CS269252B1 - Způsob izolace a detekce škodlivých látek a metabolitú z biologických tekutin - Google Patents

Abstract

Řešení se týká způsobu izolace a detekce škodlivých látek a metabolitó z biologických tekutin. Podstata řešení spočívá v tom, že se biologická tekutina nechá protéci malou kolonkou o objemu^10 až 100 ml naplněnou sorbentem, přičemž ae škodlivé látky a metabolity z biologických tekutin naadsorbují na sorbentu, poté ee deaorbují například organickým rozpouštědlem a stanovují například chromatogreficky.

Description

Vynález se týká způsobu izolace a detekce škodlivých látek a metabolitú z biologických tekutin. .

V lékařství je řada situací, kdy diagnosa a způsob léčení, závisí na rozboru tělních tekutin a stanovení přítomnosti škodlivých látek v nich.

Standardní způsob kvalitativního i kvantitativního stanovení spočívá v odběru určitého množství tělní tekutiny - krve, plazmy, krevního séra, lymfy, moči a podobně a její následné analýze, které často musí předcházet odstranění bílkovin z tělní tekutiny. Tento způsob stenovení vyhovuje v těch případech, kdy je stanovovaná škodlivá látka přítomna v tělní tekutině v dostatečném množství. V některých případech, zejména v počátečních stadiích choroby, může být ale sledovaná látka přítomna ve velmi nízké koncentraci, pod nebo na hranici citlivosti stanovení. V těchto případech je nutno odebrat větší množství tělní tekutiny a tuto různým způsobem zahušťovat, aby bylo dosaženo detegovetelné koncentrace stanovované látky. U látek, které je nutno před analýzou extrahovat může být pracovní postup velmi zdlouhavý a obtížný. V těchto případech jak extrakce,tak i zahušťování mohou být zdrojem značných nepřesností při stanovení, zejména je-li nutno ještě odstranit z tělní tekutiny bílkoviny.

Podstata způsobu podle vynálezu spočívá v tom, že se biologická tekutina nechá protéci malou kolonou o objemu 10 až 100 ml naplněnou sorbentem, přičemž se škodlivé látky a metabolity z biologických tekutin naadsorbují na sorbentu,· potom se desorbují na příklad organickým rozpouštědlem a stanovují například chromatograficky. Kolonka zhotovená z polypropylenu, teflonu nebo jiného biokompatibilního materiálu musí mít takový objem, aby poskytovala dosti materiálu k analýze, ale nezatěžovala oběhově pacienta. 0ptimální objem kolonky je 10' až 100 ml.

Tvar kolonky může být různý. Jako kompromis mezi hemodynamiekými poměry v kolonce a množství zpracování materiálu byl zvolen válcový tvar těla kolonky. Koncovky pro připojení krevních setů mohou být ploché nebo konické. Prostor koncovky a těla kolonky je oddělen sítky. Uzavření kolonky koncovkami lze volit buď šroubem, nebo svarem. Šroubový uzávěr umožňuje otevření kolonky po použití, vyjmutí sorbentu a rozdělení pro extrakci na jednotlivá stanovení. Kolonka, jejíž koncovky jsou s tělem kolonky pevně spojeny svarem, zaručuje dlouhodobější sterilitu, desorpci je potom nutné provádět vhodně zvolenou směsí rozpouštědel a pro vlastní stanovení rozdělit získaný extrakt.

Kolonka je v případě stanovení látek v krvi umístěna v mimotělním krevním oběhu, popřípadě je zařazena za separator plazmy. Při stanovení látek v ostatních tělních tekutinách protéká tekutina kolonkou v otevřeném nebo uzavřeném systému. Výhodou způsobu stanovení podle vynálezu je to, že kolonkou může protéci daleko větší množství tělní teku tiny, než jaké by bylo možné odebrat* bez-nebezpečí pro pacienta. Tím se podstatně zvýší koncentrace stanovované škodlivé látky. Množství tělní tekutiny, která kolonkou proteče je díky známé rychlosti průtoku a známé době perfúze možno snadno stanovit. Množství rozpouštědla použité k desorpci je také známé,, takže lze koncentraci škodlivé látky zjistit s velmi dobrou přesností. Odpadá odstraňování bílkovin jako jedna z možností chyb stanovení i často nutná extrakce a zahušťování, což bývá druhým zdrojem nepřesností. Škodlivé látky se mohou rozpouštědly desorbovat jako směsi nebo postupně různými rozpouště dly. V obou případech ale lze příslušnými specifickými metodami stanovit více sledová ných látek z jedné kolonky.

Způsob stanovení škodlivých látek podle vynálezu může sloužit u metabolických a endokrinologických chorob ke stanovení stopových množství látek, například žlučových kyselin,· porfyrintú, hormonů, vitaminů, stopových prvků, cholesterolu, patologických metabolitů a podobně, které by se běžnými metodami stanovení nedaly díky jejich nízké končen traci v biologických tekutinách zjistit. U otrav léky a jinými exogenními látkami by kolonky plněné směsnými sorbenty mohly sloužit k rychlé orientaci o druhu požitých toxinú.

CS 269 252 B1

Vynález je popsán v příkladech provedení, aniž se na né omezuje*

Příklad 1 ’ g eorbentu atyren-d.ivinylbenzenové pryakyřice Amberlite XAD-2 a povrchem upraveným 1 hmot. % póly 2-hydroxyethyl methakrylátu z kolonky bylo eluováno methanolem. Methanol ický roztok byl odpařen v teflonovém kelímku a hydrolyzován 10% hydroxidem sodným 24 hodin za pokojové teploty. Vzniklé volné žlučové kyseliny byly eaterifikovány diazometanem a analytovány pomocí gelové chromatografie - GLC.

Příklad 2 g sorbentu styren-divinylbenzenové pryskyřice Amberlite XAD-2 z kolonky bylo extrahováno roztokem kyaeliny sírové v methanolu -1:9 τ/ν-2 hodiny při pokojové teplotě. Po zředění trojnásobným objemem vody byl extrakt vytřepán do chloroformu. Chloroformový extrakt byl použit k analýze typu přítomných porfyrinů vysokotlakovou kapelinovou chromatografií -HPDC- nebo chromatografií v tenké vrstvě - TLC.

Příklad 3 .

g vysušeného sorbentu styren-divinylbenzenové pryskyřice Amberlite XAD-2 s· povrchem upraveným 2 hmot. % pely 2-hydroxyethyl methakrylátu z kolonky bylo extrehováné směsí metanol - dietyleter - 1:2 v/v. Steroidní hormony vyextrahované ze sorbentu byly stanoveny plynovou chromatografií.

Claims (1)

1. Způsob izolace a detekce škodlivých látek a metabolitů z biologických tekutin, vyznačující se tím, že se biologická tekutina nechá protéci malou kolonkou o objemu 10 až 1CC ml naplněnou aorbentem, přičemž se škodlivé látky a metabolity z biologických tekutin nasd sorbují na sorbentu, potom se desorbují například organickým rozpouštědlem a stanovují například chromatograficky.