 48, 758, 1954; Škvařil F.iCsl. farmácia, 9, 522, 1957; Salfer A., Lipkin L.E.i Proč. soc. exp. Biol. Med.,102, 1, 220 - 222, 1959; Rejnek J., Bednařík T., Mašek J.: Cel. farmácia, 10, 407, 1961; .Steinbuch M: Vox. Sanguinis 23, 91 - 106, 1972) je sice žetrnejžia a teoreticky bola by ajrealizovatelná, avSak pre velké objemy a problémy pri odstráňovaní farbiva je uvedená meto-da v priemyselných podmienkach tažko zvládnutelná,

Aj dalšie frakcionačné postupy izolácie imunoglobulínov ako aj napr. frakcionácia po-lyethylenglykolom (Falksveden l.i Patent Švédsko,348 - 942, 1972; Polson A., Ruiz Bravo C.iVox. Sanguinis 23, 107 - 118, 1972), popřípadě frakcionácia kovmi (Cohn E.J.t et. al . iJ. Am. Chem. Soc., 72, 465 - 474, 1950; Rejnek J,, Škvařil F.t Chem.'listy 51, 6, 1190 -- 1193, 1957) v priemyselnom měřítku prináiajú určité problémy, hlavně čo do dlžky a členi-tosti technologických postupov, nevynimajúc ani prácne odstránenie reaktívnyoh elementov.

Oproti vySSie uvedeným navrhnutý technologický postup izolácie imunoglobulínov z ma-teriálov vznlkajúcich pri frakcionácii ludskej plazmy vyznačuje sa jednoduchostou, technic-kou nenáročnostou, nízkou spotřebou energií a malými finančnými nákladami na příslušné su-roviny. Prispieva k realizácii bezodpadových technologií,k zhodnocovaniu východzích surovinludskej plazmy a k zabezpečeniu zdravotnického terénu potřebnými liečebniými přípravkami.

Podstata izolácie imunoglobulínov z materlálov vznlkajúcich pri frakcionácii ludskejplazmy spočívá v tom, že frakcia obsahujúca lmunoglobulíny sa suspenduje v apyrogénnej voděna obsah 3 až 5 hmotnostných % bielkovin. Pri hodnotě pH 5,0 až 5,1 a téplote +4 až +10 °Cza stálého miešania sa k roztoku přidává 0,1 až 0,5 hmotnostných % bentonitu. Po dokonalejhomogenizácii roztoku sa vyprecipitujú vysokomolekulárne balastné blelkoviny, ktoré sa odsupernátantu oddelujú centrifugáciou. Supernatant obsahujúoi lmunoglobulíny a dalžie sprie-vodné plazmatická blelkoviny sa filtruje a pH roztoku sa upraví na hodnotu 5,5 až 5,9 a zaúčelom purifikicie sa přidává chloroform v konoentrácii 2 až 6 objemových % přepočítané navýchodzie množstvo frakoie obsahujúcej lmunoglobulíny. Vypreoipitované blelkoviny sa odroztoku imunoglobulínov oddelujú' centrifugáciou. Supernatant sa filtruje cez čeriace vložkya přítomné lmunoglobulíny sa koncentrujú a do konečnej formy sa spracujý bežne používanýmitechnologickými 'postupami. i Výhodou uvedeného technologického postupu izolácie imunoglobulínov je aj to, že sazíská prípravok,ktorý mimo imunoglobulínov triedy IgG obsahuje vyššiu koncentráciu imuno-globulínov dalších tried, najma IgA a IgM. Předpokládá sa, že tieto kvalitativně změny bu-dú mat pre liečebnú prax svoj význam, řre overenie navrhovaného technologického postupu izo-lácie imunoglobulínov boli převedené pokusy z odpadnej frakcie I + III.

Claims (1)

1. 2 CS 270 119 B1 Příklad 1 2 000 g frakcie I + III aa suspenduje v 10 000 ml apyrogénnej vody, pH roztoku sa upraví0,5M NaOH na hodnotu 5,05 - 0,04 a potom sa k roztoku za stálého mieSania přidává 14 gbentonitu. Po dokonalej homogenizácii sa balastné bielkoviny precipitujú po dobu 10 ho-dín:a separujú centrifugáciou. pH supernatantu sa upraví 0,5M NaOH na hodnotu 5,6 ± 0,1 a za stálého mieSania sa přidá chloroform v množstve 90 ml. Po 2 hodinách homogenizáciea 2 hodinách precipitácie vyzrážaný sediment sa oddělí centrifugáciou. Supernatant safiltruje cez čeriace vložky a vrstvu kremeliny. Filtrát sa dalej koncentruje bežne použí-vanými technologickými operáciami. Příklad 2 3 000 g frakcie I + III sa suspenduje v 18 000 ml apyrogénnej vody pH roztoku sa upraví 1 J. 0,5M NaOH na hodnotu 5,07 - 0,03 a potom sa k roztoku za stálého mieSania přidává 30 gbentonitu. Po dokonalej homogenizácii sa balastné bielkoviny precipitujú po dobu 12 hodin 8 a separujú centrifugáciou. pH supernatantu sa upraví 0,5M NaOH na hodnotu 5,7 í 0,1 a za stálého mieSania sa přidá chloroform v množstve 150 ml. Po 2 hodinách homogenizácie a2 hodinách precipitácie vyzrážaný sediment sa oddělí centrifugáciou. Supernatant sa fil-truje cez čeriace vložky a vrstvu kremeliny. Filtrát sa dalej koncentruje bežne používa-nými technologickými operáciami. Porovnanie niektorých kvalitatívnych parametrov přípravku prípravok antikomplem.aktivita vj/mg bielk. obsah IgGmg/ml obsah IgAmg/ml obsah IgGmg/ml Komerčný imuno-glob. Norga nad 10 45,5 2,77 0,51 Komerčný imuno-glob. Ivega 0,8 51,77 2,74 0,66 Imunoglobulínpodlá vynálezu 0,9 34,66 9,61 .3,78 Z uvedenej tabulky a porovnania niektorých kvalitatívnych kritérii imunoglobulínov izo-lovaných z ludskej plazmy a to komerčně připravovaných imunoglobulínov Norga, Ivega aimunoglobulínov izolovaných podlá vynálezu je vidiet, že antikomplementárna aktivita uimunoglobulínov izolovaných podlá vynálezu je viac ako desatnásobne nižšia ako u komerč-ně připravovaného imunoglobulínu "Norga" a přibližuje sa k hodnotám stanoveným u imuno-globulínu pre i. v. aplikáciu "Ivega". Obsahové zastupenie jednotlivých tried imunoglo-bulínov u imunoglobulínu izolovaného podlá vynálezu sa posúva v prospěch imunogloblínovtriedy IgA a IgM> čím sa zvySuje kvalita přípravku rozšířením palety titru protilátok.Nižšie hodnoty imunoglobulínov triedy IgG sú zdávodnené převedenou dvojnásobnou extrak-ciou týchto z frakcie I + III. PREDMET VYNÁLEZU Spásob izolácie imunoglobulínov z plazmatických materiálov vznikájúcich pri frakcionáciiludskej plazmy.vyznačujúci sa tým, že k roztbku frakcie obsahujúcej imunoglobulíny o ( koncentrácii 3 až 5 hmotnostných % bielkovín, pri pH 5,0 až 5,1 sa přidává 0,1 až 0,5 hmot nostných % bentonitu, čím sa balastné bielkoviny vyprecipitujú, separáciou oddelujú a imu-noglobulíny obsiahnuté v supernatante sa purifikujú chloroformom ó koncentrácii 2 až 6 * objemových %, pri pH 5,5 až 5,9. 1 i