CS268664B2 - Process for the preparation of phenolsulphonephthaleinyl-beta -d-galactosides - Google Patents

Process for the preparation of phenolsulphonephthaleinyl-beta -d-galactosides Download PDF

Info

Publication number
CS268664B2
CS268664B2 CS849877A CS987784A CS268664B2 CS 268664 B2 CS268664 B2 CS 268664B2 CS 849877 A CS849877 A CS 849877A CS 987784 A CS987784 A CS 987784A CS 268664 B2 CS268664 B2 CS 268664B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
beta
galactoside
werden
formula
sodium salt
Prior art date
Application number
CS849877A
Other languages
English (en)
Other versions
CS987784A2 (en
Inventor
Manfred Dr Kuhr
Rudolf Dr Machat
Wolfgang Dr Weckerle
Hans-Georg Dr Batz
Rupert Dr Herrmann
Wolfgang Dr Kleemann
Herbert Buschek
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Priority to CS885171A priority Critical patent/CS268700B2/cs
Publication of CS987784A2 publication Critical patent/CS987784A2/cs
Publication of CS268664B2 publication Critical patent/CS268664B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
    • C12Q2334/40—Triphenylmethane dye chromogens, e.g. fluorescein derivatives
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/924—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

Vynález se týká způsobu výroby ného vzorce I nových fenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidů obec-
4 ve kterém značí R až R které mohou být stejné nebo rozdílné, vodíkový atom, atom halogenu, nitroskupinu nebo aminoskupinu,
12
R až R které mohou být stejné, nebo rozdílné, vodíkový atom, atom halogenu, alkylovou skupinu s 1 až 5 uhlíkovými atomy, hydroxyskupinu, alkoxylovou skupinu s 1 až 5 uhlíkovými atomy, karboxylovou skupinu nebo nitroskupinu a
M* značí proton, iont alkalického kovu, kovu alkalické zeminy nebo amonný.
Všechny sulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidy obecného vzorce I jsou nové sloučeniny.
01igosacharidy nebo polysacharidy, které obsahují D-galaktosu s beta-glykosidickou vazbou, se vyskytují prakticky ve všech organismech. Proto jsou také odpovídající beta-galaktosidázy /ЕС 3.2.1.23/ velice rozšířené a mohou být prokázány u početných mikroorganismů, zvířat i rostlin.
Beta-D-galaktosidáza splňuje mnohé fyziologické funkce v okruhu savců: hraje důležitou roli při látkové přeměně uhlohydrátú, neboť jejím působením dochází к hydrolýze laktosy. Kromě toho představuje beta-D-galaktosidázo klíčový enzym při odbourávání glykolipidů, mukopolysachari/dů a glykóproteinů.
Vzhledem ke svému významnému fyziologickému postavení získává beta-D-glaktosidáza v posledních letech v oblasti diagnostiky stále na významu. Tak se například tento enzym používá ve stále vzrůstající míře jako indikační enzym pro enzymoimunologické testy (viz například Annals of Clinical Biochemistry JO, 221 - 240 /1979/).
Stanovení aktivity beta-D-galaktosidázy hraje proto jak v klinické chemii, tak také v diagnostice stále vzrůstající roli. Při tom se zcela všeobecně smísí vzorek obsahující galaktosidázu s vhodným beta-D-galaktosidázovým substrátem. Tento substrát se působením enzymu rozštěpí, načež se jeden ze štěpných produktů vhodným způsobem stanoví. Může se stanovovat buS působením enzymu uvolněný glykon nebo aglykon. Zpravidla se stanovuje uvolněný aglykon. Jako substráty jsou vhodné přírodní substrát laktosa, jakož i obzvláště chromogenní galaktosid.
□ako substrát beta-D-galaktosidázy je v Biochem· Z· 333, 209 (1960) popsán fenyl-beta-D-galaktosid, jakož i jeho na aromatickém kruhu substituované deriváty (například o-nitrofenyl-beta-D-galaktosid nebo p-nitrofenyl-beta-D-galaktosid). Hydrolýzou uvolněné fenoly se stanovuji fotometricky v ultrafialové oblasti, popřípadě nitrofenoly v krátkovlnné viditelné oblasti vlnových délek. Také se může jako indikační reakce připojit oxidetivní kopulace s aminoantipyrinem (Analytical Biochem. 40, 281 /1971/)·
Pro histochemické pokusy se používají hlavně nafty1-beta-D-galaktosidy, například 1-nafty1-sloučeniny (Histochemie 35, 199 /1973/), 6-brom-2-nafty1-derivát (□. Biol. Chem. 195, 239 /1952/) nebo naftol-AS-BI-beta-D-galaktosid (Histochemie 37, 89 /1973/). Pro vieuelní pozorování se při tom vznikající naftoly nechají reagovat s různými diazoniovými solemi na odpovídající azobarviva.
Dále je jako substrát beta-galaktosid&ae^známý.S-brom-4-chlor-indoxy1-beta-D-galaktosid. Indikační reakcí je zde oxidativní dimerisování vznikajícího indoxylu na indigo (Histochemie 23, 266 /1970/) nebo kopulace s diazoniovými solemi na indoxylazobarviva (Histochemistry 57, 323 /1978/).
Výše uvedené metody stanovení vykazují značné nevýhody. Za prvé jsou necitlivé a kromě toho jsou substráty používané v histochemických stanoveních velmi špatně rozpustné.
Podstatně citlivějších testů se dosáhne tehdy, když se jako substráty použijí galaktosidy, jejichž aglykon je možno stanovit fluorometricky. Jako takový substrát je například popsán v Proč. Nat. Acad. Sci. U. S. 47, 1981 /1961/ fluorescein-di-beta-D-galaktosid. Kromě toho se používá 2-naftyl-beta-D-galaktosid (Analytical Biochem. 42, 275 /1971/) nebo 4-methy1-umbellifery1-beta-D-galaktosid (Bicohem. □. 102, 525 /1967/).
Nevýhoda fluorometrických stanovení spočívá v tom, že se musí pracovat za značných aparativních nákladů.
Nadále tedy zůstává potřeba substrátů, pomocí nichž by bylo možno jednoduše, rychle a spolehlivě beta-D-galaktosidázu stanovit. Úkolem předloženého vynálezu je tuto potřebu uspokojit.
Nyní bylo zjištěno, že je možno béta-D-galaktosidázu velmi citlivé stanovit ve viditelné oblasti spektra vizuelně nebo pomocí jednoduchých spektrofotometrických přístrojů, když se jako substráty použijí sulfonftaleinyl-beta-D-galaktosidy. Tyto sloučeniny mají kromě toho tu výhodu, že jsou ve vodě velmi lehce rozpustné.
Předmětem vynálezu je tedy způsob výroby sulfonftaleinyl-beta-D-galaktosidů obecného vzorce I, jehož podstata spočívá v tom, Že se nechá reagovat funolsulfonftalein obecného vzorce II
ve kterém značí X atom halogenu a
R ochrannou skupinu použitelnou v chemii cukrů/ za podmínek Waldenova přesmyku při teplotě v rozmezí 10 až 100 °C v organickém rozpouštědle nebo směsi organického rozpouštědla a vody na C-l atomu cukerného zbytku/ na súlfonftaleinyl-beta-D-galaktosid obecného vzorce IV.
X X 3 + ve kterém mají R až R a M výše uvedený význam, načež se ze sloučeniny obecného vzorce IV ochranné skupiny R^3 odštěpí při teplotě v rozmezí -60 až 60 °C.
Reakce sloučenin obecného vzorce II а III na galaktosidy obecného vzorce iv se výhodně provádí za přítomnosti činidel vázajících kyseliny, jako jsou například hydroxidy alkalických kovů nebo uhličitany alkalických kovů, ve vodném acetonu nebo (za podmínek převodu fází) ve směsích vody a benzenu nebo vody a chloroformu.
Při další modifikaci způsobu se mohou falaktosidy obecného vzorce IV vyrobit tak, Že se fenolsulfonftaleiny obecného vzorce II nejprve převedou působením hydroxidů alkalických kovů nebo jejich alkoholátů na di-alkalické soli, popřípadě působením případně substituovaných aminů na amonné soli a tyto se potom nechají reagovat v dipolárních sprotických rozpouštědlech jako je například aceton, dimethylsulfoxid, dichlormethan, tetrahydrofuran nebo dimethylformamid s 1-halogeno-galaktosou persubstituovanou na kyslíkových atomech obecného vzorce III. * . v Dále se osvědčily při syntéze galaktosidů obecného vzorce IV z fenolsulfonftaleinu obecného vzorce II a 1-halogeno galaktosy obecného vzorce III přídavky jednotlivých stříbrných solí nebo směsi stříbrných solí (například oxid stříbrný, uhličitan stříbrný, uhličitan stříbrný na celitu, triflat stříbrný a salicylát stříbrný) a/nebo jednotlivých solí rtuti nebo směsi solí rtuti (například bromid rtuřnatý, kyanid rtučnatý, octan rtučnatý, oxid rtuřnatý), popřípadě za přítomnosti vysoušečích Činidel, jako je například chlorid vápenatý nebo drierit, v rozpouštědle, jako je například methylenchlorid, chloroform, benzen, toluen nebo dioxan.
Uvedeným způsobem získané na kyslíku persubstituované sulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidy obecného vzorce IV jsou rovněž nové sloučeniny,
Odštěpování ochranných skupin R na kyslíku persubstituovaných sulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidů obecného vzorce IV na sulfonftaleinyl-beta-D-galaktosidy obecného vzorce I se provádí podle metody běžných v chemii uhlohydrátů (viz například Advances Carbohydrate Chem, 12, 157 /1057/), například u acylových ochranných skupin působením methylátu sodného nebo methylátu barnatého, popřípadě působením amoniaku v methylalkoholu.
Fenolsulfonftaleiny obecného vzorce II jsou na trhu běžně dostupné substance, nebo je možno je pomocí známých způsobů vyrobit z odpovídajících fenolů a odpovídajících o-sulfobenzoových kyselin (viz například D. S, Breslow a H. Školník v publikaci A. Weissberger, The Chemistry of heterocyclic Compounds, Intersciehce-Publishers, New York, 1966, Band 21, str, 118), nebo když se vychází ze známých sulfonftaleinů, vyrobí se z nich dostatečně deriváty, například halogenací nebo nitrací (viz například D, S, Breslow a H. Skolnik, ibid, str, 141 až 144), □ako výchozí materiál používané na kyslíku persubstituované 1-halogeno-alfa-D-galaktosy obecného vzorce III jsou rovněž známé sloučeniny, Osou popsány například v Chem. Ber. 35, 836 (1902), Nátuře 165, 369 (1950; Acta Chem. Scand., Ser. B, 33, 116 (1979; □.Chem, Soc., 1419 (1965); Carbohydr. Res., £1, 85 (1969).
1 ' 1 12
Pod pojmem halogen při definování substituentů R až R а X se rozumí fluor, chlor,
- 1 12 ’ brom a jod, и R až R výhodně fluor, chlor a brom, и X výhodně chlor a brom.
' 5 12
Pod pojmem nižší alkylová skupina při definování substituentů R až R se rozumí alkylová skupina s 1 až 5 uhlíkovými atomy, výhodně s 1 až 3 uhlíkovými atomy, přičemž obzvlóště výhodná se jeví methylová skupina a isopropylová skupina.
Pod pojmem nižší alkoxylová skupina při definovóní substituentů R5 až R^2 se rozumí alkoxylové skupiny s 1 až 5 uhlíkovými atomy, výhodně s 1 až 3 uhlíkovými atomy, přičemž obzvláště výhodná je methoxyskupina.
Pod pojmem iont alkalického kovu při definování M* se rozumí lithný, sodný nebo draselný iont, přičemž jako výhodný lze uvést iont lithný a sodný.
□ako iont kovu alkalické zeminy při definovaní M+ lze uvést iont hořčíku, vápníku a barya, výhodně iont vápníku, ·
Pod pojmem amonný iont při definování M+ se rozumí iont
v. 14 17 přičemž R až R které mohou být stejné nebo rozdílné, značí vždy vodíkový atom, nižší alkylovou skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atomy, výhodně s 1 nebo 2 uhlíkovými atomy nebo benzylovou skupinu.
Pod pojmem ochranná skupina použitelná v chemii uhlohydrátů při definování substi13 tuentu R je možno uvést obzvláště acetylovou skupinu, benzoylovou skupinu, benzylovou skupinu nebo trimethylsilylovou skupinu.
Použití sulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidů jako substrátu pro beta-D-galaktosidázu vede к podstatně citlivějším testovacím systémům pro beta-D-galaktosidázu, než dosud byly známé. Uvedené nové substráty mohou být použity pro stanovení aktivity běťa-D-gálaktosidázy výhodně jako v biochemické, tak také v klinicko-chemické oblasti. Jsou citlivější a z jejich použití vyplývají následující výhody.
a) Mohou se měřit nižší aktivity beta-D-galaktosidázy;
b) mohou se používat menší množství vzorků;
c) stanovení beta-D-galaktosidázové aktivity se může provádět v podstatně kratší době;
d) menší používaná množství vzorků a výhodnější vlnový rozsah při stanovení snižuje kromě toho rušení při stanovení jinými součástmi vzorku.
Ukázalo se, že substráty podle vynálezu jsou vhodné ke stanovení aktivity beta-D-galaktosidázy každého původu, které se mohou naprosto lišit ve svých optimálních hodnotách pH. Také v takovýchto případech reagují diagnostické prostředky se substráty obecného vzorce I podstatně citlivěji, než dosud známé testovací prostředky.
Sulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidy obecného vzorce I jsou také vhodné pro imunologické metody stanovení, při nichž se beta-D-galaktosidáza používá jako indikační enzym, jehož aktivita se musí po provedení imunologické reakce zjištovat. Takovéto imunologické metody stanovení s enzymatickými indikačními reakcemi jsou v odborném světě známé jako enzymoimunologické zkoušky (enzymimmunoassays). Tyto metody stanovení slouží ke stanovení koncentrací proteinů, polysacharidů, hormonů, léčivých látek a jiných ní-5 -12 že molekulárních substancí v množství 10 až 10 mol/litr. Vždy podle potřeby stupňů oddělování fází, rozlišuje se mezi homogenním a heterogenním vedením zkoušky. Další rozdělení může nastat v kompetetivním a nekompetetivním testovacím principu.
Při všech testovacích principech se však pracuje s koňjugáty enzym-antigen, popřípadě enzym-protilátka. Enzymatická indikační reakce je společná všem enzymoimunologickým zkouškám (enzymimmunoassays).
Indikační enzym, vhodný pro uvedené účely je beta-D-galaktosidáza. Stanovení beta-D-galaktosidázy v takovýchto enzymoimunologických zkouškách se běžně provádí tak, že se přidá vhodný substrát beta-D-galakrosidázy, enzymaticky se rozštěpí a běžným způsobem se fotometricky proměří.
Zlepšení systému testu beta-D-galaktosidázy vede tedy rovněž ke značným výhodám při enzymoimunologických zkouškách:
a) vyšší citlivost důkazu umožňuje také zde snížení hranice prokazatelné koncen- trace, kratší reakční doby a nižší množství používaných vzorků a tím také snížení rušivých vlivů způsobovaných ostatními složkami vzorku; ,
b) vhodnější rozsah vlnových délek při vyhodnocování snižuje možnost poruch při určitém vedení reakce, kdy mohou nastávat poruchy vlivem nerozpustných součástí, například působením zákalů.
V následujících příkladech jsou ukázány některé z rozličných variant postupu podle vynálezu, které mohou vést к syntéze požadovaných sloučenin. Uvedené příklady však v žádném případě nepředstavují omezení předmětu vynálezu.
Příklad 1
Sodná sůl 3,З'-dichlor-fenolsulfonftaleiny1-beta-D-galktosidu
a) Roztok 45 g (0/11 molu) 2,3,4,5-tetra-O-acety1-alfa-D-galaktopyranosylbromidu ve 450 ml chloroformu se zahřívá na teplotu 60 °C. Při této teplotě se za míchání к uvedenému roztoku přidá roztok 29/9 g (0/11 molu) benzyltriethylamoniumbromidu ve 114 ml
1,25 N vodného hydroxidu sodného (0,142 molu) a potom 46,5 g (0,11 molu) 3,3'-dichlor-fenolsulfonftaleinu (chlorfenolová červeň). Zbytky barviva se opláchnou ze stěn nádoby malým množstvím vody a dalšími 114 ml 1,25 N vodného hydroxidu sodného.
Reakční směs se potom zahřívá к varu pod zpětným chladičem po dobu 12 hodin a dále se nechá stát po dobu 8 hodin při teplotě místností. Organická fáze se oddělí a vodná fáze se několikrát vytřepe chloroformem. Pro odstranění ještě přítomných zbytků výchozího materiálu se spojené organické fáze několikrát vytřepou 0,1 N vodným hydroxidem sodným.
Po promytí chloroformové fáze vodou a vysušení pomocí bezvodého síranu sodného se organické rozpouštědlo odpaří, zbytek se rozetře s diethyletherem a získá se 46 g sodné soli 3,3z-dichlorfenolsulfonftaleiny1-2,3,4,6-tetra-O-acety1-beta-D-galaktosidu.
Jedná se o žlutý amorfní materiál o teplotě tání 190 °C (rozklad), který se získá ve výtěžku 54 % teorie.
NMR ; (DMSO-<T6) : 1,95 (s, 3H) , 1,99 (s, 3H) , 2,02 (s, 3H) , 2,12 (s, 3H) , 4,0 - 4,6 (m,4H) , 5,1 - 5,7 , (m, 3H) , 6,1 - 6,8 (m, 1H), 6,9 - 7,7 (m, 8H), 7,8 - 8,0 (m, 1H).
b) Roztok 28 g (0,036 molu) tetraacetylgalaktosidu, připraveného postupem podle odstavce a), ve 270 ml absolutního methylalkoholu se ochladí na teplotu v rozmezí
Θ až 5 °C. Pro deacetylaci se к tomuto roztoku při uvedené teplotě a za míchání přidá 72 ml jednomolárního roztoku methylátu sodného (0,072 molu) v methylalkoholu.
Po 15 minutách při teplotě v rozmezí 0 až 5 °C se roztok za účelem odstranění přebytečných sodných iontů smísí s asi 300 ml Amberlitu IRC 50 a směs se míchá po dobu 2 hodin při teplotě 5 °C. Po oddělení ionťoměniče se tento několikrát promyje methylalkoholem.
Po zahuštění spojených filtrátů se zbytek čistí za pomoci sloupcové chromatografie na silikagelu za použití směsi methylenchlorid/methylalkohol = 5/1 a získá se jako žlutý amorfní prášek 12 g sodné soli 3,З'-dichlor-fenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu.
Výtěžek činí 55 % teorie teplota tání : 210 °C (rozklad)
NMR : (0MS0-<T6) : 3,3 - 3,7 (m, 6H) t 3,9 - 5,0 (m, 4H) , 5,1 (d, 3 = 7 Hz, 1H) ,
6,1 - 6,8 (m, 1H) , 6,9 - 7,6 (m, 8H) , 7,8 - 8,0 (m, 1H).
Příklad 2
Analogickým postupem jako v příkladě 1, reakcí 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-alfa-D-galaktopyranosylbromidu s fenolsulfonftaleiny, uváděnými v následující tabulce ve sloupci “výchozí materiál“, přes odpovídající peracetylovené galaktosidy, se vyrobí beta-D-galaktosidy uváděné v následující tabulce ve sloupci konečný produkt.
Tabulka * výchozí materiál konečný produkt tepl. tání ( °c )
1) fenolová červeň sodná sůl fenolsulfonftaleinyl-beta-D- 218-220
-galaktosidu
2) fluorfenolová červeň sodná sůl 3,3'- difluorfenolsulfonftalei- sklovitá nyl-beta-D-galaktosidu výchozí materiál konečný produkt tabulka (pokračování) tepl. tání ( °C)
3) chlorfenolová modř
4)
5)
6)
7)
8)
9)
10)
11)
12)
13)
14) sodná sůl 3,3', 5,5z-tetrachlorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu pyrokatechninová violef sodná sůl 3,3^-dihydroxyfenolsulfonftale iny1-beta-D-galaktosidu sodná sůl 3,3', 5,5'-tetrijodfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu sodná sůl 2,2z-dimethylfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu sodná sůl 3,3'-dibrom -5,5'-dimethylfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu sodná sůl 3,3'-dimethylfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu sodná sůl 3,3'-diisopropyl-6y6'-dimethylfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu sodná sůl 3,3'-dibrom -5,5'-diisopropyl2,2'-dimethylfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktos idu sodná sůl 3,3'-dikaboxyfenolsulfonftale iny1-beta-D-galaktos idu sodná sůl 3,3', 5,5'-tetrabrom-2,2' -dimethy 1fenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktos idu sodná sůl 3,3z-dinitrofenolsulfonftale iny1-beta-D-galaktosidu sodná sůl 3,3z-dichlor - 5,5'-dinitrofenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktos idu jodfenolová modř metakresolový bromkresolový ortokresolová
145-150
115-120
210-215 purpur purpur červeň thymolová modř bromthymolová modř salicylová červeň
205-209
200-203
200-204
205-209
190-195
178-180
15)
16)
17)
18)
19)
20)
21)
3,3', 5,5'- tetrabrom-2,2'-dimethy1feno1sulfoftale in 3,3'-dinitrofenolsulfonftalein 3,3-dichlor - 5,5' -d in itrofenolsulfonftale in
3,3'-dimethy 1 -5,5'-dinitrofenolsulfonftale in 3,З'-d imethoxyfenols ulfonftale in
3,3'-difluorfeny1 -3 4* , 5 , 6 -tetrabromsulfonftalein
2,2'-dimethy1-3,3'dinitrofenolsulfonftalein 2,2'-dimethyl-5,5'-dini trofenolsulfonftale in fenol-4-ni-trosulfonftalein feno 1-5-nitrosulfonftalein 3,3z-dichlorfenol-4 nitrosulfonftalein
100-103
167-170
115-118
3,3'-dimethyl -5,5'-dinitrofenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosid, sodná sůl
3,3z-dimethoxyfenolsulfonftaleiny1-beta-O-galaktosid
3,З'-difluorfenyl-3, 4, 5, 6 -tetrabromsulfonftaleinyl-beta-D-galaktosid
-2,2'-dimethy1-3,3 -dinitrofenolsulfonfta leiny1-beta-D-galaktosid
2,2z-dimethyl-5,5z-dinitrofenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosid
155-158
300
160/300 sodné sůl fenol-4-nitrosulfonftaleiny1-beta-D-galaktos idu feno1-5-nitrosulfonftaleiny1-beta-D-galaktosid sodná sůl 3,3z-dichlorfenol-4-nitrosulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu
22) výchozí materiál konečný produkt tabulko (pokračování) tepl. tání ( °C)
23) 3,3z-difluorfenol- 3,3z-difluorfenol-4-nitrosulfonftaleinyl
-4*-nÍtrosulfonftaleÍn -beta-D-galaktosid
24) 3,3z,4*-trlnitrofenol- sodná sůl 3,3',4’-trinitrofenolsulfon- * 300 sulfonftalein ftaleinyl-beta-D-galaktosidu
25) fenol-4”-aminosulfon.f talein sodná sůl fenol-4’-aminosulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu amorfní
Příklad 3
Sodná sůl 3,3z-difluor-fenolsulfonftaleinyl«beta-P-galaktosidu
a) 6,2 g (0,016 molu) 3,3*-difluorfenolsulfonftaleinu (fluorfenolová červen) se rozpustí ve 170 ml absolutního methylalkoholu. Pro vytvoření di-sodné soli se к uvedenému roztoku přidá 32 ml (0,032 molu) jednomorálního roztoku methylátu sodného v methylalkoholu, načež se roztok zahustí do sucha. К roztoku tohoto zbytku ve 140 ml absolutního dimethylformamidu se přidá 7,3 g (0,0176 molu) 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-alfa-D-galaktopyranosylbromidu a reakční směs se míchá po dobu 6 hodin při teplotě místnosti. Po přefiltrováni se filtrát zahustí při teplotě místnosti za vakua. Zbytek se rozetře s diethyletherem, přefiltruje a vysuší, přičemž se získá 6,9 g sodné soli 3,3z-di-fluor-fenolsulfonftaleinyl-2,3/4/6-tetra-o-acetyl-beta-D-galaktosidu ve formě oranžově zbarveného amorfního materiálu.
Výtěžek: 63 % teorie teplota tání : 215 °C (rozklad).
NMR : (DMSO-J*g) : 1-94 (s, 3H) , 1,96 (9, 3H) ,,1,99 (s, 3H) , 2,15 (s, 3H) ,
3,9 - 4,7 (m, 4H) , 5,0 - 5,6 (m, 3H) , 6,2 - 6,6 (m, 1H) ,
7,0 - 7,6 (m, 8H) , 7,9 - 8,2 (m, 1H).
b) Roztok 3,5 g (0,005 molu) tetraacetylgalaktosidu, připraveného způsobem popsaným v odstavci a), v 750 ml absolutného methylalkoholu, se při teplotě místnosti smísí 8 1,5 ml (0,0015 molu) jednomolárního roztoku methylátu sodného v methylalkoholu. Roztok se ponechá stát přes noc, načež se zahustí. Zbytek se přečistí pomocí sloupcové chromatografie na silikagelu za použití směsi methylenchloridu a methylalkoholu 5 : 1.
Popsaným způsobem se získá ve formě ornažovočerveného hygroskopického amorfního prášku 1,2 g (sodné soli 3,3z-difluor-fenolsulfonftaleiny 1-beta-D-galaktosidu.
Výtěžek: 41 % teorie
NMR : (DMSO-<T6) : 3,1 - 3,9 (m, 6H) , 4,1 - 5,3 (m, 4H), 4,95 (d, □ » 7 Hz, 1H) ,
6,2 - 6,6 (m, 1H) , 6,8 - 7,6 (m, 8H) , 7,8 - 8,0 (m, 1H) Příklad 4
Analogickým způsobem jako je uvedeno v příkladě 3 se z 2,3,4,6-tetra-0-acetyl-alfa-D-galaktopyranosylobromidu a z fenolsulfonftaleinů, uvedených v následující tabulce jako výchozí materiál, připraví beta O-galaktosidy, uvedené v následující tabulce jako konečné produkty.
Tabulka výchozí materiál konečný produkt
1) fenolové červen tepl. tání ( °C) sodná sůl fenolsulfonftaleinyl-beta-D-galaktosidu
208-212 tabulka (pokračování)
výchozí materiál konečný produkt tepl. tání ( 0 C)
2) o-kresolová červen 3) bromkresolový purpur sodná sůl 3,3z-dimethylfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu sodná sůl 3,3z-dibrom-5,5z-dimethylfenolsulfonftaleinyl-beta-O-galaktosidu 202-205 198-202
Příklad 5 sodná sůl 3,3z-dibrom-5,5z-dimethylfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu
Roztok llzO3 g (0,027 molu) 2.3,4,6-tetra-0-acetyl-alfa-D-galaktopyranosylbromidu a 5,6 (0,007 molu) tríbenzylaminiové soli bromkresolového purpuru v 60 ml dichlormethanu se smísí s 3,1 g (0,013 molu) oxidu stříbrného a 3,7 g (0,013 molu) uhličitanu stříbrného a reakční směs se míchá po dobu.12 hodin při teplotě místnosti. Po odfiltrování sraženiny se filtrát zahustí a zbytek se přečistí pomocí sloupcové chromatografie na silikagelu za použití směsi toluen (octan ethy.lnatý) methylalkohol = 1/ 1/ 0,2. Po zahuštění odpovídající frakce se získá 4,4 g tríbenzylamoniové soli 3,3z-dibrom-5,5z-dimethylfenolsulfonftaleinyl-2,3,4,6-tetra-O-acety1-beta-D-ga laktosidu ve formě žlutého amorfního materiálu.
Výtěžek: 54 % teorie
NMR : (OMSO - <J*6) : 1,8 - 2,3 (m, 18H) , 3,8 - 4,4 (m, 4H) , 5,2 - 5,6 (m, 9H) , 6,6 - 8,1 (m, 23H).
b) Roztok 4 g (0,0035 molu) tetraacetylgalaktosidu získaného postupem podle předchozího odstavce, ve 40 ml absolutního methylalkoholu se ochladí na teplotu -40 °C a pro deacetylaci se smísí s 15,5 ml (0,015 molu) jednomolárního roztoku methylátu sodného.
Po jedné hodině se získaný roztok neutralisuje zpracováním s asi 30 ml Amberlitu IRC 50 (H-forma) a zahustí. Zbytek se přečistí pomocí sloupcové chromatografie na silikagelu za použití soustavy methylenchlorid (methylalkohol) aceton = 6/ 2/ 1 a získá se 2 g sodné soli 3,3z-dibrom-5,5z-dimethylfenolsulfonftaleinyl-beta-D-galaktosidu ve formě žlutého amorfního prášku.
Výtěžek : 62 % teorie
Teplota tání : 200 až 203 °C (rozklad)
NMR : (DMSO-<T6) : 1,9 - 2,4 (m, 6H) , 3,2 - 4,0 (га, 6H) , 4,4 (m, 2H) ,
4,8 (m, 2H) /po výměně deuteria : 4,9 (d, 3=7 Hz, 1H)/, 6,7 - 8,1 (m, 8H).
Příklad 6
Analogickým způsobem, jako je popsáno v předcházejícím příkladě 5 je možno vyrobit z 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-alfa-D-galaktopyranosylbromidu a z
1) fluorfenolové čjerveni sodná sůl 3,3z-difluorfenolsulfonftaleinyl-beta-D-galaktosidu; hygroskopická sklovitá substance;
2) fenol-3*,4,5*,6-tetrabromsulfonftaleinu sodná sůl fenol-3*,4’,5*,6’-tetrabromsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu, teplota tání: 215 °C (rozklad)
3) 3,3Z,5,5-tetrachlorfeno1-3,4,5*,6 -tetrabromsulfonftaleinu sodná sůl 3,3',5,5z-tetrachlorfenol-3,4 ,5,6-tetrabromsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu, ю
teplota tání : 150 °C (rozklad)
4) fenol-4-nitrosulfonftaleinu sodná sůl fenol-4-nitrosulfonftaleinyl-beta-D-galaktosidu, teplota tání : > 300 °C;
5) 3,3'-dichlorfenol-4-nitrosulfonftaleinu sodná sůl 3,3'-dichlorfeno1-4-nitrosulfonfteleiny1-beta-D-galaktosidu, dvojitá teplota tání : 160 °C /^300°C; ‘
6) 3,3z-dimethylfenol-4-nitrosulfonftaleinu sodná sůl 3,3z-dimethylfenol-4-nitro8ulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu, teplota tání : 210 až 220 °C ;
7) 3,3', 4-trinitrofenolsulfonftaleinu sodná sůl 3,3', 4-trinitrofenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu, teplota tání: 300 °C
8) fenol-4’-aminosulfonftaleinu sodná sůl fenol-4-aminosulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu, lyofilisát (amorfní)
Příklad 7
Tribenzylamoniová sůl 3,3z-difluorfenoleulfonfta leiny1-beta-D-galaktos id
Roztok 6,77 g (0,01 molu) tribenzylamoniové soli fluorfenolové červeni a 5,3 g (0,01 molu) per-O-trimethylsily1-alfa-D-galaktopyranosylbromidu v 70 ml dichlormethanu se smísí s 1,15 g (0,005 molu) oxidu stříbrného a 1,4 g (0,005 molu) uhličitanu stříbrného a reakční směs se míchá po dobu 18 hodin za zamezení přístupu vlhkosti. Po odfiltrování sraženiny se filtrát zahustí, zbytek se pro odštěpení ochranných skupin vyjme do 60 ml methylalkoholu a ponechá se po dobu 12 hodin při teplotě místnosti. Potom se přečistí sloupcovou chromatografií na silikagelu za použití soustavy dichlormethan/methylalkohol = 5 : 1 a získá se ve formě oranžově zbarveného amorfního prášku
1,2 g tribenzylamoniové soli 3,3'- difluorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu. Teplota tání: 157 až 165 °C
Výtěžek : 14 % teorie
NMR : (DMSO £ -θ) : 3,1 - 3,9 (m, 6H) , 4,2 - 5,2 (m, 11H), 6,3 (m, 1H) ,
6,8 - 7,6 (m, 23H) , 7,9 (m, 1H)
Příklad 8
Lithné sůl 3,3z-dichlorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu
1/5 g (0,0025 molu) sodné soli 3,3z-dichlorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu, získané podle postupu popsaného v příkladě 1, se rozpustí v malém množství vody. Tento roztok se nanese na sloupec naplněný Amberlitem IR 120 (Li-forma) a po lyofilisaci eluátu se získá ve formě oranžově zbarveného amorfního prášku 1,4 g lithné soli 3,3z-dichlorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu.
Výtěžek : 96 % teorie
Teplota tání : 190 °C (rozklad).
NMR : (DMSO-d6) : 3,3 - 3,8 (m, 6H), 4,3 - 4,9 /ш, 4Н/ . 5,07 /d, □ = 7Hz,1Н/,
6,1 - 7,7 /m, 9Н/ , 7,8 - 8,1 /m, 1Н/ # '
Příklad 9
Analogickým postupem, jako je popsáno v příkladě 8, se vyrobí ze sodné soli 3,3'- dichlorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu /viz příklad 1/
a) iontoměničovou chromatografii na Amberlitu IR 120 v Ca-formě vápenatá sůl 3,3Z- dichlorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu ve formě oranžově červeného amorfního produktu
Výtěžek : 78 % teorie Teplota tání : 250 °C /rozklad/ »VMR : delta /DMSO-dg/ : 3,2 - 3,8 /т, 6Н/ , 4,4 - 5,1 /m, 4Н/ , 51 /d, □ = 7Hz,
1Н/, 6,2 - 7,6 /m, 9Н/ , 7,8 - 8,0 /m, 1H/;
b) iontoměniČovou chromatografií na Amberlitu IR 120 v .(ΉθΟ^Ν-formě tetramethylamoniová sul 3,З'-dichlorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu ve forn.ě žlutého amorfního produktu.
Výtěžek: 85 % teorie
Teplota tání : 190 až 195 °C
NMR : (№S0-/6) : 3,2 (s, 12H) , 3,3 - 4,0 (m, 6H) , 4,1 - 5,3 (m, 4H) ,
5,1 (d, □ = 7 Hz, 1H) , 6,4 (m, 1H) , 7,0 - 7,7 (m, 8H) , 7,9 (m, 1H).
Příklad 10
Tribenzylamoniová sůl 3,З'-dichlorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu
1/5 g (0,0025 molu) sodné soli 3,3z-dichlorfenolsulfonftaleirry 1-beta-D-galaktosidu (viz příklad 1) se rozpustí v malém množství vody a pustí se přes sloupec naplněný Amberlitem IR 120 ve vodíkovém cyklu. Eluát se smísí se stechiometrickým množstvím (0,72 g) tribenzylaminu, rozpuštěným v 15 ml ethylalkoholu, načež se zahustí. Získá se takto ve formě žlutého amorfního materiálu 1,7 g tribenzylamoniové soli 3,3z-dichlorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu.
Výtěžek: 78 % teorie teplota tání : 140 až 150 °C.
Příklad 11
Analogickým způsobem jako je popsáno v předcházejícím příkladě 10 se ze sodné soli 3,3-dichlorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu (viz příklad 1) vyrobí za použití benzyldiethylaminu odpovídající diethylamoniová sůl 3,3Z- dichlorfenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu ve formě žlutého amorfního prášku.
Výtěžek: 69 % teorie teplota tání : 245 až 248 °C

Claims (1)

  1. Způsob výroby fenolsulfonftaleiny1-beta-D-galaktosidu obecného vzorce I
    I ve kterém
    R1 až R4
    R5 až R12 které mohou být stejné nebo rozdílné, značí vždy vodíkový atom, atom halogenu, nitroskupinu nebo aminoskupinu, které mohou být stejné, nebo rozdílné, značí vždy vodíkový atom, atom halogenu, alkylovou skupinu s 1 až 5 uhlíkovými atomy, hydroskupinu» alkoxylovou skupinu s 1 až 5 uhlíkovými atomy,karboxyskupi nu nebo nitroskupinu a značí proton, iont alkalického kovu, kovu alkalické zeminy nebo iont amonný·
    M* výše uvedený význam, ve kterém
    D-galaktosou obecného vzorce III
    1 12 maj í R až R sloučenina obecného vzorce II že nechá reagovat per-O-substituovanou 1-halogeno-alfa- /m/, ve kterém značí X atom halogenu a r13 ochrannou skupinu použitelnou v chemii sacharidů, za podmínek Waldenova přeemyku pří teplotě v rozmezí 10 až 100 °c v organickém rozpouštědle nebo směsi organického rozpouštědla a. vody, na atomu C-l sacharidického zbytku, na per-O-substituované sulfonftaleinyl-beta-O-galaktosidy obecného vzorce IV·
    CS 268644 B2 ve kterém mají R1 až R13 a M+ výše uvedený význam, načež se ze získané sloučeniny odštěpí ochranné skupiny R^3 při teplotě v rozmezí -60 až 60 °C.
CS849877A 1983-12-17 1984-12-17 Process for the preparation of phenolsulphonephthaleinyl-beta -d-galactosides CS268664B2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS885171A CS268700B2 (en) 1983-12-17 1988-07-19 Means for beta-d-galacosidase determination

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19833345748 DE3345748A1 (de) 1983-12-17 1983-12-17 Phenolsulfonphthaleinyl-ss-d-galactoside, verfahren zu deren herstellung sowie deren verwendung zur bestimmung der ss-d-galactosidase

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS987784A2 CS987784A2 (en) 1989-07-12
CS268664B2 true CS268664B2 (en) 1990-04-11

Family

ID=6217269

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS849877A CS268664B2 (en) 1983-12-17 1984-12-17 Process for the preparation of phenolsulphonephthaleinyl-beta -d-galactosides

Country Status (15)

Country Link
US (1) US4668622A (cs)
EP (1) EP0146866B1 (cs)
JP (1) JPS60192767A (cs)
AR (1) AR240606A1 (cs)
AT (1) ATE64600T1 (cs)
AU (1) AU549177B2 (cs)
CA (1) CA1242707A (cs)
CS (1) CS268664B2 (cs)
DD (1) DD234432A5 (cs)
DE (2) DE3345748A1 (cs)
DK (1) DK162231C (cs)
ES (1) ES8600777A1 (cs)
SU (1) SU1393322A3 (cs)
YU (1) YU43390B (cs)
ZA (1) ZA849747B (cs)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1988008137A1 (en) 1987-04-10 1988-10-20 The Flinders University Of South Australia Determination of ions in fluids
DE3714147A1 (de) * 1987-04-28 1988-11-17 Boehringer Mannheim Gmbh Immunchemisches verfahren und reagenz zur bestimmung eines polyvalenten antigens in einer fluessigen probe
US5068180A (en) * 1987-05-21 1991-11-26 Technicon Instruments Corporation Substrates for β-galactosidase
IL85581A (en) * 1987-05-21 1992-05-25 Technicon Instr Substrate for beta-galactosidase comprising derivatives of 4-nitrophenyl-beta-d-galactopyranoside and beta-galactosidase immunoassay containing said substrate
JPH0650991B2 (ja) * 1987-06-11 1994-07-06 塩野義製薬株式会社 ＮＡＧａｓｅ活性測定用試薬および測定方法
US5151348A (en) * 1988-12-23 1992-09-29 E. I. Du Pont De Nemours And Company Enzyme-linked immunoassay for measurement of cyclosporin a levels in whole blood samples
US5191073A (en) * 1989-02-13 1993-03-02 Miles Inc. Chromogenic merocyanine enzyme substrates
US5122602A (en) * 1989-02-13 1992-06-16 Miles Inc. Chromogenic merocyanine enzyme substrates
US5444161A (en) * 1989-08-16 1995-08-22 Microgenics Corporation Substrates for β-galactosidase
AU7176191A (en) * 1990-01-05 1991-07-24 Symex Corp. Chromogenic 5-position modified neuraminic acid substrates and methods for diagnosing human influenza therewith
AU7150891A (en) * 1990-01-10 1991-08-05 Symex Corp. Chromogenic 9-position modified n-acetylneuraminic acid substrates and methods for diagnosing human influenza therewith
US5210022A (en) * 1990-04-20 1993-05-11 Rcr Scientific, Inc. Method test media and chromogenic compounds for identifying and differentiating general coliforms and Escherichia coli bacteria
DE4217474A1 (de) * 1992-05-27 1993-12-02 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und Mittel zur Bestimmung eines Analyts
NL9300829A (nl) * 1993-05-13 1994-12-01 Netagco Holding Bv Werkwijze voor het besturen van een landbouwmachine alsmede een landbouwmachine.
US6262674B1 (en) * 2000-08-10 2001-07-17 Honeywell International Inc. Aircraft display with potential thrust indicator
US6534637B2 (en) 2001-02-12 2003-03-18 Beckman Coulter, Inc. Synthesis of chlorophenol red glucuronic acid
KR101259452B1 (ko) * 2010-10-18 2013-04-29 (주) 바이오앤텍 나노에멀젼 유화제 및 이를 함유하는 화장료 조성물

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3953422A (en) * 1973-08-17 1976-04-27 Smithkline Corporation Deoxyglucose derivatives
JPS5163826A (en) * 1974-07-10 1976-06-02 Iatron Lab Fuenoorufutarein beeta dd monogurukuronidonatoriumuenno goseihoho
DE2453069A1 (de) * 1974-11-06 1976-05-13 Schering Ag Neue glykoside
DE2510633C3 (de) * 1975-03-12 1978-07-13 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Eiweiß in Körperflüssigkeiten und dafür geeignete Indikatorfarbstoffe
JPS58994A (ja) * 1981-03-17 1983-01-06 Shionogi & Co Ltd 新規Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン誘導体およびこれを基質として用いるＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダ−ゼ活性測定法
CA1219201A (en) * 1983-03-07 1987-03-17 Albert E. Chu Microorganism detection test
JPH0650991B2 (ja) * 1987-06-11 1994-07-06 塩野義製薬株式会社 ＮＡＧａｓｅ活性測定用試薬および測定方法

Also Published As

Publication number Publication date
SU1393322A3 (ru) 1988-04-30
ATE64600T1 (de) 1991-07-15
DE3345748C2 (cs) 1992-02-13
AU549177B2 (en) 1986-01-16
CS987784A2 (en) 1989-07-12
ES538621A0 (es) 1985-11-01
YU213084A (en) 1986-12-31
AU3684284A (en) 1985-07-04
ZA849747B (en) 1985-08-28
JPS621978B2 (cs) 1987-01-17
DK604184A (da) 1985-06-18
CA1242707A (en) 1988-10-04
JPS60192767A (ja) 1985-10-01
EP0146866B1 (de) 1991-06-19
YU43390B (en) 1989-06-30
DK162231C (da) 1992-03-16
DE3484735D1 (de) 1991-07-25
DE3345748A1 (de) 1985-08-29
US4668622A (en) 1987-05-26
EP0146866A2 (de) 1985-07-03
AR240606A1 (es) 1990-06-30
DD234432A5 (de) 1986-04-02
EP0146866A3 (en) 1987-05-13
DK162231B (da) 1991-09-30
DK604184D0 (da) 1984-12-17
ES8600777A1 (es) 1985-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS268664B2 (en) Process for the preparation of phenolsulphonephthaleinyl-beta -d-galactosides
US4810636A (en) Chromogenic acridinone enzyme substrates
US4544631A (en) Process and reagent for the determination of α-amylase
US4716222A (en) Substrates for hydrolases
FI81359B (fi) Glykosider av resorufin-derivat, foerfarande foer framstaellning daerav samt deras anvaendning foer bestaemning av aktiviteten av glykosidaser.
JPS6054395A (ja) オリゴグリコシド誘導体
CA1332806C (en) Chromogenic substrates
EP0180961B1 (en) Glucosamine derivatives and reagent for assaying n-acetyl-beta-d-glucosaminidase using the same as substrate
US5399488A (en) Method for assaying enzyme activity using N-acetyl-β-D-glucosamine derivatives
US4433139A (en) N-Acetyl-β-D-glucosamnides for determining N-acetyl-β-D-glucosaminidase activity
US4552841A (en) N-Acetyl-β-D-glucosaminides for determining N-acetyl-β-D-glucosaminidase activity
EP0459536A1 (en) Chromogenic acridinone enzyme substrates
US6303764B1 (en) Synthesis of 4,7-dialkyl chromogenic glycosides of N-acetylneuraminic acids
EP0292169B1 (en) Substrates for B-galactosidase
JPH0341073A (ja) 色原性ジベンゾキサゼピノン及びジベンゾチアゼピノン酵素基質
JPH107693A (ja) 新規糖誘導体、その製造法、リパーゼ活性測定用試薬およびリパーゼ活性測定方法
CS273184B2 (en) Method of resorufin&#39;s derivative glycoside production
JPH075616B2 (ja) 新規リン酸誘導体及びそれを用いた酸性ホスファターゼ活性測定法
SI7812162A8 (sl) Postopek za določitev alfa-amilaze
IE47954B1 (en) Process for the preparation of maltoheptaoside derivatives