CS267400B1 - Mouse lymphocytar hybridoma rg-12 - Google Patents
Mouse lymphocytar hybridoma rg-12 Download PDFInfo
- Publication number
- CS267400B1 CS267400B1 CS887047A CS704788A CS267400B1 CS 267400 B1 CS267400 B1 CS 267400B1 CS 887047 A CS887047 A CS 887047A CS 704788 A CS704788 A CS 704788A CS 267400 B1 CS267400 B1 CS 267400B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hybridoma
- malignant melanoma
- monoclonal antibody
- cells
- mouse
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims abstract description 20
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 4
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 abstract description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 3
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 abstract description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 abstract description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract 1
- 208000009277 Neuroectodermal Tumors Diseases 0.000 abstract 1
- 206010004398 benign neoplasm of skin Diseases 0.000 abstract 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 abstract 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 230000003127 anti-melanomic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 230000025366 tissue development Effects 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 2
- JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 2-(4-fluorophenyl)-1,3-dioxoisoindole-5-carboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2C(=O)N1C1=CC=C(F)C=C1 JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920001425 Diethylaminoethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 description 1
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010029098 Neoplasm skin Diseases 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003322 aneuploid effect Effects 0.000 description 1
- 208000036878 aneuploidy Diseases 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 229960004279 formaldehyde Drugs 0.000 description 1
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000009101 premedication Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
CS 267 400 B1 1
Vynález sa týká nového buňkového hybridó-mu, zostrojeného buňkovou fúziou myšej mye-lómovcj linie Sp2/0 a myšej slczinovej lymfoíd-nej buňky, produkujúcej protilátku proti mem-bránovému antigénu bunick linie 1’udského ma-lígneho melanómu IIMB 2.
Zavedením hybridómovcj technologie sa ot-vorila cesta k príprave monoklonálnych proti-látok, namierených proti antigénnym determi-nantou! buniek nižších i vyšších organizmovvčítane buniek nádorových. Protinádorové mo-noklonálne protilátky našli široké uplatneniev imunohistoehemickej, rádioimunologickeja lokalizačnej diagnostíke primárných nádorova ich metastáz a v kontrole progresie nádoro-vé] choroby po terapii. Převážná váčšina dosialpřipravených protinádorových monoklonál-nych protilátok je namierená proti antigénomtransplantačného typu, antigénom cytoskeletu,diferenciačným antigénom a antigénom em-bryonálneho póvodu. V súčasnosti jestvuje vosvete iba niekofko monoklonálnych protilátokreagujúcich s neoantigénmi združenými s ná-dormi rovnakej histogenezy. V ostatnýeh rokoch sa podařilo vyvinúť mo-noklonálne protilátky proti antigénom združe-ným s buňkami l’udského kožného malígnehomelanómu [Ziai, M. R., lmberti, L., Nicotra, M.R., Badaracco, G., Segatto, O., Natali, P. G., Fe-rrone, S.: Analysis with monoclonal antibodiesof the molecular and cellular heterogeneity ofhuman high molecular weight melanoma asso-ciated antigen. Cancer Research 47, (1987),2474; Hotta H., Ross, A. H., Huebner, K., Isobe,M., Wendeborn, S., Chao, Μ, V., Risciardi, R. P.,Tsujimoto, Y., Croce, C. M., Koprowski, H,:Molecular cloning and characterization of anantigen associated with early stages of melano-ma tumor progression. Cancer Research, 48,(1988), 2955]. Žiadna z nich však nie je přísnéSpecifická pre buňky malígneho melanómu.Dokázala sa ich súčasná reaktivita s tkanivamia nádormi neuroektodermálneho póvodu akoi s nádormi inej histogenezy [Steplewski, Z.,Herlyn, D., Clark, W. H., Ross, A. H., Blaszcyk,M., Pak, K. Y., Koprowski, H.; Production andcharacterization of monoclonal antibodiesagainst human inalignant melanoma. CancerInvestigation, 1, (1983), 215; Hotta a spol., Can-cer Research, 48, (1988), 2955). Váčšina dosial’vyvinutých antimelanómových protilátok rea-guje s antigénmi, ktoré sa denaturujú formolom(fixatívum, rutinně používané na fixáciu tkanivpre histologické vyšetrenie) a preto nie súvhodné pre imuriohistochemické testy. Pre tietotesty je komerčně připravovaných niekofko an-timelanómových monoklonálnych protilátoks róznym stupňom špecificity firmou DakopattsA. S. (Santa Barbara, California, USA;) firmouHybritech Company (San Diego, California,USA) a i. V súčasnosti nie sú komerčně dostup-né antimelanómové monoklonálne protilátkyv súpravách pre rádioimunodiagnostické vyšet-renie cirkulujúcich antimelanómových protilá-tok v sérach pacientov s malígnym melanó-mom.
Uvedené nedostatky do značnej miery od- 2 straňuje hybridóm, produkujúci monoklonálnuprotilátku proti antigénu združenému s buňka-mi 1’udského malígneho melanómu, ktorý jeuložený v zbierke hybridómov Ústavu experi-mentálnej onkológie SAV v Bratislavě, ul. Čsl.armády 21, pod označením RG 12.
Hybridóm RG-12 bol získaný fúziou slezinovej buňky myši kmeňa Balb/c, umunizovanejbuňkami linie 1’udského malígneho melanómuHMB-2, s buňkou myšieho plazmocytómuSp2/O spósobom, popísaným v odbornej litera-túre [Kóhler, G., Milstein, C.: Continuous cultu-res of fused celíš secreting antibody of predefi-ned špecificity. Nátuře, 256, (1975), 495] a ná-sledným klonováním súboru hybridných buniekštandardnou technikou. Získaný hybridóm produkuje monoklonálnuprotilátku, ktorá sa Specificky viaže na nádoro-vý antigén, přítomný v buňkách 1’udského ma-lígneho melanómu a v buňkách nádorov epite-lového póvodu (karcinomy) nie však v buňkáchzdravých tkaniv.
Buňky hybridómu RG-12 možno pomnožo-vať v podmienkach in vitro v štandardných mé-diách pre živočišné buňkové kultúry, alebo invivo v peritoneálnej dutině myší kmeňa Balb/c.Viabilné buňky hybridómu móžu byť uchová-vané v ampulkách pri -180 °C v kvapalnom du-síku. Ich rozmražením sa získavajú životas-chopné kultúry, ktoré sa používajú ako zdrojmonoklonálnej protilátky. Příklad
Hybridómové buňky sa pomnožovali in vivoaplikáciou 1 x 107 buniek intraperitoneálnemyšiam kmeňa Balb/c bez predchádzajúcejpremedíkácie. Na 21. deň rastu hybridómu v as-citovej formě bola myš utratená a ascitová te-kutina bola odobraná punkciou brušnej dutiny.Získalo sa 5,6 ml ascitovej tekutiny s obsahom 6,9 mg/ml imunoglobulínu. Tento bol z ascito-vej tekutiny izolovaný vyzrážaním v 2 M síraneamónnom a purifikovaný chromatografiou nakoloně dietylamínoetyl-celulózy. Ascitová te-kutina obsahujúca monoklonálnu protilátkui purifikovaná protilátka vykazovala v imuno-histochemickom teste na parafínových rezochtkaniv špecifickú vazbu na buňky 1'udského ma-lígneho melanómu a buňky karcinómov, nievšak na buňky zdravých tkaniv a nádorov inejhistogenezy. V kompetitívnom rádioimunotestemonoklonálna protilátka odhafuje cirkulujúceprotinádorové protilátky v 85 % sér pacientovs malígnym melanómom. V podmienkach in vitro rastie hybridóm RG--12 ako suspenzná kultúra. Buňky hybridómumajú vefkosť a tvar charakteristický pre mye-lómové buňky. Obsahujú fúzované buňkové ja-drá s aneuploídnym karyotypom. Ako rastovémédium sa používá minimálně esenciálně médi-um MEM (Ustav sér a očkovacích látek, Praha)obohatené 10% fetálneho telacieho séra (Biove-ta, Ivanovice na Hané), gentamycínom a náraz-níkovým roztokom bikarbonátu sodného. Kul-túry sú udržiavané v termostate pri 37 °C v hu-midifikovanej atmosféře v přítomnosti 5% CO2.
Claims (1)
- 3 Za týchto podmienok je středná generačná do-ba buniek hybridómu 22,5 hod. Hybridóm pro-dukuje monoklonálny imunoglobulín triedyIgCi. Hybridóm RG-12 móže byť priemyslovo vy-užívány ako zdroj moiioklonáluej protilálkyproti inalígnemu melanómu. v kompetitívnomrádioimunotestc s použitím membránových bi-elkovín melanóniových buniek HMB-2 móžebyť monoklonálna protilátka použitá pre kvan-titativné i kvalitativně stanovenie cirkulujúcichprotinádorových protilátok u pacientov s ma- PREDMET Myší lymfocytárny hybridóm RG-12, produ-kujúci monoklonálnu protilátku triedy IgG CS 267 400 B1 4 lígnym melanómom pri diagnostike, diferenci-álnej diagnostike a monitorovaní priebehuochorenia po radikálnej liečbe. V imunohisto-chcmickom vyšetření parafínových rezov tka-niv sa monoklonálna protilátka uplatní pri de-fcrcnciálnej diagnostike malígnych melanómova ich metastáz od benígnyeh pigmentovanýchnádorov kože a iných nádorov neuroektoder-málneho póvodu. Potenciálně možné využitiemožno očakávať pri imunoscintigrafickej loka-lizačnej diagnostike metastáz malígneho mela-nómu in vivo. YNÁLEZU proti nádorovému antigénu, združenému s buň-kami 1’udského malígneho melanómu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS887047A CS267400B1 (en) | 1988-10-25 | 1988-10-25 | Mouse lymphocytar hybridoma rg-12 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS887047A CS267400B1 (en) | 1988-10-25 | 1988-10-25 | Mouse lymphocytar hybridoma rg-12 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS704788A1 CS704788A1 (en) | 1989-06-13 |
| CS267400B1 true CS267400B1 (en) | 1990-02-12 |
Family
ID=5418874
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS887047A CS267400B1 (en) | 1988-10-25 | 1988-10-25 | Mouse lymphocytar hybridoma rg-12 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS267400B1 (cs) |
-
1988
- 1988-10-25 CS CS887047A patent/CS267400B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS704788A1 (en) | 1989-06-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0201509B1 (en) | Monoclonal antibody to a human carcinoma tumor associated antigen | |
| CA1208576A (en) | Monoclonal antibodies specific to cea, a process for producing such antibodies and the use of such antibodies | |
| FI86077C (fi) | Monoklonala antikroppar och metod att producera dessa. | |
| Kennel et al. | Analysis of surface proteins of mouse lung carcinomas using monoclonal antibodies | |
| AU661816B2 (en) | Urinary tumor associated antigen, antigenic subunits uses and methods of detection | |
| US20040001789A1 (en) | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of gp96 or precursors thereof | |
| US4678747A (en) | Monoclonal antibodies for detection of an H (O) blood group antigen | |
| US5654408A (en) | Melanoma-associated antigens identified by monoclonal antibodies | |
| JPS61282096A (ja) | 新規な腫瘍関連抗原 | |
| US5639622A (en) | Monoclonal antibodies against tumor-associated antigens, a process for the preparation thereof and the use thereof | |
| Euhus et al. | Characterization of a 90‐100 kDa tumor‐associated antigen in the sera of melanoma patients | |
| IL85955A (en) | Human carcinoma-associated cytoplasmatic antigen, antibody binding to the antigen, method of in vitro diagnosis of human carcinoma, and a pharmaceutical composition or diagnostic agent comprising the antibody or antigen | |
| EP0245520B1 (en) | Monoclonal antibody against glutathione s-transferase and its use in the diagnosis of cancer | |
| Chee et al. | Mouse monoclonal antibody to a melanoma-carcinoma-associated antigen synthesized by a human melanoma cell line propagated in serum-free medium | |
| EP0154550A2 (en) | Monoclonal antibodies capable of binding to pancreatic carcinoma of ductal origin | |
| CS267400B1 (en) | Mouse lymphocytar hybridoma rg-12 | |
| EP0184906A1 (en) | Monoclonal antibodies specific for human squamous lung carninoma cells, their preparation and use | |
| CA2222551A1 (en) | Tumor associated epitopes | |
| CA1315220C (en) | Preparation of monoclonal antibodies capable of reacting with human breast carcinoma cells | |
| JPH08208698A (ja) | モノクローナル抗体 | |
| JPH0343078A (ja) | 新規ハイブリドーマ，モノクローナル抗体および用途 | |
| EP0287012A2 (en) | Anti-R-binder monoclonal antibody, process for preparing the same and application of the same | |
| JPS61249999A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS61250000A (ja) | モノクロ−ナル抗体 | |
| JPS6233199A (ja) | モノクロ−ナル抗体 |