CS265473B1 - Myší lymfocytárnf hybridom produkující protilátku proti lidskému choriogonadotropnímu hormonu - Google Patents
Myší lymfocytárnf hybridom produkující protilátku proti lidskému choriogonadotropnímu hormonu Download PDFInfo
- Publication number
- CS265473B1 CS265473B1 CS864952A CS495286A CS265473B1 CS 265473 B1 CS265473 B1 CS 265473B1 CS 864952 A CS864952 A CS 864952A CS 495286 A CS495286 A CS 495286A CS 265473 B1 CS265473 B1 CS 265473B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hcg
- mouse
- hybridoma
- against human
- lymhocytaric
- Prior art date
Links
- 239000005556 hormone Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 title claims abstract description 9
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 230000001456 gonadotroph Effects 0.000 claims 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 abstract 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000015872 Human beta Subunit Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010010590 Human beta Subunit Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytární-
ho hybridomu produkujícího protilátku proti
lidskému choriogonadotropnímu hormonu (HCG),
který je uložen ve Sbírce hybridomů Ústavu
molekulární genetiky ČSAV pod označením
IMG CZAS H-3F11. Samotné monoklonální
protilátky jsou vhodné pro výrobu nových
diagnostických souprav pro časnou diagnostiku
gravidity.
Description
Vynález se týká nových hybridomů, t j. hybridních buněčných linií, které byly sestrojeny fúzí buněk myelomové linie SP2/O a myších slezinných buněk produkujících protilátky proti lidskému choriagonadotropnímu hormonu (HCG). Tento hormon je prokazatelný v krvi a v moči těhotných žen a zcela chybí u netěhotných. Jeho výskyt v organismu začíná po implantaci oplozeného vajíčka (okolo. 8 dne po ovulaci) a koncentrace HCG pak prudce stoupá. Na průkazu přítomnosti HCG v organismu jsou založeny diagnostické testy v těhotenství.
Potřeba časné a spolehlivé diagnostiky těhotenství vyvstává nyní zvláště v souvislosti se zaváděním miniinterupcí, jejichž provedení je vázáno na prvni týdny po početí. S tím také vzrůstají požadavky na zvýšení citlivosti a spolehlivosti diagnostických testů.
Dosavadní diagnostické testy využívají imunologické reakce konvenčních antisér připravených imunizací králíků purifikovaným HCG. Sérum imunizovaných zvířat je zdrojem protilátek pro imunologické testy. Nevýhodou přípravy těchto konvenčních antisér je požadavek na vysoce purifikovaný hormon pro jejich přípravu a jednotlivé šarže antisér se liší svou aktivitou a obsahují značně heterogenní směs protilátek. Je známo, že HCG a další podobné hormony (LH, FSH) mají vysokou podobnost svého alfa řetězce a části beta řetězce a proto polyvalentní konvenční protilátky proti HCG reagují i s těmito hormony. Z důvodu určité basální koncentrace LH i u netěhotných žen aglutinační testy využívající konvenční protilátky nejsou schopné specificky prokázat méně než 500 IU HCG/1 a těhotenství tak může být těmito protilátkami prokázané až za 7 až 10 dnů po vynechání menzes.
Nevýhody variability konvenčních antisér a křížové reaktivity polyvalentnich protilátek odstraňuje hybridomová technologie.
Pomocí rozsáhlého vyhledávacího testování je možné vyselektovat takové produkty hybridomů - monoklonální protilátky, které reagují jen s jedinou antigenní determinantou na beta podjednotce HCG, která je specifická pro molekulu HCG, a která chybí na molekulách ostatních hormonů. Taková monoklonální protilátka je využitelná pro specifickou detekci HCG. To umožňuje zcitlivění doposud používaných aglutinačních testů a zavedení nových forem diagnostických testů, jako jsou testy enzymoimunologické a radioimunologické.
Využití monoklonálních protilátek proti HCG umožňuje zcitlivění detekce HCG. Úspěšná příprava monoklonálních protilátek proti HCG byla již v zahraničí popsána a monoklonální protilátky jsou využívány pro citlivou diagnostiku gravidity. Nový hybridom produkující protilátku proti HCG je uložen ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 6, Flemingovo nám. 2 pod označením IMG CZAS H-3F11.
Uvedený hybridom byl získán fúzí slezinných buněk z BALB/c myší opakovaně imunizovaných HCG s buňkami myelomové linie SP2/0 způsobem známým z odborné literatury (Fazekas de St.
Groth, S., Scheidigger, D.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactis. J. Immunol. Methods 35:1, 1980) a klonováním získané populace hybridních buněk.
Hybridom H-3F11 je možné kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a jsou adaptovány pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Buňky hybridomů, H-2F11 jsou uchovávány v kapalném dusíku a po jejich rozmražení je možné zahájit produkci monoklonálních protilátek bez dalšího požadavku na antigen.
Základním kultivačním médiem pro buňky hybridomů H-3F11 je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí obohacené o neesenciální aminokyseliny. Toto médium (označované H-MEMd- Ústav molekulární genetiky ČSAV) je pro kultivace hybridomů doplněno antibiotikami (penicilín, streptomycin) a 10 % inaktivovaného telecího séra. Hybridom je kultivován při 37 °C a produkované protilátky jsou monoklonální imunoglobuliny podtřídy IgGl. Tyto protilátky reagují v enzymoimunologickém testu (ELISA) s částečně purifikovanou beta podjednotkou HCG, s celou molekulou HCG, ale nereagují s preparáty močových proteinů netěhotných žen (obsahujícími LH, FSH a další bílkoviny).
Příprava monoklonální protilátky
2xl06 hybridomových buněk je aplikováno do peritoneální dutiny myším kmene BALB/c, kterým byl 7 až 10 dnů před podáním hybridomových buněk injikován do peritoneální dutiny 1,0 ml parafinového oleje. Po 10 až 14 dnech růstu hybridomů se u myší vytváří v peritoneální dutině ascitická tekutina (4 až 6 ml/myš), která obsahuje 2 až 4 mg protilátky/ml (imunoglobulin). Tato může být purifikována z ascitické tekutiny precipitací síranem amonným.
Protilátky přítomné v ascitické tekutině po růstu hybridómu H-3F11 reagují v enzymoimunologickém testu (ELISA) s HCG při ředění do titrů více než 1:10 000 a aglutinují krvinky s navázaným HCG. Mohou tak nahradit polyvalentní antiséra v doposud užívaných aglutinačních testech sloužících k diagnostice gravidity a mohou se stát základními reagencemi pro zavedení nových enzymoimunologických a radioimunologických testů pro časnou diagnostiku gravidity.
Claims (1)
- PŘEDMÉT VYNÁLEZUMyší lymfocytární hybridom IMG CZAS H-3F11, produkující monoklonální protilátku podtřídy IgGl proti lidskému choriogonadotropnímu hormonu (HCG).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS864952A CS265473B1 (cs) | 1986-07-01 | 1986-07-01 | Myší lymfocytárnf hybridom produkující protilátku proti lidskému choriogonadotropnímu hormonu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS864952A CS265473B1 (cs) | 1986-07-01 | 1986-07-01 | Myší lymfocytárnf hybridom produkující protilátku proti lidskému choriogonadotropnímu hormonu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS495286A1 CS495286A1 (en) | 1989-02-10 |
| CS265473B1 true CS265473B1 (cs) | 1989-10-13 |
Family
ID=5393413
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS864952A CS265473B1 (cs) | 1986-07-01 | 1986-07-01 | Myší lymfocytárnf hybridom produkující protilátku proti lidskému choriogonadotropnímu hormonu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS265473B1 (cs) |
-
1986
- 1986-07-01 CS CS864952A patent/CS265473B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS495286A1 (en) | 1989-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Van Zaane et al. | Monoclonal antibodies against porcine immunoglobulin isotypes | |
| Heyman et al. | Immunoregulation by monoclonal sheep erythrocyte-specific IgG antibodies: suppression is correlated to level of antigen binding and not to isotype. | |
| GB2095831A (en) | Monoclonal antibody reagent and method for immunological assay | |
| US4565687A (en) | Monoclonal antibodies specific for the unbound β subunit of human chorionic gonadotropin | |
| JP7013051B2 (ja) | 牛妊娠関連グリコタンパク質１に特異的に結合する抗体及びその用途 | |
| US5248593A (en) | Process and reagent for the determination of the luteinizing hormone and monoclonal antibodies suitable thereof | |
| US6787324B2 (en) | Method and apparatus for detecting conception in animals | |
| Li-Chan et al. | Influence of standards and antibodies in immunochemical assays for quantitation of immunoglobulin G in bovine milk | |
| CS265473B1 (cs) | Myší lymfocytárnf hybridom produkující protilátku proti lidskému choriogonadotropnímu hormonu | |
| EP0450936A1 (en) | Monoclonal antibody to avermectins | |
| CS260066B1 (cs) | Myší lymfocytórní hybridom produkující monoklonální imunoglobulín proti lidskému choriogonadotropnímu hormonu | |
| CS266008B1 (cs) | Myii lymfocytární hybridom produkující protilátky proti lidskému choriogonadotropnímu hormonu | |
| KR890003591B1 (ko) | 황체화 호르몬에 대한 단클론성 항체의 제조방법 | |
| US4762783A (en) | Process and reagent for the determination of the follicle-stimulating hormone and monoclonal antibodies suitable therefor | |
| Mizuchi et al. | Monoclonal antibodies to human chorionic gonadotropin and their application to two-site sandwich radioimmunoassay | |
| Zhou et al. | Characterization of novel anti-mouse thyrotropin monoclonal antibodies | |
| US7034120B2 (en) | Method and apparatus for detecting conception in animals | |
| Wang et al. | Monoclonal Antibodies in Clinical Diagnosis—Reagents for Detecting Hormones and Immunoglobulins | |
| RU2093572C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к l -цепям иммуноглобулинов свиньи | |
| SU1685997A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к тиреотропному гормону человека | |
| RU2059720C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к тиреотропному гормону человека | |
| CS277597B6 (cs) | Způsob přípravy myších monoklonálních protilátek proti C-peptidu lidského proinsulinu | |
| KR920001376B1 (ko) | 인체 태반성 홀몬(Human Chorionic Gonadotropin)의 미량 측정용 단일클론항체(monoclonal antibody) 분비 세포주 | |
| CS276374B6 (cs) | Myší lymfocytární hybridóm TSH-116, produkující monoklonální protilátku třídy IgG2a proti lidskému thyreostimulačnímu hormonu | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 |