RU2244307C2 - Method for determination of concentration of serotonin and histamine in biological fluid - Google Patents
Method for determination of concentration of serotonin and histamine in biological fluid Download PDFInfo
- Publication number
- RU2244307C2 RU2244307C2 RU2003105104/15A RU2003105104A RU2244307C2 RU 2244307 C2 RU2244307 C2 RU 2244307C2 RU 2003105104/15 A RU2003105104/15 A RU 2003105104/15A RU 2003105104 A RU2003105104 A RU 2003105104A RU 2244307 C2 RU2244307 C2 RU 2244307C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- histamine
- serotonin
- concentration
- saliva
- extract
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области медицины, к биохимическим исследованиям и способам оценки изменений уровня серотонина и гистамина в организме.The invention relates to medicine, to biochemical studies and methods for assessing changes in the level of serotonin and histamine in the body.
Определение серотонина и гистамина находит широкое применение при диагностике различных патологических процессов.The determination of serotonin and histamine is widely used in the diagnosis of various pathological processes.
Известно, что образование серотонина в организме возрастает при карциноидном синдроме, при злокачественных опухолях предстательной железы, прямой кишки, при аллергических заболеваниях, туберкулезе, шизофрении. Снижение уровня серотонина отмечено при тромбоцитопенической пурпуре, лейкозах, коллагенозах, ревматоидном полиартрите. В диагностических целях обычно исследуют обычно исследуют концентрацию серотонина в крови и 5-оксииндолуксусной кислоты в моче.It is known that the formation of serotonin in the body increases with carcinoid syndrome, with malignant tumors of the prostate gland, rectum, with allergic diseases, tuberculosis, schizophrenia. A decrease in serotonin levels was noted with thrombocytopenic purpura, leukemia, collagenoses, rheumatoid polyarthritis. For diagnostic purposes, the concentration of serotonin in the blood and 5-hydroxyindoleacetic acid in the urine is usually investigated.
Известны патологические процессы, в которых определенную роль играет образование и освобождение гистамина. Это различные аллергические заболевания, эмоциональное напряжение, реакция на рентгеновское облучение, гипоксию.Pathological processes are known in which the formation and release of histamine plays a role. These are various allergic diseases, emotional stress, reaction to x-ray exposure, hypoxia.
Взаимосвязь между гистамином и серотонином в развитии многих патологических процессах изучена недостаточно. Поэтому определенный интерес представляет их одновременное определение в одной пробе.The relationship between histamine and serotonin in the development of many pathological processes is not well understood. Therefore, their simultaneous determination in one sample is of certain interest.
В литературе описаны несколько методов одновременного определения сертотнина и гистамина в одной пробе крови.The literature describes several methods for the simultaneous determination of sertotnin and histamine in a single blood sample.
Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является метод определения содержания гистамина и серотонина в цельной крови (Мещерякова С.А., Герасимова Ц.И. Флуориметрический метод определения гистамина и серотонина в одной пробе. Лабораторное дело, 1974, №11, с.670-672).The closest in technical essence and the achieved result is a method for determining the content of histamine and serotonin in whole blood (Meshcheryakova SA, Gerasimova Ts.I. Fluorimetric method for determining histamine and serotonin in one sample. Laboratory, 1974, No. 11, p. 670-672).
Принцип известного метода основан на экстрагировании серотонина и гистамина из крови сульфатом цинка в щелочной среде, очищении от примесей путем экстракции бутанолом и хроматографии на колонке, содержащей янтарнокислую целлюлозу, переведении в водную фазу, с которой осуществляют реакцию орто-фтальальдегидным реактивом. По интенсивности флуоресценции количественно оценивают концентрацию гистамина и серотонина.The principle of the known method is based on the extraction of serotonin and histamine from blood with zinc sulfate in an alkaline medium, purification from impurities by extraction with butanol and chromatography on a column containing succinic cellulose, transfer to the aqueous phase with which the reaction is carried out with an orthophthaldehyde reagent. The concentration of histamine and serotonin is quantified by the fluorescence intensity.
Недостатком известного способа определения содержания серотонина и гистамина является то, что в качестве биологического материала, который берется у людей при исследовании, используют кровь, забор которой из вены является травматичным для человека, имеет место повреждение кровеносного сосуда, иногда с последующими нарушениями кровообращения, занесением инфекции в кровь. Эти обстоятельства, а также болевые ощущения и отрицательные эмоции часто служат причиной отказа больных от обследования, тем более в тех случаях, когда необходимо проведение серии анализов с короткими интервалами времени.A disadvantage of the known method for determining the content of serotonin and histamine is that the biological material that is taken from people in the study uses blood, the sampling of which from a vein is traumatic for humans, damage to the blood vessel, sometimes with subsequent circulatory disorders, infection into the blood. These circumstances, as well as pain and negative emotions, often cause patients to refuse examination, especially in cases where a series of tests with short intervals of time is necessary.
Кроме того, при заборе крови человека из вены требуется специально подготовленное помещение с обученным медицинским персоналом, стерильные инструменты и одноразовые шприцы, что приводит к увеличению стоимости обследования.In addition, when taking human blood from a vein, a specially prepared room with trained medical personnel, sterile instruments and disposable syringes are required, which leads to an increase in the cost of the examination.
Техническим результатом, на достижение которого направлено создание данного изобретения, является повышение эффективности способа диагностики за счет упрощения и удешевления процесса обнаружения серотонина и гистамина.The technical result, the achievement of which the creation of this invention is directed, is to increase the efficiency of the diagnostic method by simplifying and cheapening the process of detecting serotonin and histamine.
Поставленный технический результат достигается тем, что в способе определения концентрации серотонина и гистамина в биологической жидкости, включающем забор пробы у обследуемого человека, экстрагирование из нее серотонина и гистамина, хроматографирование экстракта и определение концентрации серотонина и гистамина по интенсивности флуоресценции, в качестве биологической жидкости используют слюну, экстракцию 1 мл слюны проводят 4 мл 1 н. раствора хлорной кислоты, после чего добавляют 2 г безводного карбоната калия и 5 мл смеси бутанола и хлороформа в соотношении 3:2, встряхивают, центрифугируют, отсасывают 4 мл органической фазы и пропускают через хроматографическую колонку с диаметром 3 мм и высотой 16 мм с помещенной в нее ионообменной смолой КБ-4, или КБ-4П-2, или Bio Rex - 70 в Н+-форме, размер гранул 0,1±0,02 мм, гистамин элюируют 4 мл 0,1 н. соляной кислоты при скорости движения элюирующего раствора 0,4 мл/мин, концентрацию гистамина определяют по реакции с орто-фталевым альдегидом, растворенным в этаноле, концентрацию серотонина определяют по реакции с нингидрином в прошедшей через колонку органической фазе.The technical result is achieved by the fact that in the method for determining the concentration of serotonin and histamine in a biological fluid, which includes taking a sample from an examined person, extracting serotonin and histamine from it, chromatographing the extract and determining the concentration of serotonin and histamine by fluorescence intensity, saliva is used as biological fluid , extraction of 1 ml of saliva is carried out 4 ml of 1 N. perchloric acid solution, after which 2 g of anhydrous potassium carbonate and 5 ml of a mixture of butanol and chloroform in a ratio of 3: 2 are added, shaken, centrifuged, 4 ml of the organic phase are suctioned off and passed through a chromatographic column with a diameter of 3 mm and a height of 16 mm placed in her ion exchange resin KB-4, or KB-4P-2, or Bio Rex - 70 in the H + form, the granule size of 0.1 ± 0.02 mm, the histamine is eluted with 4 ml of 0.1 N. hydrochloric acid at a speed of movement of the eluting solution of 0.4 ml / min, the concentration of histamine is determined by the reaction with orthophthalaldehyde dissolved in ethanol, the concentration of serotonin is determined by the reaction with ninhydrin in the organic phase passed through the column.
Способ осуществляется следующим образом.The method is as follows.
В качестве биологического материала используют слюну человека, перед забором пробы которой обследуемый промывает ротовую полость кипяченой водой и обсушивает салфеткой.As biological material, human saliva is used, before the sampling of which the examinee rinses the oral cavity with boiled water and dries with a napkin.
В центрифужные пробирки, содержащие 4 мл 1 н. раствора хлорной кислоты, вносят 1 мл слюны, тщательно перемешивают, оставляют на 30 мин для экстракции, а при необходимости можно оставить в холодильнике на 1-2 суток. Затем перемешивают и центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. При необходимости материал можно хранить в замороженном состоянии. При этом потери исследуемого вещества при хранении в течение одного месяца не превышают 3-5%.In centrifuge tubes containing 4 ml of 1 N. perchloric acid solution, add 1 ml of saliva, mix thoroughly, leave for 30 minutes for extraction, and if necessary, can be left in the refrigerator for 1-2 days. Then it is mixed and centrifuged for 15 minutes at 3000 rpm. If necessary, the material can be stored frozen. Moreover, the loss of the test substance during storage for one month does not exceed 3-5%.
Далее к 4 мл экстракта прибавляют 2 г карбоната калия и 5 мл смеси бутанола и хлороформа в соотношении 3:2, встряхивают 3 мин. После этого пробы центрифугируют 3 мин при 3000 об/мин, отсасывают 4 мл органической фазы и пропускают через хроматографическую колонку с диаметром 3 мм и высотой 16 мм и с помещенной в нее ионообменной смолой КБ-4, или КБ-4П-2, или Bio Rex - 70 в H+-форме, размер гранул 0,1±0,02 мм. Колонку промывают 1 мл этилового спирта, 3 мл воды и элюируют гистамин 4 мл 0,1 н. соляной кислоты при скорости движения элюирующего раствора 0,4 мл/мин. Для восстановления работоспособности колонку промывают 10 мл 1 н. соляной кислоты, затем 10 мл воды. Хранить ионообменную смолу следует в воде.Next, 2 g of potassium carbonate and 5 ml of a mixture of butanol and chloroform in a ratio of 3: 2 are added to 4 ml of the extract, shaken for 3 minutes. After this, the samples are centrifuged for 3 min at 3000 rpm, 4 ml of the organic phase is sucked off and passed through a chromatographic column with a diameter of 3 mm and a height of 16 mm and with the KB-4 or KB-4P-2 or Bio ion-exchange resin placed in it Rex - 70 in the H + form, granule size 0.1 ± 0.02 mm. The column is washed with 1 ml of ethanol, 3 ml of water and histamine 4 ml of 0.1 N elute. hydrochloric acid at a speed of movement of the eluting solution of 0.4 ml / min To restore efficiency, the column is washed with 10 ml of 1 N. hydrochloric acid, then 10 ml of water. Store ion exchange resin in water.
К элюату приливают 0,15 мл 5 н. раствора гидроксида натрия, 0,1 мл 0,1% раствора орто-фталевого альдегида в этиловом спирте, тщательно перемешивают. Через 4 минуты приливают 0,5 мл 1,5 М раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают. Величину флуоресценции измеряют при длине волны 470 нм, используя для возбуждения светофильтр с максимум пропускания 365 нм на флуориметре БИАН-130. Интенсивность свечения стабильна в течение 30 минут.0.15 ml of 5 N are added to the eluate. a solution of sodium hydroxide, 0.1 ml of a 0.1% solution of orthophthalaldehyde in ethanol, mix thoroughly. After 4 minutes, 0.5 ml of a 1.5 M phosphoric acid solution is poured, stirred. The fluorescence value is measured at a wavelength of 470 nm, using a filter with a transmission maximum of 365 nm for excitation on a BIAN-130 fluorimeter. The luminous intensity is stable for 30 minutes.
Для определения серотонина к органической фазе, прошедшей через хроматографическую колонку, добавляют 0,33 М раствор фосфата натрия для проведения рН до 6,5-7. Затем приливают 0,1 мл 0,1 М раствора нингидрина, перемешивают и помещают в термостат на 30 минут при температуре 75°С. Охлаждают в воде и через час измеряют флюоресценцию при длине волны 470 нм. Длина волны возбуждения 365 нм.To determine serotonin, a 0.33 M sodium phosphate solution is added to the organic phase that has passed through the chromatographic column to adjust the pH to 6.5-7. Then 0.1 ml of a 0.1 M solution of ninhydrin is poured, stirred and placed in a thermostat for 30 minutes at a temperature of 75 ° C. It is cooled in water and after one hour, fluorescence is measured at a wavelength of 470 nm. The excitation wavelength is 365 nm.
По определенной интенсивности флуоресценции и калибровочной кривой определяют концентрацию серотонина и гистамина, повышенная концентрация которых свидетельствует об увеличении уровня этих веществ в организме, о повышении их концентрации в крови, а понижение содержания любого из этих веществ в слюне свидетельствует соответственно об уменьшении их количества в организме.By a certain fluorescence intensity and a calibration curve, the concentration of serotonin and histamine is determined, the increased concentration of which indicates an increase in the level of these substances in the body, an increase in their concentration in the blood, and a decrease in the content of any of these substances in saliva indicates a corresponding decrease in their amount in the body.
Метод определения концентрации серотонина по реакции с нингидрином в известном способе недостаточно специфичен.The method for determining the concentration of serotonin by reaction with ninhydrin in the known method is not specific enough.
Для повышения специфичности часто применяют различные варианты экстракции органическими растворителями. Но и в этом случае метод по специфичности уступает реакции с орто-фталевым альдегидом. Для повышения специфичности заявителями использована колоночная ионообменная хроматография в сочетании с экстракцией бутанолом в щелочной среде при высокой концентрации солей в растворе.To increase the specificity, various extraction options with organic solvents are often used. But even in this case, the specificity of the method is inferior to the reaction with orthophthalaldehyde. To increase the specificity of the applicants used column ion-exchange chromatography in combination with extraction with butanol in an alkaline medium at a high concentration of salts in solution.
Известно применение хроматографических методов при определении гистамина. При этом изготовление янтарнокислой целлюлозы по известному методу трудоемко.The use of chromatographic methods for the determination of histamine is known. Moreover, the production of succinic cellulose according to the known method is laborious.
Заявителями предложено использование выпускаемой промышленностью ионообменной смолы. В результате проведенных заявителями исследований было установлено, что наиболее оптимальными характеристиками для выделения гистамина из слюны обладают слабые катиониты - ионообменные смолы КБ-4 и КБ-4П-2, Bio Rex -70.Applicants have proposed the use of an ion-exchange resin produced by industry. As a result of the studies carried out by the applicants, it was found that the weakest cation exchangers — ion exchange resins KB-4 and KB-4P-2, Bio Rex-70 — possess the most optimal characteristics for histamine release from saliva.
Заявителями были проведены дополнительные исследования с учетом специфики состава слюны и наличия в ней веществ, которые могут образовывать флуоресцирующие продукты при использованных нами длинах волн. Для обеспечения необходимой специфичности метода нами были подобраны оптимальные условия экстракции и параметры хроматографической колонки, размер гранул смолы.The applicants conducted additional studies, taking into account the specific composition of saliva and the presence of substances in it, which can form fluorescent products at the wavelengths we used. To ensure the necessary specificity of the method, we selected the optimal extraction conditions and parameters of the chromatographic column, the size of the resin granules.
Заявителями подобраны диаметр хроматографической колонки 3 мм, высота 16 мм, скорость движения элюирующего раствора 0,4 мл в минуту. В качестве элюирующего раствора предложена 0,1 н. соляная кислота.The applicants selected a chromatographic column diameter of 3 mm, a height of 16 mm, a speed of movement of the eluting solution of 0.4 ml per minute. As an eluting solution, 0.1 n. hydrochloric acid.
При экстракции предложенная авторами в прототипе смесь солей со щелочью заявителями заменена на безводный карбонат калия. Как показали исследования, проведенные нами, именно эта соль способствует максимальной экстракции гистамина и серотонина и минимальной экстракции мешающих его определению примесей при предложенном нами способе экстракции и хроматографии с учетом специфики используемого биологического материала - слюны.When extraction proposed by the authors in the prototype, a mixture of salts with alkali, the applicants replaced by anhydrous potassium carbonate. As the studies conducted by us showed, it is this salt that contributes to the maximum extraction of histamine and serotonin and minimal extraction of impurities that interfere with its determination in the extraction and chromatography method we proposed, taking into account the specificity of the biological material used - saliva.
Из всех известных способов осаждения белков в слюне оказался наиболее эффективным способ с помощью хлорной кислоты. Поскольку, как было установлено заявителями, хлорная кислота (точнее перхлорат-анион) мешает адсорбции гистамина на ионообменной смоле, было предложено осадить ее добавлением карбоната калия. Эта соль выполняет две функции: создает высокую концентрацию солей и оптимальную величину рН для экстракции гистамина в бутанол и осаждает перхлорат калия. Использованный заявителями способ депротеинизации имеет преимущество перед тем, который применен в прототипе, поскольку серотонин быстро разрушается в щелочной среде, что может иметь существенное значение при одновременной обработке большого числа проб.Of all the known methods for the precipitation of proteins in saliva, the most effective method using perchloric acid was found to be. Since, as was established by the applicants, perchloric acid (more precisely, perchlorate anion) interferes with the adsorption of histamine on an ion-exchange resin, it was proposed to precipitate it by adding potassium carbonate. This salt has two functions: it creates a high salt concentration and an optimal pH for the extraction of histamine in butanol and precipitates potassium perchlorate. The deproteinization method used by the applicants has an advantage over that used in the prototype, since serotonin is rapidly degraded in an alkaline environment, which can be of considerable importance while processing a large number of samples.
При экстракции заявителями не использован дорогостоящий гептан, требующий трудоемкой очистки. Для растворения орто-фталевого альдегида вместо токсичного метанола применен этанол.When extracting the applicants did not use expensive heptane, requiring laborious cleaning. To dissolve orthophthalaldehyde, ethanol was used instead of toxic methanol.
Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявляемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил аналог, характеризующийся признаками тождественными (идентичными) всем существенным признакам заявляемого изобретения.The analysis of the prior art by the applicant, including a search by patent and scientific and technical sources of information, and the identification of sources containing information about analogues of the claimed invention, allowed to establish that the applicant did not find an analogue characterized by signs identical (identical) to all essential features of the claimed invention.
Определение из перечня аналогов наиболее близкого технического решения (прототипа) позволило выявить совокупность существенных по отношению к усматриваемому техническому результату отличительных признаков в заявляемом способе диагностики гипергистаминемии, изложенных в формуле изобретения.The determination from the list of analogues of the closest technical solution (prototype) made it possible to identify a set of essential distinguishing features with respect to the technical result seen in the claimed method for diagnosing hyperhistaminemia set forth in the claims.
Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию “новизна”.Therefore, the claimed invention meets the criterion of "novelty."
Для проверки соответствия заявляемого изобретения критерию “изобретательский уровень” заявителем проведен дополнительный поиск известных решений, чтобы выявить признаки, совпадающие с отличительными от прототипа признаками заявляемого способа диагностики гипергистаминемии.To verify the conformity of the claimed invention to the criterion of “inventive step”, the applicant conducted an additional search for known solutions to identify signs that match the distinctive features of the proposed method for the diagnosis of hyperhistaminemia from the prototype.
Результаты поиска показали, что заявляемое изобретение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, определенного заявителем.The search results showed that the claimed invention does not follow explicitly for a specialist from the prior art as determined by the applicant.
Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию “изобретательский уровень”.Therefore, the claimed invention meets the criterion of "inventive step".
Критерий изобретения “промышленная применимость” подтверждается тем, что предлагаемый способ может быть успешно, с большой эффективностью использован в медицинских учреждениях России и СНГ.The criteria of the invention “industrial applicability” is confirmed by the fact that the proposed method can be successfully, with great efficiency used in medical institutions in Russia and the CIS.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003105104/15A RU2244307C2 (en) | 2003-02-19 | 2003-02-19 | Method for determination of concentration of serotonin and histamine in biological fluid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2003105104/15A RU2244307C2 (en) | 2003-02-19 | 2003-02-19 | Method for determination of concentration of serotonin and histamine in biological fluid |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003105104A RU2003105104A (en) | 2004-08-27 |
| RU2244307C2 true RU2244307C2 (en) | 2005-01-10 |
Family
ID=34880911
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003105104/15A RU2244307C2 (en) | 2003-02-19 | 2003-02-19 | Method for determination of concentration of serotonin and histamine in biological fluid |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2244307C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117147516A (en) * | 2023-10-27 | 2023-12-01 | 苏州市药品检验检测研究中心（苏州市药品不良反应监测中心） | Histamine detection system based on fluorescence sensor |
-
2003
- 2003-02-19 RU RU2003105104/15A patent/RU2244307C2/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| МЕЩЕРЯКОВА С.А. и др. Флуориметрический метод определения гистамина и серотонина в одной пробе. Лаб. дело., 1974, № 11 с.670-672. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117147516A (en) * | 2023-10-27 | 2023-12-01 | 苏州市药品检验检测研究中心（苏州市药品不良反应监测中心） | Histamine detection system based on fluorescence sensor |
| CN117147516B (en) * | 2023-10-27 | 2024-01-09 | 苏州市药品检验检测研究中心（苏州市药品不良反应监测中心） | Histamine detection system based on fluorescence sensor |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wada et al. | A simple method for the quantitative analysis of urinary delta-aminol evulinic acid to evaluate lead absorption | |
| Viktora et al. | New automated fluorometric methods for estimation of small amounts of adrenaline and noradrenaline | |
| Waalkes et al. | The determination of pentamidine (4, 4′-diamidinophenoxypentane) in plasma, urine, and tissues | |
| CN104651513A (en) | Gout serum miRNAs biomarkers and method for detecting expression quantity thereof | |
| CA2029831A1 (en) | Detection of appendicitis by measurement of ortho-hydroxyhippuric acid | |
| CN103740363A (en) | In-situ rapid synthesis gold and silver fluorescence nanometer material based on biomolecules such as nucleosides, preparation method and application of nanometer material | |
| CN110615786A (en) | Near-infrared fluorescent compound for detecting viscosity and preparation and application thereof | |
| RU2525437C1 (en) | Method for determining oxidative protein modification in substance pool of average molecular weight in blood serum, plasma, erythrocyte, and in urine | |
| RU2244307C2 (en) | Method for determination of concentration of serotonin and histamine in biological fluid | |
| JP2004501366A (en) | Method for detecting alpha-oxoaldehyde in whole blood, plasma and / or serum of a patient | |
| CN109632740B (en) | Method for detecting citric acid in aqueous solution | |
| JP7081861B1 (en) | A kit for testing urothelial cancer that identifies Neu5Gc in urine modified with UMOD based on LIP, and a method for producing the same. | |
| RU2612021C1 (en) | Method of predicting risk of gastric adenocarcinoma development in case of chronic processes of ulcer formation in organ | |
| RU2517541C1 (en) | Method for prediction of recurrent vulvar cancer | |
| Henry et al. | Fluorescence and adsorption of stilbamidine and its estimation in biological fluids | |
| RU2210775C1 (en) | Method for predicting hyperhistaminemia | |
| CN114813557B (en) | Urine para-hydroxyphenylalanine quantitative detection kit and detection method thereof | |
| RU2174231C1 (en) | Method for determining adrenaline, noradrenaline, dophamine and dihydroxiphenylalanine concentration in single portion of biological material | |
| CN115901659B (en) | Kit and method for detecting urinary calculus forming coefficient | |
| US3476514A (en) | Cancer cytoscreening | |
| RU2339948C1 (en) | Method of definition of total quantity of aldoses in admixed saliva | |
| RU2280873C2 (en) | Method for determining protein-bound iodine in saliva | |
| Yatoo et al. | Diagnostic Techniques in Goats | |
| RU1777080C (en) | Method for identifying malignant process | |
| BG61781B1 (en) | Method for the determination of the degree of activity for the formation of stone-forming in urine in urolithiasis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060220 |