JPH0321863A - トリエチレンテトラミン類分析法及びその装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （イ）産業上の利用分野 この発明はトリエチレンテトラミン類分析法及びその装
置に関する。さらに詳しくは医学、薬学等の分野での分
析に好適なトリエチレンテトラミン類分析法及びその装
置に関する。

（ロ）従来の技術及び課題 近年、体内に銅がたまる銅蓄積症（ウィルソン氏病）の
有効な治療剤として、トリエチレンテトラミン（以下ト
リエンという）の二塩酸塩が注目されてきていろ。これ
は該トリエンのキレート化剤としての働きを利用して体
内の銅を体外に排出する薬剤として用いられるものであ
る。

通常上記治療剤として用いられるトリエンは、原料トリ
エンのままでは毒性発現の原因となる不純物を数種含ん
でいるので、その投与にあたってその精製度を確認する
ことが極めて重要である。

この純度検定の方法としては、ガスクロマトグラフィ（
ＧＣ）またはガスクロマトグラフィー質量分析法（ｃｃ
−ＭＳ）によるものが用いられている。

一般に、薬剤は投与後において体内での血中有効濃度を
監視（モニタ）する必要がある。すなわち該有効濃度よ
りも低い場合は有効に薬理効果が発揮されず、また高い
場合は副作用が心配されるからである。このことは、投
与される患者の代謝状態等により薬剤消化速度か常時変
化するところから、上記血中有効濃度のモニタはことに
簡便に行える方法が望まれている。

しかしながら上記ＧＣやＧＣＭＳ等の方法はトリエン標
準品の純度検定を対象とした方法であって、夾雑物の多
い血清（血漿）等の血液試料中に含有されるトリエンの
分析には上記従来の方法は適用できず、血液試料中のト
リエン分析に関する報告は未たなされていないのが現状
である。

この発明はかかる状況に鑑み為されたものであり、血清
または血漿試料中のトリエンを簡便に分析できるトリエ
チレンテトラミン類分析法及びその装置を提供しようと
するものである。

（ハ）課題を解決するための手段 かくしてこの発明によれば、トリエチレンテトラミン類
を含有する血清または血漿試料を、ペンタンスルホン酸
塩またはヘキサンスルホン酸塩をイオンペア形成試薬と
して含有する酸性水溶液を移動用とする逆相イオンペア
クロマトグラフィに付してトリエチレンテトラミン類を
夾雑物質から分離し、該クａマトグラフィからの分＃溶
出液に、才ルトフタルアルデヒド及びシステインを含有
する試薬を添加混合して上記分離されたトリエチレンテ
トラミン類を発蛍光性誘導体Ｉこ誘導し、該誘導体の蛍
光光度に基づいて上記試料中のトリエチレンテトラミン
類を検出することからなるトリエチレンテトラミン類分
析法か提供される。

この発明の方法における分析対象は、銅キレート化剤と
して知られかつ近年ウィルソン氏病の効果的な治療剤と
して知られているトリエチレンテトラミン（トリエン）
及びその塩類等であって、血清または血漿等中に含有さ
れている状態のものを意味する。上記塩類の形態として
は通常上記治療剤として用いられるトリエンの二塩酸塩
の形態が最ら好適なものとして挙げられるが、これに限
定されない。

この発明の方法において、分析に供す上記血清または血
漿試料には、採取した全血試料から沈殿分離された血清
または血漿をそのまま用いることもできるが、これらの
血清または血漿を通常の除タンパク処理（例えばトリク
ロル酢酸等で凝沈させた後遠心分離もしくは口過する等
）を経た後の上清または口液等を用いることが好ましい
。

この発明の方法は、逆用イオンペアクロマトグラフィの
手法にボストカラム誘導体化法を取り入れたものからな
るか、上記逆用イオンペアクロマトグラフィにおいては
移動相に下記するものを用いる以外は当該分野で公知の
方法が用いられる。

この場合用いるカラムとしてはオクタデシル基をシリカ
ゲルまたは有機ボリマに化学結合さけたちのが好ましい
。また一方誘導体化法としては通常の一級アミノ酸及び
アミンを発蛍光化合物に誘導しうるオルトフタルアルデ
ヒド及びシスティンからなる誘導化試薬を用いる公知の
方法が用いられろ。

この発明において、上記逆相イ才ンペアクロマトグラフ
ィに用いる移動相としては、特定のイ才ンベア形戊試薬
を含有する酸性水溶液が用いられる。この酸性水溶液は
ｐＨ２〜３のリン酸綬衝液またはホウ酸緩衝岐が好まし
い。この発明において上記イオンペア形戊試薬としては
、ペンタンスルホン酸塩またはヘキサンスルホン酸塩が
用いられる。これらのイオンペア形成試薬の濃度は用い
るカラムに応じて若干異なるが、概ねペンタンスルホン
酸塩の場合は４〜ｌ（ｌｚＭ、ヘキサンスルボン酸塩の
場合は２〜６ｚＭでそれぞれ用いられることが好ましい
。各イ才ンベア形成試薬を上記各濃度より高い濃度のも
のを用いた場合は目的のトリエン類が溶出しなく、また
低い濃度のものを用いた場合は夾雑物との分離が達成で
きない。

この発明の方法において、前記トリエン類は逆相イオン
ペアクロマトグラフィにより分離された後、上記誘導体
化試薬により発蛍光物質に誘導されろ。この誘導体化へ
の反応は通常逆相イオンペアクロマトグラフィの分析流
路上で行われる。この場合該反応部としては分離成分と
誘導体化試薬が効率良く混合されるよう混合コイル状の
ものが好適に用いられる。

この発明の方法において、上記試薬により誘導された発
蛍光物質は、当該分野で公知の蛍光光度計を用いて検出
される。

この発明はまた次に挙げるごとき基本構成を有する分析
装置、すなわち、ペンタンスルホン酸塩またはヘキサン
スルホン酸塩をイ才ンベア形成試薬として含有する酸性
水溶液を移動相とした移動相供給郎から試料導入口、逆
相イオンペアクロマトグラフ用カラム、混合反応部を経
て蛍光光度計に延設される分肝流路と、オルトフタルア
ルデヒド及びシステインを含有するトリエチレンテトラ
ミン類誘導体化試薬を上記カラムと混合反応部との間に
導入しうる誘導体化試薬流路とから構成されてなるトリ
エチレンテトラミン類分肝装置を提供することができる
。

（二）作用 この発明によれば、分析流路に導入された血清または血
漿試料中に含有されたトリエチレンテトラミン類は、移
動相中に添加されたペンタンスルホン酸塩またはヘキサ
ンスルホン酸塩とイオンペアを形成して、逆相イオンペ
アクロマトグラフ用カラムで夾雑するアミノ酸等のアミ
ノ化合物から分離される。その後、オルトフタルアルデ
ヒド及びシステインを含有する試薬と混合されて発蛍光
性誘導体に誘導された後、該誘導体の蛍光光度に基づい
て検出されろこととなる。

以下実施例によりこの発明を詳細に説明するが、これに
よりこの発明は限定されるものではない。

（ホ）実施例 １１図はこの発明のトリエチレンテトラミン類分析装置
の一例の構成説明図である。

該図の分析装置（１）は、移動用貯留晴（２）から送液
ポンプ（３）、試料インノエクタ（４）、逆相イ才ンベ
アクロマトグラフ用カラム（５）、ジョイント部（６）
、混合コイル（０，５ｚｚφｘ　７０ｃ＋＋＋Ｌ　）　
（７）をこのＭｌこ経て蛍光光度計（８）に延設される
分析流路（ａ）と、誘導体化試薬貯留博（９）から送液
ポンブ（１０）を介して上記分析流路（ａ）のジョイン
ト部（６）に接続される誘導体化試薬供給流路（ｂ）と
から主として構威されている。なお、（ｌ１）はカラム
恒温漕（ＧＴＯ−６Ａ，（妹）島津製作所製）、（１２
）は記録計、（ｃ）はドレインへ延設される排出用管路
である。

以上のごとく構成された分析装置（１）における分析条
件を下記に示す。

カラム：ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ　Ｃ１ｇ（４．６ｉｍ１
、Ｄ．ｘｌ５　Ｌ．） 移動相：６１ＩＭペンタンスルホン酸ナトリウムを含む
１００ｘＭリン酸ナトリウム緩衝液（　ｐＨ２．１）誘
導体化試薬：　ｏ．ｏｇ％オルトフタルアルデヒド、０
．１％Ｎ−アセチルシステイン を含むホウ酸緩衝液（　ｐＨ１ｏ） カラム温度：４５℃ 移動相流１ｉ　：　　１．０′ｌＩ（！／ｌｌｌｉｎ誘
導体化試薬流３１：　０．４Ｒｌ２／ｍｉｎ蛍光光度計
：ＲＦ−５３５（（株）島津製作所製）（蛍光：　Ｅ．
＝３４８ｒ＋ｎ＋，　Ｅｍ＝４５０ｎｍ）上記条件の下
で、 （１）まず、トリエチレンテトラミン（トリエン）二塩
酸標準品〔アルドリッチ製〕の水溶液５０μｇ／’ｔｘ
（ｌを２０μｅ注入して得られたクロマトグラムを第２
図に示す。この図において、保持時間８．８９８分のピ
ークが標準品中の主成分であるトリエンニ塩酸であるこ
とは、示差屈折計による検出の際の面積値で確認されて
いる。従って保持時間５．０２１分及び６．　６５７分
のピークは不純物である。

（２）次に、血清（ブランク）に、１０％トリクロル酢
酸を等量加えて振盪後、遠心分離（　１２，０００ｒｐ
ｍ．，　　２分）し、その上清を２０μｇ注入して得ら
れたクロマトグラムを第３図に示す。

（３）さらに、血清（８μｇ／Ｒｃ｝リエンニ塩酸を添
加した乙の）を、上記（２）と同じ前処理に付し、その
上清を２０μｇ注入して得られたクロマトグラムを第４
図に示す。

以上の結果から、血清中に含有されるトリエン二塩酸を
、逆相イオンペアクロマトグラフィとポストカラム誘導
体化法とを併用した上記装置（１）により簡便に検出で
きることがわかる。

（へ）発明の効果 この発明によれば、血清または血漿試料中に含有される
トリエチレンテトラミン類を、簡便にかつ高感度で選択
的ｊこ分肝することができる。従ってウィルソン氏病等
の治療剤として使用されろトリエチレンテトラミン類の
血中濃度のモニタを迅速かつ簡便に行うことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図はこの発明の方法を実施する装置の一例の構成説
明図、第２図は第１図の装置によるトリエチレンテトラ
ミンニ塩酸のクａ７１・プラム図、第３図は第ｔ図の装
置によるブランク試料のクロマトグラム図、第４図は第
１図の装置により得られた一実施例のクロマトグラム図
である。 （２）・・・・・・移動相貯留Ｌ（３）．（１０）・・
・・・・送液ボンプ、（４）・・・・・・試料インジエ
クタ、（５）・・・・・・液体クロマトグラフ用カラム
、（６）・・・・・・ジョイント部、　（７）・・・・
・・混合コイル、（８）・・・・・・蛍光光度計、 （９）・・・・・・誘導体化試薬貯留漕、（１ｌ）・・
・・・・カラム恒温槽、（１２）・・・・・・記録計、
（ａ）・・・・・・分析流路、 （ｂ）・・・・・・誘導体化試薬供給流路。 笛　３　防 笛　２　防 ４将吟開（分）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、トリエチレンテトラミン類を含有する血清または血
   漿試料を、ペンタンスルホン酸塩またはヘキサンスルホ
   ン酸塩をイオンペア形成試薬として含有する酸性水溶液
   を移動相とする逆相イオンペアクロマトグラフィに付し
   てトリエチレンテトラミン類を夾雑物質から分離し、該
   クロマトグラフィからの分離溶出液に、オルトフタルア
   ルデヒド及びシステインを含有する試薬を添加混合して
   上記分離されたトリエチレンテトラミン類を発蛍光性誘
   導体に誘導し、該誘導体の蛍光光度に基づいて上記試料
   中のトリエチレンテトラミン類を検出することからなる
   トリエチレンテトラミン類分析法。 ２、ペンタンスルホン酸塩またはヘキサンスルホン酸塩
   をイオンペア形成試薬として含有する酸性水溶液を移動
   相とした移動相供給部から試料導入口、逆相イオンペア
   クロマトグラフ用カラム、混合反応部を経て蛍光光度計
   に延設される分析流路と、オルトフタルアルデヒド及び
   システインを含有するトリエチレンテトラミン類誘導体
   化試薬を上記カラムと混合反応部との間に導入しうる誘
   導体化試薬流路とから構成されてなるトリエチレンテト
   ラミン類分析装置。