CS269252B1 - Method of harmful substances' and metabolites' insulation and detection from biological liquids - Google Patents

Method of harmful substances' and metabolites' insulation and detection from biological liquids Download PDF

Info

Publication number
CS269252B1
CS269252B1 CS883223A CS322388A CS269252B1 CS 269252 B1 CS269252 B1 CS 269252B1 CS 883223 A CS883223 A CS 883223A CS 322388 A CS322388 A CS 322388A CS 269252 B1 CS269252 B1 CS 269252B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
sorbent
column
metabolites
harmful substances
chromatography
Prior art date
Application number
CS883223A
Other languages
Czech (cs)
Other versions
CS322388A1 (en
Inventor
Jiri Mudr Csc Horak
Milan Doc Drsc Jirsa
Marie Prom Chem Csc Tlustakova
Original Assignee
Jiri Mudr Csc Horak
Milan Doc Drsc Jirsa
Marie Prom Chem Csc Tlustakova
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiri Mudr Csc Horak, Milan Doc Drsc Jirsa, Marie Prom Chem Csc Tlustakova filed Critical Jiri Mudr Csc Horak
Priority to CS883223A priority Critical patent/CS269252B1/en
Publication of CS322388A1 publication Critical patent/CS322388A1/en
Publication of CS269252B1 publication Critical patent/CS269252B1/en

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Řešení se týká způsobu izolace a detekce škodlivých látek a metabolitó z biologických tekutin. Podstata řešení spočívá v tom, že se biologická tekutina nechá protéci malou kolonkou o objemu^10 až 100 ml naplněnou sorbentem, přičemž ae škodlivé látky a metabolity z biologických tekutin naadsorbují na sorbentu, poté ee deaorbují například organickým rozpouštědlem a stanovují například chromatogreficky.The solution relates to the method of isolation and detection of harmful substances and metabolites from biological fluids. The essence of the solution it consists in being a biological fluid let it flow through a small box o a volume of 10 10 to 100 ml filled with sorbent, taking ae harmful substances and metabolites from biological fluids adsorb to of the sorbent, then ee deaorb for example organic solvent and determine for example, chromatography.

Description

CS 269 252 B1EN 269 252 B1

Vynález se týká způsobu izolace a detekce škodlivých látek a metabolitú z biolo-gických tekutin. V lékařství je řada situací, kdy diagnosa a způsob léčení, závisí na rozboru těl-ních tekutin a stanovení přítomnosti škodlivých látek v nich.The invention relates to a method for the isolation and detection of harmful substances and metabolites from biological fluids. In medicine, there are many situations where the diagnosis and method of treatment depends on the analysis of body fluids and the determination of the presence of harmful substances therein.

Standardní způsob kvalitativního i kvantitativního stanovení spočívá v odběru ur-čitého množství tělní tekutiny - krve, plazmy, krevního séra, lymfy, moči a podobně ajejí následné analýze, které často musí předcházet odstranění bílkovin z tělní tekutiny.Tento způsob stenovení vyhovuje v těch případech, kdy je stanovovaná škodlivá látka pří-tomna v tělní tekutině v dostatečném množství. V některých přípedech, zejména v počáte-čních stadiích choroby, může být ale sledovaná látka přítomna ve velmi nízké koncentra-ci, pod nebo na hranici citlivosti stanovení. V těchto případech je nutno odebrat většímnožství tělní tekutiny a tuto různým způsobem zahušťovat, aby bylo dosaženo detegovatel-né koncentrace stanovované látky. U látek, které je nutno před analýzou extrehovat můžebýt pracovní postup velmi zdlouhavý a obtížný. V těchto případech jak extrakce,tak i za-hušťování mohou být zdrojem značných nepřesností při stanovení, zejména je-li nutno ješ-tě odstranit z tělní tekutiny bílkoviny.The standard method of both qualitative and quantitative determination consists in collecting a certain amount of body fluid - blood, plasma, blood serum, lymph, urine and the like - and subsequent analysis, which often must precede the removal of protein from the body fluid. wherein the pollutant to be determined is present in the body fluid in sufficient quantity. However, in some instances, particularly in the early stages of the disease, the substance of interest may be present at a very low concentration, below or at the sensitivity limit of the assay. In these cases, it is necessary to collect a larger amount of body fluid and to densify it in various ways to obtain a detectable concentration of the substance to be measured. For substances that need to be extracted before analysis, the workflow can be very lengthy and difficult. In these cases, both extraction and thickening can be a source of considerable inaccuracies in the assay, especially when protein is still to be removed from the body fluid.

Podstata způsobu podle vynálezu spočívá v tom, že se biologická tekutina nechá pro-téci malou kolonou o objemu 10 až 100 ml naplněnou sorbentem, přičemž se škodlivé lát-ky a metabolity z biologických tekutin naadsorbují na sorbentu,· potom se desorbují na -příklad organickým rozpouštědlem a stanovují například chromatograficky. Kolonka zhoto-vená z polypropylenu, teflonu nebo jiného biokompatibilního materiálu musí mít takovýobjem, aby poskytovala dosti materiálu k analýze, ale nezatěžovala oběhově pacienta. 0-ptimální objem kolonky je 10' až 100 ml.The essence of the process of the invention is that the biological fluid is passed through a small column with a volume of 10 to 100 ml filled with sorbent, whereby the harmful substances and metabolites from the biological fluids are adsorbed on the sorbent, then they are desorbed for example by organic solvent and are determined, for example, by chromatography. The box made of polypropylene, Teflon, or other biocompatible material must be of sufficient size to provide enough material for analysis but not to burden the patient's circulation. The maximum volume of the column is 10 to 100 ml.

Tvar kolonky může být různý. Jako kompromis mezi hemodynamiekými poměry v koloncea množství zpracování materiálu byl zvolen válcový tvar těla kolonky. Koncovky pro při-pojení krevních setů mohou být ploché nebo kónické. Prostor koncovky a těla kolonky jeoddělen sítky. Uzavření kolonky koncovkami lze volit buž šroubem, nebo svarem. Šroubovýuzávěr umožňuje otevření kolonky po použití, vyjmutí sorbentu a rozdělení pro extrakcina jednotlivá stanovení. Kolonka, jejíž koncovky jsou s tělem kolonky pevně spojeny sva-rem, zaručuje dlouhodobější sterilitu, desorpci je potom nutné provádět vhodně zvolenousměsí rozpouštědel a pro vlastní stanovení rozdělit získaný extrakt.The shape of the box may vary. As a compromise between the hemodynamic ratios in the column and the amount of material processing, the cylindrical shape of the column body was chosen. The blood set attachment terminals may be flat or conical. The space of the terminal and the body of the box is separated by sieves. Closure of the box with the ends can be chosen by screw or weld. The screw lock allows the box to be opened after use, the removal of the sorbent and the separation for the extraction of the individual determinations. The box, whose terminals are firmly attached to the box body, ensures longer-lasting sterility, and desorption must then be carried out with an appropriately selected solvent mixture and the extract obtained can be separated for the determination.

Kolonka je v případě stanovení látek v krvi umístěna v mimotělním krevním oběhu, po-případě je zařazena za separátor plazmy. Při stanovení látek v ostatních tělních tekuti-nách protéká tekutina kolonkou v otevřeném nebo uzavřeném systému. Výhodou způsobu sta- novení podle vynálezu je to, že kolonkou může protéci daleko větší množství tělní teku -tiny, než jaké by bylo možné odebrat*bez-nebezpečí pro pacienta. Tím se podstatně zvýšíkoncentrace stanovované škodlivé látky. Množství tělní tekutiny, která kolonkou protečeje díky známé rychlosti průtoku a známé době perfúze možno snadno stanovit. Množství roz- pouštědla použité k desorpci je také známé,jtakže lze koncentraci škodlivé látky zjistits velmi dobrou přesností. Odpadá odstraňování bílkovin jako jedna z možností chyb stano-vení i často nutná extrakce a zahušťování, což bývá druhým zdrojem nepřesností. Škodli- vé látky se mohou rozpouštědly desorbovat jako směsi nebo postupně různými rozpouště -dly. V obou případech ale lze příslušnými specifickými metodami stanovit více sledová -ných látek z jedné kolonky.The column is placed in the extracorporeal bloodstream when blood substances are determined, and if necessary, it is classified as a plasma separator. In the determination of substances in other body fluids, fluid flows through the column in an open or closed system. An advantage of the determination method according to the invention is that a much larger amount of body fluid can flow through the column than would be possible without the risk to the patient. This significantly increases the concentration of the pollutant to be determined. The amount of body fluid that flows through the column due to known flow rates and known perfusion times can be readily determined. The amount of solvent used for desorption is also known, as the concentration of the harmful substance can be determined by very good accuracy. There is no need for protein removal as one of the possibility of fixing errors and often the necessary extraction and thickening, which is the second source of inaccuracy. The harmful substances can be desorbed by the solvents as mixtures or sequentially with different solvents. In both cases, however, more specific substances can be determined from a single column by appropriate specific methods.

Způsob stanovení škodlivých látek podle vynálezu může sloužit u metabolických a en-dokrinologických chorob ke stanovení stopových množství látek, například žlučových kyse-lin,· porfyrintů, hormonů, vitaminů, stopových prvků, cholesterolu, patologických metabo-litů a podobně, které by se běžnými metodami stanovení nedaly díky jejich nízké končen -traci v biologických tekutinách zjistit. U otrav léky a jinými exogenními látkami by ko-lonky plněné směsnými sorbenty mohly sloužit k rychlé orientaci o druhu požitých toxinů.The method of determining harmful substances of the present invention can be used in metabolic and enecrinological diseases to determine trace amounts of substances such as bile acids, porphyrins, hormones, vitamins, trace elements, cholesterol, pathological metabolites, and the like, which would be common with conventional by their determination methods, due to their low endpoints in biological fluids, they could not be detected. For drug poisoning and other exogenous substances, the mixed sorbent filled cartridges could serve to quickly identify the type of toxins ingested.

Claims (1)

2 CS 269 252 B1 Vynález je popsán v příkladech provedení, aniž se na né omezuje. Příklad 1 10 g aorbentu atyren-divinylbenzenové pryskyřice Amberlite XAD-2 s povrchem upra--venýra 1 hmot. % póly 2-hydroxyethyl methakrylátu z kolonky bylo eluováno methanolem, Me-thanolioký roztok byl odpařen v teflonovém kelímku a hydrolyzován 10% hydroxidem sodným24 hodin za pokojové teploty. Vzniklé volné žlučové kyseliny byly esterifikovány diazo-metanem a analytovány pomocí gelové chromatografie - GLC. Příklad 2 10 g sorbentu styren-divinylbenzenové pryskyřice Amberlite XAD-2 z kolonky bylo ex-trahováno roztokem kyseliny sírové v methanolu -1i9 t/v-2 hodiny při pokojové teplotě. Pozředění trojnásobným objemem vody byl extrakt vytřepán do chloroformu. Chloroformový ex-trakt byl použit k analýze typu přítomných porfyrinů vysokotlakovou kapalinovou chromato-grafií -HPLC- nebo chromatografií v tenké vrstvě - TLC. Příklad 3 10 g vysušeného sorbentu styren-divinylbenzenové pryskyřice Amberlite XAD-2 s· povr-chem upraveným 2 hmot. % póly 2-hydroxyethyl imthekrylátu z kolonky bylo extrehováné směsímetanol - dietyleter - 1:2 v/v. Steroidní hormony vyextrahované ze sorbentu byly stanove-ny plynovou chromatografií. PŘEDMĚT VYIiÁLEZU Způsob izolace a detekce škodlivých látek a metabolitú z biologických tekutin, vyzna-čující se tím, že se biologická tekutina nechá protéci malou kolonkou o objemu 10 až 1CC mlneplněnou sorbentem, přičemž se škodlivé látky a metabolity z biologických tekutin nasd -sorbují na sorbentu, potom se desorbují například organickým rozpouštědlem a stanovují na-příklad chromatograficky.The invention is described in the Examples without limiting it. Example 1 10 g of Amberlite XAD-2 atyrene-divinylbenzene resin sorbent with 1 wt. The% of the 2-hydroxyethyl methacrylate from the column was eluted with methanol, the methanolic solution was evaporated in a Teflon crucible and hydrolyzed with 10% sodium hydroxide for 24 hours at room temperature. The resulting bile acids were esterified with diazo-methane and analyzed by GLC. Example 2 10 g of Amberlite XAD-2 styrene-divinylbenzene resin sorbent from the column were extracted with a solution of sulfuric acid in methanol of 919 t / v-2 hours at room temperature. Dilution with three times the volume of water was extracted into chloroform. The chloroform extract was used to analyze the type of porphyrins present by high pressure liquid chromatography (HPLC) or thin layer chromatography (TLC). Example 3 10 g of dried styrene-divinylbenzene resin sorbent Amberlite XAD-2 coated with 2 wt. The% poles of 2-hydroxyethyl imecrylate from the column were a 1: 2 v / v mixture of ethanol - diethyl ether. Steroid hormones extracted from the sorbent were determined by gas chromatography. OBJECT OF THE INVENTION A method for the isolation and detection of harmful substances and metabolites from biological fluids, characterized in that the biological fluid is passed through a small 10 to 1cc column of non-absorbent sorbent, whereby the harmful substances and metabolites from the biological fluids are adsorbed on the sorbent , then desorbed, for example, with an organic solvent and determined, for example, by chromatography.
CS883223A 1988-05-12 1988-05-12 Method of harmful substances' and metabolites' insulation and detection from biological liquids CS269252B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS883223A CS269252B1 (en) 1988-05-12 1988-05-12 Method of harmful substances' and metabolites' insulation and detection from biological liquids

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS883223A CS269252B1 (en) 1988-05-12 1988-05-12 Method of harmful substances' and metabolites' insulation and detection from biological liquids

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS322388A1 CS322388A1 (en) 1989-09-12
CS269252B1 true CS269252B1 (en) 1990-04-11

Family

ID=5371698

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS883223A CS269252B1 (en) 1988-05-12 1988-05-12 Method of harmful substances' and metabolites' insulation and detection from biological liquids

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS269252B1 (en)

Also Published As

Publication number Publication date
CS322388A1 (en) 1989-09-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Speich et al. Reference values for ionized, complexed, and protein-bound plasma magnesium in men and women.
Sweat Silica gel microcolumn for chromatographic resolution of cortical steroids
JP5249905B2 (en) Clinical laboratory system and clinical laboratory method
CN116626191A (en) Ultrafiltration-liquid chromatography tandem mass spectrometry for detecting free testosterone
CN107356694A (en) A kind of method of 15 kinds of bile acids in efficient detection blood
US8859954B1 (en) Method for discriminatimg sitosterolemia using a dried blood spot
SU576976A3 (en) Method of determining effective thyroxin ratio in blood sample
Crouthamel et al. Specific serum quinidine assay by high-performance liquid chromatography.
Kalant A microdialysis procedure for extraction and isolation of corticosteroids from peripheral blood plasma
Carlson A colorimetric method of determining unesterified fatty acids in plasma
Gupta et al. Optimization of a column liquid chromatographic procedure for the determination of plasma salbutamol concentration
CN109991337A (en) The method for detecting four class drugs and its metabolin in Eriocheir sinensis crab cream simultaneously
Maruyama et al. Analysis of conjugated bile acids in bile by high-pressure liquid chromatography
CS269252B1 (en) Method of harmful substances' and metabolites' insulation and detection from biological liquids
US3275416A (en) Process and device for separating barbituric acid derivatives from biological samples, and for analyzing same
Sunshine et al. Determination of glutethimide (Doriden) and its metabolites in biologic specimens
Huggett et al. Rapid micro-method for the measurement of paracetamol in blood plasma or serum using gas-liquid chromatography with flame-ionisation detection
Mehta Therapeutic monitoring of free (unbound) drug levels: analytical aspects
EP2989461A2 (en) Systems and methods to determine body drug concentration from an oral fluid
Wittfoht et al. Microscale ultrafiltration technique for determining free drug in 50-microL serum samples.
Martinez et al. Determination of monensin sodium residues in beef liver tissue by liquid chromatography of a fluorescent derivative
Driessen et al. Distribution of drugs over whole blood: I. The transport function of whole blood for valproate
Shikifumi et al. High-speed liquid chromatographic determination of antiepileptic drugs in human plasma
CN118243826B (en) Metabolite combination for assessing risk of biliary tract locking of neonate and application thereof
Millar et al. Distribution of phenylindanedione in blood and tissues after oral and intravenous administration